Name: Cerrahi Fare Modelinde Osteoartritin Standart Histomorfometrik Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Öğrenin, osteoartritli farelerde eklem değişikliklerinin standart histomorfometrik analizini. Bu yöntem, tedavi etkinliğini değerlendirmek ve hastalık ilerlemesini izlemek için güvenilir bir çerçeve sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Karşılaştırmalı Tıp Bölümü personeli ve Penn State Milton S. Hershey Tıp Merkezi Moleküler ve Histopatoloji çekirdek yardım larını kabul etmek istiyorum. Finansman kaynakları: NIH NIAMS 1RO1AR071968-01A1 (F.K.), ANRF Artrit Araştırma Bursu (F.K.).

Jax Labs'dan 12 haftalık erkek C57BL/6 fare satın alındı. Tüm fareler 12 saat ışık/karanlık programa sahip bir odada mikro-izolatör kafesbaşına 3-5 fareden oluşan gruplar halinde barındırıldı. Tüm hayvan prosedürleri, Ulusal Sağlık Enstitüsü (NIH) Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na göre gerçekleştirildi ve Pennsylvania Eyalet Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı.
1. Travma sonrası osteoartrit (PTOA) cerrahi modeli
<ol><li>İntraperitoneal enjeksiyon yoluyla ketamin (100 mg/kg)/xylazine (10 mg/kg) kombinasyonu nu kullanarak fareleri anestezik, ağrı kesici için intraperitoneal enjeksiyon yoluyla buprenorfin (1 mg/kg) uygulayın ve saçı diz üzerinde tıraş edin. Ameliyata başlamadan önce pedal reflekseksikliği olup olmadığını kontrol edin.</li>
	<li>Daha önce açıklandığı gibi medial menisküs (DMM) cerrahi istikrarsızlık gerçekleştirin22,23. NOT: Daha ayrıntılı cerrahi protokol bilgileri için Lütfen Glasson et al. ve Singh ve ark. referanslarına bakın22,23.<ol>
<li>Distal patelladan sağ diz ekleminin proksimal tibial platoya kadar 3 mm boyuna kesi yapın. Patellar tendonu yerinden etmek için bir dikiş kullanın.</li>
		<li>Tendon için eklem kapsülü medial açın ve intercondylar bölge, medial menisküs ve meniscotibial ligament23görselleştirmek için infrapatellar yağ yastığı hareket .</li>
		<li>Transect medial meniscotibial ligament DMM tamamlamak ve eklem istikrarsızlaştırmak için22,23. Kesi bölgesini zımba veya dikişlerle kapatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Benzer bir prosedür aşağıdaki sahte ameliyatlar gerçekleştirin, ancak medial meniscotibial ligament transection olmadan. NOT: Fareler DMM veya sahte cerrahi almak için randomize edildi. Daha önce yayınlanan literatüre göre, fareler DMM cerrahisi12hafta sonra önemli PTOA geliştirmek 22,23,24.</li>
</ol>2. Fare ötenazisi ve örnek toplama
<ol><li>Fare ötenazi<ol>
<li>DMM'den 12 hafta sonra, intraperitoneal enjeksiyon yoluyla ketamin (100 mg/kg)/xylazine (10 mg/kg) kombinasyonu kullanarak fareleri anestezi yetirin.</li>
		<li>Toraks boyunca deri yoluyla bir orta hat kesi yapmak ve perfüzyon fiksasyon için kalp ortaya çıkarmak için göğüs kafesi geri çekmek27. NOT: Uygun kemirgen fiksasyonu protokolü hakkında ek bilgi ve uygun ekipman montajı ve prosedürleri video tasviri için Gage ve ark referans bakın27.</li>
		<li>Perfüzyon cihazını üreticinin protokolüne göre ayarlayın.</li>
		<li>Kan temizlenir ve karaciğer soluk hale gelene kadar sol ventrikül yoluyla heparinize salin perfüzyon tarafından fare ötenazi. Fare fiksasyonu tamamlanana kadar fareyi %10 nötr arabellekli formalin ile perfuse. NOT: Başarılı bir şekilde perfüzyona kullanılan fare sertleşir. Otomatik pompa sistemi kullanılarak ortalama perfüzyon süresi 5-7 dk'dır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Numune toplama ve hazırlama<ol>
<li>Orta uyluk kemiği ve orta tibia kemik keserek diz izole ve çevreleyen kas dokusu nu incelemek.</li>
		<li>Diz eklemlerini oda sıcaklığında 24 saat, sonra 4 °C'de 6 gün boyunca %10 nötr tamponlu formalin de saklayarak fiksasyona devam edin.</li>
		<li>Hafif sallayarak oda sıcaklığında 1 hafta BOYUNCA EDTA kireçlenme tampon örnek saklayarak kemik dekalsite28. Çıkartma arabellek çözümünü her 3 günde bir değiştirin. NOT: Kireçlenme tamponu, 850 mL distile su artı 15 mL buzul asetik asit çözeltisi halinde 140 g ultrasaf EDTA tetrasodyumer olarak hazırlanmıştır. Tampon çözeltiye buzul asetik asit damla ile 7.6 pH dengelendi. pH = 7.6'ya ulaştıktan sonra tampon, distile su ile toplam 1 L hacmine getirildi. Kireçlenme tamponu taze olarak hazırlanır ve hazırlanışı ndan sonraki 1 hafta içinde kullanılır.</li>
		<li>% 50 etanol ile dizyıkama, sonra% 70 etanol her 15 dakika için, sonra gömme için süreç. NOT: Sıvı transferi işlemi Penn State Milton S. Hershey Tıp Merkezi'nde Moleküler ve Histopatoloji Core tarafından gerçekleştirilmiştir. En iyi numune işleme önerileri için kurumun histoloji çekirdeğine başvurun.</li>
		<li>Fare dizlerini, eklemin parafin bloğunun alt yüzeyine bakan medial yönüyle parafine yerleştirin. Kaval ve femoral yüzeylerin mümkün olduğunca aynı düzleme yakın olduğundan emin olmak için katıştırma sırasında eklemtibial tarafına hafif basınç uygulayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Mikrotom kesitve slayt seçimi
<ol><li>Mikrotom kesiti<ol>
<li>Numune bloğunun düzgün bir şekilde karşı karşıya kalmasını sağlamak için mikrotomun blok tutucuüzerindeki düzlem ayar düğümlerini kullanın.</li>
		<li>Yüz parafin bloğu böylece femur distal yönü, tibia proksimal bölge, ve medial menisküs anterior ve posterior boynuzları kesit koleksiyonu için aynı düzlemde görünür(Ek Şekil 1A). Medial menisküsün ön ve arka boynuzları birbirinden ayırmaya başladığında slaytlarda kesittoplamaya başlayın.</li>
		<li>Kaval kemiği, femur ve meniscinin yapı büyüklüklerini karşılaştırarak aynı düzlemde görünmesini sağlayın. Tibia ve femur benzer boyutta olmalıdır, her iki meniskal boynuzları boyutu ve şekli benzer(Ek Şekil 1A). Bir yapı, muadili ile karşılaştırıldığında çok büyük görünüyorsa, bu ek bir yüzey gerekli olduğunu gösterir. Daha da önemlisi, eklem alanının bozulmadığını doğrulayın.</li>
		<li>Parafin le gömülü fare dizlerinin sagittal bölümlerini 5 μm'lik bölümlerdeki medial eklem bölmesi üzerinden alın ve slaytlar üzerindeki bölümleri toplayın. Parafin bloğu başına yaklaşık 30 bölüm toplayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Slayt seçimi<ol>
<li>Beşinci bölümden başlayarak her örnek için 50 μm arayla üç temsili bölüm seçin (örneğin, slayt 5, 15 ve 25). Sonraki boyama, OARSI skorlama ve histomorfometrik analiz için seçilen slaytlar kullanılacaktır. NOT: Toplam 30 bölümden oluşan bir bloktan, tüm örneği net bir şekilde temsil etmek için setin başından (slayt 5-10 slayt), orta (slayt 15-20) ve sonu (slayt lar 25-30) slaytlarını seçin. Örnekler arasında benzer derinlik düzeylerinden slaytlar seçin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Hematoksilin, Safranin Portakal, ve Hızlı Yeşil boyama
<ol><li>Seçilen slaytları üç ksilen değişikliğiyle deparaffinize edin. Slaytları %100 etanol, %95 etanolde iki değişiklik ve %70 etanol değişimi ile nemlendirin.</li>
	<li>7 dakika hematoksilin ile slaytlar leke sonra 10 dakika boyunca akan su ile yıkayın. 3 dakika hızlı yeşil ile leke ve 10 s. Safranin-O ile 10 s. Leke 5 dakika ve hızlı bir şekilde% 0.5 buzul asetik asit daldırma ile durulayın.</li>
	<li>Distile su iki değişiklik slaytlar durulayın ve hava kurumasını bekleyin.</li>
	<li>Her biri 5 dakika boyunca ksilenin üç değişiklik slaytlar temizleyin sonra ksilen tabanlı montaj ortamı ve bir coverslip ile monte. NOT: Hematoksilin kemik iliği alanları tanımlamak için nükleer leke olarak hizmet vermektedir. Safranin-O kıkırdak, proteoglikanlar, müsin ve mast hücreli granülleri lekelemek için kullanılır. Hızlı Yeşil kemik için bir karşı leke olarak kullanılır.</li>
</ol>5. Slayt görüntüleme
<ol><li>Mikroskop ve bilgisayar tabanlı görüntüleme yazılımına bağlı mevcut bir kamera yı kullanarak Safranin-O ve Fast Green lekeli slaytları görüntüleyin.</li>
	<li>Görüntüleme yazılımını açın (Bkz. Malzeme Tablosu)ve görüntüleme penceresinin ortasında diz eklemi bölgesini (RoI) düzenleyin. Bir dönme mikroskop slayt aşaması kullanıyorsanız, kaval yüzey görüntüleme bölgesinin yatay eksen genişliğine yayılacaktır şekilde slayt hizalamak.</li>
