Name: Travmatik Beyin Hasarına Nöroinflamatuar ve Hemodinamik Yanıtın Sistem Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-27T13:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: Öğrenin, travmatik beyin hasarına nöroinflamatuar ve hemodinamik yanıtları fare modellerinde kısmi en küçük kareler regresyonu ile sistem analizi yaparak karakterize edin. Bu yöntem, beyin patofizyolojisinin kapsamlı anlaşılmasını sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu proje Ulusal Sağlık Enstitüleri R21 NS104801 (EMB) ve R01 NS115994 (LBW / EB) ve Atlanta Çocuk Sağlığı Fakülte Odaklı Ödülü (EMB) tarafından desteklenmiştir. Bu çalışma aynı zamanda ABD Savunma Bakanlığı tarafından Ödül No altındaki Kongre Tarafından Yönlendirilen Tıbbi Araştırma Programları aracılığıyla desteklenmiştir. W81XWH-18-1-0669 (LBW/EMB). Görüşler, yorumlar, sonuçlar ve öneriler yazara aittir ve mutlaka Savunma Bakanlığı tarafından onaylanmamıştır. Bu materyal, Ulusal Bilim Vakfı Lisansüstü Araştırma Burs Programı tarafından Hibe No. 1937971 altında desteklenen çalışmalara dayanmaktadır. Bu materyalde ifade edilen herhangi bir görüş, bulgu ve sonuç veya öneri yazarlara aittir ve mutlaka Ulusal Bilim Vakfı'nın görüşlerini yansıtmaz.

