Name: Yenidoğan Farelerde Hipoksi-İskemi Sırasında Sürekli Video Elektroensefalogram (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Öğrenin, yenidoğan farelerde hipoksi-iskemi sırasında sürekli video EEG kaydı yöntemini. Bu teknik, nöbet mekanizmalarını anlamak için elektrografik bulguları davranışlarla ilişkilendirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Aşağıdaki finansman kaynaklarını kabul ediyoruz: NIH NINDS – K08NS101122 (JB), R01NS040337 (JK), R01NS044370 (JK), Virginia Üniversitesi Tıp Fakültesi (JB).

Tüm hayvan çalışmaları Virginia Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı.
1. Elektrot bina / kablo binası
<ol><li>Dişi bir soket konnektörüne bağlı bir elektrot yapmak için tek kutuplu yalıtımlı paslanmaz çelik tel (0,005" çıplak çap, 0,008" kaplamalı) kullanın (dişi kap konnektörü 0,079).</li>
	<li>Hayvanları amplifikatöre bağlamak için özel yapım bir kablo kullanın.<ol>
<li>4 kanallı bir birliğe erkek 4 pinli konnektör (Erkek konnektör 0,079") takın, operasyonel amplifikatörle (op-amp) eşleşen 4 kanallı birlik kazanç empedansı. 9 V bataryaya bağlanan kablolara 10K direnç takın. Op-amp'ye bağlı olmayan bir topraklama teli pilin orta noktası olarak işlev görür.</li>
		<li>Kablonun bir ucunun (AWG, 0,012" OD) op-amp'ye ve kablonun diğer ucunun amplifikatöre bağlanması.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Elektrot implantasyon ameliyatı
<ol><li>Aşağı doğru bir akış başlığında% 4-5 izofluran ile yavruyu (doğum sonrası gün 9) uyuşturun. İşlemin başlamasından önce, yavrulara bupivacaine enjekte edin (0.02-0.05 mL, % 0.25 deri altı lokal infiltrasyon).</li>
	<li>Hayvan hareketsiz hale geldikten sonra, burun konisi ile stereotaktik bir aşamaya aktarın. Başı sabit tutmak yumuşak olduğu için kulak çubuğunun ters tarafını kullanın. Bu yaşta, yavrular kulak çubuğunun sivri ucını kullanmak için tam olarak gelişmiş bir kulağa sahip değildir.</li>
	<li>Izofluran akışını kısın ve% 2.5-3'te koruyun. Ameliyat prosedürü boyunca yavrunun sabit nefes alışını takip edin. Ağrı yanıtını kontrol etmek için kuyruğu kıstırın ve sonra kesi devam edin.</li>
	<li>Kafatasındaki kesi alanını betadin ve alkolle sterilize edin (3 döngü alternatif iyot ve% 70 etanol). Kesi bölgesinin görülebilecek şekilde çevredeki vücut kısmını örtün.</li>
	<li>Kafa derisini gözlerin biraz üstünden ön-arka açın ve yaklaşık 0,5 cm deriyi geri çek. Fare kafasını stereotaksik sahnede yeniden konumlandırın, böylece cilt açıkta kalan kafatasını dışarı doğru çeker.</li>
	<li>Pamuklu çubuk kullanarak kafatasına hidrojen peroksit uygulayın ve kafatasını neşter bıçağı kullanarak kazıyın. Kafatası çok yumuşaktır; kazıma yaparken dikkatli olun.</li>
	<li>Bir damla (yaklaşık 50 μL) yapıştırıcı uygulayın ve aplikatörünü kullanarak açıkta kalan kafatası bölgesine yayın. Yapıştırıcıyı ayarlamak için 40 sn UV ışığına maruz bırak.</li>
	<li>Referans olarak maruz kalan bregmayı kullanarak koordinatları ölçün. Hipokampus 'un CA1 bölgesinde [-3,5 mm Dorsal-Ventral (DV), ±2 mm Medial-Lateral (ML), -1,75 mm Derin (D)] ve parietal kortekste iki taraflı implant elektrotları [-1,22 mm DV, ±0,5 mm ML, -1 mm D] ve beyincikte bir referans elektrot17. İşaretli bölgede bir delik oluşturmak için 32 G iğne kullanın.</li>
	<li>Kafatasının yüzeyindeki kanı temizleyin. Kadın soket konektörüne stereotaksik kol yardımıyla takılan daha düşük elektrotlar beyne ve diş akrilik ile yerine sabitlenin. Elektrotları beyne yerleştir. Soket konnektör kulaklığı, diş akrilik ile birbirine yapışmış kafatasının üzerine oturur.</li>
	<li>Elektrot sabitlendikten sonra interskapular bölgeye ketoprofen (5 mg / kg) deri altından enjekte edin. Yavruları annenin arkasına koy. NOT: Çöplerin yarısını teker teker tanıtmak yerine anneye aynı anda kulaklıkla tanıtın. Bu, annenin yavrunun kulaklığını zarar vermesini önleyecektir.</li>
</ol>3. EEG kurulumu ve kaydı (temel/yaralanma öncesi)
<ol><li>Elektrot implantasyonundan sonra 24 saat iyileşmeden sonra, her hayvanı EEG kaydı için ısıtılmış (37 °C) özel yapım pleksiglas bir odaya yerleştirin. Bu oda aynı zamanda bir hipoksi odası olarak da hizmet verecektir.</li>
