Name: Drosophila Kullanan Heterokromatin-Teşvik Edici İlaçların Tanımlanması nda Bir Tarama Yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: Keşfedin, Drosophila kullanarak heterokromatin oluşumunu destekleyen ilaçları taramak için basit ve ekonomik bir yöntemi. Bu protokol, göz rengi fenotiplerini ölçüt olarak kullanarak kanser tedavisi araştırmalarında yeni bileşiklerin hızlı tespitini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz J. Birchler, E. Bach ve Bloomington Drosophila Stok Merkezi çeşitli Drosophila suşları için teşekkür ederiz; Ulusal Kanser Enstitüsü (NCI) Onkoloji Seti küçük moleküllü ilaç kütüphanesi için Gelişimsel Terapötik Programı; Amy Chang, Taesik You, Jessica Singh-Banga, Rachel Meza ve Alex Chavez dahil UCSD lisans öğrencileri. Bu yayında bildirilen araştırma, American Thoracic Society'den J.L.'ye yapılan bir araştırma bursu ve NIH:R01GM131044'ten W.X.L'ye kadar fonla desteklenmiştir.

1. İlaç kütüphanesi nin hazırlanması
<ol><li>İstenilen konsantrasyonda uygun çözücü kullanılarak taranacak bir ilaç kütüphanesi belirleyin ve hazırlayın (örneğin, DMSO'da 10 mM). NOT: Bir ilaç kütüphanesi için özel bir örnek Ulusal Kanser Enstitüsü (NCI) Gelişimsel Tedavi Programı (DTP) Onkoloji Seti III olduğunu. Bu setteki bileşikler 10 mM'de 10 mM'de %100 DMSO'da 96 kuyulu iki PP U-alt plakada 20 μL olarak sağlanır ve -20 °C'de saklanır. NCI Plate haritaları ve her ilacın temel kimyasal verileri aşağıdaki web sitelerinde bulunabilir: <a href="https://dtp.cancer.gov/dtpstandard/servlet/PlateMap?searchlist=4740&outputformat=html&searchtype=plate&Submit=Submit" target="_blank">NCI plaka numarası 4740</a> <a href="https://dtp.cancer.gov/dtpstandard/servlet/PlateMap?searchlist=4741&outputformat=html&searchtype=plate&Submit=Submit" target="_blank">NCI plaka numarası 4741</a>
</li>
</ol>2. Drosophila kullanarak heterokromatin teşvik edici ilaçlar için ekran
<ol><li>
Drosophila Üreme stratejisi (Şekil 1A)<ol>
<li>1. Gün: Çapraz üç w1118/Y; DX1/CyO erkek sinekler ve üç veya daha fazla bakire w1118 dişi sinekler 25 mm x 95 mm gıda şişesi standart Drosophila gıda medya 9 mL (Bloomington tarifi). Her ilaç için üç şişe ve ekran için bir kontrol çoğaltmak ayarlayın. NOT: DX1 sinekler nazik James Birchler (Missouri Üniversitesi)9,13tarafından sağlanmıştır.</li>
		<li>2. Gün ve Gün 3: Sineklerin oda sıcaklığında (22 °C) 2 gün boyunca yumurtlamalarına izin verin.</li>
		<li>4. Gün: Ebeveyn sineklerini canlandırmak için kısa bir CO2 gazı patlaması kullanın ve ebeveyn sineklerini "sinek morgunda" (%70 alkol içeren bir şişe) atın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Tarama için Drosophila'ya ilaç yedirin.<ol>
<li>Her ilaç bileşiğini orijinal stoktan seyreltin (96 kuyulu PP U-alt plakalarda %100 DMSO'da 10 mM'de 20 μL) suda %33 DMSO ile 10 μM son konsantrasyona kadar seyreltin. Kontrol olarak herhangi bir ilaç olmadan suda% 33 DMSO kullanın. NOT: Bazı ilaçlar suda kötü çözünür ve DMSO'da çözünmüştür. %100 DMSO sinekler için zehirlidir. %33'ü tolere edilebilir.</li>
		<li>4. Gün: Pipet 60 μL 10 μM uyuşturucu çözeltisi veya kontrol sinek gıda üstüne. Bu noktada, ebeveyn sinekler kaldırılmış olduğundan emin olun ve sinek yumurta ve gıda üzerinde ilk instar larvaları sürünerek vardır.</li>
		<li>6. Gün: Aynı 10 μM ilaç çözeltisinin 60 μL'lik kısmını gıda şişesine tekrarlayın. NOT: Sinekli gıdaya ilaçlar eklenmiştir, üst yüzey gıdayaklaşık 10 μM konsantrasyon içerir ve alt gıda tam olarak nüfuz edilemez. Tüm sinekler gıda üstüne yumurta bırakır ve üst yüzey gıda yemek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Göz rengi değişikliklerini gözlemleyin ve puanleyin.<ol>
