Name: Mikro-BT Görüntüleme için Erişkin ve Erken Postnatal Fare Akciğerlerinin Vasküler Döküm (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: Öğrenin, erişkin ve erken postnatal farelerde pulmoner arter vaskülatürünü dökümleme ve mikro-BT görüntüleme yöntemini. Bu teknik, yumuşak doku bütünlüğünü koruyarak vasküler morfolojiyi incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma kısmen NHLBI İntramural Araştırma Programı (DIR HL-006247) tarafından desteklenmiştir. Görüntü edinimi ve analizinde rehberlik için NIH Mouse Görüntüleme Tesisi'ne teşekkür ederiz.

Burada açıklanan tüm yöntemler Ulusal Kalp Akciğer ve Kan Enstitüsü Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (ACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Hazırlık
<ol><li>Fareyi intraperitoneally heparin (1 birim/g fare vücut ağırlığı) ile enjekte edin ve 2 dakika boyunca ambulamasını bekleyin.</li>
	<li>Co2 odasında hayvan ötenazi.</li>
	<li>Bir cerrahi tahta üzerinde bir supine pozisyonda fare düzenleyin ve bant ile tahtaya dört uzuvları güvenli. İnce diseksiyon için büyütme kullanın.</li>
</ol>2. Akciğerlerve trakea açığa
<ol><li>Saç parazitini en aza indirmek için farenin ventral tarafını %70 etanol ile püskürtün.</li>
	<li>Forceps ile karın derisi kavramak ve göbek bölgesinde makas ile küçük bir kesi yapmak. Karın kas ve deri arasındaki fasyal tabaka içine makas uçları kaydırın ve iki tabaka ayırmaya başlar. Çalışma rostrally, karın, göğüs kafesi ve boyun deri çıkarmadan.</li>
	<li>Karın kaslarını makasla açın ve diyafram ortaya çıkana kadar her iki tarafı da yanal olarak kesin.</li>
	<li>Ksifoid işlemini hafifçe kavrayın ve ince, yarı saydam diyaframdan kaudal akciğerlerin görünümünü en üst düzeye çıkaran göğüs kafesini hafifçe kaldırın. Dikkatle ksifoid sürecinin hemen altında diyafram küçük bir kesi yapmak. Akciğerler çökecek ve diyaframdan uzaklaşacak. Diyaframı göğüs kafesinden ayırın, akciğer parankimini çalmamaya özen.</li>
	<li>Diyafragmdan geçtikleri inferior vena kava (IVC) ve yemek borusunu bulun ve ayırın. Akciğerlerile temas tan kaçınarak, göğüs boşluğunda herhangi bir havuz kan temizlemek için gazlı bez kullanın.</li>
	<li>Klisoidi bir kez daha kavrayın ve nazikçe kaldırın. Akciğerlerle temastan kaçınarak göğüs kafesini iki taraflı olarak (kabaca midaxillary hattında) kesin. Ön göğüs kafesini tamamen çıkarın, manubrium'dan hemen önce göğüs açısı boyunca son kesiği kesin.</li>
	<li>Önceden doldurulmuş bir şırınga kullanarak, kurumasını önlemek için akciğerleri fosfat tamponlu salin (PBS, pH 7.4) ile serbestçe ıslayın. Yordam boyunca bu yordamı devam edin.</li>
	<li>Forceps kullanarak, manubrium kavramak ve yavaşça vücuttan uzak yükseltmek. Makas kullanarak, manubrium 1-2 mm lateral kesilmiş, köprücük kemiği kesme, ve kaldırın. Bu, altındaki timusu ortaya çıkaracak.</li>
	<li>Timusun her lobu kavrayın, ayırın ve çıkarın. Submandibular bezi ile bu işlemi tekrarlayın. Son olarak, trakea böşenen kas dokusu kaldırın. NOT: Diseksiyonu takiben kalp, yükselen aort (AA), pulmoner arteriyel gövde (PAT) ve trakea görülmelidir. Gövde kapalı birincil arterdalları bölünmüş veya yaralı olmadığından emin olun.</li>
</ol>3. PA kateterizasyon ve kan perfüzyonu
<ol><li>Ünite 1'i monte etmek için, 30 G iğnenin göbeğine 15 cm PE-10 boru iplik ve PBS'de 10-4 M sodyum nitroprusside (SNP) ile önceden doldurulmuş 1 mL şırıngaya takın. Tüm hava bu birimden temizlenir kadar piston ilerleyerek tüp prime (Şekil 1). DİkKAT: Yutulursa SNP toksiktir. Cilt ve göz lerle temasından kaçının. İşlemden sonra cildi iyice yıkayın. Uygun kişisel koruyucu ekipman giyin.<ol>
<li>Alternatif olarak, Birim 2'yi birleştirin. Doğum sonrası gün 7 (P7) ve daha küçük fareler için, göbeğinden ek bir 30 G iğne ayırmak ve iğneyi Ünite 1'in açık ucuna saplamak için hemostat kullanın(Şekil 1).</li>
	</ol>
</li>
	<li>İğne yerine, 7-0 ipek 10 cm uzunluğunda bir ucunu kavramak için kavisli keskin forceps kullanın. Bir taraftan giren ve kas ve diğer taraftan forseps uçlarını geçen kalbin apeks nüfuz. Başka bir set ile ipek kavramak ve yaklaşık 2 cm uzunluğunda çekin ve kravat kapalı. Sütür kalan 8 cm ucunu alın, caudally kalp çekme, ve cerrahi tahta ya da sonuna bant. NOT: Bu gerginlik yaratacak, daha büyük damarları açığa ve yerine kalp tethering, pulmoner arter kateter daha kolay yerleşim için izin.</li>
	<li>Hem AA hem de PAT altında kavisli forseps uçları kanca. Açma yoluyla 7-0 ipek 3 cm uzunluğunda çekin ve tek atış gevşek dikiş oluşturun.</li>