	<li>Odadaki yavruları esnek bir kablo (özel yapım op-amp kablosu) ile bir video-EEG izleme sistemine bağlayın. NOT: Kulaklık yerindeyken, fareler serbestçe hareket halindedir ve davranışlarda herhangi bir fark sergilemez. Elektrot tellerine bağlandıktan sonra, yavrunun oda boyunca serbestçe hareket edebilmesi için doğru miktarda gevşeklik sağlamak için teller oda bağı içinde ayarlanmalıdır.</li>
	<li>EEG verilerini 1000 Hz'de bir çim amplifikatörü kullanarak 1K kazançla dijitalleştirin. Daha sonra yazılımı (örneğin LabChart Pro) kullanarak EEG sinyalini (3-70 Hz arasında bant geçiş filtresi) gözden geçirin.</li>
	<li>Şahdamar ligasyon prosedürü için hayvanların bağlantısını kesmeden önce 30 dakika boyunca yaralanma öncesi temel EEG kaydedin.</li>
</ol>4. Sol şahdamar ligasyonu
<ol><li>Yavruyu (doğum sonrası gün 10) aşağı doğru bir akış başlığında% 4-5 izofluran ile uyuşturun ve bir su banyosu pedinde özel olarak düzenlenmiş kuruluma yerleştirin. Hayvan supine yerleştirin ve ön ayakları kağıt bantla sabitleyin.<ol>
<li>Izofluran akışını% 2-3'e düşürün. Ağrı tepkisi için kuyruğu kıstırın ve işlem boyunca nefes almayı izleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Boynun sol tarafındaki kesi alanını (mandibula ve köprücük kemiği arasında) betadin ve alkol (3 döngü alternatif iyot ve% 70 etanol) ile sterilize edin.</li>
	<li>Mikros makas kullanarak boynun sol tarafında yaklaşık 1 cm uzunluğunda bir kesi yapın. Bir diseksiyon mikroskobu kullanarak, şahdamarını açığa çıkarmak için deri altı dokusunu ve cildi dikkatlice geri çekin. Vagus sinirini (artere yanal çalışan) tanımlamaya ve hassas bir şekilde ayırmaya ve arterden geri çekmeye özen edin.</li>
	<li>Mikroforceps kullanarak arterin altına 5 cm uzunluğunda steril ipek dikiş iplik. Tıkanmış akışa arterin etrafına çift düğümlü bir dikiş bağlayın.</li>
	<li>Fazla dikişi kesin ve deri altı dokusunu ve cildini geri çekerek maruz kalan arteri kapatın. Kesiği kapatmak için veteriner bağını kullanın.</li>
	<li>Hayvanı, ısınan bir şilteye yerleştirilen oda sıcaklığında bir odaya sürekli EEG izlemeye geri yerleştirin. Hazneyi açmamak için yavru çekirdek sıcaklığının nokta kızılötesi sıcaklık kontrollerini alın. Hayvanın hipoksiden önce 1 saat boyunca iyileşmesine izin verin.</li>
</ol>5. EEG ve hipoksi
<ol><li>FiO2'i (ilham alan oksijenin fraksiyonu) bir oksijen monitörü aracılığıyla oda içinde sürekli olarak izleyin.</li>
	<li>Hazneyi % 100 N2 için 60 L / dk N2 ve% 100 O2 için 0.415 L / dk ile yıkayın. Haznedeki oksijen doygunluğu %12'ye ulaştığında, O2 akışını değiştirmeden tutarken N2 akışını 10 L/dk'ya düşürin. Küçük ayarlamalarla FiO2'yi 45 dakika boyunca %8'de koruyun.</li>
	<li>45 dakikalık hipoksi maruziyetinin ardından FiO2'yi %21'e döndürün.</li>
	<li>Yavruların odada iyileşmesini ve hipoksi sonrası 2 saat boyunca EEG'de izlenmesini sağla.</li>
	<li>Kayıt süresi tamamlandıktan sonra, fareleri EEG kaydından çıkarın ve anneye geri dönün.</li>
</ol>6. EEG analizi
<ol><li>EEG dosyasını LabChart Pro'da video ile analiz edin. Kör bir araştırmacının EEG'yi nöbetler ve arka plan desenleri için işaretlemesini söyle17. Nöbetler, net evrim ile yüksek frekanslı ritmik keskin dalga deşarjları (≥3x taban çizgisi) ile 10 saniyeden fazla süren elekrografik bir olay olarak tanımlanır17.</li>
	<li>İkinci bir kör araştırmacı incelemesinin anlaşma için rastgele işaretlenmiş olayları geçirmesini haline geçirin.</li>
	<li>İşaretli her elektrografik olay için ilişkili videoyu gözden geçirin ve yenidoğan kemirgen davranışsal nöbet skoruna göre analiz edin16. Kısaca, bu puan 0-6 arasında değişmektedir (hareketsizlik şiddetli tonik-klonik davranış). Nöbet semiyolojisini daha da karakterize etmek için, yanallık için davranışı analiz edin (multifokal/bilateral hareketler ve odak/tek taraflı vs. karışık).</li>
	<li>Bir güç spektrogramı oluşturun. 1024 veri noktası boyutuna sahip Cosine-Bell veri penceresine sahip hızlı fourier dönüşümü kullanın. %87,5'lik bir pencere çakışması yardımıyla spektrogramda düzgün bir x ekseni oluşturun. Gücü μV218 olarak ifade edin.</li>
</ol>

