Name: İzolasyon, Transfeksiyon ve Yetişkin Fare ve Sıçan Kardiyomiyositlerinin Uzun Süreli Kültürü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: Keşfedin yetişkin fare ve sıçan kardiyomiyositlerinin izolasyonu, siRNA transfeksiyonu ve 20 günden fazla uzun süreli kültürü için optimize edilmiş protokolü. Bu yöntem, kardiyak hücre biyolojisi ve gen ekspresyonu çalışmaları için yüksek sağkalım sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Cincinnati Üniversitesi Tıp Fakültesi Patoloji ve Laboratuvar Tıbbı Bölümü'nden Dr. Onur Kanisicak'a; Dr. Onur Kanisicak'a Ulusal Sağlık Enstitüleri'nden (R01HL148598) hibe. Dr. Onur Kanisicak, Amerikan Kalp Derneği Kariyer Geliştirme Ödülü (18CDA34110117) tarafından desteklenmiştir. Dr. Perwez Alam, Amerikan Kalp Birliği doktora sonrası hibe (AHA_20POST35200267) tarafından desteklenir. Dr Malina J. Ivey bir NIH T32 hibe (HL 125204-06A1) tarafından desteklenir.

Tüm deneyler, ABD Ulusal Sağlık Enstitüsü (NIH) tarafından yayınlanan Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'nun yönergelerine uygun olarak yapılmalıdır. Videoda görüntülenen tüm protokoller Cincinnati Üniversitesi, Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Yetişkin farelerden (ve sıçanlardan) kalp çıkarma öncesi hazırlık
<ol><li>Sırasıyla fare ve fare izolasyonu için Tablo 1 ve Tablo 2'deverilen tariflere göre karşılık gelen perfüzyon, enzim ve durdurma çözeltilerini hazırlayın. Herhangi bir kontaminasyon veya çözülmemiş partikülleri temizlemek için çözeltileri 0,22 m filtreden filtreleyin.</li>
	<li>15 dakika boyunca %70 alkolle ıslatarak cerrahi aletleri temizleyin ve sterilize edin ve daha sonra çift distile su ile yıkayın. Temiz bir kağıt havlu üzerinde kuru hava araçları bırakın.</li>
	<li>Su banyosunu 37 ºC'ye önceden ısıtın. İşlem sırasında perfüzyon aparatı ile ılık suyun kesintisiz dolaşımını sağlamak için su banyosundaki su seviyesini kontrol edin.</li>
	<li>Perfüzyon cihazını %70 alkolle 5 dk. Tekrarederek temizleyin. NOT: Borunun temizlenmesine yardımcı olan akış hızını artırın.</li>
	<li>Alkol aktıktan sonra, 10 dakika boyunca çift distile su çalıştırarak alkol kalıntıları temizleyin.</li>
	<li>Eksizyondan sonra kalbi temizlemek için 3 adet orta boy tek kullanımlık polistiren tartım tabakları ayarlayın. Bulaşıkları 20 mL miyosit tamponu ile doldurun.</li>
	<li>Pasteur pipet yardımı ile her çan ara2-3 damla heparin ekleyin ve birden fazla kez pipetleme tarafından iyice karıştırın.</li>
	<li>Künt iğne kanüllü 10 mL'lik bir şırınga alın. NOT: Temiz ve steril bir iğnenin ucunu keserek künt bir iğne kanüli hazırlanabilir. Fare ve sıçan için kanül yapmak için sırasıyla 21 G iğne ve 14 G iğne kullanıldı.</li>
	<li>Şırıngayı perfüzyon tamponuile doldurun (Tablo 1). Şırıngadan hava kabarcıklarını çıkarın ve açılı bir pozisyonda üçüncü tabağa yerleştirin. Bantla sabitleyin. NOT: Sıçanlar için miyosit perfüzyon tamponu yerine A Çözeltisi (Tablo 2) kullanılmıştır.</li>
	<li>Cerrahi bir dikiş ile gevşek bir düğüm hazırlayın ve iğne etrafında yerleştirin.</li>
	<li>Anestezi enjeksiyonundan 20 dakika önce intraperitoneal enjeksiyon ile fareye heparin (100 USP ünitesi/fare) enjekte edin.</li>
	<li>Perfüzyon aparatı aracılığıyla miyosit perfüzyon tamponu(Tablo 1)dolaşın. Akış hızını 3 mL/dk'ya düşürün. NOT: Sıçanlar için miyosit perfüzyon tamponu yerine A Çözeltisi (Tablo 2) kullanılmıştır.</li>
	<li>5 dakika sonra perfüzyon tamponu enzim solüsyonu ile değiştirin (Tablo 1). İşlem sırasında enzim çözeltisini oksijenle doygunlayın. 3 mL/dk akış hızı kullanın. NOT: Fare CM izolasyonu için bunun yerine E (Tablo 2) çözeltisi kullanın.</li>
	<li>Anestezi intraperitoneal enjeksiyon ile fare anestezi. Terminal cerrahisi için IACUC tarafından önerilen uygun dozda anestezi kullanın.</li>
	<li>Bir parmak sıkışması bir yanıt eksikliği ile anestezi yeterli derinliği onaylayın. Sonra fareyi cerrahi platforma koy.</li>
</ol>2. Erişkin farelerden (ve sıçanlardan) kalp çıkarma
<ol><li>% 70 alkol ile silerek cildi sterilize.</li>
	<li>Göğsü dikkatlice aç.</li>
	<li>Kalbi çıkar. Eksizyon sırasında kalp dışı dokulardan kaçının.</li>
	<li>Perfüzyon tampon(Tablo 1)ile dolu ilk çanak, kalp koyun. NOT: Fare için A çözeltisi kullanın (Tablo 2).</li>
	<li>Yavaşça sıkarak kalpten kan temizleyin.</li>
	<li>Kalbi ikinci yemeğe aktar.</li>
	<li>Kalpten kan temizleyin ve kardiyak olmayan dokuları çıkarın. Daha sonra, üçüncü çanak kalp aktarın.</li>