	<li>Bir dizi örnek le görüntüye başlamadan önce kameranın beyaz dengesini ayarlayın(Ek Şekil 2). Hem 4x hem de 10x büyütmede eklem bölmesi görüntü, hem tibial hem femoral eklem yüzeyi ve tibial subkondral kemik görüntü ROIs her içinde dahil olmasını sağlamak (Ek Şekil 1A, B). OARSI puanlamaiçin kullanılacak seçilen üç düzeyin her biri için görüntüleri kaydedin. NOT: Kameranın beyaz dengesinin ayarlanması kullanılan yazılım ve kamera sistemlerine bağlıdır. Genellikle, Kamera Sekmesi veya Ana Görüntüleme Menüsüne gidin ve Beyaz Dengesi Ayarla'yagidin. Beyaz Dengesi Ayarla'yı seçin ve küçük bir imleç veya simge görünmelidir(Ek Şekil 2A). İmleci kullanarak, beyaz dengesini ayarlamak için görüntü/örnek içinde eklem alanı gibi lekesiz bir alan seçin.</li>
</ol>6. Osteoartrit araştırma topluluğu uluslararası (OARSI) puanlama15
<ol><li>Seçilen üç Safranin-O ve Hızlı Yeşil lekeli slaytları tüm örneklerden randomize edin.</li>
	<li>Üç gözlemci ile kör bir şekilde OARSI puanlama gerçekleştirin. Kısaca, rasgele sırayla bir seferde bir görüntü görüntüleyin ve her örnek için seçilen üç seviyeden biriyle ilişkili olarak üç gözlemcinin her görüntüyü puanlamasını bekleyin. NOT:15nolu derecelendirme ölçeğinin ayrıntılı açıklamaları için lütfen OARSI puanlama tablosuna bakın.</li>
	<li>Her gözlemciden ayrı ayrı puanları kullanarak her bölümün ortalama puanını hesaplayın. Üç temsilci bölümün ortalama puanını alarak örnek başına ortalama puanı belirleyin.</li>
</ol>7. Histomorfometrik analiz
NOT: Diz ekleminin canlı görüntüleri bir mikroskop kamera kullanılarak dokunmatik ekranlı monitörde izlenir ve ROI'ları manuel olarak izlemek için bir kalem kullanılır. Histomorfometri yazılımının yerleşik algoritmaları, tanımlanan ROI'larda belirtilen parametreleri (aşağıdaki Protokol'e bakın) ölçer. Daha da önemlisi, histomorfometrik analiziçin OARSI puanlamasında kullanılan aynı Safranin-O ve Fast Green lekeli kesitler kullanılmaktadır.
<ol><li>Yazılım kurulumu ve ölçüm hazırlama<ol>
<li>Mikroskopu, kamerayı, bilgisayarı ve dokunmatik ekranı açın. Yazılım programını başlatmak için Yazılım Simgesi'ne tıklayın. Slaytı görüntülemek için mikroskop aşamasına yerleştirin.</li>
		<li>Örneği ölçüm penceresi içinde ortala. Ölçüm ızgarasının mikroskopta kullanılan hedefe uyacak şekilde uygun büyütmeye ayarlandığından emin olun(Ek Şekil 3).</li>
		<li>Ekranın üst kısmındaki Dosya sekmesine gidin ve Ayarlar'ı Oku'yagidin. Ayarlar penceresini açın ve ölçülecek parametreler için uygun ayarlar dosyasını seçin.</li>
		<li>Ekranın sağ tarafındaki listeden ölçülecek parametreyi seçin (Ek Şekil 3). Belirli doku ROI'larını ölçmek için aşağıda açıklanan adımlara göre görüntüleri izlemek için kalemi veya fare imlecini kullanın. Her ölçümle tamamlandığında, ölçümü sonlamak ve bir sonraki parametreye devam etmek için Sağ Tıklatın. NOT: Ölçülecek parametreler listesi, açıklanan ROI'ları ölçmek amacıyla yazılım şirketiyle istişare edilince oluşturulan farklı bir tercih dosyası aracılığıyla oluşturulur. Kurulumun tamamıyla ilgili daha fazla bilgi için lütfen tartışmaya bakın.</li>
		<li>Tüm ölçümleri tamamlayın ve ardından yazılım ekranının altındaki Özet Veri sekmesine gidin(Ek Şekil 3). Ekran penceresine tıklayın, klavyedeki Ekle tuşuna basın veya verileri kopyalayıp ayrı bir elektronik tabloya yapıştırın. NOT: Histomorfometrik analizi randomize ve kör bir şekilde gerçekleştirin. Tüm numuneler için tüm parametre ölçümlerini tamamladıktan sonra, verileri düzenleyin ve her örnekteki üç slayttan ölçümleri ortalaman.</li>
	</ol></li>
	<li>Toplam, kalsifiye ve kireçlenmemiş kıkırdak alanlarının ölçümleri NOT: Bu adımları gerçekleştirmek için ticari olarak kullanılabilen bir yazılım (bkz. Malzeme Tablosu)kullanın. Bu bölümde tartışılan kıkırdak bölgeleri, kavşaklar ve subkondral kemik bölgelerinin açıklanması için Lütfen Ek Şekil 1B,C'ye bakın.<ol>
<li>Kıkırdağın eklem boşluğuyla buluştuğu tibial kıkırdak yüzeyinin üst kenarına bir çizgi çizin. Kalsifiye kıkırdağın subkondral kemikle buluştuğu kondro-osseöz kavşakta ikinci bir çizgi çizin (Şekil 1B). Toplam kıkırdak alanı ölçümü otomatik olarak elde etmek için yazılım Alanı işlevini kullanın.</li>
		<li>Kıkırdağın kalsifiye ve kireçlenmemiş bölgelerini ayıran doğal olarak oluşan bir çizgi olan gelgit işareti boyunca bir çizgi çizin. Kalsifiye kıkırdağın subkondral kemikle buluştuğu kondro-osseöz kavşakta ikinci bir çizgi çizin (Şekil 1B). Kalsifiye kıkırdak alanı ölçümü otomatik olarak elde etmek için yazılım Alanı işlevini kullanın.</li>
		<li>Kalsifiye edilmiş kıkırdak alanını toplam kıkırdak alanından çıkararak kireçlenmemiş kıkırdak alanını hesaplayın (Şekil 1B).</li>
	</ol></li>
	<li>Kondrosit sayısı ve fenotip tayini<ol>
<li>Matris üreten ve matris üretmeyen kondrositleri ayırt etmek için histomorfometri yazılımındaki ayarlar içinde ayrı sayma işlevleri oluşturun (Şekil 1B).</li>
		<li>Belirtilen fenotipifade her kondrosit üzerinde küçük bir nokta yapmak için kalem kullanarak kondrosit üreten veya üretmeyen matris lerin sayısını belirleyin(Şekil 1B). NOT: Hücreleri fenotiplerine göre ya matris üreten (yani güçlü Safranin-O boyama) veya matris üretmeyen (yani çok sönük veya safranin-O boyama olmadan) olarak sayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Tibial eklem yüzey çevresinin ölçümü<ol>
<li>Tibial kıkırdak yüzeyinde bir çizgi izleyerek mutlak tibial eklem yüzeyi çevresini ölçün, bireysel fibrilasyonları dikkatlice tanımlayın(Şekil 1C).</li>
		<li>Her bölümün düzlemi için bir iç kontrol görevi görmek için gelgit işareti boyunca ikinci bir çizgi çizin(Şekil 1C).</li>
		<li>Tibial eklem yüzeyi fibrilasyon indeksi gelgit işareti çevre ile tibial artiküler yüzey çevre bölerek hesaplayın. NOT: Gelgit çeşnisi genellikle numuneler arasında eşittir, bu nedenle sahte ve DMM arasındaki eklem yüzeyi çevreleri arasındaki fark, mutlak çevre veya fibrilasyon indeksi kullanılıp kullanılmadığı genellikle küçüktür.</li>
	</ol></li>
	<li>Subkondral kemik ve ilik uzay alanlarının ölçümü<ol>
<li>Subkondral kemik içindeki toplam ilik uzay alanını belirlemek için subkondral bölgedeki bölgeleri sadece hematoksilin ile boyanmış (yani Fast Green için negatif) sıralayarak Alan işlevini kullanarak subkondral ilik uzay alanını ölçün. Tibial subkondral kemik içindeki tüm ilik uzayının toplam alanını belirlemek için bu alanların çevresine çizgiler çizin (Şekil 2B).</li>
		<li>Kondro-osseous kavşak ve büyüme plakasının üstün sınırı arasındaki bölgeyi özetleyerek, anterior ve posterior osteofit bölgelerine yanal olarak uzanan bölge işlevini kullanarak toplam subkondral alanı ölçün(Şekil 2B).</li>
		<li>Subkondral kemik iliği uzay alanını total subkondral alandan çıkararak subkondral kemik alanını hesaplayın (Şekil 2B,C).</li>
	</ol></li>
	<li>Anterior ve posterior osteofit alanlarının ölçümü<ol>
<li>Osteofit alanını ölçmek için, Alan fonksiyonunu kullanarak proksimal tibianın ön ve posterior osteofitlerini takip edin (Şekil 2B,E,F). NOT: Osteofitler eklem kıkırdağı ile büyüme plakası, subkondral bölgeye anterior veya posterior arasında şekil veren kemikli projeksiyonlardır. Tibianın ön ve arka tarafındaki osteofit alanlar subkondral kemiğin ön veya posterior bölgesinin izlenmesi ile belirlenir. Osteofitler ve subkondral kemik arasındaki kavşak açıkça eklem kıkırdağı büyüme plakasına kadar uzanan hücrelerin bir çizgi ile belirlenir. Osteofit ve sinovyum arasındaki kavşak kemik ve fibröz doku arasındaki geçiş ile tanımlanır.</li>
	</ol></li>
	<li>Sinovyal kalınlığın ölçülmesi<ol>
<li>Femur üzerindeki ön sinovyumun iç ekleme noktasından menisküs üzerindeki bağlanma noktasına doğru bir çizgi çizerek Alan işlevini kullanarak ön femoral sinovyal kalınlığı ölçün (Şekil 3B).</li>
		<li>Femur üzerindeki sinovyumun dış sineğinden menisküse olan ekine doğru ikinci bir çizgi çizin (Şekil 3B).</li>
		<li>Toplam sinovyal alanı sinovyal çevreye bölerek sinovyal kalınlığı hesaplayın.</li>
	</ol></li>
</ol>8. İstatistiksel analiz
<ol><li>Ölçülen parametreleri toplayın ve her örnek için üç temsili bölümden elde edilen sonuçları ortalama. Üç veya daha fazla grubu karşılaştırmak için iki grubu veya tek yönlü ANOVA'yı karşılaştırmak için eşlenmemiş bir Öğrencinin t-testini kullanarak verileri analiz edin.</li>
	<li>Verileri ortalama ± standart hatası olarak görüntüleyin. NOT: P ≤ 0.05'te istatistiksel anlamlılık elde edildi.</li>
</ol>

