Yenidoğan Farelerde Hipoksi-İskemi Sırasında Sürekli Video Elektroensefalogram

Hipoksik iskemik ensefalopati neonatal nöbetlerin en sık nedenidir. Hipoksik iskemik nöbetler ve sürekli video elektroensefalografi veya EEG'nin bu fare modeli, yenidoğan nöbetlerinin daha iyi anlaşılmasına ve karakterizasyonuna yardımcı olabilir. Bu teknik, bir yenidoğan yaralanma modelinde yüksek kaliteli video elektroensefalografi kayıtlarının elde edilmesini kolaylaştırır ve yenidoğan nöbetlerinin mekanizmaları, sonuçları ve terapötik testlerle ilgili gelecekteki çalışmalara yardımcı olabilir.

Prosedürü gösteren Pravin Wagley olacak. Laboratuvarımdan bir laboratuvar uzmanı. Elektrot implantasyon cerrahisi için.

Anestezi uygulanmış bir doğum sonrası dokuzuncu gün faresinde ağrı refleksine yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, fareyi bir burun konisi ile stereotaksik bir aşamaya yerleştirin ve başı sabit tutmak için kulak çubuğunun arka tarafını kullanın. Kafatasındaki kesi alanını üç alternatif betain ve% 70 etanol ovma ile sterilize edin ve kesi bölgesini görünür tutarken fareyi örtmek için fenestre bir örtü kullanın. Kafa derisini gözlerin biraz üstünden ön arkaya doğru açın ve cildin yaklaşık yarım santimetresini geri çekin.

Kafayı stereotaksik aşamada yeniden konumlandırın, böylece cilt kafatasını açığa çıkarmak için dışa doğru çekilir ve hidrojen peroksit uygulamak için pamuklu bir bez kullanın. Kafatasını dikkatlice kazıyarak temizlemek için bir neşter bıçağı kullanın. Ve kemiğe yaklaşık 50 mikrolitrelik bir damla yapıştırıcı uygulayın.

Yapıştırıcıyı kafatasının üzerine yaymak için aplikatörü kullanın ve yapıştırıcıyı 40 saniye boyunca ultraviyole ışık altına yerleştirin. Yapıştırıcı sertleştiğinde, açıkta kalan bregmayı referans olarak kullanarak koordinatları ölçün. Ve hipokampusun CA1 bölgesinde iki taraflı, parietal kortekste ve beyincikte iki taraflı olarak elektrot delikleri oluşturmak için 32 gauge bir iğne kullanın.

Kafatasının yüzeyindeki kanı temizleyin ve dişi soket konektörüne bağlı elektrotları beyne indirmek için stereotaksik kolu kullanın. Her elektrodu beyne implante edin ve elektrotları diş akrilik ile yerine sabitleyin. Kulaklığı ek diş akrilik ile kafatasına yapıştırın.

Her yavruya deri altından kilogram başına beş miligram Ketoprofen enjekte edin. Tüm elektrotlar çöpün en az yarısına sabitlendiğinde, yavruları anneye geri verin. Elektrot implantasyonundan 24 saat sonra, her bir hayvanı EEG kaydı için 37 santigrat derece özel yapım bir pleksiglas odasına yerleştirin ve yavruları bir video EEG izleme sistemine bağlamak için esnek, özel yapım bir işlemsel amplifikatör kablosu kullanın.

EEG verilerini 1000 Hertz'de bir kilo kazançla sayısallaştırmak için çok kanallı bir diferansiyel amplifikatör kullanın ve EEG sinyalini uygun analiz yazılımında gözden geçirin. Ardından, karotis arter dava prosedürü için hayvanların bağlantısını kesmeden önce 30 dakika boyunca bir yaralanma öncesi başlangıç EEG'si kaydedin. Başlangıç EEG verilerini kaydettikten sonra, boynun sol tarafındaki mandibula ve klavikula arasındaki cildi gösterildiği gibi betain ve etanol ile sterilize edin.

Ve boynun sol tarafında yaklaşık bir santimetrelik bir kesi yapın. Yavruyu diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin ve karotis arteri ortaya çıkarmak için deri altı dokusunu ve cildi dikkatlice geri çekin. Arterin altına beş santimetrelik steril bir ipek dikiş parçası yerleştirin.

