Name: İnsan Doğal Katil Hücre Metabolizmasının Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Öğrenin, ekstraselüler akış analizörü kullanarak primer insan NK hücrelerinde glikoliz ve mitokondriyal solunumu ölçme yöntemini. Obezite ve kanser gibi hastalıklarda immün yanıtları anlamak için yüksek verimli tarama olanağı sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar destek ve tartışma için Dr Michael N. Sack (Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü) teşekkür ederiz. Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri, Ulusal Kanser Enstitüsü ve Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü Intramural Araştırma Programları tarafından desteklenmiştir. JT MICINN (İspanya) Ramon y Cajal programı (hibe RYC2018-026050-I) tarafından desteklenir.

<ol><li>Long, E. O., Kim, H. S., Liu, D., Peterson, M. E., Rajagopalan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+natural+killer+cell+responses%3A+integration+of+signals+for+activation+and+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Controlling natural killer cell responses: integration of signals for activation and inhibition.</a> Annual Review of Immunology. 31, 227-258 (2013).</li>
<li>Caligiuri, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human natural killer cells.</a> Blood. 112 (3), 461-469 (2008).</li>
<li>Anton, O. M., Vielkind, S., Peterson, M. E., Tagaya, Y., Long, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NK+Cell+Proliferation+Induced+by+IL-15+Transpresentation+Is+Negatively+Regulated+by+Inhibitory+Receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">NK Cell Proliferation Induced by IL-15 Transpresentation Is Negatively Regulated by Inhibitory Receptors.</a> Journal of Immunology. 195 (10), 4810-4821 (2015).</li>
<li>Henney, C. S., Kuribayashi, K., Kern, D. E., Gillis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-2+augments+natural+killer+cell+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Interleukin-2 augments natural killer cell activity.</a> Nature. 291 (5813), 335-338 (1981).</li>
<li>Anton, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-endocytosis+of+intact+IL-15Ralpha-IL-15+complex+from+presenting+cells+into+NK+cells+favors+signaling+for+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Trans-endocytosis of intact IL-15Ralpha-IL-15 complex from presenting cells into NK cells favors signaling for proliferation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (1), 522-531 (2020).</li>
<li>Marcais, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+metabolic+checkpoint+kinase+mTOR+is+essential+for+IL-15+signaling+during+the+development+and+activation+of+NK+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">The metabolic checkpoint kinase mTOR is essential for IL-15 signaling during the development and activation of NK cells.</a> Nature Immunology. 15 (8), 749-757 (2014).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Nicholls, D. G., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+Maximum+Glycolytic+Capacity+Using+Extracellular+Flux+Measurements%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Determining Maximum Glycolytic Capacity Using Extracellular Flux Measurements.</a> PloS One. 11 (3), 0152016(2016).</li>
<li>Brand, M. D., Nicholls, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+mitochondrial+dysfunction+in+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Journal%22%5BJournal%5D)">Assessing mitochondrial dysfunction in cells.</a> Biochemical Journal. 435 (2), 297-312 (2011).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+Proton+Leak+Plays+a+Critical+Role+in+Pathogenesis+of+Cardiovascular+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial Proton Leak Plays a Critical Role in Pathogenesis of Cardiovascular Diseases.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 982, 359-370 (2017).</li>
<li>Terren, I., Orrantia, A., Vitalle, J., Zenarruzabeitia, O., Borrego, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NK+Cell+Metabolism+and+Tumor+Microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">NK Cell Metabolism and Tumor Microenvironment.</a> Frontiers in Immunology. 10, 2278(2019).</li>
<li>Felices, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+treatment+with+IL-15+exhausts+human+NK+cells+via+a+metabolic+defect%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation+Insight%22%5BJournal%5D)">Continuous treatment with IL-15 exhausts human NK cells via a metabolic defect.</a> Journal of Clinical Investigation Insight. 3 (3), 96219(2018).</li>
<li>Miller, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+First-in-Human+Phase+I+Study+of+Subcutaneous+Outpatient+Recombinant+Human+IL15+%28rhIL15%29+in+Adults+with+Advanced+Solid+Tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A First-in-Human Phase I Study of Subcutaneous Outpatient Recombinant Human IL15 (rhIL15) in Adults with Advanced Solid Tumors.</a> Clinical Cancer Research. 24 (7), 1525-1535 (2018).</li>
<li>Conlon, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL15+by+Continuous+Intravenous+Infusion+to+Adult+Patients+with+Solid+Tumors+in+a+Phase+I+Trial+Induced+Dramatic+NK-Cell+Subset+Expansion%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">IL15 by Continuous Intravenous Infusion to Adult Patients with Solid Tumors in a Phase I Trial Induced Dramatic NK-Cell Subset Expansion.</a> Clinical Cancer Research. 25 (16), 4945-4954 (2019).</li>
<li>Dubois, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL15+Infusion+of+Cancer+Patients+Expands+the+Subpopulation+of+Cytotoxic+CD56%28bright%29+NK+Cells+and+Increases+NK-Cell+Cytokine+Release+Capabilities%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology+Research%22%5BJournal%5D)">IL15 Infusion of Cancer Patients Expands the Subpopulation of Cytotoxic CD56(bright) NK Cells and Increases NK-Cell Cytokine Release Capabilities.</a> Cancer Immunology Research. 5 (10), 929-938 (2017).</li>