	<li>Akciğerleri ve diğer çevre dokuları kesin ve yükselen aort yoluyla kanüle. Bu işlem CM kalitesini ve miktarını artırmak için mümkün olduğunca hızlı (<5 dk) yapılmalıdır.</li>
</ol>3. Kalbin sindirimi
<ol><li>Fare kalbinin sindirimi NOT: Fare nin kalbinde dolaşan tüm çözeltiler/tamponlar işlem boyunca oksijenlendirilmelidir.<ol>
<li>Kantin iğnesini şırıngadan dikkatlice çıkarın ve Langendorff perfüzyon cihazına bağlayın.</li>
		<li>Enzim çözeltisi ve sindirim akışı etkileyebilir kalbe giden herhangi bir hava kabarcıkları kaçının.</li>
		<li>Kalbe homojen bir ortam sağlamak için su ceketini yukarı taşıyın. Enzim çözeltisinin kalpten 2-3 mL/dk hızla akmasına izin verin. NOT: Geçen çözeltinin hızı kritiktir ve CM miktarı ve kalitesinin sonucu üzerinde önemli bir etkiye sahiptir.</li>
		<li>Enzim çözeltisi 2 dakika boyunca kalp ten akmasına izin verin.</li>
		<li>2 dk, enzim çözeltisine 40 μL 100 μM CaCl2 çözeltisi ekleyin ve karıştırın. Enzim çözeltisi başka bir 10-15 dakika için kalp geçmesine izin verin. NOT: Bir kez akış pürüzsüz olur, kalp kahverengimsi ve yumuşak olur, kollajenaz enzimi ve kalbin düzgün sindirim eşit dağılımı gösteren.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fare kalbinin sindirimi NOT: Fare nin kalbinde dolaşan tüm çözeltiler/tamponlar işlem boyunca oksijenlendirilmelidir.<ol>
<li>Kantin iğnesini şırıngadan dikkatlice çıkarın ve Langendorff perfüzyon cihazına bağlayın.</li>
		<li>Enzim çözeltisi ve sindirim akışı etkileyebilir kalbe giden herhangi bir hava kabarcıkları kaçının.</li>
		<li>Kalbe homojen bir ortam sağlamak için su ceketini yukarı taşıyın.</li>
		<li>Çözelti a akışını 3-5 dk kalpten herhangi bir kan çıkarmak için 2-3 mL/dk hızda başlatın. NOT: Geçen çözeltinin hızı kritiktir ve CM kalitesinin sonucu üzerinde önemli bir etkiye sahiptir.</li>
		<li>Kan kalpten temizlendikten sonra A çözeltisinden çözeltiE(Tablo 2)geçin. Çözeltide 0,1 mM'lik son konsantrasyon için aşağıda belirtildiği gibi CaCl2 ile Titrat çözeltisi E:<ol>
<li>Perfüzyon 10 dakika sonra, 0,1 M CaCl212,5 μL ekleyin.</li>
			<li>Perfüzyon 15 dk sonra, 0,1 MCaCl2 25 μL ekleyin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Akış hızlı hale gelene ve kalp esnek olana kadar enzim çözeltisi 30-40 dakika daha kalpten geçsin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. CM tek hücreli süspansiyon hazırlanması
<ol><li>CM tek hücreli süspansiyonun hazırlanması (fare)<ol>
<li>Kalbi Langendorff perfüzyon sisteminden çıkarın. 5 mL enzim çözeltisi ile dolu 60 mm Petri kabına taşıyın ve kabı biyogüvenlik başlığına aktarın. NOT: Langendorff perfüzyon sisteminden kalbi çıkarmadan önce yeterli kalp sindirimini sağlayın. Sindirim süresi enzim aktivitesine, çözelti akışına ve kalbin büyüklüğüne bağlıdır.</li>
		<li>Steriliteyi sağlamak ve kontaminasyonu önlemek için biyogüvenlik kaputunda daha fazla mekanik ayrışma gerçekleştirin.</li>
		<li>Dikkatle atria kaldırmak (1/4bazal kalp kısmı) ve ekstra yağ dokuları.</li>
		<li>İnce parçalar halinde forceps ile kalp kıyma.</li>
		<li>Steril bir Pasteur pipetalın ve ucunu 45º açıyla kesin.</li>
		<li>Bu Pasteur pipetini kullanarak kalp dokusunu tek hücreli süspansiyonda hafif pipetleme ile dağıtın. Optimal sindirim tek hücreli kardiyomiyositlerin süspansiyon sağlar. NOT: Mekanik yakıcılık nedeniyle CM hasarını azaltmak için transfer borusunun dar, alt kısmını çıkarın.</li>
		<li>Daha sonra, aşırı hazımsızlık olasılığını önler enzim aktivitesini durdurmak için durdurmak çözeltisi 5 mL ekleyin.</li>
		<li>Taze bir 50 mL konik alın ve steril 100 μm hücresüz üzerine yerleştirin.</li>
		<li>Doku yığınıkaldırmak için hücre süzgeci aracılığıyla kardiyomiyosit süspansiyon geçirin. Petri kabını ve süzgeci, süzgeçe bağlı kalan kardiyomiyositleri toplamak için 5 mL'lik başka bir stop çözeltisi(Tablo 1)ile yıkayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>CM tek hücreli süspansiyon (sıçan) hazırlanması<ol>
<li>Kalbi Langendorff perfüzyon sisteminden çıkarın. Kalbi 5 mL çözelti A ile dolu 100 mm Petri kabına taşıyın ve kabı biyogüvenlik başlığına taşıyın. NOT: Langendorff perfüzyon sisteminden kalbi çıkarmadan önce yeterli kalp sindirimini sağlayın. Sindirim süresi enzim aktivitesine, çözelti akışına ve kalbin büyüklüğüne bağlıdır.</li>
		<li>Steriliteyi sağlamak ve kontaminasyonu önlemek için biyogüvenlik kaputunda daha fazla mekanik ayrışma gerçekleştirin.</li>
		<li>Dikkatle atria kaldırmak (bazal kalp kısmının 1/4th) ve ekstra yağ dokuları.</li>
		<li>İnce parçalar halinde forceps ile kalp kıyma.</li>
		<li>Steril bir Pasteur pipetalın ve ucunu 45º açıyla kesin.</li>
