Name: Genç Vahşi Tip Farelerde Bilişsel Açık ve Anksiyete Benzeri Davranışlara Neden Olmak İçin Titreşimli Orbital Rotor Kullanan Kronik Uyku Parçalanma Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-22T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Öğrenin, titreşimli orbital rotor kullanarak genç vahşi tip farelerde kronik uyku parçalanması modeli oluşturmayı. Bu yöntem bilişsel açıkları ve anksiyete benzeri davranışları tetikleyerek nörodejeneratif hastalıkların patogenezini araştırmaya olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (W. Wang'a 61327902-6 ve F.F. Ding'e 81801318) tarafından desteklendi. Dr. Sigrid Veasy'yi SF deneysel sistemini kurduğu ve teknik detayları sağladığı için kabul ediyoruz. Dr. Maiken Nedergaard'ı ilgili deneyler için öğretici yorumları için kabul ediyoruz.

Bu protokol, Tongji Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi, Tongji Tıp Koleji, Huazhong Bilim ve Teknoloji Üniversitesi tarafından onaylandı.
1. Fare taraması ve deneye hazırlık
<ol><li>Tüm deney için 20-28 g ağırlığında vahşi tip yetişkin (8-10 haftalık) erkek fareleri seçin. NOT: Vahşi tip C57BL/6 fareler Hubei Laboratuvar Hayvanları Araştırma Merkezi, Hubei, Çin'den elde edilir.</li>
	<li>Tüm fareleri CSF'ye ve kontrol grubuna rastgele atayın. Sosyal izolasyon stresini önlemek için her kafeste 3-5 fare barındırın. Kontrol kafeslerinde bulunan farelerin sayısı, eşleştirilmiş CSF kafeslerinde bulunanlarla eşleştirilir. NOT: Aynı grup kafeslerindeki fareler, takip davranış deneyleri yapmak için birikmiş.</li>
	<li>Çevredeki çevreyi ve işçilik etkilerini aynı tutmak için kontrol kafeslerini CSF kafesleriyle aynı odada bulun.</li>
	<li>İzleme amacıyla bir kulak etiketi kullanarak her gruptaki fareleri kulaklarında numaralandırma ve işaretleme.</li>
	<li>Ortam sıcaklığını ve nemini %21-23 °C ile %35-%60 arasında koruyun.</li>
	<li>Farelerde normal uyku ritmi üzerinde önyargılı etkiyi önlemek için ortam ortamını 12 saatlik açık-karanlık döngüde (08:00-20:00 arası açık,8:00 PM-8:00 light-OFF) koruyun.</li>
	<li>Araştırmacı modelleme odasında bulunurken gürültüyü ve paraziti en aza indirin.</li>
	<li>Farelere yeterli yiyecek ve su sağlayın. Platform hareketlerinde su sızıntısını önlemek için su şişelerinde küresel vana uçları ile uzun nozüller kullanın. Rotor çalışması sırasında şişenin yerinden çıkmasın diye su şişesini bir yay ile kafesin üzerine sabitleyin.</li>
</ol>2. Yörünge rotorunun hazırlanması ve ayarlanması
<ol><li>Üzerine en fazla 10 kafes yerleştirilebilen genişlemiş platformlu (67 cm x 110 cm) elektrik kontrollü bir yörünge rotor hazırlayın.</li>
	<li>Farelerin günlük uykularının çoğunu sergilediği zaman olan bir program zamanlayıcısı tarafından kontrol edilen ışık AÇIK fazı (8:00 AM-8:00 PM) sırasında yörünge rotorunun açık olduğunu ayarlayın.</li>
	<li>Yörünge rotorunu 110 rpm hıza ve katı hal zamanlayıcı ile kontrol edilen 10 s-on, 110 s-off tekrarlayan bir döngüye sahip ayarlayın. NOT: Platformun yük kapasitesi 50 kg'dır. Rotor ufkunun titreşen sabit genliği 2,5 cm'dir.</li>
	<li>Platform dönüşlerinde kafeslerin yerinden çıkmasını önlemek için CSF kafeslerini rotor platformunun üzerine kalın yaylarla sabitleyin.</li>
</ol>3. Kronik uyku parçalanması modelleme ve izleme
<ol><li>Farelerin ortam ortamına uyum sağlaması için CSF ve kontrol farelerinin kafeslerini deneylerden önce bir hafta boyunca modelleme odasına yerleştirin.</li>
	<li>Modellemenin başlangıcında, tüm farelerin yörüngesel dönüşler sırasında yiyecek ve suya ücretsiz erişimi olduğundan emin olun.</li>
	<li>Modellemenin başında, yörünge rotorunun dişli olarak çalıştığından emin olmak için en az 1 saat gözlemleyin.</li>
	<li>Modelleme sırasında, yörünge rotorunun düzgün çalıştığını ve farelerin yeterli yiyecek ve suya sahip olduğundan emin olmak için her 2 günde bir fare koşullarını kontrol edin. Kafes yataklarını haftalık olarak değiştirin.</li>
	<li>Modelleme sırasında, yatakları değiştirirken fareleri haftalık olarak 08:00'de tartın. Önemli kilo kaybı olan fareleri modellemeden ve ayrıca deneysel gruplardan çıkarın. NOT: Önemli kilo kaybı, 2 hafta süren 20 g'dan daha az ağırlık olarak tanımlanır.</li>
	<li>Tüm modelleme seansları sırasında, varsa saldırganı kafesten ve ayrıca deneysel gruplardan çıkarın.</li>