<ol><li>Ma, V. Y., Chan, L., Carruthers, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence%2C+prevalence%2C+costs%2C+and+impact+on+disability+of+common+conditions+requiring+rehabilitation+in+the+United+States%3A+stroke%2C+spinal+cord+injury%2C+traumatic+brain+injury%2C+multiple+sclerosis%2C+osteoarthritis%2C+rheumatoid+arthritis%2C+limb+loss%2C+and+back+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Physical+Medicine+and+Rehabililation%22%5BJournal%5D)">Incidence, prevalence, costs, and impact on disability of common conditions requiring rehabilitation in the United States: stroke, spinal cord injury, traumatic brain injury, multiple sclerosis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, limb loss, and back pain.</a> Archives of Physical Medicine and Rehabililation. 95 (5), 986-995 (2014).</li>
<li>Hopman, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+between+chronic+disease%2C+age+and+physical+and+mental+health+status%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chronic+Diseases+in+Canada%22%5BJournal%5D)">Associations between chronic disease, age and physical and mental health status.</a> Journal of Chronic Diseases in Canada. 29 (3), 108-116 (2009).</li>
<li>Lorenz, J., Grässel, S. Experimental osteoarthritis models in mice. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLorenz%2C+J+%22Mouse+Genetics.+Methods+in+Molecular+Biology%22">Mouse Genetics. Methods in Molecular Biology</a>. Singh, S., Coppola, V. 1194, Humana Press. New York, NY. 401-419 (2004).</li>
<li>Sophia Fox, A. J., Bedi, A., Rodeo, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+basic+science+of+articular+cartilage%3A+structure%2C+composition%2C+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Sports+Health%22%5BJournal%5D)">The basic science of articular cartilage: structure, composition, and function.</a> Journal of Sports Health. 1 (6), 461-468 (2009).</li>
<li>Van der Kraan, P., Van den Berg, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrocyte+hypertrophy+and+osteoarthritis%3A+role+in+initiation+and+progression+of+cartilage+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Chondrocyte hypertrophy and osteoarthritis: role in initiation and progression of cartilage degeneration.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 20 (3), 223-232 (2012).</li>
<li>Hodsman, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+hormone+and+teriparatide+for+the+treatment+of+osteoporosis%3A+a+review+of+the+evidence+and+suggested+guidelines+for+its+use%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Parathyroid hormone and teriparatide for the treatment of osteoporosis: a review of the evidence and suggested guidelines for its use.</a> Endocrine Reviews. 26 (5), 688-703 (2005).</li>
<li>Pitsillides, A. A., Beier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+biology+in+osteoarthritis-lessons+from+developmental+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Cartilage biology in osteoarthritis-lessons from developmental biology.</a> Nature Reviews Rheumatology. 7 (11), 654(2011).</li>
<li>Yuan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone-cartilage+interface+crosstalk+in+osteoarthritis%3A+potential+pathways+and+future+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Bone-cartilage interface crosstalk in osteoarthritis: potential pathways and future therapeutic strategies.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 22 (8), 1077-1089 (2014).</li>
<li>Goldring, S. R., Goldring, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+osteochondral+unit+during+osteoarthritis%3A+structure%2C+function+and+cartilage-bone+crosstalk%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Changes in the osteochondral unit during osteoarthritis: structure, function and cartilage-bone crosstalk.</a> Nature Reviews Rheumatology. 12 (11), 632(2016).</li>
<li>Martel-Pelletier, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Osteoarthritis.</a> Nature Reviews Disease Primers. 2 (1), 16072(2016).</li>
<li>Goldring, M. B., Otero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+in+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Inflammation in osteoarthritis.</a> Current Opinion in Rheumatology. 23 (5), 471(2011).</li>
<li>Sellam, J., Berenbaum, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+synovitis+in+pathophysiology+and+clinical+symptoms+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">The role of synovitis in pathophysiology and clinical symptoms of osteoarthritis.</a> Nature Reviews Rheumatology. 6 (11), 625(2010).</li>
<li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoarthritis+severity+is+sex+dependent+in+a+surgical+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Osteoarthritis severity is sex dependent in a surgical mouse model.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 15 (6), 695-700 (2007).</li>
<li>Katon, W., Lin, E. H., Kroenke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+association+of+depression+and+anxiety+with+medical+symptom+burden+in+patients+with+chronic+medical+illness%5BTitle%5D)+AND+%22General+Hospital+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">The association of depression and anxiety with medical symptom burden in patients with chronic medical illness.</a> General Hospital Psychiatry. 29 (2), 147-155 (2007).</li>
<li>Glasson, S., Chambers, M., Van Den Berg, W., Little, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+OARSI+histopathology+initiative-recommendations+for+histological+assessments+of+osteoarthritis+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">The OARSI histopathology initiative-recommendations for histological assessments of osteoarthritis in the mouse.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 18, 17-23 (2010).</li>
<li>Pastoureau, P., Leduc, S., Chomel, A., De Ceuninck, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+articular+cartilage+and+subchondral+bone+histology+in+the+meniscectomized+guinea+pig+model+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of articular cartilage and subchondral bone histology in the meniscectomized guinea pig model of osteoarthritis.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 11 (6), 412-423 (2003).</li>
<li>O'Driscoll, S. W., Marx, R. G., Fitzsimmons, J. S., Beaton, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+automated+cartilage+histomorphometry%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Method for automated cartilage histomorphometry.</a> Tissue Engineering. 5 (1), 13-23 (1999).</li>
<li>Matsui, H., Shimizu, M., Tsuji, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+and+subchondral+bone+interaction+in+osteoarthrosis+of+human+knee+joint%3A+a+histological+and+histomorphometric+study%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy+Research+Technique%22%5BJournal%5D)">Cartilage and subchondral bone interaction in osteoarthrosis of human knee joint: a histological and histomorphometric study.</a> Microscopy Research Technique. 37 (4), 333-342 (1997).</li>
<li>Hacker, S. A., Healey, R. M., Yoshioka, M., Coutts, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+methodology+for+the+quantitative+assessment+of+articular+cartilage+histomorphometry%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">A methodology for the quantitative assessment of articular cartilage histomorphometry.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 5 (5), 343-355 (1997).</li>
<li>Pastoureau, P., Chomel, A. Methods for Cartilage and Subchondral Bone Histomorphometry. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPastoureau%2C+P+%22Cartilage+and+Osteoarthritis.+Methods+in+Molecular+Medicine%22">Cartilage and Osteoarthritis. Methods in Molecular Medicine</a>. DeCeuninck, F., Sabatini, M., Pastoureau, P. 101, Humana Press. New York, NY. 79-91 (2004).</li>
<li>McNulty, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+histological+assessment+of+osteoarthritis+lesions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cartilage%22%5BJournal%5D)">A comprehensive histological assessment of osteoarthritis lesions in mice.</a> Cartilage. 2 (4), 354-363 (2011).</li>
