Name: MCF7 HücreLi Monokatmanlarda Hücre-Substrat Adezyon Alanı ve Hücre Şekli Dağılımlarının Ölçülmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: Öğrenin, MCF7 meme kanseri hücrelerinde odak adezyon alanlarını ve hücre şekli indeksini konfokal mikroskopi ve ImageJ kullanarak nasıl ölçeceğinizi. Bu yöntem hücre morfolojisi ve adezyon özelliklerinin güvenilir analizi için sağlam bir protokol sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Polonya Ulusal Bilim Merkezi tarafından 2014/14/M/NZ1/00437 sayılı hibe kapsamında desteklenmiştir.

1. Hazırlık adımları
<ol><li>Enfluent monolayers elde etmek için hücre tohumlama<ol>
<li>Tohumlamadan önce, kollajen I (veya tercih edilen diğer ECM bileşeni) ile 4-wells oda slayt kuyuları kat. Kollajen I kaplama için ticari bir protokoluygulayın: 8 μg/cm2konsantrasyonda https://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/articles/biofiles/collagen-product-protocols.html.</li>
		<li>Tohum 400.000 hücreleri bir kuyuya 4-iyi oda slayt.</li>
		<li>Kültür hücreleri için 24 saat (veya daha uzun, deneysel uç noktalara bağlı olarak) boyama önce, bir kuvözde 37 °C, 5% CO2. Bu adım hücre-hücre temaslarının olgunlaşmasını ve monolayers oluşumunu sağlar.</li>
		<li></ol></li><li> <ol><li><li><li><li><li><li><li><li><li> </li></ol></li><li><ol><li> </li><li><ol><li><li> </li></ol></li><li><ol><li><li><li><li></ol></li></ol></li></ol><ol><li> <ol><li><li></li><li></li><li></li><li> </li><li><ol><li>&amp;W</li><li></li></ol></li><li></li><li></li><li></li><li><ol><li><li><li></li><li></li><li><li> </li></ol></li></ol></li><li><ol><li><ol><li></li><li></li><li></li></ol></li><li> <ol><li><li></li><li> </li><li></li><li> </li></ol></li></ol></li></ol><ol><li><ol><li> </li><li></ol></li><li><ol><li><ol><li> <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/61461/61461equ01.jpg"> </li></ol></li><li><ol><li> </li></ol></li><li><ol><li><li><li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li>Li, D. S., Zimmermann, J., Levine, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+closure+of+circular+wounds+through+coordinated+collective+motion%5BTitle%5D)+AND+%22Search+Results%22%5BJournal%5D)">Modeling closure of circular wounds through coordinated collective motion.</a> Search Results. 13 (1), 016006(2016).</li>
<li>Ilina, O., Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+collective+cell+migration+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of collective cell migration at a glance.</a> Journal of Cell Science. 122, Pt 18 3203-3208 (2009).</li>
<li>Ladoux, B., Mege, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanobiology+of+collective+cell+behaviours%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Mechanobiology of collective cell behaviours.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 18 (12), 743-757 (2017).</li>
<li>Stossi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+throughput+microscopy+identifies+bisphenol+AP%2C+a+bisphenol+A+analog%2C+as+a+novel+AR+down-regulator%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">High throughput microscopy identifies bisphenol AP, a bisphenol A analog, as a novel AR down-regulator.</a> Oncotarget. 7 (13), 16962-16974 (2016).</li>
<li>Legland, D., Arganda-Carreras, I., Andrey, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MorphoLibJ%3A+integrated+library+and+plugins+for+mathematical+morphology+with+ImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">MorphoLibJ: integrated library and plugins for mathematical morphology with ImageJ.</a> Bioinformatics. 32 (22), 3532-3534 (2016).</li>
<li>Balcerak, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HAX1+impact+on+collective+cell+migration%2C+cell+adhesion%2C+and+cell+shape+is+linked+to+the+regulation+of+actomyosin+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">HAX1 impact on collective cell migration, cell adhesion, and cell shape is linked to the regulation of actomyosin contractility.</a> Molecular Biology of the Cell. 30 (25), 3024-3036 (2019).</li>