		<li>Bu Pasteur pipetini kullanarak kalp dokusunu tek hücreli süspansiyonda hafif pipetleme ile dağıtın. Optimal sindirim tek hücreli kardiyomiyositlerin süspansiyon sağlar. NOT: Mekanik yakıcılık nedeniyle CM hasarını azaltmak için transfer borusunun dar, alt kısmını çıkarın.</li>
		<li>CM süspansiyonuna 5 mL çözelti B(Tablo 2)ekleyin ve kalan yağ veya sindirilmemiş doku parçalarını çıkarmak için çözeltiyi 100 μm hücresüzden geçirin.</li>
		<li>Taze bir 50 mL konik şişede filtrat toplayın.</li>
		<li>Petri kabını ve kalan CM'yi hücre süzgecinden geçirmek için 5 mL daha b çözeltisi kullanın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. CM'siz lerin kaldırılması
<ol><li>Yetişkin tek hücreli süspansiyondan (fare) CM'lerden çıkarılma<ol>
<li>3 dk için 20 x g hücre süspansiyon santrifüj.</li>
		<li>Supernatant atın ve stop çözeltisi 10 mL hücreleri resuspend(Tablo 1). NOT: Stop çözeltisindeki BSA konsantrasyonunun artırılması viskozitesini artıracak ve CM olmayanların sedimantasyon hızını azaltacaktır.</li>
		<li>Tüpün 3-5 kez hafif çetren inversiyon ile CM'leri yeniden askıya alın.</li>
		<li>3 dk aralıklarla 100 μM CaCl2 çözeltisi ekleyin ve karıştırın. Üç kez tekrarlayın.</li>
		<li>Dördüncü eklemeden sonra, 3 dk için 20 x g kardiyomiyosit süspansiyon santrifüj.</li>
		<li>Supernatant atın.</li>
		<li>Önceden ısıtılmış (37 ºC), yetişkin fare CM kaplama medyasında(Tablo 3)CM'leri yeniden askıya alın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Yetişkin tek hücreli süspansiyonlardan (sıçan) CM'siz lerin çıkarılması<ol>
<li>Pelet hücreleri 20 x g'de 3 dk 25 ºC'de.</li>
		<li>Supernatant atın ve çözelti B 25 mL içine hücreleri resuspend(Tablo 2).</li>
		<li>Hücreleri nazik bir şekilde karıştırın ve CM'nin yer çekimi altında yerleşmesini sağlamak için bir tüp standına yerleştirin.</li>
		<li>Supernatant'ı dikkatlice atın.</li>
		<li>B çözeltisinin 25 mL'lik taze siseviyesindeki hücreleri yeniden askıya alın ve 50 μL, 75 μL ve 100 μL 0,1 M CaCl2'yi 3-5 dk aralıklarla adım adım ekleyerek 1,0 mM CaCl2'ye titre edin. NOT: Bu adımda B çözeltisinde daha yüksek bir BSA konsantrasyonu kullanılabilir. B çözeltisindeki BSA konsantrasyonunun artırılması viskoziteyi artırır ve böylece CM'siz lerin sedimantasyon hızını azaltır.</li>
		<li>Pelet hücreleri 20 x g için 3 dk 25 ºC'de, supernatant aspire ve yetişkin sıçan hücre kültür ortamı nın istenilen hacmi ekleyin(Tablo 4).</li>
		<li>Lamina kaplı bir tabakta Tohum CM'leri. NOT: CM olmayan hücrelerin kontaminasyonunu en aza indirmek için kaplamasız bir kültür plakası üzerindeki CM'lerin ön kaplaması kullanılabilir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. Yetişkin CM kaplama
<ol><li>Ön kaplama<ol>
<li>Kardiyomiyositleri kültür medyasına yeniden uzaklaştırmak.</li>
		<li>Hücreleri fare veya fare CM için 60 mm veya 100 mm'lik bir çanak içine önceden plakalayın.</li>
		<li>37 ºC'de %5 CO2 ile desteklenen bir kuluçka makinesinde 2 saat kuluçka ya da tüp lüzmler.</li>
		<li>Ön plaka kuluçka sırasında, hücre kültür plakalarını uzun süreli CM kültürü için laminin (PBS'de 10 μg/mL) ile kaplayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ön kaplama 2 saat sonra, 50 mL konik şişe cms toplamak.</li>
	<li>Çanak hücreleri toplamak ve transfection deneyleri için bir laminin kaplı 24 iyi kültür plakası içine yeniden plaka.</li>
	<li>37 ºC'de bir kuvözdeki kültür hücreleri %5 co2ile desteklenir. 4-6 saat yüzeyile kardiyomiyositler uymak için yeterli, ve böylece, transfeksiyon 6 saat sonrası kaplama yapılabilir. NOT: FBS içeren kaplama ortamı yaygın olarak kullanılır ve proliferasyon çalışmaları ile daha iyi uyumluluk gösterir. Ancak, salgı faktörlerinin analiz edildiği deneylerde serumsuz bir ortam kullanılabilir.</li>
</ol>7. Transfeksiyon
<ol><li>CM'leri lamina ile kaplanmış hücre kültürü plakalarına 4-6 saat kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>Laminin kaplı plaka üzerinde CM tohumlama dört saat sonra, üreticinin protokolüne göre bir transfeksiyon reagent (örneğin, Lipofektamine RNAiMAX) kullanarak ilgi siRNA (50 nM) ile transfect hücreleri.</li>
	<li>Transfeksiyondan sonra 24 saat ve ondan sonraki 24 saatte bir 20 güne kadar ortam değiştirin.</li>
	<li>20 gün sonra, canlı kardiyomiyositlerin uzun vadede başarılı bir şekilde kültüre kazandırıldığından emin olmak için Troponin gibi kardiyak spesifik belirteçler için immünositokimya da dahil olmak üzere, downstream uygulamaları için PBS'de %4 PFA içeren hücreleri düzeltin.</li>
</ol>