	<li>Modellemenin sona ermesinden sonra, fareleri orijinal odada korumaya ve beslemeye devam edin.</li>
</ol>4. Morris su labirenti (MWM) testi
<ol><li>Teste hazırlık<ol>
<li>Ilık suyla (20-23 °C) dolu dairesel bir tankın aparatını hazırlayın.</li>
		<li>Uzaktan görüş referansı olarak tankı çevreleyen perdede farklı şekil ve renklere sahip dört işareti dört çeyrek yönde askıya alın. Toz süt ilavesi ile suyun opak görünmesini sağlayın.</li>
		<li>Güneybatı çeyreğinin ortasında bir platform bulun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Eğitim testi<ol>
<li>Fareleri 5 günlük bir eğitim süresi boyunca her gün 08:00 ile 12:00 arasında ardışık dört denemeye tabi edin.</li>
		<li>Her fareyi dört denemede dört kadrandan birinde yan duvara bakan suya bırakın. Her denemede, platformu bulmak için farenin 60 s yüzmesine izin verin. Fare platforma 60 s içinde ulaşamazsa, platforma yönlendirin ve 15 s boyunca orada kalmaya devam edin.</li>
		<li>Gizli platformu bulmak için farelerin kaçış gecikmesini otomatik olarak kaydetmek için bir video izleme sistemi kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Prob testi<ol>
<li>Prob testini 5 eğitim gününden sonraki altıncı günde gerçekleştirin.</li>
		<li>Platformu kaldırın. Her fareyi kuzeydoğu çeyreğinden serbest bırakın ve 60 sn yüzmesine izin verin</li>
		<li>Farelerin izleme verilerini otomatik olarak kaydetmek için bir video izleme sistemi kullanın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Yeni nesne tanıma (NOR) testi
<ol><li>Tanıdık aşama<ol>
<li>Fareleri, iki nesne kopyası (A1 ve A2) içeren sırayla bir tanka (uzunluk 30 cm, genişlik 28 cm, yükseklik 35 cm) yerleştirin. Farelerin serbestçe keşfetmesine izin verin (deneme başına 10 dk).</li>
		<li>Farelerin izleme verilerini otomatik olarak kaydetmek için bir video izleme sistemi kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Test aşaması<ol>
<li>Tanıdık fazın 1 saat gecikmesi sonrasında test denemesini gerçekleştirin. Orijinal nesnelerden birini, diğerini değiştirmeden tanktaki yeni bir nesneyle ("roman") değiştirin. Fareleri tanka geri verin ve deneme başına 5 dakika boyunca keşfetmesine izin verin.</li>
		<li>Her fare tarafından her nesnenin keşfinde harcanan zamanı otomatik olarak kaydetmek için bir video izleme sistemi kullanın. NOT: Nesnenin keşfi, burnu nesneye doğru ve nesneden 1 cm'den daha az bir mesafeye doğru yönlendirirken vibrissae'yi yalayarak, koklayarak, çiğneyerek veya hareket ettirerek belirlenir. Ayrımcılık Endeksi (DI), TN = "novel" nesnesini keşfetmek için harcanan zaman ve TF = "tanıdık" nesneyi keşfetmek için harcanan zaman olan denklem (TN − TF)/(TN + TF) ile hesaplanır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. Açık alan testi (OFT)
<ol><li>Bir tankın aparatını hazırlayın (30 cm x 28 cm x 35 cm).</li>
	<li>Test sırasında, her fareyi tankın ortasına yerleştirin ve 5 dakika boyunca serbestçe keşfetmesine izin verin. Önceki farenin arta kalan etkilerini önlemek için her denemeden sonra tankı% 75 etanol ile temizleyin.</li>
	<li>Farelerin izleme verilerini otomatik olarak kaydetmek için bir video izleme sistemi kullanın.</li>
</ol>7. Zorla yüzme testi (FST)
<ol><li>15 cm derinliğinde su (20-23 °C) içeren açık silindirik bir kabın aparatını hazırlayın.</li>
	<li>Test sırasında, her fareyi silindire yerleştirin ve 6 dakika boyunca orada kalmasına izin verin.</li>
	<li>Her fare tarafından testin son 4 dakikası boyunca hareketsizlik süresini otomatik olarak kaydetmek için bir video izleme sistemi kullanın. NOT: Fare, çırpınma durduğunda ve suda yüzdüğünde hareketsiz olmaya kararlıdır, bu da sadece başını suyun üzerinde tutmak için gerekli hareketleri sağlar.</li>
</ol>8. Veri Analizi
<ol><li>İstatistiksel analiz yazılımı kullanarak verileri analiz edin (örneğin, GraphPad Prizması 6.0).</li>
	<li>Tüm verileri ortalama ± SEM olarak ifade edin.</li>
	<li>İki yönlü ANOVA kullanan iki grup arasındaki MWM testinde kaçış gecikmesini tekrarlanan önlemlerle ve ardından Bonferroni posttestleriyle karşılaştırın. CSF ve denetim grupları arasındaki diğer karşılaştırmalar eşleşmeyen t testleri ile belirlenir.</li>
	<li>Tüm testlerde P < 0.05 ise farkları önemli olarak düşünün.</li>
</ol>

