Name: Plevral Yayılım Fare Modelleri için Yakın Kızılötesi Fotoimmünoterapi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-09T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 39 s
Description: Keşfedin, plevral yayılım akciğer kanserli fare modellerinde yakın kızılötesi fotoimmünoterapi ile tümör tedavi etkinliğini biyolüminesans görüntüleme kullanarak değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Hiç kimse

Tüm in vivo deneyler, Nagoya Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi Laboratuvar Hayvan kaynaklarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygun olarak gerçek gerçekleştirildi (onay #2017-29438, #2018-30096, #2019-31234, #2020-20104). Nagoya Üniversitesi Hayvan Merkezi'nde altı haftalık homozigot athymic çıplak fareler satın alındı ve bakımı yapıldı. Farelerde prosedürü gerçekleştirirken, izofluran ile uyuşturuldular (giriş: % 4-5, bakım% 2-3); pati, anestezinin derinliğini doğrulamak için cımbızla bastırıldı.
1. iab ile IR700 konjugasyonu
<ol><li>1 h için 15-25 °C'de 0.1 mol/L Na 2 HPO 4 (pH 8.6) ile IR700 NHS ester (DMSO'da 66.8 mg,34.2nmol, 5 mmol/L) ile 1 mg, 6.8 nmol) kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>Karışımı bir sütun kullanarak arındırın (örneğin, Sephadex). Sütunu PBS ile hazırlayın ve yıkayın. Daha sonra karışımı sütuna uygulayın ve saflaştırılmış IR700 konjuge antikoru içeren damlayı toplayın. Bu IR700 konjuge antikor antikor ışığa duyarlılık konjuge (APC) olarak adlandırılır.</li>
	<li>APC'deki protein ve IR700 konsantrasyonu ölçün.<ol>
<li>Spektrofotometre kullanarak protein ve IR700 için kalibrasyon eğrileri hazırlayın.</li>
		<li>Standart albümin konsantrasyonlarını kit protokolünü takiben bir protein test kiti ile karıştırın (bkz. Malzeme Tablosu, Coomassie Parlak Mavi (CBB) protein boyama). Albümin absorbansını 595 nm dalga boyunda ölçün ve aşağıdaki denklemi kullanarak protein için kalibrasyon eğrisini (doğrusal bir yaklaşım formülü) çizin: y = ax + b (x: konsantrasyon, y: absorbans).</li>
		<li>Aynı prosedürü kullanarak 690 nm'de emilim ile IR700 için kalibrasyon eğrileri elde edin. Standart IR700 konsantrasyonu 0,1-5 μM'de (0,1954-9,77 μg/mL) önerilir.</li>
		<li>APC'deki protein konsantrasyonunu ve IR700 konsantrasyonunu kalibrasyon eğrisi [x = (y-b)/a (x: konsantrasyon, y: absorbans)] kullanarak ölçün.</li>
		<li>Molar konsantrasyonunun sonuçlarıyla mAb başına bağlı IR700 boya sayısını belirleyin. NOT: mAb molekülü başına en uygun IR700 moleküllerinin konjugasyon sayısını belirlemek önemlidir. Genel olarak, tek bir mAb molekülüne bağlı yaklaşık üç IR700 molekülü hem in vitro hem de in vivoetkili olacaktır. Antikor başına bağlı birçok IR700 (örneğin, altı), in vivo deneyler sırasında karaciğerde sıkışmayı kolaylaştırır. IR700'e bağlı antikor oranı 1:2-1:4 aralığındaydı. Gerekirse IR700 oranı azaltıldı.</li>
	</ol>
</li>
	<li>APC oluşumu için bir onay olarak sodyum dodecyl sülfat-poliakrilamid jel elektroforez (SDS-PAGE) gerçekleştirin. Jeli floresan görüntüleyici kullanarak 700 nm'de görüntüleyin ve jeldeki proteini kit protokolünü takip eden bir protein boyama kiti kullanarak lekelenin (bkz. Malzeme Tablosu, CBB protein boyama).</li>
</ol>2. Plevral yaygınlaştırma modelinin üretimi
<ol><li>Luciferaz eksprese edici hedef hücreleri hazırlayın ve 100 μL fosfat tamponlu salinde (PBS) 1.0 × 106 hedef hücreyi askıya alın NOT: Akciğer kanseri ve MPM gibi intratorasik kanser hücreleri hedef hücre olarak uygundur. Luciferaz ekspresyonu hücreleri luciferaz gen transfeksiyon yoluyla hazırlandı ve 10 hücre geçişi > sonra luciferazın yüksek ekspresyonu doğrulandı. Hücreler % 10 fetal sığır serumu ve penisilin (100 IU/mL) ve streptomisinin (100 mg/mL) ile desteklenmiş bir ortamda kültürlendi. Hücre sayısı tümör büyüme hızına ve tedavi süresine göre ayarlandı (1.0. × 105 -6.0× 106 hücre/vücut ağırlığı).</li>
	<li>Tercih edilen vücut ağırlığı 19-21 g olan 8-12 haftalık dişi homozigot athymic çıplak fareler hazırlayın.</li>
	<li>İşlem sırasında fareleri izofluran ile uyuşturun (giriş: % 4-5, bakım% 2-3); reaksiyon olmadığını onaylamak için kuyruğa cımbızla bastırın.</li>
	<li>Polistiren köpüklü bir durdurucu yapın ve akciğer yaralanmasını önlemek için ucun 5 mm'de kalması için durdurucuyu 30 G iğneye takın. Pnömotorakstan kaçınmak için iğne ucunu temiz ön ayaklarla veya %70 EtOH ile temizlenmiş sert bir nesneye bastırarak bükün (Şekil 1). DİkKAT: Kendini delmemeye dikkat edin. İğneyi bükmek için tokmak kullanın. İğneye tağrken durdurucuyu tutmayın. Hücreleri şırındağa doldurmadan önce durdurucuyu yapıştırmak daha güvenlidir.</li>
	<li>Bir şırıngayı (1 mL) hedef hücrelerle doldurun ve bir durdurucu ile 30G iğne takın.</li>
	<li>İşlemden önce hayvanın göğsünü% 70 EtOH ile dezenfekte edin.</li>
	<li>Farenin göğsüne bir iğneyi interkostal boşluktan delin. O sırada kaburgalara vururken direnç nedeniyle iğne ucu yukarı ve aşağı hareket etti. Interkostal alandan geçtikten sonra şırınna fareye bastırın ve 100 μL hedef hücre enjekte edin (Şekil 2). NOT: İğne göğüs boşluğuna düzgün bir şekilde girdiğinde fare derin nefes eder. İğne ucunun bükülmesi ile pnömotoraks ve akciğere uygun olmayan hücre enjeksiyonu önlenebilir. NOT: Kalp duvarı delinme riskini önlemek için sağ göğüs duvarı delinmesi önerilir.</li>
	<li>Hücreleri torasik boşluğa yaymak için fareyi 2-3 kez yuvarlayın.</li>
	<li>Fareyi temiz ve sıcak bir kafese geri döndürün ve ambülatöre kadar izleyin. İşlemden sonra, fare anesteziden uyanacak ve normal davranacaktır.</li>
</ol>3. Biyolüminesans ölçümü
NOT: Veri toplama için kullanılan yazılım Malzeme Tablosundalistelenmiştir.
<ol><li>Plevral yayılım modelinin neslini doğrulamak için, hücreleri torasik boşluğa enjekte ettikten sonra her gün biyolüminesans görüntülerini değerlendirin.</li>
	<li>Fareleri uyuşturun (adım 2.3) ve D-luciferin (15 mg / mL, 200 μL) ile intraperitoneally enjekte edin.</li>
	<li>Farenin görüntülemeden önce ve sonra normal nefes almasını sağlayın. Anestezi sırasında hipotermiyi önlemek için gerekirse bir ısıtıcı kullanın.</li>
	<li>Enjeksiyondan on dakika sonra, fareyi biyolüminesans görüntüleme (BLI) ölçüm ekipmanına ayarlayın. Görüntü alımı için yazılımın Edinme Denetim Masası'nı açın. Parlaklık, Fotoğrafve Kaplama (Şekil 3) 'yiseçin.</li>