<li>Glasson, S., Blanchet, T., Morris, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+surgical+destabilization+of+the+medial+meniscus+%28DMM%29+model+of+osteoarthritis+in+the+129%2FSvEv+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">The surgical destabilization of the medial meniscus (DMM) model of osteoarthritis in the 129/SvEv mouse.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 15 (9), 1061-1069 (2007).</li>
<li>Singh, S. R., Coppola, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSingh%2C+SR+%22Mouse+Genetics%3A+Methods+and+Protocols%22">Mouse Genetics: Methods and Protocols</a>. , Humana Press. New York, NY. (2004).</li>
<li>Fang, H., Beier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+osteoarthritis%3A+modelling+risk+factors+and+assessing+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Mouse models of osteoarthritis: modelling risk factors and assessing outcomes.</a> Nature Reviews Rheumatology. 10 (7), 413(2014).</li>
<li>Culley, K. L., et al. Mouse Models of Osteoarthritis: Surgical Model of Posttraumatic Osteoarthritis Induced by Destabilization of the Medial Meniscus. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCulley%2C+KL+%22Osteoporosis+and+Osteoarthritis.+Methods+in+Molecular+Biology%22">Osteoporosis and Osteoarthritis. Methods in Molecular Biology</a>. Westendorf, J., van Wijnen, A. 1226, Humana Press. New York, NY. 143-173 (2015).</li>
<li>Van der Kraan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+that+influence+outcome+in+experimental+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Factors that influence outcome in experimental osteoarthritis.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 25 (3), 369-375 (2017).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564(2012).</li>
<li>Callis, G., Sterchi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decalcification+of+bone%3A+literature+review+and+practical+study+of+various+decalcifying+agents.+Methods%2C+and+their+effects+on+bone+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histotechnology%22%5BJournal%5D)">Decalcification of bone: literature review and practical study of various decalcifying agents. Methods, and their effects on bone histology.</a> Journal of Histotechnology. 21 (1), 49-58 (1998).</li>
<li>Lajeunesse, D., Massicotte, F., Pelletier, J. P., Martel-Pelletier, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subchondral+bone+sclerosis+in+osteoarthritis%3A+not+just+an+innocent+bystander%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Subchondral bone sclerosis in osteoarthritis: not just an innocent bystander.</a> Modern Rheumatology. 13 (1), 0007-0014 (2003).</li>
<li>Li, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subchondral+bone+in+osteoarthritis%3A+insight+into+risk+factors+and+microstructural+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research+Therapy%22%5BJournal%5D)">Subchondral bone in osteoarthritis: insight into risk factors and microstructural changes.</a> Arthritis Research Therapy. 15 (6), 223(2013).</li>
<li>Kapoor, M., Martel-Pelletier, J., Lajeunesse, D., Pelletier, J. P., Fahmi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+proinflammatory+cytokines+in+the+pathophysiology+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Role of proinflammatory cytokines in the pathophysiology of osteoarthritis.</a> Nature Reviews Rheumatology. 7 (1), 33(2011).</li>
<li>Scanzello, C. R., Goldring, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+synovitis+in+osteoarthritis+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">The role of synovitis in osteoarthritis pathogenesis.</a> Bone. 51 (2), 249-257 (2012).</li>
<li>Benito, M. J., Veale, D. J., FitzGerald, O., van den Berg, W. B., Bresnihan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synovial+tissue+inflammation+in+early+and+late+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+Rheumatic+Diseases%22%5BJournal%5D)">Synovial tissue inflammation in early and late osteoarthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 64 (9), 1263-1267 (2005).</li>
<li>De Lange-Brokaar, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synovial+inflammation%2C+immune+cells+and+their+cytokines+in+osteoarthritis%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Synovial inflammation, immune cells and their cytokines in osteoarthritis: a review.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 20 (12), 1454-1499 (2012).</li>
<li>Findlay, D. M., Kuliwaba, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone-cartilage+crosstalk%3A+a+conversation+for+understanding+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Research%22%5BJournal%5D)">Bone-cartilage crosstalk: a conversation for understanding osteoarthritis.</a> Bone Research. 4, 16028(2016).</li>
<li>Lories, R. J., Luyten, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bone-cartilage+unit+in+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">The bone-cartilage unit in osteoarthritis.</a> Nature Reviews Rheumatology. 7 (1), 43(2011).</li>
<li>Pritzker, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoarthritis+cartilage+histopathology%3A+grading+and+staging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Osteoarthritis cartilage histopathology: grading and staging.</a> Journal of Osteoarthritis and Cartilage. 14 (1), 13-29 (2006).</li>
<li>Hayami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+articular+cartilage+and+subchondral+bone+changes+in+the+rat+anterior+cruciate+ligament+transection+and+meniscectomized+models+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Characterization of articular cartilage and subchondral bone changes in the rat anterior cruciate ligament transection and meniscectomized models of osteoarthritis.</a> Bone. 38 (2), 234-243 (2006).</li>
<li>Priemel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mineralization+defects+and+vitamin+D+deficiency%3A+Histomorphometric+analysis+of+iliac+crest+bone+biopsies+and+circulating+25-hydroxyvitamin+D+in+675+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">mineralization defects and vitamin D deficiency: Histomorphometric analysis of iliac crest bone biopsies and circulating 25-hydroxyvitamin D in 675 patients.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 25 (2), 305-312 (2010).</li>
<li>Yukata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+infusion+of+PTH+1%E2%80%9334+delayed+fracture+healing+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Continuous infusion of PTH 1–34 delayed fracture healing in mice.</a> Scientific Reports. 8 (1), 13175(2018).</li>
<li>Kawano, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LIM+kinase+1+deficient+mice+have+reduced+bone+mass%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">LIM kinase 1 deficient mice have reduced bone mass.</a> Bone. 52 (1), 70-82 (2013).</li>
<li>Zhang, L., Chang, M., Beck, C. A., Schwarz, E. M., Boyce, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+new+bone%2C+cartilage%2C+and+fibrosis+tissue+in+healing+murine+allografts+using+whole+slide+imaging+and+a+new+automated+histomorphometric+algorithm%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Research%22%5BJournal%5D)">Analysis of new bone, cartilage, and fibrosis tissue in healing murine allografts using whole slide imaging and a new automated histomorphometric algorithm.</a> Bone Research. 4, 15037(2016).</li>
<li>Wu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+an+osteoarthritis-like+phenotype+and+degradation+of+phosphorylated+Smad3+by+Smurf2+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatism%22%5BJournal%5D)">Induction of an osteoarthritis-like phenotype and degradation of phosphorylated Smad3 by Smurf2 in transgenic mice.</a> Arthritis Rheumatism. 58 (10), 3132-3144 (2008).</li>
<li>Hordon, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trabecular+architecture+in+women+and+men+of+similar+bone+mass+with+and+without+vertebral+fracture%3A+I.+Two-dimensional+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Trabecular architecture in women and men of similar bone mass with and without vertebral fracture: I. Two-dimensional histology.</a> Bone. 27 (2), 271-276 (2000).</li>
</ol>