	<li>Makas kullanarak kateter (Ünite 1) takılması için ince duvarlı sağ ventrikül (RV) nüfuz, kalbin apeksine doğru 1-2 mm kesi yapmak. Yerleştirmeden önce, sistemde hava olmadığını doğrulayın. Astarlı boruyu sağ ventriküle tanıtıve hafifçe yarı saydam ince duvarlı PAT'e doğru ilerleyin.<ol>
<li>Kateterin sol veya sağ pulmoner dallara doğru ilerlemediğini ve pulmoner arter dal noktasına abut olmadığını görsel olarak doğrulayın. Bant kullanarak, cerrahi tahtaya tüp distal kısmını güvenli. NOT: RV tanımlamak için, kalbin sağ tarafında çimdik için forceps kullanın. Sol ventrikül aksine, RV nispeten ince serbest duvar kolayca kavranmalıdır.</li>
		<li>P7'den daha genç fareler için, Ünite 2'yi bir mikromanipülatöre takın ve ünitenin iğne ucunu yukarıda manipülatör kullanarak açıklandığı şekilde PAT'e takın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Yavaşça her iki büyük damarların etrafında gevşek dikiş sıkın ve doğal bir dinlenme pozisyonuna kalp dönmek için adım 3.2 oluşturulan dikiş 8 cm uzunluğunda kesti. Kateter artık PAT içinde sıkıca sabitlenmiş.</li>
	<li>Perfusate sistemden çıkmak için izin vermek için kalbin sol auricle klip.</li>
	<li>Snp içeren şırıngayı (Ünite 1 veya Unit 2, boyuta bağlı) şırınga pompasına sabitleyin ve kanı yıkamak ve vaskülatürü maksimum olarak büyütmek için çözeltiyi 0,05 mL/dk oranında perfüzyonlayın. Kan/perfusat kırpılmış auricle ile çıkar. Perfusate net çalışana kadar perfüzyona devam edin (yetişkin bir farede ~200 μL, genç hayvanlar için daha az). NOT: Düşük viskoziteli PBS/SNP'yi perfüzyon yaparken, zamandan tasarruf amacıyla nispeten daha yüksek bir infüzyon oranı kullanılmıştır. Daha viskoz polimer bileşik aşırı dolum önlemek için daha yavaş bir oranda aşılanır, rüptür, ve distal uç noktaları üzerinde kontrolü maksimize.</li>
</ol>4. Trakeostomi ve akciğer şişmesi
<ol><li>Akciğer şişirme ünitesini oluşturmak (Şekil 2).<ol>
<li>Esnek bir plastik 24 G intravenöz (IV) kateter (iğne kaldırıldı)/kelebek infüzyon açık bir 50 mL şırınga (hiçbir piston) bağlı bir stopcock için ayarlayın. Şırıngayı bir yüzük standına as.</li>
		<li>Şırıngaya %10 tamponlu formalin ekleyin. Stopcock'u açın, formalinin boruya girmesini ve sistemdeki tüm havayı temizlemesine izin verin. Stopcock kapatın ve menisküs kadar şırınga yükseltmek20trakea üzerinde cm 8 . DİkKAT: Formalin yanıcı, kanserojen, yutulduğunda akut toksiktir ve cilt tahrişine, ciddi göz hasarına, cilt hassasiyetine ve germ hücre mutajenitasyonuna neden olur. Yutma ve cilt ve gözler ile temas kaçının. Buhar veya sis teneffüs kaçının. Ateşleme kaynaklarından uzak durun. Uygun kişisel koruyucu ekipman giyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>2-4 mm ayrı krikoid kıkırdak aşağı iki gevşek dikiş yerleştirin.</li>
	<li>Makas kullanarak, krikotiroid ligament dikişüstün küçük bir kesi yapmak.</li>
	<li>IV kateteri açıklığa yerleştirin ve ucu iki gevşek sütürden öteye doğru ilerletin.</li>
	<li>Nefes borusu çevresindeki dikişleri sıkın ve stopcock açın. Formalin yerçekimi ile akciğerlere girmek için izin verin ve akciğerler in tamamen şişirmek için 5 dakika bekleyin. Akciğerler enflasyon sırasında göğüs kafesine yapışırsa, göğüs kafesinin dışını künt uçlu pütürlülerle tutarak lobların serbest çıkmasına yardımcı olmak için her yöne doğru hareket edin. Akciğerlerle doğrudan temas etmeyin.</li>
	<li>5 dakika sonra, ilk dikiş ve ligate ötesinde IV kateter geri. İkinci dikiş için tekrarlayın. Akciğerler artık kapalı ve basınçlı bir durumda şişirilmiş durumda.</li>
</ol>5. Vaskülatür döküm
<ol><li>1,5 mL'lik bir tüpte, iyi karıştırmasağlamak için8 polimer:diluent:kür maddesi 8'in in1 mL'sini hazırlayın ve birkaç kez hafifçe ters çevirin.</li>
	<li>1 cc şırıngadan pistonu çıkarın, eldivenli bir parmakla karşı ucunu kapatın ve polimer bileşiği şırınganın içine dökün. Dikkatlice piston yeniden, ters ve tüm hava kaldırmak ve şırınga ucunda bir menisküs oluşturmak için piston ilerlemek.</li>
	<li>SNP/PBS şırıngını iğnenin göbeğinden çıkarın ve menisküs oluşturmak için hub'a ek PBS damlatın. Dikkatle sıkışmış hava için merkezi kontrol edin, gerekirse yerinden, ve menisküs reform. Polimer bileşiği ile dolu şırınga için hub katılın. NOT: Her iki uçta da menisküs oluşturmak havanın sisteme girme şansını önemli ölçüde azaltır.</li>
	<li>Polimer bileşik dolu şırınga pompasına takın ve 0,02 mL/dk'da aşılayın. NOT: Daha küçük akciğerler için, daha yavaş bir hız aşırı dolgu önlemek için yararlı olabilir ama, gerekli değildir.</li>
