Name: Proteolytically Bozulmuş Aljinat Hidrojeller ve Porcine Oosit Kapsülleme için Hidrofobik Mikrobiyoreaktörler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-07-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Öğrenin, fibrin-aljinat ve FEP tozu kullanarak domuz oosit kapsülleme yöntemlerini. Bu protokoller, COC yapısını koruyarak üreme biyolojisi ve infertilite tedavileri için yüksek canlılık sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar çok müteşekkir: dr Waclaw Tworzydlo (Gelişimbiyoloji ve Omurgasız Morfoloji Bölümü, Zooloji ve Biyomedikal Araştırma Enstitüsü, Jagiellonian Üniversitesi) TEM teknik tesisleri için; Teknik yardım için Bayan Beata Snakowska'ya (Endokrinoloji Anabilim Dalı, Zooloji ve Biyomedikal Araştırma Enstitüsü, Jagiellonian Üniversitesi); Hücre Biyolojisi ve Görüntüleme Bölümü, Zooloji ve Biyomedikal Araştırma Enstitüsü, Jagiellonian Üniversitesi, JEOL JEM 2100HT (JEOL, Tokyo, Japonya). Bu çalışma Polonya Ulusal Bilim Merkezi'nin 2018/29/N/NZ9/00983 sayılı hibe ile desteklenmiştir.

