Name: Farelerde Kuru Toz Formülasyonunun Intratrakial Yönetimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-07-25T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: Öğrenin, farelerde kuru toz formülasyonlarının intratrakeal yönetimi için invaziv olmayan bir yöntemi. Bu teknik, solunum hastalıkları tedavilerinin ön klinik değerlendirmesinde güvenli ve doğru toz dağıtımı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, bay Ray Lee, Bay HC Leung ve Bay Wallace So'ya ışık kaynağı ve toz oytucusu yapma konusundaki nazik yardımları için teşekkür etmek istiyor; ve hayvan görüntüleme yardımı için Fakülte Çekirdek Tesisi. Çalışma, Hong Kong Araştırma Hibe Konseyi (17300319) tarafından desteklendi.

Bu çalışmada yapılan deneyler, Hong Kong Üniversitesi Öğretim ve Araştırma için Canlı Hayvanların Kullanımı Komitesi (CULATR) tarafından onaylanmıştır. Luciferaz messenger RNA'nın (mRNA), %5 sentetik peptit PEG12KL4'ünü ve mannitolün %94,5'ini (w/w) içeren sprey dondurma kurutma (SFD) ile hazırlanan kuru toz formülasyonları akciğerde mRNA ekspresyonunun16. SFD tozunun kütle ortanca aerodinamik çapı (MMAD) 2,4 μm'dir. Sprey kurutulmuş (SD) mannitol tozu, toz dağılımında kullanılan hava hacminin etkisini araştırmak için kullanılır16. SD tozunun MMAD'si 1,5 μm'dir.
1. Kuru toz insufflator imalatı ve kuru tozun yüklenmesi
<ol><li>(İsteğe bağlı) Kuru tozun statik yüklerini (bir şişede) ve 200 μL filtresiz yuvarlak jel yükleme pipet ucunu nötralize edin. Üreticinin talimatına göre anti-statik bir top veya deiyonizasyon işlevine sahip bir terazi kullanın.</li>
	<li>Yaklaşık 4 cm x 4 cm büyüklüğünde bir tartım kağıdı hazırlayın. Kağıdı çapraz olarak ikiye katlayın ve açın.</li>
	<li>Tartım kağıdında 1-2 mg kuru toz ağırlığındadır.</li>
	<li>Jel yükleme pipet ucunu ucun daha geniş açıklığı boyunca tozla doldurun. Toz, ucun dar ucuna yakın gevşek aglomeralar oluşturana kadar tozu paketlemek için hafifçe dokunun (Şekil 1A). Toz dağılımını engelleyebileceğinden tozu çok sıkı paketlemekten kaçının.</li>
	<li>Toz yüklü ucu üç yönlü bir stopcock aracılığıyla 1 mL şırındıya bağlayın (Şekil 1B). Şırındın boyutu tozu dağıtmak için kullanılan hava hacmine göre değiştirilebilir. Tozun dökülmesini önlemek için bağlantı sırasında ucu ve şırınnayı dikey olarak tutun. Uygulama hemen yapılmazsa, ucun açıklıklarını kapatmak için parafilm kullanın ve idareye kadar geçici olarak uygun durumda saklayın.</li>
</ol>2. Entübasyon cihazının imalatı
<ol><li>Işık kaynağı (Şekil 2)<ol>
<li>Işık yayan diyot (LED) torcu ve 0,8-1 mm çapında esnek bir optik fiber ile özel yapım bir ışık kaynağı hazırlayın.</li>
		<li>Led torcunun net lensine bir el matkabı veya matkap ucu ile ortalanmış bir delik yapın, böylece optik fiber zar zor geçebilir.</li>
		<li>Optik fiberi delikten geçirin. Optik fiberin diğer ucundaki maksimum parlaklık için yerleştirmenin konumunu ve derinliğini ayarlamak için LED torcu kapatın.</li>
		<li>Optik fiberi net epoksi tutkal ile yerine yapıştırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kılavuzak canül (Şekil 3)<ol>
<li>1 mL plastik Pasteur pipet (Şekil 3A) alın ve pipeti her iki ucunda tutun.</li>
		<li>Pipet ortasını alevin 5-10 cm üzerine yerleştirerek ısıtmak için bir alkol lambası (veya Bunsen brülörü gibi laboratuvardaki diğer ısı kaynakları) kullanın (Şekil 3B). Pipetleri eşit şekilde ısıtıldığından emin olmak için döndürün.</li>
		<li>Plastik yumuşak ve deforme olduğunda, pipeti alevden uzaklaştırın ve pipeti hafifçe uzatın.</li>