Son osteoartrit araştırma eklem içinde farklı dokular arasındaki çapraz konuşma anlayışımızı geliştirdi ve her doku hastalık başlatma veya ilerleme8oynadığı rol8 ,9,10,35,36. Buna göre, OA değerlendirmesinin kıkırdak analizi ile sınırlı kalmaması, aynı zamanda subkondral kemik ve sinovyum analizini de içermesi gerektiği açıkça ortaya çıkmıştır. Buna rağmen, ek...

Amerika Birleşik Devletleri'nde en yaygın eklem bozukluklarından biri, OA eklem kıkırdağının ilerleyici dejenerasyonu ile karakterizedir, öncelikle kalça ve diz eklemlerde, hangi hasta hareketliliği ve yaşam kalitesi üzerinde önemli etkilere neden olur1,2,3. Eklem kıkırdağı sürtünmeyi en aza indirmek için tasarlanmış diyasit eklemlerin özel bağ dokusudur, hareketi kolaylaştırmak, ve eklem sıkıştırma dayanmak4. Eklem kıkırdağı iki ana bileşenden oluşur: kondrositler ve hücre dışı matriks. Kondrositler, hücre dışı matriks4'üngeliştirilmesinde, bakımında ve onarımında birincil rol oynayan özel, metabolik olarak aktif hücrelerdir. Kondrosit hipertrofisi (CH) OA gelişiminin başlıca patolojik bulgularından biridir. Bu artan hücresel boyutu ile karakterizedir, proteoglikan üretimi azaldı, ve sonunda kıkırdak dejenerasyonu yol kıkırdak matris aşağılayıcı enzimlerin artan üretimi5,6,7. Ayrıca, subkondral kemik ve eklem sinovyumpatolojipatolojideğişiklikleri OA gelişimi veilerlemesindeönemli bir rol oynamaktadır 8,9,10,11,12. Bugüne,kadar kıkırdak dejenerasyonu1,2,3,13,14inhibe mevcut küratif tedaviler vardır. Bu nedenle, OA patolojisini anlamayı ve OA'yı yavaşlatabilen hatta durdurabilen yeni tedavi yaklaşımlarını keşfetmeyi amaçlayan kapsamlı bir araştırma bulunmaktadır. Buna göre, eklemin kıkırdak, sinovyum ve subkondral kemiğindeki OA ile ilişkili patolojik değişikliklerin doğru değerlendirilmesini sağlayan nicel ve tekrarlanabilir bir yaklaşıma ihtiyaç artmaktadır.
Şu anda, OA şiddeti ve ilerlemesi öncelikle OARSI veya Mankin puanlama sistemleri kullanılarak değerlendirilir15. Ancak, bu puanlama sistemleri sadece yarı nicel ve kullanıcı öznelliği etkilenebilir. Daha da önemlisi, onlar doğru hastalık sırasında eklemde meydana gelen ince değişiklikleri değerlendirmek için başarısız ya da genetik manipülasyon veya terapötik bir müdahale yanıt olarak. Literatürde kıkırdak, sinovyum veya subkondral kemik16,17,18,19,,20,21histomorfometrik analizleri açıklayan sporadik raporlar vardır. Ancak, tüm bu eklem bileşenlerinin titiz ve tekrarlanabilir histomorfometrik analizi için ayrıntılı bir protokol hala eksik tir ve bu da sahada karşılanmamış bir ihtiyaç yaratmaktadır.
Histomorfometrik analiz kullanarak OA'daki patolojik değişiklikleri incelemek için medial menisküs (DMM) dengesini bozarak OA'yı indüklemek için cerrahi oa fare modeli kullandık. Murine OA kurulan modeller arasında, DMM yaralanma22daha az travmatik mekanizma içerir çünkü çalışmamız için seçildi 22,23,24,25,26. Meniskal-ligamentöz yaralanma ile karşılaştırıldığında (MLI) veya ön çapraz bağ yaralanması (ACLI) ameliyatları, DMM OA daha kademeli bir ilerleme teşvik, insanlarda OA gelişimine benzer22,24,25,26. Fareler, eklem kıkırdağı, subkondral kemik ve sinovyumdaki değişiklikleri değerlendirmek için DMM ameliyatından on iki hafta sonra ötenazi yedirildi.
Bu protokolün amacı, OA'ya eşlik eden ortak değişiklikleri değerlendirmek için standartlaştırılmış, titiz ve nicel bir yaklaşım oluşturmaktır.