	<li>Pozlama süresini Otomatik olarak ayarlayın. Binning'i küçük olarak ayarla.</li>
	<li>F/stop'ı parlaklık için 1 ve fotoğraf için 8 olarak ayarlayın; f/stop, şarjlı bağlı cihaz dedektörü tarafından alınan ışık miktarını kontrol ediyor.</li>
	<li>Görünüm Alanını Colarak ayarlayın.</li>
	<li>Fare örneği görüntülemeye hazır olduğunda, görüntüleme alımı için Al'ı tıklatın. Daha fazla çalışma için yeterli luciferaz aktivitesi olan fareler seçildi. NOT: Uygun bir plevral yayma modeli, ventral taraftan bakıldığında göğüsteki dağınık bölgede güçlü lüminesans gösterir. BLI görüntüleri toraksta ve sadece enjeksiyon bölgesinde dağıtılmazsa, tümör deri altından nakledilebilir.</li>
	<li>Görüntüyü görüntüledikten sonra, görüntü biçimini Radiance olarak ayarlayın. Araç Paleti panelini açın (Şekil 4A).</li>
	<li>Yatırım Getirisi Araçları 'nıseçin. Görüntülerdeki biyolüminesan alanı aralığı için Circle'ı kullanmanızı öneririz.</li>
	<li>Yüzey biyolüminesansı yoğunluğunu ölçmek için RoI'leri ölç'ü tıklatın (Şekil 4B).</li>
	<li>Gereken değerleri/bilgileri seçmek için yatırım getirisi ölçüm panelinin sol köşesindeki Ölçümü Yapılandır'ı kullanın. Bu veri tablosunu .csv dosyası olarak verin (Şekil 4C).</li>
	<li>.csv dosyasında biyolüminesan yoğunluk nicelemesi olarak Toplam Akı (p/s) değerlerini kullanın.</li>
</ol>4. Dağınık lüminesans görüntüleme tomografisi (DLIT)
NOT: Veri toplama için kullanılan yazılım Malzeme Tablosundalistelenmiştir.
<ol><li>X-ray Armed düğmesini açın.</li>
	<li>Fareleri uyuşturun (adım 2.3) ve ardından D-luciferin (15 mg / mL, 200 μL) intraperitoneally farelere enjekte edin. DLIT'i sürekli olarak 3,2'den 3,7'ye çekmek için bu adımı atlayın.</li>
	<li>Enjeksiyondan on dakika sonra fareyi BLI ekipmanına ayarlayın.</li>
	<li>Yazılımın Edinme Denetim Masası'nı açın. Parlak , Fotoğraf, CT, Standart-Bir Fareve Kaplama 'yıseçin. Diğer ayarlar 3.4-3.6(Şekil 5A)ile aynıydı.</li>
	<li>Edinme Denetim Masası'nda Görüntüleme Sihirbazı'nı seçin.</li>
	<li>Biyolüminesans'ı ve ardından DLIT 'i (Şekil 5B) seçin.</li>
	<li>Ölçülecek dalga boyu olarak Firefly'ı seçin (Şekil 5C).</li>
	<li>Görüntüleme Konusunu Fare, Pozlama parametrelerini Otomatik Ayarlar, Görüş Alanını C-13,4 cmve Konu Yüksekliğini 1,5 cm ( Şekil5D) olarak ayarlayın.</li>
	<li>Itme X ışınları enerjilendiğinde üretilecektir. öğesini 0,.</li>
	<li>CT sıralı görüntü verilerini açın.</li>
	<li>Araç Paletinde Yüzey Topografyası'nı açın. Göster 'i seçin (Şekil 6A).</li>
	<li>Mor ekran yalnızca gövde yüzeyini gösterecek şekilde eşiği ayarlayın (Şekil 6B). Ardından, Konu Çıplak Fare'yi seçin ve Yüzey Oluştur 'utıklatın. Farenin anahattının doğru çizildiğinden emin olun (Şekil 6C).</li>
	<li>Araç Paleti, DLIT 3D Rekonstrüksiyon Özellikleri sekmesini açın. Fare Dokusu olarak Doku Özelliklerini ve Ateş Böceği Olarak Kaynak Spektrumu 'nı seçin(Şekil 6D). Ardından, Çözümle sekmesini açın ve seçilen her dalga boyu verisi için verileri onaylayın. Son olarak, Yeniden Yapılandır düğmesini (Şekil 6E) tıklatın.</li>
	<li>Yapılandırılmış DLIT görüntüsünde göğüs boşluğunda BLI varlığını onaylayın.</li>
</ol>5. In vivo plevral yayma modeli için NIR-PIT
<ol><li>Bir güç ölçer ile 690 nm dalga boyu (NIR) lazer ışık dozunu ölçün ve çıkışı 100 mW / cm2'yeayarlayın. NOT: Lazer ışığı hassas bir bobin boyutu ile tutarlıdır; böylece, ışık enerjisi 50 cm içindeki mesafeden bağımsız olarak neredeyse hiç değişmez. Yanıklar gibi birçok olumsuz olay varsa, 40 mW / cm2aralığında çıkışı azaltın.</li>
	<li>Kuyruğu% 70 EtOH ile temizleyin ve NIR ışınlamadan 24 saat önce kuyruk damarı aracılığıyla APC (100 μg) enjekte edin. Kanamayı kontrol etmek için enjeksiyon bölgesine basınç uygulayın. NOT: Enjeksiyon için APC hacmini 50-200 μL'ye ayarlayın.</li>
	<li>Fareleri uyuşturun (adım 2.3) ve sırt üstü yatırın. Hedef olmayan bölgeye NIR ışınını önlemek için, diğer bölgeleri alüminyum folyo ile siper edin (Şekil 7A). 100 J/cm2lazer ile NIR ışık ile ışınlanın; tümör göbeğe geri yayılırsa, NIR-ışık ışınlama dozu birden fazla yöne bölünebilir (Şekil 7B). NOT: İn vitro sonuçlara ve yanık gibi olumsuz olaylara bağlı olarak dozu30-150 J/cm 2 olarak ayarlayın.</li>
	<li>NIR ışınlama tamamlandığında ve fare uyanık olduğunda, kafese geri döndürün.</li>
	<li>BLI'ye uyun ve yatırım getirisini zaman içinde (her gün) ölçün (Bkz. 3.2-3.12).</li>
	<li>Ex vivo görüntüleme için, NIR ışınlamadan hemen önce, APC enjeksiyonundan 24 saat sonra karbondioksitli fareleri ötenazi edin.<ol>
<li>Farenin göğsünün içini gözlemlemek için toraksı çıkarın ve kaburgaları ve sternumu kesin. APC yönetimi olmadan kontrolün yanında floresan görüntüsünü (700 nm) yakalayın. Daha sonra, maruz kalan toraksın üzerine D-luciferin (150 μg/mL) uygulayın ve BLI alındı (bkz. 3.2-3.7).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Xu, X., Lu, H., Lee, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+Infrared+Light+Triggered+Photo%2FImmuno-Therapy+Toward+Cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Near Infrared Light Triggered Photo/Immuno-Therapy Toward Cancers.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, (2020).</li>
<li>Mitsunaga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+cell-selective+in+vivo+near+infrared+photoimmunotherapy+targeting+specific+membrane+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cancer cell-selective in vivo near infrared photoimmunotherapy targeting specific membrane molecules.</a> Nature Medicine. 17, 1685-1691 (2011).</li>
<li>Kobayashi, H., Choyke, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-Infrared+Photoimmunotherapy+of+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Accounts+of+Chemical+Research%22%5BJournal%5D)">Near-Infrared Photoimmunotherapy of Cancer.</a> Accounts of Chemical Research. 52, 2332-2339 (2019).</li>
<li>Oseroff, A. R., Ohuoha, D., Hasan, T., Bommer, J. C., Yarmush, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody-targeted+photolysis%3A+Selective+photodestruction+of+human+T-cell+leukemia+cells+using+monoclonal+antibody-chlorin+e6+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Antibody-targeted photolysis: Selective photodestruction of human T-cell leukemia cells using monoclonal antibody-chlorin e6 conjugates.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 83, 8744-8748 (1986).</li>