<ol><li>Langlois, J. A., Rutland-Brown, W., Wald, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+and+impact+of+traumatic+brain+injury%3A+a+brief+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Head+Trauma+Rehabilitation%22%5BJournal%5D)">The epidemiology and impact of traumatic brain injury: a brief overview.</a> Journal of Head Trauma Rehabilitation. 21 (5), 375-378 (2006).</li>
<li>Iraji, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resting+State+Functional+Connectivity+in+Mild+Traumatic+Brain+Injury+at+the+Acute+Stage%3A+Independent+Component+and+Seed-Based+Analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Resting State Functional Connectivity in Mild Traumatic Brain Injury at the Acute Stage: Independent Component and Seed-Based Analyses.</a> Journal of Neurotrauma. 32 (14), 1031-1045 (2015).</li>
<li>Guskiewicz, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cumulative+effects+associated+with+recurrent+concussion+in+collegiate+football+players%3A+the+NCAA+Concussion+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Cumulative effects associated with recurrent concussion in collegiate football players: the NCAA Concussion Study.</a> Journal of the American Medical Association. 290 (19), 2549-2555 (2003).</li>
<li>Longhi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+window+of+vulnerability+to+repetitive+experimental+concussive+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Temporal window of vulnerability to repetitive experimental concussive brain injury.</a> Neurosurgery. 56 (2), 364-374 (2005).</li>
<li>Committee on Sports-Related Concussions in Youth, Board on Children, Youth, and Families, Institute of Medicine, National Research Council. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Sports-Related+Concussions+in+Youth%3A+Improving+the+Science%2C+Changing+the+Culture%22">Sports-Related Concussions in Youth: Improving the Science, Changing the Culture</a>. , National Academies Press (US). Washington (DC). http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK169016/ (2014).</li>
<li>Barkhoudarian, G., Hovda, D. A., Giza, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Molecular+Pathophysiology+of+Concussive+Brain+Injury+-+an+Update%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Medicine+and+Rehabilitation+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">The Molecular Pathophysiology of Concussive Brain Injury - an Update.</a> Physical Medicine and Rehabilitation Clinics of North America. 27 (2), 373-393 (2016).</li>
<li>McCrory, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+statement+on+concussion+in+sport--the+4th+International+Conference+on+Concussion+in+Sport+held+in+Zurich%2C+November+2012%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Journal+of+Sport+Medicine%22%5BJournal%5D)">Consensus statement on concussion in sport--the 4th International Conference on Concussion in Sport held in Zurich, November 2012.</a> Clinical Journal of Sport Medicine. 23 (2), 89-117 (2012).</li>
<li>Belanger, H. G., Vanderploeg, R. D., Curtiss, G., Warden, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+neuroimaging+techniques+in+mild+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuropsychiatry+and+Clinical+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Recent neuroimaging techniques in mild traumatic brain injury.</a> Journal of Neuropsychiatry and Clinical Neurosciences. 19 (1), 5-20 (2007).</li>
<li>Sours, C., Zhuo, J., Roys, S., Shanmuganathan, K., Gullapalli, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruptions+in+Resting+State+Functional+Connectivity+and+Cerebral+Blood+Flow+in+Mild+Traumatic+Brain+Injury+Patients%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Disruptions in Resting State Functional Connectivity and Cerebral Blood Flow in Mild Traumatic Brain Injury Patients.</a> PLoS ONE. 10 (8), 0134019(2015).</li>
<li>Buckley, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+Microvascular+Cerebral+Blood+Flow+Assessed+by+Diffuse+Correlation+Spectroscopy+after+Repetitive+Concussions+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Decreased Microvascular Cerebral Blood Flow Assessed by Diffuse Correlation Spectroscopy after Repetitive Concussions in Mice.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 35 (12), 1995-2000 (2015).</li>
<li>Sankar, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+cerebral+blood+flow+is+a+non-invasive+biomarker+of+neuroinflammation+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Low cerebral blood flow is a non-invasive biomarker of neuroinflammation after repetitive mild traumatic brain injury.</a> Neurobiology of Disease. 124, 544-554 (2019).</li>
<li>Vagnozzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+window+of+metabolic+brain+vulnerability+to+concussions%3A+mitochondrial-related+impairment--part+I%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Temporal window of metabolic brain vulnerability to concussions: mitochondrial-related impairment--part I.</a> Neurosurgery. 61, 379-388 (2007).</li>
<li>Longhi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+window+of+vulnerability+to+repetitive+experimental+concussive+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Temporal window of vulnerability to repetitive experimental concussive brain injury.</a> Neurosurgery. 56, 364-374 (2005).</li>
<li>Fujita, M., Wei, E. P., Povlishock, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intensity-+and+interval-specific+repetitive+traumatic+brain+injury+can+evoke+both+axonal+and+microvascular+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Intensity- and interval-specific repetitive traumatic brain injury can evoke both axonal and microvascular damage.</a> Journal of Neurotrauma. 29, 2172-2180 (2012).</li>
<li>Angoa-Perez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sports-related+head+injury%3A+bridging+the+gap+between+preclinical+research+and+clinical+reality%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Animal models of sports-related head injury: bridging the gap between preclinical research and clinical reality.</a> Journal of Neurochemistry. 129, 916-931 (2014).</li>
<li>Prins, M. L., Hales, A., Reger, M., Giza, C. C., Hovda, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeat+traumatic+brain+injury+in+the+juvenile+rat+is+associated+with+increased+axonal+injury+and+cognitive+impairments%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Repeat traumatic brain injury in the juvenile rat is associated with increased axonal injury and cognitive impairments.</a> Developmental Neuroscience. 32, 510-518 (2010).</li>
<li>Viano, D. C., Hamberger, A., Bolouri, H., Saljo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concussion+in+professional+football%3A+animal+model+of+brain+injury--part+15%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Concussion in professional football: animal model of brain injury--part 15.</a> Neurosurgery. 64, 1162-1173 (2009).</li>
<li>Kane, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+human+repetitive+mild+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A mouse model of human repetitive mild traumatic brain injury.</a> Journal of Neuroscience Methods. 203, 41-49 (2012).</li>
<li>Meehan, W. P., Zhang, J., Mannix, R., Whalen, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+Recovery+Time+Between+Injuries+Improves+Cognitive+Outcome+After+Repetitive+Mild+Concussive+Brain+Injuries+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Increasing Recovery Time Between Injuries Improves Cognitive Outcome After Repetitive Mild Concussive Brain Injuries in Mice.</a> Neurosurgery. 71 (4), 885-892 (2012).</li>
<li>Durduran, T., Yodh, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffuse+correlation+spectroscopy+for+non-invasive%2C+micro-vascular+cerebral+blood+flow+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroImage%22%5BJournal%5D)">Diffuse correlation spectroscopy for non-invasive, micro-vascular cerebral blood flow measurement.</a> NeuroImage. 85, 51-63 (2014).</li>
<li>Sathialingam, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+separation+diffuse+correlation+spectroscopy+for+measurement+of+cerebral+blood+flow+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Small separation diffuse correlation spectroscopy for measurement of cerebral blood flow in rodents.</a> Biomedical Optics Express. 9 (11), 5719(2018).</li>
<li>Lee, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+optical+assessment+of+resting-state+cerebral+blood+flow+in+children+with+sickle+cell+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophotonics%22%5BJournal%5D)">Noninvasive optical assessment of resting-state cerebral blood flow in children with sickle cell disease.</a> Neurophotonics. 6 (03), 1(2019).</li>
<li>Wang, H., Liu, Q., Tu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interpretation+of+partial+least-squares+regression+models+with+VARIMAX+rotation%5BTitle%5D)+AND+%22Partial+Least+Squares%22%5BJournal%5D)">Interpretation of partial least-squares regression models with VARIMAX rotation.</a> Partial Least Squares. 48 (1), 207-219 (2005).</li>
<li>Eriksson, L., Byrne, T., Johansson, E., Trygg, J., Vikström, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-+and+Megavariate+Data+Analysis+Basic+Principles+and+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Umetrics+Academy%22%5BJournal%5D)">Multi- and Megavariate Data Analysis Basic Principles and Applications.</a> Umetrics Academy. , (2013).</li>
<li>Conzen, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+and+regional+hemodynamics+of+isoflurane+and+sevoflurane+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+and+Analgesia%22%5BJournal%5D)">Systemic and regional hemodynamics of isoflurane and sevoflurane in rats.</a> Anesthesia and Analgesia. 74 (1), 79-88 (1992).</li>
<li>Durduran, T., Choe, R., Baker, W. B., Yodh, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffuse+optics+for+tissue+monitoring+and+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Reports+on+Progress+in+Physics%22%5BJournal%5D)">Diffuse optics for tissue monitoring and tomography.</a> Reports on Progress in Physics. 73 (7), 076701(2010).</li>
<li>Lee, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+separation+frequency-domain+near-infrared+spectroscopy+for+the+recovery+of+tissue+optical+properties+at+millimeter+depths%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Small separation frequency-domain near-infrared spectroscopy for the recovery of tissue optical properties at millimeter depths.</a> Biomedical Optics Express. 10 (10), 5362-5377 (2019).</li>
<li>Bertrand, F., Maumy-Bertrand, M. plsRglm: Partial Least Squares Regression for Generalized Linear Models. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://CRAN.R-project.org/package=pplsRglm">https://CRAN.R-project.org/package=pplsRglm</a> (2019).</li>
<li>White, B. R., Bauer, A. Q., Snyder, A. Z., Schlaggar, B. L., Lee, J. M., Culver, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+functional+connectivity+in+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Imaging of functional connectivity in the mouse brain.</a> PLoS One. 6, 16322(2011).</li>
<li>Buckley, E. M., Parthasarathy, A. B., Grant, P. E., Yodh, A. G., Franceschini, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffuse+correlation+spectroscopy+for+measurement+of+cerebral+blood+flow%3A+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophotonics%22%5BJournal%5D)">Diffuse correlation spectroscopy for measurement of cerebral blood flow: future prospects.</a> Neurophotonics. 1 (1), 011009(2014).</li>
<li>Rowan, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+reactivity+measured+in+awake+mice+using+diffuse+correlation+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophotonics%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular reactivity measured in awake mice using diffuse correlation spectroscopy.</a> Neurophotonics. 8 (1), (2021).</li>
<li>Tate, J., Ward, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferences+in+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22The+Clinical+Biochemist.+Reviews%22%5BJournal%5D)">Interferences in immunoassay.</a> The Clinical Biochemist. Reviews. 25 (2), 105-120 (2004).</li>
<li>Staples, E., Ingram, R. J. M., Atherton, J. C., Robinson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimising+the+quantification+of+cytokines+present+at+low+concentrations+in+small+human+mucosal+tissue+samples+using+Luminex+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimising the quantification of cytokines present at low concentrations in small human mucosal tissue samples using Luminex assays.</a> Journal of Immunological Methods. 394 (1-2), 1-9 (2013).</li>
<li>Gierut, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network-level+effects+of+kinase+inhibitors+modulate+TNF-%CE%B1-induced+apoptosis+in+the+intestinal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Signaling%22%5BJournal%5D)">Network-level effects of kinase inhibitors modulate TNF-α-induced apoptosis in the intestinal epithelium.</a> Science Signaling. 8 (407), 129(2015).</li>
</ol>