<li>F1 sinekleri ortaya çıktıktan iki gün sonra (yaklaşık 14. günde), sinekleri inceleyin. F1 sineklerini anestezik için kısa bir CO2 patlaması kullanın ve sinekleri şişelerinden bir filtre kağıdının altından geçerken CO2 yudumlarken gözenekli bir diseksiyon pedine çıkarın.</li>
		<li>Bu pedteki sinekleri bir diseksiyon mikroskobu altında inceleyin. Tüm sineği inceleyin ve w1118/Y'nin tamamınıtanımlayın; DX1/+ heterozigot erkeklerde CyO dominant kıvırcık kanat fenotipi nden yoksun olarak görülürler.</li>
		<li>W1118/Y'nin her birinin göz renginipuanla; DX1/+ heterozigot erkek 1 ile 5 arasında bir ölçekte uçar (Şekil 1B). Beyaz göz rengi yüzdesi aşağıdaki gibi derecelendirildi: 1. <%5 kırmızı dağınık göz toplam yüzey alanı 2. 6% - 25% kırmızı lekeler göz toplam yüzey alanı 3. 26% - 50% kırmızı lekeler göz toplam yüzey alanı 4. 51% - 75% kırmızı lekeler göz toplam yüzey alanı 5. >%75 kırmızı lekeler göz toplam yüzey alanı NOT: Alternatif olarak, homojenize sinek kafaları 100% metanol ve OD 450 nm göz pigmentasyon ölçmek için bir spektrometre kullanın. PEV DX1 erkeklerde daha pronouced çünkü sadece erkek seçin. Her şişede 10'dan fazla erkek puan.</li>
		<li>Puanlanmış her şişedeki tüm erkeklerin ortalama renk indeksi hesaplayın. Her bileşik için triplicates gerçekleştirin (Şekil 1C). NOT: Göz rengi yaşa göre değiştiğinden, bu zamana duyarlı bir adımdır. Göz rengi aynı yaşta hesaplanmalıdır - 2 gün eski. Genellikle >10 sinekler her şişede puanlanmalıdır.</li>
		<li>Bileşiklerin heterokromatin oluşumunu gerçekten desteklediğini doğrulamak için, doğrulamak için batı lekeleme gibi farklı bir teknik kullanın (Şekil 1G).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Morgan, M. A., Shilatifard, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+signatures+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Development%22%5BJournal%5D)">Chromatin signatures of cancer.</a> Genes Development. 29 (3), 238-249 (2015).</li>
<li>Saksouk, N., Simboeck, E., Dejardin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutive+heterochromatin+formation+and+transcription+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Epigenetics+Chromatin%22%5BJournal%5D)">Constitutive heterochromatin formation and transcription in mammals.</a> Epigenetics Chromatin. 8, 3(2015).</li>
<li>Allshire, R. C., Madhani, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ten+principles+of+heterochromatin+formation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Ten principles of heterochromatin formation and function.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 19 (4), 229-244 (2018).</li>
<li>Jenuwein, T., Allis, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translating+the+histone+code%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Translating the histone code.</a> Science. 293 (5532), 1074-1080 (2001).</li>
<li>Grewal, S. I., Moazed, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochromatin+and+epigenetic+control+of+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Heterochromatin and epigenetic control of gene expression.</a> Science. 301 (5634), 798-802 (2003).</li>
<li>Heard, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delving+into+the+diversity+of+facultative+heterochromatin%3A+the+epigenetics+of+the+inactive+X+chromosome%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Genetics+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Delving into the diversity of facultative heterochromatin: the epigenetics of the inactive X chromosome.</a> Current Opinion in Genetics & Development. 15 (5), 482-489 (2005).</li>
<li>Ci, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochromatin+Protein+1alpha+Mediates+Development+and+Aggressiveness+of+Neuroendocrine+Prostate+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Heterochromatin Protein 1alpha Mediates Development and Aggressiveness of Neuroendocrine Prostate Cancer.</a> Cancer Research. 78 (10), 2691-2704 (2018).</li>
