Name: C57BL/6 Farelerde Sodyum Taurokolat İndüklenen Şiddetli Akut Pankreatit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: Keşfedin C57BL/6 farelerde sodyum taurokolat infüzyonu ile şiddetli akut pankreatit indüksiyonu yöntemini. Bu protokol erken inflamatuar olayları ve farmakolojik yanıtları incelemek için hızlı ve tekrarlanabilir bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, São Paulo Üniversitesi Tıp Kliniği'ndeki Mezuniyet Sonrası Programı sayesinde; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) ve São Paulo Üniversitesi Tıp Fakültesi (FMUSP).

Bu protokol USP Tıp Fakültesi, Num. Projesi: 1343/2019-CEUA: FMUSP hayvanlarının kullanımı için Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır. Bu protokol için 6 haftalık, 20 ± 2 g ağırlığında C57BL/6 fareler kullanılmıştır (n = 9/grup).
1. Laparotomi
<ol><li>Hayvanları 1 mL şırınga ve 13x0.45mm iğne 26G 1/2 kullanarak deri altından (0.1 mL/10g vücut ağırlığı) olmak için ksilazin (10 mg/kg) ve ketamin çözeltisi (80 mg/kg) ile uyuşturun. Parmağı kıstırarak yeterli anestezi derinliği olup olmadığını kontrol edin. Isıtılmış pedler kullanarak vücut sıcaklığını kontrol edin. Tüm cerrahi malzemelerin steril olduğundan emin olun.</li>
	<li>Karın bölgesini % 5 povidon-iyot çözeltisi ile temizleyin ve göğüs ile alt karın arasındaki kılları çıkarmak için bir düzeltici kullanın (yaklaşık 2 cm2). Cerrahi bölgeyi % 70 alkolle temizleyin.</li>
	<li>Cerrahi bant kullanarak hayvanı cerrahi tahtada hareketsiz hale ederim. Cildin 5 mm'lik kısmını karnın üst kısmında ve xiphoid işleminin 1 cm altında yatay olarak kesmek için makas kullanın. Peritondaki kesimi tekrarlayın. Bu, boşluğun minimum maruziyeti ile laparotomi ile sonuçlanacaktır.</li>
</ol>2. Pankreasın bulunması ve açığa
<ol><li>Bir retraktör yardımıyla, karaciğeri bağırsaktan ~ 1 cm uzaklıktaki farenin kafasına doğru çekin.</li>
	<li>Pankreasın sodyum taurocholate (pankreas kafası) ile enjekte edilecek bölgesini bulun. Duodenumu karaciğere atıfta bulunarak bulun - karaciğerin altında, sağ tarafta (farenin görüldüğü gibi solda). Duodenum ince bağırsağın ilk kısmıdır ve midenin son kısmına bağlanır.</li>
	<li>Toparlama yardımıyla karaciğeri hayvan kafasına doğru kaldırın ve ince bağırsak kısmını hafifçe çekin. Ortak safra kanalının distal kısmını daha iyi görüntülemek için ince bağırsağın iki yan ucunu 6-0 polipropilen dikişle sabitle.</li>
</ol>3. Şiddetli akut pankreatit indüksiyonu
<ol><li>Retrograd infüzyonun karaciğere sızmasını önlemek için proksimal ortak safra kanalını geçici olarak bir mikrovessel klipsle tıkayın. Ortak safra kanalı duodenumun karaciğer tarafında görülebilir ve duodenum ile birleştiği yer beyaz görünecektir. Organı karın boşluğundan dışarı maruz bırak.</li>
	<li>0,54 mm polietilen tüpe bağlı 0,4 mm'lik bir iğne ile ortak safra kanalına erişmek için periampullary bölgesini (ince bağırsak duvarının beyazımsı kısmı) delin.</li>
	<li>8-0 ile distal ortak safra kanalının geçici tıkanıklığını yapın sodyum taurocholate çözeltisinin duodenuma sızmasını önlemek için dikiş.</li>
	<li>İnfüzyon pompasını başlatın ve 3 dakika boyunca 10 μL/10 g vücut ağırlığı sabit bir hızda% 2,5 sodyum taurokolat çözeltisi (% 0,9 salin ile seyreltilmiş) infüzyon programla.</li>
	<li>İnfüzyondan sonra, mikrovessel klipsini çıkarın, geçici 8-0 dikiş ve safranın fizyolojik akışını yeniden inşa etmek için safra pankreas kanalından enjeksiyon iğnesi.</li>