		<li>Ortadaki gerilmiş pipetleri bir çift makasla A ve Bölüm B'ye kesin (Şekil 3C-E). Bölüm A'yı ince uç pipet, Bölüm B'yi ise yol gösterici bir kaval kemiği olarak kullanın. Kılavuz ampul ile başarılı entübasyon şansını artırmak için, Bölüm B'nin sonunda(Şekil 3F)bir eğim yapın (hayvanın yaralanma riskini artırabilecek çok keskin değil). Kılavuz kanüle 200 μL jel yükleme pipet ucu (toz yükleme için) yerleştirildiğinde, kanülü 1-2 mm çıkıntı yapmalıdır. NOT: Entübasyon için uygun boyuta (iç ve dış çap) sahip kılavuz bir kanül (Bölüm B), içine 21 kalibrelik bir iğne sığabilirken, 17 kalibrelik bir iğnenin içine de sığabilir. Uygun boyuta ulaşmak için pipetlerin gerilmesinde birden fazla girişim gerekebilir.</li>
		<li>(İsteğe bağlı): Optik fiberi tutmanın daha kolay olması için daha esnek hale getirmek için kılavuz kolayın geniş ucunda küçük bir açıklık kesin (Şekil 3F). Bu açıklık ayrıca sıvı aerosolun yönetimi için bir mikrosprayer takılmasına izin verir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Entübasyon
<ol><li>Fareyi (BALB/c, 7-9 hafta) ketamin (100 mg/kg) ve ksilazin (10 mg/kg) ile intraperitoneal enjeksiyonla uyuşturun.</li>
	<li>Pleksiglastan yapılmış bir platform hazırlayın ve bir kelepçe ile bir standa monte etmenin (Şekil 4A). Anestezi edilmiş fareyi platforma (yaklaşık 60° eğimde) bir destek pozisyonunda yerleştirin. Platformun eğim yüksekliği ve açısı, standın üzerindeki kelepçenin konumuna göre ayarlanabilir.</li>
	<li>Kesici dişlerini naylon bir diş ipi üzerine bağlayarak fareyi askıya alın (Şekil 4B). Farenin konumunu bir bant parçası veya lastik bantla sabitleyin.</li>
	<li>Optik fiberi, kılavuz kanülün açılmasıyla fiber seviyesinin ucuyla entübasyondan önce kılavuz kanüle yerleştirin. Aydınlatmak için LED torcu açın.</li>
	<li>Nefes nefese bırakmak için farenin dilini bir çift asa ile hafifçe çıkıntılayın.</li>
	<li>Diğer yandan, içinde optik fiber olan kılavuzlu canülleri tutmak için kullanın. Ağız boşluğundan yerleştirin. Optik fiberden gelen aydınlatma ile nefes borusunun açılması ses telleri arasında bir delik olarak görselleştirilebilir.</li>
	<li>Kılavuz canüllerin eğimini açıklığın orta çizgisine doğru hizalayın (Şekil 5A). Trakeal açıklığındaki canülün en iyi ucunu hedef alarak kılavuzlu kanolü optik fiberle nefes borusuna hafifçe entübe edin.</li>
	<li>Entübasyon üzerine, optik fiberi hızla çıkarın ve kılavuz damarı nefes borusunun içinde bırakın (Şekil 5B). Normal bir solunum gözlenmelidir.</li>
	<li>Kılavuzlu kaval kemiğinin (Bölüm A) açılışında ince uç pipetini (Bölüm A) tutun ve farenin akciğerine küçük bir hava kabarcığım (yaklaşık 0,2 mL) insufflate edin. Farenin göğsünde hafif bir enflasyon uygun entübasyonu gösterir. İnce uç pipetini toz uygulamadan önce çıkarın.</li>
</ol>4. Toz yönetimi
<ol><li>Şırınna bağlı toz yüklü ucu adım 1.5'te açıklandığı gibi tutun. Şırınd ile uç arasındaki hava akışının kesildiğini sağlayın.</li>
	<li>Şırınd pistonu geriye doğru çekerek 0,6 mL havayı geri çekin. NOT: Tozu dağıtmak için kullanılan hava hacmi tozun özelliklerine ve yüklenen toz miktarına bağlıdır. Bu, sonuç bölümünde daha ayrıntılı olarak açıklanmıştır.</li>
	<li>Şırıngam ile toz yüklü uç arasındaki hava akışını bağlamak için üç yönlü stopcock'un vanasını çevirin.</li>
	<li>Toz yüklü ucu farenin nefes borusuna yerleştirilmiş kılavuz kanüle yerleştirin (Şekil 5C). Kılavuz kanül tutun ve tozu aerosol olarak akciğere dağıtmak için şırıngan pistonu tek bir sürekli eylemde zorla itin. NOT: Hayvanın yaralanmasını önlemek için cihazın ileriye doğru hareketi en aza indirilmelidir.</li>
	<li>Ucu çıkarın ve ucun içindeki tozun boşaltılıp boşaltıldığını kontrol edin. Değilse, 4.1 ile 4.4 arasında olan adımı yineleyin. NOT: Toz aşırı dokunma nedeniyle çok sıkı paketlenmişse, düzgün dağıtılamayabilir.</li>
	<li>Yönetim tamamlandıktan sonra, kılavuzlu mayayı nefes borusundan çıkarın.</li>
	<li>Farenin, hava yollarının tıkanmasını önlemek için dilinin yarısı çıkıntılı bir şekilde yatay olarak konumlandırarak iyileşmesine izin verin.</li>
</ol>

