Name: Optik lob görselleştirmesi için larva ve erişkin drosophila beyinlerinin diseksiyonu, immünohistokimyası ve montajı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 29 s
Description: Öğrenin, Drosophila larva ve erişkin beyinlerinin diseksiyonu, immünohistokimyası ve optik lob görselleştirmesi için üç farklı montaj stratejisi. Bu yöntem, sinirbilim araştırmalarında görüntüleme netliğini artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bsh antikorunun bir alikotunu bizimle paylaştığı için Claude Desplan'a teşekkür ederiz. DE-Cadherin, Dachshund, Eyes Absent, Seven-up ve Bruchpilot monoklonal antikorları, NIH'nin NICHD'si tarafından oluşturulan ve Iowa Üniversitesi, Biyoloji Bölümü, Iowa City, IA 52242'de tutulan Gelişimsel Çalışmalar Hibridoma Bankası'ndan elde edildi. Bu çalışma, T.E.'ye verilen bir NSERC Keşif Bursu ile desteklenmiştir. UA, NSERC Alexander Graham Bell Kanada Yüksek Lisans Bursu tarafından desteklenmektedir. PV, Ontario Yüksek Lisans Bursu tarafından desteklenmektedir.

<ol><li>Fischbach, K. -F., Dittrich, A. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+optic+lobe+of+Drosophila+melanogaster.+I.+A+Golgi+analysis+of+wild-type+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">The optic lobe of Drosophila melanogaster. I. A Golgi analysis of wild-type structure.</a> Cell Tissue Research. 258, (1989).</li>
<li>Hofbauer, A., Campos-Ortega, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation+pattern+and+early+differentiation+of+the+optic+lobes+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Roux%27s+Archives+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Proliferation pattern and early differentiation of the optic lobes in Drosophila melanogaster.</a> Roux's Archives of Developmental Biology. 198, 264-274 (1990).</li>
<li>Sanes, J. R., Zipursky, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+Principles+of+Insect+and+Vertebrate+Visual+Systems%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Design Principles of Insect and Vertebrate Visual Systems.</a> Neuron. 66, 15-36 (2010).</li>
<li>Nériec, N., Desplan, C. From the Eye to the Brain. Development of the Drosophila Visual System. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aN%C3%A9riec%2C+N+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22">Current Topics in Developmental Biology</a>. 116, Academic Press Inc. 247-271 (2016).</li>
<li>Apitz, H., Salecker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Challenge+of+Numbers+and+Diversity%3A+Neurogenesis+in+the+Drosophila+Optic+Lobe%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">A Challenge of Numbers and Diversity: Neurogenesis in the Drosophila Optic Lobe.</a> Journal of Neurogenetics. 28, 233-249 (2014).</li>
<li>Contreras, E. G., Sierralta, J., Oliva, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+strategies+for+the+generation+of+neuronal+diversity%3A+Lessons+from+the+fly+visual+system%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Novel strategies for the generation of neuronal diversity: Lessons from the fly visual system.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 12, 140(2019).</li>
<li>Erclik, T., Hartenstein, V., Lipshitz, H. D., McInnes, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+Role+of+the+Vsx+Genes+Supports+a+Monophyletic+Origin+for+Bilaterian+Visual+Systems%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Conserved Role of the Vsx Genes Supports a Monophyletic Origin for Bilaterian Visual Systems.</a> Current Biology. 18, 1278-1287 (2008).</li>
<li>Erclik, T., Hartenstein, V., McInnes, R. R., Lipshitz, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eye+evolution+at+high+resolution%3A+The+neuron+as+a+unit+of+homology%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Eye evolution at high resolution: The neuron as a unit of homology.</a> Developmental Biology. 332, 70-79 (2009).</li>
<li>Wu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+projection+neurons+in+the+Drosophila+lobula+link+feature+detection+to+distinct+behavioral+programs%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Visual projection neurons in the Drosophila lobula link feature detection to distinct behavioral programs.</a> eLife. 5, (2016).</li>
<li>Ngo, K. T., Andrade, I., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatio-temporal+pattern+of+neuronal+differentiation+in+the+Drosophila+visual+system%3A+A+user%27s+guide+to+the+dynamic+morphology+of+the+developing+optic+lobe%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Spatio-temporal pattern of neuronal differentiation in the Drosophila visual system: A user's guide to the dynamic morphology of the developing optic lobe.</a> Developmental Biology. 428, 1-24 (2017).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+patterning+of+Drosophila+medulla+neuroblasts+controls+neural+fates%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Temporal patterning of Drosophila medulla neuroblasts controls neural fates.</a> Nature. 498, 456-462 (2013).</li>
<li>Erclik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+temporal+and+spatial+patterning+generates+neural+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Integration of temporal and spatial patterning generates neural diversity.</a> Nature. 541, 365-370 (2017).</li>
<li>Apitz, H., Salecker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+region-specific+neurogenesis+mode+requires+migratory+progenitors+in+the+Drosophila+visual+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A region-specific neurogenesis mode requires migratory progenitors in the Drosophila visual system.</a> Nature Neuroscience. 18, 46-55 (2015).</li>