<ol><li>Vasudevan, C., Levene, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+aetiology+of+neonatal+seizures%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Fetal+%26+Neonatal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and aetiology of neonatal seizures.</a> Seminars in Fetal & Neonatal Medicine. , (2013).</li>
<li>Volpe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+Seizures%5BTitle%5D)+AND+%22Volpe%27s+Neurology+of+the+Newborn%22%5BJournal%5D)">Neonatal Seizures.</a> Volpe's Neurology of the Newborn. , Elsevier. 275-321 (2018).</li>
<li>Shankaran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+EKSNNR.+Childhood+outcomes+after+hypothermia+for+neonatal+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Network EKSNNR. Childhood outcomes after hypothermia for neonatal encephalopathy.</a> New England Journal of Medicine. 366 (22), 2085-2092 (2012).</li>
<li>Pappas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+outcomes+after+neonatal+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Cognitive outcomes after neonatal encephalopathy.</a> Pediatrics. 135 (3), 624-634 (2015).</li>
<li>van Schie, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+motor+and+behavioral+outcome+after+perinatal+hypoxic-ischemic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Paediatric+Neurology%22%5BJournal%5D)">Long-term motor and behavioral outcome after perinatal hypoxic-ischemic encephalopathy.</a> European Journal of Paediatric Neurology. 19 (3), 354-359 (2015).</li>
<li>Rensing, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+analysis+of+developmental+changes+in+electroencephalography+patterns+and+sleep-wake+states+of+the+neonatal+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Longitudinal analysis of developmental changes in electroencephalography patterns and sleep-wake states of the neonatal mouse.</a> PLoS One. 13 (11), 1-17 (2018).</li>
<li>Rice, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals of Neurology. 9 (2), 131-141 (1981).</li>
<li>Burnsed, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-ischemia+and+therapeutic+hypothermia+in+the+neonatal+mouse+brain--a+longitudinal+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-ischemia and therapeutic hypothermia in the neonatal mouse brain--a longitudinal study.</a> PLoS One. 10 (3), 0118889(2015).</li>
<li>Semple, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+development+in+rodents+and+humans%3A+Identifying+benchmarks+of+maturation+and+vulnerability+to+injury+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Brain development in rodents and humans: Identifying benchmarks of maturation and vulnerability to injury across species.</a> Progress in Neurobiology. , 1-16 (2013).</li>
<li>Comi, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gabapentin+neuroprotection+and+seizure+suppression+in+immature+mouse+brain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Gabapentin neuroprotection and seizure suppression in immature mouse brain ischemia.</a> Pediatric Research. 64 (1), 81-85 (2008).</li>
<li>Comi, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+stroke+and+ischemic+seizures+in+the+immature+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Neurology%22%5BJournal%5D)">A new model of stroke and ischemic seizures in the immature mouse.</a> Pediatric Neurology. 31 (4), 254-257 (2004).</li>
<li>Kadam, S. D., White, A. M., Staley, K. J., Dudek, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+Electroencephalographic+Monitoring+with+Radio-Telemetry+in+a+Rat+Model+of+Perinatal+Hypoxia-Ischemia+Reveals+Progressive+Post-Stroke+Epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Continuous Electroencephalographic Monitoring with Radio-Telemetry in a Rat Model of Perinatal Hypoxia-Ischemia Reveals Progressive Post-Stroke Epilepsy.</a> Journal of Neuroscience. 30 (1), 404-415 (2010).</li>
<li>Burnsed, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+Circuit+Activity+during+Neonatal+Hypoxic+-+Ischemic+Seizures+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neuronal Circuit Activity during Neonatal Hypoxic - Ischemic Seizures in Mice.</a> Annals of Neurology. 86, 927-938 (2019).</li>
<li>Sampath, D., White, A. M., Raol, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+neonatal+seizures+in+an+animal+model+of+hypoxic-ischemic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Characterization of neonatal seizures in an animal model of hypoxic-ischemic encephalopathy.</a> Epilepsia. 55 (7), 985-993 (2014).</li>
<li>Sampath, D., Valdez, R., White, A. M., Raol, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticonvulsant+effect+of+flupirtine+in+an+animal+model+of+neonatal+hypoxic-ischemic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Anticonvulsant effect of flupirtine in an animal model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.</a> Neuropharmacology. 123, 126-135 (2017).</li>
<li>Kang, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((and+sex-dependent+susceptibility+to+phenobarbital-resistant+neonatal+seizures%3A+role+of+chloride+co-transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">and sex-dependent susceptibility to phenobarbital-resistant neonatal seizures: role of chloride co-transporters.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9, 1-16 (2015).</li>
<li>Zanelli, S., Goodkin, H. P., Kowalski, S., Kapur, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+transient+acute+hypoxia+on+the+developing+mouse+EEG%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Impact of transient acute hypoxia on the developing mouse EEG.</a> Neurobiology of Disease. 68, 37-46 (2014).</li>
<li>Lewczuk, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EEG+and+behavior+patterns+during+experimental+status+epilepticus%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">EEG and behavior patterns during experimental status epilepticus.</a> Epilepsia. 59 (2), 369-380 (2017).</li>
<li>Wu, D., Martin, L. J., Northington, F. J., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillating+gradient+diffusion+MRI+reveals+unique+microstructural+information+in+normal+and+hypoxia-ischemia+injured+mouse+brains%5BTitle%5D)+AND+%22Magnetic+Resonance+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Oscillating gradient diffusion MRI reveals unique microstructural information in normal and hypoxia-ischemia injured mouse brains.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 72 (5), 1366-1374 (2014).</li>
</ol>