<ol><li>Newman, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+delivery+to+the+lungs%3A+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Therapeutic+Delivery%22%5BJournal%5D)">Drug delivery to the lungs: challenges and opportunities.</a> Therapeutic Delivery. 8 (8), 647-661 (2017).</li>
<li>Setter, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhaled+dry+powder+insulin+for+the+treatment+of+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Inhaled dry powder insulin for the treatment of diabetes mellitus.</a> Clinical Therapeutics. 29 (5), 795-813 (2007).</li>
<li>Muralidharan, P., Hayes, D., Mansour, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+powder+inhalers+in+COPD%2C+lung+inflammation+and+pulmonary+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Dry powder inhalers in COPD, lung inflammation and pulmonary infections.</a> Expert Opinion on Drug Delivery. 12 (6), 947-962 (2015).</li>
<li>de Boer, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+powder+inhalation%3A+past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Dry powder inhalation: past, present and future.</a> Expert Opinion on Drug Delivery. 14 (4), 499-512 (2017).</li>
<li>Das, S., Tucker, I., Stewart, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhaled+dry+powder+formulations+for+treating+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Inhaled dry powder formulations for treating tuberculosis.</a> Current Drug Delivery. 12 (1), 26-39 (2015).</li>
<li>Okamoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+chitosan-pDNA+complex+powder+prepared+by+supercritical+carbon+dioxide+process%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Stability of chitosan-pDNA complex powder prepared by supercritical carbon dioxide process.</a> International Journal of Pharmaceutics. 290 (1-2), 73-81 (2005).</li>
<li>He, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+inhaled+recombinant+human+insulin+dry+powders%3A+pharmacokinetics%2C+pharmacodynamics+and+14-day+inhalation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacy+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of inhaled recombinant human insulin dry powders: pharmacokinetics, pharmacodynamics and 14-day inhalation.</a> Journal of Pharmacy and Pharmacology. 71 (2), 176-184 (2019).</li>
<li>Durham, P. G., Young, E. F., Braunstein, M. S., Welch, J. T., Hickey, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dry+powder+combination+of+pyrazinoic+acid+and+its+n-propyl+ester+for+aerosol+administration+to+animals%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">A dry powder combination of pyrazinoic acid and its n-propyl ester for aerosol administration to animals.</a> International Journal of Pharmaceutics. 514 (2), 384-391 (2016).</li>
<li>Phillips, J. E., Zhang, X., Johnston, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+powder+and+nebulized+aerosol+inhalation+of+pharmaceuticals+delivered+to+mice+using+a+nose-only+exposure+system%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE+%28Journal+of+Visualized+Experiments%29%22%5BJournal%5D)">Dry powder and nebulized aerosol inhalation of pharmaceuticals delivered to mice using a nose-only exposure system.</a> JoVE (Journal of Visualized Experiments). (122), e55454(2017).</li>
<li>Nahar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro%2C+in+vivo+and+ex+vivo+models+for+studying+particle+deposition+and+drug+absorption+of+inhaled+pharmaceuticals%29%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">In vitro, in vivo and ex vivo models for studying particle deposition and drug absorption of inhaled pharmaceuticals).</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 49 (5), 805-818 (2013).</li>
<li>Price, D. N., Muttil, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+Therapeutics+to+the+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Delivery of Therapeutics to the Lung.</a> Methods in Molecular Biology. 1809, 415-429 (2018).</li>
<li>Chang, R. Y. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proof-of-Principle+Study+in+a+Murine+Lung+Infection+Model+of+Antipseudomonal+Activity+of+Phage+PEV20+in+a+Dry-Powder+Formulation%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Proof-of-Principle Study in a Murine Lung Infection Model of Antipseudomonal Activity of Phage PEV20 in a Dry-Powder Formulation.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 62 (2), (2018).</li>