<li>Suzuki, T., Kaido, M., Takayama, R., Sato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+temporal+mechanism+that+produces+neuronal+diversity+in+the+Drosophila+visual+center%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">A temporal mechanism that produces neuronal diversity in the Drosophila visual center.</a> Developmental Biology. 380, 12-24 (2013).</li>
<li>Hara, Y., Sudo, T., Togane, Y., Akagawa, H., Tsujimura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+death+in+neural+precursor+cells+and+neurons+before+neurite+formation+prevents+the+emergence+of+abnormal+neural+structures+in+the+Drosophila+optic+lobe%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Cell death in neural precursor cells and neurons before neurite formation prevents the emergence of abnormal neural structures in the Drosophila optic lobe.</a> Developmental Biology. 436, 28-41 (2018).</li>
<li>Morante, J., Erclik, T., Desplan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration+in+Drosophila+optic+lobe+neurons+is+controlled+by+eyeless%2FPax6%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cell migration in Drosophila optic lobe neurons is controlled by eyeless/Pax6.</a> Development. 138, 687-693 (2011).</li>
<li>Millard, S. S., Pecot, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+assembling+columns+and+layers+in+the+Drosophila+visual+system%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Development%22%5BJournal%5D)">Strategies for assembling columns and layers in the Drosophila visual system.</a> Neural Development. 13, 1-17 (2018).</li>
<li>Takemura, S. Y., Lu, Z., Meinertzhagen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+circuits+of+the+Drosophila+optic+lobe%3A+The+input+terminals+to+the+medulla%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Synaptic circuits of the Drosophila optic lobe: The input terminals to the medulla.</a> Journal of Comparative Neurology. 509, 493-513 (2008).</li>
<li>Akin, O., Bajar, B. T., Keles, M. F., Frye, M. A., Zipursky, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-type-Specific+Patterned+Stimulus-Independent+Neuronal+Activity+in+the+Drosophila+Visual+System+during+Synapse+Formation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Cell-type-Specific Patterned Stimulus-Independent Neuronal Activity in the Drosophila Visual System during Synapse Formation.</a> Neuron. 101, 894-904 (2019).</li>
<li>Spratford, C. M., Kumar, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+immunostaining+of+imaginal+discs+from+drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Dissection and immunostaining of imaginal discs from drosophila melanogaster.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51792(2014).</li>
<li>Dokucu, M. E., Zipursky, S. L., Cagan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atonal%2C+rough+and+the+resoluton+of+proneural+clusters+in+the+developing+Drosophila+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Atonal, rough and the resoluton of proneural clusters in the developing Drosophila retina.</a> Development. 122, Cambridge, England. 4139-4147 (1996).</li>
<li>Hsiao, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+immunohistochemistry+of+larval%2C+pupal+and+adult+Drosophila+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments%22%5BJournal%5D)">Dissection and immunohistochemistry of larval, pupal and adult Drosophila retinas.</a> Journal of visualized experiments. , e4347(2012).</li>
<li>Kelly, S. M., Elchert, A., Kahl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+immunofluorescent+staining+of+mushroom+body+and+photoreceptor+neurons+in+adult+Drosophila+melanogaster+brains%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Dissection and immunofluorescent staining of mushroom body and photoreceptor neurons in adult Drosophila melanogaster brains.</a> Journal of Visualized Experiments. , e56174(2017).</li>
<li>Williamson, R. W., Hiesinger, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+developing+and+adult+Drosophila+brains+and+retinae+for+live+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of developing and adult Drosophila brains and retinae for live imaging.</a> Journal of Visualized Experiments. , e1936(2010).</li>
<li>Bertet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+patterning+of+neuroblasts+controls+notch-mediated+cell+survival+through+regulation+of+hid+or+reaper%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Temporal patterning of neuroblasts controls notch-mediated cell survival through regulation of hid or reaper.</a> Cell. 158, 1173-1186 (2014).</li>
<li>Pinto-Teixeira, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+Concurrent+Retinotopic+Maps+in+the+Fly+Motion+Detection+Circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Development of Concurrent Retinotopic Maps in the Fly Motion Detection Circuit.</a> Cell. 173, 485-498 (2018).</li>
<li>Plevock, D. A., Rusan, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+Imaging+of+Drosophila+Larval+Neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts.</a> Journal of Visualized Experiments. , e51756(2014).</li>
<li>Ting, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+dendritic+morphology+in+columns+and+layers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Analyzing dendritic morphology in columns and layers.</a> Journal of Visualized Experiments. , e55410(2017).</li>
<li>Özel, M. N., Langen, M., Hassan, B. A., Hiesinger, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filopodial+dynamics+and+growth+cone+stabilization+in+Drosophila+visual+circuit+development%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Filopodial dynamics and growth cone stabilization in Drosophila visual circuit development.</a> eLife. 4, (2015).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir mali çıkarları olmadığını beyan ederler.