Yazarlar rakip finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Mevcut protokoldeki kritik adımlar arasında, çalışma amacına göre optimize edilmiş parametrelerle uyku parçalanma makinelerinin kurulması ve tüm modelleme seansları boyunca farelerin rahat ve sessiz bir yaşam ortamında tutulması yer almaktadır. Uyku parçalanmasını kesmek veya durdurmak ve bu fareler için davranış testleri düzenlemek için uygun zamanlamaya karar vermek de çok önemlidir. Diğer uyku manipülasyon modelleri gibi, protokolü kontrollü ışık döngüleri ve olası tüm gereksiz parazitlerin boşluğu ile özel bir odada ...

Uyku bozukluğu, hem uykuyu rahatsız eden rahatsızlıkları olan hastalarda hem de uykuyu rahatsız eden olayları olan sağlıklı kişilerde giderek daha yaygındır. Nörodejeneratif hastalıklar, kronik ağrı, duygusal stres, solunum sistemi hastalıkları, üriner sistem hastalıklarıvb. Obstrüktif uyku apnesi (OSA), uykuda periyodik uzuv hareketleri (PLMS), diğer uyku bozuklukları arasında uyku bakım uykusuzluğu, uyku parçalanmasına neden olan en yaygın nedenlerdir6,7. Gelişmiş ülkelerde, OSA yetişkin popülasyonda% 5 ila% 9 ve çocuk nüfusta% 2'nin üzerinde yaygınlığa sahiptir8,9,10. Bu arada, akıllı telefonların aşırı kullanımı, düzensiz uyku alışkanlıkları, rahatsız edici sesler ve bakıcılar için gece vardiyaları gibi iş görevleri nedeniyle uyku bozukluğu yaşayan sağlıklı nüfusun giderek artan bir oranı vardır. Uykunun beyin atıklarının temizlenmesi için önemli olduğu kabul edilir11,12, hafıza konsolidasyonu13,14, metabolik denge15,16, diğer birçok fizyolojik süreç arasında. Bununla birlikte, uzun süreli uyku bozukluğunun sağlıklı insanlarda geri dönüşü olmayan patogenez değişikliklerine yol açıp açmayacağı ve bunun etiyoloji mi yoksa birkaç yıl içinde nörodejeneratif hastalıklar gibi merkezi sinir sistemi hastalıkları geliştirmenin katkıda bulunan bir faktörü mü olduğu hala büyük ölçüde bilinmemektedir. Amacımız, 2 aylık bir uyku parçalanma tedavisinden sonra genç vahşi tip farelerde istikrarlı ve belirgin bilişsel açık ve anksiyete benzeri davranışlar üreten deneysel bir model bildirmektir. Bu model, yukarıda listelenen bilimsel soruların cevaplaması için uygulanacaktır.
Uyku bozukluğu, Alzheimer hastalığı (AD) veya demans gelişimi için potansiyel bir risk faktörü olarak listelenmiştir. Kang ve arkadaşları ilk olarak AD patolojisinin alevlenmesini 6 h akut uyku yoksunluğu17ile buldu ve tanımladı. Bundan sonra, diğer birçok çalışma, transgenik AD fare modellerinde uyku yoksunluğu veya parçalanmasının patogenezi ağırlaştırabileceğini bildirdi18,19,20. Bununla birlikte, çok az araştırmacı genç vahşi tip farelerde uyku bozukluğunun sonucunu inceledi; yani, uyku bozukluğunun AD benzeri davranışlara veya genç vahşi tip farelerde patolojik değişikliklere yol açıp açmayacağı. Son yayınımızda, 2 aylık uyku parçalanmasının belirgin mekansal hafıza eksikliği ve anksiyete benzeri davranışların yanı sıra, 2-3 aylık vahşi tip farelerde hem korteks hem de hipokampusta hücre içi Amiloid-β (Aβ) birikiminin arttığını bildirdik21. Ayrıca, APP / PS1 farelerinde bildirilen patolojik değişikliklere benzer olan endozom-otofagozom-lizozom yol belirteçlerinin ve mikroglia aktivasyonunun değiştirilmiş ifade seviyelerini gözlemledik21,22.