Bu yazıda, tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarına karşı hemodinamik ve nöroinflamatuar yanıtın değerlendirilmesi için yöntemler ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Ayrıca, bu verilerin kısmi en küçük kareler regresyonunu kullanarak çok değişkenli sistem analizinin bir parçası olarak nasıl entegre edileceğini gösterdik. Aşağıdaki metinde, protokolle ilişkili bazı önemli adımlar ve sınırlamaların yanı sıra yöntemlerin mevcut yöntemlere göre avantajlarını / dezavantajlarını tartışacağız.
...

Genel bakış Hafif travmatik beyin yaralanmaları (mTBI'lar) yılda ~ 1.6-3.8 milyon sporcuyu etkilemektedir1. Sub-sarsıntılı ve sarsıntılı yaralanmalar da dahil olmak üzere bu yaralanmalar, hastaları geçici fiziksel, duygusal, psikolojik vebilişsel semptomları olan 2 bırakabilir. Dahası, bir "güvenlik açığı penceresi" içinde sürdürülen tekrarlayan mTBI (rmTBI), tek başına tek bir mTBI'nın etkilerinden daha uzun süren bilişsel sonuçların kümülatif ciddiyetine ve süresine ve hatta sonuçta 4,5,6 işlevinin kalıcı kaybına yol açabilir. Birçok hasta nispeten kısa bir zaman diliminde (<1 hafta) iyileşse de, hastaların% 10-40'ı 1 ay > mTBI'nın daha uzun süreli etkilerine maruz kalırken, bazıları 1 yıla kadar sürer 3,7,8,9. Bu yaralanmaların yüksek prevalansına ve kalıcı sonuçlarına rağmen, yaralanma mekanizmaları tam olarak anlaşılamamıştır ve etkili bir tedavi stratejisi bulunmamaktadır.
mTBI / rmTBI sonrası sonuçlardaki yüksek değişkenlik göz önüne alındığında, terminal mTBI / rmTBI çalışmalarında elde edilen dokudan erken evre moleküler tetikleyicilerin tanımlanmasındaki bir zorluk, bu moleküler tetikleyicilerin uzun vadeli sonuçlara kesin "akut moleküler bağlantılarını" gösteren uzunlamasına verilerin eksikliğidir. Bu zorluğun üstesinden gelmek için grubumuz, diffüz korelasyon spektroskopisi (DCS) adı verilen optik bir araç kullanılarak akut olarak ölçülen akut olarak azaltılmış serebral kan akışının, rmTBI10'un bir fare modelinde uzun vadeli bilişsel sonuçla güçlü bir şekilde ilişkili olduğunu keşfetti. Bu hemodinamik biyobelirteci kullanarak, akut olarak düşük serebral kan akışına (ve buna bağlı olarak daha kötü tahmin edilen uzun vadeli sonuç) sahip farelerin, hem MAPK hem de NFκB yolaklarında nöronal fosfo-sinyallemede eşlik eden akut artışlara, pro-inflamatuar sitokinlerin nöronal ekspresyonunda artışlara ve fagosit / mikroglial belirteç Iba111'in ekspresyonunda artışlara sahip olduğunu gösterdik. . Bu veriler, nöronal fosfo-sinyalleme, sitokin ekspresyonu ve mikroglial aktivasyon için hem yaralanma sonrası serebral kan akışının akut düzenlenmesinde hem de nöronal disfonksiyona ve daha kötü bilişsel sonuçlara yol açan bir sinyal kaskadının tetiklenmesinde olası bir rol olduğunu göstermektedir. Burada, rmTBI sonrası hem hemodinamik hem de nöroinflamatuar ortamı aynı anda araştırmak için yaklaşımımızı ve bu karmaşık veri kümelerinin nasıl entegre edileceğini detaylandırıyoruz. Spesifik olarak, bu kapsamlı yaklaşımın dört temel adımı için prosedürleri özetliyoruz: (1) hafif travmatik beyin hasarının ağırlık verme modeli, (2) serebral kan akışının diffüz korelasyon spektroskopisi ile değerlendirilmesi, (3) nöroenflamatuar ortamın nicelleştirilmesi ve (4) veri entegrasyonu (Şekil 1). Aşağıda, okuyuculara yöntemlerimizin arkasındaki mantık boyunca rehberlik etmeye yardımcı olmak için bu önemli adımların her birine kısa bir giriş sunuyoruz. Makalenin geri kalanı, bu önemli adımların her biri için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır.
Hafif travmatik beyin hasarının ağırlık verme modeli Tekrarlayan hafif TBİ'nin birçok mükemmel preklinik modeli 12,13,14,15,16,17,18 olmasına rağmen, iyi kurulmuş ve klinik olarak ilgili bir ağırlık düşüşü kapalı kafa travması modeli kullanıyoruz. Bu modelin temel özellikleri arasında (1) sağlam kafatası / kafa derisinin künt etkisi ve ardından başın boyun etrafında sınırsız dönmesi, (2) açık yapısal beyin hasarı, ödem, kan-beyin bariyeri hasarı, akut hücre ölümü veya kronik beyin dokusu kaybı ve (3) sadece birden fazla vuruştan sonra ortaya çıkan kalıcı (1 yıla kadar) bilişsel eksiklikler19 (Şekil 2).
Serebral kan akımının diffüz korelasyon spektroskopisi ile değerlendirilmesi Diffüz korelasyon spektroskopisi (DCS), kan akışını ölçen invaziv olmayan bir optik tekniktir 5,20,21. DCS'de, doku yüzeyine yakın kızılötesi bir ışık kaynağı yerleştirilir. Doku yüzeyindeki kaynaktan sabit bir mesafeye, dokuya dağılmış olan ışığı tespit etmek için bir dedektör yerleştirilir (Şekil 3). Hareket eden kırmızı kan hücrelerinin saçılması, tespit edilen ışık yoğunluğunun zamanla dalgalanmasına neden olur. Korelasyon difüzyon teorisi olarak bilinen basit bir analitik model, bu yoğunluk dalgalanmalarını bir kan akışı indeksi ile ilişkilendirmek için kullanılır (CBFi, Şekil 4). CBF i birimleri (cm2 / s) geleneksel akış birimleri (mL / dak / 100 g) olmamasına rağmen, farelerde yapılan önceki bir çalışma, CBFi'nin MRI 21 etiketli arteriyel spin ile ölçülen serebral kan akışı ile güçlü bir şekilde ilişkili olduğunu göstermiştir.