Hipoksik-iskemik nöbetler sırasında yenidoğan farelerde sürekli video-EEG izleme için bir model sunduk. EEG ile birlikte video analizi, nöbet semiyolojisinin karakterizasyonuna izin verir. EEG analizi, güç spektrogramlarının çıkarılmasına ve arka plan genlik analizine izin verir.
Elektrotların doğru ve dikkatli yerleştirilmesi bu protokolde çok önemlidir, çünkü elektrot yerleştirme veya yanlış yerleştirme sırasında yaralanma sonuçları önemli ölçüde etkileyebilir. Yaralanmadan önce normal temel...

Hipoksik iskemik ensefalopati (HIE) yılda 1000 yenidoğanda 1,5'ini etkileyen ve yenidoğan nöbetlerinin en sık nedeni olan bir durumdur1,2. Hayatta kalan bebekler serebral palsi, zihinsel engellilik ve epilepsi gibi çeşitli nörolojik engelliler için risk altındadır3,4,5.
Hayvan modelleri hipoksi iskemi ve yenidoğan nöbetlerinin patofizyolojisini anlamada ve araştırmada kritik bir rol oynar6,7. Modifiye vannucci modeli, doğum sonrası 10 (p10)7,8'de hipoksi iskemisini (HI) indük etmek için kullanılır. Bu yaştaki fare yavruları nörolojik olarak kabaca tam insan yenidoğanı terimine çevirir9.
Bu yaralanma modeli ile birlikte kullanılan sürekli video elektroensefalografi (EEG) izleme, yenidoğan hipoksik iskemik nöbetlerin daha iyi anlaşılmasına ve karakterizasyonuna olanak tanır. Önceki çalışmalar kemirgenlerdeki yenidoğan nöbetlerini analiz etmek için video kayıtları, sınırlı EEG kayıtları ve telemetri EEG kayıtları dahil olmak üzere çeşitli yöntemler kullanmıştır10,11,12,13,14,15,16. Aşağıdaki yazıda, hipoksi-iskemi sırasında fare yavrularında sürekli video EEG kaydetme sürecini derinlemesine ele alıyoruz. Yenidoğan fare yavrularında sürekli video EEG izleme için bu teknik çeşitli hastalık ve nöbet modellerine uygulanabilir.