	<li>PE tüpünden aşağı doğru hareket ederken bileşiği izleyin ve PAT'e girerken şırınga hacmine dikkat edin. Tüm loblar kılcal damar seviyesine tamamen dolana kadar doldurmaya devam edin ve şırınga pompasını durdurun. Şırınga hacmini tekrar kontrol edin. NOT: Birkaç çalıştırmadan sonra yaklaşık bir bitiş noktasını ölçmek için tahmini hacim kullanılabilir (yetişkin bir fare için ~35 μL ve P1 yavrusu için ~5 μL). Pompa durdurulduktan sonra, sistemdeki artık basınç polimer bileşiği pulmoner arterlere itmeye devam edecektir. Tüm akciğer lobları benzer bir oranda doldurmak gerekir.</li>
	<li>Bir fiber optik temizleme mendil ile akciğerleri kaplayın, liberal PBS uygulamak, ve karkas oda sıcaklığında 30-40 dakika boyunca rahatsız edilmeden oturmasını bekleyin. Bu dönemde, polimer bileşik tedavi ve sertleşir.</li>
	<li>Kateteri çıkarın, farenin kollarını/alt yarısını ayırın ve baş/toraksı bir gecede %10 tamponlu formalin ile dolu 50 mL konik konik bir yere yerleştirin.</li>
	<li>Fiksasyondan sonra, nefes borusunu kavrayın ve kalp/akciğer ünitesini kalan göğüs kafesi ve torakstan yavaşça ayırın. Kalp/akciğer bloğunu formalin dolu bir sintillasyon şişesine yerleştirin. Gerisini at.</li>
</ol>6. Döküm için alternatif vasküler yataklar (Tablo 1)
NOT: Her hedef vasküler yatak farklı kateter yerleşimleri, infüzyon oranları ve optimal dolum süreleri gerektirebilir. Böylece, birden fazla hayvan birden fazla organ atmak için gerekli olacaktır.
<ol><li>Sistemik vasküler yataklar için yukarıdaki gibi 1.1-2.5 adımlarını takip edin. Portal sistemi ve diyafram ek notlar bakınız (Tablo 1).</li>
	<li>Bir hemostat ile ksifoid süreci kavramak ve iki taraflı göğüs kafesi kesti (kabaca midaxillary line) hemen önce iç torasik arterler.</li>
	<li>Hayvanın boynuna/kafasına dayanarak göğüs boşluğunu tamamen açığa çıkaracak şekilde hala bağlı olan göğüs kafesini katlayın.</li>
	<li>Yukarıdaki adım 3.1 izleyin, sonra akciğerleri çıkarın. Torasik aort (TA) görünür olduğunda, diyaframdan ~10 mm daha üstün olan kavisli çöplerin uçlarını altına bağla. 7-0 ipek 3 cm uzunluğunda kavramak, TA altında açıklık geri çekin ve tek atış gevşek dikiş oluşturun. Diyaframın ~8 mm üzerinde bu işlemi tekrarlayın.</li>
	<li>Diyaframdan üstün yapılar için, TA'nın ventral kısmında küçük bir delik (toplam çevrenin ~%30'u) oluşturmak için yay makası kullanın, 6.4 adımda yerleştirilen gevşek dikişlere ~2 mm daha düşük.<ol>
<li>Diyafram aşağı yapılar için, bunun yerine, gevşek dikişler ~ 2 mm üstün küçük bir delik oluşturun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hayvan boyutuna bağlı olarak, Ünite 1 veya 2'yi gemiye tanıtınız, gevşek dikişlerin ötesine ilerleyin ve kabı nazikçe hafifçe initin.</li>
	<li>Şırınga pompasını 1,0 mL/dk hızında ayarlayarak ve en az 5 mL perfüzyon la ilgili olarak 3.7 adımını takip edin. Perfusate IVC üzerinden çıkacak.</li>
	<li>İnfüzyon oranını 0,05 mL/dk'ya ayarlayarak hedef dokuyu gerçek zamanlı olarak görsel olarak izleyerek 5.1 - 5.4 adımlarını takip edin. NOT: İnfüzyon hacmi organ ve hayvan yaşına özgü olacaktır. Hacim daha da hedef olmayan vasküler yatak (yani, beyin, karaciğer, böbrek, bağırsak) yol arteriyel dalları ligating ile sınırlı olabilir.</li>
	<li>5.6'yı takip edin ve hedef dokuyu çıkarın ve formalin yerleştirin.</li>
</ol>7. Mikro-BT için numune montajı, taraması ve rekonstrüksiyonu
<ol><li>Parafin film kullanarak, tarama yatağında düz bir yüzey oluşturun ve ıslak numuneyi bu yüzeye ortalayın(Şekil 3A). NOT: Hareket artifakı algılanırsa, örnek daha fazla sabitleme gerektirebilir.</li>
	<li>Dehidratasyon önlemek için ek parafin film ile hafifçe çadır / kapak örnek. Dokuda deformasyona neden olan numunenin parafin filmini dinlenmemeye özel özen gösterirler(Şekil 3B).</li>
	<li>Tablo 2'de özetlenen ayarları kullanarak örneği tarayıp bu parametreleri belirli bir denemede standartlaştırın. NOT: Bu deneme/uç nokta bağlıdır. Örnekler arasında karşılaştırma kolaylığı için seçilen parametreleri standartlaştırın.</li>
	<li>Yeniden yapılanttırılanın işleme ve analiz sonrası taramalarını aktarın.</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Düzgün bir şekilde yürütülen bu yöntem, pulmoner arterağlarının çarpıcı görüntülerini vererek kemirgen modellerinde karşılaştırma ve deney emaresi sağlar. Yol boyunca birkaç kritik adım başarıyı sağlar. İlk olarak, müfettişler akciğer vaskülatür ve kalp odalarında oluşan kan pıhtıları önlemek için hazırlık aşamasında hayvan heparinize gerekir. Bu polimer bileşiğin tam arteriyel transit sağlar. İkinci olarak, diyafram delinme ve göğüs kafesi çıkarmadan, yanlışlıkla hasar, kesik ler veya yaralanmalara karşı akciğerleri kor...

