Name: Bir Ex vivo Assay Gastrointestinal Sistemde Candida albicans Hyphal Morphogenesis Çalışma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-07-01T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Öğrenin, Candida albicans hif morfojenezisini incelemek için ex vivo bağırsak homojenatı ekstraktı ve immünofloresan boyama yöntemini. Bu teknik, gastrointestinal sistemde fungal gelişimi araştırmak için değerli bir araçtır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Midwestern Üniversitesi Hücresel ve Moleküler Çekirdek Araştırma tesisinin kaynaklarını ve desteğini kabul ediyor.

Tüm hayvan protokolleri Midwestern Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından57önce açıklandığı gibi onaylanmıştır. Midwestern Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi, #2894 MWU IACUC Protokolü kapsamında bu çalışmayı onayladı. MWU hayvan bakım politikaları, Laboratuvar Hayvanlarının İnsani Bakımı ve Kullanımına Ilişkin Halk Sağlığı Hizmeti (PHS) Politikası'nı ve Hayvan Refahı Yasası'nda (AWA) belirtilen politikaları izler.
1. Fareler çalışma standart protokol
<ol><li>Erkek ve dişi C57BL/6J fareleri en az altı haftalık kullanın. Cefoperaz (0.5 mg/mL) ile steril su ile tamamlayın.<ol>
<li>5'li gruplar halinde, her kafeste erkek ya da tüm dişi fareleri içeren eş-ev fareleri. Farelerstandart fare chow ve su (400 mL şişe ile) her zaman sağlayın.</li>
		<li>Yiyecek ve su seviyelerinin yeterli olduğundan emin olmak ve fareleri sıkıntı belirtileri için incelemek için kafesleri günlük olarak kontrol edin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kafes besleme şişelerinde kalan suya bakılmaksızın taze antibiyotik sağlandığından emin olmak için her 48 saatte bir suyu cefoperazone ile değiştirin.</li>
	<li>5\u20127 günlük cefoperazone tedavisinden sonra, kurulan IACUC protokolünü gözlemleyerek CO2 boğulma yoluyla fareleri ötenaziye edin. Servikal çıkığı ile ölümü doğrulayın.</li>
	<li>Otoklav sterilize keskin uçlu makas ve otoklav sterilize forceps kullanarak farelerdin.<ol>
<li>Ötenaziden sonra, karın maruz kalması gibi tüm uzuvları sabitleyerek bir diseksiyon yüzeyine hayvan güvenli.</li>
		<li>Diseksiyon sırasında kürkün forceps, makas veya bağırsak bölümlerine yapışmasını önlemek için karın bölgesini %70 etanol püskürtün.</li>
		<li>Çimdik ve karın tabanında deri bir bölümünü kaldırmak ve makas kullanarak deri ve altta yatan fasya ile küçük bir kesi oluşturmak için forseps kullanın. Çekum veya bağırsak duvarı delinmeönlemek için bu kesi yaparken büyük özen.</li>
		<li>Bu kesiği göğüs kafesine kadar genişletin, kısmen periton boşluğunu teşhir edin. Yukarı ve yanal uzanan her iki tarafta ilk kesi noktasından başlayarak bir kesim olun.</li>
		<li>Bu kanatları yanal olarak çekin ve periton boşluğunu tamamen ortaya çıkarmak için diseksiyon yüzeyine sabitleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Her bölümden bağırsak içeriğinin en büyük miktarda toplanmasını sağlamak için mide ve kalın bağırsağın distal bölgede kesim üstün hale makas kullanırken, forceps kullanarak GI yolu ayıklayın.</li>
	<li>GI yolu çıkarılırken, tek tek bileşenlerin yırtılmasını önlemeye dikkat edin. Ayrı mide, ince bağırsak, çekum, ve kalın bağırsak tek tek proksimal ve distal uçlarında makas kullanarak.</li>
	<li>Her bölümden her bağırsak içeriğinin toplanması için, makas kullanarak her bölümün distal ucunda tek bir kesi yapın, ardından forseps kullanarak 1,5 mL mikrocentrifuge tüpüne bağırsak içeriğini elle dışarı atın.</li>
	<li>Ex vivo tahlilleri için bağırsak içeriğini -80 °C'de saklayın.</li>
</ol>2. Maya özü-peptin-dekstroz (YPD) agar plakalarının hazırlanması
<ol><li>1 L cam şişe için maya özü peptone-dekstroz suyu tozu, 10 g agar ve ultrasaf su 500 mL son hacmine ekleyin.</li>
	<li>Otoklav 121 °C'de 30 dk sıvı bir döngü üzerinde ortamı sterilize etmek için.</li>