Referans olarak, burada kullanılan DCS cihazı şirket içinde inşa edilmiştir ve 852 nm uzunluğunda bir tutarlılık uzunluğu lazeri, bir dizi 4 foton sayma çığ fotodiyotu ve bir donanım otokorelatör kartından (tek tau, 8 kanal, 100 ns minimum örnekleme süresi) oluşur 21,22. Veriler, LabView'da yazılmış ev yapımı yazılımlarla elde edilir. Cihazın hayvan arayüzü, 6 mm aralıklarla yerleştirilmiş ve siyah bir 3D baskılı sensöre (4 mm x 8 mm) gömülü 400 μm çok modlu kaynak fiber (400-2200 nm dalga boyu aralığı, saf silika çekirdek, TECS Sert Kaplama, 730 ± 30 nm ikinci mod kesme) ve 780 nm tek modlu dedektör fiberinden (4 mm x 8 mm, Şekil 3).
Nöroinflamatuar ortamın nicelleştirilmesi Nöroinflamasyon çeşitli hücresel süreçler tarafından düzenlenmesine rağmen, iki temel ilgili mekanizma sitokinler / kemokinler tarafından hücre dışı sinyalizasyon ve fosfo-proteinler tarafından hücre içi sinyalleşmedir. Yaralanma sonrası beynin nöroinflamatuar ortamını araştırmak için, beyinler farelerden çıkarılır, mikrodisseke edilir ve sitokinler / kemokinler ve fosfo-proteinler Luminex kullanılarak ölçülür (Şekil 5, Şekil 6, Şekil 7). Luminex çoklanmış immünotahliller, enzime bağlı immünosorbent tahlillerini (ELISA'lar) floresan olarak etiketlenmiş manyetik boncuklara bağlayarak bu proteinlerin çeşitli koleksiyonlarının eşzamanlı olarak ölçülmesini sağlar. İlgilenilen her protein için farklı floresan etiketler kullanılır ve her etiketin boncukları, söz konusu proteine karşı bir yakalama antikoru ile işlevselleştirilir. Her proteini yakalamak için yüzlerce boncuk birlikte karıştırılır, 96 kuyucuklu bir tabağa yerleştirilir ve numune ile inkübe edilir. Numune inkübasyonundan sonra, numune yıkanırken boncukları kuyuya hapsetmek için bir mıknatıs kullanılır. Daha sonra, biyotinile tespit antikoru, geleneksel bir ELISA'ya benzer bir antikor-antijen sandviç oluşturmak için ilgilenilen analite bağlanır, ancak farklı bir floresan etiketli boncuk üzerinde meydana gelen her protein için ELISA ile. Fikoeritrin konjuge streptavidin (SAPE) eklenmesi her reaksiyonu tamamlar. Luminex cihazı daha sonra boncukları okur ve sinyali her floresan etiketine / proteinine göre ayırır.
Veri entegrasyonu Luminex testinde ölçülen çok sayıda analit (örneğin, sitokinler) nedeniyle, her bir nicelleştirilmiş protein ayrı ayrı analiz edilirse, veri analizinin yorumlanması zor olabilir. Analizi basitleştirmek ve analitler arasında gözlemlenen eğilimleri yakalamak için, kısmi en küçük kareler regresyonu adı verilen çok değişkenli bir analiz yöntemi kullanıyoruz (PLSR, Şekil 8)23. PLSR, ölçülen her proteine (yani, "öngörücü değişkenler" olarak adlandırılan sitokinler veya fosfo-proteinler) karşılık gelen bir ağırlık ekseni tanımlayarak, ölçülen proteinlerin bir yanıt değişkeni (örneğin, serebral kan akışı) ile birlikte en iyi şekilde açıklanmasını sağlayarak çalışır. Ağırlıklar "yüklemeler" olarak adlandırılır ve gizli değişken (LV) olarak bilinen bir vektöre monte edilir. İki LV'nin her birinde ölçülen protein verilerini yansıtarak ("puanlama" olarak adlandırılır), veriler bu LV'ler açısından yeniden çizilebilir. PLSR'yi hesapladıktan sonra, AG'ye yapılan numune projeksiyonları ile öngörücü değişken24 arasındaki kovaryansı en üst düzeye çıkaran yeni bir AG tanımlamak için bir varimax rotasyonu kullanıyoruz. Bu yaklaşım, LV1'i yanıt değişkeninin varyansının en iyi açıklandığı eksen olarak tanımlamamızı sağlar. LV2, yanıt değişkeni ile LV1 artık verileri arasındaki eş-varyansı en üst düzeye çıkarır, bu da numuneler arasındaki biyolojik veya teknik değişkenlikle ilişkilendirilebilir. Son olarak, PLSR modelinin herhangi bir örnek23'e büyük ölçüde bağımlı olmadığından emin olmak için bir Leave One Out Cross Validation (LOOCV) yürütüyoruz.
Bu protokolde, mTBI'ya nöroinflamatuar ve hemodinamik doku yanıtını karakterize etmek için yöntemleri detaylandırıyoruz. Genel iş akışı Şekil 1'de özetlenmiştir. Bu protokolde, fareler ağırlık düşürme kapalı kafa travması modeli kullanılarak bir veya daha fazla mTBI'ye tabidir. Serebral kan akımı, yaralanmadan önce ve yaralanmadan sonra birden fazla zaman noktasında uzunlamasına ölçülür. Nöroenflamatuar değişikliklerin sorgulanması için ilgi duyulan zaman noktasında, hayvan ötenazi yapılır ve beyin çıkarılır. İlgilenilen beyin bölgeleri mikrodiseksiyon yoluyla izole edilir ve daha sonra proteini çıkarmak için lize edilir. Lisatlar daha sonra hem sitokin hem de fosfo-protein ekspresyonunun Luminex multipleks immünotahlilleri ve ayrıca Western lekesi için kullanılır. Son olarak, bu bütünsel veri kümesi kısmi en küçük kareler regresyon analizi kullanılarak tümleştirilir.