Aşağıdaki prosedürler Jagiellonian Üniversitesi Zooloji ve Biyomedikal Araştırma Enstitüsü Hayvan Refahı Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Domuz kümülüs-oosit komplekslerinin izolasyonu
<ol><li>Yumurtalık foliküllerinin izolasyonu için malzeme toplamak için, prepubertal yaldızlardan (yaklaşık 6-7 aylık, 70 ila 80 kg ağırlığında) yerel bir mezbahada domuz yumurtalıkları için malzeme toplamak. Her deneyde COC izolasyonu için 10 hayvandan yaklaşık 20 domuz yumurtalığı seçin. NOT: Her yumurtalığın 3-5 folikül verdiğini varsayarsak, toplam folikül sayısı 60 ile 100 arasında değişir.</li>
	<li>Yumurtalıkları steril fosfat tamponlu salin (PBS; pH 7.4; 38 °C) %1 AAS içeren bir termosa yerleştirin. Deney materyalinin 1 saat içinde laboratuvara taşındığından emin olun ve burada iki kez antibiyotik içeren steril PBS ile durulanır.</li>
	<li>Yumurtalıkları duruladıktan sonra, hm orta ile dolu beher aktarın ve tüm manipülasyonlar zaman için 38 °C'de bir kuvözde saklayın. NOT: Oosit işleme sırasında en iyi sonuçlar için, %2,5 antibiyotik/antimikotik solüsyon (AAS) ve %10 fetal sığır serumu (FBS) ilavesi ile DMEM/F12 ortamında (işleme ortamı, HM) tüm prosedürleri uygulayın ve pH'ı ortamdaKI CO2 düzeyinde, sıcaklık kontrolü (38 °C) ve bakteriyel kontaminasyonu en aza indirmek için laminar kaputunun altında kontrol edin.</li>
	<li>Büyük domuz foliklerinden (6-8 mm çapında) oda sıcaklığında 10 dk için 100 x g'de aspirasyon ve santrifüj ile foliküler sıvı (FF) toplanır. Bundan sonra, 0,2 μm membran gözenek filtreleri bağlı steril şırınga kullanarak supernatant filtre ve -80 ° C'de snap dondurma. NOT: Foliküler sıvıa aspirasyon için insülin şırınga (u- 40) kullanın.</li>
	<li>CO'ların izolasyonu için sadece sağlıklı, orta büyüklüktefoliküllerin (4-6 mm çapında) seçildiğinden emin olun42. NOT: Homojen ooplazmalı ve çok katmanlı (en az 3-4) kompakt kümülüs ile bozulmamış ve yuvarlak oosit esahip grade I'nin COC'leri daha fazla 3D IVM prosedürü için uygun kabul edilir43.</li>
	<li>COC'leri izole etmek için, 2-3 yumurtalıkları HM ile doldurulmuş steril 10 cm çapındaki Petri kabına aktarın. Aşağıdaki prosedürlerden birini izleyerek COC'leri orta büyüklükteki foliküllerden izole edin.<ol>
<li>Çıkıntılı yumurtalık foliküllerinin yüzeyini steril cerrahi bıçak 15C ile hafifçe kesin. Bu, cocs ile birlikte foliküler sıvı Petri kabına dışarı akmasına neden olacaktır.</li>
		<li>Tek kullanımlık şırıngaya bağlı 5/8" boyutuna sahip 28 G iğne kullanarak foliküler içeriği aspire edin ve Petri kabına aktarın. NOT: Yumurtalık dokusu kalıntılarını atın. İzolasyonun sonraki aşamaları stereomikroskop altında gerçekleştirilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>3-5 60 mm IVF Petri yemekleri hazırlayın.<ol>
<li>Merkezi kuyulara 1 mL HM ekleyin ve dış halkalarına 3-4 damla HM (damla başına 50°L) yerleştirin.</li>
		<li>Daha sonra, bir polikarbonat mikropipet kullanarak, 3-4 kez kısa bir süre durulamak için dış halkalar HM damla hasarsız COCs taşıyın.</li>
		<li>Sonunda, ayrı ayrı merkezi kuyuya aktarın. Daha fazla işlem için bu IVF plakaları bir kuvözde saklayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>COC'ler toplandıktan sonra, bunları aşağıda listelenen iki farklı IVM kapsülleme protokolüne rasgele atayarak son seçim adımını gerçekleştirin.</li>
</ol>2. Fibrin-aljinat hidrojel boncuklarda kapsülleme
<ol><li>Tris-tamponlu salin (TBS; pH 7.4) 2.0 mL steril mikrosantrifüj tüp1 mL 50 IU / mL trombin hazırlayın.</li>
	<li>Fibrinojen stok çözeltisi (TBS'de 50 mg/mL) hazırlayın ve dondurulmuş halde tutun. NOT: TBS'de fibrinojeni eriterken kümelenmeyi önlemek için TBS'yi 37 °C'ye ısıtın.<ol>
<li>İşlem günü, buz üzerinde yavaşça eritin ve kullanım oda sıcaklığına getirmeden hemen önce.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kullanımdan hemen önce karışım 1:1 oranında %0.5 aljinat çözeltisi ve 50 mg/mL fibrinojen çözeltisi sonunda 2 mL (FA) elde etmek için kullanılır. Steril bir mikrosantrifüj tüp yavaşça karışımı girdap. Kabarcıklar yapmaktan kaçının.</li>
	<li>"Kuluçka odaları" hazırlamak için, cam mikroskop slaytlar parafin filmleri ince şeritler uygulayın. NOT: Slaytları kullanmadan önce %70 EtOH ile silin. Bir kuluçka odası iki slaytile oluşturulur. Onları ayırmak için, bunlardan birine 3 mm boşluk yerleştirin.</li>
	<li>Pipet 7.5 μL fa karışımı damla bu parafin film kaplı cam slayt üzerine, aynı zamanda boşluk ayıran vardır. Bir slayt yerde 8-10 damla, iki satır halinde düzenlenmiştir.</li>
	<li>Bir mikropipet kullanarak, 3-5 COK'yu ve minimum hacim (5°L'ye kadar) olgunlaşma ortamını (MM) aktarın ve bunları tam olarak FA damlasının ortasına yerleştirin. Bu yordam iyi manuel beceri ve hassasiyet gerektirir. NOT: Olgunlaşma ortamı (MM), 10 IU/mL PMSG, 10 IU/mL hCG, %10 FBS ve %50 domuz folikülü sıvısı (FF) ile desteklenen DMEM/F12'den oluşur.</li>
	<li>Sadece onları kapsayacak şekilde, her FA damla 7,5 μL trombin / Ca2 + çözeltisi ekleyin. Jel neredeyse anında formları çünkü onları karıştırmak için gerek yoktur.</li>
	<li>Fa kapsüller için ikinci, daha önce hazırlanmış cam slayt uygulayarak kuluçka odası kapağı. Çok dikkatli ama sağlam bir hareketle, odayı ters çevirin ve kurumasını önlemek için nemli filtre kağıdıyla kaplı 100 mm'lik Petri kabına yerleştirin.</li>
	<li>Daha sonra Petri kabını yaklaşık 5-7 dakika boyunca %5 CO2 kuluçka makinesine (38 °C) aktarın. Bundan sonra, FA kapsülfibrin ve aljinat eşzamanlı jelasyon nedeniyle bulutlu olacak.</li>
	<li>FA kapsüllerini kuyu başına 100°L MM içeren 96 kuyu plakasına (kuyu başına bir kapsül) aktarın. NOT: Oluşan FA kapsüllerine zarar vermemek için cerrahi forseps ler kullanarak bu adımı dikkatli bir şekilde gerçekleştirin.</li>
	<li>Her 2 günde bir MM'nin (50 μL) yarısını taze, önceden dengelendirilmiş olanla değiştirin. Ters ışık mikroskobu (10x büyütme) kullanan görüntü COC'ları. NOT: COCs FA kültürü için kültür koşulları: 38 °C, %5 CO2 atmosfer ve bağıl nem %95 altında. IVM 4 gün sonra, hidrojeller fibrin bileşeninin ilerleyici bozulması nedeniyle neredeyse net görünür. Kalan aljinat enzimatik olarak aljinat-lyaz, özellikle aljinat bozan ve hayvan hücrelerini etkilemeyen bir bitki kaynaklı enzim tarafından bozulmalıdır.<ol>
<li>MM'yi kapsülleri içeren kuyulardan çıkarın ve DMEM'e 100°L 10 IU/mL aljinat liaz ekleyin. 25-30 dakika kuvözde kültür plakası bırakın.</li>