Bu protokolde, larva ve yetişkin Drosophila beyinlerini immün olarak boyamak ve bunları çeşitli yönlerde monte etmek için bir yöntem tarif ediyoruz. Larva ve yetişkin beyinlerini boyama yöntemleri daha önce tanımlanmış olsa da 22,23,24,27,28, spesifik optik lob yapılarının optimal görselleştirilmesi için montaj stratejileri daha az dikkat çekmiştir <s...

Bileşik göz ve altta yatan optik lobdan oluşan Drosophila görsel sistemi, nöral devre gelişimi ve işlevinin incelenmesi için mükemmel bir model olmuştur. Son yıllarda, özellikle optik lob, nörojenez ve devre kablolaması gibi nörogelişimsel süreçleri incelemek için güçlü bir sistem olarak ortaya çıkmıştır 1,2,3,4,5,6,7,8. Dört nöropilden oluşur: lamina, medulla, lobüla ve lobüla plakası (son ikisi lobüla kompleksini oluşturur)1,2,3,4,5,6. Gözden gelen fotoreseptörler, görsel girdileri işleyen ve bunları lobüla kompleksi 1,2,3,4,5,6'nın nöropillerine ileten lamina ve medulla nöronlarını hedefler. Lobula kompleksindeki projeksiyon nöronları daha sonra merkezi beyindeki daha üst düzey işlem merkezlerine görsel bilgi gönderir 1,5,9. Retinotomiyi sürdürme ve farklı görsel uyaran türlerini işleme ihtiyacının gerektirdiği optik lobun karmaşık organizasyonu, onu karmaşık nöral devrelerin nasıl bir araya getirildiğini incelemek için çekici bir sistem haline getirir. Özellikle, medulla, omurgalı nöral devre gelişimi için uzun süredir bir model olan nöroretina ile hem organizasyonunda hem de gelişiminde çarpıcı benzerlikler paylaşır 3,8.
Optik lob gelişimi, embriyogenez sırasında, optik placode2,4,5,6,7,8'i oluşturan ~ 35 ektodermal hücrenin spesifikasyonu ile başlar. Larva yumurtadan çıktıktan sonra, optik plakod iki farklı primordiyaya ayrılır: 1) lamina ve dış medulla nöronlarını üreten dış proliferasyon merkezi (OPC) ve 2) iç medulla ve lobula kompleksinin nöronlarını üreten iç proliferasyon merkezi (IPC) 4,5,6,10. Geç ikinci instar larvada, OPC ve IPC'nin nöroepitel hücreleri, daha sonra ara ganglion ana hücreleri 4,5,11,12 yoluyla nöronlar üreten nöroblastlara dönüşmeye başlar. Optik lob nöroblastları, döllerinde nöral çeşitlilik oluşturmak için birlikte hareket eden uzamsal ve zamansal olarak kısıtlı transkripsiyon faktörleri tarafından modellenir 11,12,13,14. Pupada, optik lob nöropillerinin devreleri, programlanmış hücre ölümü11,15, nöronal göç12,16, aksonal/dendritik hedefleme10,17, sinaps oluşumu18,19 ve nöropil rotasyonları10,17 dahil olmak üzere çeşitli süreçlerin koordinasyonu yoluyla birleştirilir.
Burada, larva ve yetişkin beyinlerinin optik lobun görüntülenmesi için diseke edildiği, immün olarak boyandığı ve monte edildiği metodolojiyi açıklıyoruz. Karmaşık üç boyutlu organizasyonu göz önüne alındığında, optik lobun analizi, yetişkin nöropillerinin ve larva progenitörlerinin birbirlerine ve merkezi beyne göre nasıl konumlandırıldığını anlamayı gerektirir. Bu nedenle, montaj oryantasyonunun optik lob yapılarının mekansal organizasyonu ile nasıl ilişkili olduğuna özel bir önem veriyoruz. Larva beyinleri için üç (ön, arka ve yanal) ve yetişkin beyinleri için üç (ön, arka ve yatay) montaj stratejisi tanımladık ve bunların her biri belirli bir optik lob progenitör popülasyonunu veya nöropilini görüntülemek için en uygun açıyı sağlar.