Bu tekniğin odak noktası farelerde polimer bazlı bir bileşik kullanılarak pulmoner arter mimarisinin görselleştirilmesidir. Beyin, kalp ve böbrek1,2,,3,4,5gibi sistemik vasküler yataklarda kapsamlı çalışmalar yapılırken, pulmoner arter ağının hazırlanması ve doldurulması ile ilgili daha az bilgi mevcuttur. Bu çalışmanın amacı, bu nedenle, önceki çalışma6üzerine genişletmek için,7,8 ve araştırmacılar kolayca pulmoner arter ağacının yüksek çözünürlüklü görüntüleri üretmek için takip edebilirsiniz ayrıntılı bir yazılı ve görsel referans sağlamaktır.
Manyetik rezonans görüntüleme, ekokardiyografi veya BT anjiyografi9,,10gibi akciğer vaskülatürünün etiketlenmesi ve görüntülenmesi için çok sayıda yöntem mevcut olmakla birlikte, bu yöntemlerin çoğu küçük damarları yeterince doldurup/veya yakalayamamaktadır, incelenebilenin kapsamını sınırlandırmaktadır. Seri kesit ve rekonstrüksiyon gibi yöntemler yüksek çözünürlük sağlar, ancak zaman/emek yoğun11,12,13. Çevreleyen yumuşak doku bütünlüğü geleneksel korozyon döküm10,13,,14,15,16tehlikeye girer. Hatta hayvan yaşı ve boyutu bir kateter tanıtmak için çalışırken faktörler haline ya da, çözünürlük eksiktir. Polimer enjeksiyon tekniği, diğer taraftan, kapiller seviyesine arterler doldurur ve μCT ile kombine edildiğinde, benzersiz çözünürlüksağlar 5. Doğum sonrası 14.8 Bunlar süresiz olarak yeniden taranabilir, hatta mevcut yumuşak doku17ödün vermeden histolojik hazırlık / elektron mikroskobu (EM) için gönderilebilir. Bu yöntemin ana sınırlamaları CT ekipman / yazılım ön maliyet, doğru intravasküler basınç izleme ile zorluklar, ve aynı hayvan uzunlamasına veri elde etmek için yetersizlik vardır.
Bu makale, pulmoner arter enjeksiyon tekniğini daha da optimize etmek ve yaş/boyutla ilgili sınırları doğum sonrası 1 (P1) gününe kadar itmek ve çarpıcı sonuçlar elde etmek için mevcut çalışmalara dayanmaktadır. Arteriyel damar ağlarını incelemek isteyen ekipler için en yararlıdır. Buna göre, kateter yerleştirme/stabilizasyonu, dolgu hızı/hacmi üzerinde daha fazla kontrol sağlamakta ve artan döküm başarısı için önemli tuzakları vurgulamaktadırk. Elde çıkan dökümler daha sonra gelecekteki karakterizasyon ve morfolojik analiz için kullanılabilir. Belki de daha da önemlisi, bu ilk görsel gösteri, bizim bilgimize göre, bu karmaşık prosedür ile kullanıcı yürür.