		<li>Çözünmüş kapsüllerden COC'leri çıkarın. NOT: Bu bir kesme pipet ucu ile yapılabilir.</li>
		<li>Taze bir DMEM'de birkaç yıkamadan sonra, PBS içeren bir IVF yemeğinin (çanak başına 5-10 COC) iç halkasına COC aktarın. Şimdi, daha fazla morfolojik veya biyokimyasal analiz için kullanın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Süper hidrofobik florlu etilen propilen (FEP) mikrobiyoreaktörlerde kapsülleme.
NOT: Tüm IVM prosedürlerinin termostatik kontrollü masada ve COC'lerin kullanım ları boyunca 38 °C'de tutulmasından emin olun.
<ol><li>1 μm FEP toz yatak ortalama parçacık boyutu 5 g içeren bir 30 mm Petri çanak hazırlayın. NOT: Taze FEP tozu kullanmak önemlidir. Yeniden kullanılan FEP toplam eğilimindedir ve kümeler oluşturur.</li>
	<li>Adım 1.6'da izole edilmiş 3-5 CO'yu içeren tek bir MM damlasını (hacim olarak~30°L) FEP tozunun yatağına dağıtın. Bu parçacıkların sıvı damlayüzeyini ve oluşan sıvı bilyelerin (LM) yüzeyini tamamen kapladığından emin olmak için plakayı dairesel bir hareketle hafifçe döndürün.</li>
	<li>1.000 μL uçlu bir pipet kullanarak lm'yi toplayıp edin. NOT: LM (4-5 mm) çapına uyacak şekilde pipet ucunu kenardan kesin. Bu tür hazırlanmış ucun yaklaşık çapı LM'den biraz daha büyük olmalıdır.</li>
	<li>Birkaç 60 mm IVF Petri yemekleri hazırlayın. Nem haznesini hazırlamak için dış halkalara 3-4 mL steril su ekleyin. Sonra, merkezi kuyuya bir LM yerleştirin. NOT: Bu prosedür iyi manuel beceri ve hassasiyet gerektirir - mermer dikkatsizce yerleştirilir veya hatta düşük bir yükseklikten düşerse yok edilecektir.</li>
	<li>Mermerleri % 5 CO2 kuluçka makinesinde 38 °C'de 4 gün kuluçkaya yatırın.<ol>
<li>Prosedürü takip eden ortamı günlük olarak değiştirin: Her LM'ye 30 μL MM uygulayın, bu da doğrudan sıvı teması kaplanmış FEP tozlarının hidrofobikliğini bozduğu için bunların yayılmasına neden olacaktır. Mermer içeriği eridiğinde, biyoreaktörden salınan COC'leri Petri kabındaki bir damla taze MM'ye aktarın. NOT: Serbest bırakılan COC'ları tam olarak aktarmak için polikarbonat mikropipet kullanın.</li>
		<li>FEP partiküllerini çıkarmak için MM'de (3-4 kez) birkaç kez yıkaldıktan sonra, 30 μL taze MM ile FEP toz yatağına aktarın. Toz parçacıklarının sıvı damlasının yüzeyini tamamen kaplayıp yeni bir LM oluşturmasını sağlamak için plakayı dairesel bir hareketle yavaşça döndürün.</li>
		<li>Ardından 3.3-3.4 adımlarından prosedürü izleyin. NOT: FEP tozunun şeffaf kaplaması, ışık mikroskobu kullanılarak LM içeriğinin izlenmesini sağlar.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 96-h IVM prosedürü nden sonra iki 3D sistem kullanılarak COC'ların karakterizasyonu
NOT: Kullanılan IVM sistemlerinin verimliliğini belirlemek için, ışık mikroskobu altında morfolojik olarak COC'leri puan. Ayrıca, COCs canlılık analizi için calcein ve ethidium homodimer (EthD-1) boyaları ile çift floresan etiketleme kullanın44.
<ol><li>IVM sonrası yumurtaların ışık ve floresan mikroskobu ile morfolojik incelemesi.<ol>
<li>38 °C 1x PBS ile COC'leri (hem FAB kullanarak kültürden türetilenler hem de LM'den elde edilenleri) yıkayın. NOT: COC'lerin kullanımını kolaylaştırmak ve boyama işlemi sırasında onlara zarar vermemek için, 96 veya 48 kuyu plakası kullanın ve COC'leri sonraki kuyulara aktararak her boyama adımını gerçekleştirin.</li>
		<li>37 °C'de 100 μL 1.6 mM calcein ve 5.5 mM EthD-1 ile 30-45 dakika kuluçkaya yatırın. Her iki maddeyi de 1x PBS'de seyreltin. NOT: Bu iki renkli floresan bir teşp olduğundan, karanlıkta bu adımı gerçekleştirin.</li>
		<li>Kuluçkadan sonra, COC'yi PBS'de iki kez yıkayın ve floresan proteinlerin ve floresan boyaların hızlı fotobeyazmasını önlemek için tasarlanmış bir antifade montaj ortamına batırın (Malzeme Tablosu). NOT: Kapak camı kenarlarını herhangi bir oje ile kurura karşı koruyun.</li>
		<li>Bir konfokal lazer tarama mikroskobu altında lekeli örnekleri görselleştirin. NOT: Her iki probun floresanını (yani calcein ve ethidium homodimer-1, EthD-1) 488nm'ye kadar bir argon lazeri ayarlayın. Yayılan floresan üçlü dikroik filtre 488/561/633 ile ayrılır ve daha sonra yeşil (calcein) için 505−570 nm ve kırmızı filtre için 630−750 nm (EthD-1) olarak ölçülür.</li>
		<li>Ölü granülosa hücrelerinin yüzdesine bağlı olarak konfokal floresan görüntülemedayalı kültür yumurtalık folikülleri uygulanan modifiye sınıflandırma kullanarak, dört kategoriye COCs sınıflandırma35.  V1: Yaklaşık %100 uygun c'lere sahip COC'lar; V2: Ölü C'lerin %10'una sahip COC'lar; V3: Ölü CC'lerin %10-50'si olan COC'lar; V4: Ölü CC'lerin %50'si ile COC'lar. NOT: Teknik olarak, canlı ölü tsay ile yumurta canlılığını değerlendirmek zordur; bu nedenle, mitokondriyal ultrayapı veya aktivite analiz ederek, örneğin tahmin edilmelidir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Transmisyon elektron mikroskobu ile IVM sonrası oositultrayapının incelenmesi.<ol>
<li>100 μL%2.5 glutaraldehitteki COC'leri 0,1 M sodyum kacodylate tamponda (pH 7,2, oda sıcaklığında) 2 saat boyunca düzeltin.</li>
		<li>100 μL 0,1 M sodyum kacodylate tampon (4 °C gecede) ve aynı tampon içinde durula.</li>
		<li>0,1 M sodyum kacodylate tampon (oda sıcaklığında) 1 saat için% 1 osmiyum tetroksit ile Postfix COCs.</li>
		<li>Uranyal asetatta boyama (%1) sonra, artan etanol seyreltme serisindeki COC'leri kurutun (%50, %60, %70, %90 ve %100), oda sıcaklığında bir gecede sızdırın, ardından iki kısa rezorin değişimi ve son olarak LR White'a yerleştirin.</li>
		<li>Daha sonra, numuneleri yönlendirmek ve değerlendirmek için yarı ince bölümleri (1 μm) metilen mavisi/masmavi II ile lekeleyin.</li>
		<li>Son olarak, TEM ile ultraince, iki kat lekeli bölümleri ultrayapısal düzeyde inceleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Sadece yumurtanın değil, onu çevreleyen kümülüs hücrelerinin de tüp bebek büyümesini sürdürebilme ve aynı zamanda olgunlaşmasını destekleyebilme yeteneği, başarılı yardımcı üreme teknolojileri için ve özellikle insan veya domuz gibi uzun süreli foliküler büyüme uygulanan türlerde somatik hücre/oosit etkileşimlerinin anlaşılmasını ilerletmek için son derece önemlidir. Sürekli geliştirilmiş IVM teknikleri polikistik over sendromu (PCOS), erken yumurtalık yetmezliği veya kesin kısırlık (onkoterapi) durumlarında üreme seçene...