<li>Ito, T., Okuda, T., Takayama, R., Okamoto, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+Evaluation+Method+for+Gene+Silencing+by+Serial+Pulmonary+Administration+of+siRNA+and+pDNA+Powders%3A+Naked+siRNA+Inhalation+Powder+Suppresses+Luciferase+Gene+Expression+in+the+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+pharmaceutical+sciences%22%5BJournal%5D)">Establishment of an Evaluation Method for Gene Silencing by Serial Pulmonary Administration of siRNA and pDNA Powders: Naked siRNA Inhalation Powder Suppresses Luciferase Gene Expression in the Lung.</a> Journal of pharmaceutical sciences. 108 (8), 2661-2667 (2019).</li>
<li>Patil, J. S., Sarasija, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+drug+delivery+strategies%3A+A+concise%2C+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Lung+India%22%5BJournal%5D)">Pulmonary drug delivery strategies: A concise, systematic review.</a> Lung India. 29 (1), 44-49 (2012).</li>
<li>Ihara, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+Quantification+of+Gene+Silencing+by+Intratracheal+Administration+of+Dry+Powdered+Small-Interfering+RNA%2FChitosan+Complexes+in+the+Murine+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">Histological Quantification of Gene Silencing by Intratracheal Administration of Dry Powdered Small-Interfering RNA/Chitosan Complexes in the Murine Lung.</a> Pharmaceutical Research. 32 (12), 3877-3885 (2015).</li>
<li>Qiu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+mRNA+pulmonary+delivery+by+dry+powder+formulation+of+PEGylated+synthetic+KL4+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Effective mRNA pulmonary delivery by dry powder formulation of PEGylated synthetic KL4 peptide.</a> Journal of Controlled Release. 314, 102-115 (2019).</li>
<li>Pfeifer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+powder+aerosols+of+polyethylenimine+%28PEI%29-based+gene+vectors+mediate+efficient+gene+delivery+to+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Dry powder aerosols of polyethylenimine (PEI)-based gene vectors mediate efficient gene delivery to the lung.</a> Journal of Controlled Release. 154 (1), 69-76 (2011).</li>
<li>Kim, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxorubicin-loaded+highly+porous+large+PLGA+microparticles+as+a+sustained-+release+inhalation+system+for+the+treatment+of+metastatic+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Doxorubicin-loaded highly porous large PLGA microparticles as a sustained- release inhalation system for the treatment of metastatic lung cancer.</a> Biomaterials. 33 (22), 5574-5583 (2012).</li>
<li>Tonnis, W. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+aerosol+generator+for+homogenous+distribution+of+powder+over+the+lungs+after+pulmonary+administration+to+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">A novel aerosol generator for homogenous distribution of powder over the lungs after pulmonary administration to small laboratory animals.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 88 (3), 1056-1063 (2014).</li>
<li>Hoppentocht, M., Hoste, C., Hagedoorn, P., Frijlink, H. W., de Boer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+evaluation+of+the+DP-4M+PennCentury+insufflator%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">In vitro evaluation of the DP-4M PennCentury insufflator.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 88 (1), 153-159 (2014).</li>
<li>Liao, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porous+and+highly+dispersible+voriconazole+dry+powders+produced+by+spray+freeze+drying+for+pulmonary+delivery+with+efficient+lung+deposition%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Porous and highly dispersible voriconazole dry powders produced by spray freeze drying for pulmonary delivery with efficient lung deposition.</a> International Journal of Pharmaceutics. 560, 144-154 (2019).</li>
<li>Ito, T., Okuda, T., Takashima, Y., Okamoto, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naked+pDNA+Inhalation+Powder+Composed+of+Hyaluronic+Acid+Exhibits+High+Gene+Expression+in+the+Lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Naked pDNA Inhalation Powder Composed of Hyaluronic Acid Exhibits High Gene Expression in the Lungs.</a> Molecular Pharmaceutics. 16 (2), 489-497 (2019).</li>
<li>Chaurasiya, B., Zhou, M., Tu, J., Sun, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+validation+of+a+simple+device+for+insufflation+of+dry+powders+in+a+mice+model%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Design and validation of a simple device for insufflation of dry powders in a mice model.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 123, 495-501 (2018).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak çıkar çatışmaları yoktur.