<table><tbody><tr><td>1cc şırınga</td><td>Becton Dickinson</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>20ml Cam Sintilasyon Şişeleri</td><td>Fisher</td><td>03-340-25P</td><td></td></tr><tr><td>30G İğne</td><td>Becton Dickinson</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>50mL konik tüpler</td> Örnek <td>Depolama ve tarama için</td><td>Cornin</td><td>352098</td></tr><tr><td>60cc şırınga</td><td>Becton Dickinson</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>7-0 ipek sütür</td><td>Teleflex</td><td>103-S</td><td></td></tr><tr><td>Analiz 12.0 Yazılım</td><td>AnalyzeDirect Inc.</td><td>N/A</td><td>Birincil Yazılım</td></tr><tr><td>Amira 6.7 Yazılım</td><td>Thermo Scientific</td><td>N/A</td><td>Alternatif Yazılım</td></tr><tr><td>CeramaCut Makas 9cm</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>14958-09</td><td></td></tr><tr><td>Seramik Kaplı Kavisli Forseps</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>11272-50</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Tankı</td><td>Robert's Oxygen Co.</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Çift şırınga pompası</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-74900-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Mini-Forseps</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>11200-14</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Pharmco</td><td>111000200</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Sigma - Yaşam Bilimleri</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Gazlı Bez</td><td>Covidien</td><td>441215</td><td></td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>13013-14</td><td></td></tr><tr><td>Heparin (1000USP Birim / ml)</td> <td>Hospira</td><td>NDC 0409-2720-01</td><td></td></tr><tr><td>Horos Yazılımı</td><td>Horos Projesi</td><td>N/A</td><td>Alternatif Yazılım</td></tr><tr><td>İndüksiyon Odası</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Fisher</td><td>06-666</td><td>fiber optik temizleme mendili</td></tr><tr><td>Etiketleme Bandı</td><td>Fisher</td><td>15966</td><td></td></tr><tr><td>Manyetik Taban</td><td>Kanetec</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-CT sistemi</td><td>PerkinElmer</td><td>Quantum GX</td><td></td></tr><tr><td>Microfil (Polimer Bileşik)</td><td>Flowech Inc.</td><td>Kit B - MV-122</td><td>8 oz. MV bileşiği; 8 oz. seyreltici; MV-Kürleme Ajanı</td></tr><tr><td>Mikromanipülatör</td><td>Çalma</td><td>56131</td><td></td></tr><tr><td>Monoject 1/2 ml İnsülin Şırınga</td><td>Covidien</td><td>1188528012</td><td></td></tr><tr><td>Sekizgen Forseps Düz Dişler</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>11042-08</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis şirketi, Inc.</td><td></td><td></td>#PM999</tr><tr><td>PE-10 boru</td><td>Instech</td><td>BTPE-10</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu Salin</td><td>BioRad</td> <td># 161-0780</td><td></td></tr><tr><td>Halka Standı</td><td>Fisher</td><td>S13747</td><td>Yükseklik 24 inç.</td></tr><tr><td>Sodyum Nitroprussid</td><td>sigma</td><td>71778-25G</td><td></td></tr><tr><td>Çelik Levha</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>16 x 16 inç alan, 1/16 inç kalınlığında</td></tr><tr><td>Düz Yaylı Makas</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>SURFLO 24G Teflon IV Kateter</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji</td><td>360103</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Tahta</td><td>Fisher</td><td>12-587-20</td><td>Bu dönüştürülmüş bir slayt tutucudur</td></tr><tr><td>Üniversal 3 uçlu kelepçe</td><td>Fisher</td><td>S24280</td><td></td></tr><tr><td>Kanatlı Inf. Set 25X3 / 4, 12 "Boru</td><td>Nipro</td><td>PR25G19</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Stemi-508 Diseksiyon Kapsamı</td><td>Zeiss</td><td>n/a</td><td></td></tr></tbody></table>