Sunulan bu uyku parçalanma (SF) protokolü Sinton ve ark.23 tarafından doğrulandı ve Li ve ark.24tarafından değiştirildi. Kısacası, 110 rpm'de titreşen bir yörünge rotor, light-ON fazı (8:00 AM–8:00 PM) sırasında her 2 dakikada bir 10 sn uykuyu keser. Bu modeldeki uyku yapısı değişikliği daha önce elektrofizyolojik uyku kayıtları ile karakterize edildi ve Li ve ark.24tarafından rapor edildi, ışık-ON aşamasında uyanma süresinde önemli bir artış ve hızlı göz hareketi (REM) uykusunda azalma olduğunu gösteren, toplam uyku ve uyanma süreleri (24 saat içinde) 4 haftadan fazla modellemeden etkilenmedi24. Şu anda, toplam uyku veya kısmi uyku yoksunluğu en sık kullanılan uyku manipülasyon modelleridir. Toplam uyku yoksunluğu genellikle hayvanı sürekli nazik bir şekilde elleçleme veya yeni nesnelere maruz bırakma, alternatif olarak bir çubuğu veya çalışan bir koşu bandını sürekli döndürerek25 , 26,27,28,29ilegerçekleştirilir. Etik nedenlerden dolayı, toplam uyku yoksunluğu genellikle 24 saatten kısadır. En sık uygulanan kısmi uyku yoksunluğu modeli, öncelikle REM uyku30 , 31,32'yiortadanleyen su platformu yöntemidir. Bir koşu bandı veya kafesin altını süpüren bir çubuk kullanan diğer yaklaşımlar, sabit aralıklarla ayarlandığında uyku parçalanmasına neden olabilir33 , 34,35,36,37,38. SF'nin uykuyu kesmesi ve zaman zaman tüm uyku aşamalarında uyarılmalara neden olması dikkat çekicidir24. Orbital rotor uygulayan bu CSF modelinin öne çıkan avantajlarından biri, düzenli izleme dışında günlük olarak sık işlem işçiliğini önleyen makineler tarafından otomatik olarak kontrol edilen aylarca sürekli olarak yapılabilmesidir. Ayrıca, cihaz aynı anda üniformalı müdahaleler altında birden fazla fare kafesini modellemeye izin verecektir. Tüm modelleme seansları sırasında, fareler ev kafeslerinde normal yatak takımları ve yuva malzemeleri ile barındırılırken, diğer bazı yöntemler çeşitlendirilmiş ortamlara ve kaçınılmaz strese maruz kalmayı gerektirir.
Uyku parçalanması daha önce uyku evresinde sık uyarılmayı ve uyanma aşamasında önemli uyku geri tepmesini taklit eden uyku manipülasyon yöntemi ile karakterize edildi. Bazı literatürlerde CSF, OSA39,40için hayvan modeli olarak kabul edildi. Bu çalışmada, seçilen uyarılma sıklığının saatte 30 kez olmasının gerekçesi, orta ila şiddetli uyku apnesi olan hastalarda uyarılma indekslerinin gözlemlenmesine dayanmaktadır. 4 haftalık uyku parçalanmasının hiperkapik uyarılma gecikmesini ve dokunsal uyarılma eşiğini önemli ölçüde artırdığı gözlendi, bu da iyileşmeden en az 2 hafta sonrasürebilir 24. Bu fenotip, hiperkapniye yanıt olarak noradrenerjik, orexinergic, histaminerjik ve kolinerjik wake-active nöronlarda c-fos aktivasyonunun azaltılmasının yanı sıra cingulate korteksine azaltılmış katekolaminerjik ve orexinerjik projeksiyonların24. Bununla birlikte, OSA'daki en önemli özelliğin hava yolu tıkanıklığının neden olduğu hipoksi olduğunu ve bunun uyku bozulmasına neden olduğunu belirtmek gerekir41,42. OSA patogenezinde uyku bozukluğu ve tekrarlayan hipoksi karşılıklı olarak birbirleriyle etkileşime girer. Bu nedenle, uyku parçalanması tek başına farelerde OSA'nın tüm temel özelliklerini tam olarak gösteremeyebilir.
Burada, genç vahşi tip farelerde kronik uyku parçalanmasını modellemek için standartlaştırılmış bir protokol sunuyoruz. Bilişsel eksiklik ve anksiyete benzeri ve CSF tedavisinden sonra depresyon benzeri davranışlar Morris su labirenti, Novel nesne tanıma, Açık alan testi ve Zorla yüzme testi ile değerlendirildi. Bu modelin düzensiz uyku düzeni, bilişsel eksiklik ve anksiyete benzeri davranışların fenotiplerini üreten bir bütün olarak alınması gerektiğini belirtmek önemlidir. Mevcut model potansiyel olarak uygulanabilir, ancak sınırlı olmamak üzere aşağıdaki amaçlarla uygulanabilir: 1) Genetik yatkınlığı olmayan genç farelerde kronik uyku bozukluğunun neden olduğu fonksiyonel veya moleküler patogenez mekanizmalarının daha fazla araştırılması, 2) Uyku bozukluğunun başlattığı nörodejenerasyona giden doğrudan yolu belirlemek, 3) Kronik uyku bozukluğunun neden olduğu fenotipleri iyileştirmek için terapötikleri keşfetmek, 4) Kronik uyku bozukluğu üzerine vahşi tip farelerde içsel koruyucu/telafi edici mekanizmaların incelenmesi, 5) Uyku-uyanıklık regülasyonunun ve devlet geçiş mekanizmalarının incelenmesi için uygulanacaktır.