<table><tbody><tr><td>10x PBS</td><td>Bioshop</td><td>PBS405</td><td></td></tr><tr><td>%37 formaldehit</td><td>Bioshop</td><td>FOR201</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 (keçi) ikincil</td><td>Invitrogen</td><td>A-11055</td><td>1:500'de kullanım</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555 (fare) ikincil</td><td>Invitrogen</td><td>A-31570</td><td>1:500'de kullanım</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 (kobay) ikincil</td><td>Invitrogen</td><td>A-21450</td><td>1:500'de kullanım</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 (sıçan) ikincil</td><td>Invitrogen</td><td>A-21247</td><td>1:500'de kullanım</td></tr><tr><td>Kapak fişleri</td><td>VWR</td><td>48366-067</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon forseps - #5</td><td>Dumont</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon forseps - #55</td><td>Dumont</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Tabağı</td><td>Corning</td><td>722085</td><td></td></tr><tr><td>Kuru mendil</td><td>Kimbery Clark</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-Bgal birincil antikoru</td><td>1:1000'de</td><td>biyogenez</td><td></td> kullanımı</tr><tr><td>Gine domuzu anti-Bsh birincil antikoru</td><td>Claude Desplan'dan</td><td></td> hediye <td>1:500'de kullanım</td></tr><tr><td>Gine domuzu anti-Vsx1 birincil antikoru</td><td>Erclik ve ark. 2008</td><td></td><td>1:1000'de kullanım</td></tr><tr><td>Laboratuvar filmi</td><td>Parafilm</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Sarstedt</td><td>72.706.600</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop slaytları</td><td>VWR</td><td>CA4823-180</td><td></td></tr><tr><td>Fare anti-dac primer antikoru</td><td>Gelişimsel Çalışmalar Hibridoma Bankası (DSHB)</td><td>mabdac2-3</td><td>1:20'de kullanım</td></tr><tr><td>Fare anti-eya primer antikoru</td><td>DSHB</td><td>eya10H6</td><td>1:20'de kullanın</td></tr><tr><td>Fare anti-nc82 primer antikoru</td><td>DSHB</td><td>nc82</td><td>1:50'de</td></tr><tr><td>kullanın Fare anti-SVP birincil antikoru</td><td>DSHB</td><td>Yedili 2D3</td><td>1:100'de kullanım</td></tr><tr><td>Polimer</td><td>Kil Her türlü kil kullanılabilir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tavşan anti-GFP</td><td>Invitrogen</td><td>A-11122</td><td>1:1000'de</td></tr><tr><td>sıçan anti-DE-Cadherin birincil antikoru</td><td>DSHB</td><td>DCAD2</td><td>kullanımı 1:20'de</td></tr><tr><td>Slowfade montaj ortamı</td><td>Invitrogen</td><td>S36967</td><td>Vectashield montaj ortamı (cat# H-1000)</td></tr><tr><td>Triton-x-100</td><td>Bioshop</td><td>TRX506</td><td></td></tr> da kullanılabilir</tbody></table>

optik lob görselleştirmesi için larva ve erişkin drosophila beyinlerinin diseksiyonu, immünohistokimyası ve montajı

Dissection, Immunohistochemistry and Mounting of Larval and Adult Drosophila Brains for Optic Lobe Visualization