<li>Zhu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochromatin-Encoded+Satellite+RNAs+Induce+Breast+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cell%22%5BJournal%5D)">Heterochromatin-Encoded Satellite RNAs Induce Breast Cancer.</a> Molecular Cell. 70 (5), 842-853 (2018).</li>
<li>Dorer, D. R., Henikoff, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansions+of+transgene+repeats+cause+heterochromatin+formation+and+gene+silencing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Expansions of transgene repeats cause heterochromatin formation and gene silencing in Drosophila.</a> Cell. 77 (7), 993-1002 (1994).</li>
<li>Fanti, L., Dorer, D. R., Berloco, M., Henikoff, S., Pimpinelli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochromatin+protein+1+binds+transgene+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Heterochromatin protein 1 binds transgene arrays.</a> Chromosoma. 107 (5), 286-292 (1998).</li>
<li>Shi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JAK+signaling+globally+counteracts+heterochromatic+gene+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">JAK signaling globally counteracts heterochromatic gene silencing.</a> Nature Genetics. 38 (9), 1071-1076 (2006).</li>
<li>Shi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+STAT+is+required+for+directly+maintaining+HP1+localization+and+heterochromatin+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Drosophila STAT is required for directly maintaining HP1 localization and heterochromatin stability.</a> Nature Cell Biology. 10 (4), 489-496 (2008).</li>
<li>Ronsseray, S., Boivin, A., Anxolabehere, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-Element+repression+in+Drosophila+melanogaster+by+variegating+clusters+of+P-lacZ-white+transgenes%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">P-Element repression in Drosophila melanogaster by variegating clusters of P-lacZ-white transgenes.</a> Genetics. 159 (4), 1631-1642 (2001).</li>
<li>Loyola, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+methotrexate+as+a+heterochromatin-promoting+drug%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Identification of methotrexate as a heterochromatin-promoting drug.</a> Scientific Reports. 9 (1), 11673(2019).</li>
<li>Dialynas, G. K., Vitalini, M. W., Wallrath, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+Heterochromatin+Protein+1+%28HP1%29+to+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Mutation+Research%22%5BJournal%5D)">Linking Heterochromatin Protein 1 (HP1) to cancer progression.</a> Mutation Research. 647 (1-2), 13-20 (2008).</li>
<li>Janssen, A., Colmenares, S. U., Karpen, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochromatin%3A+Guardian+of+the+Genome%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Heterochromatin: Guardian of the Genome.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 34, 265-288 (2018).</li>
<li>Zhu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BRCA1+tumour+suppression+occurs+via+heterochromatin-mediated+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">BRCA1 tumour suppression occurs via heterochromatin-mediated silencing.</a> Nature. 477 (7363), 179-184 (2011).</li>
<li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unphosphorylated+STAT5A+stabilizes+heterochromatin+and+suppresses+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Unphosphorylated STAT5A stabilizes heterochromatin and suppresses tumor growth.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (25), 10213-10218 (2013).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken çıkar çatışmaları yok.