<table><tbody><tr><td>Herhangi bir labirent davranış izleme sistemi</td><td>Stoelting, Inc,</td> <td>USA-Farelerin</td> <td>davranış izini kaydetmek için kullanılan bir video izleme sistemi.</td></tr><tr><td>C57BL/6J fareler</td><td>Hubei Laboratuvar Hayvanları Araştırma Merkezi, Hubei, Çin.</td><td>-</td><td>Hubei Laboratuvar Hayvanları Araştırma Merkezi'nden 10-12 haftalık sağlıklı erkek C57BL/6J fareler satın alındı</td></tr><tr><td>Graphpad Prism 6.0 Yazılımı</td><td></td> <td>İstatistiksel grafikler çizmek için Graphpad Software,Inc.USA-Graphpad Prism 6.0 yazılımı kullanıldı.</td><td></td></tr><tr><td>Morris su labirenti sistemi</td><td>Şangay XinRuan Bilgi Technology Co, Ltd, Çin</td><td>XR-XM101</td><td>Sistem, Morris su labirenti testini gerçekleştirmek için kullanıldı</td></tr><tr><td>Orbial rotor</td><td>Shanghai ShiPing Laboratory Equipment Co., Ltd, Çin</td><td>SPH-331</td><td>Yörünge rotoru, kronik uyku parçalanma modelini oluşturmak için kullanıldı</td></tr><tr><td>Katı hal zamanlayıcısı</td><td>OMRON Corporation, Kyoto, Japonya</td><td>H3CR-F8-300</td><td>Katı hal zamanı, rotorun çalışma frekansını ve süresini kontrol etmek için kullanıldı</td></tr> <tr><td></td><td>-</td><td></td> <td>uzunluk 30 cm, genişlik 28 cm, yükseklik 35 cm Tank, açık alan testi ve yeni nesne tanıma testi yapmak için kullanıldı</td></tr></tbody></table>.

genç vahşi tip farelerde bilişsel açık ve anksiyete benzeri davranışlara neden olmak İçin titreşimli orbital rotor kullanan kronik uyku parçalanma modeli

A Chronic Sleep Fragmentation Model using Vibrating Orbital Rotor to Induce Cognitive Deficit and Anxiety-Like Behavior in Young Wild-Type Mice