<ol><li>van Amerongen, M. J., Engel, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Features+of+cardiomyocyte+proliferation+and+its+potential+for+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Features of cardiomyocyte proliferation and its potential for cardiac regeneration.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 12, 2233-2244 (2008).</li>
<li>Parente, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia%2Freoxygenation+cardiac+injury+and+regeneration+in+zebrafish+adult+heart%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Hypoxia/reoxygenation cardiac injury and regeneration in zebrafish adult heart.</a> PLoS One. 8, 53748(2013).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+regenerative+capacity+of+zebrafish+reverses+cardiac+failure+caused+by+genetic+cardiomyocyte+depletion%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The regenerative capacity of zebrafish reverses cardiac failure caused by genetic cardiomyocyte depletion.</a> Development. 138, 3421-3430 (2011).</li>
<li>Gonzalez-Rosa, J. M., Martin, V., Peralta, M., Torres, M., Mercader, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+scar+formation+and+regression+during+heart+regeneration+after+cryoinjury+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Extensive scar formation and regression during heart regeneration after cryoinjury in zebrafish.</a> Development. 138, 1663-1674 (2011).</li>
<li>Graham, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture%2C+and+functional+characterization+of+adult+mouse+cardiomyoctyes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture, and functional characterization of adult mouse cardiomyoctyes.</a> Journal of Visualized Experiments. , e50289(2013).</li>
<li>Brette, F., Orchard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-tubule+function+in+mammalian+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">T-tubule function in mammalian cardiac myocytes.</a> Circulation Research. 92, 1182-1192 (2003).</li>
<li>Müller, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+the+cardiac+sodium+calcium+exchanger+promoter+in+adult+and+neonatal+cardiomyocytes+by+Nkx2.5+and+serum+response+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of the cardiac sodium calcium exchanger promoter in adult and neonatal cardiomyocytes by Nkx2.5 and serum response factor.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 34, 807-821 (2002).</li>
<li>Zhou, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes+in+ischemic+heart+disease%3A+novel+carriers+for+bioinformation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Exosomes in ischemic heart disease: novel carriers for bioinformation.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 120, 109451(2019).</li>
<li>Wu, Y. S., Zhu, B., Luo, A. L., Yang, L., Yang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Cardiokines+in+Heart+Diseases%3A+Beneficial+or+Detrimental%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">The Role of Cardiokines in Heart Diseases: Beneficial or Detrimental.</a> BioMed Research International. 2018, 8207058(2018).</li>
<li>Eppenberger, H. M., Hertig, C., Eppenberger-Eberhardt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+rat+cardiomyocytes+in+culture+A+model+system+to+study+the+plasticity+of+the+differentiated+cardiac+phenotype+at+the+molecular+and+cellular+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cardiovascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Adult rat cardiomyocytes in culture A model system to study the plasticity of the differentiated cardiac phenotype at the molecular and cellular levels.</a> Trends in Cardiovascular Medicine. 4, 187-193 (1994).</li>
<li>Alam, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+Senescence-Associated+Genes+Rb1+and+Meis2+in+Adult+Cardiomyocytes+Results+in+Cell+Cycle+Reentry+and+Cardiac+Repair+Post-Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Inhibition of Senescence-Associated Genes Rb1 and Meis2 in Adult Cardiomyocytes Results in Cell Cycle Reentry and Cardiac Repair Post-Myocardial Infarction.</a> Journal of the American Heart Association. 8, 012089(2019).</li>
<li>Arif, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-210-mediated+proliferation%2C+survival%2C+and+angiogenesis+promote+cardiac+repair+post+myocardial+infarction+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-210-mediated proliferation, survival, and angiogenesis promote cardiac repair post myocardial infarction in rodents.</a> Journal of Molecular Medicine. 95, 1369-1385 (2017).</li>
<li>Rosenthal, N., Brown, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+ascending%3A+perspectives+for+human-disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The mouse ascending: perspectives for human-disease models.</a> Nature Cell Biology. 9, 993-999 (2007).</li>
<li>Nippert, F., Schreckenberg, R., Schlüter, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Cultivation+of+Adult+Rat+Cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and Cultivation of Adult Rat Cardiomyocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. , e56634(2017).</li>
<li>Judd, J., Lovas, J., Huang, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+Culture+and+Transduction+of+Adult+Mouse+Cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation, Culture and Transduction of Adult Mouse Cardiomyocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. , e54012(2016).</li>
<li>Ackers-Johnson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simplified%2C+Langendorff-Free+Method+for+Concomitant+Isolation+of+Viable+Cardiac+Myocytes+and+Nonmyocytes+From+the+Adult+Mouse+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">A Simplified, Langendorff-Free Method for Concomitant Isolation of Viable Cardiac Myocytes and Nonmyocytes From the Adult Mouse Heart.</a> Circulation Research. 119, 909-920 (2016).</li>
<li>Li, D., Wu, J., Bai, Y., Zhao, X., Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+adult+mouse+cardiomyocytes+for+cell+signaling+and+in+vitro+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of adult mouse cardiomyocytes for cell signaling and in vitro cardiac hypertrophy.</a> Journal of Visualized Experiments. , e51357(2014).</li>
<li>Pinz, I., Zhu, M., Mende, U., Ingwall, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+isolation+procedure+for+adult+mouse+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">An improved isolation procedure for adult mouse cardiomyocytes.</a> Cell Biochemistry and Biophysics. 61, 93-101 (2011).</li>
<li>O'Connell, T. D., Rodrigo, M. C., Simpson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+adult+mouse+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of adult mouse cardiac myocytes.</a> Methods in Molecular Biology. 357, 271-296 (2007).</li>
<li>Dou, Y., Arlock, P., Arner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blebbistatin+specifically+inhibits+actin-myosin+interaction+in+mouse+cardiac+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%3A+Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Blebbistatin specifically inhibits actin-myosin interaction in mouse cardiac muscle.</a> American Journal of Physiology: Cell Physiology. 293, 1148-1153 (2007).</li>
<li>Kabaeva, Z., Zhao, M., Michele, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blebbistatin+extends+culture+life+of+adult+mouse+cardiac+myocytes+and+allows+efficient+and+stable+transgene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%3A+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Blebbistatin extends culture life of adult mouse cardiac myocytes and allows efficient and stable transgene expression.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 294, 1667-1674 (2008).</li>
<li>Sellin, L. C., McArdle, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+effects+of+2%2C3-butanedione+monoxime%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+%26+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Multiple effects of 2,3-butanedione monoxime.</a> Pharmacology & Toxicology. 74, 305-313 (1994).</li>
</ol>