Heterokromatin gen ekspresyonunu düzenleyen merkezi bir rol oynayan yoğun bir DNA şeklidir. Bu kanser giderek daha fazla tanınan hale geliyor ve kanser tedavisi için potansiyel bir hedef olarak hizmet verebilir15,16,17,18. Küçük moleküllü bileşikler, insan vücudunda üretim, koruma ve metabolizmadaki avantajlar nedeniyle ilaç geliştirmede yaygın olarak kullanılmaktadır. Heterokromatin teşvik ede...

Heterokromatin gen ekspresyonunda merkezi bir rol oynayan, hücre bölünmesi sırasında kromozom ayrımını düzenleyen ve genom instabilitesi1'ekarşı korumada yoğunlaşmış bir DNA şeklidir. Heterokromatin bir gen baskı düzenleyicisi olarak kabul edilmiştir ve hücre mitoz sırasında kromozom bütünlüğünü korumak için2,3. Bu soy taahhüdü 4 sırasında histon H3 lizin 9 (H3K9me) di- ve tri-metilasyon ile ilişkilidir4,5. Ayrıca Heterokromatin Protein 1 (HP1) kromoetkialanı proteinlerinin işe alınmasının da heterokromatin ve gen ekspresyonunun epigenetik baskısı ile ilişkili olduğu kabul edilir6. Bu proteinler heterokromatin oluşumunun temel bileşenleri ve belirteçleridir.
Genomik istikrarsızlık kanserogenezteşvik genetik değişiklikler elde etmek için hücreleri sağlar yana, heterokromatin kanser gelişiminde daha tanınan hale geliyor ve kanser tedavisi için hedeflenebilir7,8. Şu anda heterokromatin oluşumuna yardımcı olmak için iyi kurulmuş hiçbir ilaç bulunmamaktadır. Burada heterokromatin oluşumunu teşvik eden küçük moleküllü bileşiklerin taranması için basit ve hızlı ama etkili bir yöntem salıyoruz. Tarama küçük moleküllü ilaçların bir kütüphane ile Drosophila tedavi ederek yapılır. Bu yöntem, heterokromatin düzeylerinden etkilenen DX1Drosophila suşundaki alacalı göz rengi fenotipinden yararlanır. DX1 sinekleri, heterokromatinizasyona bağlı olarak alacalı ekspresyonu/depresyonuna sahip yedi P[lac-w] transgeniiçeren bir tandem dizisi içerir, bu nedenle göz rengindeki variegasyonun derecesi heterokromatin seviyesini yansıtır. Özellikle, artan heterokromatin alacalı göz rengi (beyaz göz) artan oranda tespit edilebilir. Aksine, azalan heterokromatin P[lac-w] transgen ekspresyonu (kırmızı göz)9,10,11,12artan oranı ile tespit edilecektir.
Bu nedenle, ekspresyonu mevcut heterokromatin miktarıyla doğrudan ilişkili olduğundan, alacalı göz rengi fenotipüreten bu Drosophila transgen sisteminden yararlanıyoruz. Heterokromatin oluşumunu teşvik ettiğinden şüphelenilen bileşiklerin bulunması üzerine, batı lekesi gibi diğer yöntemler le bu şüpheyi doğrulayabiliriz. Bu heterokromatin teşvik edici maddeler ileride hastalarda klinik çalışmalar için daha da geliştirilebilir.

<table><tbody><tr><td>Drosophila</td><td></td><td> DX1 suş</td><td> DX1 sinekleri, James Birchler (Missouri Üniversitesi) tarafından nazikçe sağlandı</td></tr><tr><td>Drosophila Gıda Medyası</td><td>UCSD sinek mutfağı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metotreksat</td><td>NCI ilaç kütüphanesi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td> <td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Etil alkol</td><td>Sigma</td><td>E7023-500ML</td><td></td></tr></tbody></table>

drosophila kullanan heterokromatin-teşvik edici İlaçların tanımlanması nda bir tarama yöntemi

A Screening Method for Identification of Heterochromatin-Promoting Drugs Using Drosophila

Drosophila kanser tedavisi için yararlı olabilir bileşikleri taramak için kullanılabilir mükemmel bir model organizmadır. Burada açıklanan yöntem Drosophilakullanarak heterokromatin teşvik bileşikleri tanımlamak için bir maliyet-etkin in vivo yöntemidir. Drosophila's DX1 suşu, heterokromatin oluşumunun derecelerini yansıtan bir alacalı göz rengi fenotip sahip, böylece bir heterokromatin teşvik ilaç ekranı için bir araç sağlayan. Bu tarama yönteminde, göz variegasyonu gözün yüzey alanına göre ölçülür ve 1 ile 5 arasında bir ölçekte puanlandırılır. Tarama yöntemi basit ve hassastır ve bileşiklerin in vivo test edilmesine olanak tanır. Bu yöntemi kullanarak ilaç tarama kanser terapötik yararlı etkileri olabilir heterokromatin teşvik ilaçların belirlenmesi için hızlı ve ucuz bir yol sağlar. Heterokromatin oluşumunu teşvik bileşiklerin belirlenmesi de kanser gelişiminin epigenetik mekanizmaların keşfine yol açabilir.