Bu yazıda kuru toz insufflation ve intratrakial entübasyon için özel yapım cihazlar sunulmuştur. Toz yükleme adımında, kuru toz 200 μL jel yükleme pipet ucuna yüklenir. Ucun dar ucunda gevşek toz paketlemeye izin vermek için uca hafifçe dokunmak önemlidir. Bununla birlikte, toz çok sıkı paketlenirse, ucuna sıkışırlar ve düzgün bir şekilde dağılamazlar. Özellikle düşük yoğunluklu ve düşük bağıl nemde toz yüklemesini kolaylaştırmak için tozun ve pipet ucunun statik yüklerinin nötralize etmesi önerilir. Kılavuzlu canül, cih...

Pulmoner uygulama yolu, hem lokal hem de sistemik eylemler için terapötiklerin sağlanmasında çeşitli faydalar sunmaktadır. Akciğer hastalıklarının tedavisi için, pulmoner doğumla yüksek lokal ilaç konsantrasyonu elde edilebilir, böylece gerekli doz azaltılabilir ve sistemik yan etkilerin insidansı düşürülebilir. Ayrıca, akciğerdeki nispeten düşük enzimamatik aktiviteler erken ilaç metabolizmasını azaltabilir. Akciğerler ayrıca büyük ve iyi perfüzyonlu yüzey alanı, son derece ince epitel hücre tabakası ve pulmoner kılcal damarlardaki yüksek kan hacmi nedeniyle sistemik etki için ilaç emilimi için de etkilidir1.
Solunan kuru toz formülasyonları astım, kronik obstrüktif akciğer hastalığı, diabetes mellitus ve pulmoner aşılama 2,3 ,4gibi çeşitli hastalıkların önlenmesi ve tedavisi için yaygın olarak araştırılmıştır. Katı durumdaki ilaçlar genellikle sıvı formda olduğundan daha kararlıdır ve kuru toz inhalatörleri nebülizörlerden daha taşınabilir ve kullanıcı dostudur5,6. Solunan kuru toz formülasyonlarının geliştirilmesinde, pulmoner uygulamadan sonra preklinik hayvan modellerinde güvenlik, farmakokinetik profil ve terapötik etkinliğin değerlendirilmesi gerekir7. Kuru tozu aktif olarak soluyabilen insanların aksine, kuru tozun küçük hayvanlara pulmoner teslimatı zordur. Hayvanların akciğerlerine kuru toz teslim etmek için verimli bir protokol oluşturmak gerekir.
Fareler, ekonomik oldukları ve iyi üredikleri için araştırma hayvanı modelleri olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Ayrıca kullanımı kolaydır ve birçok hastalık modeli iyi kurulmuştur. Kuru tozu farenin akciğerine uygulamak için iki ana yaklaşım vardır: soluma ve intratrakiyeal uygulama. Soluma için, fare kuru tozun aerosolleştirildiği ve hayvanların sakinleştirilmeden aerosolde nefes aldığı tüm vücut veya sadece burun odasına yerleştirilir8,9. Pahalı ekipman gereklidir ve ilaç dağıtım verimliliği düşüktür. Tüm vücut odası teknik olarak daha az zorlu olsa da, sadece burun maruziyet odası ilaçların vücut yüzeyine maruz kalmasını en aza indirebilir. Ne olursa olsun, akciğerlere teslim edilen dozu hassas bir şekilde kontrol etmek ve belirlemek hala zordur. Kuru toz esas olarak mukozal boşluğun belirgin olduğu nazofarenks bölgesinde biriktirilir10. Ayrıca, odanın içindeki fareler yönetim sürecinde önemli bir stres altındadır, çünkü kısıtlanmış ve yiyecek ve su temininden mahrumdurlar11. Intratraseral uygulama için, genellikle maddenin doğrudan nefes borusuna girmesini ifade eder. Bunu başarmak için iki farklı teknik vardır: trakeotomi ve orotrakeal entübasyon. Birincisi, trakeada bir kesi yapan cerrahi bir prosedür gerektirir, bu da invazivdir ve nadiren toz uygulama için kullanılır. Burada sadece ikinci teknik açıklanmıştır. Soluma yöntemi ile karşılaştırıldığında, intratrakiel uygulama, minimum ilaç kaybı ile yüksek teslimat verimliliği nedeniyle farede pulmoner doğum için daha yaygın kullanılan yöntemdir12,13. Fareye birkaç miligram içinde az miktarda toz teslim etmek basit ve hızlı bir yöntemdir. Fare anatomik ve fizyolojik olarak insanlara farklı olmasına ve entübasyon işlemi sırasında anestezi yapılması gerekmesine rağmen, intratrakimyasal uygulama üst solunum yollarını atlar ve pulmoner emilim, biyoyararlanım ve terapötik etkiler gibi kuru toz formülasyonunun biyolojik aktivitelerini değerlendirmek için daha etkili bir yol sunar14,15.
Kuru tozu intratrakisel olarak uygulamak için, farenin entübe edilmesi gerekir, bu da zor olabilir. Bu yazıda, özel yapım kuru toz insufflator ve entübasyon cihazının imalatı açıklanmıştır. Farenin akciğerinde kuru tozun entübasyon ve insufflation işlemleri gösterilmiştir.