<li>Traba, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fasting+and+refeeding+differentially+regulate+NLRP3+inflammasome+activation+in+human+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Fasting and refeeding differentially regulate NLRP3 inflammasome activation in human subjects.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (12), 4592-4600 (2015).</li>
<li>Traba, J., Miozzo, P., Akkaya, B., Pierce, S. K., Akkaya, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Optimized+Protocol+to+Analyze+Glycolysis+and+Mitochondrial+Respiration+in+Lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54918(2016).</li>
<li>Horan, M. P., Pichaud, N., Ballard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+quantifying+mitochondrial+dysfunction+in+complex+diseases+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Journals+of+Gerontology.+Series+A%2C+Biological+Sciences+and+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Review: quantifying mitochondrial dysfunction in complex diseases of aging.</a> Journals of Gerontology. Series A, Biological Sciences and Medical Sciences. 67 (10), 1022-1035 (2012).</li>
<li>Tognarelli, S., Jacobs, B., Staiger, N., Ullrich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+Cytometry-based+Assay+for+the+Monitoring+of+NK+Cell+Functions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Flow Cytometry-based Assay for the Monitoring of NK Cell Functions.</a> Journal of Visualized Experiments. (116), e54615(2016).</li>
<li>Theorell, J., Bryceson, Y. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Intracellular+Ca%282%2B%29+Mobilization+in+Human+NK+Cell+Subsets+by+Flow+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Analysis of Intracellular Ca(2+) Mobilization in Human NK Cell Subsets by Flow Cytometry.</a> Methods in Molecular Biology. 1441, 117-130 (2016).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Gerencser, A. A., Nicholls, D. G., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+intracellular+rates+of+glycolytic+and+oxidative+ATP+production+and+consumption+using+extracellular+flux+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Quantifying intracellular rates of glycolytic and oxidative ATP production and consumption using extracellular flux measurements.</a> Journal of Biological Chemistry. 292 (17), 7189-7207 (2017).</li>
<li>O'Brien, K. L., Finlay, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunometabolism+and+natural+killer+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunometabolism and natural killer cell responses.</a> Nature Reviews: Immunology. 19 (5), 282-290 (2019).</li>
<li>Ahn, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+the+mitochondrial+deacetylase+Sirt3+in+regulating+energy+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A role for the mitochondrial deacetylase Sirt3 in regulating energy homeostasis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (38), 14447-14452 (2008).</li>
<li>Stram, A. R., Payne, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-translational+modifications+in+mitochondria%3A+protein+signaling+in+the+powerhouse%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Post-translational modifications in mitochondria: protein signaling in the powerhouse.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 73 (21), 4063-4073 (2016).</li>
<li>Armstrong, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+alters+mitochondrial+bioenergetics+and+modifies+pancreatic+cell+death+independently+of+cyclophilin+D%2C+resulting+in+an+apoptosis-to-necrosis+shift%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress alters mitochondrial bioenergetics and modifies pancreatic cell death independently of cyclophilin D, resulting in an apoptosis-to-necrosis shift.</a> Journal of Biological Chemistry. 293 (21), 8032-8047 (2018).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Goncalves, R. L. S., Gerencser, A. A., Nicholls, D. G., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contributions+of+respiration+and+glycolysis+to+extracellular+acid+production%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">The contributions of respiration and glycolysis to extracellular acid production.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1847 (2), 171-181 (2015).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+and+Analysis+of+Extracellular+Acid+Production+to+Determine+Glycolytic+Rate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Measurement and Analysis of Extracellular Acid Production to Determine Glycolytic Rate.</a> Journal of Visualized Experiments. (106), e53464(2015).</li>
<li>Lichtshtein, D., Kaback, H. R., Blume, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+lipophilic+cation+for+determination+of+membrane+potential+in+neuroblastoma-glioma+hybrid+cell+suspensions%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Use of a lipophilic cation for determination of membrane potential in neuroblastoma-glioma hybrid cell suspensions.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 76 (2), 650-654 (1979).</li>
<li>Michelet, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+reprogramming+of+natural+killer+cells+in+obesity+limits+antitumor+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Metabolic reprogramming of natural killer cells in obesity limits antitumor responses.</a> Nature Immunology. 19 (12), 1330-1340 (2018).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan.