	<li>Sonunda, karnı 6-0 nonabsorbent monofilament polipropilen dikiş ile dikin. Laparotomi ile son dikiş arasındaki süre en fazla 30 dk olmalıdır (bkz. Şekil 1).</li>
	<li>Ameliyattan sonra, hayvanları odun talaşları ve su ve yiyecek reklam libitum ile kaplı polietilen kutularda barındırın.</li>
	<li>Kontrol farelerini deneysel farelerle aynı şekilde tedavi edin, ancak infüzyonun sadece salinlerden oluştuğundan emin olun. Cerrahi prosedürü ve salin çözeltisinin infüzyonunu (10 mL/dk, 3 dakika boyunca) bir kontrol grubunda (SHAM) gerçekleştirerek ameliyat ve kanülasyonun neden olduğu enflamatuar önyargıyı ortadan kaldırın.</li>
	<li>Tramadol 12.5 mg/kg subkutan olarak her 8 saatte bir kullanın, ameliyat sonrası iyileşmeden sonra başlayarak.</li>
</ol>4. Analiz yöntemleri
<ol><li>AP indüksiyondan 12 saat sonra, yörüngesel pleksus yoluyla yaklaşık 250 μL kan toplamak için hayvanları ksilazin (10 mg / kg) ve ketamin (80 mg / kg) ile uyuşturun.<ol>
<li>Cildi yavaşça sırtta tutun, göz küresinin hafif bir çıkıntısını teşvik edin ve gözü yukarı bakacak şekilde konumlandırın.</li>
		<li>Hayvanın gözüne lokal anestezi içeren bir damla göz merhemi aşıla.</li>
		<li>Kılcal borunun ucunu gözün medial köşesine yerleştirin ve ~30°-45° açıyla göz küresinin altına hafifçe yerleştirin. Kan akışı başlayana kadar kılcal boruyu döndürün. Prosedür için güç kullanmanın gerekli olmadığını unutmayın.</li>
		<li>Koleksiyon bittikten sonra, gazlı bezle hafif sıkıştırma ile göz kapaklarını kapalı tutarak homeostazdan emin olun. Kılcal boruyu keskinlik kabına atın19.</li>
		<li>Serumu santrifüjle (700 x g, 15 dk) ve amilaz ve IL-6 dosing için süpernatantı stokla (adım 4.7 ve 4.8).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fareleri CO2 boğulması ile ötenazi.</li>
	<li>Periton boşluğuna 4 mL buz gibi 1x PBS enjekte etmek için 27 G iğne kullanın. Karın derisini 10'a katladı ve iğnenin herhangi bir organı delmemek için peritonda yavaşça itilmesini sağlayın. Enjeksiyondan sonra, peritona yapışılan hücreleri çıkarmak için peritona 10 s boyunca hafifçe masaj yapın.</li>
	<li>Makas ve cımbız kullanarak, iç deride küçük bir kesim (0,5 cm) yapın ve karın boşluğunu ortaya çıkarmak için kas yapın. Peritona bir ampul pipeti yerleştirin ve sıvıyı toplayın. Yağ dokusunu veya diğer organları aspire etmemeye dikkat edin.</li>
	<li>Mümkün olduğunca fazla sıvı toplayın ve toplanan hücre süspansiyonlarını buzda tutulan tüplere biriktirin. Ampul pipetini keskinlik kabına atın20. Periton sıvısını (250 x g, 5 dk) santrifüj edin ve IL-6 dosing için süpernatantı stokla (adım 4,9).</li>
	<li>Duodenuma (<5mm) bitişik pankreas bölgesini toplayın.</li>
	<li>Pankreası% 10 formalin ile sabitleyerek işleyin ve parafin içine ekleyin.<ol>
<li>Işık mikroskopisi altında histopatolojik analizler için slaytları hematoksilin ve eozin ile lekeleyin. AP'nin kapsamını değerlendirmek için Schmidt'in protokol21'ini (pankreas ödemi, acinar hücre, yaralanma/nekroz, pankreas iltihabı) kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Amilaz (U/dL) ürününün önerilerine göre piyasada bulunan kitleri kullanarak ölçün.</li>
	<li>Il-6'yı, üreticinin önerilerine göre ticari kitler kullanarak Luminex testleriyle ölçün.</li>
	<li>4.1 ve 4.4 adımlarında elde edilen serum ve periton sıvısı süpernatantını gerekirse -80 °C'de bir dondurucuda saklayın.</li>
</ol>