<table><tbody><tr><td>BALB/c fare</td><td></td><td></td><td>Dişi; 7-9 haftalık; Vücut ağırlığı 20-25 g</td></tr><tr><td>CleanCap Firefly Luciferase mRNA</td><td>TriLink Biyoteknoloji</td><td>L-7602</td><td></td></tr><tr><td>Kuru Toz İnsüflatör</td><td>PennCentury</td><td>Model DP-4M</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin %10</td> <td>Alfasan International B.V.</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Işık yayan diyot (LED) meşale</td><td>Unilite Internation</td><td>PS-K1</td><td></td></tr><tr><td>Mannitol (Pearlitol 160C)</td><td>Roquette</td><td>450001</td> Filtresiz yuvarlak jel yüklemeli pipet ucu (200 & <td></td></tr> mikro<tr><td>; L)</td><td>Labcon</td><td>1034-800-000</td><td></td></tr><tr><td>Naylon diş ipi</td><td>Reach</td><td>30017050</td><td></td></tr><tr><td>İğnesiz bir mililitre şırınga</td><td>Terumo</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>Fiber Optik</td><td></td> Veri <td></td> OMPF1000 <td></td></tr><tr><td>PEG12KL4 peptid</td><td>EZ Biolab</td><td></td><td>(PEG12)-KLLLLKLLLLKLLKLLKLLK-NH2</td></tr><tr><td>Plastik Pasteur ince uçlu pipet</td><td>Alpha Laboratuvar</td><td>lambaları LW4061</td><td></td></tr><tr><td>Üç musluk</td><td>Braun</td><td>D201</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin %2 Alfasan</td> <td>International B.V.</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Zerostat 3 anti-statik tabanca</td><td>MILTY</td><td>5036694022153</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde kuru toz formülasyonunun intratrakial yönetimi

Intratracheal Administration of Dry Powder Formulation in Mice

Solunabilir kuru toz formülasyonlarının geliştirilmesinde, biyolojik faaliyetlerini preklinik hayvan modellerinde değerlendirmek esastır. Bu makale, farelerde kuru toz formülasyonunun intratraskial teslimatının noninvaziv bir yöntemini tanıtmaktadır. Üç yönlü bir stopcock aracılığıyla 1 mL şırındıya bağlı 200 μL jel yükleme pipet ucundan oluşan kuru toz yükleme cihazı sunulur. Pipet ucuna az miktarda kuru toz (1-2 mg) yüklenir ve şırınnada 0,6 mL hava ile dağılır. Pipet uçları tek kullanımlık ve ucuz olduğundan, farklı kuru toz formülasyonları önceden farklı uçlara yüklenebilir. Çeşitli formülasyonlar, cihaz temizliği ve doz doldurma olmadan aynı hayvan deneyinde değerlendirilebilir, böylece zamandan tasarruf edilir ve artık tozdan çapraz bulaşma riski ortadan kalkar. Toz dağılımının kapsamı pipet ucunda kalan toz miktarına göre incelenebilir. Farede özel yapım ışık kaynağı ve yol gösterici bir canül içeren bir entübasyon protokolü dahildir. Uygun entübasyon, kuru toz formülasyonunun farenin derin akciğer bölgesine intratrakial olarak teslimini etkileyen önemli faktörlerden biridir.

