Mikro-BT Görüntüleme için Erişkin ve Erken Postnatal Fare Akciğerlerinin Vasküler Döküm

Bu protokol, hem erişkin hem de erken doğum sonrası farelerde pulmoner arteriyel vaskülatür inat için hassas, adım adım rehberlik sağlar. Bu teknik, kullanıcıların yumuşak doku bütünlüğünü korurken mikro-BT de dahil olmak üzere çeşitli yöntemlerle tüm vasküler ağı görselleştirme için tam olarak atmalarını sağlar. Bu teknik özellikle pulmoner-vasküler morfoloji ve mimari bakmak için yararlıdır, ancak kolayca diğer vasküler yatak hedefleme için adapte edilebilir.

Birçok ameliyat ve diseksiyon gibi, aslında bir prosedür görselleştirme nin yerini hiçbir şey tutamaz ve izleyiciler daha zorlu manevraların gerçekleştirildiğini görmekten fayda lanabilirler. Ksifoid işlemi ortaya çıktıktan sonra, göğüs kafesini hafifçe kavrayın ve yükseltin. Dikkatlice şimdi maruz, yarı saydam diyafram bir kesi yapmak.

Akciğerler gözle görülür bir şekilde çökecek ve diyaframdan uzaklaşacak. Akciğer ve trakea açığa sonra, iplik 15 santimetre PE10 boru 30-gauge iğne nin merkezine. Ve bu üniteyi PBS'deki 4 azı lı sodyum nitroprusside'a 10 tane içeren bir mililitrelik şırıngaya bağla.

Tüm hava temizlenmeden önce tüpü asal hale getirmek için pistonu ilerletin. Metne etkili bir alternatif olarak, bir tarafta kalbin apeks nüfuz ve kas yoluyla eğri forseps uçlarını geçmek, ve dokunun diğer tarafında dışarı. 7-0 ipek 10 santimetre uzunluğunda bir ucunu kavramak ve doku üzerinden yaklaşık iki santimetre çekin.

Dikiş ten sonra, caudally kalp çekmek için dikiş kalan sekiz santimetre kullanın. Dikişin ucunu da cerrahi tahtaya bantla. Kanca yükselen aort ve pulmoner arter gövde altında kavisli forseps ipuçları.

Ve tek atışgevşek dikiş oluşturmak için açılış yoluyla 7-0 ipek üç santimetre uzunluğunda geri çekin. İnce duvarlı sağ ventrikül nüfuz, kalbin apeks doğru bir-iki milimetrelik kesi yapmak için makas kullanın. Ve astarlı tüpü sağ ventriküle tanıtıp kateteri hafifçe yarı saydam, ince duvarlı pulmoner arter gövdesine doğru ilerletin.

Kateterin sol veya sağ pulmoner dallara ilerlemediğini ve pulmoner arter dal noktasına girmediğini görsel olarak doğrulayın. Cerrahi tahtaya tüpün distal kısmını bantlayın ve her iki büyük damarın etrafındaki gevşek sütürü hafifçe sıkın. Kalbi doğal bir istirahat pozisyonuna döndürmek için sekiz santimetrelik sütür parçasını kesin.

Ve perfusate vaskülatür çıkmak için izin vermek için kalbin sol kahin klip. Sonra, bir şırınga pompası kullanın, bir 0.5 ml / dk akış hızı hem kan floş için sodyum nitroprusside aşılamak için, ve maksimum vaskülatür dilate, perfusat ekadar açık çalışır. Akciğer şişirme ünitesini oluşturmak için esnek plastik 24-gauge intravenöz kateteri bir küvetten kesin ve kelebek infüzyon seti iğnesine bağlayın.

Bu üniteyi stopcock'a takın ve stopcock'u 50 mililitrelik açık bir şırıngaya takın. Şırıngayı formalin ile yükledikten ve kateteri astarladıktan sonra, stopcock kapalıyken, şırıngayı bir halka standında, menisküsün trakeanın 20 santimetre yukarısında olduğu noktaya yerleştirin. Iki gevşek dikiş yerleştirin, iki ila dört milimetre arayla, krikoid kıkırdak aşağı, ve krikotiroid ligament küçük bir kesi yapmak için makas kullanın, dikişüstün.