<li>Buskermolen, A. B. C., Kurniawan, N. A., Bouten, C. V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+automated+quantitative+analysis+of+cell%2C+nucleus+and+focal+adhesion+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">An automated quantitative analysis of cell, nucleus and focal adhesion morphology.</a> PLoS One. 13 (3), 0195201(2018).</li>
<li>Fokkelman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+adhesome+screen+identifies+critical+modulators+of+focal+adhesion+dynamics%2C+cellular+traction+forces+and+cell+migration+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Cellular adhesome screen identifies critical modulators of focal adhesion dynamics, cellular traction forces and cell migration behaviour.</a> Scientific Reports. 6, 31707(2016).</li>
<li>Horzum, U., Ozdil, B., Pesen-Okvur, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Step-by-step+quantitative+analysis+of+focal+adhesions%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Step-by-step quantitative analysis of focal adhesions.</a> MethodsX. 1, 56-59 (2014).</li>
<li>Kim, D. H., Wirtz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+adhesion+size+uniquely+predicts+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Focal adhesion size uniquely predicts cell migration.</a> FASEB Journal. 27 (4), 1351-1361 (2013).</li>
<li>Pincus, Z., Theriot, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+quantitative+methods+for+cell-shape+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Comparison of quantitative methods for cell-shape analysis.</a> Journal of Microscopy. 227, Pt 2 140-156 (2007).</li>
<li>Tsygankov, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CellGeo%3A+a+computational+platform+for+the+analysis+of+shape+changes+in+cells+with+complex+geometries%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">CellGeo: a computational platform for the analysis of shape changes in cells with complex geometries.</a> Journal of Cell Biology. 204 (3), 443-460 (2014).</li>
<li>Tiryaki, V. M., Adia-Nimuwa, U., Ayres, V. M., Ahmed, I., Shreiber, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Texture-based+segmentation+and+a+new+cell+shape+index+for+quantitative+analysis+of+cell+spreading+in+AFM+images%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Texture-based segmentation and a new cell shape index for quantitative analysis of cell spreading in AFM images.</a> Cytometry A. 87 (12), 1090-1100 (2015).</li>
<li>Tong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+micropatterning+reveals+the+modulatory+effect+of+cell+shape+on+proliferation+through+intracellular+calcium+transients%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Cell micropatterning reveals the modulatory effect of cell shape on proliferation through intracellular calcium transients.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1864 (12), 2389-2401 (2017).</li>
<li>Vartanian, K. B., Kirkpatrick, S. J., Hanson, S. R., Hinds, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+cytoskeletal+alignment+independent+of+fluid+shear+stress+on+micropatterned+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell cytoskeletal alignment independent of fluid shear stress on micropatterned surfaces.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 371 (4), 787-792 (2008).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Hücre-hücre ve hücre-substrat adezyonu epitel hücrelerinin doğal özelliklerini oluşturur ve doku morfogenezi ve embriogenezinde kritik rol oynar. Erişkin dokularda hücre tabakasının mekanik özelliklerinin uygun şekilde düzenlenmesi homeostazı korumada ve tümör progresyonu ve metastaz gibi patolojik yanıtların önlenmesinde çok önemlidir. Fokal yapışıklıkların boyutu ve sayısı hücre-substrat yapışıklığı gücüne bağlıdır, hücre şekli ise kontraktil kuvvetlere bağlıdır ve hücre-hücre temaslarının durumuyla ilişkilidir.
<p...