Bu yazıda, saf ve canlı birincil insan NK hücrelerini periferik kandan verimli bir şekilde izole etmek ve elde etmek için bir protokol oluşturduk. Ayrıca, oksijen tüketimi ve hücre dışı asitleşme oranı ile değerlendirilen bu NK hücrelerinin metabolik aktivitesinin ölçümü için koşulları da ekstrasellüler akı analizörü kullanarak optimize ettik. Diğer solunum yöntemleri ile karşılaştırıldığında, hücre dışı akı analizörü hızlıdır, az sayıda hücre gerektirir ve yüksek iş akışı taramalarına olanak tanır. Ancak, reaktifler pah...

Doğal Killer (NK) hücreleri anti-tümör ve anti-viral tepkiler aracılık doğuştan lenfositler vardır. NK hücreleri insan periferik kantüm lenfositlerin% 5-15'ini oluşturur, ve dalak bulunabilir, karaciğer, kemik iliği ve lenf düğümleri. NK hücreleri, T-hücre reseptörleri (TCR) veya B-hücre reseptörleri (BCR) gibi polimorfik klodik reseptörleri ifade etmez. Buna karşılık, onların sitolitik fonksiyonların aktivasyonu bir hedef hücre yüzeyinde değişken ligandlar tanımak reseptörlerinin katılımı ile istenir1,2.
Periferik kandan izole edilmiş istirahat insan NK hücreleri insan serumu ile desteklenen kültür ortamında birkaç gün hayatta kalabilir. IL-15 veya IL-2 gibi sitokinler tarafından NK hücrelerinin aktivasyonu çoğalması ve öldürme yeteneğinin bir artış için hücreleri sürücüler, diğer etkileri arasında3,4,5. Çeşitli çalışmalar NK hücre aktivasyonu ve metabolik aktivite değişiklikleri arasında doğrudan bir korelasyon göstermiştir6. Bu metabolik değişiklikler enerji ve biyosentez açısından hücrelerin özel gereksinimlerini karşılamak için mukadder.
Aerobik hücreler ve organizmalar katabolizma ve karbonhidrat, yağ ve proteinlerin oksidasyon içeren kimyasal reaksiyonlar bir dizi yoluyla enerji elde. Glikoliz, trikarboksilik asit (TCA) döngüsü ve oksidatif fosforilasyon kombinasyonu sayesinde ökaryotik hücreler ATP talebinin büyük bir kısmını karşılar ve hücre büyümesi ve çoğalması için gerekli olan makromoleküller için yapı taşları olarak gerekli ara ları elde ederler. Glikoli (Şekil 1A) hücreye glikoz girişi ile başlar. Sitosolda glikoz fosforilasyona ve pirüvatöre dönüştürülür (glukoz molekülü başına 2 kat atp net üretimi ile), laktat indirgenebilir veya asetil-CoA'ya dönüştürülmek üzere mitokondriye taşınabilir ve TCA döngüsüne girer. TCA döngüsü asetil-CoA daha molekülleri ile yakıt lı bisiklet devam ediyor ve CO2 üretir (sonunda hücre dışında yayılır ve, orta H2O ile tepki vererek, orta asitleşme yol açacaktır karbonik asit üretecek) ve NADH, elektron taşıma zincirine elektron bağışı sorumlu molekül (ETC). Elektronlar farklı protein kompleksleri ile seyahat ve nihayet oksijen tarafından kabul edilir. Bu kompleksler (I, III ve IV) mitokondriyal matristen membranlar arası uzaya H+ pompalar. Üretilen elektrokimyasal degradenin bir sonucu olarak, H+ karmaşık V (ATP-synthase) aracılığıyla matristekrar girecek, POTANSIYEL enerji ATP üretimi içine birikmiş yatırım.
Hem glikoliz hem de mitokondriyal solunum inhibitörleri kullanılarak farklı noktalarda engellenebilir. Bu inhibitörlerin bilgisi ve kullanımı hücre dışı akı testinin geliştirilmesinin temelini oluşturmuştur. Hücre dışı akı analizörü, pH ve oksijen gibi iki basit parametreyi gerçek zamanlı olarak ölçerek glikoliz ve mitokondriyal solunum oranını 96 kuyulu bir plakada algılar. Glikoliz stres testi glikozsuz bazal bir ortamda yapılır (Şekil 1B)7. Hücre dışı asitleşme hızının (ECAR) ilk ölçümleri glikoliden bağımsız asitleşmenin göstergesidir. Glikolitik olmayan asitleşme olarak adlandırılır ve TCA tarafından üretilen CO2 ile ilişkilidir ve daha önce de açıklandığı gibi, H+ (TCA'ya bağlı ECAR) üretmek için ortamda H2O ile birleşir. İlk enjeksiyon glikoz kullanımını teşvik etmek ve glikoli artırmak için glikoz olduğunu. İkinci enjeksiyon her iki rotenon birleştirir, karmaşık bir I inhibitörü, ve antimisin A, Kompleks III inhibitörü birlikte, ETC hücreleri hücresel ATP düzeylerini korumak için glikoliz aktive ederek mitokondriyal ATP üretiminde bu dramatik azalmaya yanıt, ve bu bazal durumda hücre tarafından kullanılmayan glikoliz miktarını temsil eder ama potansiyel ATP talep artışlara yanıt olarak işe olabilir (compens compentory glycos). Üçüncü enjeksiyon glukoz analog udur 2-Deoksiglukoz (DG), hangi enzim hekkokinaz için bir substrat olarak glikoz ile rekabet. Bu fosforilasyonun ürünü olan 2-deoksiglukoz-6-fosfat pirüvata dönüştürülemez ve bu nedenle glikoliz bloke edilir ve bu da ECAR'ı minimuma indirir. Bu noktada ölçülen ECAR glikoliz veya solunum aktivitesi ne kadar az kalıntı glikoliz tam olarak 2-DG tarafından inhibe olmayan diğer ekstrasellüler asitleşme kaynaklarını içerir (post 2-DG-asitleşme).