	<li>Bir laminar akış kaputunun altına, steril petri plakasına yaklaşık 20 mL agar ortam dökün. 500 mL agar ortam yaklaşık 25 plaka verilmelidir.</li>
	<li>Plakaları kullanıma hazır olana kadar 4 °C'de saklayın.</li>
</ol>3. Hyphal morfogenez tayini için ex vivo hazırlık
<ol><li>Bir YPD agar plaka üzerine C. albicans SC5314 taze bir kültür çizgi ve 30 °C gecede kuluçka.</li>
	<li>Gecede yetiştirilen C. albicans SC5314 kültüründen iki ila üç orta büyüklükteki bireysel koloni seçin ve 1 mL fosfat tamponlu salin (PBS) ile yeniden askıya alın.</li>
	<li>-80 °C'lik dondurucudan dondurulmuş bağırsak içeriğini alın ve 25 °C'de çözülün.</li>
	<li>Yeni bir 1.5 mL tüp içine bağırsak içeriği yaklaşık 150 mg tartın.</li>
	<li>150 μL PBS (bağırsak içeriği ve PBS 1:1 ağırlık tan hacim oranına) sahip bağırsak içeriğini yeniden askıya alın.</li>
	<li>Girdap yüksek hızda 30 s bağırsak içeriğini homojeize ve yaklaşık bir dakika oda sıcaklığında oturmaya izin verir.</li>
	<li>3 dk için 1000 x g homojenates santrifüj.</li>
	<li>Supernatant'ı yeni bir 1,5 mL tüpe aktarın.</li>
	<li>Supernatant tüm enkaz kaldırmak için adımları 3.7 ve 3.8 tekrarlayın.</li>
	<li>Bu supernatant için yukarıda hazırlanan C. albicans SC5314 inoculum 10 μL ekleyin</li>
	<li>İyice karıştırın ve 37 °C'de 4-5 saat kuluçkaya yatırın.</li>
</ol>4. Hiphal morfogenez tayini için metabolitlerin bağırsak homojen ekstrelerine ekselrite
<ol><li>-80 °C'lik dondurucudan dondurulmuş bağırsak içeriğini alın ve PBS'de 1:1 oranında (ağırlık: hacim) yeniden askıya alın.</li>
	<li>Bağırsak içeriği ve PBS karışımı için bağırsak metabolitleri istenilen konsantrasyonu ekleyin.</li>
	<li>Girdap yüksek hızda 30 s metabolitleri içeren bağırsak içeriğini homojenize ve yaklaşık 10 dakika oda sıcaklığında oturmaya izin.</li>
	<li>3 dk için 1000 x g homojenates santrifüj.</li>
	<li>Supernatant'ı yeni bir 1,5 mL tüpe aktarın. Supernatant tüm enkaz kaldırmak için adımları 4.4 ve 4.5 tekrarlayın.</li>
	<li>Bu supernatant için yukarıda hazırlanan C. albicans SC5314 inoculum 10 μL ekleyin. İyice karıştırın ve 37 °C'de 4-5 saat kuluçkaya yatırın.</li>
</ol>5. C. albicans morfogenez talimi (immünboyama ve görüntüleme)
<ol><li>Numuneleri 1000 x g'da 2 dk için santrifüj edin ve supernatant'ı pipetleme yoluyla atın.</li>
	<li>Numuneleri 15 dakika boyunca %2 paraformaldehit (PFA) 100 μL'lik olarak düzeltin.</li>
	<li>2 dk için 1000 x g santrifüj ve pipetleme ile supernatant atın.</li>
	<li>Numuneleri 1 mL PBS ile iki kez yıkayın. Numuneleri yıkamak için pbs peletini hafifçe boruile yeniden askıya alın. Bu hiphal yapılarına zarar verebilir gibi örnek girdap etmeyin. Yeniden süspansiyon sonra, 2 dk için 1000 x g santrifüj ve pipetleme yoluyla supernatant atın.</li>
	<li>Örnekleri 100 μL pbs pbs oda sıcaklığında inkübe kullanabilirsiniz poliklonal C. albicans antikor (1:100 seyreltme) içeren 30 dakika.</li>
	<li>1 mL PBS ile numuneleri üç kez yıkayın. NOT: Floresan antikor kullanırken, fotoğraf beyazlatma önlemek ve örnek uzun ömürlü geliştirmek için loş ışıkta tüm seyreltme ve yıkama adımları yapılması tavsiye edilir.</li>
	<li>1:500 seyreltme de anti-Rabbit IgG Alexafluor 488 antikor içeren PBS 100 μL 15 dakika oda sıcaklığında örnekleri kuluçka. Fotoğraf beyazlatma önlemek için karanlık bir çekmece veya odada kuluçka gerçekleştirin.</li>
	<li>1 mL PBS ile numuneleri üç kez yıkayın.</li>
	<li>Numuneleri 100 μL PBS'de yeniden askıya alın ve görüntüleme için 96 kuyuluk bir plakaya aktarın. NOT: Görüntülenmezken, 96 kuyulu plakanın fotoğraf beyazlatmasını önlemek için alüminyum folyoya sarılması önerilir.</li>
	<li>Floresan görüntüleme mikroskobu kullanarak 20x ve 40x objektif lensler kullanarak görüntü mantar hücreleri. Floresan'ı tespit etmek için yeşil floresan protein (GFP) filtresi (uyarma dalga boyu 470/40 ve emisyon dalga boyu 525/50) kullanın.</li>
</ol>