Epitel hücre monolayers hücre-hücre ve hücre-substrat adezyon yanı sıra kontraktil kuvvetler ve gerginlikler önemli parametreleri temsil ve uygun denge birim1,2,3genel bütünlüğüne katkıda bir kolektif olarak hareket . Bu nedenle, bu parametrelerin değerlendirilmesi hücre tabakasının geçerli durumunu belirlemek için bir yol temsil eder.
Burada açıklanan iki yöntem yapışık, epitel hücrelerinin (bu durumda MCF7 meme kanseri hücre hattı) konfluent monolayers iki boyutlu bir analizitemsil eder. Analiz, Z ekseninde farklı bölgelerden gelen konfokal görüntüler (tek Z dilimleri) kullanılarak gerçekleştirilir; odak yapışma (FA) ölçümleri için bir substrata yakın bazal bölge ve hücre şekli ölçümleri için apikal bölge. Sunulan yöntemler nispeten basit ve standart laboratuvar teknikleri ve açık kaynak yazılım gerektirir. Konfokal mikroskopi bu protokol için yeterlidir, bu nedenle daha özel TIRF (Total Internal Reflection Fluorescence) mikroskopi sayılmadan yapılabilir. Böylece protokol nispeten standart bir laboratuvar ortamında uygulanabilir. Yöntemlerin doğruluğu sınırlı olsa da, odak yapışması ve hücre şeklindeki temel farklılıkları ayırt edebilirler.
Burada açıklanan her iki yöntem de ImageJ kullanılarak yapılan hücre culturing, immunostaining, confokal görüntüleme ve görüntü analizi gibi standart deneysel prosedürlerden oluşmaktadır. Ancak, uygun işlevlere sahip herhangi bir görüntü işleme yazılımı kullanılabilir. Sunulan yöntemler farmakolojik tedavi veya minimal genetik modifikasyon tarafından meydana gelen değişiklikleri izleyebilir ve karşılaştırabilirsiniz. Bu yöntemlerin sınırlı hassasiyeti nedeniyle kesin değerlerin elde edilmesi önerilmez. Birçok görüntünün ölçümlerini kolaylaştırmak için iki otomatik makro dahil edildi.