Mitokondriyal stres testi glikozlu bir ortamda yapılır (Şekil 1C)8. Oksijen tüketim hızının (OCR) ilk ölçümleri mitokondriyal solunumun (bazal solunum) taban çizgisine karşılık gelir. İlk enjeksiyon, ATP synthase (kompleks V) yoluyla protonların dönüşünü engelleyen, ATP sentezini engelleyen ve böylece solunum kompleksleri yoluyla daha fazla proton pompalanmasını önleyen mitokondriyal membranı hızla hiperpolarize eden ve OCR'de azalmaya yol açan oligomisindir. Temel solunum ile oligomisin ilavesi ile verilen değer arasındaki karşılaştırma ATP'ye bağlı solunumu temsil eder. Oksijen tüketiminin kalan oligomisin duyarsız oranı proton sızıntısı denir, hangi adenin nükleotid translocase gibi iç mitokondriyal membran lipid bilayer veya proteinler yoluyla proton akışını temsil eder9. İkinci enjeksiyon uncoupler 2,4-dinitrofenol (DNP), mitokondriyal matriks içine H+ büyük bir giriş indükler bir iyonofor, mitokondriyal membran depolarizasyon ve mitokondriyal ATP sentezinin bozulmasına yol açar. Hücreler membran potansiyelini (maksimal solunum kapasitesi) kurtarmak için beyhude bir girişim de elektron taşıma ve oksijen tüketimi oranını maksimum seviyelere artırarak proton-güdük kuvvetin dağılmasına yanıt verir. Maksimal solunum kapasitesi ve bazal solunum arasındaki fark hücrenin yedek solunum kapasitesi, bazal durumda ATP üretmek için hücre tarafından kullanılmayan solunum miktarını temsil eder ama potansiyel OLARAK ATP talebi artışlara yanıt olarak işe olabilir8. Üçüncü enjeksiyon rotenon ve antimisin A bir kombinasyonudur. Bu enjeksiyon ETC'yi tamamen durdurur ve OCR en düşük seviyesine iner, kalan oksijen tüketimi mitokondriyal değildir (NADPH-oksidazların neden olduğu vb.).
Metabolik yollardaki değişiklikler bir şekilde NK hücrelerinin işleyişini tahmin edebilir, bu in vitro sitokinler ile NK hücrelerinin sürekli aktivasyonu farklı metabolik yollar 10 çalışma ile NK hücre yorgunluğu yol açabileceği ileri sürülmüştür10,11. NK hücremetabolik durumu ve fonksiyonu arasındaki korelasyon kanser immünoterapisi açısından çok önemlidir. Bu alanda, IL-15 infüzyonu ile NK hücrelerinin aktivasyonu, tek başına veya monoklonal terapötik antikorlar ile birlikte tümör hücre öldürme geliştirmek için test edilmiştir12,13,14. Bu tedavi stratejilerine yanıt olarak NK hücrelerinin metabolik durumunun bilinmesi, NK hücre aktivasyon durumunun ve öldürme fonksiyonunun değerli bir belirleyicisini sağlayacaktır.
Monosit, T ve B hücreleri gibi diğer miyeloid ve lenfoid hücrelerde metabolik yolların çalışması15 tanımlanmış ve optimize edilmiş yöntemler16olarak yayınlanmıştır. Bu protokolde, hem yüksek sayıda saf ve canlı NK hücresi sağlayan bir NK izolasyon protokolünü hem de hücre dışı akı analizörü kullanarak metabolik aktiviteyi ölçmek için optimize edilmiş bir protokolü birleştiren bir yöntem salıyoruz. Burada bu istirahat ve IL-15 aktif insan NK hücrelerinde metabolik değişikliklerin çalışması için geçerli bir yöntem olduğunu göstermektedir. Hücre dışı akı testi için, hücre numarası ve ilaç konsantrasyonları gibi parametreler test edilmiş ve optimize edilmiştir. Diğer solunum yöntemi ile karşılaştırıldığında, ekstrasellüler akı analizörü tam otomatik ve gerçek zamanlı olarak test etmek mümkün, hücrelerin çok düşük miktarlarda, aynı anda 92 örnek, ve böylece nispeten hızlı bir şekilde yüksek iş çıkışları taramaları sağlar (birden fazla örnek ve çoğaltmalar ile)17.
Bu yöntem NK hücre metabolizması inceleyerek NK hücre fonksiyonunu değerlendirmek isteyen araştırmacılar tarafından kullanılabilir. Diğer sitokinler, antikorlar veya çözünür uyaranlar tarafından aktive edilen hücrelere de uygulanabilir.