Yazarların hiçbir rakip mali çıkarları veya diğer çıkar çatışmaları var.

Burada açıklanan yöntem, antibiyotik, diyet, ksenobiyotik ve terapötik etkileri nin C. albicans hyphal morfogenezi üzerindeki etkisini araştırmak için yeni bir yol sunar GI sisteminde. Sistemik enfeksiyonların çoğunluğu GI sistemi kaynaklanan olduğundan21,22,23,24,25,26,27,</su...

Candida albicans normalde kommensal bir fırsatçı, polimorfik mantar patojen, ancak bağışıklık tehlikeyebireylerdeyaşamı tehdit eden enfeksiyonlara neden yeteneğine sahip öldürücü bir forma morfolojik bir değişim geçirebilir 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13. C. albicans sistemik nosokomiyal enfeksiyonların önde gelen nedenidir, bir 40\u201260% mortalite oranı ile antifungal tedavi ile bile2,14,15. C. albicans kadın üreme sistemi16dahil olmak üzere farklı konak nişlerde ikamet rağmen16 ,17, sağlıklı bireylerin ağız boşluğu18 ve gastrointestinal (GI) yolu19,20, sistemik enfeksiyonların çoğunluğu GI sistemi ve dahası kaynaklanan, sistemik enfeksiyon kaynağı genellikle GI yolu olduğu doğrulanır21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34. C. albicans patojenite GI yolu faktörlerin geniş bir yelpazede etkilenir; ancak, virülans için gerekli önemli bir özelliği öldürücü bir hiphal hücre morfolojisi içine bir maya hücre morfolojisi geçiş35,36,37,38,39,40,41,42,43,44. C. albicans eki ve enfeksiyon sırasında GI sisteminden yayılması son derece öldürücü hyphae içine bir commensal maya geçiş kapasitesi ile ilişkilidir, mantar invaziv hastalığa neden sağlayan44,45,46,47,48,49,50,51,52,53.
Bağırsakta çeşitli faktörler, n-asetilglucosamine dahil, C. albicanstarafından hiphal oluşumunu düzenleyen. Bu nedenle, GI sisteminde bu mantar patojeninin hiphal morfogenezi ile ilgili bilgi açığını daraltmak çok önemlidir54,55,56. Son kanıtlar çeşitli bağırsak metabolitlerinin farklı olarak C. albicans in vitro57,58,59,60hipofna morfogenezini kontrol ettiğini göstermektedir. Ancak, teknik kısıtlamalar in vivo gut örneklerinde C. albicans hyphae oluşumunu incelemeye çalışırken sorunlar mevcut, özellikle maya ve hyphae hücreleri boyama ve hyplal gelişimi kantitatif analizi. Gi sisteminde C. albicans hyphal morfogenezi anlamak için, bir ex vivo yöntemi mantar hyphal morfogenez üzerinde metabolitlerin etkisini incelemek için farelerden homojenize bağırsak içeriğinin çözünür özleri kullanılarak geliştirilmiştir. C. albicans GI enfeksiyonuna dirençli ve duyarlı farelerden alınan bağırsak örneklerini kullanan bu yöntem, metabolitlerin, antibiyotiklerin ve ksenobiyotiklerin GI sistemindeki mantar lı hiphal morfogenezi üzerindeki etkisini belirlemeye ve incelemeye yardımcı olacaktır.