Hücreye özgü mekanistik çalışmalar yapabilmek için yetişkin kardiyomiyosit izolasyonu ve uzun vadeli kültür için bir protokol kurulması çok önemlidir. Yetişkin CM izolasyon protokolleri tartışırken sadece birkaç rapor vardır, ve hatta bunların daha az yetişkin farelerCM15,,16,,17uzun vadeli kültür için kullanılır. Bu yetişkin sıçan CM yetişkin fareler CM10,11,...

Kalp hastalıkları dünya çapında önde gelen ölüm nedenlerinden biridir. Kardiyak yaralanmanın hemen hemen her türü erişkin kardiyomiyosit (CM) kaybıile sonuçlanır. Erişkin memeli kalpler yetişkin CM1senescent doğası nedeniyle kardiyak yaralanma onarmak mümkün değildir. Böylece, yetişkin memeli kalp herhangi bir hakaret CMs kalıcı bir kaybına yol, azaltılmış kalp fonksiyonu ve kalp yetmezliğine yol açan. Yetişkin memelilerin aksine, zebra balığı ve yeni kalpler gibi küçük hayvanlar mevcut CM çoğalması2,3,4ile kardiyak yaralanmalarını yenileyebilirler. Hem proliferatif hem de proliferatif olmayan yaklaşımlar la kardiyak yaralanmalar için yeni bir terapötik müdahale bulmak için dünya çapında bir çaba devam etmektedir. Son yıllarda, genetik fare modelleri çeşitli kardiyak yaralanma ve onarım çalışma geliştirilmiştir. Ancak, in vivo hayvan modelleri kullanarak ikincil etkileri bir hücre özerk mekanizma deşifre etmek için ek karmaşıklığı ile pahalı bir yaklaşım olmaya devam etmektedir. Ayrıca in vivo sistemleri, CM'den kardiyoprotektif sinyalizasyona neden olan farmakolojik bir müdahalenin CM'ye özgü etkilerini analiz etmek zordur.
Ayrıca, cm proliferasyon analizleri yapmak için yetişkin CM'lerin uzun vadeli kültürü gereklidir. CM proliferasyon tahlilleri hücrelerin hücre döngüsüne indüklenen ve bundan sonra doğru veri elde etmek için en az 4-5 gün gerektirir. Ayrıca, elektrofizyolojik çalışmalar, ilaç taraması, toksisite çalışmaları ve Ca++ homeostaz çalışmaları için izole CM'ler kullanan çalışmalar tüm gelişmiş bir kültür sistemi 5 ihtiyacı vardır5,6,7. Ayrıca, son çalışmalar CMs salgılanan sitokinlerin kardiyoprotektif önemini göstermektedir (kardiyokines)8,9. Kalp onarımı ve rejenerasyonu sırasında bu kardiyokinelerin terapötik rolünü ve moleküler mekanizmasını araştırmak için uzun süreli bir kültür gereklidir.
Yetişkin sıçan CMs bir in vitro sistem10,,11,,12tek hücreli izolasyon ve uzun vadeli kültür için yeterince sağlam . Ancak, yetişkin fare CMs in vitro tahliller için büyük ilgi vardır, genetik olarak değiştirilmiş fare modelleri çeşitli durumu nedeniyle, hangi tasarım ve sıçan CM ile mümkün değildir çeşitli yenilikçi analizlerin yürütülmesi için izin verir13. Yetişkin fare CM izolasyon aksine, yetişkin fare kalplerden tek hücreli süspansiyon elde etmek oldukça zordur, ve kültür yetişkin fare CMs uzun vadeli kültür daha da zordur.
Bir Langendorff sistemi kullanarak fare ve sıçan kalplerinden Yetişkin CM izolasyon u daha önce CM fonksiyonu5,14,,15çalışma kurulmuştur. Burada, hem sıçanlardan hem de farelerden yetişkin CM izolasyonprotokollerinin yanı sıra izole edilmiş hücrelerin değiştirilmiş uzun vadeli kültürü, transfeksiyonu ve CM çoğalmasını ayrıntılı olarak açıklıyoruz.