<table><tbody><tr><td>SURGERY</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ball Point Aplikatörü</td><td>Metrex Research</td><td>8300-F</td><td>i-bond aplikatörü</td></tr><tr><td>Kranioplast (Toz/Reçine)</td><td>Coltene</td><td>H00383</td><td>Perm Reline/Power</td></tr><tr><td>I-Bond</td><td>Kulzer GmbH, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LOOK İpek Sütür</td><td>Cerrahi Uzmanlık Corporation</td><td>SP115</td><td>LOOK SP115 Siyah Örgülü İpek Emilmeyen cerrahi sütür</td></tr><tr><td>RS-5168 Botvin Forseps</td><td>Roboz Cerrahi Alet</td><td>RS5168</td><td>Ameliyat/ligasyon için Forcep</td></tr><tr><td>RS-5138 Graefe Forseps</td><td>Roboz Cerrahi Alet</td><td>RS5138</td><td>Ameliyat/ligasyon için Forcep</td></tr><tr><td>I-Bond Blast Lite için UV ışığı</td><td>First Media</td><td>BL778</td><td>I-bond</td></tr><tr><td>Vannas Mikrodiseksiyon Makası</td> <td>için UV ışığıRoboz Cerrahi Alet</td><td>RS5618</td><td>Ligasyon için Makas</td></tr><tr><td>Vet Bond</td><td>3M Vetbond</td><td>1469SB</td><td>Vet Tutkalı</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>HIPOKSI</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hipoksidial</td><td>Starr Yaşam Bilimleri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oksijen sensörü</td><td>Tıbbi Ürünler</td><td></td><td>MiniOxI- oksijen analizörü / hipoksi teçhizatı için sensör</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><>EEG KAYITI</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>dişi priz konektörü 0.079 "</td><td>Mill-Max Manufacturing Corp</td><td>832-10-024-10-001000</td><td>Digikey Çim Amplifikatöründen Sipariş Edildi</td></tr><tr><td></td><td>Natus Nöroloji Anonim Şirketi</td><td></td><td>Çim Ürünü</td></tr><tr><td>LabChart Pro</td><td>ADI Instruments</td><td></td><td>Yazılımı Sistemi çalıştırmak için</td></tr><tr><td>Erkek Soket Konnektörü 0.079"</td> <td>Mill-Max Manufacturing Corp</td><td>833-43-024-20-001000</td><td>Digikey İşlemsel</td></tr><tr><td>Amplifikatör</td><td>Texas Instruments, Dallas, TX, ABD'den</td> sipariş edildi <td>TLC2274CD</td><td>TLC2274 Dörtlü Düşük Gürültülü Ratıktan Raya İşlemsel</td></tr><tr><td>Amplifikatör İşlemsel Amplifikatör</td><td>Texas Instruments, Dallas, TX, ABD</td><td>TLC2272ACDR</td><td>TLC2274 Dörtlü Düşük Gürültülü Raydan Raya İşlemsel Amplifikatör</td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik tel</td><td>Sistemleri</td><td>791400</td><td>0.005 "Çıplak / 0.008" Kaplamalı 100 ft</td></tr><tr><td>Ultra Esnek Tel</td><td>McMaster-Carr</td><td>9564T1</td><td>36 Çeşitli renklerde gazlı bez teli</td></tr></tbody></table>

yenidoğan farelerde hipoksi-İskemi sırasında sürekli video elektroensefalogram

Continuous Video Electroencephalogram during Hypoxia-Ischemia in Neonatal Mice

Hipoksi iskemi yenidoğan nöbetlerinin en sık nedenidir. Hayvan modelleri, yenidoğan nöbetleri ve hipoksi iskemisinin altında kalan mekanizmaları ve fizyolojiyi anlamak için çok önemlidir. Bu makalede, hipoksi iskemisi sırasında nöbetleri tespit etmek ve EEG arka planını analiz etmek için yenidoğan farelerinde sürekli video elektroensefalogram (EEG) izleme yöntemi açıklanmaktadır. Video ve EEG'nin birlikte kullanılması, nöbet semiyolojisinin tanımlanmasına ve nöbetlerin onaylanmasına izin verir. Bu yöntem ayrıca deneysel zaman dilimi boyunca güç spektrogramlarının ve EEG arka plan desen eğilimlerinin analizine izin verir. Bu hipoksi iskemi modelinde yöntem, yaralanmadan önce EEG kaydının normatif bir taban çizgisi elde etmesine ve yaralanma ve iyileşme sırasında iyileşmesine izin verir. Toplam izleme süresi, yavruların anneden dört saatten uzun süre ayrılamaması ile sınırlıdır. Bu yazıda hipoksik-iskemik nöbetlerin bir modelini kullanmış olsak da, yenidoğan video EEG izleme için bu yöntem kemirgenlerde çeşitli hastalık ve nöbet modellerine uygulanabilir.