<table><tbody><tr><td>1 - 10 ve mikro; L Pipet Uçları</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-454</td><td>Çeşitli</td></tr><tr><td>100 - 1000 & mikro; L Pipet Uçları</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-400</td><td>Çeşitli</td></tr><tr><td>20 - 200 & L Pipet Uçları</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-451</td><td>Çeşitli</td></tr><tr><td>2-metilbütirik asit</td><td>Sigma</td><td>193070-25G</td><td>hifal inhibitör bileşik</td></tr><tr><td>488 keçi anti-tavşan IgG</td><td>Invitrogen (Fisher)</td> <td>A11008</td><td>IF Boyama ikincil ab</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Fisher</td><td>BP1423-500</td><td>YPD agar bileşeni</td></tr><tr><td>Otomatik Görüntüleme Mikroskobu</td><td>Keyence</td><td>BZX700</td><td></td></tr><tr><td>Candida Albicans Antikoru</td><td>İnvitrojen (Fisher)</td> <td>PA1-27158</td><td>IF Boyama primer ab</td></tr><tr><td>sefoperazon</td><td>Cayman</td><td>16113</td><td>antibiyotik</td></tr><tr><td>deoksikolik asit</td><td>Sigma</td><td>30960</td><td>hifal inhibitör bileşik</td></tr><tr><td>D-Glikoz</td><td>Fisher</td><td>D16-500</td><td>hifal teşvik edici bileşik</td></tr><tr><td>forseps</td><td>Fisher</td><td>08-885</td><td></td></tr><tr><td>laktik asit</td><td>Alfa Aesar</td><td>AAAL13242-06</td><td>hifal inhibitör bileşik</td></tr><tr><td>litokolik asit</td><td>Sigma</td><td>L6250-10G</td><td>hifal inhibitör bileşik</td></tr><tr><td>palmitik asit</td><td>Sigma</td><td>P5585-10G</td><td>hyphal inhibitör bileşik</td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Alfa Aesar</td><td>A11313</td><td>IF Boyama sabitleyici</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS), 10x</td><td>Alfa Aesar</td><td>J62692</td><td>PBS bileşeni</td></tr><tr><td>p-tolilazetik asit</td><td>SCBT</td><td>sc-257959</td><td>hif inhibitör bileşik</td></tr><tr><td>sebasik asit</td><td>Sigma</td><td>283258-250G</td><td>hif inhibitör bileşik</td></tr><tr><td>keskin uçlu makas</td><td>Fisher</td><td>28301</td><td></td></tr><tr><td>steril Milli-Q su</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Çeşitli</td></tr><tr><td>YPD Et suyu</td><td>BD Biosciences</td><td>242810</td><td>YPD agar bileşeni</td></tr></tbody></table>

bir ex vivo assay gastrointestinal sistemde candida albicans hyphal morphogenesis Çalışma

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

Candida albicans gastrointestinal hyphal morfogenez (GI) yolu sıkı çeşitli çevresel sinyaller tarafından kontrol edilir, ve bu fırsatçı mantar patojenin yayılması ve patogenezönemli önemli bir rol oynar. Ancak, in vivo GI sisteminde mantar hyphae görselleştirmek için yöntemler bu morfogenez sürecini kontrol çevresel sinyallerin anlaşılmasını sınırlar zordur. Burada açıklanan protokol, gut homojen özlerde hiphal morfogenezinin görselleştirilmesi için yeni bir ex vivo yöntemi göstermektedir. Bir ex vivo tsay kullanarak, Bu çalışma göstermiştir ki antibiyotik tedavi farelerden cecal içeriği, ancak tedavi edilmemiş kontrol fareler, bağırsak içeriğinde C. albicans hiphal morfogenezi teşvik. Ayrıca, antibiyotik tedavi farelerden sekal içeriğine bağırsak metabolitleri belirli gruplar geri ekleyerek farklı hiphal morfogenez ex vivo düzenler. Birlikte ele alındığında, bu protokol tanımlamak ve C. albicans hyphal morfogenez gi sisteminde kontrol çevresel sinyalleri araştırmak için yeni bir yöntem temsil eder.