Üç boyutlu (3D) olanlar da dahil olmak üzere çeşitli kültür sistemlerinin geliştirilmesi, gelişimin en erken aşamalarında bile foliküllerden izole edilen yumurtaların büyümesi ve olgunlaşması için en uygun koşulları sağlamayı amaçlamaktadır. Bu yardımlı üreme teknikleri için büyük önem taşımaktadır (ART), özellikle kanser tedavisi sonrası kısırlık ile mücadele eden kadınların artan sayıda görünümünde1. In vitro koşullarda yumurtaların olgunlaşması (IVM) zaten hayvancılık üreme amacıyla in vitro embriyo üretimi için kullanılan iyi kurulmuş bir tekniktir2. Ancak, çoğu memeli türünde, kümülüs-oosit komplekslerinin (COC) yüksek olgunlaşma oranları elde edilebilse bile (dağılım %60-90)3,gelişimsel yeterlilikleri hala ihtiyaçlara yetersizdir. Bunun nedeni blastosist evresine kadar bile böyle bir şekilde elde edilen zigotların gelişiminin düşük olması ve vekil hayvanlara aktarılmasından sonra dönemsel canlılıklarının azalmasıdır. Sonuç olarak, IVM prosedürüne tabi tutulan yumurtalardan elde edilen embriyoların gelişimsel yeterliliğinin arttırılması gerekmektedir4. Bu nedenle, yeni olgunlaşma medya5 ve in vitro kültürün çeşitli dönemlerde test edilmektedir6,7 çeşitli büyüme faktörleri ve molekülleri ile kültür medya takviyesi ile birlikte8,9.
Herhangi bir komple IVM sisteminin ilk adımı in vitro kültür sırasında yumurtasürdürülebilir büyüme için en uygun koşulları oluşturmaktır. Oosit büyümesi, yumurtanın10,11numaralı mayaya devam etme yeteneğinin belirli göstergelerinden biridir. Buna ek olarak, uygun bir oosit in vitro kültür sistemi nükleer olgunlaşma ve sitoplazmik farklılaşma12destekleyen yeteneğine sahip olmalıdır. Kümülüs-oosit kompleksinin morfolojisi, insan ve hayvanda in vitro fertilizasyon (IVF) prosedürünün sonraki adımları için en iyi yumurtayı seçmek için ART kliniklerinde kullanılan bir diğer önemli göstergedir12,13. Düşünülen COC'ların morfolojik özellikleri arasında: yumurta çapı, sitoplazma granülasyonu ve ilk polar vücut bütünlüğü14,15. Ayrıca, yumurta gelişim potansiyeli kümülüs hücrelerinin görünümü ve sıkıştırma ve yumurta çevreleyen tabakalarının sayısı ile ilişkilidir. Çok uygun oosit in vitro kültür sistemi için önemli de oosit-kümülüs hücrelerinin uygun etkileşimleri ve sitoiskelet istikrar16,17,,18,19bakım . Şimdiye kadar, insan COCs içinde in vitro oosit büyümegösterilmiştir 20. İnek COC'lerinin kullanımı da canlı doğumlarla sonuçlandı. Bu olgunlaşmamış yumurtalık folikülleri izole edildi ve daha sonra 14 gün boyunca kültüre kadar oosit ivf prosedürü21geçmesi için yeterince büyüktü . Benzer şekilde, in vitro kültür den sonra IVM tabi babun antral folikülleri izole COCs normal görünen iğ yapısı ile metafaz II aşamasına mayiosis reinitiating yeteneğine sahip oositler verdi22. Ancak bu çalışmada yazarlar onları döllemeye çalışmadı. Yine de bu tür sonuçlar, benzer bir prosedürün sadece bu memeli türlerine değil, aynı zamanda foliküllerden elde edilen insan kümülüs-oosit komplekslerine de uygulanabileceğini göstermektedir.
Yukarıda açıklanan sonuçlar, yumurtaların iki boyutlu (2D) sistemlerde kültürlendiği konvansiyonel IVM protokollerinin uygulanması ile elde edilmiştir. 2D kültür sistemlerinde rutin prosedür, uygun bir kültür ortamının bir damla batırılmış, mineral yağ23,,24ile oositler kapsayan . Bu in vitro oosit kültürü sırasında bir yağ bindirme sıvı buharlaşmayı önlemek için hizmet, böylece kültürde uygun pH ve ozmotik basınç bakımı sağlanması kabul edilir. Böyle bir 2D kültür sistemi elde etmek için izin rağmen, olgun domuz oositlerin bile% 87 kadar25, bu mineral yağ bindirme uygun yumurta gelişimi için gerekli olan lipid çözünür malzemelerin önemli difüzyon neden olduğu kanıtlanmıştır26. Ayrıca, yumurta kültürü sırasında mineral yağiçine steroidler (progesteron ve östrojenler) difüzyon nedeniyle, nükleer olgunlaşma bir gecikme ve domuz yumurtalarının gelişimsel yeterlilik başarı azalma gözlenmiştir. Bu zigotaz sayıda elde neden olabilir, ayrıca blastosist aşamasına düşük gelişim kapasitesi ile karakterizedir ve alıcı hayvanlara aktarılan sonra kötü canlılık ile27. Bu nedenle, IVM prosedürü nden sonra alınan yumurtalardan elde edilen embriyoların gelişimsel yeterliliğini artırmak için, özellikle üç boyutlu (3D) sistemler kullanılarak, kompleks olarak C'lerle birlikte kültüre sahip yumurtaların hem sitoplazmik hem de nükleer olgunluğa ulaşması için en uygun koşulları yaratarak girişimler yapılmaktadır. Çeşitli yenilikçi 3D in vitro kültür sistemleri son yirmi yılda28,,29geliştirilmiştir. Bunlar, hücrelerin doğal uzamsal organizasyonunu sürdürmek ve geleneksel 2B kültürlerde elde edilemeyen kültür yemeklerinde düzleştirmelerini önlemek için tasarlanmıştır. Kültürlü COC'ların yapısal ve işlevsel aktivitesi, uygun mimarilerinin sürdürülmesi ve çeşitli bölmeler arasındaki boşluk kavşakları aracılığıyla kesintisiz iletişim ile sağlanabilir30. Kümülüs-oosit komplekslerinin 3D in vitro kültürü için biyo-iskelelerin uygunluğu ekstra-hücre dışı matriks (ECM; kollajen ve hyaluronik asit)31 veya inert polimerler (aljinat)32gibi doğal biyomalzemeler kullanılarak değerlendirilmiştir. Çeşitli türlerde test edilen bu girişimler, yumurta lı kekozisin yeniden başlaması ve tam yeterliliklerinin elde edilmesini açısından umut verici sonuçlar almıştır33,34,35. Ancak şimdiye kadar, domuzlar da dahil olmak üzere büyük evcil hayvanlardan izole COCs olgunlaşma için uygun hiçbir 3D sistem geliştirilmiştir.