Vagus sinirini tanımlayın ve siniri arterden hassas bir şekilde ayırın ve geri çekin. Sütürü sadece arterin altında olacak şekilde manevra yapın. Vagus sinirini tanımladıktan sonra, siniri arterden hassas bir şekilde ayırın ve geri çekin ve arterin altına beş santimetrelik steril bir ipek dikiş parçası geçirmek için mikro forseps kullanın.

Akışı tıkamak için arterin etrafına çift düğümlü bir dikiş atın ve fazla dikişi kesin. Açıkta kalan arterin üzerindeki deri altı dokusunu ve cildi değiştirin ve kesiyi kapatmak için Vetbond kullanın. Daha sonra hayvanı, ısınma yatağına yerleştirilen oda sıcaklığında bir odada sürekli EEG izlemeye geri koyun ve odanın açılmasını önlemek için yavru çekirdek sıcaklığının kızılötesi sıcaklık kontrollerini yapın.

Sürekli solunan oksijen izleme fraksiyonu ile yavruların bir saat boyunca iyileşmesine izin verdikten sonra, hazneyi dakikada 60 litre %100 nitrojen ve dakikada 0,415 litre %100 oksijen ile yıkayın. Odadaki oksijen doygunluğu %12'ye ulaştığında, oksijen akışını değiştirmeden nitrojen akışını dakikada 10 litreye düşürün. Gerektiğinde küçük ayarlamalar yaparak, solunan oksijen oranını 45 dakika boyunca %8'de tutun.

45 dakikalık hipoksiye maruz kaldıktan sonra, solunan oksijen oranını %21'e geri getirin ve yavruların iki saat boyunca EEG izleme ile odada iyileşmesine izin verin. Kayıt süresinin sonunda, fareleri EEG sisteminden ayırın ve yavruları anneye geri verin. Video EEG kayıtları, elektrografik bulguların videodaki davranışla ilişkilendirilmesini sağlar.

Bu modelde gözlemlenen olayların çoğu fokal tek taraflı veya karma davranışları içerir. Hipoksik dönem boyunca, farelerin bir alt kümesi tipik olarak kompulsif olmayan nöbet aktivitesi sergiler, bu sırada yavrular EEG'de sürekli nöbet aktivitesi ile hareketsizdir. Bu analizde, temel aktivite, P 10 fare yavrularında daha önce açıklanan arka plana benzerdi.

Davadan sonra ve hipoksinin başlamasından önce, farelerin bir alt kümesi konvülsif nöbetler sergiledi. Hipoksi indüksiyonunu takiben, EEG'deki arka plan amplitüdü azaldı. Ve aralıklı başak dalgası deşarjları patlamaları sergilendi, ardından baskılama yapıldı.

Fareler, polis spike dalgaları ile daha karmaşık ve sık hale gelen ritmik spike dalga deşarjları olarak bastırılmış bir arka plandan ortaya çıkan elektrografik nöbetler sergiledi. Hipoksi sırasında, güç spektrogram analizi, iskemik ve kontralateral hemisferler arasındaki asimetriler için dikkate değerdir. İskemik hemisfer bir patlama bastırma paterni sergiler ve kontralateral hemisfer bastırılmış bir arka plan sergiler.

Yeniden oksijenlenme ve iyileşme sırasında, farelerin bir alt kümesi, kayıt süresinin geri kalanında nöbet geçirmeye devam eder. EEG arka planı, hipoksi sonrası başlangıç seviyesine kıyasla baskılanır ve hipoksi sonrası kayıt döneminde kademeli bir iyileşme gözlenir. Yenidoğan yavrularla çalışırken hassasiyet çok önemlidir.

Ayrıca cerrahi işlemlerden sonra yavruların gruplar halinde anne ile birlikte tekrar yerleştirilmesine özellikle dikkat edilmelidir. Video elektroensefalografi, yenidoğan yavrularında histopatoloji, görüntüleme ve davranışla birlikte yenidoğan nöbetlerinin yaralanma cerrahisi ve davranışsal sonuçlar üzerindeki etkisini incelemek için kullanılabilir.