Thangamani laboratuvarı60 önceki bulgular ile birlikte bu sonuçlar C. albicans mide, ince bağırsak ve tedavi edilmemiş kontrol ve antibiyotik tedavi farelerin kalın bağırsak alınan bağırsak homojenate özleri ex vivo yetiştirilen zaman, C. albicans genellikle bir maya morfolojisi ile gelişir göstermektedir(Şekil 1B). Ancak, antibiyotik le tedavi edilen farelerden sekal ekstresinde yetiştiğinde, C. albicans kolayca morfogenez uğrar, maya ve hy...

Gut homojen özler ve immünofloresan boyama kullanılarak bu çalışmada açıklanan ex vivo tsay GI sisteminde Candida albicans hiphal morfogenez incelemek için yeni bir yöntem temsil eder. Bu yöntem bağırsakta morfogenetik geçişi düzenleyen çevresel sinyalleri araştırmak için kullanılabilir.

Bir Ex vivo Assay Gastrointestinal Sistemde Candida albicans Hyphal Morphogenesis Çalışma

Candida albicans hyphal morphogenesis in the gastrointestinal (GI) tract is tightly controlled by various environmental signals, and plays an important ...

Bu videoda gösterilen protokol bize mantar hiphal morfogenez üzerinde bağırsak metabolitlerinin rolünü anlamak için izin verir. Bu ex vivo tekniği daha fazla veya daha az hiçbir in vitro çalışma çoğaltmak bir şekilde mantar hyphal morfogenez çalışması için bağırsak en yakın yaklaşım. Bu yöntem, bağırsak metabolitlerinin diğer enterik patojenler üzerindeki rolünü incelemek için uygulanabilir.Otoklavlı sterilize keskin uçlu makas ve forceps kullanarak fareleri inceleyin. Ötenaziden sonra, karın ortaya çıkarmak için tüm uzuvları sabitleyerek bir diseksiyon yüzeyine hayvan güvenli. Kürkün forceps, makas veya bağırsak bölümlerine yapışmasını önlemek için karın bölgesini %70 etanol püskürtün.Çimdik ve karın tabanında deri bir bölümünü kaldırmak ve ceum veya bağırsak duvarı delinme önlemek için dikkat ederek deri ve altta yatan fasya ile küçük bir kesi oluşturmak için forseps kullanın. Bu kesiği kısmen periton boşluğunu açığa çıkaran göğüs kafesine uzatın, sonra her iki taraftaki ilk kesi noktasından başlayarak yukarı ve yanal olarak uzanan bir kesik yapın. Bu kanatları yanal olarak çekin ve periton boşluğunu tamamen ortaya çıkarmak için diseksiyon yüzeyine sabitleyin.Bağırsak içeriğinin en büyük miktarda toplanmasını sağlamak için mide ve kalın bağırsağın distal bölgede kesim üstün hale makas kullanırken forceps ile GI yolu ayıklayın. GI yolu çıkarılırken, tek tek bileşenlerin yırtılmasını önlemeye dikkat edin. Onların proksimal ve distal uçlarında mide, ince bağırsak, çekum ve kalın bağırsak ayırın.Her bölümden bağırsak içeriğinin toplanması için, distal ucunda tek bir kesi yapmak, sonra el ile forseps ile 1.5 mililitremikrosantrifüj tüp içine bağırsak içeriğini dışarı atmak. Ex vivo tahlilleri için numuneleri eksi 80 santigrat derecede saklayın. Bir YPD agar plaka üzerine C.albicans SC5314 taze bir kültür Streak ve 30 santigrat derece gecede kuluçka.Ertesi gün, iki veya üç orta ölçekli bireysel koloniler seçin ve PBS bir mililitre onları yeniden askıya. Dondurucudan dondurulmuş bağırsak içeriğini alın ve 25 santigrat derecede eritin. Yaklaşık 150 miligram bağırsak içeriğini yeni bir 1,5 mililitrelik tüpe aktarın ve 150 mikrolitre PBS ile yeniden askıya alın.