Uyku bozukluğu genellikle kronik bir hastalık veya şikayet edilen bir olay olarak popülasyonlarda yaygındır. Kronik uyku bozukluğunun, hastalıkların patogenezine, özellikle nörodejeneratif hastalıklara yakından bağlanması önerilmektedir. Son zamanlarda, 2 aylık uyku parçalanmasının genç vahşi tip farelerde davranışsal ve patolojik değişiklikler gibi Alzheimer hastalığı (AD) başlattığını bulduk. Burada, kronik uyku parçalanması (CSF) elde etmek için standartlaştırılmış bir protokol sunuyoruz. Kısaca, CSF, 110 rpm'de titreşen ve 10 s-on, 110 s-off tekrarlayan bir döngü ile çalışan bir yörünge rotor tarafından, ışık-ON aşamasında (8:00 AM-8:00 PM) 2 aya kadar sürekli olarak indüklendi. Mekansal öğrenme ve hafıza bozuklukları, CSF modellemesinin sonuçları olarak farelerde anksiyete benzeri ancak depresyon benzeri olmayan davranışlar, Morris su labirenti (MWM), Novel nesne tanıma (NOR), Açık alan testi (OFT) ve Zorla yüzme testi (FST) ile değerlendirildi. Diğer uyku manipülasyonlarına kıyasla, bu protokol işleme emeklerini en aza indirir ve modelleme verimliliğini en üst düzeye çıkarır. Genç vahşi tip farelerde kararlı fenotipler üretir ve çeşitli araştırma amaçları için potansiyel olarak üretilebilir.

Tüm temsili sonuçlar ve rakamlar son yayınımızdan çoğaltıldı21. Rakamların yeniden kullanımına orijinal dergi tarafından izin verildi.
Tüm deneysel tasarım, CSF modellemesinin, MWM, NOR, OFT ve FST'nin davranış testlerinin zamanlamasını gösteren zaman sırasına göre gösterilmiştir (Şekil 1A). Modelleme seansları sırasında genel durumlarını izlemek için CSF ve kontrol gruplarından her hafta fare ağırlıkları elde ettik. Modelleme sırasında iki...

Burada sunulan, genç vahşi tip farelerde doğrulanmış bilişsel açık ve anksiyete benzeri davranışlara neden olabilecek, elektrik kontrollü bir yörünge rotorunun elde ettiği kronik uyku parçalanması (CSF) modeli için bir protokoldür. Bu model kronik uyku bozukluğu ve ilgili bozuklukların patogenezini keşfetmek için uygulanabilir.

Genç Vahşi Tip Farelerde Bilişsel Açık ve Anksiyete Benzeri Davranışlara Neden Olmak İçin Titreşimli Orbital Rotor Kullanan Kronik Uyku Parçalanma Modeli

Sleep disturbance is generally common in populations as a chronic disease or a complained event. Chronic sleep disturbance is proposed to be closely ...