<ol><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significantly+different+clinical+features+between+hypertriglyceridemia+and+biliary+acute+pancreatitis%3A+A+retrospective+study+of+730+patients+from+a+tertiary+center%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center.</a> BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).</li>
<li>Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+antioxidant+mechanisms+in+lung+during+experimental+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).</li>
<li>T, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraductal+infusion+of+taurocholate+followed+by+distal+common+bile+duct+ligation+leads+to+a+severe+necrotic+model+of+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 44 (3), (2015).</li>
<li>Botoi, G., Andercou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin+17-prognostic+marker+of+severe+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Chirurgia%22%5BJournal%5D)">Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis.</a> Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).</li>
<li>Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+IL-1beta%2C+IL-8%2C+and+IL-10+polymorphisms+and+risk+of+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics+and+Molecular+Research%22%5BJournal%5D)">Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis.</a> Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).</li>
<li>Feng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+peritoneal+lavage+with+ulinastatin+on+the+expression+of+NF-kappaB+and+TNF-alpha+in+multiple+organs+of+rats+with+severe+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).</li>
<li>Fang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+sildenafil+on+inflammatory+injury+of+the+lung+in+sodium+taurocholate-induced+severe+acute+pancreatitis+rats%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats.</a> International Immunopharmacology. 80, (2020).</li>
<li>Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Post%C4%99py+Higieny+i+Medycyny+Do%C5%9Bwiadczalnej%28Online%29%22%5BJournal%5D)">Experimental models of acute pancreatitis.</a> Postępy Higieny i Medycyny Doświadczalnej(Online). 69, 264-269 (2015).</li>
<li>Wan, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+experimental+animal+models+of+biliary+acute+pancreatitis+and+recent+advances+in+basic+research%5BTitle%5D)+AND+%22HPB+%28Oxford%29%22%5BJournal%5D)">Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research.</a> HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).</li>
<li>Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretagogue+%28Caerulein%29+induced+pancreatitis+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreapedia%3A+The+Exocrine+Pancreas+Knowledge+Base%22%5BJournal%5D)">Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).</li>
<li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+protects+against+L-arginine-induced+acute+necrotizing+pancreatitis+in+mice+by+enhancing+SIRT1-mediated+deacetylation+of+p53+and+heat+shock+factor+1%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1.</a> International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).</li>
<li>Ma, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+resveratrol+on+peritoneal+macrophages+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis.</a> Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).</li>
<li>Souza, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+effects+of+peritoneal+lavage+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis.</a> Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).</li>
<li>Perides, G., Acker, G. J. v, Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).</li>
<li>Wittel, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taurocholate-induced+pancreatitis%3A+a+model+of+severe+necrotizing+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).</li>
<li>Tao, L., Reese, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+mouse+models+that+reflect+human+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunology%22%5BJournal%5D)">Making mouse models that reflect human immune responses.</a> Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).</li>
<li>Vandamme, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+rodents+as+models+of+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacy+and+Bioallied+Science%22%5BJournal%5D)">Use of rodents as models of human diseases.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).</li>
<li>Song, H. K., Hwang, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+C57BL%2F6N+mice+on+the+variety+of+immunological+researches%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Research%22%5BJournal%5D)">Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches.</a> Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).</li>
<li>Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBogdanske%2C+JJ+%22Suturing+Principles+and+Techniques+in+Laboratory+Animal+Surgery.+1st+edition%22">Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition</a>. (1), CRC Press. (2010).</li>
<li>Ray, A., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+mouse+peritoneal+cavity+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of mouse peritoneal cavity cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (35), e1488(2010).</li>
<li>Schmidt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+better+model+of+acute+pancreatitis+for+evaluating+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.</a> Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).</li>
<li>Liu, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+improves+the+therapeutic+efficacy+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis.</a> International Immunopharmacology. 80, 106128(2020).</li>
<li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 125 (12), 110024(2020).</li>
<li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 125, 110024(2020).</li>
<li>Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+bile+acids+on+pancreatic+ductal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreapedia%3A+The+Exocrine+Pancreas+Knowledge+Base%22%5BJournal%5D)">The effects of bile acids on pancreatic ductal cells.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).</li>
<li>Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+incidence+of+acute+pancreatitis%3A+impact+of+social+deprivation%2C+alcohol+consumption%2C+seasonal+and+demographic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Alimentary+Pharmacology+and+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors.</a> Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).</li>
<li>Lerch, M. M., Gorelick, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+acute+and+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Models of acute and chronic pancreatitis.</a> Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).</li>
<li>Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+immune-modulating+formula+comprising+whey+peptides+and+fermented+milk+improves+inflammation-related+remote+organ+injuries+in+diet-induced+acute+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Microbiota+Food+Health%22%5BJournal%5D)">An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice.</a> Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).</li>
<li>Kui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+methodolgy+of+L-Arginine-induced+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis.</a> PLoS One. 10 (2), 011758(2015).</li>
<li>Xue, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternatively+activated+macrophages+promote+pancreatic+fibrosis+in+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communication%22%5BJournal%5D)">Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis.</a> Nature Communication. 6, 7158(2015).</li>
<li>Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-6+in+inflammatory+and+malignant+diseases+of+the+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas.</a> Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).</li>
<li>Rao, S. A., Kunte, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-6%3A+An+early+predictive+marker+for+severity+of+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis.</a> Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Retrograd sodyum taurokolat infüzyonu ile akut pankreatit indükleme yöntemi sıçanlarda zaten gösterilmiştir22,23,24. 2008, 2010 ve 2015'te yayınlanan üç benzer eser, protokol için referans olarak görev yaptı3,14,15. Bu çalışmada, bu yöntemi C57BL /6 farelerde yeniden üretmek için tüm kritik adımları ve doğrulamak için bazı olasılıkları ...