İçgüdüiçeriğini homojenize etmek ve oda sıcaklığında yaklaşık bir dakika oturmasını sağlamak için numuneyi 30 saniye boyunca yüksek hızda girdaplayın. Homojenleri üç dakika boyunca 1,000 kez G'de santrifüj edin, sonra süpernatant'ı herhangi bir enkaz aktarmamaya özen terek yeni bir 1,5 mililitrelik tüpe aktarın. Santrifüj tekrarladıktan sonra, supernatant c.albicans inoculum 10 mikrolitre ekleyin, iyi karıştırın ve 4-5 saat boyunca 37 derece santigrat örnek kuluçka.C.albicans üzerinde eksojen metabolitlerin etkisini test etmek için, bağırsak içeriği ve PBS karışımı için metabolitlerin istenilen konsantrasyonu ekleyin, sonra yüksek hızda 30 saniye için örnek girdap, 10 dakika oda sıcaklığında oturup izin ve daha önce açıklandığı gibi santrifüj ve aşılama gerçekleştirin. Mantar hücre kültürünü 1,000 kez G'de iki dakika santrifüj edin ve süpernatant'ı atın. Numuneleri 15 dakika boyunca %2 PFA'nın 100 mikrolitresinde sabitleyin, ardından santrifüjü tekrarlayın ve süpernatant'ı atın.El yazması talimatlara göre bir mililitre PBS ile örnekleri iki kez yıkayın, ardından örnekleri oda sıcaklığında 100 mikrolitre PBS'de poliklonal C.albicans antikorile 30 dakika kuluçkaya yatırın. Kuluçkadan sonra, fotobeyaztasyondan kaçınmak için loş ışıkta çalışarak numuneyi PBS ile üç kez daha yıkayın. Karanlık bir odada, 1-500 seyreltme anti-tavşan IgG Alexa Fluor 488 antikor içeren PBS 100 mikrolitre 15 dakika oda sıcaklığında örnekleri kuluçka.Numuneyi bir mililitre PBS ile üç kez yıkadıktan sonra, 100 mikrolitre PBS'de yeniden askıya alın ve görüntüleme için 96 kuyuluk bir plakaya aktarın. 20X ve 40X objektif lensler ve yeşil floresan protein filtresi kullanarak floresan görüntüleme mikroskobu ile mantar hücrelerini görüntüleyin. C.albicans mide, ince bağırsak ve tedavi edilmeyen kontrol ve antibiyotik tedavi farelerin kalın bağırsak alınan bağırsak homojenate özleri ex vivo büyüdü, genellikle bir maya morfolojisi ile gelişir.Ancak, antibiyotik tedavi farelerden cecal ekstresi yetiştirilen, C.albicans kolayca maya ve hyphae formları ile sonuçlanan morfogenez uğrar. Bu antibiyotik tedavisi cecal ortamda değişikliklere neden olduğunu gösterir, Hangi C.Albicans hiphal morfogenezi neden. Antibiyotik le tedavi edilen farelerin sekal homojenate glikoz eksojen eklenmesi büyük bir hiphal gelişimi ex vivo gösterdi.Bu sonuçlar, antibiyotik tedavisi görmüş farelerin sekal homojenate geri bağırsak metabolitlerinin eklenmesi farklı c.albicans morfogenezi düzenler öneririz. Bu protokolü denerken, bağırsak içeriğinin seyreltilmesinin optimizasyonunun enkaz toplamadan bağırsak metabolitlerinin yeterli şekilde toplanmasını sağladığını unutmayın. İkiye bir ortama-bağırsak içeriği seyreltme aşmayın ve mümkünse daha düşük bir seyreltme hedefleyin.Bu teknik şimdi bağırsaktaki spesifik metabolitlerin hiphal gelişimini nasıl etkilediğini araştırmak için kullanılmakta olup, araştırmacıların bağırsak metabolitlerinin mantar patogenezi üzerindeki rolünü daha iyi anlamalarını sağlar.

an-ex-vivo-assay-to-study-candida-albicans-hyphal-morphogenesis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, Candida albicans'ın deri altı dokuda biyofilm oluşumunu incelemek için bir in vivo fare modelinin geliştirilmesini göstermektedir. Deney, Candida ile enfekte olmuş cihazların biyofilm gelişimi için hayvanın sırt bölgesine implante edilmesini içeriyor.