<table><tbody><tr><td>2,3-Bütan Dion monoksim</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B-0753</td><td></td></tr><tr><td>Blebbistatin</td><td>APExBIO</td><td>B1387</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3059</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>449709</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürü plakası</td><td>Corning Costar</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>Hücre süzgeci</td><td>BD Biosciences</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Cel-miR-67</td><td>Dharmacon</td><td>CN-001000-01-50</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz tip2</td><td>Worthington</td><td>LS004177</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Dereceli Transfer Pipetleri</td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-20</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık polistiren tartı kapları</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z154881-500EA</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Kartalı'nin orta</td><td>Thermo Scientific</td><td>SH30022.01</td><td></td></tr><tr><td>EdU</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>C10337</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>Corning</td><td>35-015-CV</td><td></td></tr><tr><td>İnce Nokta Yüksek Hassasiyetli Forseps</td><td>Fisherbrand</td><td>22-327379</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-5400</td><td></td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>Hausser Scientific</td><td>1483</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sagent İlaç</td><td>PSLAB-018285-02</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek Hassasiyetli Düz Geniş Güçlü Nokta Cımbız / Forseps</td><td>Fisherbrand</td><td>12-000-128</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidaz</td><td>Sigma</td><td>H3506</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I0516-5ML</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-8281</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>746436</td><td></td></tr><tr><td>Işık Mikroskobu</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipofektamin RNAiMAX</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>13778-150</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M-2643</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Fisher Scientific</td><td>S318-500</td><td></td></tr><tr><td>Doğal Fare Laminin</td><td>Invitrogen</td><td>23017-015</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin</td><td>Corning</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td>Henry Schein</td><td>24352</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>20012-027</td><td></td></tr><tr><td>Proteaz XIV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5147-1G</td><td></td></tr><tr><td>Selenyum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>229865+5G</td><td></td></tr><tr><td>siMeis2</td><td>Dharmacon</td><td>s161030</td><td></td></tr><tr><td>siRb1</td><td>Dharmacon</td><td>s128325</td><td></td></tr><tr><td>Düz Künt/KeskinDiseksiyon Makası</td><td>Fisher Scientific</td><td>28252</td><td></td></tr><tr><td>Düz Çok İnce Hassas Uçlu Forseps</td><td>Fisherbrand</td><td>16-100-120</td><td></td></tr><tr><td>Taurine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T0625</td><td></td></tr><tr><td>Transferrin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8158-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Ultra pürüzsüz, eğimli kenar kaplama makas</td><td>Fisherbrand</td><td>22-079-747</td><td></td></tr><tr><td>Su Banyosu</td><td>Fisher Scientific</td><td>3006S</td><td></td></tr></tbody></table>

İzolasyon, transfeksiyon ve yetişkin fare ve sıçan kardiyomiyositlerinin uzun süreli kültürü

Isolation, Transfection, and Long-Term Culture of Adult Mouse and Rat Cardiomyocytes