Bir hayvanın akciğerine toz aerosol sağlamak için kuru bir toz oyucu kullanıldığında, kullanılan hava hacmi, toz dağılımı verimliliğinin yanı sıra güvenliği de etkilediği için kritik öneme sahiptir. Yöntemi optimize etmek için, kuru tozu dağıtmak için farklı hava hacimleri (0,3 mL, 0,6 mL ve 1,0 mL) kullanıldı (1 mg sprey kurutulmuş mannitol) ve farelerin ağırlığı uygulamadan sonra 48 saat boyunca izlendi(Şekil 6). 0.3 mL ve 0.6 mL hava kullanımı, farelerin uygulama sonrası 48 saate kadar ki...

Soluma için kuru toz formülasyonları solunum yolu hastalıklarının tedavisinde büyük potansiyele sahiptir. İnsan çalışmalarına girmeden önce, preklinik çalışmalarda kuru toz formülasyonunun etkinliğini değerlendirmek gerekir. Farelerde intratrakiel yoldan kuru tozun yönetiminin basit ve invaziv bir yöntemi sunulmuştur.

Farelerde Kuru Toz Formülasyonunun Intratrakial Yönetimi

In the development of inhalable dry powder formulations, it is essential to evaluate their biological activities in preclinical animal models. This paper ...

Kuru tozun intratrakeal uygulaması, klinik öncesi hayvan modellerinde pulmoner emilim, biyoyararlanım ve terapötik etkiler gibi solunan bir toz formülasyonunun performansını ve biyolojik aktivitelerini değerlendirmek için gereklidir. Entübasyon işlemi non-invazivdir ve farelere güvenli ve doğru bir şekilde toz formülasyonu sağlayabilir. Özel yapım kuru toz insülatör, tek kullanımlık, ucuz ve toz formülasyonlarının dağıtılmasında etkilidir.İnsüflatörler, aynı deneylerde birden fazla fare üzerinde farklı formülasyonların değerlendirilmesinde, artık tozdan çapraz kontaminasyon riski olmadan kullanılabilir. Entübasyon süreci deneyimsiz araştırmacılar için zorlayıcıdır. Trakea açıklığında kanülün en ince ucunu görselleştirme ve hedefleme yeteneği, kılavuz kanülün doğru yerleştirilmesi için çok önemlidir.Bu teknik, yanlış yerleştirmeyi en aza indirmek için pratik gerektirir. Doktora sonrası öğrencim Carol ve doktora öğrencim Rachel hazırlık ve entübasyon prosedürünü gösterecekler. Başlamak için, kuru tozun ve 200 mikrolitrelik filtresiz yuvarlak jel yüklemeli pipet ucunun statik yüklerini antistatik bir tabanca veya deiyonize işlevli bir terazi ile nötralize edin.Yaklaşık dört x dört san

intratracheal-administration-of-dry-powder-formulation-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Intratrakeal instilasyonlar doğrudan ciğerlerine çözünenlerin sağlar. Bu prosedür, akciğer distal bölgeye instillate teslim hedefler ve bu nedenle sık sık alveoller okuyan yönelik çalışmalar dahil edilmiştir. Biz farelerde intratrakeal instilasyonlar gerçekleştirmek için ayrıntılı bir yaşam protokolü sağlar.

Fare Akciğer içine çözünenlerin Doğrudan Trakeal damlatma

Bu videoda, deneysel bir ajanın distal sağ ve sol akciğere seçici olarak uygulanması için intrabronşiyal bir yaklaşım açıklanmaktadır. Öne çıkan protokolde, pulmoner fibroz için daha iyi bir model elde etmek için bleomisini intrabronşikal olarak bir fareye uygulayacağız.

İntrabronşiyal Doğum: Deneysel bir ajanı seçici olarak bir fare akciğerine uygulamak için bir teknik

Kaynak: Venuprasad, K., ve diğerleri. Hava Yolu Enflamasyonunu İncelemek İçin Fare Modellerinde Haemophilus influenzae'nin Trakeal İçi Uygulaması. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, alt solunum yolu enfeksiyonunu modellemek için akciğer patojenik bir bakteri inokulumunun anestezi uygulanmış bir fareye intratrakeal olarak verilmesini göstermektedir.

Bir Fare Modelinde İntratrakeal Bakteri Dağıtımının Gerçekleştirilmesi

Bu video, bir aerosol jeneratörü ile donatılmış bir inhalasyon ünitesi kullanılarak ilaç aerosollerinin üretilmesini ve bu aerosollerin farelere yalnızca burundan hedeflenen şekilde verilmesini göstermektedir. Fare, yalnızca buruna takılan bir tutucu ile sınırlandırılır ve ilacı doğrudan farenin burun boşluğuna veren inhalasyon ünitesine bağlanır. Daha sonra, ilaç trakeadan geçer ve akciğerlere girer.