Bu çalışma, domuz COCs 3D kültür için kullanılabilecek iki protokolleri açıklar. İlk protokol de fibrin-aljinat boncuklarda (FAB) kapsülleme tanımlanır. FAB eşzamanlı bir aljinat ve fibrin çözeltisi karıştırma tarafından oluşturulabilir, hangi bir senkron jelleşme sürecinden geçmesi. Her iki bileşen de matris sertliğine katkıda bulununca, bu kombinasyon dinamik bir mekanik ortam sağlar. Benzer bir çözüm daha önce fare yumurtalık folikül kültürü ve olgunlaşma36için kullanılmıştır. Sunulan protokolde, aljinat-fibrin ağının erken bozulmasını önlemek için, hızlı ve istikrarlı bir jelleşme süreci sağlayarak uygun şekilde daha yüksek kalsiyum klorür çözeltisi konsantrasyonları kullanılır. Dinamik mekanik ortam, COC'lerin bulunduğu ve boyutlarının arttığı doğal foliküler ortamda buna benzer koşullar yaratır. Buna ek olarak, çalışma, mikrobiyoreaktörler (Sıvı Mermerler, LM) oluşturmak için, ortam bir damla askıya alınan ve florlu etilen propilen (FEP; heksofloropropilen ve tetrafloroetilen kopolimer) toz parçacıkları ile kapsüllenmiş cocs 3D kültür sistemlerinin temsili sonuçlarını göstermektedir. LM daha önce destek gösterilmiştir 3D biyoreaktör bir formudur, diğerleri arasında, yaşayan mikroorganizmaların büyüme37, tümör sferoidler38 ve embriyonik kök hücreler39. LMs de başarıyla koyun yumurta kültürü40için kullanılmıştır. LM'ler kullanılarak yapılan deneylerin çoğunda biyoreaktörler 1 μm41partikül boyutuna sahip politetrafloroetilen (PTFE) toz yatağı kullanılarak hazırlanmıştır. Sunulan protokol, floropolimerler PTFE'ye kompozisyon ve özellikleri çok benzer olan FEP'i kullanır. Ama FEP ptfe daha kolay biçimlenebilir ve yumuşak ve ne özellikle önemlidir, son derece şeffaftır.
Her iki 3D sistem de gaz tüp bebek kültür ortamını korur. Ayrıca, oosit ve çevresindeki foliküler hücreler arasındaki işlevsel ilişkiyi koruyarak, boşluk kavşaklarının düzlemesini ve bunun sonucu olarak bozulmasını önleyerek COCs 3D organizasyonunu sürdürürler.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Genel< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Antibiyotik Antimikotik (100x) 100ml</td><td>Thermo Fisher</td><td>15240062</td><td>İşleme Ortamı için% 2,5 nihai konsantrasyon. PBS'de% 1 (adım 1.2)</td></tr> <tr><td>DMEM / F12 (500ml)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>D8062</td><td>İşleme ve Olgunlaşma Ortamı</td></tr><tr><td>DPBS (Ca, Mg olmadan), 1x, 500ml</td><td>Thermo Fisher</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>FCS (100 ml)</td><td>Thermo Fisher</td><td>16140063</td><td>hem İşleme Ortamı hem de Olgunlaşma Ortamı için %10 nihai konsantrasyondur. (Adımlar: 1.5. 2.6.)</td></tr> <tr><td>PBS (1x, pH 7.4) 500ml</td><td>Thermo Fisher</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>TBS Stok Çözeltisi (10x, pH 7.4) 500 ml</td><td>Cayman Kimyasalları</td><td>600232</td><td>1x nihai konsantrasyon. Diğer marka kullanılabilir</td></tr><tr><td><güçlü>Olgunlaşma Ortamı< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>hCG (10 000 U'luk 1 ŞIŞE)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>CG10</td><td></td></tr><tr><td>PMSG</td><td>BioVendor</td><td>RP1782721000</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Fibrin-aljinat boncuk< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Aljinat Liyaz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1603</td> <td>(Adım 2.11.1)</td></tr><tr><td>Trombin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9326-150UN</td> <td>(Adım 2.1)</td></tr> <tr><td>Kalsiyum Klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td> <td>(Adım 2.1)</td></tr> <tr><td>Fibrinojen (250mg)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>F3879</td> <td>(Adım 2.2)</td></tr> <tr><td>Sodyum Aljinat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W201502</td> <td>(Adım 2.3) aljinat çözeltisi için kullanın</td></tr> <tr><td>< güçlü > Sıvı Mermer< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FEP</td><td>Dyneon GmbH 3M AdMD</td><td>A-66670</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Morfolojik inceleme</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CANLI/ÖLÜ Canlılık/Sitotoksisite Kiti, memeli hücreleri için</td><td>Thermo Fisher</td><td>L3224</td><td>(Adım 4.1.) Yayılan floresan: kalsein için 494 nm, EthD-1 için 528 nm; Ölçü: kalsein için 517 nm, 617 nm - EthD-1</td></tr><tr><td>VECTASHIELD Antifade Montaj Ortamı</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>H-1000</td><td>montaj ortamı</td></tr><tr><td><güçlü>Yapısal inceleme</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehit çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5882</td><td>%2.5 nihai konsantrasyon (Adım 4.2.1.)</td></tr><tr><td>LR Beyaz reçine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L9774</td> <td>(Adım 4.2.4.)</td></tr><tr><td>Metilen mavisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9140</td> <td>(Adım 4.2.5.)</td></tr><tr><td>Osmiyum Tetroksit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O5500</td> <td>(Adım 4.2.3.)</td></tr><tr><td>Sodyum kakodilat trihidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0250</td><td>0.1M sodyum kakodilat tamponu (pH 7.2) hazırlamak için kullanın</td></tr> <tr><td>Uranil Asetat</td><td>POCH</td><td>868540111</td> <td>(Adım 4.2.4.)</td></tr><tr><td><güçlü>Özel aletler, aletler</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>30 mm Pteri kabı</td><td>TPP</td><td>93040</td><td></td></tr><tr><td>60 mm IVF Petri kabı</td><td>Falcon</td><td>353653</td><td></td></tr><tr><td>Ez-Grid Premium Hücre Kullanımlı Pipetleyici</td><td>RI Yaşam Bilimleri</td><td>8-72-288</td><td></td></tr><tr><td>Ez-Tip</td><td>RI Yaşam Bilimleri</td><td>8-72-4155/20</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma Tablosu</td><td>SEMIC</td><td></td><td>Diğer markalar kullanılabilir</td></tr><tr><td>İnkübatör</td><td>Panasonic</td><td>MCO-170AIC-PE</td><td>Diğer markalar kullanılabilir</td></tr><tr><td>Steril petri kabı (10 cm)</td><td>NEST Biyoteknoloji</td><td>704002</td><td></td></tr><tr><td>0.2 & mikro ile steril şırınga filtreleri; m</td><td>GOOGLAB SCIENTIFIC</td><td>GB-30-022PES</td><td></td></tr><tr><td>Termos</td><td>Quechua</td><td>5602589</td><td>Diğer markalar kullanılabilir</td></tr></tbody></table>