<table><tbody><tr><td>2-Deoksi-D-glikoz (2-DG)</td><td>MilliporeSigma</td><td>D8375-5G</td><td>Glikolür stres testi enjektör bileşiği</td></tr><tr><td>2,4-Dinotrofenol (2,4-DNP)</td><td>MilliporeSigma</td><td>D198501</td><td>ETC birleştirici / mitokondriyal stres testi enjektör bileşiği</td></tr><tr><td>96 Kuyulu Hücre Kültürü Plakası / Kapaklı Yuvarlak Alt</td><td>Costar</td><td>3799</td><td>NK hücre kültürü</td></tr><tr><td>Antimisin A</td><td>MilliporeSigma</td><td>A8674</td><td>Kompleks III inhibitörü / glikoliz ve mitokondriyal stres testi enjektör bileşiği</td></tr><tr><td>BD FACSDIVA Yazılımı</td><td>BD Biosciences Akış</td><td></td><td>verisi toplama</td></tr><tr><td>BD LSR Fortessa BD</td><td>Biosciences</td><td></td><td>Akış verisi toplama</td></tr><tr><td>Cell-Tak</td><td>Corning</td><td>354240</td><td>Hücre yapıştırıcısı</td></tr><tr><td>CyQUANT hücre proliferasyon testi</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C7026</td><td>DNA kantitasyonu için hücre proliferasyon testi. Hücre parçalama tamponu ve CyQUANT GR boya</td></tr><tr><td>içerir EasySep İnsan CD3 Pozitif Seçim Kiti II</td><td>Kök hücre teknolojileri</td><td>17851</td><td>PBMC'lerden NK hücre izolasyonu</td></tr><tr><td>EasySep İnsan NK hücre Zenginleştirme Kiti</td><td>Kök hücre teknolojileri</td><td>19055</td><td>PBMC'lerden NK hücre izolasyonu</td></tr><tr><td>EasySep Mıknatıs</td><td>Kök hücre teknolojileri</td><td>18001</td><td>PBMC'lerden NK hücre izolasyonu</td></tr><tr><td>EDTA 0.5 M, pH 8</td><td>Kalite Biyolojik</td><td>10128-446</td><td>NK satış ayırma tamponu</td></tr><tr><td>FACS tüpleri</td><td>Falcon-Fisher Scientific</td><td>352235</td><td>Akış sitometrisi deneyi</td></tr><tr><td>Falcon 50 ml Konik tüpler</td><td>Falcon-Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td>NK hücre ayırma</td></tr><tr><td>Fetal Buzağı Serumu (FCS)</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td>NK hücre ayırma tamponu</td></tr><tr><td>FlowJo Yazılımı</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Akış verileri analizi</td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>MilliporeSigma</td><td>G8270</td><td>Mitokondriyal stres testi ortamının bileşeni. Glikoliz stres testi enjektör bileşiği</td></tr><tr><td>Halt Proteaz İnhibitörü Kokteyli</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>78429</td><td>Proteaz inhibitörü 100X. RIPA lizis tamponunda kullanım</td></tr><tr><td>İnsan IL-15</td><td>Peprotech</td><td>200-15-50ug</td><td>NK hücre stimülasyonu</td></tr><tr><td>İnsan serumu (HS)</td><td>Valley Biomedical</td><td>9C0539</td><td>NK hücre kültürü ortamı takviyesi</td></tr><tr><td>IMDM</td><td>Gibco</td><td>12440053</td><td>NK hücresi kültür ortamı</td></tr><tr><td>L-Glutamin (200 mM)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25030-081</td><td>Stres testi ortamının bileşeni</td></tr><tr><td>CANLI/ÖLÜ Sabitlenebilir Aqua Ölü Hücre Leke Kiti</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>L34965</td><td>Akış sitometrisi boyama için canlılık boyası</td></tr><tr><td>LSM</td><td>mpbio</td><td>50494X</td><td>PBMC'lerin insan kanından ayrılması</td></tr><tr><td>Fare anti-insan CD3 BV711</td><td>BD Biosciences</td><td>563725</td><td>T hücresi akış sitometrisi boyama</td></tr><tr><td>Fare anti-insan CD56 PE</td><td>BD Pharmingen</td><td>555516</td><td>NK akış sitometrisi boyama</td></tr><tr><td>Fare anti-insan NKp46 PE</td><td>BD Pharmingen</td><td>557991</td><td>NK akış sitometrisi boyama</td></tr><tr><td>Oligomisin</td><td>MilliporeSigma</td><td>75351</td><td>Kompleks V inhibitörü / mitokondriyal stres testi enjektör bileşiği</td></tr><tr><td>PBS pH 7.4</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td>NK hücresi ayırma tamponu</td></tr><tr><td>Pierce BCA Protein Test Kiti</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>23225</td><td>Protein konsantrasyonunun belirlenmesi için</td></tr><tr><td>RIPA Tamponu</td><td>Boston BioProducts</td><td>BP-115</td><td>Hücre lizisi</td></tr><tr><td>Rotenone</td><td>MilliporeSigma</td><td>R8875</td><td>Kompleks II inhibitörü / glikoliz ve mitokondriyal stres testi enjektör bileşiği</td></tr><tr><td>Denizatı Dalga Kontrol Cihazı Yazılımı</td><td>Agilent</td><td></td><td>Denizatı XFe96 Analizörü için Kontrolör</td></tr><tr><td>Denizatı Dalga Masaüstü Yazılımı</td><td>Agilent</td><td></td><td>Veri analizi için</td></tr><tr><td>Denizatı XF Temel Orta</td><td>Agilent</td><td>102353-100</td><td>Hücre Dışı Akı tahlili baz ortamı</td></tr><tr><td>Denizatı XFe96 Analizörü</td><td>Agilent</td><td></td><td>Hücre Dışı Akı Analizörü</td></tr><tr><td>Denizatı XFe96 FluxPak</td><td>Agilent</td><td>102416-100</td><td>20 XF96 hücre kültürü plakası, 18 XFe96 sensör kartuşu, bileşikleri tahlil kartuşuna aktarmak için yükleme kılavuzları ve 1 şişe kalibrant çözeltisi (500 ml) içerir.</td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat</td><td>MilliporeSigma</td><td>S5761</td><td>Cell-Tak çözeltisini hazırlamak için</td></tr><tr><td>Sodyum piruvat (100 mM)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11360-070</td><td>Mitokondriyal stres testi ortamının bileşeni</td></tr></tbody></table>