Erişkin memeli kardiyomiyositlerin (CMs) ex vivo kültürü, kardiyak biyolojinin in vitro çalışması için en uygun deneysel sistemi sunmaktadır. Erişkin memeli CM'ler en az proliferatif kapasiteye sahip ölümcül farklılaşmış hücrelerdir. Erişkin CM'lerin mitotik sonrası durumu sadece kardiyomiyosit hücre döngüsünün ilerlemesini kısıtlamakla kalmamış, aynı zamanda CM'lerin verimli kültürünü de sınırlandırır. Ayrıca, yetişkin CM'lerin uzun vadeli kültürü CM proliferasyonu ve gen ekspresyonunun analizi gibi birçok çalışma için gereklidir.
Fare ve sıçan kardiyomiyosit izolasyonu için kullanılan iki en çok tercih edilen laboratuvar hayvanlarıdır. Sıçan CM'lerinin uzun süreli kültürü mümkün olsa da, yetişkin fare CM'leri ölüme duyarlıdır ve normal koşullarda beş günden fazla kültürlenemez. Bu nedenle, yetişkin murine CMs için hücre izolasyonu ve uzun vadeli kültür protokolü optimize etmek için kritik bir ihtiyaç vardır. Bu değiştirilmiş protokol ile, 20 günden fazla hem yetişkin fare yi hem de fare CM'lerini başarılı bir şekilde izole etmek ve kültüretmek mümkündür. Ayrıca, izole CM siRNA transfeksiyon verimliliği önemli ölçüde önceki raporlara göre artmıştır. Yetişkin fare CM izolasyonu için Langendorff perfüzyon yöntemi optimal enzim çözeltisi ve tam ekstrasellüler matriks ayrışması için yeterli zaman ile kullanılmaktadır. Saf ventriküler CM'ler elde etmek için, her iki atria diseksiyon ve kaplama ile devam etmeden önce diseksiyon ve atılır. Hücreler verimli ve hızlı bağlanmaya olanak sağlayan laminin kaplı bir plaka üzerinde dağıtıldı. CMs siRNA transfeksiyon önce 4-6 saat yerleşmek için izin verildi. Kültür medyası 20 gün boyunca her 24 saatte bir yenilendi ve daha sonra, CM'ler Troponin ve KI67 gibi hücre döngüsünün belirteçleri gibi kardiyak spesifik belirteçler için sabit lendi ve lekelendi.

Mevcut değiştirilmiş protokol verimli izolasyon ve tüp bebek fare ve fare CMs kültürü sağlar. Sıçan CM izolasyonu için, toplam 3 yetişkin (12 haftalık) erkek Fischer 344 sıçan kullanıldı. Şekil 1, işlemde gerekli olan cerrahi cihazları ve izolasyon kurulumlarını gösterir; her parça işaretlenmiştir ve şekil efsanesinde açıklanmıştır. Kollajenaz tip 2 sindirim için kullanılmıştır, bu da başarılı izolasyondan yüksek miktarda yüksek kaliteli CM'ler verir(Şekil 2A). ...

Burada, yetişkin fare ve sıçan kardiyomiyositlerinin izolasyon, transfeksiyon ve uzun vadeli kültürü için bir protokol sıyoruz.

İzolasyon, Transfeksiyon ve Yetişkin Fare ve Sıçan Kardiyomiyositlerinin Uzun Süreli Kültürü

Ex vivo culture of the adult mammalian cardiomyocytes (CMs) presents the most relevant experimental system for the in vitro study of cardiac biology. ...

Bu videonun amacı yetişkin kardiyomiyosit izolasyon, uzun vadeli kültür ve transfeksiyon için standart bir protokol göstermektir. Fare veya sıçandan kardiyomiyositlerin izole edilmesi ve kültüre alınması, sağlıklı ve hastalıklı kalpteki kardiyomiyositlerin hücre otonom biyolojisini araştırmak için gerekli bir yöntem olmaya devam etmektedir. İzole kardiyomiyositkullanarak cevaplanabileceğimiz birkaç soru var.Proliferatif potansiyel gibi. Yaralanma yanıtı üzerine gen ekspresyonu değişiklikleri veya spesifik sitokin ekspresyonları vardır. Ne yazık ki, fare kardiyomiyositnormal kültür koşullarında son bir hafta hayatta değildir.Bu nedenle, bu videoda, yetişkin fare kardiyomiyositleri izole etmek için optimize edilmiş bir yöntemi tanımlıyoruz, onları 21 gün boyunca aşındırıp kültürediyoruz, bu teknikte ustalaşmak başlangıçta zor. Ama uygulama ile bir izolasyon ve yaklaşık% 100 transfeksiyon verimliliği sonra kardiyomiyosithayatta yaklaşık% 80-90 elde edebilirsiniz. Ve bu kardiyomiyositlerin çoğu son 20 gün hayatta kalabilir.Cerrahi aletlerinizi 15 dakika %70 alkolle ıslatarak ve daha sonra çift distile su ile yıkayarak temizleyin ve sterilize edin. Sudan sonra, havadaki araçları bir son

isolation-transfection-long-term-culture-adult-mouse-rat

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu çalışmada, yetişkin sıçan kalp miyositler izole ve kültürü tipik bir şekilde tanımladı. Kollajenaz ve proteaz tek miyositler sindirimi ve izole etmek için kullanılır. Miyositler Çoğu deney gereksinimlerini karşılamak bu protokolü takip kültürü.