Candida albicans Bir İn Vivo Fare Modelinde Biyofilm Oluşumu

Bu video, antikorların mantar biyofilmleri üzerindeki etkisini incelemek için bir in vitro tekniği göstermektedir. Patojenik mantar Candida tropicalis, biyofilm oluşumunu kolaylaştıran aspartil proteinaz 2 (Sap2) salgılanan bir virülans faktörü salgılar. Biyofilm olgunlaşmasını inhibe eden Sap2'ye özgü antikorlar içeren ısıyla inaktive edilmiş bir serum eklendikten sonra, mantar hücrelerinin canlılığı bir kromojenik test kullanılarak değerlendirilir.

Antikorların Candida tropicalis Biyofilmi Üzerindeki Etkisini Değerlendirmek İçin Bir İn Vitro Test

Biz canlı hücre Video mikroskopi yöntemleri...

Fungal Patojen Fagositoz Canlı hücre video Mikroskopi

Bu makale, mantar virülans mekanizmaları hakkındaki bilgimizi ilerletmek için yararlı bir araç olacak olan fakültatif bir hücre içi insan mantar patojeni Candida glabrata'nın insan makrofajları ile etkileşimini incelemek için bir in vitro hücre kültürü model sistemi oluşturmak için bir protokolün ana hatlarını çizmektedir.

İnsan THP-1 Makrofajlarında Candida glabrata'nın Hücre İçi Davranışını İncelemek İçin İn vitro Sistemin Kurulması

Bir fare deri altı modelinde Candida albicans biyofilm gelişiminin deneysel bir prosedürünü sunuyoruz. Mantar biyofilmleri, koloni oluşturan birimlerin sayısının belirlenmesi ve üretilen ışık miktarının canlı hücre sayısına karşılık geldiği invaziv olmayan bir biyolüminesans görüntüleme ile ölçüldü.

Biyoparlaklık Görüntüleme Ardından Fare Subkutan Modeli Tıbben-ilgili yabancı Organları Candida albicans Biyofilm Geliştirme

Burada, mikrobiyal etkileşim çalışmaya çok yönlü ana model olarak Caenorhabditis elegans Yuvarlak solucanlar mevcut.

Nematot Caenorhabditis Elegans - konak-mikrop etkileşimleri çalışmaya çok yönlü Vivo içinde manken

Bu protokol ana bilgisayar fizyolojik koşullar altında Candida albicans biyofilm oluşumu görselleştirmek için özelleştirilebilir otomatik mikrosıvısal aygıt kullanımını açıklar.

Görselleştirme bir otomatik mikrosıvısal aygıtı kullanarak Candida albicans biyofilm oluşumu

Bu protokolün amacı Memeli gastrointestinal sistemde Candida albicans hücre şekli ve lokalizasyonu görselleştirmektir.

Situ Hibridizasyonfloresan Kullanarak Murine Gastrointestinal Sistemde Candida albicans Görselleştirilmesi

Bu makalede, non-invaziv konfokal mikroskopi kullanılarak bir memeli konakçısında aktif enfeksiyon sırasında morfogenez fenotipleri için orta büyüklükte Candida albicans mutant kütüphanelerinin taranması için bir yöntem anlatılmaktadır.

Bir Memeli Konağında Aktif Enfeksiyon Sırasında Candida albicans Mutant Suşlarında Morfogenez Fenotiplerini Taramak için In Vivo Görüntülemenin Kullanımı

Rekabetçi homing deneyler, doğrudan tek bir fare iki farklı hücre popülasyonlarının göçmen özelliklerinin değerlendirilmesi için izin verir. Burada oluşturulan ex vivo gut-tropik karşı-gut olmayan tropik T hücreleri göç karşılaştırarak bu yordamı göstermektedir.

Gut-tropik T Hücre Göç Eğitim Rekabetçi Homing Tahliller

Öğrenin, Candida albicans hif morfojenezisini incelemek için ex vivo bağırsak homojenatı ekstraktı ve immünofloresan boyama yöntemini. Bu teknik, gastrointestinal sistemde fungal gelişimi araştırmak için değerli bir araçtır.

Bir Ex vivo Assay Gastrointestinal Sistemde Candida albicans Hyphal Morphogenesis Çalışma

Daha fazla video keşfet