İnsan doğal katil hücre metabolizmasının analizi

Analysis of Human Natural Killer Cell Metabolism

Doğal Killer (NK) hücreleri esas olarak doğuştan gelen anti-tümör ve anti-viral immün yanıtlar aracılık ve sağkalım teşvik etmek sitokinler ve diğer uyaranların çeşitli yanıt, hücresel çoğalma, interferon gama gibi sitokinlerin üretimi (IFNγ) ve / veya sitotoksisite programları. Sitokin stimülasyon ile NK hücre aktivasyonu onların biyoenerjik ve biyosentetik gereksinimlerini desteklemek için metabolik yolların önemli bir remodeling gerektirir. Bozulmuş NK hücre metabolizmasının obezite ve kanser de dahil olmak üzere kronik hastalıkların bir dizi ile ilişkili olduğunu düşündüren kanıtlar büyük bir vücut vardır, Hangi NK hücre metabolizmasını belirlemek için bir yöntemin kullanılabilirliğinin klinik önemini vurgulamaktadır. Burada, insan NK hücrelerinin enerji metabolizmasındaki değişiklikleri izlemek için bir araç olarak glikoliz ve mitokondriyal oksijen tüketiminin gerçek zamanlı ölçümlerine olanak tanıyan bir platform olan hücre dışı akı analizörü nün kullanımını açıklıyoruz. Burada açıklanan yöntem aynı zamanda il-15 gibi sitokinler ile NK hücrelerinin uyarılmasından sonra metabolik değişikliklerin izlenmesi için izin verir, şu anda klinik çalışmaların geniş bir yelpazede araştırılmaktadır bir sistem.

NK hücrelerinin periferik kandan izolasyonu saf ve canlı bir popülasyon sağlar
Hücre dışı akı teşpini kuyudaki H+ ve O2 konsantrasyonunun ölçümü ne dayanır ve farklı hücre popülasyonları veya canlılıkları arasında ayrım yapmaz. Bu nedenle, ilgi hücresinin son derece saf ve canlı bir nüfus elde etmek bu deneylerde başarılı olmak için önemli bir adım oldu.
NK hücrelerinin periferik kandan izolasyonu bölüm 2'de belirtildiği gibi g...

Bu yazıda, periferik kandan izole edilen primer insan Doğal Öldürücü (NK) hücrelerinde glikoliz ve mitokondriyal solunumu ölçmek için bir yöntem, istirahatte veya IL15 kaynaklı aktivasyonu takiben açıklıyoruz. Açıklanan protokol kolayca birincil insan NK hücreleri diğer sitokinler veya çözünür uyaranlar tarafından aktive genişletilebilir.

İnsan Doğal Katil Hücre Metabolizmasının Analizi

Natural Killer (NK) cells mediate mainly innate anti-tumor and anti-viral immune responses and respond to a variety of cytokines and other stimuli to ...