<table><tbody><tr><td>Ayarlanabilir pipetler</td><td></td><td></td><td>herhangi bir ayarlanabilir pipet</td></tr><tr><td>Alüminyum folyo</td><td>VWR</td><td>89107-726</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Plex hücre lizis kiti</td><td>C Bio-Rad</td><td>171304012</td><td></td></tr><tr><td>MARKA MARKA plakaları pureGrade Mikroplakalar, Steril</td><td>Olmayan BrandTech</td><td>781602 96</td><td></td></tr><tr><td>Komple mini proteaz inhibitör tablet</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11836153001</td><td></td></tr><tr><td>Tüy dökücü krem</td><td>Amazon</td><td>Nair</td><td></td></tr><tr><td>DiH2O</td><td>VWR</td><td>VWRL0200-1000</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyulu düz tabanlı plakalar için el tipi manyetik ayırıcı blok</td><td>Millipore Sigma Kataloğu</td><td>40-285</td><td></td></tr><tr><td>Donanım Otokorelatör Kartı</td><td>www.correlator.com</td><td>Flex05-8ch</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran 250 mL</td><td>MED-VET INTERNATIONAL</td><td>RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe (11,2 x 21,3 cm)</td><td>VWR</td><td>21905-026</td><td></td></tr><tr><td>Laboratuvar vorteks karıştırıcı</td><td>VWR</td><td>10153-838</td><td></td></tr><tr><td>LabView</td><td>Ulusal Aletler</td><td>LabVIEW</td><td></td></tr><tr><td>Luminex 200, HTS, FLEXMAP 3D veya xPONENT yazılımı ile MAGPIX</td><td>Luminex Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luminex Sürücü Sıvısı</td><td>Luminex</td><td>MPXDF-4PK</td><td></td></tr><tr><td>Luminex kılıf sıvısı</td><td>EMD Kırlangıç</td><td>SHEATHFLUID</td><td></td></tr><tr><td>MILLIPLEX HARITASI Fare Sitokin / Kemokin Manyetik Boncuk Paneli - Önceden Karıştırılmış 32 Plex - İmmünoloji Multipleks Testi</td><td>Millipore Sigma</td><td>MCYTMAG-70K-PX32</td><td></td></tr><tr><td>MILLIPLEX MAPK/SAPK Sinyalizasyon 10-Plex Kit-Hücre Sinyalizasyon Multipleks Testi</td><td>Millipore Sigma</td><td>48-660MAG</td><td></td></tr><tr><td>Mini LabRoller döndürücü</td><td>VWR</td><td>10136-084</td><td></td></tr><tr><td>Fenilmetilsülfonil florür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7626-1G</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td><td>VWR</td><td>97064-158</td><td></td></tr><tr><td>Plaka Kapatıcı</td><td>VWR</td><td>82050-992</td><td></td></tr><tr><td>Polipropilen mikrofüj tüpleri</td><td>VWR</td><td>20901-547</td> Mini LabRoller Millipore Sigma Z674591 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Reaktif Rezervuarları</td><td>VWR</td><td>89094-668</td><td></td></tr><tr><td>R Programlama Dili</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RStudio<</td><td>u>www.rstudio.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sonicator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Titre plakası çalkalayıcı</td><td>VWR</td><td>12620-926</td><td></td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416-50ML</td><td></td></tr><tr><td>1 m akrilik kılavuz tüp</td><td>McMaster-Carr</td><td>49035K85</td><td></td></tr><tr><td>4 foton sayma çığ fotodiyot</td><td>Perkin-Elmer</td><td>SPCM-AQ4C-IO</td><td></td></tr><tr><td>400 um çok modlu kaynak fiber</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>FT-400-EMT</td><td></td></tr><tr><td>54 g cıvata</td><td>Ace Donanım</td><td></td><td>0.95 cm temel gövde çapı, 2 cm kafa çapı, 10.2 cm uzunluk</td></tr><tr><td>780 nm tek modlu dedektör fiber</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>780HP</td><td></td></tr><tr><td>852 nm uzun tutarlılık uzunluğuna sahip lazer</td><td>TOPTICA Photonics</td><td>iBeam smart</td><td></td></tr></tbody></table>

travmatik beyin hasarına nöroinflamatuar ve hemodinamik yanıtın sistem analizi

Systems Analysis of the Neuroinflammatory and Hemodynamic Response to Traumatic Brain Injury