İnsanlarda, safra kesesi taşlarının varlığı, kolesochal'ın terminal kısmının tıkanması, pankreas salgılarının akışını kesmesi ve pankreasta yoğun bir enflamatuar sürece neden olması nedeniyle pankreatitin en yaygın nedenidir, serum ve enflamatuar mediatörlerde sindirim enzimlerinin konsantrasyonunda bir artış ile1,2.
Akut pankreatit (AP) gelişimini açıklamak için iki farklı teori önerilmiştir. "Ortak kanal" teorisi, safra kesesinde bulunan taşların distal ortak safra kanalı sistemini tıkadığını ve safra salgısının pankreas kanalına retrograd akmasını sağladığını öne sürmemektedir. İkinci teori ("kanal tıkanıklığı" teorisi), pankreas kanalının fazla safra kesesi taşları tarafından tıkanmasının duodenuma pankreas salgısının akışında tıkanmaya neden olduğunu ve düktal hipertansiyona neden olduğunu göstermektedir3. Akut safra pankreatitine yol açan mekanizmalar tam olarak anlaşılamasa da, sonuç yoğun bir enflamatuar süreçtir. Sindirim enzimi patlaması ve pankreas kendi kendine sindirim histopatolojik değişikliklere, assitik sıvı ve serumda enflamatuar sitokinlerde (IL-1β, IL-6, TNF-α) artışa ve akut faz proteinlerinde artışa yol açar4,5,6.
Şiddetli akut pankreatit, birden fazla organın tutulumu ve yüksek mortalite riski nedeniyle klinik dikkati hak eden bir durumdur. Akut pankreatit (AP) üremesi için hayvan modelleri önemlidir, çünkü bunlar hastalığın patofizyolojik mekanizmalarını açıklar ve hastalığın ilk aşamalarından başlayarak enflamatuar olayların evrimini izlemeye yardımcı olur. Bu genellikle kliniklerde mümkün değildir2,7. Ek olarak, preklinik çalışmalarda pankreas dokularına erişim kolaydır, klinik koşullara bağlı değişikliklerin aydınlatılmasını kolaylaştırır8 izojenik türlerle çalışma, istenmeyen değişkenleri ortadan kaldırma ve klinik benzerliği insan durumunda gözlenen sonuçlarla yansıtma olasılığı ile birlikte9.
Sıçanlarda ve fare türlerinde akut pankreatit indüksiyonu için safralı ve safrasız modeller bilimsel literatürde sıkça incelenmiştir. Safrasız indüksiyon yöntemleri arasında kolesistokinin secretagogunun veya analog cerulein10'un supramaximal uyarıcı dozlarının verilmesi; neredeyse ölümcül dozlarda L-arginin verilmesi; veya etionin11 ile desteklenmiş kolin eksikliği olan bir diyetin yönetimi. Bu yöntemlerin çoğaltılması ve pankreas iltihabı ile sonuçlanması kolay olsa da, teoride AP'yi tetikleyen mekanizmaları (yani safra salgısının pankreas kanalına reflü) çoğaltır. Safra modeline hitap eden teknik, safra asitlerinin pankreas kanalına retrograd infüzyonuna dayanır ve bu protokolü gerçekleştirmek için iyi eğitimli araştırmacılar gerektirir. Sıçanlarda bu yöntem kullanılarak çeşitli çalışmalar yayınlanmıştır (görünüşe göre bu deneyler cerrahi prosedürler içerdiğinden teknik nedenlerle)12,13. Bununla birlikte, farelerdeki yaklaşım iltihaplanma çalışmasında daha ilginç sonuçlar sunabilir3,14,15. Bu çalışmada, C57BL/6 anestezik farelerde sodyum taurokolat infüzyonu ile şiddetli akut pankreatit üremesi için izlenecek adımların bir kontrol listesini göstereceğiz.
Antikorlarla deneylere ve gen ve protein ekspresyonunun analiz edilmesine ihtiyaç duyan çalışmalar için, bu hayvanlar için daha fazla malzeme cephaneliği ve çalışmalarla ilgili kullanılabilecek diğerlerinin yanı sıra izojenik ve nakavt türleriyle çalışma olasılığı nedeniyle farelerin kullanımı tercih edilir16. Fareler C57BL/6, başlangıçta antitümör aktivite ve immünoloji çalışması için geliştirilen doğuştan gelen bir fare türüdür. Bu suş, araştırmacılar tarafından izojenik olduğu için giderek daha fazla tercih edilmekte ve bu da bir deneyde daha az sayıda hayvanın kullanıldığı ve aynı grup17,18 arasındaki sonuçların daha az değişkenliği anlamına gelebilecek sonuçların daha fazla tekrarlanabilirliğine izinmektedir.
Perides ve ark. (2010)14 , sodyum taurokolat infüzyonu ile farelerde AP indüksiyonu için bir protokol yayınladı. Burada bu modeli, tanımlanmış bir hacim ve infüzyon hızı ile C57BL / 6 farelerde daha yüksek sodyum taurokolat konsantrasyonu (% 2.5) kullanarak güncelleriz (Şekil 1). Maksimum şiddet seviyesine farelerde indüksiyondan 12 saat içinde ulaşılır. IL-6 konsantrasyonunun hem serumda hem de periton boşluğunda yükselmesi AP'nin ilerlemesi ile ilişkilidir. Pratikte, anestezinin indüksiyonundan infüzyonun tamamlanmasına kadar geçen toplam tahmini süre hayvan başına 25 dk'dır. Bu deneyi eğitimli bir araştırmacının yapması şarttır. Çözeltinin ortak safra kanalına düzgün bir şekilde enjekte edildiğinden emin olmak için sodyum taurocholate yerine metilen mavisi kullanarak birkaç pilot eğitim seansı gerçekleştirin.