Bu protokol, drosophilaheterokromatin oluşumunu teşvik bileşikleri taramabaşarıyla kullanılmıştır , hangi ilaç gelişimi için vivo sistemi etkili ve düşük maliyetli(Şekil 1). Drosophila melanogasterinin DX1 türünü kullanarak 97 FDA yetkili onkoloji ilacından oluşan onkoloji seti III adlı küçük moleküllü bir ilaç kütüphanesini taradık (Şekil 1B). Önemli bir ilacın sonuçları bir çubuk grafikte gösterilmiştir<strong class=...

Drosophila kanser tedavisi için potansiyel uygulamaları ile tarama ilaçları için uygun yaygın olarak kullanılan deneysel bir modeldir. Burada, Heterokromatin oluşumunu teşvik küçük moleküllü bileşiklertarama için bir yöntem olarak Drosophila alacalı göz rengi fenotiplerin kullanımını açıklar.

Drosophila Kullanan Heterokromatin-Teşvik Edici İlaçların Tanımlanması nda Bir Tarama Yöntemi

Drosophila is an excellent model organism that can be used to screen compounds that might be useful for cancer therapy. The method described here is a ...

Şu anda heterokromatin oluşumunu teşvik iyi kurulmuş hiçbir ilaç vardır. Burada bu süreci teşvik küçük molekül bileşikleri tanımlamak için basit ve verimli bir yöntem salıyoruz. Tarama protokolümüz heterokromatin teşvik edici ilaç tanımlaması için in vivo sistemi takip edilmesi kolay, basit, ucuz ve kolay bir sistem sağlar.Heterokromatin oluşumunu teşvik bileşiklerin belirlenmesi, onarıyor ve kanser tedavisi kanser mekanizmalarının keşfine yol açabilir. Bu maliyet etkin Drosophila heterokromatin teşvik bileşikleri tanımlamak için ölçüldü de hücre tarama en yüksek hücre havuzu için önleyici bir önlem olarak form isabet saymak için kullanılabilir. Bu Drosophila TranSheet sistemi sineğe mevcut heterokromatin miktarı ile ters orantılı bir alacalı göz rengi fenotip üretir gibi bizim tarama protokolü de hızlı pilot ekranlar için yararlı olabilir.Prosedürü niçin göstermek için Yardım Kenny Dao, bizim laboratuvar dan bir lisans öğrencisi olacaktır. Uygun bir çözücü kullanarak bir tarama için bir ilaç kütüphanesi tanımladıktan ve hazırladıktan sonra, ve istenilen konsantrasyon, üç erkek sinekler çapraz üç veya daha fazla bakire kadın sinekler bir 25 tarafından 95 milimetrelik gıda şişesi. Standart Drosophila gıda ortamı dokuz milimetre ile.Her ilaç için üç tane kopya şişe ayarlayın. Ekran için bir kontrol şişesi ekleyin. Ve sineklerin oda sıcaklığında iki gün boyunca yumurtlamalarına izin verin.Haçın ikinci gününde, sinekleri kısa bir karbondioksit patlamasıyla anestezi edin. Ve% 70 etanol içeren bir şişe içinde ebeveyn sinekatın. Daha sonra, ilk stoktan her ilaç bileşiğini seyreltin ve suda %33 DMSO'daki mikro molar son konsantrasyonuna katılın.Ve 60 mikrolitre ilacın ekleyin, ya da kontrol 33% DMSO tek başına, sinek gıda üstüne. O zaman şişelerde ebeveyn sineklerinin bulunmadığını doğrulayın. Ve ilaç çözeltisini uygun şişelere ekleyin.F1 sinekleri ortaya çıktıktan iki gün sonra, anestezik sinekleri bir şişeden filtre kağıdının altından süzülen karbondioksit içeren gözenekli bir diseksiyon yastığına aktarın. Bir diseksiyon mikroskobu altında, her bir sinek incelemek, kıvırcık o-baskın kıvırcık kanat fenotipi eksikliği ile heterozigot erkeklerin tüm tespit. Puan her heterozigot erkek göz rengi bir ile beş arasında bir ölçekte.Bir puan ile daha az% 5 kırmızı dağınık göz toplam yüzey alanına atanmaktadır. %6-25 kırmızı nokta göz toplam yüzey alanı ile sinekler için iki puan ekleyin. %26-50 kırmızı nokta göz toplam yüzey alanı ile sinekler için bir üç.%51-75 kırmızı nokta göz toplam yüzey alanı ile uçar dört. Ve beş sinek %75'ten daha büyük kırmızı nokta göz toplam yüzey alanı ile. Sonra triplicate puan her şişe tüm erkeklerin ortalama renk indeksi hesaplayın.Bileşiklergerçekten heterokromatin oluşumuteşvik onaylamak için, farklı bir doğrulama tekniği, batı lekeleme gibi, yapılabilir. Bu temsili deneyde, 97 FDA yetkili onkoloji ilaçlarından oluşan onkoloji seti 3 olan küçük moleküllü ilaç kütüphanesi Drosophila Melanogaster'in DX1 suşkullanılarak tarandı. Tarama tadına göre, kütüphanede E7 olarak kodlanan metotreksat, Dx1 suşu içinde en fazla varyasyona neden oldu.Metotreksat gelecekteki kanser hedefli tedavi için en umut verici heterokromatin teşvik ilaç olabileceğini düşündüren. Bu bileşiğin heterokromatin dönüşümlerini desteklediğini doğrulamak için batı leke verileri gerçekleştirildi. Ilişkili protein, H3K9 trimilasyon heterokromatin formatının yukarı düzenleme gösteren ve tarama sonuçları doğrulanması.Kritik adım, önceden belirlenmiş bir çalışma rotasına göre 1-5 arasında bir ölçekte beyaz 11-18 DX1 heterozigot erkek sineklerin her birinin göz rengini puanlamadır. Darbeleri doğrulamak için batı lekelerini ya da immünboymayı kullanabiliriz. Heterokromatin oluşumunu teşvik ettiğinden şüphelenilen bileşiklerin keşfi, insan hastalarında kanser gelişiminin IV genetik mekanizmasının ve klinik çalışmaların keşfine de yol açabilir.