Hafif travmatik beyin yaralanmaları (mTBI) önemli bir halk sağlığı sorunudur. mTBI'ya tekrar tekrar maruz kalmak, kümülatif, uzun süreli fonksiyonel eksikliklere yol açabilir. Grubumuz ve diğerleri tarafından yapılan çok sayıda çalışma, mTBI'nın sitokin ekspresyonunu uyardığını ve mikroglia'yı aktive ettiğini, serebral kan akışını ve metabolizmasını azalttığını ve serebrovasküler reaktiviteyi bozduğunu göstermiştir. Ayrıca, birkaç çalışma bu nöroinflamatuar ve hemodinamik belirteçlerdeki bozukluklar ile bilişsel bozukluklar arasında bir ilişki olduğunu bildirmiştir. Burada, farelerde mTBI'ya nöroinflamatuar ve hemodinamik doku yanıtını karakterize etmek için yöntemler detaylandırılmıştır. Spesifik olarak, mTBI'nın ağırlık düşürme modelinin nasıl gerçekleştirileceğini, diffüz korelasyon spektroskopisi adı verilen invaziv olmayan bir optik teknik kullanarak serebral kan akışının uzunlamasına nasıl ölçüleceğini ve mikroglia ve diğer nöral bağışıklık hücrelerinin aktivitesine yanıt veren ve düzenleyen sitokinleri ve immünomodülatör fosfo-proteinleri (örneğin, MAPK ve NFκB yolları içinde) ölçmek için beyin dokusu örnekleri üzerinde Luminex çoklanmış immünoassay nasıl yapılacağını açıklıyoruz. Son olarak, tüm bu değişkenler arasındaki ilişkileri anlamak için çok değişkenli bir sistem analizi yaklaşımı kullanarak bu verilerin nasıl entegre edileceğini ayrıntılarıyla açıklıyoruz. Bu fizyolojik ve moleküler değişkenler arasındaki ilişkileri anlamak, sonuçta mTBI'dan sorumlu mekanizmaları tanımlamamızı sağlayacaktır.

Daha önce toplanan veriler, sekiz C57BL / 6 fareden oluşan bir grubun, günde bir kez11 aralıklı üç kapalı kafa yaralanmasına maruz kaldığı önceki çalışmalardan alınmıştır (Şekil 2). Bu çalışmada serebral kan akımı son yaralanmadan 4 saat sonra diffüz korelasyon spektroskopisi ile ölçülmüştür (Şekil 3, Şekil 4). Yaralanma sonrası CBF değerlendirmesinden sonra, hayvanlar ötenazi yapıldı ve immünoassay yoluyla s...

Bu protokol, hafif travmatik beyin hasarına nöroinflamatuar ve hemodinamik yanıtı karakterize etmek ve bu verileri kısmi en küçük kareler regresyonunu kullanarak çok değişkenli bir sistem analizinin bir parçası olarak entegre etmek için yöntemler sunmaktadır.

Travmatik Beyin Hasarına Nöroinflamatuar ve Hemodinamik Yanıtın Sistem Analizi

Mild traumatic brain injuries (mTBIs) are a significant public health problem. Repeated exposure to mTBI can lead to cumulative, long-lasting functional ...