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 594</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A32740</td><td>keçi tavşan önleyici, 1:500</td></tr><tr><td>Amonyum klorür</td><td>Sigma</td><td>A9434</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>BioShop</td><td>ALB001.500</td><td></td></tr><tr><td>Baldır derisinden kollajen</td><td>Sigma</td><td>C9791-10MG</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma</td><td>D9542</td><td>1:10000 (H2O'da 1 mg / mL stok), nükleik asit boyama</td></tr><tr><td>DMEM + GlutaMAX, 1 g/L D-Glikoz, Piruvat</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>21885-025</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10270-136</td><td></td></tr><tr><td>Bağlantı plakoglobin</td><td>Hücre Sinyalizasyonu</td><td>2309S</td><td>tavşan, 1:400</td></tr><tr><td>Laminer akış kabini sınıf 2</td><td>Alpina</td><td></td><td>standart ekipman</td></tr><tr><td>MCF7 tabanlıHAX1KD hücre hattı</td><td>Varşova Ulusal Onkoloji Enstitüsü'nde kurulan hücre hattı, Balcerak ve ark., 2019</td><td></td><td>MCF7 hücre hattı ileHAX1knockdown</td></tr><tr><td>MCF7 hücre hattı (KONTROL)</td><td>ATCC</td><td>ATCC HTB-22</td><td>epitelyal, yapışık meme kanseri hücre hattı</td></tr><tr><td>Olympus CK2 ışık mikroskobu</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paxillin</td><td>Abcam</td><td>ab32084</td><td>tavşan, 1:250, Y113</td></tr><tr><td>PBS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Phalloidin-TRITC konjuge</td><td>Sigma</td><td>P1951</td><td>1:400 (DMSO'da stok 5 mg / mL), aktin etiketleme</td></tr><tr><td></td><td>PTX Sigma</td><td>T7402-1MG</td><td></td></tr><tr><td>TBST &ndash; NaCl</td><td>Sigma</td><td><güçlü>S9888</güçlü></td><td></td></tr><tr><td>TBST &ndash; Trizma tabanı</td><td>Sigma</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>9002-93-11</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss LSM800 Konfokal mikroskop</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mcf7 hücreli monokatmanlarda hücre-substrat adezyon alanı ve hücre Şekli dağılımlarının Ölçülmesi

Quantification of Cell-Substrate Adhesion Area and Cell Shape Distributions in MCF7 Cell Monolayers

Burada sunulan yöntemler, birden fazla uygun şekilde boyanmış konfokal görüntülerden konfluent yapışık hücre monolayers bazı parametreleri ölçmek: odak yapışıklıkların sayısı ve boyutu bir fonksiyonu olarak substrat yapışma, ve hücre şekli, hücre şekli indeksi ve diğer şekil tanımlayıcıları ile karakterize. Fokal yapışıklıklar paxillin boyama ile görselleştirildi ve hücre-hücre sınırları birleştiğinde plakoglobin ve aktin ile işaretlendi. Hücre kültürü ve boyama yöntemleri standarttı; görüntüler tek odak düzlemlerini temsil; görüntü analizi kamuya açık görüntü işleme yazılımı kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Sunulan protokoller, odak yapışıklıklarının sayısını ve boyutunu ve monokatmanlarda hücre şekli dağılımındaki farklılıkları ölçmek için kullanılır, ancak boyanabilir (örneğin, mitokondri veya çekirdek) diğer farklı hücresel yapının boyut ve şeklinin ölçülmesi için yeniden kullanılabilir. Bu parametrelerin değerlendirilmesi, hücre adezyonu ve hücre şeklini etkileyen actomiyozin kontraktürü de dahil olmak üzere yapışık hücre tabakasındaki dinamik kuvvetlerin karakterizasyonunda önemlidir.