İlaç aerosollerini doğrudan fare akciğerlerine üretmek ve vermek için bir teknik

Reaktiflerin Entübasyon aracılı intratrakeal (IMIT) instilasyon solunum yolu hastalıkları, hem de akciğer içine doğrudan tedavi reaktifler aşılamak için bir yöntem incelenmesi için mükemmel, invazif olmayan bir yöntemdir. Bu klinik öncesi test için uygun bir hızlı ve yüksek oranda çoğaltılabilir bir yöntemdir.

Entübasyon-aracılı intratrakeal (IMIT) damlatma: A Noninvaziv, Lung-özel Dağıtım Sistemi

Bu makalede, entübasyon yoluyla fare trakea içine doğrudan bleomisin yönetmek için hızlı ve basit bir yöntem sunar. Bu yöntemin en önemli avantajları usta son derece tekrarlanabilir kolay ve özel ekipman ya da uzun iyileşme süreleri gerektirmez vardır.

Farelerde Trakea hızlı intübasyon için geliştirilmiş bir yöntem

Burada tarif edilen inhalasyon ünitesi oluşturmak karakterizasyon için numune ve eşit kemirgenler akciğerlerde ilaç aerosolü bırakabilir. Bu etkinlik ve akciğerlerinde biriken ilaç dozları güvenliği klinik öncesi belirlenmesini sağlar; Klinik kullanılan ilaç gelişimini sağlayan anahtar verileri.

Kuru Toz ve Eczacılık Nebulize Aerosol Soluma bir Burun sadece Pozlama Sistemi Kullanarak Fare teslim

Farelerde deneysel ajanlar intratracheal (It) yönetimi genellikle distal akciğerlere asimetrik teslim sonuçlanır.  Bu raporda, her akciğeri operatif olmayan canlı fareler içinde cannulate için doğrudan intrabronchial (ıB) yaklaşımı açıklanmaktadır.  Bu yaklaşım, bir akciğer için seçici olarak ajanlar yönetmek için kullanılabilir ya da her iki akciğerde simetrik Ajan teslim geliştirmek için adapte olabilir.

Fare akciğer Içinde seçici Ajan biriktirme geliştirmek için doğrudan Intrabronchial yönetim

Burada, noninvaziv orofaringeal endotrakeal entübasyon yoluyla intratrakeal lipopolisakkarit (LPS) doğumu için bir protokol öneriyoruz. Bu yöntem, hayvan için cerrahi prosedürün travmasını en aza indirir ve LPS'yi trakeaya ve daha sonra akciğerlere doğru bir şekilde iletir.

Farelerde Noninvaziv İntratrakeal Lipopolisakkarit Damlatma

Farmasötik kuru toz geliştirme, genellikle bir fare modeli kullanılarak güvenilir in vivo testler gerektirir. Kuru toz aerosollerin farelere doğru ve tekrarlanabilir bir şekilde iletilmesi için cihaz teknolojisi kısıtlanmıştır. Bu çalışma, fareyle ilgili dozlarda pulmoner ilaç dağıtımı için tek kullanımlık dozlayıcılar sunarak ilk kavram kanıtı araştırmasına yardımcı olur.

Farelere kuru toz verilmesi için tasarlanmış tek kullanımlık dozlayıcılar

Burada, trakea yoluyla taşınan aerosol bleomisin kullanarak farelerde pulmoner fibrozisin modeli için bir protokol sunuyoruz. Bu optimize edilmiş yöntem, cerrahi kesi olmadan tekiz, nicel ve hassas bir doğum sağlar ve bleomisin kaynaklı fibrozun tekrarlanabilirliğini ve güvenilirliğini artırır.

Tekrarlanabilir ve minimal invaziv fare modelleri için Rafine Aerosol Tabanlı intratrakeal bleomicin teslimat yöntemi

Öğrenin, farelerde kuru toz formülasyonlarının intratrakeal yönetimi için invaziv olmayan bir yöntemi. Bu teknik, solunum hastalıkları tedavilerinin ön klinik değerlendirmesinde güvenli ve doğru toz dağıtımı sağlar.

Farelerde Kuru Toz Formülasyonunun Intratrakial Yönetimi

Daha fazla video keşfet