proteolytically bozulmuş aljinat hidrojeller ve porcine oosit kapsülleme için hidrofobik mikrobiyoreaktörler

Proteolytically Degraded Alginate Hydrogels and Hydrophobic Microbioreactors for Porcine Oocyte Encapsulation

Üreme biyolojisinde, suni döllenme ve embriyo transfer teknolojisi ile başlayan biyoteknoloji devrimi, yumurta tüp bebek olgunlaşma (IVM), tüp bebek (IVF) ve somatik hücreden nükleer transfer ile evcil hayvanların klonlanması gibi yardımcı üreme tekniklerinin geliştirilmesine yol açmıştır. IVM özellikle önem eger bir yöntemdir. Ticari olarak önemli veya nesli tükenmekte olan türlerde üretim aralığının azaltılması, in vitro insan üremesi ile ilgili araştırmalar ve hücre tedavileri için transgenik hayvanların üretimi gibi uygulamalar için olgun, kaliteli oositlerin tedariki için platform teknolojisidir. Yumurta kalitesi terimi olgunlaşmayı tamamlama, döllenme ve sağlıklı yavrular olma yetkinliğini içerir. Bu iyi kalitede oositler IVF prosedürleri de dahil olmak üzere başarılı döllenme için her şeyden önemli olduğu anlamına gelir. Bu, sadece insan yumurtalarının değil, diğer büyük memeli türlerinin de büyümesini destekleyecek güvenilir bir kültür yöntemi geliştirmekte birçok zorluk teşkil eder. IVM'de ilk adım yumurtaların in vitro kültürüdür. Bu çalışma, domuz yumurtası 3D kültür için iki protokol açıklar. İlk olarak, 3D model kümülüs kompleksleri (COCs) bir fibrin-aljinat boncuk interpenetrating ağ kapsüllenir, hangi fibrin ve aljinat karışımı aynı anda jellenir. İkincisinde, COC'lar bir damla orta alanda askıya alınır ve sıvı mermerler (LM) olarak tanımlanan mikrobiyoreaktörleri oluşturmak için florürlü propilen (FEP; heksofloropropilen ve tetrafloroetilen kopolimeri) ile kapsüllenirler. Her iki 3D sistem de gaz tüp bebek kültür ortamını korur. Ayrıca, boşluk kavşaklarının düzlemesini ve bunun sonucu olarak bozulmalarını önleyerek, yumurta ve çevresindeki foliküler hücreler arasındaki işlevsel ilişkiyi koruyarak COCs 3D organizasyonunu sürdürürler.

Her iki IVM sistemi kullanan COC'larda granülosa hücreleri birbirine sıkıca yapışmış ve kurtarılan COC'ların çoğunda bozulmadan kümülüs hücresi katmanları bulunurdu(Şekil 1A,B). Ayrıca kümülüs hücrelerinin önemli bir kısmı korunmuştur.
COCs canlılık analizinden elde edilen sonuçlar, 3Boyutlu in vitro koşullarda domuz yumurtalarının kapsülasyonu için uygulanan her iki sistem de optimum büyüme koşullarını sağladığını doğrulamıştır<strong class="xfig...

Burada 3D kültür koşullarında domuz oositkapsülasyonu için iki protokol sunulmuştur. İlk olarak, kümülüs-oosit kompleksleri (COCs) fibrin-aljinat boncuklar kapsüllenir. İkincisi, florlu etilen propilen toz parçacıkları (mikrobiyoreaktörler) ile çevrilidir. Her iki sistem de 3B organizasyonlarını sürdürmek için en uygun koşulları sağlar.

Proteolytically Bozulmuş Aljinat Hidrojeller ve Porcine Oosit Kapsülleme için Hidrofobik Mikrobiyoreaktörler

In reproductive biology, the biotechnology revolution that began with artificial insemination and embryo transfer technology led to the development of ...