<table><tbody><tr><td>% 10 Tamponlu Formalin Fosfat Fisher</td><td>Chemical</td><td>SF100-20</td><td>Hasattan sonra numune fiksasyonu için</td></tr><tr><td>Asetik Asit, Buzul (Sertifikalı ACS)</td>Dekalsifikasyon için <td>Fisher Chemical</td><td>A38S-212</td><td>Boyama için tampon hazırlama ve asetik asit çözeltisi hazırlama</td></tr><tr><td>Cintiq 27QHD Yaratıcı Kalem Ekran</td><td>Wacom</td><td>https://www.wacom.com/en-es/products/pen-displays/cintiq-27-qhd-touch</td><td>Histomorfometrik analiz ve görüntüleme için</td></tr><tr><td>Cintiq Ergo standı</td><td>Wacom</td><td>https://www.wacom.com/en-es/products/pen-displays/cintiq-27-qhd-touch</td><td>Histomorfometrik analiz ve görüntüleme için</td></tr><tr><td>Etilendiamintetraasetik asit, tetrasodyum tuzu dihidrat, %99</td> <td>Acros Organics</td><td>AC446080010</td><td>Dekalsifikasyon için Tampon hazırlama</td></tr><tr><td>Hızlı Yeşil leke</td><td>SIGMA Yaşam Bilimleri</td><td>F7258</td><td>Örnek boyama için</td></tr><tr><td>Fisherbrand Superfrost Plus Mikroskop Slaytları Fisher</td><td></td><td>12-550-15</td><td>Örnek kesit toplama için</td></tr><tr><td>HistoPrep Ksilen</td><td>Fisherbrand</td><td>HC-700-1GAL</td><td>Numune ayrıştırma ve boyama için</td></tr><tr><td>Histosette II Doku Kasetleri - Kombinasyon Kapağı ve Tabanı</td><td>Fisher</td><td>15-182-701A</td><td>Numune işleme ve yerleştirme için</td></tr><tr><td>HP Z440 İş İstasyonu</td><td>HP</td><td>Ürün numarası: Y5C77US#ABA</td><td>Histomorfometrik analiz ve görüntüleme için</td></tr><tr><td>Manuel Döner Mikrotom</td><td>Leica</td><td>RM 2235</td><td>İçin Numune kesitleme</td></tr><tr><td>Markalama kalemleri</td><td>Leica</td><td>3801880</td><td>Numune etiketleme, kasetler ve slaytlar için</td></tr><tr><td>OLYMPUS BX53 Mikroskop</td><td>OLYMPUS</td><td>https://www.olympus-lifescience.com/en/microscopes/upright/bx53f2/</td> <td>Histomorfometrik analiz ve görüntüleme için</td></tr><tr><td>OLYMPUS DP 73 Mikroskop Kamerası</td><td>OLYMPUS</td><td>https://www.olympus-lifescience.com/en/camera/color/dp73/</td><td>Histomorfometrik analiz ve görüntüleme için (durduruldu)</td></tr><tr><td>ORION STAR A211 pH metre</td><td>Dekalsifikasyon Tamponu hazırlama için</td><td>Thermo Scientific</td><td>STARA2110</td></tr><tr><td>OsteoMeasure Yazılımı OsteoMetrics</td><td></td><td>https://www.osteometrics.com/index.htm</td><td>Histomorfometrik ölçüm ve analiz için</td></tr><tr><td>Perfüzyon İki Otomatik Basınç Perfüzyon sistemi</td><td>Leica</td><td>Model # 39471005</td><td>Fare için diz hasadı</td></tr><tr><td>PRISM 7 Yazılımı</td><td>GraphPad</td><td>Kurumsal Erişim Hesabı</td><td>İstatistiksel Analiz</td></tr><tr><td>Safranin-O boyası</td><td>SIGMA Life Sciences</td><td>S8884</td><td>Örnek boyama için</td></tr><tr><td>ThinkBoneStage - Döner Mikroskop Aşaması</td><td>Think Bone Consulting Inc. - OsteoMetrics (tedarikçi)</td><td>http://thinkboneconsulting.com/index_files/Slideholder.php</td><td>Histomorfometrik analiz ve görüntüleme için</td></tr><tr><td>Wacom Pro Pen Stylus</td><td>Wacom</td><td>https://www.wacom.com/en-es/products/pen-displays/cintiq-27-qhd-touch</td><td>Histomorfometrik analiz ve görüntüleme için</td></tr><tr><td>Hematoksilen boyama için</td><td>Weigerts Iron Hematoxylin A</td><td>Fisher</td><td>5029713</td> Hematoksilen</tr><tr>boyama için<td>Weigerts Iron Hematoxylin B</td><td>Fisher</td><td>5029714</td><td>Hematoksilen boyama için</td></tr></tbody></table>

cerrahi fare modelinde osteoartritin standart histomorfometrik değerlendirilmesi

Standardized Histomorphometric Evaluation of Osteoarthritis in a Surgical Mouse Model