Bu yöntemler, kısmi en küçük kareler regresyonu kullanılarak çok değişkenli bir sistem analizinin bir parçası olarak beyin hasarına nöroinflamatuar ve hemodinamik yanıtları karakterize etmek için kullanılabilir. Bu teknikler, beynin yaralanmaya verdiği tepkinin bütünsel bir görünümünü vermek için kullanılır. Bir yaralanmaya neden olmak için, anestezi uygulanmış bir farede ayak parmağı sıkışmasına yanıt verilmediğini doğrulayın ve fareyi ince bir zarın ortasındaki yüzüstü pozisyona yerleştirin.Öğretilen dokuyu tutmak için her iki elinizi kullanarak, farenin kuyruğunu bir başparmağın altına sabitleyin ve kılavuz tüpün altındaki fare kafasına yerleştirin. Fare konumdayken, gözlerin arkası ile kulakların önü arasındaki darbeyi hedefleyerek, cıvatayı kılavuz tüpün üstünden farenin başının sırt kısmına bırakın. Çarpma üzerine, fare dokuyu kıracak ve başın boyun etrafında hızlı bir şekilde hızlanmasına izin verecektir.Yaralanmadan sonra, farenin 37 santigrat derecelik bir ısıtma pedi üzerinde sırtüstü pozisyonda iyileşmesine izin verin. İki dakikalık bir stabilizasyon süresinden sonra, DCS sensörünü farenin kafatasının sağ yarımküresi üzerinde yavaşça dinlendirin, böylece optik sensörün üst kenarı gözün arkasıyla hizalanır ve sensörün tarafı orta hat boyunca hizalanır. Oda ışığından korumak ve beş saniyelik veri elde etmek için sensörün üzerine bir el koyun.Ardından, sensörü sol yarımküre üzerinde yeniden konumlandırın ve beş saniyelik sol yarımküre verilerini alın. Çoklanmış sitokin ve fosfo-protein üretimini değerlendirmek için, yaklaşık üç miligram hasat edilmiş hayvan beyin dokusu başına 150 mikrolitre karışık lizis tamponu ekleyin. Ve dokuyu 15 ila 20 kez mekanik olarak tritüre etmek için 1.000 mikrolitrelik bir pipet ucu kullanın.Homojenize edilmiş numuneleri, santrifüjleme yoluyla doku kalıntılarını toplamadan önce dört santigrat derecede 30 dakika boyunca bir rotatöre yerleştirin. Süpernatantları yeni tüplere aktarın ve kalan çökeltiyi çıkarmak için numuneleri santrifüj edin. Süpernatantları yeni tüplere aktarın ve standart protokollere göre BCA testi ile protein konsantrasyonunu belirleyin.Her numunenin 25 mikrolitresini, yeni tüplerdeki doğrusal aralık analizi ile belirlenen optimum protein konsantrasyonunda hazırlayın. Her numunenin toplam hacmini 25 mikrolitreye normalleştirmek için tahlil tamponu kullanmak. Bir tahlil plakası hazırlamak için, 96 delikli bir plakanın her bir oluğuna 200 mikrolitre yıkama tamponu ekleyin ve plakayı dakikada 750 devirde 10 dakika çalkalayıcı üzerinde çalkalayın.Kuluçkanın sonunda, yıkama tamponunu boşaltın ve herhangi bir kalıntıyı gidermek için plakayı bir kağıt havluya dokunun. Daha sonra, her bir kuyucuğa 25 mikrolitre tahlil tamponu, ardından arka plan kuyularına 25 mikrolitre ilave tampon ekleyin. Seyreltilmiş numunelerin 25 mikrolitresini uygun numune kuyularına ekleyin ve her bir kuyucuğa iyice yeniden askıya alınmış boncukların 25 mikrolitresini eklemeden önce bir dakika boyunca çoklanmış manyetik boncukların içinden vorteks yapın.Tüm boncuklar eklendiğinde, plakayı bir plaka kapatıcı ile kapatın ve iki ila sekiz santigrat derecede sallanarak bir gece inkübasyonu için plakayı folyo ile örtün. Ertesi sabah, plakayı manyetik bir ayırıcıya yerleştirin ve kuyucukların mıknatıslarla hizalandığından emin olun. İki dakika sonra, kuyu içeriğini plaka hala manyetik ayırıcıya bağlı olacak şekilde boşaltın ve her bir kuyucuğa 200 mikrolitre yıkama tamponu ekleyin.İki dakika boyunca sallanmasını sağladıktan sonra, plakayı iki dakika boyunca manyetik ayırıcıya yerleştirin. Daha sonra, kuyu içeriğini plaka hala manyetik ayırıcıya bağlı olarak boşaltın ve plakayı, az önce gösterildiği gibi, kuyu başına taze bir 200 mikrolitre yıkama tamponu ile yıkayın. İkinci yıkamadan sonra, kuyucuk başına 25 mikrolitre algılama antikoru ekleyin ve oda sıcaklığında dakikada 750 devirde bir saatlik inkübasyon için folyo ile tekrar örtün.Kuluçkanın sonunda, her bir oyuğa 25 mikrolitre streptavidin fikoeritrin ekleyin ve plakayı oda sıcaklığında 30 dakika daha çalkalayıcıya geri koyun. Kuluçkanın sonunda, kuyu içeriğini boşaltmadan önce plakayı iki dakika boyunca manyetik ayırıcıya yerleştirin. Plakayı yıkama başına 200 mikrolitre taze yıkama tamponu ile iki kez yıkayın ve her bir oyuğa 75 mikrolitre uygun tahrik sıvısı ekleyin.Ardından, plaka çalkalayıcıdaki boncukları oda sıcaklığında beş dakika boyunca tekrar askıya alın ve analizördeki plakaları üreticinin talimatlarına göre okuyun. Bu analizde, serebral kan akımı, son yaralanmadan dört saat sonra diffüz korelasyon spektroskopisi ile ölçüldü. Her yarım küre için serebral kan akış indeksi ve ortalama serebral akış indeksi daha sonra belirlenebilir.Tüm numunelerden veri toplamadan önce uygun bir protein yükleme kütlesini belirlemek için doğrusal bir aralık analizi yapılabilir. Sitokin verileri, örnek verilerden arka plan ölçümleri çıkarılarak ve ardından her anolit için Z-skoru verileri hesaplanarak hazırlanabilir. Kısmi en küçük kareler regresyonu, yanıt değişkeni olarak bir fagosit mikroglial aktivasyon belirteci veya başka bir ilgili değişken ve öngörücü değişkenler olarak sitokin ölçümleri kullanılarak gerçekleştirilebilir.Varimax rotasyonu, aktivasyon işaretleyici ölçümleri ile gizli değişken birdeki verilerin kovaryansını en üst düzeye çıkarmak için gerçekleştirilebilir. Gizli değişken olandaki yüksek yükleme ağırlıkları, aktivasyon belirtecinin yüksek ekspresyonu ile en çok ilişkili sitokin ifadelerine karşılık gelir. Aktivasyon belirteci ve sitokinler arasındaki doğrusal regresyonlar, gizli değişken birinde en büyük yükleme ağırlığına sahip sitokinlerin de bu analiz için istatistiksel olarak anlamlı olduğunu göstermektedir.Bu protokolü travmatik beyin hasarına odaklamamıza rağmen, bu yöntemler beyni etkileyen çok sayıda patolojik durumun incelenmesine yaygın olarak genellenebilir. Bu teknikleri, nedensel mekanik ilişkiler kurmak için gelecekteki deneylerde modüle etmek için ve nihayetinde hafif travmatik beyin hasarı için yeni terapötik stratejiler geliştirmek amacıyla izlenebilir hedefleri belirlememize yardımcı olmak için kullanıyoruz.

systems-analysis-neuroinflammatory-hemodynamic-response-to-traumatic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu makale, hafif travmatik beyin hasarı teşhis ve kurtarma gençlik için bir multi-modal bir yaklaşım genel bir bakış sağlar. Bu yaklaşım, fonksiyonel manyetik rezonans görüntüleme ve bilişsel test sırasında baş etkileri ve beyin aktivitesi arasında ilişki izlemek için Head Impact Telemetri Sistemi ile nöropsikolojik test birleştirir.