Kronik uyku bozukluğu nörodejeneratif hastalık patogenezine yol açar. Bu soruyu ele almak için insan uykusu sırasında sık sık kesintileri modellemek için basit, istikrarlı ve uzun vadeli bir protokol sağlamak istiyoruz. Bu fareler, taşıma işçiliğini ve yapay alıcıları en aza indirir.Tekrarlanabilir davranışsal ve patolojik sonuçlar üretmek için aynı deney grubundaki fareler arasında ve farklı deneyler arasında müdahaleleri standartlaştırabilir. Bu model, altta yatan bir hastalığın varlığında kronik uyku bozukluğunun etkilerini incelemek için depresyon ve Alzheimer hastalığı gibi çeşitli hastalık modellerine uygulanabilir. Sosyal izolasyon stresini önlemek için BOS modellemesine ve kontrol kafeslerine rastgele üç ila beş 20 ila 28 gram, 8 ila 10 haftalık yetişkin vahşi tip erkek fareler atayarak başlayın.Aynı çevre ortamını korumak için her iki kafes grubunu da aynı 21 ila 23 santigrat derece ve %35 ila 60 nem modelleme odasında 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsüne sahip olarak barındırın. Daha sonra, platform hareketlerinde su sızıntısını önlemek için su şişeleri üzerinde küresel vana uçları olan uzun nozullar kullanarak ve dönme sırasında şişelerin yerinden çıkmasını önlemek için su şişelerini her kafesin üstüne bir yay ile sabitleyerek farelere yeterli yiyecek ve su sağlayın. Kronik uyku parçalanması modellemesi için, 67 x 110 santimetre platformlu, elektrikle kontrol edilen bir yörünge rotorunu sabah 8:00'de çalışacak şekilde programlayın.saat 20:00'ye kadar ışık fazı ve rotor hızını tekrarlayan 110 saniye açık, 10 saniye kapalı döngü için dakikada 110 devire ayarlamak için bir katı hal zamanlayıcı kullanın. Platform dönüşü sırasında kafeslerin yerinden çıkmasını önlemek için BOS kafeslerini rotor platformunun üstüne sabitlemek için kalın yaylar kullanın ve yörünge dönüşleri sırasında yiyecek ve su erişiminin sağlandığını doğrulayın.Model sistemini kurduktan sonra, yörünge rotorunun uygun şekilde çalıştığından emin olmak için kafesleri en az bir saat gözlemleyin. Modelleme süresi boyunca, yatak takımlarını değiştirirken fareleri haftada bir sabah 8:00'de tartın ve gerektiğinde saldırganları kafeslerden çıkarın.Modelleme süresinin sonunda, fareleri modelleme odasında barındırmaya ve beslemeye devam edin. Morris Water Maze testi yapmak için, 08:00 ile 12:00 saatleri arasında.Beş gün boyunca her gün, her seferinde bir fareyi, her deneme için dört kadrandan birinde 20 ila 23 santigrat derece su ile dolu dairesel bir tanka bırakın. Deneme sırasında, platforma yüzmeye çalışan her farenin kaçış gecikmesini kaydetmek için bir video izleme sistemi kullanın. Fare 60 saniye içinde platformu bulamazsa, hayvanı platforma yönlendirin.Kafesine geri koymadan önce 15 saniye platformda kalmasına izin verin. Antrenmandan sonraki altıncı günde, platformu su tankından çıkarın ve hayvan başına son bir 60 saniyelik yüzme periyodu için fareyi kuzeydoğu kadranından serbest bırakın. BOS modellemesinden sonra, kontrol ve deney grupları arasında farelerin ağırlıklarında herhangi bir fark gözlenmemiştir.CSF grubu, Morris Water Maze davranış denemesinde kontrol hayvanlarına kıyasla beş eğitim günü boyunca platformu konumlandırmada daha az yetenek gösteriyor. Prob testinde, BOS fareleri, gözlemlenebilir bir yüzme hızı farkı olmadan önceki platform konumunu daha az kez geçerek, hedeflenen kadranda orantılı olarak önemli ölçüde daha az zaman harcadılar. Yeni nesne tanıma testinin tanıdık aşamasında, BOS ve kontrol grupları arasındaki toplam keşif süresinde veya her iki gruptaki A1 ve A2 nesneleri arasındaki keşif süresinde anlamlı bir fark yoktur.Test aşamasında, BOS farelerinin ayrımcılık indeksi, kontrol hayvanlarınınkine kıyasla önemli ölçüde azaltılır. Bu temsili açık alan testi ve zorunlu yüzme testi değerlendirmelerinde, BOS grubu test sırasında merkezi bölgede kontrol grubuna göre daha az zaman harcadı. BOS fareleri ayrıca tank içinde daha uzun bir toplam hareket mesafesi sergiledi, bu da modellemeden sonra spontan aktivitenin arttığını düşündürdü.Bununla birlikte, BOS modellemesi, zorla yüzme testine tabi tutulan iki grup arasındaki hareketsizlik süresindeki anlamlı olmayan farklılıklarla doğrulandığı gibi depresyon benzeri davranışı indüklemedi. Uygun bir titreşim döngüsü ve modelleme süresinin seçilmesinin yanı sıra BOS tedavisi ve fenotip tanımlaması için uygun bir zaman çizelgesi bu deneyin başarısı için önemlidir. Geleneksel uyku yoksunluğu protokolleri çok fazla çalışma gerektirir ve çoğunlukla akut veya kısa süreli modelleme gerektirir.Bu protokol, hafif fakat uzun süreli uyku bozukluğunun patolojik bir mekanizmasının incelenmesine izin verir.

a-chronic-sleep-fragmentation-model-using-vibrating-orbital-rotor-to

Research

JoVE Journal

Behavior

Davranış

Burada, akustik uyarılara karşı uyku tepkisini modüle eden, farelerde non-REM uykusunda sinirsel ve kardiyak değişkenlerin zamansal dinamiklerini tanımlamak için deneysel ve analitik prosedürleri sunuyoruz.

Uyku Faresinde Spektral Gücün ve İnsanın Yavaş yavaş Dinamiklerinin Nicelleştirilmesi

Burada, merkezi yorgunluk değiştirilmiş kullanarak bir fare modeli tanıtmak için bir protokol mevcut birden çok platform yöntemi (MMPM).