Odak yapışma analizi HAX1 geninin nakavt daha önce fokal yapışıklıkları etkilediği gösterilmiştir6. Hücreler kollajen I-kaplı yüzeyde 48 saat boyunca kültürlendi. Fokal yapışma proteini paxillin ile boyanmış üç bağımsız deneyden(HAX1 KD) MCF7 kontrol hücrelerinin ve MCF7 hücrelerinin görüntüleri konfokal mikroskop kullanılarak elde edildi (bazal bölgeden tek odak düzleminden/Z-diliminden görüntü). Her hücre hattından yaklaşık 2.000-2.500 hücreden fa'l...

Makalede, 1) odak yapışıklıklarının büyüklüğü ve sayısı ile 2) hücre şekil indeksi ve MCF7 hücrelerinin eşzamanlı monolayers konfokal görüntülerinden dağılımının nicelikselleştirilmesi açıklanmaktadır.

MCF7 HücreLi Monokatmanlarda Hücre-Substrat Adezyon Alanı ve Hücre Şekli Dağılımlarının Ölçülmesi

The methods presented here quantify some parameters of confluent adherent cell monolayers from multiple appropriately stained confocal images: adhesion to ...

Bu protokol, iki boyutlu görüntüsünden hücre içi yapının alanının, çevresinin ve şeklinin nicelemesini sağlar. Bu teknik hızlı ve kolaydır, sadece standart laboratuvar ayarları ve konfokal mikroskop gerektirir ve açık kaynak yazılım kullanır. Prosedürü gösteren Anna Balcerak, benim laboratuvarımdan doktora öğrencisi olacak.37 derece santigrat derece ve beş derece karbondioksit inkübatör 24 saatlik bir kültür için dört iyi kollajen bir kaplamalı oda slayt iyi başına kültür orta 0,5 mililitre beşinci hücrelere dört kez 10 tohumlama ile başlayın. Ertesi sabah, en az %90 eşzamanlı monokatmanın varlığını doğrulamak için optik ters mikroskop kullanın ve tek z dilimi görüntüleri elde etmek için konfokal mikroskop kullanın. Odak yapışma analizi için ImageJ'deki görüntüleri açın ve görüntü ölçeğini pikselolarak ayarlamak için analiz, ölçek ayarlama, ölçek kaldırma ve genel iDosya adını ve ilgi alanının ölçüm seçeneklerini eklemek için, analiz et ve ölçümleri ayarla ve alanı kontrol et ve etiket seçeneklerini görüntüle. Arka planı çıkarmak için işlemi seçin ve arka planı çıkarın. Yuvarlanan top yarıçapını 50 piksele ayarlayın ve kayan paraboliyi kontrol edin.En küçük ilgi alanının alanını belirlemek için, en küçük tek odak yapışmasını ana hatlarını belirleyin ve alanı ölçmek için analiz et ve ölç'ü tıklatın. En az 20 ilgi alanı seçildiğinde ve ölçüldüğünde, elde edilen sonuçların ortalamasını hesaplayın ve kaydedin. Üst sınırı tipik bir hücre alanının %25'ine ayarlayın.Görüntüyü ikili olarak vermek için görüntüyü tıklatın, ayarlayın ve eşiği tıklatın ve varsayılan, siyah beyaz ve koyu arka planı denetleyin. İlgi çekici bölgelerin sayısını ve alanlarını ölçmek için, parçacığı analiz etme ve analiz etme ve piksel birimlerini kontrol etme, sonuçları görüntüleme, sonuçları netle ve özetle. Dilim, sayım ve toplam alan ortalama boyutu verilerini özet penceresinden tercih edilen veri yönetim programına aktarın.Odak yapışma ölçümü için, odak yapışması ImageJ makrosunu açın ve en küçük ilgi alanı nın alanını en küçük ilgi alanı olarak girin. Eşik türü değerini manuel veya otomatik olarak ayarlayın ve değişiklikleri kaydedin. Ardından ImageJ'den makroyu arayın ve işlenecek görüntüyü seçin.Manuel hücre şekli analizi için, uygun bir görüntü işleme yazılımı programında bir görüntü açın ve ölçülecek parametreleri seçin. Hücre kenarlıklarını, tercih edilen bağlantı proteinleri tarafından işaretlenen el ile ifade etmek için serbest el seçim aracını kullanın. Seçilen parametreler her hücre için otomatik olarak hesaplanır.Tüm hücreler ana hatlarıyla ana hatlarıyla belirtildiğinde, edit, seçim ve yöneticiye ekleyin'i seçin. Yalnızca kesintisiz kenarlıkları olan tamamen görünür hücrelerin tamamı seçilmelidir. Ölçümü yapmak için, ilgi alanı yöneticisinin bulunduğu bölgenin sol kutusunda görünen tüm sayıları işaretleyin ve ölçüyü tıklatın.Sonuçlar sonuç kutusunda görünür ve tercih edilen elektronik tabloya aktarılabilir. Otomatik hücre analizi, çok sayıda hücrenin sayısallaştırılmasını kolaylaştırır. Her yeni hücre türü için, parametreleri belirlemek için önce makroyu çalıştırın.Makro tamamlandığında, hücre boyutu sınırlarını ayarla'yı seçin. En küçük ve en büyük hücrelerin etiketini tıklatın ve ölçü'ye tıklayın. En küçük hücrenin ve en büyük hücre değişkenlerinin değerini ayarlayın ve değişiklikleri kaydedin.Makro pencerelerinin tümünü kapatın ve gri tonlamada işlenecek görüntüyü seçin. Sonra makroyu yeniden çalıştırın. Makro, hücre şekli dizini, en boy oranı ve ilgi alanları seçim listesi verilerini içeren sonuçların bir tablosunu sağlar.Burada, son numaralı anahatlar ve odak yapışmasının bindirmeleri de dahil olmak üzere ImageJ ile sayılan odak yapışıklıklarının temsili görüntüleri, hem kontrol hem de nakavt hücre hatları için orijinal görüntüile odak yapışmaanahatlarını gözlemleyebilir. Bu analizde gösterildiği gibi, knockdown hücreleri hücre başına yapışıklıkların daha fazla sayıda yanı sıra hücre hattı hücreleri kontrol göre boyutu daha büyük yapışıklıklar gösterdi. Bu görüntülerde tedavi edilmeyen ve kemoterapötik olarak tedavi edilen hücre monolayers'ın temsili bölgeleri gösterilmiştir.Anahat hücreleri hücre şekil indeks değerlerine göre karakterize edildi, örneğin bu analizde son depo kutusunda bir artış ve tedavi edilmeyen kontrollere kıyasla ilaçla tedavi edilen hücreler için ana zirvelerin düzlemesi gösterildi. Daha sonra her hücre kültürü için bir frekans dağılımı ve kümülatif dağıtım oluşturulabilir. Gösterildiği gibi monolayers grayscale görüntüleme analiz ve görüntüleme 12 alanlardan 512 hücrelerin niceliksel hücre şekli indeksi göreli bir frekans dağılımı ortaya izin verdi.Bu protokolün çalışması için, mümkün olan en iyi kalitede görüntüleri kullanmak önemlidir. Uygun hücre tohumlama, boyama ve görüntüleme yeterli deneysel kalitede görüntüleri sağlamalıdır.