<li>Mew, D., Wat, C. K., Towers, G. H., Levy, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoimmunotherapy%3A+treatment+of+animal+tumors+with+tumor-specific+monoclonal+antibody-hematoporphyrin+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Photoimmunotherapy: treatment of animal tumors with tumor-specific monoclonal antibody-hematoporphyrin conjugates.</a> Journal of Immunology. 130, 1473-1477 (1983).</li>
<li>Vrouenraets, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+meta-tetrahydroxyphenylchlorin-monoclonal+antibody+conjugates+for+photoimmunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of meta-tetrahydroxyphenylchlorin-monoclonal antibody conjugates for photoimmunotherapy.</a> Cancer Research. 59, 1505-1513 (1999).</li>
<li>Goff, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoimmunotherapy+and+biodistribution+with+an+OC125-chlorin+immunoconjugate+in+an+in+vivo+murine+ovarian+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Photoimmunotherapy and biodistribution with an OC125-chlorin immunoconjugate in an in vivo murine ovarian cancer model.</a> British Journal of Cancer. 70, 474-480 (1994).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoinduced+Ligand+Release+from+a+Silicon+Phthalocyanine+Dye+Conjugated+with+Monoclonal+Antibodies%3A+A+Mechanism+of+Cancer+Cell+Cytotoxicity+after+Near-Infrared+Photoimmunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Central+Science%22%5BJournal%5D)">Photoinduced Ligand Release from a Silicon Phthalocyanine Dye Conjugated with Monoclonal Antibodies: A Mechanism of Cancer Cell Cytotoxicity after Near-Infrared Photoimmunotherapy.</a> ACS Central Science. 4, 1559-1569 (2018).</li>
<li>Sato, K., Nagaya, T., Choyke, P. L., Kobayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+in+the+treatment+of+pleural+disseminated+NSCLC%3A+Preclinical+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy in the treatment of pleural disseminated NSCLC: Preclinical experience.</a> Theranostics. 5, 698-709 (2015).</li>
<li>Nishinaga, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+Phototherapy+for+Malignant+Pleural+Mesothelioma%3A+Near-Infrared+Photoimmunotherapy+Targeting+Podoplanin%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Targeted Phototherapy for Malignant Pleural Mesothelioma: Near-Infrared Photoimmunotherapy Targeting Podoplanin.</a> Cells. 9, 1019(2020).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+prevents+lung+cancer+metastases+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy prevents lung cancer metastases in a murine model.</a> Oncotarget. 6, 19747-19758 (2015).</li>
<li>Sato, K., Nagaya, T., Mitsunaga, M., Choyke, P. L., Kobayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+for+lung+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy for lung metastases.</a> Cancer Letters. 365, 112-121 (2015).</li>
<li>Isobe, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+targeting+DLL3+for+small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy targeting DLL3 for small cell lung cancer.</a> EBioMedicine. 52, 102632(2020).</li>
<li>Nakamura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+in+a+transgenic+mouse+model+of+spontaneous+epidermal+growth+factor+receptor+%28EGFR%29-expressing+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy in a transgenic mouse model of spontaneous epidermal growth factor receptor (EGFR)-expressing lung cancer.</a> Molecular Cancer Therapeutics. 16, 408-414 (2017).</li>
<li>Nagaya, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+with+avelumab%2C+an+anti-programmed+death-ligand+1+%28PD-L1%29+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy with avelumab, an anti-programmed death-ligand 1 (PD-L1) antibody.</a> Oncotarget. 8, 8807-8817 (2017).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+selective+depletion+of+tumor-associated+regulatory+T+cells+with+near-infrared+photoimmunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Spatially selective depletion of tumor-associated regulatory T cells with near-infrared photoimmunotherapy.</a> Science Translational Medicine. 8, (2016).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+effectiveness+of+light+emitting+diodes+%28LEDs%29+and+lasers+in+near+infrared+photoimmunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Comparative effectiveness of light emitting diodes (LEDs) and lasers in near infrared photoimmunotherapy.</a> Oncotarget. 7, 14324-14335 (2016).</li>
<li>Sato, K., Choyke, P. L., Kobayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoimmunotherapy+of+Gastric+Cancer+Peritoneal+Carcinomatosis+in+a+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Photoimmunotherapy of Gastric Cancer Peritoneal Carcinomatosis in a Mouse Model.</a> PLoS One. 9, 113276(2014).</li>
<li>McLemore, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+intrapulmonary%2C+percutaneous+intrathoracic%2C+and+subcutaneous+models+for+the+propagation+of+human+pulmonary+and+nonpulmonary+cancer+cell+lines+in+athymic+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Comparison of intrapulmonary, percutaneous intrathoracic, and subcutaneous models for the propagation of human pulmonary and nonpulmonary cancer cell lines in athymic nude mice.</a> Cancer Research. 48, 2880-2886 (1988).</li>
<li>Manzotti, C., Audisio, R. A., Pratesi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+orthotopic+implantation+for+human+tumors+as+model+systems%3A+relevance+to+metastasis+and+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Importance of orthotopic implantation for human tumors as model systems: relevance to metastasis and invasion.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 11, 5-14 (1993).</li>
<li>Lwin, T. M., Hoffman, R. M., Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+of+patient-derived+orthotopic+mouse+models+and+genetic+reporters+for+developing+fluorescence-guided+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Advantages of patient-derived orthotopic mouse models and genetic reporters for developing fluorescence-guided surgery.</a> Journal of Surgical Oncology. 118, 253-264 (2018).</li>
