Teleostların Koku Sinirinden Ekstrasellüler Çok Birimli Kayıt

Bu, CNS tarafından herhangi bir işlem den önce tamamen duyusal bir sinyal kaydeder gibi deniz balıklarında koku hassasiyetini değerlendirmek için en sağlam ve hassas yöntemdir. Bu tekniğin en önemli avantajları duyarlılığı ve dış tuzluluktan bağımsız olarak farklı bir ortamdan farklı bir türe kolayca aktarılabildiğidir. Kontrol suyunu hazırlamak için, bir litre kömür filtreli deniz suyu toplayın ve pH'ı kontrol etmek için bir pH sondası kullanın.

pH 8.2 civarında olmalıdır. Değilse, 8.2 pH ulaşınkadar atmosferik hava ile deniz suyu kabarcık. Daha sonra, suyun alkalinitesini ölçmek için bir alkalinite titratör kullanın, sonra su sıcaklığını ve tuzluluk ölçmek.

Yüksek karbondioksitli su hazırlamak için, istenilen pH ulaşılAna kadar karbondioksit ile köpüren önce partikül inaktive kömür filtreleri ile deniz suyu bir litre filtre. 7.7 civarında olmalıdır pH kontrol etmek için bir pH prob kullanın, sonra suyun alkalinitesini ölçmek ve su sıcaklığı ve tuzluluk ölçmek için bir alkalinite titratör kullanın. Hem kontrol hem de yüksek karbondioksit lisanlı sudaki karbondioksit basıncını belirlemek için, sudaki karbondioksit parametrelerini hesaplamak ve giriş penceresine su tuzluluğu, sıcaklık, basınç, toplam alkalinite ve pH değerlerini eklemek için tasarlanmış bir yazılım programı açın.

Ardından sabitleri, ölçekleri ve birimleri seçin ve karbondioksit basıncını belirlemek için işlemi tıklatın. Kuyruk kıskacına yanıt verilmemesi nedeniyle uygun bir sedasyon seviyesini doğruladıktan sonra, anestezili balığı model için özelleştirilmiş bir yastık desteğine yerleştirin ve balığın ağzına uygun büyüklükte bir silikon tüp yerleştirin. Tüp bir dalgıç pompa ve anestezik içeren bir rezervuar gazdeniz suyu ve su solungaçları üzerinde kilogram başına dakikada yaklaşık 100 mililitre pompalanır bağlı.

Daha sonra, yan kas içine bir topraklama pimi takın ve amplifikatör baş aşamasına pin bağlayın. Sadece baş maruz nemli bezle balık kapağı ve burun deliği içinde uyarıcı iletim sistemi ile tüp konumlandırmak. Koku sinirlerini ortaya çıkarmak için, gözler arasında kafatasıderi ve kemik kaldırmak için bir matkap ve bir diseksiyon mikroskop kullanın.

Bir çipura kullanırken, sadece gözleri posterior ve gözler arasında kemik kaldırmak için matkap kullanmak için gözlerin hemen üzerinde kafatası parçası kaldırmak için dairesel bir testere kullanın. Yeterli kemik temizlendikten sonra, sinirlere veya damarlara zarar vermeden koku sinirlerini örten yağ ve bağ dokusunu çıkarmak için ince çalgılar kullanın. Elektrotları kullanmadan önce üç voltluk dc kaynağın negatif direğine bağlayarak ve ucu fizyolojik tuzluya 20-30 saniye süreyle yerleştirerek temizleyin.

Küçük kabarcıklar sürekli bir akış ucu gelen görülmelidir. Parilene kaplı tungsten elektrotları alternatif akım AC preamplifikatörünün baş aşamasına bağlayın. Koku alma sinirleri maruz kaldıktan sonra, standart ve boş minimum yanıt maksimum yanıt veren bir pozisyonda uygun koku sinir içine elektrotlar eklemek için mikro-manipülatörler kullanın.

Diseksiyonun sorunsuz geçmesini sağlamak, kritik adım elektrotları doğru konuma sokmaktır. Bu zaman alabilir ve deneme yanılma belirli bir dereceye kadar içerir. Elektrofizyolojik ölçümler elde etmek için, temiz arka plan suyundan su içeren uyarıcıya hızlı geçişsağlamak ve ortak çıkışı koku rosetinde su taşıyan tüpe bağlamak için bir uyarıcı dağıtım sistemi kurmak için bir solenoid işletilen üç yönlü valf kullanın.

Bir satırı arka plan deniz suyuna, diğerini de test çözümüne yerleştirin. Valf sürücüsünü analog dijital dönüştürücünün tetikleyicisine bağlayın ve yazılımı tetikleyici olayda kayda başlamak ve önceden belirlenmiş bir süre devam edecek şekilde yapılandırın. Hazırlığın kararlılığını kontrol etmek için, tekrarlanan uyaranlar arasında bir dakika nın akmasını sağlayan standartla birlikte tümleşik yanıtın genliğini tekrar tekrar kaydedin ve ölçün.

Daha sonra, kontrol deniz suyunda amino asitlere koku sinir yanıtları kaydedin ve ardışık uyaranlar arasında bir dakika elapsına izin, sonra bir kontrol su boş çözeltisi negatif üçüncü azı serine bir kez 10 yanıtı kaydedin. Sonra yüksek karbondioksit deniz suyunda amino asitlere koku sinir yanıtları kaydedin. Yüksek karbondioksitli su boş çözeltisine verilen tepki ve bir kez 10'a verilen yanıt, kontrol suyu boş çözeltisindeki negatif üçüncü azı azı nabiyosu.

Burada, bir çipuranın koku sinirinden kaydedilen pozitif ve negatif kontrol uyaranlarına tipik tepkiler gösterilmiştir. Uyarıcı uygulamasının yaklaşık bir saniye içinde, uyarıcı hala mevcut iken bir konaklama dönemi ve uyarıcı sona erdikten sonra temel aktiviteye dönüş gibi hızlı bir aktivite artışı gözlemlenebilir. Buna karşılık, boş bir uyarıcı çok az veya hiç yanıt çağrıştırır.

Bu tipik konsantrasyon yanıt eğrisinde, bir kokunun artan konsantrasyonlarının aktivitede giderek daha büyük artışlara ve dolayısıyla entegre yanıtların genliğini uyandırabildiği gözlenebilir. Normalleştirilmiş verilerin çizilmesi ve buna karşılık gelen doğrusal regresyon, her bir hayvanın veya bir grup hayvanın konsantrasyon yanıtları için algılama eşiğinin tahmin inmesine olanak tanır. Sigmoidal konsantrasyon yanıt eğrileri yarı logaritma çizilebilir, bu da %50 maksimal yanıtta çağrıştıran koku konsantrasyonunun hesaplanmasına olanak sağlar.

Bu mümkün olduğunca sağlıklı balık tutmak için önemlidir. Örneğin, solungaçların yeterince sulandırıldığından ve koku epitelinin kayıt sırasında ıslak tutulduğundan emin olun. Amaçlarımızdan biri beyindeki sinir yollarının izini duyusal bilgilerin aktarıldığı yere kadar takip etmek.