<table><tbody><tr><td>0.4 mm</td><td>iğne INTRAG MEDİKAL TEKNOLOJİ</td><td></td><td>90183210 30G</td></tr><tr><td>&nbsp; 0,54 mm polietilen tüp</td><td>Tygon</td><td>730010-Strafor</td><td></td></tr> <tr><td>blok</td> <td>-</td> <td>fareyi</td><td></td></tr> <tr><td>monte etmek için maskeleme bandı</td><td>Missner</td><td>1236-İnfüzyon</td><td></td></tr> <tr><td>pompası 10&mikro'ya programlanmış; L / dk.</td><td>Havard aparatı-Peristaltik Pompa Serisi</td><td>MA1 55-7766</td><td>&nbsp; Model 66 Küçük Peristaltik</td></tr><tr><td>Makas ve forseps</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antiseptik providin iyot</td><td>Pfizer</td><td>12086OR</td><td>antisepsi</td></tr><tr><td>%70 etanol</td><td>SIGMA</td><td>459836</td><td>300 mL dH2O ile 700 mL %100 etanol karıştırın</td></tr><tr><td>Jilet bıçağı</td><td>Lord</td><td>bdk9a1ghk6</td><td>Trikotomi için</td></tr><tr><td>Sodyum taurokolat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>86339- 1G</td><td>CAS NUMARASI- 345909-26-4</td></tr><tr><td>mikro damar klipsi</td><td>Medicon Surgical</td><td>56.87.35</td><td>Yaklaşık, açıklık 4.0 mm, kapatma basıncı 30 -&nbsp; 40 g</td></tr><tr><td>6-0 prolene</td><td>Bioline</td><td>5162</td><td>Sütür hattı</td></tr><tr><td>Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL</td><td>Crist&aacute; lia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xilazine% 2</td> <td>Syntec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steril tuzlu su çözeltisi (% 0.9 (wt / vol) salin)</td> <td>Farmace</td><td>105851</td><td></td></tr><tr><td>Metil Mavi</td><td>Sigma-Aldrich Kimyasalları</td><td>M5528</td><td></td></tr><tr><td>MILLIPLEX & HARİTA&nbsp; Fare Sitokin / Kemokin Manyetik Boncuk Paneli - İmmünoloji Multipleks Testi</td><td>MERCK</td><td>MCYTOMAG-70K</td><td>Fare serumu, plazma ve hücre kültürü örneklerinde Luminex teknolojisini kullanarak Boncuk Bazlı Multipleks Testler ile çoklu sitokin ve kemokin biyobelirteçlerini aynı anda analiz edin.</td></tr><tr><td>Amilaz Testi</td><td>Labtest</td><td>11</td><td></td></tr><tr><td>Desmarres toplayıcı 13 mm genişlik</td><td>ROBOZ</td><td>RS-6672</td><td></td></tr></tbody></table>