Nöbet semiyolojisi
Yenidoğan hipoksi-iskemi maruziyeti farelerde hem genelleştirilmiş hem de odak nöbetleriyle sonuçlanır (Şekil 1A-C). Video EEG kayıtları, elekrografik bulguların videodaki davranışla ilişkilendirilmesini sağlar. Bu davranışlar daha önce yayınlanan yenidoğan kemirgen davranışsal nöbet skoru (BSS)16 kullanılarak puanlanmıştır. BSS'ye ek olarak, olayları odak/tek taraflı, ikili veya karışık olup olm...

Bu makalede hipoksi-iskemi geçiren yenidoğan farelerde birden fazla derinlik elektrodu kullanılarak sürekli video EEG kayıtları için bir yöntem açıklanmaktadır.

Yenidoğan Farelerde Hipoksi-İskemi Sırasında Sürekli Video Elektroensefalogram

Hypoxia ischemia is the most common cause of neonatal seizures. Animal models are crucial for understanding the mechanisms and physiology underlying ...

Hipoksik iskemik ensefalopati neonatal nöbetlerin en sık nedenidir. Hipoksik iskemik nöbetler ve sürekli video elektroensefalografi veya EEG'nin bu fare modeli, yenidoğan nöbetlerinin daha iyi anlaşılmasına ve karakterizasyonuna yardımcı olabilir. Bu teknik, bir yenidoğan yaralanma modelinde yüksek kaliteli video elektroensefalografi kayıtlarının elde edilmesini kolaylaştırır ve yenidoğan nöbetlerinin mekanizmaları, sonuçları ve terapötik testlerle ilgili gelecekteki çalışmalara yardımcı olabilir.Prosedürü gösteren Pravin Wagley olacak. Laboratuvarımdan bir laboratuvar uzmanı. Elektrot implantasyon cerrahisi için.Anestezi uygulanmış bir doğum sonrası dokuzuncu gün faresinde ağrı refleksine yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, fareyi bir burun konisi ile stereotaksik bir aşamaya yerleştirin ve başı sabit tutmak için kulak çubuğunun arka tarafını kullanın. Kafatasındaki kesi alanını üç alternatif betain ve% 70 etanol ovma ile sterilize edin ve kesi bölgesini görünür tutarken fareyi örtmek için fenestre bir örtü kullanın. Kafa derisini gözlerin biraz üstünden ön arkaya doğru açın ve cildin yaklaşık yarım santimetresini geri çekin.Kafayı stereotaksik aşamada yeniden konumlandırın, böylece cilt kafatasını açığa çıkarmak için dışa doğru çekilir ve hidrojen peroksit uygulamak için pamuklu bir bez kullanın. Kafatasını dikkatlice kazıyarak temizlemek için bir neşter bıçağı kullanın. Ve kemiğe yaklaşık 50 mikrolitrelik bir damla yapıştırıcı uygulayın.Yapıştırıcıyı kafatasının üzerine yaymak için aplikatörü kullanın ve yapıştırıcıyı 40 saniye boyunca ultraviyole ışık altına yerleştirin. Yapıştırıcı sertleştiğinde, açıkta kalan bregmayı referans olarak kullanarak koordinatları ölçün. Ve hipokampusun CA1 bölgesinde iki taraflı, parietal kortekste ve beyincikte iki taraflı olarak elektrot delikleri oluşturmak için 32 gauge bir iğne kullanın.Kafatasının yüzeyindeki kanı temizleyin ve dişi soket konektörüne bağlı elektrotları beyne indirmek için stereotaksik kolu kullanın. Her elektrodu beyne implante edin ve elektrotları diş akrilik ile yerine sabitleyin. Kulaklığı ek diş akrilik ile kafatasına yapıştırın.Her yavruya deri altından kilogram başına beş miligram Ketoprofen enjekte edin. Tüm elektrotlar çöpün en az yarısına sabitlendiğinde, yavruları anneye geri verin. Elektrot implantasyonundan 24 saat sonra, her bir hayvanı EEG kaydı için 37 santigrat derece özel yapım bir pleksiglas odasına yerleştirin ve yavruları bir video EEG izleme sistemine bağlamak için esnek, özel yapım bir işlemsel amplifikatör kablosu kullanın.EEG verilerini 1000 Hertz'de bir kilo kazançla sayısallaştırmak için çok kanallı bir diferansiyel amplifikatör kullanın ve EEG sinyalini uygun analiz yazılımında gözden geçirin. Ardından, karotis arter dava prosedürü için hayvanların bağlantısını kesmeden önce 30 dakika boyunca bir yaralanma öncesi başlangıç EEG'si kaydedin. Başlangıç EEG verilerini kaydettikten sonra, boynun sol tarafındaki mandibula ve klavikula arasındaki cildi gösterildiği gibi betain ve etanol ile