Yetişkin Sıçan Kalp miyositler İlköğretim Kültür

Yetişkin, kardiyak miyositler hayvan kalpleri izole edilebilir ve birkaç gün kültüre temel hücrelerdir. Bu kültür süre içinde adenoviral gen transferi, genetik olarak kodlanmış biyosensörler (GEBs) ya da floresan füzyon proteinleri ifade etmek için kullanılır. Her iki yaklaşım konfokal mikroskobi ile hücresel soruşturma izin verir.

Konfokal Görüntüleme İzolasyon ve Yetişkin kardiyak miyositler Genetik Manipülasyon

Birincil fare kardiyomyosit kültürleri miyofibriler organizasyon ve fonksiyon soruşturma için önemli araçlardan biridir. Aşağıdaki protokol neonatal fare kalpleri birincil kardiyomiyositlerde izolasyonunu ve kültür açıklar. Elde edilen kültürler, daha sonra kardiyomiyosit biyomekanik, biyokimyasal ve hücre-biyolojik tahlillerin çeşitli için kullanılabilmektedir.

İzolasyon ve Kültür Yenidoğan Fare kardiyomiyositlerin

Burada bir perfüzyon Langendorff sistemi kullanılarak erişkin fare cardiomyoctyes izolasyonunu tarif eder. Elde edilen hücreler, + toleranslı elektriksel olarak hareketsiz Ca2 ve kültürlenmiş ve adeno-veya gen ekspresyonunu değiştirmek için lentivirüsler ile transfekte edilmiş olabilir. Bunların işlevi de MMSYS sistemi ve yama kelepçe teknikler kullanılarak analiz edilebilir.

İzolasyon, Kültür ve Yetişkin Fare Cardiomyoctyes Fonksiyonel Karakterizasyonu

Biz yetişkin fare kardiyomiyositlerin izolasyonu için güvenilir bir yöntem açıklanmaktadır. Bu protokol, genetik olarak tadil edilmiş farelerin çeşitli fonksiyonel yetişkin kardiyomiyositlerde kültürü için tutarlı bir sonuç elde edilir.

İzolasyon ve Kültür Yetişkin Fare Hücre Sinyal için kardiyomiyositlerin ve<em&gt; In vitro</em&gt; Kalp hipertrofisi

Bu protokol, yüksek verim, saflık ve canlılığa sahip yetişkin fare kardiyomiyositlerinin tekrarlanabilir izolasyonu ve uzun süreli kültürü için adım adım bir yöntemi açıklar.

İzolasyon, Kültür ve Yetişkin Fare kardiyomiyositlerde İletimi

Bir fare kalpten farklı kardiyak hücre tiplerinin izolasyonu için çeşitli protokoller geliştirilmiş ve açıklanmıştır. Burada, yüksek kaliteli ana kardiyak hücre tiplerinin (kardiyomiyosit, endotel hücreleri ve fibroblastların) tek bir preparasyondan izole edilmesini sağlayan deneysel maliyetleri düşüren optimize edilmiş bir protokol tarif edilmiştir.

Bir Yetişkin Sıçan Kalpten Yüksek Kalitede Kardiyomiyosit, Endotel Hücresi ve Fibroblastların Eşzamanlı İzolasyonu

Burada, yalıtım ve yetişkin fare Ventriküler cardiomyocytes (R.V.C) tarımı için bir iletişim kuralı mevcut. İzole R.V.C kısa ve uzun vadeli tarım için kullanılabilir. Yalıtım ve R.V.C ekimi kalp hastalıkları için yeni tedavi rejimlerinin geliştirilmesi önemli bir rol oynayabilir.

Yalıtım ve yetişkin fare Cardiomyocytes tarımı

Miyositlerin ve miyosit olmayanların tek bir yetişkin fare kalbinin hem atria hem de ventriküllerinden eşzamanlı izolasyonu için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu protokol, yüksek oranda uygulanabilir kardiyak miyositlerin ve miyosit olmayanların tutarlı verimini sağlar ve fenotipleme ve in vitro analiz için en uygun hücreye özgü kültür koşullarını detaylandırmaz.

Yetişkin Fare Kalbinden Atriyal Miyositler, Ventrikül Miyositleri ve Miyosit Olmayanların Eşzamanlı İzolasyonu ve Kültürü

Kardiyolojide hücresel ve moleküler fonksiyonel deneyler için altın standart kardiyomiyositlerdir. Bu makalede, fare kardiyomiyositlerini izole etmek için Langendorff dışı tekniğe yapılan uyarlamalar açıklanmaktadır.

Fare kardiyomiyositlerini sürekli olarak izole etmek için basit ve etkili bir yöntem

Keşfedin yetişkin fare ve sıçan kardiyomiyositlerinin izolasyonu, siRNA transfeksiyonu ve 20 günden fazla uzun süreli kültürü için optimize edilmiş protokolü. Bu yöntem, kardiyak hücre biyolojisi ve gen ekspresyonu çalışmaları için yüksek sağkalım sağlar.

İzolasyon, Transfeksiyon ve Yetişkin Fare ve Sıçan Kardiyomiyositlerinin Uzun Süreli Kültürü

Daha fazla video keşfet