c57bl/6 farelerde sodyum taurokolat İndüklenen Şiddetli akut pankreatit

Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

Sodyum taurokolat infüzyonu ile safra akut pankreatit indüksiyonu, insan klinik durumunun temsili ve klinik safra pankreatitinin başlangıcına karşılık gelen enflamatuar olayların üremesi nedeniyle bilim topluluğu tarafından yaygın olarak kullanılmaktadır. Pankreas hasarının şiddeti, aşılanan safra asidinin konsantrasyonu, hızı ve hacmi ölçülerek değerlendirilebilir. Bu çalışma, protokol üremesinde kullanılan malzeme ve yöntemlerin güncellenmiş bir kontrol listesini sağlar ve bu akut pankreatit (AP) modelinin ana sonuçlarını gösterir. Önceki yayınların çoğu, bu modeli sıçanlarda yeniden üretmekle sınırlıdır. Bu yöntemi, çalışmayla ilgili olabilecek ek avantajlar (yani, bu hayvanlar için reaktifler ve antikorlardan oluşan bir cephaneliğin mevcudiyeti ve genetiği değiştirilmiş fare suşlarıyla çalışma imkanı) sağlayan farelerde uyguladık. Farelerde akut pankreatit indüksiyonu için, C57BL/6 farelerde 3 dakika boyunca 10 μL/dk infüzyon hızında% 2.5 sodyum taurocholate tanımlanmış bir doz ile sistematik bir protokol sunuyoruz ve indüksiyonun 12 saat içinde maksimum şiddet seviyesine ulaşıyor ve yöntemi doğrulayan sonuçlarla sonuçları vurguluyoruz. Uygulama ve teknikle, anestezinin indüksiyonundan infüzyonun tamamlanmasına kadar toplam tahmini süre hayvan başına 25 dk'dır.