Bu yöntem doğal öldürücü hücre metabolizmasının belirlenmesiiçin izin verir. Oksijen tüketimini ve hücre dışı ortamdaki pH değişimlerini ölçerek aktivasyonda önemli bir parametredir. Hücre dışı akı analizörünün avantajı, tam otomatik olması ve düşük miktarlarda hücre ile gerçek zamanlı olarak 92 numuneyi test edebilmesidir.Böylece yüksek iş elde ekranlar sağlar. Kliniğimizde glikoliz ve inky hücrelerde solunumu belirlemek için geçerli bir yöntem çok önemlidir. Obezite ve kanser gibi birçok hastalık olduğu için hücre metabolizması bozuldu.50 mililitrelik konik tüp içine lenfosit ayırma orta 20 mililitre pipetting ile başlayın. Tüpü 30 derecelik açıda tutarken, orta üzerinde 20 mililitre kan pipeti yavaşça. İki sıvı arasında görünür ve iyi tanımlanmış bir arayüz oluşturma.Tüpleri 1000 kez 25 dakika santrifüj edin.Sonra tüpleri dikkatlice santrifüjden çıkarıp rafa koyun. LSM ve plazma arasındaki arabirimde dikkat çekici bir hücre tabakasının varlığını kontrol edin. 10 mililitrelik plastik pipetle mononükleer hücre tabakasını hafifçe aspire edin ve yeni bir 50 mililitrelik konik tüpe yerleştirin.Mononükleer hücreleri 45 mililitre PBS ile iki kez yıkayın. Ve onları 800 kez G'de beş dakika santrifüj edin. Doğal öldürücü hücreleri veya engaves izole etmek için, PVM denizleri saymak ve mililitre başına sekizinci hücrelere bir kez 10 NK ayırma tampon onları yeniden askıya.Sonra yeni bir 50 mililitre tüp içine hücre süspansiyon 10 mililitre aktarın. NK hücre izolasyonantikor karışımı 500 mikrolitre ekleyin. Ve 10 mikrolitre anti CD üç pozitif izolasyon antikor karışımı PBMCs için.Ve onları 10 dakika oda sıcaklığında kuluçkaya yatırın. Vortex manyetik boncuklar ve PBMCs ve antikorlar için bir mililitre ekleyin. Daha sonra MIGS'i oda sıcaklığında ara sıra karıştırarak 10 dakika kuluçkaya yatırın.35 mililitre NK izolasyon tamponu ekleyin ve tüpü mıknatısın üzerine 15 dakika yerleştirin. 50 mililitrelik plastik pipetle tüpün kenarlarına veya dibine dokunmadan supernatant'ı dikkatlice toplayın. Hücreleri say ve 5 dakika boyunca 800 kez G santrifüj.Çözünür koridor 15 ile NK hücreleri uyarmak için, imdm 100 mikrolitre içinde 750, 000 hücreleri bir 96 iyi plaka bir kuyuda% 10 HS içeren. ImDM'de mililitre başına 15 ila bir mikrogram ve %10 HS insan koridoru seyreltin. Ve hücrelere seyreltilmiş insan koridoru 15 100 mikrolitre ekleyin.Bir kontrol örneğini uyarılmamış hücrelerle onarın ve her iki örneği de 37 santigrat derecede kuvöze yerleştirin. 48 saat boyunca hücreleri uyarmak sonra ekstrasellüler akı tayini gerçekleştirmek. Deneyden bir gün önce, analizciyi açın ve 37 santigrat dereceye kadar ısınmasını sağlar.Sansür kartuşu paketini açın ve kartuş'u yardımcı plakadan ayırın. Daha sonra yardımcı plakanın her kuyuya 200 mikrolitre kalibrasyon çözeltisi ekleyin. Ve sensörlerin tamamen batırılmış olduğundan emin olmak için merkezi kartuşu geri koyun.Optimum sonuçlar için kartuş bir gecede 37 santigrat derecede karbondioksitsiz bir kuluçka makinesinde inkübün. Bu da düzgün bir şekilde nemlendirildi. Yapışkan kaplı bir bıçak hazırlamak için, plakanın her kuyusundaki hücre yapışkan çözeltisinin 25 mikrolitresi.Ve oda sıcaklığında 20 dakika kuluçkaya yattı. Daha sonra çözeltiyi çıkarın ve plakayı kuyu başına 200 mikrolitre steril su ile iki kez yıkayın. Kuyuların kuruması için plakayı hücre kültürü başlığı içinde 15 dakika açık tutun.Önceden yalıtılmış NK hücreleri beş dakika için 200 kez G ekleyin santrifüj. Sonra supernatants kaldırmak ve ısıtılmış mitokondriyal stres testi orta veya glikoliz stres testi orta hücreleri yıkayın. Hücreleri tekrar peletleyin ve aynı ortamda tercih edilen hücre konsantrasyonuna geri uzaklaştırın.180 mikrolitre hücre süspansiyonu her şeyi de tsayme plakasına yerleştirin. Arka plan düzeltme için kontrol kuyuları olarak a bir, A 12 H bir ve H 12 kuyuları kullanın. Bu Wells Kuluçka için 180 mikrolitre sayak orta ekleme 30 dakika boyunca 37 santigrat derece bir karbondioksit içermeyen kuluçka plaka.Plakayı 200 kez G'de beş dakika santrifüj edin. Daha sonra mikroskop altındaki hücreleri gözlemleyin ve kuyunun dibinde bir mano tabakası oluşturabileceklerini kontrol edin. Hücreleri 25 dakika daha kuluçkaya yatırın.37 santigrat derecesıcak çalışma çözümleri. Ve gerekirse 7.4 onların pH'ı hazırla. Mitokondriyal stres testi veya sulu sansür kartuşu A, B ve C panolarına glikoliz stres testi için önceden hazırlanmış bileşikleri yükleyin Programı kurarken yüklü sansür kartuşu geri kuvöze koyun.Hücre dışı akı test protokolünü ayarlamak için yazılımı açın ve ön işlem koşullarını tanımlamak için Grup tanımlarını kullanın. Benzer koşullara sahip kuyu gruplarını belirtmek için Plaka haritası sekmesini kullanın Ayrıca arka plan düzeltmeve boş kuyuları gösterir. Ardından programı protokoller sekmesinde ayarlayın.Programı başlatın ve sensör kartuşu ve yardımcı plakayı tepsiye yerleştirin. Kalibrasyon adımından sonra, asay plakası için kalibrasyon plakasını ekli hücrelerle değiştirin. Çalıştırma tamamlandıktan sonra verileri alın ve analiz edin.NK hücrelerinin saflığını ve canlılığını değerlendirmek için. PVM denizlerinden küçük Alec Watt ve izole NK hücre popülasyonu akış sitometrisi ile boyandı ve analiz edildi. NK hücre popülasyonunun saflığı CD üç ve CD 56 veya NKP 46'ya karşı çift kalarak kurulmuştur.İnsan NK hücreleri için mitokondriyal oksijen tüketim oranı lots burada gösterilmiştir. Beklendiği gibi I hücre numaraları daha yüksek OCR değerleri görüntülenir. Hücre sayıları da kuyudaki DNA veya protein miktarı ile doğrusal ilişkili.Öte yandan daha yüksek hücre numaraları optimal değildi. Çünkü DNP'nin eklenmesiyle kuyudaki oksijen konsantrasyonu her döngüde tamamen tükenmişti. Bu da OCR'nin doğru hesaplanmasını engelledi.İnsan NK hücrelerinde, 100 mikromolar DNP optimal doz olarak bulundu. Her kuyu başına 750, 000 NK hücreli tipik bir mitokondriyal stres testi deneyi burada gösterilmiştir. Bu testte Oligomisin oksijen tüketiminde dramatik bir azalmaya yol açar.Ve ECAR'da artış. Glikoliye geçiş ivediliği ve hücresel ATP seviyelerini koruma çabasını temsil ediyor. NK hücrelerinin koridor 15 ile aktivasyonu hem mitokondriyal oksijen tüketiminde hem de hücre dışı asitleşmede artışa neden oldu.Bazal Maksimal ve ATP bağlantılı solunum artmış ancak proton sızıntısı veya non mitokondriyal solunum. Ayrıca, OCR/ECA oranı azaldı IL 15 stimülasyonu ndan sonra glikolitik metabolizmaya geçiş olduğunu gösteren. Bu protokolü gerçekleştirirken, en uygun hücre sayısını belirlemek ve kablosuz ların konsantrasyonu titre etmek için saf ve sağlıklı bir hücre popülasyonu elde etmek çok önemlidir.

analysis-of-human-natural-killer-cell-metabolism

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, hücre dışı akı analizörü kullanarak aktive edilmiş insan NK hücrelerinde enerji metabolizmasını analiz etme yöntemini göstermektedir. Elektron taşıma zinciri komplekslerinin farklı inhibitörleri, oksijen tüketim oranı veya OCR ile ölçülen ATP sentezini etkiler ve hücresel metabolizma ve biyoenerjetik hakkında bilgi sağlar.