mikro-bt görüntüleme için erişkin ve erken postnatal fare akciğerlerinin vasküler döküm

Vascular Casting of Adult and Early Postnatal Mouse Lungs for Micro-CT Imaging

Kan damarları 3 boyutlu uzayda karmaşık ağlar oluştururlar. Sonuç olarak, vasküler ağların bir dokunun yüzeyini gözlemleyerek nasıl etkileştiğini ve nasıl etkileştiğini görsel olarak anlamak zordur. Bu yöntem akciğerin karmaşık 3 boyutlu vasküler mimarisini görselleştirmek için bir araç sağlar.
Bunu başarmak için pulmoner artere bir kateter yerleştirilir ve vaskülatür aynı anda kandan atılır ve direnci sınırlamak için kimyasal olarak genişlenir. Akciğerler daha sonra standart bir basınçta trakea ile şişirilir ve polimer bileşik standart bir akış hızında vasküler yatağa aşılanır. Tüm arteriyel ağ doldurulduktan ve tedavisine izin verildikten sonra, akciğer vaskülatürü doğrudan görüntülenebilir veya mikro-CT (μCT) tarayıcıda görüntülenebilir.
Başarılı bir şekilde yapıldığında, erken doğum sonrası yaşlardan erişkinlere kadar farelerde pulmoner arteriyel ağ takdir edebilirsiniz. Ayrıca pulmoner arter yatağında gösterildiği gibi, bu yöntem optimize edilmiş kateter yerleşimi ve uç noktaları ile herhangi bir vasküler yatak uygulanabilir.

Başarılı bir döküm tüm pulmoner arter ağının düzgün dolgu sergileyecek. Bunu yaşolarak değişen C57Bl/6J farelerde gösteriyoruz: Doğum sonrası gün P90 (Şekil 4A), P30 (Şekil 4B), P7 (Şekil 4C), P1(Şekil 4D). Akış hızının kontrol edilerek ve dolgunun gerçek zamanlı olarak görsel olarak izlenmesi yle, en distal vaskülatürün güvenilir uç noktaları elde edilmiştir<strong clas...

Bu tekniğin amacı, erken postnatal ve erişkin farelerin pulmoner arter ağlarının akciğer şişmesi yoluyla ex vivo görselleştirilmesi ve pulmoner arter yoluyla radyoopak polimer bazlı bileşiğin enjeksiyonudur. Döküm dokular için potansiyel uygulamalar da tartışılmıştır.

Mikro-BT Görüntüleme için Erişkin ve Erken Postnatal Fare Akciğerlerinin Vasküler Döküm

Blood vessels form intricate networks in 3-dimensional space. Consequently, it is difficult to visually appreciate how vascular networks interact and ...