quantification-cell-substrate-adhesion-area-cell-shape-distributions

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Hem molekülleri etkileşen hücrelerin yüzeylerinde demirlemiş olan reseptör-ligand etkileşimi kinetiği ölçmek için bir yapışma frekans tahlil açıklanmıştır. Bu mekanik tabanlı test mikropipet basınçlı bir insan adezyon sensörü olarak kırmızı kan hücresi ve integrin αLβ2 ve hücrelerarası adezyon molekülü-1 reseptörleri ve ligandlar etkileşim olarak kullanarak örneklenir.

Yapışma için Frekans Testi Yerinde</emHücre-Hücre Arayüz Çapraz Junctional Moleküler Etkileşimler> Kinetik Analizi

Biz invadopodia aracılı matriks yıkımı görselleştirmek için floresan jelatin kaplı mikroskop lamelleri üretmek için prototip yöntem açıklanmaktadır. Mevcut yazılımını kullanarak hesaplama teknikleri karışık bir popülasyon içindeki ve bütün mikroskobik alanı kapsayan çok hücreli grupları için tek hücreler ile matris proteolizin sonuç seviyeleri ölçülmesi için sunulmuştur.

Tek ve Çok hücreli Bağlamlarda Invadopodia aracılı Ekstrasellüler Matriks Proteoliz Kantitatif Ölçümü

Burada, hücre-substrat empedansı ve canlı hücre görüntüleme analizleri ile hücre adezyonu ve adezyonu giderme süreçlerini invaziv olmayan bir şekilde yüksek zamansal çözünürlükle sürekli olarak ölçmek için bir protokol sunuyoruz. Bu yaklaşımlar, matris modifikasyonu tarafından tetiklenen hücre adezyon/adezyonu kaldırma süreçlerinin dinamiklerini ve bunların adezyona bağlı sinyalleşme olaylarıyla zamansal ilişkisini ortaya koymaktadır.

Matrix Modifikasyon Bağlı Hücresel Yapışma ve De-yapışma Real-time Değişiklikleri Tedbir Hücre-substrat Empedans ve Canlı Hücre Görüntüleme kullanma

Bir endotel hücre tek tabakası içindeki gerçek yapışkan hücre sayısının kantitasyonuna izin veren bir in vitro yöntem sunuyoruz.

Endotel Hücre yapışma miktarının belirlenmesi<em&gt; In Vitro</em

Bu akış yapışma deneyi T hücresi epitel hücre etkileşimleri basit, çok etkili bir model sağlar. Bir şırınga pompası kayma gerilimi oluşturmak için kullanılır ve konfokal mikroskopi ölçümü için görüntü yakalar. Bu çalışmaların amacı, etkili akış koşulları kullanılarak T hücre yapışmasını ölçümüdür.

T Lenfosit-Yapışma Molekülü Etkileşimleri Çalışmaları Yapışma Altında Kesme Stres Testi

Hücre farklılaşması, iki matris bileşimi ve substrat malzeme özellikleri de dahil olmak üzere mikro-çevresel faktörlerin, bir ana bilgisayar tarafından kontrol edilir. Biz burada hücre farklılaşması ve microenvironmental bağlamında bir fonksiyonu olarak biyomekanik hücre substrat etkileşimleri hem değerlendirmek için çekiş kuvvet mikroskobu ile birlikte hücre mikrodiziler kullanan bir tekniği açıklar.

Hücre farklılaşması ve Çekiş Kuvvetleri Korelatif Analizi için Yüksek verim Hücre Mikroarray Platformu

Bu çalışmada yardımcı programı ve kolaylığı nicel hücre zarı uzantısı ölçüm ve hücre yapışkanlı kapasite için onun korelasyon gösterir. Temsil edici bir örnek olarak, biz burada Dickkopf ilgili biraz protein 3 (DKK3) artan lobopodia oluşumu teşvik ve vitroAdrenokortikal Karsinom hücre adhesiveness hücreleri göstermek.

Hücre zarının uzantıları ve rolleri kanser hücre adezyon dinamikleri eğitim karakterizasyonu

HMCA tabanlı görüntüleme plaka işgali tahlil performans için sunulmaktadır. Bu plaka üç boyutlu (3D) tümör pulcuklarının oluşumu ve hücre dışı matriks (ECM) içine kanser hücre işgalinin ölçüm kolaylaştırır. İstila tahlil miktar yarı otomatik analizi ile elde edilir.

Kanser hücre işgali ve Anti-metastatik uyuşturucu kullanarak hidrojel mikro-odası dizi (HMCA) eleme Analizi-tabak dayalı

Burada, lenf nodu (LN) kriyokesilere yapışkan tümör hücrelerinin sayısallaştırılmasını sağlayan basit ve ucuz bir yöntemi tanımlıyoruz. LN-yapışık tümör hücreleri ışık mikroskobu ile kolayca tanımlanır ve floresan tabanlı bir yöntemle doğrulanır, tümör hücre bağlayıcılığını LN parenkime bağlayan bir adezyon indeksi verir.

Lenf Nodu Kriyosiyonlarında Tümör Hücre Adezyonunun Ölçülmesi

Bu protokol, hızlı hücre yuvarlaması yapışması sırasında yapışma olaylarını görüntüleyene kadar yapışma ayak izi testini gerçekleştirmek için deneysel prosedürleri sunar.

Yapışma Ayak İzi Tahlili ile Hücre Yuvarlanmasında Görüntüleme Moleküler Yapışması

Öğrenin, MCF7 meme kanseri hücrelerinde odak adezyon alanlarını ve hücre şekli indeksini konfokal mikroskopi ve ImageJ kullanarak nasıl ölçeceğinizi. Bu yöntem hücre morfolojisi ve adezyon özelliklerinin güvenilir analizi için sağlam bir protokol sunar.

MCF7 HücreLi Monokatmanlarda Hücre-Substrat Adezyon Alanı ve Hücre Şekli Dağılımlarının Ölçülmesi

Daha fazla video keşfet