Fonksiyonel Manyetik Rezonans Görüntüleme ve Head Impact Telemetri Sistemi kullanarak Gençlik Sporla ilgili Beyin sarsıntısı Etkileri Üzerine Bir Araştırma

Yanal sıvı perküsyon (LFP), farelerde travmatik beyin hasarı oluşturulmuş bir model olduğunu göstermiştir. LFP hayvan modellerinde üç ana kriterleri yerine getirir: geçerliliği, güvenilirliği ve klinik önemi. Cerrahi kraniotomi oluşan prosedür, hub tespit, fokal ve diffüz yaralanma ile sonuçlanan yaralanma indüksiyonu ile takip açıklanmıştır.

Yanal Akışkan Perküsyon: Travmatik Beyin Hasarı Farelerde Modeli

Hipokampal devresinde fonksiyonel değişikliklerin araştırıldığı A çok yönlü bir yaklaşım açıklanmıştır. Elektrofizyolojik teknikler hasar protokol, davranışsal testleri ve bölgesel diseksiyon yöntem ile birlikte tarif edilmiştir. Bu tekniklerin kombinasyonu diğer beyin bölgeleri ve bilimsel sorular için benzer bir şekilde uygulanabilir.

Hafif Travmatik Beyin Hasarı takiben Hipokampal Devre İşlev değişimler üzerine araştırmalar

Bu videoda, hafif travmatik beyin hasarı olan bir fare modelinde serebral kan akışını ölçmek için yaygın korelasyon spektroskopisi tekniğini gösteriyoruz.

Bir fare modelinde serebral kan akışını değerlendirmek için yaygın korelasyon spektroskopisi

Travmatik beyin yaralanmaları (TBH'ler) ciddi bir sağlık sorunu olmaya devam etmektedir. Kontrollü kortikal darbe cerrahisi modeli kullanılarak, TBH'nin etkileri ve olası tedavi yöntemleri üzerine araştırmalar yapılabilir.

Travmatik Beyin Hasarı için Kontrollü Kortikal Etki Modeli

Serebral kontüzyonun eşlik ettiği intraparankimal kanama ve nöroinflamasyon ciddi ikincil beyin hasarını tetikleyebilir. Bu protokol, araştırmacıların kanama, kontüzyon ve travma sonrası bağışıklık tepkilerini incelemelerine ve potansiyel terapötikleri keşfetmelerine olanak tanıyan fare kontrollü bir kortikal etki (CCI) modelini detaylandırır.

Travmatik Kanama, Konkontüzyon ve Nöroinflamasyon için Preklinik Kontrollü Kortikal Etki Modeli

Bu protokol, kapalı kafa travması (CHI) yöntemiyle indüklenen tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarının (rmTBI) modifiye edilmiş bir fare modelini sunar. Yaklaşım, meninkslere maruz kalmanın yaygın olarak neden olduğu iltihabı azaltmak için inceltilmiş bir kafatası penceresi ve sıvı perküsyonunun yanı sıra kemirgenlerde rmTBI modellemesinde gelişmiş tekrarlanabilirlik ve doğruluk içerir.

İnceltilmiş kafatası penceresi ve sıvı perküsyonu içeren tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarının modifiye edilmiş fare modeli

Burada, akut fazda korunmuş beyin yapısı ve uzun süreli beyin atrofisi ile komplike olmayan hafif travmatik beyin hasarının nörogörüntü sonucunu kopyalayan bir kapalı kafa travması hayvan modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz. Boylamsal manyetik rezonans görüntüleme, kanıt için kullanılan birincil yöntemdir.

Kilo Düşürme Yöntemi ile Modifiye Edilmiş ve Manyetik Rezonans Görüntüleme ile Kanıtlanmış Komplike Olmayan Hafif Travmatik Beyin Hasarı Modelinin Geliştirilmesi

Basitleştirilmiş travmatik beyin hasarı (TBH) modelleri terapötik yaklaşımların geliştirilmesini kolaylaştırmıştır. Bu protokol, iğneler kullanılarak bıçak yarası olan bir fare korteksinin oluşturulmasını ana hatlarıyla belirtir ve kanama ve iltihabın analizini sağlar. Bıçak yaralı TBI fare modeli, özel ekipman gerektirmeden gerçekleştirilebilme avantajı sunar.

Travmatik Beyin Hasarında Kanama ve Enflamasyonu İncelemek için Bıçak Yaralı Fare Modeli

Biz kantitatif gerçek zamanlı PCR ve / veya tüm genom mikroarrayler kullanan sonraki gen ekspresyon analizi için yaralı sıçan beyinlerinin frozen adlı hipokampal nöronlar veya tek nöronların zenginleştirilmiş popülasyonları elde etmek için lazer yakalama mikrodiseksiyon (LCM) nasıl kullanılacağı açıklanmıştır.

Travmatik Beyin Hasarı Sonrası Nöronlar veya gen ekspresyon analizi için Tek Nöron zenginleştirilmiştir Populasyonlarının Lazer Yakalama Mikrodisseksiyon

Öğrenin, travmatik beyin hasarına nöroinflamatuar ve hemodinamik yanıtları fare modellerinde kısmi en küçük kareler regresyonu ile sistem analizi yaparak karakterize edin. Bu yöntem, beyin patofizyolojisinin kapsamlı anlaşılmasını sağlar.

Travmatik Beyin Hasarına Nöroinflamatuar ve Hemodinamik Yanıtın Sistem Analizi

Daha fazla video keşfet