Hücre dışı akı analizörü kullanılarak insan NK hücrelerinde enerji metabolizmasının gerçek zamanlı izlenmesi

Bu video, doğal öldürücü hücrelerin floresan lekeli hedef hücrelere karşı litik aktivitesini göstermektedir. Yöntem, ölü hücreleri boyayarak ve canlı ve ölü hedef hücreleri ölçmek için bir akış sitometresi kullanarak NK hücresinin neden olduğu sitotoksisite ölçümünü mümkün kılar.

Akış Sitometrik Analizi için Doğal Öldürücü Hücre Aracılı Sitotoksisite Testi Numune Hazırlama

Basit ve güvenilir bir yöntem, örneğin, farklı NK hücresi alt-gruplar içinde degranülasyonu, sitokin ve kemokin üretimi gibi NK hücresi fonksiyonlarının bir dizi analiz için tarif edilmektedir.

Akış NK Hücre Fonksiyonları İzleme Testi Sitometri tabanlı

Bu çalışma, insan kan örneklerinde NK (Doğal Öldürücü) hücre sayısının ve NK hücre sitotoksisitesinin doğru ve hızlı bir şekilde belirlenmesi için gelişmiş bir iş akışını açıklar.

İnsan Tüm Kan Natural Killer Hücre Parçalayıcı Faaliyet Akışı Sitometrik Analizi

Kantitatif insan doğal katil hücrelerin sitotoksik etkinliğini belirlemek için Akış Sitometresi tabanlı yöntemi burada gösterilir.

Akış Sitometresi tabanlı sitotoksisite tahlil insan NK hücre etkinliği değerlendirilmesi için

Kanser hücreleri tarafından doğal katil (NK) hücre aracılı eradikasyon kaçırma kanser inisiyasyonu ve ilerlemesi için önemlidir. Burada, hepatik tümör hücrelerine doğru NK hücre aracılı sitotoksisitesini değerlendirmek için radyoaktivite ye dayalı olmayan iki protokol siyoruz. Ayrıca, NK hücre geçişini çözümlemek için üçüncü bir protokol sunulur.

Hepatik Tümör Hücreleri Bağlamında Doğal Öldürücü Hücre Aracılı Sitotoksisite ve GöçÖlçümü

İnsan doğal öldürücü hücrelerindeki terapötik antikorlar tarafından FcφRIIIa güdümlü olayları incelemek için bir protokol burada açıklanmıştır. Bu yapay stimülasyon platformu, degranülasyon, kemokin/sitokin üretimi gibi aşağı akış efektör fonksiyonlarının ve bağlamada yer alan antikorların FcφRIIIa ve Fc bölümlerinin aracılık ettiği sinyal yollarının sorgulenmesine izin verir.

Terapötik Antikorların Varlığında FcφRIIIa Katılımı tarafından Yönlendirilen İnsan Doğal Öldürücü Hücre Olaylarının Değerlendirilmesi

Mevcut protokol, hafif sitotoksisiteye sahip CD3-/CD45+CD56+ hücrelerinin, hem 3D hem de 2D kültür koşulları altında insan genişlemiş potansiyel kök hücrelerinden (hEPSC'ler) nasıl ayırt edileceğini göstermektedir. Bu, karmaşık mikro çevrenin tahrip edilmeden rutin fenotipik doğrulamaya izin verir.

İnsan Genişletilmiş Potansiyel Kök Hücrelerden Doğal Öldürücü Hücrelerin Üretilmesi

Bu protokol, lenssiz gölge görüntüleme teknolojisini kullanarak doğal öldürücü (NK) hücre sayısı ve aktivitesinin hızlı tek hücreli analizi için etiketsiz bir yöntemi tanımlar. Bu yöntem, kırınım modellerinin bilgisayarlı analizi ile tek tek NK hücrelerindeki morfolojik değişiklikleri ölçer.

Doğal öldürücü hücre aktivasyonunun hızlı, etiketsiz analizi için sahada konuşlandırılabilir lenssiz görüntüleme platformu

Bu protokol, canlı hücre görüntüleme ve akış sitometrisi kullanılarak insan doğal katil hücrelerinin doğal, kimerik antijen reseptörü aracılı ve antikor bağımlı sitotoksisitesinin tutarlı ölçümü için standartlaştırılmış bir in vitro iş akışı sağlar.

Canlı hücre görüntüleme ve akış sitometrisi kullanarak kimerik antijen reseptörleri ve terapötik antikorlarla potantize edilen NK-hücre sitotoksisitesinin nicelendirilmesi

Öğrenin, ekstraselüler akış analizörü kullanarak primer insan NK hücrelerinde glikoliz ve mitokondriyal solunumu ölçme yöntemini. Obezite ve kanser gibi hastalıklarda immün yanıtları anlamak için yüksek verimli tarama olanağı sunar.

İnsan Doğal Katil Hücre Metabolizmasının Analizi

Daha fazla video keşfet