<li>Sordat, B. C. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSordat%2C+BCM+%22From+Ectopic+to+Orthotopic+Tumor+Grafting+Sites%3A+Evidence+for+a+Critical+Role+of+the+Host+Tissue+Microenvironment+for+the+Actual+Expression+of+the+Malignant+Phenotype%22">From Ectopic to Orthotopic Tumor Grafting Sites: Evidence for a Critical Role of the Host Tissue Microenvironment for the Actual Expression of the Malignant Phenotype</a>. , Humana Press. Cham. 43-53 (2017).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoimmunotherapy%3A+comparative+effectiveness+of+two+monoclonal+antibodies+targeting+the+epidermal+growth+factor+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Oncology%22%5BJournal%5D)">Photoimmunotherapy: comparative effectiveness of two monoclonal antibodies targeting the epidermal growth factor receptor.</a> Molecular Oncology. 8, 620-632 (2014).</li>
<li>Nakajima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+conjugate+and+light+dose+on+photo-immunotherapy+induced+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">The effects of conjugate and light dose on photo-immunotherapy induced cytotoxicity.</a> BMC Cancer. 14, 389(2014).</li>
<li>Nagaya, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+of+B-cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Oncology%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy of B-cell lymphoma.</a> Molecular Oncology. 10, 1404-1414 (2016).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+in+the+treatment+of+disseminated+peritoneal+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy in the treatment of disseminated peritoneal ovarian cancer.</a> Molecular Cancer Therapeutics. 14, 141-150 (2015).</li>
<li>Colin, D. J., Bejuy, O., Germain, S., Triponez, F., Serre-Beinier, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+and+monitoring+by+pet%2Fct+of+an+orthotopic+model+of+human+pleural+mesothelioma+in+athymic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Implantation and monitoring by pet/ct of an orthotopic model of human pleural mesothelioma in athymic mice.</a> Journal of Visualized Experiments. 2019, (2019).</li>
<li>Opitz, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+recurrence+model+of+malignant+pleural+mesothelioma+for+investigation+of+intrapleural+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cardio-Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Local recurrence model of malignant pleural mesothelioma for investigation of intrapleural treatment.</a> European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 31, 772-778 (2007).</li>
<li>Bunn, P. A., Kelly, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+chemotherapeutic+agents+prolong+survival+and+improve+quality+of+life+in+non-small+cell+lung+cancer%3A+a+review+of+the+literature+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">New chemotherapeutic agents prolong survival and improve quality of life in non-small cell lung cancer: a review of the literature and future directions.</a> Clinical Cancer Research. 4, 1087-1100 (1998).</li>
<li>Astoul, P., Wang, X., Hoffman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-like+nude-mouse+and+scid-mouse+models+of+human+lung+and+pleural+cancer+%28review%29%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Patient-like nude-mouse and scid-mouse models of human lung and pleural cancer (review).</a> International Journal of Oncology. 3, 713-718 (1993).</li>
<li>Yamaguchi, H., Pantarat, N., Suzuki, T., Evdokiou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+photoimmunotherapy+using+a+small+protein+mimetic+for+HER2-overexpressing+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Near-infrared photoimmunotherapy using a small protein mimetic for HER2-overexpressing breast cancer.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20, (2019).</li>
<li>Jing, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+and+selective+elimination+of+glioblastoma+stem+cells+with+theranostic+Near-Infrared-Labeled+CD133-Specific+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Imaging and selective elimination of glioblastoma stem cells with theranostic Near-Infrared-Labeled CD133-Specific antibodies.</a> Theranostics. 6, 862-874 (2016).</li>
<li>Burley, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+photoimmunotherapy+targeting+EGFR-Shedding+new+light+on+glioblastoma+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Near-infrared photoimmunotherapy targeting EGFR-Shedding new light on glioblastoma treatment.</a> International Journal of Cancer. 142, 2363-2374 (2018).</li>
<li>Nagaya, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+using+a+fiber+optic+diffuser+for+treating+peritoneal+gastric+cancer+dissemination%5BTitle%5D)+AND+%22Gastric+Cancer%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy using a fiber optic diffuser for treating peritoneal gastric cancer dissemination.</a> Gastric Cancer. 22, 463-472 (2019).</li>
<li>Nagaya, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+near+infrared+photoimmunotherapy+using+a+fiber+optic+diffuser+for+peritoneal+dissemination+of+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Science%22%5BJournal%5D)">Endoscopic near infrared photoimmunotherapy using a fiber optic diffuser for peritoneal dissemination of gastric cancer.</a> Cancer Science. 109, 1902-1908 (2018).</li>
<li>Harada, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+photoimmunotherapy+with+galactosyl+serum+albumin+in+a+model+of+diffuse+peritoneal+disseminated+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Near-infrared photoimmunotherapy with galactosyl serum albumin in a model of diffuse peritoneal disseminated ovarian cancer.</a> Oncotarget. 7, 79408-79416 (2016).</li>
<li>Journals, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JNCI+Journal+of+the+National+Cancer+Institute+Way+to+Better+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">JNCI Journal of the National Cancer Institute Way to Better DNA.</a> Annals of Internal Medicine. 37, 1-9 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar rakip finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Bu çalışmada NIR-PIT'in MPM'nin plevral yayılım modeli üzerindeki terapötik etkisini ölçmek için bir yöntem ortaya koyduk. NIR-PIT ile son derece seçici hücre öldürme yapıldı; böylece, normal doku neredeyse hiç zarar görmedi23,24,25. Bu tür seçici hücre öldürme ile NIR-PIT'in yaygın modeller9,26'dagüvenli olduğu gösterilmiştir. Ancak, baz...