Amerika Birleşik Devletleri'nde en sık görülen eklem bozukluklarından biri, osteoartrit (OA) eklem kıkırdağının ilerleyici dejenerasyonu ile karakterizedir, öncelikle kalça ve diz eklemleri, hangi hasta hareketliliği ve yaşam kalitesi üzerinde önemli etkilere yol açar. Bugüne kadar, oa yavaşlatmak veya kıkırdak dejenerasyonu inhibe edebilmek için mevcut küratif tedaviler vardır. Şu anda, OA patolojianlamak ve verimli yavaşlatmak, durdurmak, hatta OA ters yeni terapötik yaklaşımlar veya ajanlar keşfetmek için devam eden araştırma geniş bir vücut vardır. Bu nedenle eklem kıkırdağı, sinovyum ve subkondral kemikteki OA ile ilişkili patolojik değişiklikleri doğru bir şekilde değerlendirmek için kantitatif ve tekrarlanabilir bir yaklaşıma sahip olmak çok önemlidir. Şu anda, OA şiddeti ve ilerlemesi öncelikle Osteoartrit Araştırma Derneği Uluslararası kullanılarak değerlendirilir (OARSI) veya Mankin puanlama sistemleri. Bu skorlama sistemlerinin önemine rağmen yarı niceldirler ve kullanıcı öznelliği nden etkilenebilirler. Daha da önemlisi, erken hastalık durumları veya erken tedavi aşamalarında kıkırdak değişiklikleri, henüz önemli, ince, henüz önemli değerlendirmek için başarısız. Burada tanımladığımız protokol, OA'daki ortak değişikliklerin değerlendirilmesi için standartlaştırılmış, titiz ve tekrarlanabilir bir nicel metodoloji oluşturmak için bilgisayarlı ve yarı otomatik histomorfometrik yazılım sistemi kullanmaktadır. Bu protokol mevcut sistemlere güçlü bir ek sunar ve eklemdeki patolojik değişikliklerin daha verimli bir şekilde algılanmasını sağlar.

DMM'ye bağlı OA artiküler kıkırdak dejenerasyonu ve kondrosit kaybı ile sonuçlanır DMM'ye bağlı OA, yüzey erozyonu ve kıkırdak kaybı ile belirgin bir şekilde karakterize olan sahte farelere göre artmış OARSI skoru ile sonuçlanmıştır(Şekil 1A,D). Burada ayrıntılı olarak açıklanan histomorfometri protokolü, toplam kıkırdak alanında ve kireçlenmemiş kıkırdak alanında azalma da dahil olmak üzere çeşitli OA ile ilişkili değişiklikler tespit etti (<strong class...

Mevcut protokol osteoartrit eşlik morfolojik eklem değişikliklerinin nicelleştirilmesi için titiz ve tekrarlanabilir bir yöntem kurar. Bu protokolün uygulanması hastalığın ilerlemesinin izlenmesi ve osteoartritte terapötik müdahalelerin değerlendirilmesinde değerli olabilir.

Cerrahi Fare Modelinde Osteoartritin Standart Histomorfometrik Değerlendirilmesi

One of the most prevalent joint disorders in the United States, osteoarthritis (OA) is characterized by progressive degeneration of articular cartilage, ...

Protokolümüz osteoartrit gelişimi ve ilerlemesinde eklem değişikliklerinin kantitatif analizi için sağlam ve tekrarlanabilir bir yönteme karşılanmamış bir ihtiyacı gidermez. Tekniğimiz osteoartritte birden fazla eklem dokularında değişikliklerin kantitatif analizi için spesifik ve tekrarlanabilir parametreleri özetler. Bu teknik osteoartrit kantitatif analizi için izin verdiği gibi, onların terapötik etkinliğini değerlendirmek için birden fazla eklem dokuları üzerinde özel tedavilerin etkilerini karşılaştırmak için istihdam edilebilir.Protokolümüz ayrıca diğer osteoartrit modellerine veya kıkırdak ve kemik kantifikasyonunun gerekli olduğu kas-iskelet araştırma alanlarına da uygulanabilir. Sistem basit ve sezgisel olmasına rağmen, tekrarlanabilirlik elde etmek için ölçümleri tekrartekrar elde etmek için eğitim oturumları hala gereklidir. Vengadeshprabhu Karuppagounder, laboratuvarımızdan doktora sonrası bir bilim adamı şimdi prosedürümüzü sergileyecek.Mikroskobu, kamerayı, bilgisayarı ve dokunmatik ekranı açarak başlayın. 4X hedefini seçin ve yazılım programını başlatmak için yazılım simgesine tıklayın. Slaytı mikroskop aşamasına yerleştirin ve ölçü ızgarasının hem tibial hem de femoral eklem yüzeyinin ve tibial subkondral kemiğin ilgi çekici görüntü bölgeleri içinde yer aldığı hedefe uyacak şekilde uygun büyütmeye ayarlanmasını sağlamak için numuneyi ölçüm penceresine yerleştirin.Ardından Dosya menüsünün altında Ayarlar'ı Oku'yu seçin. Ayarlar penceresinde, ölçülecek parametreler için uygun ayarlar dosyasını seçin. Toplam kıkırdak alanını ölçmek için Tib TC fonksiyonunu seçin ve kıkırdağın eklem boşluğuyla buluştuğu tibial kıkırdak yüzeyinin üst kenarı boyunca ve kalsifiye kıkırdağın subkondral kemikle buluştuğu kondro-osseöz kavşak boyunca iz edin.Kalsifiye kıkırdak alanını ölçmek için Tib CC işlevini seçin ve gelgit işareti boyunca bir çizgi, kıkırdağın kalsifiye ve kireçlenmemiş bölgelerini ayıran doğal olarak oluşan bir çizgi ve kireçlenmiş kıkırdağın subkondral kemikle buluştuğu kondro-osseous kavşak boyunca izleyin. Kireçlenmemiş kıkırdak alanını belirlemek için, kalsifiye kıkırdak alanını toplam kıkırdak alanından çıkarın. Kondrosit sayısını belirlemek için, matris üreten ve matris olmayan kondrositler ayırt etmek için histomorfometri yazılımı ayarları içinde ayrı sayı fonksiyonları oluşturun.Sonra kondrosit üreten veya üreten değil matris sayısını belirlemek için belirtilen fenotip ifade her kondrosit üzerinde küçük bir nokta yapmak için kalemkullanın. Toplam tibial eklem yüzey parametresini ölçmek için, tek tek fibrilasyonları dikkatle tanımlamak için tibial kıkırdağın yüzeyinde bir çizgi iz. Daha sonra her bölümün düzlemi için bir iç kontrol olarak hizmet etmek için gelgit işareti boyunca ikinci bir çizgi çizin ve tibial eklem yüzey fibrilasyon indeksi hesaplamak için gelgit işareti parametresi ile tibial eklem yüzey parametre bölmek.Subkondral ilik uzay alanını ölçmek için İlik Alanı işlevini seçin. Daha sonra tibial subkondral kemik içinde kemik iliği alanının toplam alanını belirlemek için bu alanların parametresi etrafında çizgiler çizin. Toplam subkondral alanı ölçmek için Subkondral Kemik fonksiyonunu seçin ve anterior ve posterior osteofit bölgelerine yanal olarak uzanan büyüme plakasının üstün sınırında kondro-osseous kavşak arasındaki bölgeyi anahat.Daha sonra subkondral kemik alanını hesaplamak için subkondral kemik iliği uzay alanını toplam subkondral alandan çıkarın. Osteofit alanını ölçmek için, ön osteofit fonksiyonunu seçin ve proksimal tibia nın ön osteofitini takip edin. Sonra posterior osteophyte seçin ve proksimal tibia posterior osteophyte iz.Ön femoral sinovyal kalınlığı ölçmek için, Anterior Femur Sinovyum Menisküs tıklayın ve menisküs üzerindeki eki noktasına doğru femur üzerinde ön sinovyum iç ekleme noktasından bir çizgi çizmek ve menisküs eki doğru femur üzerinde sinovyum dış ekleme bir çizgi. Daha sonra sinovyal kalınlığı hesaplamak için sinovyal parametre ile toplam sinovyal alanı bölün. DMM indüklenen osteoartrit sonuçları sham fareler ile karşılaştırıldığında artmış Osteoartrit Araştırma Derneği Uluslararası puanı.Yüzey erozyonu ve kıkırdak kaybı ile belirgin karakterizedir. Bu histomorfometri protokolü toplam kıkırdak ve kireçlenmemiş kıkırdak alanlarda bir azalma da dahil olmak üzere çeşitli osteoartrit ilişkili değişiklikleri tespit etmek için kullanılabilir. Toplam kondrosit sayısında bir azalma ve daha da önemlisi, kondrosit üreten matris sayısında bir kayıp.Erozyonun şiddetini gösteren eklem yüzeyinde değişiklikler de gözlenir, fibrilasyon indeksi genel bir artış da dahil olmak üzere. Osteoartrit de subkondral kemik bölgesinde bir artış ve subkondral kemik skleroz gösteren DMM farelerde kemik iliği alanının bir azalma içerir. Hem anterior hem de posterior osteofit alanları da DMM farelerde artmıştır, yaralanma yerinde eklem yükleme değişiklikleri işlemek için bir telafi mekanizması olarak hareket eden devam eden bir subkondral kemik remodeling düşündürmektedir.Sinovyumun histomorfometrik analizi DMM farelerde sinovyal kalınlıkta bir artış olduğunu göstermektedir. Osteoartrit ilişkili sinovyal inflamasyon ve eklem alanına inflamatuar sitokinlerin difüzyon tipik bir sonucu. Buna ek olarak, Osteoartrit Araştırma Derneği Uluslararası puan da kireçlenmemiş kıkırdak alanının histomorfometrik analizi arasında önemli bir kullanıcı arası değişkenlik gözlenmez.Histomorfometrik analizden sonra, örnekler arasındaki protein ekspresyonundaki değişiklikleri incelemek için sıralı slaytlar ve immünoresans boyama kullanılabilir.