Bu protokol, hem erişkin hem de erken doğum sonrası farelerde pulmoner arteriyel vaskülatür inat için hassas, adım adım rehberlik sağlar. Bu teknik, kullanıcıların yumuşak doku bütünlüğünü korurken mikro-BT de dahil olmak üzere çeşitli yöntemlerle tüm vasküler ağı görselleştirme için tam olarak atmalarını sağlar. Bu teknik özellikle pulmoner-vasküler morfoloji ve mimari bakmak için yararlıdır, ancak kolayca diğer vasküler yatak hedefleme için adapte edilebilir.Birçok ameliyat ve diseksiyon gibi, aslında bir prosedür görselleştirme nin yerini hiçbir şey tutamaz ve izleyiciler daha zorlu manevraların gerçekleştirildiğini görmekten fayda lanabilirler. Ksifoid işlemi ortaya çıktıktan sonra, göğüs kafesini hafifçe kavrayın ve yükseltin. Dikkatlice şimdi maruz, yarı saydam diyafram bir kesi yapmak.Akciğerler gözle görülür bir şekilde çökecek ve diyaframdan uzaklaşacak. Akciğer ve trakea açığa sonra, iplik 15 santimetre PE10 boru 30-gauge iğne nin merkezine. Ve bu üniteyi PBS'deki 4 azı lı sodyum nitroprusside'a 10 tane içeren bir mililitrelik şırıngaya bağla.Tüm hava temizlenmeden önce tüpü asal hale getirmek için pistonu ilerletin. Metne etkili bir alternatif olarak, bir tarafta kalbin apeks nüfuz ve kas yoluyla eğri forseps uçlarını geçmek, ve dokunun diğer tarafında dışarı. 7-0 ipek 10 santimetre uzunluğunda bir ucunu kavramak ve doku üzerinden yaklaşık iki santimetre çekin.Dikiş ten sonra, caudally kalp çekmek için dikiş kalan sekiz santimetre kullanın. Dikişin ucunu da cerrahi tahtaya bantla. Kanca yükselen aort ve pulmoner arter gövde altında kavisli forseps ipuçları.Ve tek atışgevşek dikiş oluşturmak için açılış yoluyla 7-0 ipek üç santimetre uzunluğunda geri çekin. İnce duvarlı sağ ventrikül nüfuz, kalbin apeks doğru bir-iki milimetrelik kesi yapmak için makas kullanın. Ve astarlı tüpü sağ ventriküle tanıtıp kateteri hafifçe yarı saydam, ince duvarlı pulmoner arter gövdesine doğru ilerletin.Kateterin sol veya sağ pulmoner dallara ilerlemediğini ve pulmoner arter dal noktasına girmediğini görsel olarak doğrulayın. Cerrahi tahtaya tüpün distal kısmını bantlayın ve her iki büyük damarın etrafındaki gevşek sütürü hafifçe sıkın. Kalbi doğal bir istirahat pozisyonuna döndürmek için sekiz santimetrelik sütür parçasını kesin.Ve perfusate vaskülatür çıkmak için izin vermek için kalbin sol kahin klip. Sonra, bir şırınga pompası kullanın, bir 0.5 ml / dk akış hızı hem kan floş için sodyum nitroprusside aşılamak için, ve maksimum vaskülatür dilate, perfusat ekadar açık çalışır. Akciğer şişirme ünitesini oluşturmak için esnek plastik 24-gauge intravenöz kateteri bir küvetten kesin ve kelebek infüzyon seti iğnesine bağlayın.Bu üniteyi stopcock'a takın ve stopcock'u 50 mililitrelik açık bir şırıngaya takın. Şırıngayı formalin ile yükledikten ve kateteri astarladıktan sonra, stopcock kapalıyken, şırıngayı bir halka standında, menisküsün trakeanın 20 santimetre yukarısında olduğu noktaya yerleştirin. Iki gevşek dikiş yerleştirin, iki ila dört milimetre arayla, krikoid kıkırdak aşağı, ve krikotiroid ligament küçük bir kesi yapmak için makas kullanın, dikişüstün.Kateteri açıklığa takın ve ucu iki gevşek sütürden öteye doğru ilerletin. Nefes borusu çevresindeki dikişleri sıkın ve formalinin yer çekimi ile akciğerlere girmesini sağlamak için stopcock'u açın. Akciğerlerin tamamen şişmesi için beş dakika bekleyin.Akciğerler enflasyon sırasında göğüs kafesine yapışırsa, göğüs kafesinin dışını kavramak için künt uçlu çerpler kullanın ve akciğerlerle doğrudan temas etmeden lobların serbest çıkmasına yardımcı olmak için kaburgaları her yöne doğru hareket ettirin. Beş dakika sonra, ilk dikiş ve ligate arkasında kateteri geri çek. Sonra ikinci dikiş arkasında kateteri geri ve ligate.Akciğerler artık kapalı ve basınçlı bir şekilde şişirilmeli. Vaskülatür döküm için, bir mililitre polimer dilüent kür ajan 8-1-1 çözeltisi bir mililitre yük bir mililitre şırınga içine. Ve dikkatlice piston takın.Şırınga ters çevrilmiş, havakaldırmak için piston depress, ve şırınga ucunda bir menisküs oluşumunu sağlamak için. İğnenin göbeğinden sodyum nitroprusside şırınga çıkarın ve bir menisküs oluşturmak için, hub içine ek PBS damla. Polimer-bileşik şırınganın hub'ına katılın ve infüzyonu dakikada 0,02 milimetreden başlatın.Pulmoner arter gövdesine girerken şırınga hacmini belirterek, tüpün içinden serbestçe geçerken bileşiği izleyin. Tüm loblar tamamen dolana kadar profüzyon devam edin, aşağı küçük damar. Pompayı durdurun ve bir kez daha şırınga hacmine dikkat edin.Bir fiber optik temizleme mendil ile akciğerleri kaplayın ve liberal PBS uygulayın. Numunenin oda sıcaklığında 30 ila 40 dakika bozulmadan oturmasına izin verin. Polimer bileşik tedavi ve sertleştirilmiş sonra, uzuvları ve farenin alt yarısı kesin.Ve baş ve toraks 50 mililitrekonik dolu içine yerleştirin 10% tamponlu formalin, bir gecede. Ertesi sabah, yavaşça kalan göğüs kafesi ve toraks kalp ve akciğer birimi ayırmak için nefes trakea kavramak. Hasat edilen doku bloğunu formalin dolu bir ışıltı lı şişeye yerleştirin.Başarılı bir döküm tüm pulmoner arter ağının tek tip dolum neden olacaktır. Akciğer veya akciğer hava yollarında hasar varsa, küçük sızıntılar basınç tutan akciğerleri önleyecektir. Yamalı veya eksik dolum, kateter aracılığıyla damar sistemine giren havanın, bileşiğin aşağı akışını engellemesi sonucu bir hava kilidinden kaynaklanabilir.Underfilling çok az bileşik vaskülatür içine tanıtıldı oluşur. Alternatif olarak, aşırı doldurma, ya da çok hızlı bir şekilde çok fazla polimer bileşik tanıtılması, arteriyel rüptürneden olabilir, ya da, daha yaygın olarak, venöz transit. Kateteri pulmoner gövdeden çok aşağıya doğru ilerletmek ucun bir pulmoner arter dalına girmesine neden olabilir, akışta bir dengesizlik oluşturabilir ve bir tarafın diğerinden daha hızlı dolmasına neden olabilir.Tekniğin gösterildiği gibi dikkatli bir şekilde ifa edilebildiği gibi, distal vaskülatür uç noktalarının uygun doğrudan izlenmesi ve standart infüzyon oranları pulmoner vaskülatüroptimal dolgu ile sonuçlanabilir. Ayrıca, sistemik vaskülatür bu tekniğiadapte diğer vasküler yatakeşit olumlu sonuçlar verebilir. Dökümden sonra, numuneler mikro bilgisayarlı tomografi taraması için işlenebilir.Post-processing için, ticari bir yazılım paketi pulmoner vasküler ağaç bir 3D hacim render oluşturmak için kullanılabilir. Bu tekniği ilk kez denerken, özellikle kırılgan akciğerler ve pulmoner arter çevresinde dikkatli olun. En önemlisi, vasküler devre içine hava girmesini önlemek.Başarılı bir döküm sonrasında, bir örnek mikro-BT ile taranabilir ve vasküler morfometri ve mimari içeren sorular araştırılabilir.

vascular-casting-adult-early-postnatal-mouse-lungs-for-micro-ct

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

MicroCT tarafından Kontrastlı küçük hayvan damar görüntüleme seri için hızlı, düşük maliyetli ve yüksek verimli...