Kanser, onlarca yıllık araştırmalara rağmen ölüm oranının önde gelen nedenlerinden biri olmaya devam ediyor. Bunun bir nedeni, radyasyon tedavisi ve kemoterapinin terapötik faydalarını sınırlandırabilecek son derece invaziv teknikler olmasıdır. Daha az invaziv teknikler olan hücresel veya moleküler hedefli tedaviler daha fazla ilgi görüyor. Fotoimmünoterapi, immünoterapi ve fototerapiyi birleştirerek sinerjik olarak terapötik etkiyi artıran bir tedavi yöntemidir. İmmünoterapi, tümör mikroçevresinin immünojenikliğini artırarak ve immünregülatör baskılamayı azaltarak tümör bağışıklığını arttırır ve vücuttaki tümörlerin yok olmasına neden olur. Fototerapi, primer tümörleri ışığa duyarlılık ve ışık ışınlarının bir kombinasyonu ile yok eder ve tümör hücrelerinden salınan tümöre özgü antijenler tümör bağışıklığını arttırır. Tümörler hedef hücrelere özgü ve seçici oldukları için ışığa duyarlılıklayıcılar kullanılarak seçici olarak tedavi edilebilirler. Fototerapinin modalitesi fotodinamik tedavi (PDT), fototermal tedavi (PTT) ve fotokimya temelli tedavileri içerir1.
Yakın kızılötesi fotoimmünoterapi (NIR-PIT), fotokimyasal bazlı tedavi ve immünoterapiyi birleştiren yakın zamanda geliştirilen bir antitümör fototerapi yöntemidir1,2. NIR-PIT, kızılötesine yakın silikon fitalasiyanin boyası IRdye 700DX'in (IR700) monoklonal antikora (mAb) konjugasyonu yoluyla belirli hücre yüzey moleküllerini hedefleyen moleküler olarak hedeflenmiş bir tedavidir. Hedef hücrenin hücre zarı NIR ışığı (690 nm)3ile ışınlama üzerine yok edilir.
Geleneksel ışığa duyarlılıklayıcılar ve antikorlar veya hedeflenen PDT birleştirerek hedefli ışık tedavisi kullanma kavramı otuz yıldan daha eskidir4,5. Önceki çalışmalar konvansiyonel PDT ajanlarını antikorlara eşlenerek hedeflemeye çalışmıştır. Bununla birlikte, bu konjugeler ışığa duyarlılıklarının hidrofobikliği nedeniyle karaciğerde sıkışıp kaldıkları için sınırlı bir başarı vardı6,7. Ayrıca, NIR-PIT mekanizması geleneksel PDT'den tamamen farklıdır. Geleneksel ışığa duyarlılıklayıcılar, ışık enerjisini emen, heyecanlı bir duruma yer alan, zemin durumuna geçiş yapan ve apoptoza neden olan bir enerji dönüşümünden kaynaklanan oksidatif stres üretir. Bununla birlikte, NIR-PIT, bir fotokimyasal reaksiyon yoluyla membranda fotosensilatizerleri toplayarak hücre zarını doğrudan yok ederek hızlı nekroza neden olur8. NIR-PIT birçok yönden geleneksel hedefli PDT'den daha üstündür. Geleneksel ışığa duyarlılıklar, çok sayıda ışığa duyarlılıklaştırıcının tek bir antikor molekülüne bağlanmasını gerektiren ve potansiyel olarak bağlayıcı yakınlığı azaltan düşük yok olma katsayılarına sahiptir. Geleneksel ışığa duyarlılıkların çoğu hidrofobiktir, bu da fotoizatörlerin immünoreaktivitelerinden veya in vivo hedef birikimlerinden ödün vermeden antikorlara bağlanmasını zorlaştırır. Geleneksel ışığa duyarlılıklar tipik olarak görünür aralıktaki ışığı emerek doku penetrasyonunu azaltır.
Akciğer kanseri ve malign plevral mezotelioma (MPM) hücreleri gibi intratorasik tümörleri hedefleyen NIR-PIT üzerinde yapılan çeşitli çalışmalar9, 10,11,12,13,14,15,16,17bildirilmiştir. Bununla birlikte, sadece birkaç rapor NIR-PIT'in plevral yaygın MPM veya akciğer kanseri modellerinde etkinliğini tanımlamıştır9,10,11,12. Deri altı tümör ksinograft modellerinin standart tümör modelleri olduğu düşünülmektedir ve şu anda yeni tedavilerin antitümör etkilerini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır18. Bununla birlikte, deri altı tümör mikroçevrİmİ, uygun bir doku yapısının veya gerçek bir malign fenotip 19 , 20 ,21,22'yidüzgün bir şekilde rekapte eden bir durumun geliştirilmesi için izindeğildir. İdeal olarak, antitümör etkilerin daha hassas bir şekilde değerlendirilmesi için ortotopik hastalık modelleri oluşturulmalıdır.
Burada, NIR-PIT kullanılarak tedavi edilen plevral yaygın akciğer kanserinin fare modelinde bir etkinlik değerlendirme yöntemi gösteriyoruz. Plevral yayılım fare modeli, tümör hücrelerinin torasik boşluğa enjekte ederek üretilir ve luciferaz lüminesansı kullanılarak doğrulanır. Fare, IR700 ve NIR ışınlama ile konjuge edilen intravenöz bir mAb enjeksiyonu ile tedavi edildi. Terapötik etki luciferaz lüminesans kullanılarak değerlendirildi.