standardized-histomorphometric-evaluation-osteoarthritis-surgical

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz farelerde medial menisküs (DMM) modeli, osteoartrit (OA) araştırma için etkili bir araç istikrarı bozacak bir protokol açıklar. Buna ek olarak, progranulin OA patogenezinde koruyucu bir rol oynadığını gösteren, bu model kullanılarak progranulincan fahiş OA gelişimi ve ilerlemesinde bu eksikliği göstermiştir.

Osteoartrit Progranulin ve koruyucu rolünü araştırmak için Farelerde bir Cerrahi kaynaklı Modeli Kurulması

Osteoartrit (OA), ya da dejeneratif eklem hastalığı, yalnızca kısmen kullanılabilir analjezik tarafından kontrol kalır ağrı ile ilişkili bir zayıflatıcı bir durumdur. Hayvan modelleri OA ile ilgili ağrı mekanizmalarının anlayışımızı geliştirmek için geliştirilmektedir. Burada fare OA ağrısının monoiodoacetate modeli için bir yöntem tarif eder.

Fare Osteoartrit Ağrı Monoiodoacetate Modeli

Biz hücre ölümü yaralanma/olduğu gibi fare eklemlerin eklem yüzeyinde kayma ölçüde kontrollü mekanik yükler veya etkileri uygulamadan sonra değerlendirmek için bir yöntem mevcut. Bu yöntem, osteoartrit, genetik faktörler ve/veya farklı yükleme rejimleri içinde situ kondrosit güvenlik açığı nasıl etkilediğini araştırmak için kullanılabilir.

Gerçek zamanlı görselleştirme ve analiz nedeniyle tam olarak olduğu gibi fare kıkırdak Explants mekanik yükleme kondrosit yaralanma

Burada, murine dalak, kemik iliği, lenf düğümleri ve sinovyal doku içinde hem ekstra hem de hücre içi boyama tahlilleri kullanarak monosit/makrofaj ve T hücrealt kümelerini tanımlamak için ayrıntılı ve tekrarlanabilir akış sitometri protokolünü tanımladık ve murine osteoartritin yerleşik bir cerrahi modelini kullanıyoruz.

Bir Osteoartrit Modelinde Minör Dalak, Kemik İliği, Lenf Düğümleri ve Sinovyal DokuDaki İmmün Hücre Alt Kümelerinin Akış Sitometri Analizi

Bu metodoloji makalesi, murine osteoartrit diz eklemlerinde ve normal diz eklemlerinde histolojik subkondral kemik kalınlığını kontrol olarak ölçmek için yazılım destekli nicel ölçüm protokolü sürmektedir. Bu protokol ince kalınlaşmaya karşı oldukça hassastır ve erken osteoartrit subkondral kemik değişikliklerini tespit etmek için uygundur.

Osteoartrit Subkondral Kemik Kalınlığının Yazılım Destekli Nicel Ölçümü

Mevcut protokol, medial miniskotibial ligamenti keserek fare dizinin dengesini bozduktan sonra eklem kıkırdağının yüzeyindeki kontrollü mikrobıçak çiziklerini tanımlamaktadır. Bu hayvan modeli, osteofit oluşumunu, osteosklerozu ve erken evre ağrıyı incelemek için uygun hızlandırılmış bir osteoartrit (OA) formu sunar.

Hızlandırılmış Osteoartritin Medial Menisküs ve Kıkırdak Çizik Murin Modelinin Destabilizasyonu

Protokol, farelerde diz hiperaljezisinin nasıl ölçüleceğini açıklar. Akut diz ağrısının fare modellerinde ve osteoartrit (OA) modellerinde örnekler gösteriyoruz.

Farelerde Diz Hiperaljezisinin Basınç Uygulama Ölçümü Kullanılarak Değerlendirilmesi

Burada, kemirgenlerde diz osteoartritini indüklemek için güvenilir bir model olarak ön çapraz bağı (ÖÇB) kesmek için cerrahi bir yöntem ve diz sinovyal sıvısının toplanması, diz ödeminin ölçülmesi ve osteoartrit şiddetinin değerlendirilmesi için metodolojiler açıklanmaktadır.

Eklem iltihabı ve travma sonrası osteoartriti incelemek için bir kemirgen modelinde ön çapraz bağ transeksiyonu ve sinovyal sıvı lavajı

Biz fare fetüs olarak biyoaktif ajanların intratrakeal yönetimi için yeni bir cerrahi yaklaşım geliştirdi. Teslimat güzergahı sık kullanılan intra-amniyotik enjeksiyon dışında fetal fare akciğerlere hedefleme daha verimlidir. Bu işlem, bir fare modeli tarif edilmemiştir tarihe sahiptir.

Bir Fetal Fare Modelinde Biyoaktif Ajan intratrakeal Yönetimi İçin Yeni Bir Cerrahi Yaklaşım

Tibial sinir kesisi modeli iskelet kas atrofi bir, iyi tolere doğrulanmış ve tekrarlanabilir bir model. Model cerrahi protokol C57Black6 farelerde açıklanan ve gösterilmiştir.

Tibial Sinir transeksiyonu - Farelerde denervasyon bağlı İskelet Kas Atrofi için bir Standart Model

Öğrenin, osteoartritli farelerde eklem değişikliklerinin standart histomorfometrik analizini. Bu yöntem, tedavi etkinliğini değerlendirmek ve hastalık ilerlemesini izlemek için güvenilir bir çerçeve sunar.

Cerrahi Fare Modelinde Osteoartritin Standart Histomorfometrik Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet