Name: Venöz Malformasyon için Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Öğrenin, venöz malformasyonları araştırmak için hasta kaynaklı endotelyal hücrelerle murine ksenogreft modeli oluşturmayı. Bu yöntem, histopatolojik özellikleri taklit ederek preklinik terapötik testlere olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar prova için Nora Lakes teşekkür etmek istiyorum. Bu el yazmasında bildirilen araştırma Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü tarafından, Ödül Numarası R01 HL117952 (E.B.), Ulusal Sağlık Enstitüleri bir parçası altında desteklenmiştir. İçerik sadece yazarların sorumluluğundadır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin resmi görüşlerini temsil etmek zorunda değildir.

<ol><li>Dompmartin, A., Vikkula, M., Boon, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venous+malformation%3A+update+on+aetiopathogenesis%2C+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Phlebology%3A+The+Journal+of+Venous+Disease%22%5BJournal%5D)">Venous malformation: update on aetiopathogenesis, diagnosis and management.</a> Phlebology: The Journal of Venous Disease. 25 (5), 224-235 (2010).</li>
<li>Limaye, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somatic+mutations+in+angiopoietin+receptor+gene+TEK+cause+solitary+and+multiple+sporadic+venous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Somatic mutations in angiopoietin receptor gene TEK cause solitary and multiple sporadic venous malformations.</a> Nature Genetics. 41 (1), 118-124 (2009).</li>
<li>Castel, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somatic+PIK3CA+mutations+as+a+driver+of+sporadic+venous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Somatic PIK3CA mutations as a driver of sporadic venous malformations.</a> Science Translational Medicine. 8 (332), 42(2016).</li>
<li>Limaye, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somatic+Activating+PIK3CA+Mutations+Cause+Venous+Malformation%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Human+Genetics%22%5BJournal%5D)">Somatic Activating PIK3CA Mutations Cause Venous Malformation.</a> The American Journal of Human Genetics. 97 (6), 914-921 (2015).</li>
<li>Castillo, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somatic+activating+mutations+in+Pik3ca+cause+sporadic+venous+malformations+in+mice+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Somatic activating mutations in Pik3ca cause sporadic venous malformations in mice and humans.</a> Science Translational Medicine. 8 (332), 43(2016).</li>
<li>Stratman, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+lumen+and+vascular+guidance+tunnel+formation+requires+MT1-MMP-dependent+proteolysis+in+3-dimensional+collagen+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell lumen and vascular guidance tunnel formation requires MT1-MMP-dependent proteolysis in 3-dimensional collagen matrices.</a> Blood. 114 (2), 237-247 (2009).</li>
<li>Okada, S., Vaeteewoottacharn, K., Kariya, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+Highly+Immunocompromised+Mice+for+the+Establishment+of+Patient-Derived+Xenograft+%28PDX%29+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Application of Highly Immunocompromised Mice for the Establishment of Patient-Derived Xenograft (PDX) Models.</a> Cells. 8 (8), 889(2019).</li>
<li>Byrne, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interrogating+open+issues+in+cancer+precision+medicine+with+patient-derived+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Interrogating open issues in cancer precision medicine with patient-derived xenografts.</a> Nature Reviews Cancer. 17 (4), 254-268 (2017).</li>
<li>Allen, P., Melero-Martin, J., Bischoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+I+collagen%2C+fibrin+and+PuraMatrix+matrices+provide+permissive+environments+for+human+endothelial+and+mesenchymal+progenitor+cells+to+form+neovascular+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Type I collagen, fibrin and PuraMatrix matrices provide permissive environments for human endothelial and mesenchymal progenitor cells to form neovascular networks.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 5 (4), 74(2011).</li>
<li>Allen, P., Kang, K. T., Bischoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+onset+of+perfused+blood+vessels+after+implantation+of+ECFCs+and+MPCs+in+collagen%2C+PuraMatrix+and+fibrin+provisional+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative%22%5BJournal%5D)">Rapid onset of perfused blood vessels after implantation of ECFCs and MPCs in collagen, PuraMatrix and fibrin provisional matrices.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative. 9 (5), 632-636 (2015).</li>
<li>Nowak-Sliwinska, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+guidelines+for+the+use+and+interpretation+of+angiogenesis+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Consensus guidelines for the use and interpretation of angiogenesis assays.</a> Angiogenesis. 21 (3), 425(2018).</li>
<li>Roh, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+results+of+surgical+treatment+for+patients+with+venous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">The results of surgical treatment for patients with venous malformations.</a> Annals of Vascular Surgery. 26 (5), 665-673 (2012).</li>
<li>Marler, J. J., Mulliken, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+management+of+hemangiomas+and+vascular+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Current management of hemangiomas and vascular malformations.</a> Clinics in Plastic Surgery. 32 (1), 99-116 (2005).</li>
<li>Goines, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+xenograft+model+for+venous+malformation%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">A xenograft model for venous malformation.</a> Angiogenesis. 21 (4), 725-735 (2018).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ponatinib+Combined+With+Rapamycin+Causes+Regression+of+Murine+Venous+Malformation%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+thrombosis%2C+and+vascular+biology%22%5BJournal%5D)">Ponatinib Combined With Rapamycin Causes Regression of Murine Venous Malformation.</a> Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. 39 (3), 496-512 (2019).</li>
<li>Le Cras, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutively+active+PIK3CA+mutations+are+expressed+by+lymphatic+and+vascular+endothelial+cells+in+capillary+lymphatic+venous+malformation%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Constitutively active PIK3CA mutations are expressed by lymphatic and vascular endothelial cells in capillary lymphatic venous malformation.</a> Angiogenesis. , 1-18 (2020).</li>
<li>Boscolo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+improves+TIE2-mutated+venous+malformation+in+murine+model+and+human+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Rapamycin improves TIE2-mutated venous malformation in murine model and human subjects.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (9), 3491-3504 (2015).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken çıkar çatışmaları yok.

Burada, VM'nin hasta kaynaklı ksenogreft modelini oluşturmak için bir yöntem açıklıyoruz. Bu rüre modeli araştırmacılar patolojik lümen genişleme daha derin bir anlayış kazanmak için izin veren mükemmel bir sistem sunuyor ve VM tedavisi için daha etkili ve hedefli tedaviler geliştirilmesinde etkili olacaktır. Bu kolayca kapiller lenfatik venöz malformasyon16gibi vasküler anomalilerin diğer türleri araştırmak için adapte edilebilir. Tekrarlanabilir vasküler lezyonların başarılı üretimi için çok öne...

Vaskülatür gelişimindeki bozukluklar venöz malformasyon (VM) gibi birçok hastalığın altında yatan nedenlerdir. VM anormal morfogenez ve damar genişlemesi ile karakterize konjenital bir hastalıktır1. VM doku ve endotel hücreleri (EC) üzerinde yapılan önemli çalışmalar iki gende fonksiyon kazanım mutasyonları tespit etti: TEK, tirozin kinaz reseptörü TIE2 kodlayan, ve PIK3CA, p110α kodlayan (katalitik alt birim) PI3-kinaz (PI3K)2,,3,4,5. Bu somatik mutasyonlar, PI3K/AKT dahil olmak üzere anahtar anjiyojenik/büyüme sinyal yollarının ligand-bağımsız hiper aktivasyonuile sonuçlanır ve böylece dilate ektatik venler3ile sonuçlanır. Bu önemli genetik keşiflere rağmen, anormal anjiyogenezi tetikleyen sonraki hücresel ve moleküler mekanizmalar ve genişlemiş vasküler kanalların oluşumu hala tam olarak anlaşılamamıştır.
Normal ve patolojik anjiyogenez sırasında, yeni damarlar önceden varolan vasküler ağdan filizlenir ve EC proliferasyon, göç, hücre dışı matriks (ECM) remodeling ve lümen oluşumu 6 dahil olmak üzere önemli hücresel süreçlerin bir dizi geçmesi6. EC'nin iki ve üç boyutlu (2D/3D) in vitro kültürleri bu hücresel özelliklerin her birini ayrı ayrı araştırmak için önemli araçlardır. Bununla birlikte, bir fare modeli ev sahibi mikro ortamda patolojik damar genişlemere açık bir talep ve çeviri araştırma için hedefli ilaçların preklinik değerlendirme için etkili bir platform sağlarken.
Bugüne kadar TIE2 fonksiyon artışı mutasyonları ile ilişkili vm transgenik bir murine modeli bildirilmemiştir. Mevcut transgenik VM fare modelleri, aktive mutasyonpik3CA p.H1047R3,5'inher yerde veya doku kısıtlamalı ekspresyonuna dayanır. Bu transgenik hayvanlar, bu sıcak nokta PIK3CA mutasyonunun tüm vücut veya dokuya özgü etkileri hakkında önemli bilgiler sağlar. Bu modellerin sınırlandırılması erken öldürücülük ile sonuçlanan yüksek patolojik vasküler ağ oluşumudur. Bu nedenle, bu fare modelleri mutasyonel olayların düzensiz oluşumunu ve VM patolojisinin lokalize doğasını tam olarak yansıtmamaktadır.
Aksine, hasta kaynaklı ksenogreft modelleri transplantasyon veya patolojik doku veya immünoeksik fareler içine hastalardan elde edilen hücrelerin enjeksiyon dayanmaktadır7. Ksenogreft modelleri hastalık gelişimi ve yeni terapötik ajanların keşfi hakkında bilgi genişletmek için güçlü bir araçtır8. Buna ek olarak, hasta kaynaklı hücreleri kullanarak bilim adamları hasta fenotipspektrum çalışması için mutasyon heterojenite recapitulate sağlar.
Burada, TIE2 ve/veya PIK3CA'nın mutant-aktif formunu ifade eden hasta kaynaklı VM EC'nin atimik çıplak farelerin arkasına deri altı enjekte edildiği bir protokolü açıklıyoruz. Enjekte edilen vasküler hücreler önceki vasküler ksenogreft modellerinde açıklandığı gibi anjiyogenezi teşvik etmek amacıyla Bir ECM çerçevesinde askıya alınır9,10,11. Bu VM EC önemli morfogenez geçmesi ve destekleyici hücrelerin yokluğunda genişlemiş, perfüzyon patolojik damarlar oluşturmak. VM'nin açıklanan ksenogreft modeli, kontrolsüz lümen genişlemesini inhibe edebilmeleri için hedeflenen ilaçların klinik öncesi değerlendirilmesi için etkili bir platform sağlar.

<table><tbody><tr><td>Atimik çıplak fareler, (Foxn1-nu); 5-6 hafta, erkekler</td><td>Envigo</td><td>069(nu)/070(nu/+)</td><td>Deri altı enjeksiyon</td></tr><tr><td>Biotinile Ulex europeaus Aglütininin-I (UEA-I)</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>B-1065</td><td>Histolojik analiz</td></tr><tr><td>Şişe üstü filtre (500 ml; 0.2 & mikro; M)</td> <td>Thermo Fisher</td><td>974106</td><td>Hücre kültürü</td>,</tr><tr><td>Sığır Serum Albümini (BSA)</td> <td>BSA</td><td>A7906-50MG</td><td>Hücre kültürü; Histolojik analiz</td></tr><tr><td>Kalsiyum klorid dihidrat (CaCl2.2H2O)</td> <td>Sigma</td><td>C7902-500G</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Kaliper Elektron</td><td>Mikroskobu Bilimleri</td><td>50996491</td><td>Lezyon tıkacı ölçümü</td></tr><tr><td>CD31 konjuge manyetik boncuklar (Dynabeads)</td><td>Life Technologies</td><td>11155D</td><td>EC ayırma</td></tr><tr><td>Hücre süzgeci (100 & mu; M)</td> <td>Greiner</td><td>542000</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Kollajenaz A</td><td>Roche</td><td>10103578001</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Konik Tüp; polipropilen (15 mL)</td><td>Greiner</td><td>07 000 241</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Konik Tüp; polipropilen (50 mL)</td><td>Greiner</td><td>07 000 239</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Coplin boyama kavanozu</td><td>Ted Pella</td><td>21029</td><td>Histolojik analiz</td></tr><tr><td>Kapak Camı (50 X 22 mm)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12545E</td><td>Histolojik Analiz</td></tr><tr><td>DAB: 3,3'Diaminobenzidin Reaktifi (ImmPACT DAB)</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>SK-4105</td><td>Histolojik Analiz</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Eagle's Medium'un Modifikasyonu (DMEM)</td><td>Corning</td><td>10-027-CV</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>DynaMag-2</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>12321D</td><td>EC ayırma</td></tr><tr><td>Kulak yumruğu</td><td>VWR</td><td>10806-286</td><td>Deri altı enjeksiyon</td></tr><tr><td>EDTA (0.5M, pH 8.0)</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15575-020</td><td>Histolojik analiz</td></tr><tr><td>Endotel Hücre Büyümesi Ortamı-2 (EGM2) Bulletkit (bazal ortam ve takviyeler)</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Eozin Y (alkol bazlı)</td><td>Thermo Scientific</td><td>71211</td><td>Histolojik analiz</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon Labs</td><td>2716</td><td>Histolojik analiz</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS), HyClone</td><td>GE Healthcare</td><td>SH30910.03</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Filtre ucu 1.250 &mu; L</td><td>MidSci</td><td>AV1250-H</td><td>Çoklu adım:</td></tr><tr><td>Filtre ucu 20 & mu; L</td><td>VWR</td><td>10017-064</td><td>Çoklu adımlar</td></tr><tr><td>Filtre ucu 200 & mu; L</td><td>VWR</td><td>10017-068</td><td>Çoklu adımlı</td></tr><tr><td>Formalin tamponlu çözelti (% 10)</td> <td>Sigma</td><td>F04586</td><td>Lezyon tıkacı diseksiyonu</td></tr><tr><td>Hemasitometre (INCYTO; Tek kullanımlık)</td><td>SKC FİLMLER</td><td>DHCN015</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Hematoksilen</td><td>Vektör Hematoksilen</td><td>H-3401</td><td>Histolojik analiz</td></tr><tr><td>İnsan plazma fibronektin saflaştırılmış protein (1mg/mL)</td><td>Sigma</td><td>FC010-10MG</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Hidrojen Peroksit çözeltisi (%30 a/a)</td><td>Sigma</td><td>H1009</td><td>Histolojik analiz</td></tr><tr><td>ImageJ Yazılımı</td><td></td><td></td><td>Analiz</td></tr><tr><td>İzofluran, USP</td><td>Akorn Hayvan Sağlığı</td><td>59399-106-01</td><td>Deri altı enjeksiyon</td></tr><tr><td>magnezyum sülfat heptahidrat (MgSO4.7H2O)</td> <td>Sigma</td><td>M1880-500G</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Temel Membran Matrisi (Fenol Kırmızı İçermez; LDEV içermez)</td> <td>Corning</td><td>356237</td><td>Deri altı enjeksiyon</td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpü (1.5 mL)</td> <td>VWR</td><td>87003-294</td><td>EC ayırma</td></tr><tr><td>Mikroskop Slayt Superfrost (75mm X 25mm)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>1255015-CS</td><td>Histolojik analiz</td></tr><tr><td>İğneleri, 26G x 5/8 inç Sub-Q steril iğneler</td><td>Becton Dickinson (BD)</td><td>BD305115</td><td>Deri altı enjeksiyon</td></tr><tr><td>Normal at serumu</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>S-2000</td><td>Histolojik analiz</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin-L-Glutamin (100X)</td> <td>Corning</td><td>30-009-CI</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Kalıcı montaj ortamı (VectaMount)</td> <td>Vektör Laboratuvarları</td><td>H-5000</td><td>Histolojik analiz</td></tr><tr><td>Havaneli Boyut C, Düz</td><td>Thomas Scientific</td><td>3431F55</td><td>EC izolasyonu</td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Tuzlu su (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP3994</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>ölçeği</td><td>VWR</td><td>65500-202</td><td>Deri altı enjeksiyon</td></tr><tr><td>Serolojik pipetler (10 ml)</td><td>VWR</td><td>89130-898</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Serolojik pipetler (5ml)</td><td>VWR</td><td>89130-896</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Sodyum karbonat (Na2CO3)</td><td>Sigma</td><td>223530</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Streptavidin, Yaban Turpu Peroksidaz, Konsantre, IHC</td><td>Vektör Laboratuvarları</td> için <td>SA-5004</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Şırıngası (60ml)</td><td>BD Biosciences</td><td>309653</td><td>Cel kültürü</td></tr><tr><td>ŞIRINGA FİLTRESİ (0.2 ve mikro; M)</td> <td>Corning</td><td>431219</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Şırıngaları (Luer Kilitli 1 mL)</td><td>Becton Dickinson (BD)</td><td>BD-309628</td><td>Deri altı enjeksiyonu</td></tr><tr><td>Doku kültürü ile tedavi edilmiş plaka (100 X 20 mm)</td><td>Greiner</td><td>664160</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Doku kültürü ile tedavi edilmiş plaka (145X20 mm)</td><td>Greiner</td><td>639160</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Doku kültürü ile tedavi edilmiş plakalar (60 X 15) mm</td><td>Eppendorf</td><td>30701119</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Tris-base (Trizma bazı)</td><td>Sigma</td><td>T6066</td><td>Histolojik analiz</td></tr><tr><td>Tripan Mavisi Çözeltisi (%0,4)</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15250061</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Tripsin EDTA, 1X (%0,05 Tripsin/0,53mM EDTA)</td><td>Corning</td><td>25-052-Cl</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Biorad</td><td>170-6531</td><td>Histolojik analiz</td></tr><tr><td>Buğday şişesi</td><td>VWR</td><td>16159-798</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Ksilenler</td><td>Fisher Scientific</td><td>X3P-1GAL</td><td>Histolojik analiz</td></tr></tbody></table>

venöz malformasyon için hasta kaynaklı ksenogreft modeli

A Patient-Derived Xenograft Model for Venous Malformation

Venöz malformasyon (VM), venöz ağın bozulmuş gelişiminden kaynaklanan ve sıklıkla işlevsiz venlerle sonuçlanan vasküler bir anomalidir. Bu makalenin amacı, insan VM'sini taklit eden ve hasta heterojenliğini yansıtabilen bir murine ksenogreft modelinin kurulmasını dikkatle tanımlamaktır. VM'de patolojik damar genişlemesinin başlıca itici etkenleri olarak endotel hücrelerinde (EC) hiper-aktive edici olmayan (somatik) TEK (TIE2) ve PIK3CA mutasyonları tespit edilmiştir. Aşağıdaki protokol, mutant TIE2 ve/veya PIK3CA'yı ifade eden hasta kaynaklı EC'nin izolasyonu, saflaştırılması ve genişlemesini açıklamaktadır. Bu EC ektatik vasküler kanallar oluşturmak için immünoeksik atimik farelerin arkasına subkutan enjekte edilir. TIE2 veya PIK3CA-mutant EC ile oluşturulan lezyonlar enjeksiyondan sonraki 7\u20129 gün içinde gözle görülür şekilde vaskülarize edilir ve VM hasta dokusunun histopatolojik özelliklerini yeniden özetler. Bu VM ksenogreft modeli VM oluşumu ve genişlemesi sürüş hücresel ve moleküler mekanizmaları araştırmak için güvenilir bir platform sağlar. Buna ek olarak, bu model insan VM görülen anormal damar genişlemesini önlemede yeni ilaç adaylarının etkinliğini test çeviri çalışmaları için etkili olacaktır.

Bu protokol, immünofif uyruvarlı çıplak farelerin arkasına hasta kaynaklı EC'nin deri altı enjeksiyonuna dayalı vm'nin bir murine ksenogreft modeli oluşturma sürecini açıklar. Endotel hücre kolonileri VM dokusundan veya lezyonal kandan ilk hücre izolasyonundan sonra 4 hafta içinde hasat edilebilir(Şekil 1A,B). Enjeksiyondan bir gün sonra, ksenogreft lezyon fişi yaklaşık 80\u2012100 mm2'likbir yüzey alanını kaplar. Elimizde TIE2/PIK3CA-mutant EC'li lezyon fişleri gözle görülür vaskülarize edili...

Venöz malformasyonun murine ksenogreft modelini oluşturmak için ayrıntılı bir protokol sayılmiyoruz. Bu model, hiper aktive edici TIE2 ve/veya PIK3CA gen mutasyonları içeren hasta kaynaklı endotel hücrelerinin deri altı enjeksiyonuna dayanmaktadır. Ksenogreft lezyonları VM hasta dokusunun histopatolojik özelliklerini yakından özetler.

Venöz Malformasyon için Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modeli

Venous malformation (VM) is a vascular anomaly that arises from impaired development of the venous network resulting in dilated and often dysfunctional ...

Bu protokol venöz malformasyonların histopatolojisini özetleyen hasta kaynaklı ksenogreftler oluşturmak için kullanılabilir. Bu daha bizim preklinik terapötik test taşımak için izin verildi. Bu teknik, hastanın doğrudan endotel hücrelerinin büyümesini ve deneysel tedaviye yanıtın günlük olarak izlenmesini sağlayan hızlı ve güvenilir bir NVivo sistemi sağlar.Bu yöntem, vasküler veya lenfatik anomalilerin diğer türlerini araştırmak için kolayca uyarlanabilir. Enjeksiyon için hücre süspansiyon hazırlayarak başlayın. Endotel hücrelerini beş mililitre önceden ısıtılmış %0.05 tripsin-EDTA ile 37 derecede iki dakika boyunca deneyin.Tripsin nötralize ve EGM beş mililitre ekleyerek ve 150 mililitre konik tüp içine hücreleri toplamak. 5 dakika boyunca 400 kez G santrifüj sonra supernatant aspire ve EGM üç mililitre hücreleri yeniden askıya. Hücreleri hemositometreile say.İstenilen hücre sayısı ile hacmi yeni bir 50 mililitrelik konik tüp içine girişim ve santrifüj ile tekrar hücreleri pelet. Hücre peletgevşetmek için küçük bir hacim bırakarak supernatant aspire. Enjeksiyon başına 220 mikrolitre BMEM ile hücre peletini yeniden askıya alın.Kabarcıklar oluşturmamak için emin olmak için buz üzerinde iyice hücre süspansiyon karıştırın. BMEM hücre kültürünü, pistonu çekerek bir mililitrelik şırınga nın içine aspire edin. Şırıngaya 26 kalibrelik steril bir iğne kilitlersiniz ve hazırlanan şırıngaları enjeksiyondan önce buzun üzerinde sabit tutarsınız.Farenin düzgün bir şekilde anestezi altında olmasını sağladıktan sonra midesine yerleştirin ve enjeksiyon bölgesini %70 etanol ile dezenfekte edin. Yavaşça herhangi bir yerleşmiş hücreleri askıya almak için hazırlanan şırınga rulo. Gıyabın sonuna kadar kabarcıklar ve hücre süspansiyon küçük bir hacim sınırdışı.Yapı gibi bir çadır oluşturmak için enjeksiyon yerinde cilt çimdik. Sonra derinin altına iğne sağ yerleştirin ve iğne kas dokusuiçine enjeksiyonu önlemek için çimdik deri serbest bırakarak sadece derin olduğundan emin olun. İğneyi tutmak, küçük bir küresel kütle oluşturmak için hücre süspansiyonunun 200 mikrolitresini dikkatlice enjekte edin.Kas içine hücre süspansiyon enjekte önlemek için dikkat edin. Her fişin uzunluğunu ve genişliğini bir kaliper ile ölçün. Kesilen ksenogreft fişleri cetvelin yanındaki kesme tahtasına hizala ve lezyonların brüt vaskülaritesini kaydetmek için bir görüntü alın.Daha sonra fişleri oda sıcaklığında bir gecede %10 formalin batırarak düzeltin. Diseksiyondan sonra, lezyon fişleri histolojik analiz için işlenir ve fiş içinde insan kaynaklı endotel hücrelerini tespit etmek için UEA-1 için lekeli. Çakışmayı önlemek için lezyon kesitinde X düzlem deseninde 20 X büyütmede parlak alan mikroskobu ile lezyon kesiti başına beş HPF görüntü alın.Çekilen resimlere bir ölçek çubuğu eklediğinden emin olun. Görüntüdeki HPF görüntülerini açın J.To ölçek çubuğunun piksellerini kalibre edin, düz çizgi aracını kullanın ve ölçek çubuğunun üzerinden gidin. Ardından, Analiz et ve Ölçeği Ayarla'yı tıklatarak ölçülen pikselleri milimetreye dönüştürün.Sonraki tıklatıldığında Ölçümleri Analiz Et ve alanı seçin ve bindirmeye ekleyin. Analiz kullanarak HPF'nin toplam alan alanını ölçün ve bu ölçümü ölçmek için bu ölçüyü kaydedin. Ücretsiz el seçimleri aracını kullanarak UEA-1 pozitif vasküler kanalel olarak anahat.Ana hatlarıyla açıklanan alanı ölçmek için Analiz ve Ölçü'ye tıklayın. HPF içindeki tüm vasküler kanalları ölçün. Her bölümde alınan beş HPF işlemini tekrarlayın ve daha fazla analiz için değerleri Excel'e aktarın.Daha sonra el yazması yönlere göre vasküler alan ve vasküler yoğunluk yüzdesini hesaplayın. Bu protokol kullanılarak TIE2 veya PIK3CA hiperaktif mutant endotel hücreleri ile lezyon fişleri gözle görülür vaskülarize edilir ve enjeksiyondan sonraki yedi ila dokuz gün içinde perfüzyona alınır. Lezyon fişleri insan VM dokusunun histopatolojik özelliklerine çok benzer ve ince bir endotel hücresi tabakası ile hizalanmış büyük vasküler kanallar görülebilir.Bu vasküler yapılar genellikle ev sahibi fare vaskülatürü ile fonksiyonel anastomoz doğrulayan eritrositler içerir. İnsana özgü lektin UEA-1 kullanılarak yapılan immünohistokimyasal boyama, vasküler bölgeleri kaplayan hücrelerin fare vaskülatürü yerine insan implante edilmiş hücrelerden elde edildiğini doğrular. Bu prosedürü takiben, deneysel tedavilerin spesifik etkilerini analiz etmek için proliferasyon veya apoptoz belirteçleri için lezyon bölümlerinin ek boyanması yapılabilir.Bu scenografik model vm hastaları için çeşitli klinik çalışmalarda etkinliğini göstermiştir mTOR inhibitörü rapamisin gibi venöz malformasyon için yeni tedavilerin preklinik çalışmalariçin kullanılmıştır.

a-patient-derived-xenograft-model-for-venous-malformation

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu videoda, insan kaynaklı melanom hücreleri, bağışıklığı baskılanmış bir farenin yan bölgesine deri altından implante ediliyor. PDX modeli, in vivo koşullarda gözlenen tümör heterojenliğini ve melanom agresifliğini daha iyi özetleyen melanom hücrelerinin klinik öncesi araştırmasına izin verir.

Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellemesi: Melanom Fare Modelleri Oluşturmak İçin Bir Teknik

Biz yetişkin fare serebral venöz hipertansiyon güvenilir bir model oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu model yaygın fare tarif edilir ve test edilmiştir. Farelerde bu yeni mevkidaşı genetik modifiye hayvanları kullanma imkanı açar ve böylece modelin uygulamalarını genişletmektedir.

Yetişkin Fare Venöz Hipertansiyon Modeli: Dış Boyun Ven Anastomoza Ortak Karotis Arter.

Vaskülarizasyon başarılı doku mühendisliği yaklaşımları anahtarıdır. Bu nedenle, güvenilir teknolojileri doku yapıları vasküler ağların gelişimini değerlendirmek için gereklidir. Burada görselleştirmek ve in vivo damarlanmayı ölçmek için basit ve maliyet-etkin bir yöntem mevcut.

A Tam Cilt Hata Modeli Biyomateryallerin vaskülarizasyonunu değerlendirin<em&gt; In Vivo</em

Hücresel ve moleküler neotissue oluşumu hakkındaki bilgi geliştirmek için, TEVG bir fare modeli yakın zamanda geliştirilmiştir. Greftler C57BL / 6 farelerinde Infrarenal vena kava araya girme greft olarak implante edildi. Bu model bizim klinik araştırmada elde edilenlere benzer sonuçlar elde, ama çok kısaltılmış zaman zarfında.

Fare Modeli Inferior Vena Cava İnterpozisyon Greft İmplantasyonu

Bu izole edilmiş ve iyi karakterize edilmiş bir ortamda in vivo damarlanmayı analiz etmek için bir model olarak bir arteriovenöz (AV) döngü üretilmesi için bir mikro yaklaşımı açıklar. Bu model yalnızca anjiyojenezde araştırılması için yararlıdır, ama aynı zamanda en iyi şekilde mühendislik eksenel vaskülarize ve transplante dokuların için uygundur.

Bir Küçük Hayvan Modelinde Arteriovenöz (AV) Döngü Anjiogenez ve Vaskülarize Doku Mühendisliği Eğitim için

Bu video, sıçanlarda venöz interpozisyon cerrahisi sonrası miyointimal hiperplazi gelişimini incelemek için bir model göstermektedir.

Ven interpozisyonu Model: baypas açıklığının Eğitim için uygun bir model

Hasta-türevi xenograft (PDX) modelleri daha sağlam özetlemek Melanom moleküler ve biyolojik özellikleri ve geleneksel plastik doku kültürü tabanlı asder karşılaştırıldığında tedavi tepkisi daha öngörü vardır. Burada, yeni PDX modellerinin kurulması ve mevcut PDX modellerinin karakterizasyonu/denemeleri için standart çalışma protokollerimizi tarif ediyoruz.

Bir melanom hasta-türetilen xenograft model

Bir aokaval fistül, her iki duvar üzerinden Vena Cava inferior içine murine infra-renal aort delip tarafından oluşturuldu ve inferior vena cava kısmi ligasyon yoluyla onun çıkış bir stenoz oluşturulması izledi. Bu tekrarlanabilir model, Merkezi venöz stenozu incelemek için kullanılabilir.

Bir outflow stenozu ile Aokaval fistül kullanarak Merkezi venöz stenozis murine modeli

Bu protokol, ven greftleri kullanılarak revaskülarizasyon cerrahisi sonrası venöz intimal hiperplaziyi zayıflatmak için stratejiler geliştirmek için damarları arteriyel kan basıncına maruz kalarak deneysel olarak venöz intimal hiperplazi yaratmayı amaçlamaktadır.

Arteriyel Kan Basıncı Altında İntimal Hiperplazi değerlendirmek için Ven Greftleri kullanarak Revaskülarizasyon Cerrahisi Taklit Bir Tavşan Venöz Interposition Modeli

Endojen olarak HER2 ile amplifiye edilmiş inflamatuar meme kanseri hücre hattının kuyruk damarı enjeksiyonu yoluyla üretilen meme kanseri beyin metastazının bir ksenogreft fare modelini tanımladık.

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Bu protokolde kardiyopulmoner bypass yapılmadan sol göğüs duvarında küçük bir kesiden yeni domuz ven baypas greftleme yapıldı. İntimal kalınlaşma gösteren postoperatif patoloji çalışması yapıldı.

Domuz Damarı Greft Hastalığı Modelinin Kurulması ve Değerlendirilmesi

Öğrenin, venöz malformasyonları araştırmak için hasta kaynaklı endotelyal hücrelerle murine ksenogreft modeli oluşturmayı. Bu yöntem, histopatolojik özellikleri taklit ederek preklinik terapötik testlere olanak tanır.

Venöz Malformasyon için Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modeli

Daha fazla video keşfet