Kateteri açıklığa takın ve ucu iki gevşek sütürden öteye doğru ilerletin. Nefes borusu çevresindeki dikişleri sıkın ve formalinin yer çekimi ile akciğerlere girmesini sağlamak için stopcock'u açın. Akciğerlerin tamamen şişmesi için beş dakika bekleyin.

Akciğerler enflasyon sırasında göğüs kafesine yapışırsa, göğüs kafesinin dışını kavramak için künt uçlu çerpler kullanın ve akciğerlerle doğrudan temas etmeden lobların serbest çıkmasına yardımcı olmak için kaburgaları her yöne doğru hareket ettirin. Beş dakika sonra, ilk dikiş ve ligate arkasında kateteri geri çek. Sonra ikinci dikiş arkasında kateteri geri ve ligate.

Akciğerler artık kapalı ve basınçlı bir şekilde şişirilmeli. Vaskülatür döküm için, bir mililitre polimer dilüent kür ajan 8-1-1 çözeltisi bir mililitre yük bir mililitre şırınga içine. Ve dikkatlice piston takın.

Şırınga ters çevrilmiş, havakaldırmak için piston depress, ve şırınga ucunda bir menisküs oluşumunu sağlamak için. İğnenin göbeğinden sodyum nitroprusside şırınga çıkarın ve bir menisküs oluşturmak için, hub içine ek PBS damla. Polimer-bileşik şırınganın hub'ına katılın ve infüzyonu dakikada 0,02 milimetreden başlatın.

Pulmoner arter gövdesine girerken şırınga hacmini belirterek, tüpün içinden serbestçe geçerken bileşiği izleyin. Tüm loblar tamamen dolana kadar profüzyon devam edin, aşağı küçük damar. Pompayı durdurun ve bir kez daha şırınga hacmine dikkat edin.

Bir fiber optik temizleme mendil ile akciğerleri kaplayın ve liberal PBS uygulayın. Numunenin oda sıcaklığında 30 ila 40 dakika bozulmadan oturmasına izin verin. Polimer bileşik tedavi ve sertleştirilmiş sonra, uzuvları ve farenin alt yarısı kesin.

Ve baş ve toraks 50 mililitrekonik dolu içine yerleştirin 10% tamponlu formalin, bir gecede. Ertesi sabah, yavaşça kalan göğüs kafesi ve toraks kalp ve akciğer birimi ayırmak için nefes trakea kavramak. Hasat edilen doku bloğunu formalin dolu bir ışıltı lı şişeye yerleştirin.

Başarılı bir döküm tüm pulmoner arter ağının tek tip dolum neden olacaktır. Akciğer veya akciğer hava yollarında hasar varsa, küçük sızıntılar basınç tutan akciğerleri önleyecektir. Yamalı veya eksik dolum, kateter aracılığıyla damar sistemine giren havanın, bileşiğin aşağı akışını engellemesi sonucu bir hava kilidinden kaynaklanabilir.

Underfilling çok az bileşik vaskülatür içine tanıtıldı oluşur. Alternatif olarak, aşırı doldurma, ya da çok hızlı bir şekilde çok fazla polimer bileşik tanıtılması, arteriyel rüptürneden olabilir, ya da, daha yaygın olarak, venöz transit. Kateteri pulmoner gövdeden çok aşağıya doğru ilerletmek ucun bir pulmoner arter dalına girmesine neden olabilir, akışta bir dengesizlik oluşturabilir ve bir tarafın diğerinden daha hızlı dolmasına neden olabilir.

Tekniğin gösterildiği gibi dikkatli bir şekilde ifa edilebildiği gibi, distal vaskülatür uç noktalarının uygun doğrudan izlenmesi ve standart infüzyon oranları pulmoner vaskülatüroptimal dolgu ile sonuçlanabilir. Ayrıca, sistemik vaskülatür bu tekniğiadapte diğer vasküler yatakeşit olumlu sonuçlar verebilir. Dökümden sonra, numuneler mikro bilgisayarlı tomografi taraması için işlenebilir.

Post-processing için, ticari bir yazılım paketi pulmoner vasküler ağaç bir 3D hacim render oluşturmak için kullanılabilir. Bu tekniği ilk kez denerken, özellikle kırılgan akciğerler ve pulmoner arter çevresinde dikkatli olun. En önemlisi, vasküler devre içine hava girmesini önlemek.

Başarılı bir döküm sonrasında, bir örnek mikro-BT ile taranabilir ve vasküler morfometri ve mimari içeren sorular araştırılabilir.