<table><tbody><tr><td>0.25w/h% Tripsin-1mmol/l EDTA 4Na Fenol Kırmızı</td><td>Wako</td> ile <td>Çözelti Hücre kültürü için</td><td>209-016941</td></tr><tr><td>1 mL şırınga</td><td>Fare deneyi için</td><td>TERUMO</td><td>SS-01T</td></tr><tr><td>Fareler deneyi için</td><td>30G iğne</td><td>Nipro</td><td>1907613</td></tr><tr><td>BALB/cSlc-nu/nu</td><td>Japonya SLC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Collidal Mavi Boyama Kiti</td><td>Invitrogen</td><td>LC6025</td><td>kullanımı jel protein boyama için</td></tr><tr><td>Coomassie (bradford) Plus protein tahlili</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc (Waltham, MA, ABD)</td> <td>APC konsantrasyonunu ölçmek için</td> <td>PI-23200</td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td> <td>Wako</td><td>043-07216</td> IR700 D-Luciferin (potasyum <td>tuzu) konjugasyonu için kullanın</td></tr> <tr><td></td><td>Cayman Chemical</td><td>14681</td><td>biyolüminesans görüntüleme ve DLIT</td></tr><tr><td>GraphPad Prism7</td> <td>için</td><td>İstatistiksel analiz için</td>GraphPad yazılımı <td></td></tr><tr><td>700 nm floresan görüntüyü analiz etmek için</td><td>Image Studio</td><td>Li-Cor Biosciences</td><td></td></tr><tr><td>IRDye 700DX Ester Kızılötesi Boya</td><td>LI-COR Bioscience (Lincoln, NE, ABD)</td><td>929-70011</td><td></td></tr><tr><td>fareler için izofluran</td><td>Wako</td><td>095-06573</td><td>anestezi</td></tr><tr>için<td>IVIS Spectrum CT</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td> biyolüminesan görüntü ve DLIT</td></tr><tr><td>Living Image</td><td>PerkinElmer</td><td></td>, <td>biyolüminesan görüntü ve DLIT</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>SIGMA-ALDRICH (St. Louis, MO, ABD)</td> <td>IR700</td> NIR Lazer Changchun Yeni Endüstriler Optoelektronik Teknolojisi MRL-III-690R <td>konjugasyonu için IR700</td></tr><tr><td></td><td></td><td>NIR ışınlaması için</td><td></td></tr> kullanım <tr><td>Novex WedgeWell% 4 ila 20, Tris-Glisin, 1.0 mm, Mini Protein Jel, 12 kuyu</td><td></td><td>SDS-PAGE NuPAGE</td><td></td></tr> <tr><td>LDS Numune Tamponu için</td> Invitrogen XP04202BOX kullanımı (x4)<td>SDS-PAGE</td>Optik güç ölçer için <td>Invitrogen</td><td>NP0007</td> kullanımı</tr><tr><td></td><td>Thorlabs (Newton, NJ, ABD)</td><td>NIR lazerin çıkışını ölçmek için</td> <td>PM100</td>&nbsp;</tr><tr><td>PBS(-)</td><td>Wako</td><td>166-23555</td><td></td></tr><tr><td>Pearl Trilogy görüntüleme sistemi</td><td>Li-Cor Biosciences</td><td></td><td>, 700 nm fluorecent görüntüyü yakalamak için</td></tr><tr><td>Penicilin-Streptomisin Çözeltisi (x100)</td><td>Hücre kültürü için</td> <td>Wako</td><td>168-23191</td></tr><tr><td>Lusiferaz transfeksiyonu için</td><td>Puromycin Dihidroklorür</td><td>ThermoFisher</td><td>A1113803</td></tr><tr><td>RediFect Red-Fluc-Puromycin Lentiviral Prticles</td><td>PerkinElmer</td><td>CLS960002</td><td>lusiferaz transfeksiyonu için</td></tr><tr><td>RPMI-1640, L-glutamin ve Fenol Kırmızısı</td><td>Wako</td><td>189-02025</td> ile <td>hücre kültürü için</td></tr><tr><td>Sephadex G25 sütunu (PD-10)&nbsp;</td><td>GE Healthcare (Piscataway, NJ, ABD)</td><td>17-0851-01</td> APC <td>konsantrasyonunu ölçmek için IR700</td></tr><tr><td>UV-1900i</td><td>Shimadzu</td><td></td><td></td></tr> konjugasyonu için kullanım</tbody></table>