sterilize edin.Ve boynun sol tarafında yaklaşık bir santimetrelik bir kesi yapın. Yavruyu diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin ve karotis arteri ortaya çıkarmak için deri altı dokusunu ve cildi dikkatlice geri çekin. Arterin altına beş santimetrelik steril bir ipek dikiş parçası yerleştirin.Vagus sinirini tanımlayın ve siniri arterden hassas bir şekilde ayırın ve geri çekin. Sütürü sadece arterin altında olacak şekilde manevra yapın. Vagus sinirini tanımladıktan sonra, siniri arterden hassas bir şekilde ayırın ve geri çekin ve arterin altına beş santimetrelik steril bir ipek dikiş parçası geçirmek için mikro forseps kullanın.Akışı tıkamak için arterin etrafına çift düğümlü bir dikiş atın ve fazla dikişi kesin. Açıkta kalan arterin üzerindeki deri altı dokusunu ve cildi değiştirin ve kesiyi kapatmak için Vetbond kullanın. Daha sonra hayvanı, ısınma yatağına yerleştirilen oda sıcaklığında bir odada sürekli EEG izlemeye geri koyun ve odanın açılmasını önlemek için yavru çekirdek sıcaklığının kızılötesi sıcaklık kontrollerini yapın.Sürekli solunan oksijen izleme fraksiyonu ile yavruların bir saat boyunca iyileşmesine izin verdikten sonra, hazneyi dakikada 60 litre %100 nitrojen ve dakikada 0,415 litre %100 oksijen ile yıkayın. Odadaki oksijen doygunluğu %12'ye ulaştığında, oksijen akışını değiştirmeden nitrojen akışını dakikada 10 litreye düşürün. Gerektiğinde küçük ayarlamalar yaparak, solunan oksijen oranını 45 dakika boyunca %8'de tutun.45 dakikalık hipoksiye maruz kaldıktan sonra, solunan oksijen oranını %21'e geri getirin ve yavruların iki saat boyunca EEG izleme ile odada iyileşmesine izin verin. Kayıt süresinin sonunda, fareleri EEG sisteminden ayırın ve yavruları anneye geri verin. Video EEG kayıtları, elektrografik bulguların videodaki davranışla ilişkilendirilmesini sağlar.Bu modelde gözlemlenen olayların çoğu fokal tek taraflı veya karma davranışları içerir. Hipoksik dönem boyunca, farelerin bir alt kümesi tipik olarak kompulsif olmayan nöbet aktivitesi sergiler, bu sırada yavrular EEG'de sürekli nöbet aktivitesi ile hareketsizdir. Bu analizde, temel aktivite, P 10 fare yavrularında daha önce açıklanan arka plana benzerdi.Davadan sonra ve hipoksinin başlamasından önce, farelerin bir alt kümesi konvülsif nöbetler sergiledi. Hipoksi indüksiyonunu takiben, EEG'deki arka plan amplitüdü azaldı. Ve aralıklı başak dalgası deşarjları patlamaları sergilendi, ardından baskılama yapıldı.Fareler, polis spike dalgaları ile daha karmaşık ve sık hale gelen ritmik spike dalga deşarjları olarak bastırılmış bir arka plandan ortaya çıkan elektrografik nöbetler sergiledi. Hipoksi sırasında, güç spektrogram analizi, iskemik ve kontralateral hemisferler arasındaki asimetriler için dikkate değerdir. İskemik hemisfer bir patlama bastırma paterni sergiler ve kontralateral hemisfer bastırılmış bir arka plan sergiler.Yeniden oksijenlenme ve iyileşme sırasında, farelerin bir alt kümesi, kayıt süresinin geri kalanında nöbet geçirmeye devam eder. EEG arka planı, hipoksi sonrası başlangıç seviyesine kıyasla baskılanır ve hipoksi sonrası kayıt döneminde kademeli bir iyileşme gözlenir. Yenidoğan yavrularla çalışırken hassasiyet çok önemlidir.Ayrıca cerrahi işlemlerden sonra yavruların gruplar halinde anne ile birlikte tekrar yerleştirilmesine özellikle dikkat edilmelidir. Video elektroensefalografi, yenidoğan yavrularında histopatoloji, görüntüleme ve davranışla birlikte yenidoğan nöbetlerinin yaralanma cerrahisi ve davranışsal sonuçlar üzerindeki etkisini incelemek için kullanılabilir.

continuous-video-electroencephalogram-during-hypoxia-ischemia

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Hipoksik-iskemik beyin hasarı için postnatal sıçan modelinde, insan yenidoğan hipoksik iskemik ensefalopati (HIE) köklü bir model. Bu makalede, doğum sonrası sıçan Yavrularda HIE modeli açıklanmaktadır.