Domuz yumurtalarının kapsüllemesi için yapılan bu protokol, KÜRESEL COC organizasyonunun sürdürülmesini mümkün kılar. Bu, yumurta ve çevresindeki foliküler hücreler arasındaki boşluk kavşaklarının düzlemesini ve bunun sonucu olarak bozulmasını önler. Açıklanan iki protokolün başlıca avantajları kullanıcı dostu olan ve hem yumurta hem de kemo hücre sağkalımını etkin bir şekilde kontrol altına almaktır.Kültür sistemlerinin her ikisi de üreme biyolojisi temel araştırma için değerli araçlar, ve gelişmiş kısırlık tedavisi için klinik önemi olabilir. Ayrıca yeni biyoteknoloji yöntemleri geliştirmek ve hayvancılık geliştirmek için uygulanabilir. Yumurtalıkları duruladıktan sonra, HM ortamı ile dolu bir kabına aktarın ve sonraki tüm manipülasyonlar sırasında 38 santigrat derecede bir kuvözde saklayın.Büyük domuz folikülüfoliküler sıvıaspire ve oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 100 kez G santrifüj. Daha sonra, 0,2 mikrometrelik membran gözenek filtresine bağlı steril bir şırınga kullanarak supernatant filtre ve negatif 80 santigrat derece de hızlı dondurma. COC'leri orta boy foliküllerden izole etmek için, 2-3 yumurtalıkları HM ile dolu steril 10 santimetrelik Petri kabına aktarın. Hafifçe foliküler sıvı ve COCs Petri kabına dışarı akmasına neden olacak steril bir cerrahi sayı 15 bıçak ile çıkıntılı yumurtalık folikülleri yüzeyini kesti.Tek kullanımlık bir şırıngaya bağlı 28 gauge iğne ile foliküler içeriği aspire ve başka bir Petri kabına aktarın. IVF Petri yemekleri hazırlamak için, merkezi kuyulara bir mililitre HM ekleyin ve dış halkalara üç ila dört damla HM yerleştirin. Daha sonra, hasar görmemiş COC'ları dış halkalarda HM damlalarına taşımak için bir polikarbonat mikropipet kullanın ve kısa bir süre için 3-4 kez durulayın.Bittiğinde, ayrı ayrı merkezi kuyuya aktarın. Tüp bebek plakalarını kuvözde saklayın. Metin el yazmasında açıklandığı gibi trombin ve fibrinojen çözeltileri hazırlayın.İşlem günü, fibrinojen çözeltisini buz üzerinde yavaşça eritin ve kullanmadan hemen önce oda sıcaklığına getirin. Mix 0.5%aljinat çözeltisi ve fibrinojen çözeltisi bire bir oranında iki mililitre son hacmi için ve yavaşça karışımı girdap. Cam mikroskop slaytlarına ince parafin film şeritleri uygulayarak kuluçka odalarını onarın.Pipet 7.5 mikrolitre fa karışımı damla parafin film kaplı cam slayt üzerine ayıran spacers ile, sekiz ila 10 damla iki satır düzenlenmiş yerleştirerek. En az olgunlaşma ortamı hacmiyle birlikte, FA damlasının merkezine üç ila beş CO'yu aktarmak için bir mikropipet kullanın. Her FA damla üstüne trombin çözeltisi 7,5 mikrolitre ekleyin onu kapsayacak şekilde.Jel neredeyse anında formları çünkü onları karıştırmak için gerek yoktur. Kuluçka odasını önceden hazırlanmış bir cam kaydırakla kaplayın, sonra odayı ters çevirin ve nemli filtre kağıdıyla kaplı 100 milimetrelik Petri kabına yerleştirin. Petri kabını 38 santigrat derecede %5 karbondioksite 5-7 dakika koyun.Kuluçkadan sonra, her FA kapsülü 100 mikrolitre olgunlaşma ortamı içeren 96 kuyuluk bir kuyuya aktarın. Her iki günde bir, ortamın yarısını taze önceden dengeli olgunlaşma ortamıyla değiştirin. Image COC 10x büyütme de ters ışık mikroskobu kullanıyor.COC'leri dört gün boyunca biraraya çıkardıktan sonra, olgunlaşma ortamını kuyulardan çıkarın ve DMEM'de mililitre başına 10 uluslararası üniteden 100 mikrolitre ekleyin. Kültür plakasını kuvözde 25-30 dakika bekletin. Çözünmüş kapsüllerden COC'leri çıkarın.DMEM birkaç kez yıkayın, sonra PBS içeren bir IVF çanak iç halka aktarın. 30 milimetrelik Petri kabında beş gram FEP tozu bir yatak yapın. FEP tozu üzerine üç ila beş COC içeren olgunlaşma ortamının tek bir damlatma dağıtın.Parçacıkların sıvı damlayüzeyini tamamen kaplayıp sıvı bilyeler veya LM'ler oluşturmasını sağlamak için plakayı dairesel bir hareketle hafifçe döndürün veya LM'ler. Birkaç 60 milimetrelik IVF Petri yemekleri hazırlayın ve nem haznesini oluşturmak için dış halkalara üç ila dört mililitre steril su ekleyin. 1000 mikrolitrelik pipet ile oluşan LM pick up ve merkezi kuyuiçine yerleştirin.Mermerleri 4 gün boyunca 38 derecede karbondioksit inkübatöründe 4 gün kuluçkaya yatırın. Ortamı değiştirmek için, her LM'ye 30 mikrolitre olgunlaşma ortamı uygulayın, bu da onun yayılmasına neden olur. Mermer içeriği eridiğinde, biyoreaktörden salınan COC'leri Petri kabındaki taze olgunlaşma ortamına aktarın.Olgunlaşma ortamında 3-4 yıkAmadan sonra, 30 mikrolitre taze ortamla birlikte COC'leri FEP toz yatağına aktarın. Toz parçacıklarının sıvı damlasının yüzeyini tamamen kaplamasını ve yeni bir LM.Then oluşturmasını sağlamak için plakayı dairesel bir hareketle hafifçe döndürün ve LM'yi IVF Petri kabına aktarın. Hem in vitro olgunlaşma sistemleri sıkıca birbirine yapışmış granüloz hücreleri ve kümülüs hücrelerinin bozulmamış katmanları ile COCs üretti.COC canlılık analizi, her iki kapsülleme sisteminde de optimum büyüme koşullarının sağlandığını doğrulamıştır. Her iki grupta da sadece yüksek canlılık oosit leri gözlendi. Yumurtalar iletim elektron mikroskobu ile görüntülendi.Mitokondri eşit olarak dağıtıldı ve kabuk benzeri bir şekle sahipti. Sadece birkaçı uzamış ve kümelenmeleri düzensiz bir şekilde gözlemlenmiştir. Endoplazmik retikulum ya mitokondri ile ilişkili ya da yumurta sitoplazmasında serbestti.Sıvı damlacıklar küçük, koyu, yuvarlak yapılar olarak ortaya çıktı ve Golgi aparatı dilate sarnıç ile ortaya çıktı. Fa kapsüllerini kuluçka odasından kültür plakalarına aktarırken ve format LM'yi IVF Petri kabına alıp aktarırken hassas ve dikkatli olmak önemlidir.

proteolytically-degraded-alginate-hydrogels-hydrophobic

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

3D fibrin aljinat nüfuz ağ over folikül kapsülleme için yeni bir yöntem açıklanmıştır. Bu sistem, olgun oosit üretmek için olgunlaşmamış köklerinin gelişimini desteklemek için proteolitik degradasyon ile yapısal destek birleştirir. Bu yöntem, hücre-hücre genişleme sınırlayıcı olmadan kişileri korumak için kültürü hücre agrega uygulanan olabilir.