Dört nöropilden oluşan Drosophila optik lob: lamina, medulla, lobüla ve lobüla plakası, nöral çeşitliliği oluşturan ve devre montajını yönlendiren gelişimsel mekanizmaları keşfetmek için mükemmel bir model sistemdir. Karmaşık üç boyutlu organizasyonu göz önüne alındığında, optik lobun analizi, yetişkin nöropillerinin ve larva progenitörlerinin birbirlerine ve merkezi beyne göre nasıl konumlandırıldığını anlamayı gerektirir. Burada, optik lob görüntülemesi için larva ve yetişkin beyinlerinin diseksiyonu, immün boyaması ve montajı için bir protokol tarif ediyoruz. Montaj oryantasyonu ile optik lobun uzamsal organizasyonu arasındaki ilişkiye özel önem verilmektedir. Larvada üç (ön, arka ve yanal) ve yetişkinde üç (ön, arka ve yatay) montaj stratejisi tanımladık ve bunların her biri farklı bir optik lob yapısı için ideal bir görüntüleme açısı sağlar.

Protokolde tarif edilen oryantasyonlarda monte edilen larva ve yetişkin optik lobların konfokal görüntüleri Şekil 1 ve Şekil 2'de sunulmuştur.
Şekil 1, ön, arka ve yan yönelimlerde konumlandırılmış larva beyinlerinin şemalarını ve temsili konfokal dilimlerini göstermektedir. Anterior montaj oryantasyonunda, OPC epiteli (DE-Cadherin), medulla nöroblastları (deadpan&gt;βgal) ve lamina nöronları (Da...

Bu protokol, larva ve yetişkin Drosophila optik loblarını görüntüleme için hazırlamak için üç adımı tanımlar: 1) beyin diseksiyonları, 2) immünohistokimya ve 3) montaj. Belirli optik lob yapılarını görselleştirmek için farklı montaj yönleri gerektiğinden, adım 3'e vurgu yapılır.

Optik lob görselleştirmesi için larva ve erişkin drosophila beyinlerinin diseksiyonu, immünohistokimyası ve montajı

The Drosophila optic lobe, comprised of four neuropils: the lamina, medulla, lobula and lobula plate, is an excellent model system for exploring the ...

Optik loblara özel bir vurgu yaparak larva ve yetişkin Drosophila beyinlerini incelemek, immünoboyamak ve monte etmek için bir protokol tarif ediyoruz. Optik lobun karmaşık üç boyutlu organizasyonu göz önüne alındığında, burada açıklanan protokolün araştırmacılara montaj oryantasyonu ile görselleştirilen optik lob yapıları arasındaki ilişkiyi daha iyi anlamalarını sağlayacağı tahmin edilmektedir. Bu protokol, hem larva hem de yetişkin optik loblar için, her biri görüntüleme sırasında belirli bir optik lob yapısını görselleştirmek için en uygun açıyı sağlayan üç montaj stratejisini tanımlar.Diseksiyona başlamadan önce, üç oyuklu bir plakanın tüm kuyucuklarını kuyu başına 400 mikrolitre PBS ile doldurun ve bir drosophila şişesinin veya şişesinin içinde sürünen 15 dolaşan üçüncü instar larvasını nazikçe seçmek için forseps kullanın. Tüm larvaları üç kuyucuklu plakanın ilk kuyusuna yerleştirin ve bir larvayı plakanın orta kuyusuna aktarın. Baskın olmayan eli kullanarak, larvanın gövdesini kuyu tabanında tutun ve larva ağız kancasını nazikçe kavramak için baskın eli kullanın.Beyni çıkarmak için ağız kancasını vücuttan uzaklaştırın. Ardından, hayali diskler de dahil olmak üzere aksesuar

dissection-immunohistochemistry-mounting-larval-adult-drosophila

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Burada, glial hücreler göç GFP etiketli glial hücreler ile eşleştirilmiş canlı mikroskobik analizi ile gelişmekte olan Drosophila göz içine incelemek için bir protokol açıklar.

Drosophila Göz hayali Disk Glial Hücre Göç Canlı Görüntüleme

Larva, Pupa ve Erişkin diseksiyonu ve İmmünohistokimya<em&gt; Drosophila</em&gt; Retinaları

Bu video, yetişkin sineklerden alınan sağlam beyinleri bir köprü lamı altına monte etme yöntemini açıklar ve floresan mikroskobu için bağışıklığı lekelenmiş beyinler üzerinde gerçekleştirilen protokolü gösterir.