Perinatal İskemi Hipoksik İskemik Ensefalopati Modeli

Büyük hayvan modellerinde neonatal asfiksi fizyoloji ve farmakoloji sınavında iyi translasyonel değerlere sahiptir. Yenidoğan domuz kullanarak, sistemik ve bölgesel hemodinami, biyokimyasal ve patolojik yollar ve korelasyon ile oksijen taşınması eğitim avantajlarına sahip neonatal asfiksi taklit etmek için bir deney protokolü geliştirmektir.

Yenidoğan Asfiksi Bir Domuz Modeli

Video, yenidoğan hipoksik-iskemik beyin hasarını incelemek için bir fare modeli oluşturma prosedürünü göstermektedir. Cerrahi olarak iskemiyi indükleme ve beyin hasarını şiddetlendirmek için hayvanı hipoksiye maruz bırakma adımlarını ana hatlarıyla belirtir. Son olarak, ortaya çıkan beyin lezyonlarının nasıl değerlendirileceğini gösterir ve fare modelinin daha fazla bilimsel araştırma için hazırlanmasını sağlar.

Yenidoğan Hipoksik-İskemik Beyin Hasarının Fare Modelinin Oluşturulması

Kaynak: Ouyang, Y., et al. Fare Serebral Hipoksi-iskemisi Sırasında Eş Zamanlı PET/MRG Görüntüleme. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, eşzamanlı pozitron emisyon tomografisi (PET) ve manyetik rezonans görüntüleme (MRI) yoluyla serebral hipoksi hasarını değerlendirmek için bir teknik göstermektedir. Anestezi uygulanmış bir fare, ortak karotis arter (CCA) ligasyonuna tabi tutulur, bu da bir beyin yarım küresine kan akışını azaltır ve onu hipoksiye bağlı yaralanmaya yatkın hale getirir. PET ve MRG...

Bir fare modelinde serebral hipoksi-iskeminin neden olduğu beyin hasarının görüntülenmesi

Perinatal asfiksiyi takiben hipoksik-iskemik ensefalopati hayvan modelleri kullanılarak incelenebilir. Yenidoğan hipoksik-iskemik ensefalopatisinin bir domuz yavrusu modeli oluşturmak için gerekli prosedürleri gösteriyoruz.

Yenidoğan Hipoksik-İskemik Ensefalopati A Piglet Modeli

Burada, insan hastalığının yenidoğan kemirgen modellerinde elektroensefalogram (EEG) için kablosuz bir etkinleştirme teknolojisinin kullanımını gösteriyoruz. Telemetri ile, engelleyici bağlantılar yoktur, bu nedenle doğal davranışlara izin verir.

Epoch Kablosuz Verici Sisteminin Kullanılması İnsan Hastalığı Küçük Kemirgen Modelleri Uzun süreli Sürekli EEG İzleme

Tek taraflı Karotis arter tıkanıklığı postnatal gününde gerçekleştirilen 7-10 CD-1 fare pups yenidoğan hipoksik-iskemik (hı) model oluşturmak ve HI beyin hasarı etkileri araştırıldı. Neurobehavioral işlevleri olmayan çalışan normal farelere göre bu farelerde görmüştük.

Yenidoğan hipoksik-iskemik beyin hasarı, fare modeli neurobehavioral değerlendirmesi

Burada, biyo sinyalleri kullanarak aynı anda video, farelerde kalp ve beyin kaydetmek için bir iletişim kuralı mevcut elektroansefalografi (EEG) ve Elektrokardiyografi (EKG). Ayrıca elde edilen EEG-ECG kayıtları nöbetler, EEG spektral güç, kardiyak fonksiyon ve kalp hızı değişkenliği için analiz yöntemleri açıklar.

Eş zamanlı Video-EEG-EKG Neurocardiac disfonksiyon epilepsi fare modelleri tanımlamak için izleme

Burada, anestezik kullanımını gerektirmeyen erken doğum sonrası fareler için optimize edilmiş noninvaziv bir elektrokardiyografi (EKG) protokolü salıyoruz.

Perinatal Farede Noninvaziv Elektrokardiyografi

Bu protokol, 7 günlük yenidoğan farelerde sol ventrikül morfolojisinin, fonksiyonunun ve koroner kan akımının ekokardiyografik değerlendirmesini açıklamaktadır.

Yenidoğan Farelerde Sol Ventrikül Yapısının, Fonksiyonunun ve Koroner Akımın Ekokardiyografik Karakterizasyonu

Öğrenin, yenidoğan farelerde hipoksi-iskemi sırasında sürekli video EEG kaydı yöntemini. Bu teknik, nöbet mekanizmalarını anlamak için elektrografik bulguları davranışlarla ilişkilendirir.

Yenidoğan Farelerde Hipoksi-İskemi Sırasında Sürekli Video Elektroensefalogram

Daha fazla video keşfet