Proteolitik Degradable 3 Boyutlu Sistem Yumurtalık Folikül Encapsulation ve Kültür Bir Yöntem

Üç boyutlu bağlamında normal hücreleri Kültür, hücresel dönüşüm ve tümörogenez için gerekli erken olayları incelemek için alternatif bir yöntem temsil eder. Bu yöntem, normal yumurtalık ve yumurtalık kanseri oluşumu erken olayları incelemek için oviductal hücreleri büyümek için kullanılır.

Yumurtalıklar ve fallop borularında Üç Boyutlu Organ Kültür Aljinatta Hidrojeller

Aşağıdaki bölümlerde, biyomedikal uygulamalarda kullanım için aljinat mikroküreler hazırlanması için prosedürleri özetlemektedir. Biz özellikle tip 1 diyabet için potansiyel bir tedavi olarak hücre ve protein encapsulation çift amaçlı çok katmanlı aljinat mikroküreler oluşturmak için bir teknik göstermektedir.

Biyomedikal Uygulamalar için Aljinatta Mikrokürelerin Üretimi

Bu videoda, bir 3D kültür oluşturmak için domuz kümülüsü-oosit komplekslerinin (COC'ler) fibrin-aljinat boncuklarda kapsüllenmesi için protokoller açıklanmaktadır. Bu in-vitro olgunlaşma sistemi, normal hücreden hücreye iletişimi sürdürerek oosit olgunlaşmasını sağlar ve canlılığı korur.

Domuz COC'lerinin 3D Kültürü: Fibrin-aljinat Polimer Hidrojel Boncuklarda Kümülüs Oosit Komplekslerini Kapsüllemek İçin Bir Prosedür

Bu videoda, hidrofobik mikrobiyoreaktörlerde domuz oositlerinin kapsüllenmesi için bir protokol açıklıyoruz.

Sıvı Mermer Mikrobiyoreaktör Sistemi: Domuz Oositlerinin Kapsüllenmesi için Bir 3D Kültür Protokolü

Pluripotent kök hücreleri (PS hücreleri) bir koaksiyel nozul kullanarak aljinat hidrojel kapsüllerine kapsüllemek için bir yöntem oluşturduk.  Bu, hücrelerin aşırı toplanmasını önler ve süspansiyon kültüründeki hücrelerin yaşadığı kesme stresini sınırlar.  Teknik, PS hücrelerinin seri üretiminin yanı sıra kök hücre nişi üzerine yapılan araştırmalara da uygulanabilir.

Bir Koaksiyel Memesini kullanma Pluripotent Kök Hücre Aljinat Encapsulation

poli (N-izopropil akrilamid) -graft-kondroitin sülfat oluşan enjekte edilebilir doku mühendisliği iskelesi (PNIPAAm-g-CS) içeren aljinat mikro hazırlandı. Özellikleri ve in vitro biyouyumluluk şişme yapışma mukavemeti, bu çalışmada incelenmiştir. Burada geliştirilen karakterizasyon teknikleri diğer thermogelling sistemleri için geçerli olabilir.

Doku Mühendisliği Aljinat mikropartiküllerin ile Thermogelling Poli (N-izopropil) -graft-kondroitin Sülfat Kompozitlerin Sentezi

örnek olarak L-iksuloz üretimini kullanarak kofaktör rejenerasyonu ve geliştirilmiş yeniden kullanılabilirliği eş hareketsiz tam hücre Biyokatalizörler için protokol sundu. Kofaktör yenilenmesi işlevsel tamamlayıcı enzimleri ifade eden iki Escherichia coli suşları birleştirilmesi ile elde edilir; Bütün hücre gibi bir biyokatalizör hareketsizleştirme kalsiyum aljinat taneleri hücre kapsülleme ile elde edilir.

Kofaktör Yenilenme ve Geliştirilmiş kullanırlılık için Aljinat Boncuk Multi-biyokatalizi immobilizasyonu

Bu video ve el yazması memeli hücrelerini basit bir karıştırma teknesi kullanarak büyük partiler halinde üretilebilen% 0.5 ila% 10 aljinat boncuklar halinde kapsüllemek için emülsiyon temelli bir yöntemi tarif eder. Kapsüllenmiş hücreler, hücresel terapi uygulamaları için in vitro kültürlenebilir veya nakledilebilir.

Alginat Boncuklarda Memeli Hücre Kapsüllenmesinin Basit Bir Karıştırılmış Geminin Kullanımı

Bu protokol, tek emülsiyon formülasyonuna dayalı kolay mikroakışkan teknolojisi ile poli(laktik-ko-glikolik asit) bazlı yüksek açık gözenekli mikrosferlerin (HOPM'ler) üretimini açıklamaktadır. Bu mikrosferlerin doku mühendisliği ve ilaç taramasında potansiyel uygulamaları vardır.

Mikroakışkan Teknoloji ile Yüksek Açık Gözenekli Mikrosferlerin ( HOPM'ler ) Üretilmesi

İn vitro gametogenezi tamamlayan yeni bir iskelesiz agaroz kalıbında yumurtalık foliküllerini kültürleme yöntemlerini açıklıyoruz.

İskelesiz Fare Yumurtalık Folikül Kültürü için Özelleştirilebilir Agaroz Kalıplarının Üretimi ve Kullanımı

Öğrenin, fibrin-aljinat ve FEP tozu kullanarak domuz oosit kapsülleme yöntemlerini. Bu protokoller, COC yapısını koruyarak üreme biyolojisi ve infertilite tedavileri için yüksek canlılık sağlar.

Proteolytically Bozulmuş Aljinat Hidrojeller ve Porcine Oosit Kapsülleme için Hidrofobik Mikrobiyoreaktörler

Daha fazla video keşfet