Pankreatit şiddeti Schmidt'in ölçeğine göre 0-3 arasında puanlanmıştır21 burada sıfır yokluğa karşılık gelir, 1 hafif bir varlığa karşılık gelir (%&lt;25), 2 ılımlı bir varlığa karşılık gelir (% ila 50) ve 3 yoğun bir varlığa karşılık gelir (%&gt; 50) (Tablo 1). Yapılan ölçümler plazma amilaz aktivitesi, pankreas ödemi, acınar hücre, yaralanma/nekroz, pankreas iltihabı (H&amp;E-lekeli bölümlerin histoloji analizi ile) ve serum ve PerC sıvısında IL-...

Şiddetli akut pankreatit için hayvan modelleri, ilk aşamada patofizyolojik değişikliklerin incelenmesini sağlayarak enflamatuar olayların evriminin gözlemini kolaylaştırır. Burada, anestezi edilmiş C57BL/6 farelerin pankreas kanalına sodyum taurokolatın retrograd infüzyonu ile şiddetli akut safra pankreatit indüksiyonu için bir protokol sunuyoruz.

C57BL/6 Farelerde Sodyum Taurokolat İndüklenen Şiddetli Akut Pankreatit

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

Bu yöntem akut safra pankreatitinde meydana gelen enflamatuar olayların yeniden üretilmesi için kullanılabilir. Pankreas dokusundaki değişiklikleri erken evrelerinde incelemek mümkündür, bu da klinikte genellikle mümkün değildir. Bu tekniğin temel avantajları, eğitimli bir araştırmacı için hızlı ve kolay üremesi ve insanlarda akut pankreatit ile benzer sonuçlar sunmasıdır.Yöntem, pankreas ve bitişik organlardaki enflamatuar aracılık eden hücrelerin incelenmesine izin verdiğinden, ilaç moleküllerinin farmakolojik immün yanıtlarını ve diğer terapötik müdahaleleri incelemek için kullanılabilir. Bu protokolü denerken, organların yerini belirlemek ve cannülasyon bölgesini kurmak çok önemlidir. Organların yerini ezberle ve önce metilen mavisi gibi renkli bir çözelti kullanarak enjeksiyon uygulamasını yapın.Anestezinin derinliğini bir ayak parmağı sıkışması ile kontrol ettikten sonra, uyuşturulmış bir farenin karın bölgesini% 5 povidon iyot çözeltisi ile temizleyin. Bir düzeltici kullanarak, göğüs ve alt karın arasındaki saçları çıkarın ve yaklaşık iki santimetrekarelik bir cerrahi bölgeyi% 70 alkolle temizleyin. Hayvanı cerrahi tahtada hareketsiz hale getirmek ve cildin beş milimetresini

sodium-taurocholate-induced-severe-acute-pancreatitis-in-c57bl6-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, sodyum taurokolatın pankreas infüzyonu yoluyla akut biliyer pankreatitli bir fare modelinin oluşturulması prosedürü açıklanmaktadır. Bu model, pankreasta sodyum taurokolatın neden olduğu patofizyolojik değişikliklerin incelenmesine yardımcı olur.

Akut Biliyer Pankreatit Modeli: Pankreas Kanalı İnfüzyonu Yoluyla Akut Biliyer Pankreatit Fare Modeli Oluşturmak İçin Bir Yöntem

Kronik pankreatit (CP), genellikle inatçı karın ağrısı ile ilişkili olan pankreasın iltihabı ve fibrozisi ile karakterize bir hastalıktır. Bu makalede, 2,4,6 -trinitrobenzen sülfiyonik asit (TNBS) ile safra kanalı infüzyonu yoluyla CP'nin fare modelini oluşturma tekniğinin iyileştirilmesine odaklanmaktadır.