Bir fare modeli değiştirilmiş bir kullanarak merkezi yorgunluk birden çok Platform yöntemi

Etkinlik tabanlı ev-kafes izleme aracılığıyla uyku ölçme bir yüksek-den geçerek yöntemi açıklamak. Bu yöntem geleneksel EEG tabanlı yöntemleri avantaj sunar. Toplam uyku süresi belirlenmesi için de doğrulanır ve uyku insan hastalık kemirgen modellerinde izlemek için güçlü bir araç olabilir.

Uyku süresi Rodents noninvaziv, yüksek üretilen iş belirlenmesi

Biz nerede müfettişler yavaşça fare uyku davranış gözlenen her zaman eşya nazik işleme olarak bilinen bir uyku yoksunluğu tekniği tarif. Bu yöntem araştırmacılar Kronik uyku kısıtlama geliştirme boyunca gelecek beyin fizyolojisi ve davranış olabilir etkileri çalışmaya olanak sağlayan güçlü bir araçtır.

Kronik uykusuzluk Mouse aracılığıyla yumuşak kauçuk sersemler

Burada, biz farelerde uyku/uyanıklık devletlerin izlenmesi sırasında nöronların belirli türlerinin optogenetik manipülasyon yöntemlerini açıklamak, bir örnek olarak stria terminalis yatak çekirdeği üzerinde son çalışma sunma.

Farelerde uyku/uyanıklık durumları Izleme sırasında nöral devrelerin optogenetik manipülasyon

Burada, minimal kullanımla ve invaziv prosedürler olmadan stres ve anksiyete benzeri davranışları indüklemek için vahşi tip C56BL / 6J fareleri kullanan sosyal izolasyon (SI) kaynaklı bir anksiyete fare modeli sunulmaktadır. Bu model, sosyal izolasyonun modern yaşam kalıplarını yansıtır ve anksiyete ve ilgili bozuklukları incelemek için idealdir.

Sosyal İzolasyon Modeli: Noninvaziv Bir Kemirgen Stres ve Anksiyete Modeli

Mevcut protokol, farelerde uyku yoksunluğunu indüklemek için kullanılan uygun maliyetli bir rocker platform tabanlı cihaz kurmak için bir yöntemi özetlemektedir. Bu cihazın, elektroensefalogram (EEG) ile kanıtlanmış uyku düzenlerinde bozulmalara neden olmanın yanı sıra uyku yoksunluğu ile ilişkili metabolik ve moleküler değişiklikleri indüklemede etkili olduğu kanıtlanmıştır.

Farelerde uyku yoksunluğu için bir cihaz kurulması

Bu protokol, farelerin %60'ından fazlasında yetişkinlikte uzun süreli sosyal kaçınma sağlamak için erken ergen erkek farelerde 10 günlük kronik sosyal yenilgi stresinin nasıl gerçekleştirileceğini detaylandırır.

Erken Ergen Erkek Farelerde Kronik Sosyal Yenilgi Stresi

Bu makale modeli doğum sonrası depresyon ve kemirgenler laktasyondaki anksiyete bir ethologically ilgili paradigma gibi kronik ikamet saldırgan sosyal stres kullanımı anlatılmaktadır.

Kemirgenler Emziren yılında Model Doğum Sonrası Depresyon Kronik Sosyal Stres Kullanımı

Biz objektif bir ölçü yaygın olarak kullanılan lastik el yanılsama paradigma istihdam nasıl göstermektedir. Bu tedbir köklü crossmodal uyumu görev değiştirerek elde edilir. Bu görev, lastik el yanılsama olduğu gibi vücut temsilleri modülasyon için kritik olan multisensory süreçlerin incelenmesi sağlar.

Kauçuk El Illusion Paradigma bir Amaç Davranış Tedbir Alınması Aracı Olarak Crossmodal Congruency Görev

Öğrenin, titreşimli orbital rotor kullanarak genç vahşi tip farelerde kronik uyku parçalanması modeli oluşturmayı. Bu yöntem bilişsel açıkları ve anksiyete benzeri davranışları tetikleyerek nörodejeneratif hastalıkların patogenezini araştırmaya olanak tanır.

Genç Vahşi Tip Farelerde Bilişsel Açık ve Anksiyete Benzeri Davranışlara Neden Olmak İçin Titreşimli Orbital Rotor Kullanan Kronik Uyku Parçalanma Modeli (Video) | JoVE Journal

Genç Vahşi Tip Farelerde Bilişsel Açık ve Anksiyete Benzeri Davranışlara Neden Olmak İçin Titreşimli Orbital Rotor Kullanan Kronik Uyku Parçalanma Modeli

Daha fazla video keşfet