Kontrast Geliştirilmiş Gemi Görüntüleme MicroCT kullanarak

Tahribatsız ses görselleştirme sadece x-ray mikro bilgisayarlı tomografi (BT) en verimli olduğu tomografi teknikleri ile elde edilebilir.

Yüksek Çözünürlüklü 3D Görüntüleme Ex-Vivo Biyolojik örnekler Micro CT

Bu makalede, biz gerçekleştirmek için kolay ve görüntü yetişkin fare beyin damar ağacı kullanılabilir serebrovasküler döküm için basit ve pratik bir tekniği mevcut.

3D Görüntüleme ve Morfolojik Analizi Yetişkin Mouse Serebrovasküler Döküm

X-ışını görüntüleme teknolojisini kullanarak yenidoğan fare akciğerindeki alveolar sıvı klerensi veya pulmoner ödem oranını değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Yenidoğan Fare Akciğer Akciğer Akışkan Ciltler Gerçek zamanlı X-ışını görüntüleme

Mikro bilgisayarlı tomografi kullanarak bir adenokarsinom fare modelinin akciğerlerinde tümör nodülü gelişiminin saptanması için bir yöntem ve bunun zaman içinde ve tedaviye yanıt olarak nodül boyutundaki değişiklikleri izlemek için kullanımını açıklıyoruz. Değerlendirmenin doğruluğu son nokta histolojik kantizasyonu ile doğrulandı.

Tümör Gelişim Değerlendirme Mikro bilgisayarlı Tomografi ile ve Takibi Tedavi Yanıtın Akciğer Kanseri Fare Modeli

Biz bir non-invaziv multimodal bleomycin Çift Kişilik boğaza korumak tarafından indüklenen fare akciğer fibrozis modelinin boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı yaklaşım Imaging tanımlamak.

Yaklaşım Imaging Multimodal Bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis farelerde boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı

Burada, meme blastema oluşumu ve Intramembranous ossifikasyon araştırmak için yetişkin fare terminali falanks amputasyon bir protokol sunuyoruz, floresan immünhistokimya ve sıralı in-vivo MİKROBİLGİSAYARLI tomografi ile analiz.

Yetişkin fare basamak amputasyon ve rejenerasyonu: Mammalin Blastema oluşumu ve Intramembranous ossifikasyon araştırmak için basit bir model

Burada, akciğerin yüksek çözünürlüklü, intravital görüntülemesini sağlayan murine toraks için kalıcı olarak indwelling optik pencerenin cerrahi implantasyonu için bir protokol sunuyoruz. Pencerenin kalıcılığı, akciğerdeki dinamik hücresel süreçlerin, özellikle de yayılan tümör hücrelerinin metastatik ilerlemesi gibi yavaş gelişen süreçlerin incelenmesine çok uygun hale getirir.

Akciğere Kanser Metastazını Araştırmak İçin Kalıcı Bir Pencere

Çift reçine döküm mikro hesaplamalı tomografi veya DUCT, organ mimarisinin 3D analizini kolaylaştırmak için aynı anda iki borulu sistemin görselleştirilmesini, dijitalleşmesini ve segmentasyonunu sağlar. DUCT, iki radyopak reçinenin ex vivo enjeksiyonunu ve ardından tomografik verilerin mikro bilgisayarlı tomografi taramasını ve segmentasyonunu birleştirir.

DUCT: Çift Reçine Dökümü ve ardından 3D Karaciğer Analizi için Mikro Bilgisayarlı Tomografi

Burada, lezyon tarafında intratrakeal damlatma yoluyla tek taraflı bleomisin ile indüklenen pulmoner fibrozis modelinde ventilasyon bölgelerini ölçmek için mikro-bilgisayarlı tomografi (mikro-BT) kullanan bir protokol sunuyoruz.

Preklinik Modellerde Pulmoner Fibrozisin Gelişmiş Değerlendirmesi için Mikro-BT Kullanılarak Tek Taraflı Akciğer Hacmi Analizi

Öğrenin, erişkin ve erken postnatal farelerde pulmoner arter vaskülatürünü dökümleme ve mikro-BT görüntüleme yöntemini. Bu teknik, yumuşak doku bütünlüğünü koruyarak vasküler morfolojiyi incelemek için kullanılır.

Mikro-BT Görüntüleme için Erişkin ve Erken Postnatal Fare Akciğerlerinin Vasküler Döküm

Daha fazla video keşfet