a-screening-method-for-identification-heterochromatin-promoting-drugs

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetik

Son zamanlarda yüksek verimlilik sıralama teknolojisi büyük ölçüde Kromatin immünopresipitasyon (ChIP) deney duyarlılığı artmış ve saflaştırılmış hücreleri veya disseke doku kullanarak uygulama açtı. İşte biz ChIP tekniği kullanılacak bir yöntem...

Kullanarak Kromatin immünopresipitasyon (ChIP) Drosophila Doku

Bu videoda, genomu CRISPR-Cas9 kullanılarak modifiye edilen transgenik Drosophila sineklerini tanımlamak için bir tarama yöntemi açıklanmaktadır. CRISPR-Cas9, bilim insanlarının bir organizmanın genomunu manipüle etme biçiminde devrim yaratan güçlü bir genom düzenleme aracıdır. Örnek protokolde, bir transaktivasyon dizisinin eklenmesinin dalsız (bnl) genin ilk eksonunun yerini aldığı ve böylece bnl genine özgü bir sürücü hattı olan bnl-LexA'nın oluşturulduğu CRISPR tarafından üretilen...

Genomik Modifikasyonların Taranması: Drosophila'da CRISPR Tarafından Üretilen Mutantları Tanımlamak İçin Bir Yöntem

Gelişmekte olan embriyoya Drosophila küçük moleküllerin giriş yeni bileşikler, ilaçlar, toksinler ve biyolojik aktivitesini karakterize edici hem de temel geliştirme yolunu tarama için büyük bir potansiyel sunmaktadır. Açıklanan yöntemler burada Drosophila embriyo modelin programını genişleterek, bu yaklaşımın doğal engelleri aşmak adımları özetlemektedir.