plevral yayılım fare modelleri için yakın kızılötesi fotoimmünoterapi

Near Infrared Photoimmunotherapy for Mouse Models of Pleural Dissemination

Fotoimmünoterapinin etkinliği ortotopik fare modeli ile deri altı modeline göre daha doğru değerlendirilebilir. Akciğer kanseri veya malign plevral mezotelioma gibi intratorasik hastalıklar için tedavi yöntemlerinin değerlendirilmesi için plevral yayılım modeli kullanılabilir.
Yakın kızılötesi fotoimmünoterapi (NIR-PIT), nir ışığına maruz kaldıktan sonra tümör hedefleyen antikorların özgüllüğünü bir fotoabsorberin (IR700Dye) neden olduğu toksisite ile birleştiren yakın zamanda geliştirilmiş bir kanser tedavi stratejisidir. NIR-PIT'in etkinliği çeşitli antikorlar kullanılarak bildirilmiştir; ancak, sadece birkaç rapor bu stratejinin terapötik etkisini ortotopik bir modelde göstermiştir. Bu çalışmada NIR-PIT kullanılarak tedavi edilen plevral yayılımlı akciğer kanseri modelinin etkinlik değerlendirmesinin bir örneğini ortaya koyuyoruz.

Anti-podoplanin antikoru NZ-1, NZ-1-IR700 üretmek için IR700 ile eşleştirilmişti. NZ-1 ve IR700'ün bir SDS-PAGE(Şekil8)üzerinde bağlanmasını doğruladık. Luciferaz ekspresyatif H2373 (H2373-luc), malign mezotelioma hücrelerinin (H2373) luciferaz geni10ile transfecting ile hazırlanmıştır.
8-12 haftalık dişi homozigot athymic çıplak fareleri uyuşturduk ve torasik boşluğa 1 ×10 5 H2373-luc hücresi enjekte ettik. Tümör hücrelerinin fa...

Yakın kızılötesi fotoimmünoterapi (NIR-PIT), kanser hücrelerini yok etmek için antikor-fotoabsorber (IR700Dye) konjuge ve NIR ışığı kullanan gelişmekte olan bir kanser terapötik stratejisidir. Burada, nir-PIT'in antitümör etkisini biyolüminesans görüntüleme kullanarak plevral yaygın akciğer kanseri ve malign plevral mezotelioma fare modelinde değerlendirmek için bir yöntem sunuyoruz.

Plevral Yayılım Fare Modelleri için Yakın Kızılötesi Fotoimmünoterapi

The efficacy of photoimmunotherapy can be evaluated more accurately with an orthotopic mouse model than with a subcutaneous one. A pleural dissemination ...