Yetişkin Drosophila Beyinlerinin Montajı: Konfokal Görüntüleme için Slaytlar Hazırlama Yöntemi

İmmün boyama, dokulardaki belirli hücre tiplerini ve proteinleri görselleştirmek için etkili bir tekniktir. Sonikasyonu kullanarak, burada açıklanan protokol, immünostainingden önce Drosophila melanogaster dokularını geç evre embriyolardan ve larvalardan ayırma ihtiyacını hafifletir. Formaldehitle sabitlenmiş bütün mount larvalarının immün boyaması için etkili bir metodoloji sunuyoruz.

Geç evre embriyonik ve larva soniklenmesi-kolaylaştırdı Immunoflorasan Boyama<em&gt; Drosophila</em&gt; Dokular<em&gt; Yerinde</em

Bu protokol, dokunulmamış larva beyin bağlamında canlı hücre görüntüleme yapmak için kullanılan akıcı bir yöntem göstermektedir. Canlı hücre görüntüleme yaklaşımları sürekli daha önce gözardı mekanizmaları ortaya çıkarılması, asimetrik nöral kök hücre bölünmeleri çalışmanın yanı sıra diğer nörolojik ve gelişimsel süreçleri için paha biçilmezdir.

Canlı Görüntüleme<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva nöroblastomun

Drosophila'nın yetişkin yapıları, hayali diskler adı verilen kese benzeri yapılardan türetilmiştir. Bu disklerin analizi, doku tayini, kompartman sınırı oluşturma, hücre proliferasyonu, hücre kaderi spesifikasyonu ve düzlemsel hücre polaritesi dahil olmak üzere birçok gelişimsel süreç hakkında bilgi sağlar. Bu protokol, ışık/floresan mikroskobu için hayali diskleri hazırlamak için kullanılır.

Diseksiyon ve hayali Disklerin immün itibaren Drosophila melanogaster

Yetişkin Drosophila beyin nöronal devreleri, yüksek beyin fonksiyonları ve karmaşık bozuklukları çalışmak için değerli bir sistemdir. Etkin bir yöntem, beyin temelli çalışmalar kolaylaştıracak küçük sinek kafasından tüm beyin dokusu incelemek için. Burada iyi korunmuş morfolojisi ile yetişkin beyinlerinde basit, tek adımlı diseksiyon protokol açıklar.

Basit Bir adım Yetişkin Tüm montaj Hazırlama Diseksiyon Protokolü<em&gt; Drosophila</em&gt; Brain

Bu iletişim kuralı diseksiyon ve yetişkin Drosophila melanogaster immunostaining açıklar beyin dokuları. Özellikle, bu iletişim kuralı doğru nöronal gelişim birçok yönlerini temel genel prensipler ortaya çıkarmak için kullanılabilecek örnek nöronal alt kümeleri olarak Drosophila mantar beden ve photoreceptor nöronlar kullanımı vurgulamaktadır.

Diseksiyon ve mantar vücut immünfloresan boyama ve yetişkin Drosophila melanogaster beynindeki nöronlar Photoreceptor

Bu kağıt doku immünhistokimya, Batı analiz ve RNA-ekstraksiyon için işlenmesi için protokolleri ile birlikte Drosophila pupa retina dissekan için cerrahi bir yöntem sunuyor.

Drosophila pupa Retina diseksiyon immünhistokimya, Batı analiz ve RNA izolasyon için

Bu çalışma, dekapitasyon, fiksasyon, kriyoseksiyon, floresan boyama, immün boyama ve görüntülemeyi içeren, konfokal ve multifoton görüntülemeye genişletilebilen basitleştirilmiş bir doku işleme protokolü sunmaktadır. Yöntem, gelişmiş motor becerilere olan ihtiyacı atlayarak karmaşık diseksiyonlarla karşılaştırılabilir etkinliği korur. Kantitatif görüntü analizi, kapsamlı bir araştırma potansiyeli sağlar.

Gelişmiş beyin floresan boyaması ve immün boyama için Drosophila kafalarının doğrudan kriyoseksiyonu

Öğrenin, Drosophila larva ve erişkin beyinlerinin diseksiyonu, immünohistokimyası ve optik lob görselleştirmesi için üç farklı montaj stratejisi. Bu yöntem, sinirbilim araştırmalarında görüntüleme netliğini artırır.

Optik lob görselleştirmesi için larva ve erişkin drosophila beyinlerinin diseksiyonu, immünohistokimyası ve montajı

Daha fazla video keşfet