Geçirgenliği için bir yöntem<em&gt; Drosophila</emKüçük Molekül Faaliyet Tahliller için&gt; Embriyolar

Bu yayının amacı, görselleştirmek ve Drosophila çıkarılan RNA bir Geliştirilmiş Northern Blot protokolünün ameliyat adımları görüşmek embriyolar, hücreleri ve dokuları melanogaster etmektir. Bu protokol küçük RNA türünün etkin tespiti için özellikle yararlıdır.

Küçük RNA Türlerin Northern Blot Algılama geliştirilmiş Drosophila melanogaster

Bu eser bir protokolünü açıklar yüksek çözünürlüklü in situ Hi-C kitaplıklardan nesil sıkıca öncesi gastrulasyon Drosophila melanogaster sahnelenen için embriyo.

Genom çapında kromatin Conformation yakalama kitaplıklardan sıkıca aşamalı erken Drosophila embriyo nesil

Drosophila melanogaster'da nörodejenerasyon gösteren mutantlar için ekrana ileri genetik bir yaklaşım kullanarak bir protokol sunuyoruz. Bu bir tırmanma tahlil, Histoloji analizi, gen haritalama ve sonuçta nörokoruma süreci ile ilgili yeni genler belirlemek için DNA sıralaması içerir.

In vivo Ileri genetik ekran Drosophila melanogaster yeni Nörokoruyucu genler tanımlamak için

Bu yöntem hücre hatlarında ÇHC2 aracılı kromatin etki alanlarının oluşumunu takip etmek için tasarlanmıştır ve yöntem diğer birçok sistemlere uyarlanabilir.

Kromatin Etki Alanlarının De novo Oluşumunu İnceleme Yöntemi

Bu protokol, meyve sineği metamorfoza uğrarken Drosophila abdominal epitelde hücre oryantasyonu ve doku büyüme dinamiklerinin görüntülenmesi ve analizi için tasarlanmıştır. Burada açıklanan metodoloji Drosophila veya diğer model organizmalarda farklı gelişimsel aşamaların, dokuların ve hücre altı yapıların incelenmesine uygulanabilir.

Pupal Evrelerinde Gelişen Drosophila Epitelinde Doku Oryantasyonu ve Büyüme Dinamiğinin Görüntülenmesi ve Analizi

Bu protokol, Drosophila politen hücrelerindeki heterokromatin agregalarını görselleştirmeyi amaçlamaktadır.

Drosophila Tükürük Bezlerinde Heterokromatin İlişkili Proteinlerin Görselleştirilmesi için İmmünofluoresan Boyama

5-etil-2'-deoksiyridin (EdU) ve fosfo-histon H3 (pH3) etiketlemeli hücre döngüsü analizi, kapsamlı optimizasyon gerektirebilecek çok adımlı bir prosedürdür. Burada, farklı hücre döngüsü aşamalarındaki hücreleri ayırt etmek için görüntü analizi ve niceleme dahil olmak üzere bu prosedür için tüm adımları açıklayan ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

5-Etil-2'-Deoksiroridin/Fosfo-Histon H3 Drosophila Nöral Kök Hücrelerde Hücre Döngüsü İlerleme Analizi için Çift Etiketleme Protokolü

Burada, başarılı genetik modifikasyonların işaretsiz tanımlanması için PCR tabanlı bir teknik kullanan ve stabil knock-in hatlarının geliştirilmesini kolaylaştıran Drosophila için basitleştirilmiş bir endojen gen etiketleme protokolü sunuyoruz.

Drosophila melanogaster'de Endojen Gen Etiketleme için Tek Adımlı CRISPR Tabanlı Strateji

Keşfedin, Drosophila kullanarak heterokromatin oluşumunu destekleyen ilaçları taramak için basit ve ekonomik bir yöntemi. Bu protokol, göz rengi fenotiplerini ölçüt olarak kullanarak kanser tedavisi araştırmalarında yeni bileşiklerin hızlı tespitini sağlar.

Drosophila Kullanan Heterokromatin-Teşvik Edici İlaçların Tanımlanması nda Bir Tarama Yöntemi

Daha fazla video keşfet