Safra Kanalı TNBS infüzyonu ile Kronik Pankreatit için Bir Fare Modeli

Burada şiddetli akut pankreatit fare modeli açıklanmıştır. Burada sunulan prosedür çok hızlı, basit ve erişilebilirdir, böylece akut pankreatitteki moleküler mekanizmaların ve farklı terapötik müdahalelerin uygun bir şekilde incelenmesine izin verir.

Biliopankreatik Kanala Sodyum Taurocholate Retrograd Enjeksiyonu Kullanılarak Fare Şiddetli Akut Pankreatit Modelinin Kurulması

İntraperitoneal ilaç uygulaması, pankreas hasarını indüklemek için güvenli ve etkili bir non-invaziv yaklaşımdır. Bu çalışma, değişen derecelerde pankreas hasarını indüklemek için fareler üzerinde beş farklı intraperitoneal enjeksiyon protokolünü karşılaştırdı ve şiddetli akut pankreatit (SAP) için patolojik değişiklikleri ve tedavi stratejilerini araştırmak için bir ciddi pankreas hasarı modeli oluşturdu.

Semoreuin ve lipopolisakkarit intraperitoneal enjeksiyonunun bir kombinasyonu ile şiddetli akut pankreatitin bir fare modelinin hazırlanması

Bu video CO nasıl gerçekleştirileceği...

Süresi doldu CO 2</subAcil Servisten Entübe veya kendiliğinden nefes alamayan hastalarda> Ölçüm

Ventilatöre bağlı akciğer hasarı için bir fare modeli akut akciğer hasarı incelemek için önemli bir...

Farelerde Akut Akciğer Hasarı tetikleyebilecek Basınç Kontrollü Havalandırma

Biz fareler tabi olan orta ve ağır iskemi-reperfüzyon bağlı böbrek hasarı modelleri tanımlamak tek taraflı renal pedikül sırasıyla, eş zamanlı veya gecikmeli taraf nefrektomi takip sıkma. Bu modeller sürekli böbrek fonksiyon bozukluğu ve post-yaralanma fibrozis yol, ancak yaralanma şiddeti ve yaşam fare arka plan, yaş ve cerrahi ekipman bağlıdır.

Farelerde Akut Böbrek Hasarı ve Post Yaralanma Fibrozis iskemi-reperfüzyon Model

Akut beyin travması bugüne kadar yeterli bir tedavisi olmayan ciddi bir yaralanma olduğunu. Multiphoton mikroskopi uzunlamasına akut beyin travması gelişim sürecini inceleyerek ve kemirgenlerde terapötik stratejiler sondalama sağlar. Beynin in vivo iki foton görüntüleme ile incelenmiştir akut beyin travması iki model bu protokolde gösterilmiştir.

Boyuna İki foton görüntüleme ile takip Farelerde Akut Beyin Travma

BM12 lenfositlerinin bir C57BL/6 alıcısına transferi, sistemik lupus eritematozusun yerleşik bir modelidir. Burada, bu modeli kullanarak hastalığın nasıl başlatılacağını ve T foliküler yardımcı hücrelerin, germinal merkez B hücrelerinin ve plazma hücrelerinin akış sitometrisi ile nasıl karakterize edileceğini açıklıyoruz.

C57BL / 6 FARELERDE SLE bm12 İndüklenebilir Modeli (SLE)

Fare distal kolostomi insan saptırma kolit, ağırlıklı olarak Lenfositik kolit dışkı akışından hariç iki nokta üst üste segmentinde için bir fare modeli sağlar.

Fare Distal kolostomi, C57BL/6 farelerde saptırma kolit roman modeli

Keşfedin C57BL/6 farelerde sodyum taurokolat infüzyonu ile şiddetli akut pankreatit indüksiyonu yöntemini. Bu protokol erken inflamatuar olayları ve farmakolojik yanıtları incelemek için hızlı ve tekrarlanabilir bir model sunar.

C57BL/6 Farelerde Sodyum Taurokolat İndüklenen Şiddetli Akut Pankreatit

Daha fazla video keşfet