Bu yöntem, NIR-PIT'in torasik tümörler üzerindeki terapötik etkilerini klinik olarak ilgili bir tümör modelinde değerlendirmek için kullanılabilir. Plevral yayılımlı kanser modelini kullanan NIR-PIT işlemlerinin anlaşılması ve gerçekleştirilmesi kolaydır. Bir fare yayma modeli kurmak için, bir durdurucu yapmak için polistiren köpük kullanın ve% 70 etanol ile dezenfekte edin.İğneyi, ucu stoperden beş milimetre uzatılarak stopere takın. 30 kalibrelik bir iğnenin ucunu temiz önps ile veya %70 etanol ile temizlenmiş sert bir nesneye karşı bükün ve bir şırıngayı 100 mikrolitre PBS'deki altı hedef tümör hücresine bir kere 10 ile doldurun. Uyuşturularak, 19 ila 21 gram, sekiz ila 12 haftalık, kadın, homozigot, athimik çıplak farede pedal refleksine tepki eksikliğini onaylayın.Kaburgaların temas etmesini önlemek için iğneyi yukarı ve aşağı hareket ettirerek, iğneyi interkostal boşluktan göğsüne yerleştirin. Uç interkostal boşluktan geçtiğinde, şırınna fareye bastırıldığı şekilde konumlandırın ve hedef hücrelerin tüm hacmini enjekte edin. Enjeksiyondan sonra, hücreleri torasik boşluğa yaymak için fareyi iki ila üç kez yuvarlayın ve fareyi tam iyileşmeye kadar izleyerek kafesine geri döndürün.Hücre enjeksiyonundan 24 saat sonra ve bundan sonraki her gün, anestezi edilmiş tümör hücre enjeksiyonlu farelere mililitre başına 15 miligram D-luciferin başına 200 mikrolitre enjekte edin. 10 dakika sonra, fareleri bir biyolüminesans görüntüleyiciye yerleştirin ve görüntüleyici yazılımında Alım Kontrol Paneli'ni açın. Parlaklık, Fotoğraf ve Yer Paylaşımı'nın seçeneğini belirleyin.Otomatik Pozlama Süresini, Binning'i Küçük'e, F/Stop'u Luminescent için bir ve Fotoğraf için sekize ve C'ye Görünüm Alanını ayarlayın.Biyolüminesansı görüntülemek için Edin'i tıklatın. Görüntü Biçimi'ni Radyan olarak ayarlayın ve Araç Paleti panelinde İlgi Alanı Araçları'ndan daireyi seçin. Yüzey biyolüminesansı yoğunluğunu ölçmek için İlgi Alanlarını Ölç'ü tıklatın ve denemeyle ilgili değerleri seçmek için Ölçümü Yapılandır'ı kullanın.Bu veri tablosunu csv dosyası olarak verin. Ardından, dosyadaki biyolüminesan yoğunluk nicelemesi için toplam akı değerlerini kullanın. Tümör enjekte edilen farelerin kızılötesine yakın fototerapisini yapmadan önce, 690 nanometre dalga boyu lazerin ışık dozunu ölçmek için bir güç ölçer kullanın ve çıkışı santimetrekare başına 100 miliwatt'a ayarlayın.Tedaviden 24 saat önce, tümör enjekte edilen hayvanın kuyruk damarı aracılığıyla 50 ila 200 mikrolitre PBS'de intravenöz olarak 100 mikrogram antikor ışığa duyarlılık konjugesi enjekte edildi. Fototerapi tedavisinin olduğu gün, anestezi konjuge enjekte edilmiş, tümör yüklü fareyi supine konumuna yerleştirin ve hedef olmayan bölgeleri alüminyum folyo ile siper edin. Tüm kalkanlar yerleştirildiğinde, torasik boşluğu yaklaşık 30 saniye boyunca kızılötesine yakın ışıkla ışınlamak için santimetrekare başına 100 joule lazer kullanın.Işınlama tamamlandığında ve fare uyandığında, hayvanı kafesine geri döndürün ve gösterildiği gibi günlük biyolüminesansı ölçün. Bu temsili analizde, anti-podoplanin antikorunun IR700 ile konjugasyonu SDS-PAGE analizi ile doğrulanmıştır. Tümör hücre enjeksiyonundan sonra, hangi farelerin daha fazla çalışma için göğüs boşluğunda yeterli luciferaz aktivitesini ifade ettiğini belirlemek için biyolüminesans görüntüleme ve yaygın lüminesans görüntüleme tomografisi yapılmalıdır.Enjeksiyondan sonraki beşinci günde, anti-podoplanin antikoru IR700 enjekte edilen fareler torasik tümörlerde yüksek IR700 floresan ve luciferaz aktivitesi gösterir ve bu da intravenöz olarak enjekte edilen IR700 konjuge antikorların yaygın plevral tümör bölgelerine ulaştığını gösterir. Özellikle, kızılötesine yakın fotoimmünoterapi ile tedavi edilen plevral yaygın fareler luciferaz aktivitesinde azalma gösterirken, kontrol grubundaki göreceli ışık birimleri yoğunlukta kademeli bir artış göstermektedir. Gerekli NIR ışınlama enerjisi hücre hattına ve antikorlara bağlı olduğundan, durumları önceden tüp bebek olarak kontrol etmeyi unutmayın.

near-infrared-photoimmunotherapy-for-mouse-models-pleural

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Fotodinamik tedavi (PDT), akciğer kanseri tedavisi için non-invaziv ve cerrahi olmayan bir yöntemdir. Işığa duyarlılaştırıcılar seçici olarak tümör dokusunda birikir ve oksijen ve uygun dalga boyundaki ışığın varlığında tümör hücresi ölümüne yol açar. Bu video, ışığa duyarlılaştırıcının fototoksik potansiyelini belirlemek için tümör taşıyan bir farede nanopartiküller içeren ışığa duyarlılaştırıcı kullanılarak in vivo anti-tümör etkinlik analizini açıklamaktadır.

PDT'nin İn Vivo Antitümör Etkinlik Analizi: Tümör Taşıyan Farelerde Bir Fotosensitizörün Fototoksik Potansiyelini Belirleme Tekniği

Bu video, immün yetmezliği olan bir farenin göğüs boşluğuna akciğer kanseri hücresi süspansiyonu enjekte ederek plevral yayılımın bir fare modelini oluşturmak için bir yöntem göstermektedir.

Plevral Dissemine Akciğer Kanserinin Fare Modelinin Oluşturulması

Bu video, lusiferaz eksprese eden tümör hücreleri sergileyen tasarlanmış bir fare modelinde akciğer kanserini tedavi etmek için yakın kızılötesi fotoimmünoterapi tekniğini göstermektedir. Tümör hücreleri üzerindeki spesifik antijenlere bağlanan bir antikor-ışığa duyarlılaştırıcı konjugatı (APC) enjekte edildikten sonra, fare yakın kızılötesi radyasyona maruz kalır, bu da APC'de fotokimyasal değişikliklere neden olur ve bağlı tümör hücrelerinin nekrotik ölümüne yol açar. Tedavinin etkinliği, bir...

Bir Murin Modelinde Akciğer Kanserini Tedavi Etmek için Yakın Kızılötesi Fotoimmünoterapi Tekniği

Bu video, yakın kızılötesi fotoimmünoterapi yoluyla karışık bir 3D hücre kültüründen belirli hücrelerin seçici olarak çıkarılması için bir tekniği göstermektedir. Bu yöntemde, hedeflenen hücreler, bir NIR fotoemici ile konjuge edilmiş bir antikor kullanılarak doğru bir şekilde tanımlanır. Kızılötesi ışıkla müteakip ışınlama, hücre ölümünü indükleyerek hedeflenen hücreleri 3D kültürden etkili bir şekilde ortadan kaldırır.

Karışık 3D Kültürlerde Hedeflenen Hücre Eliminasyonu için Yakın Kızılötesi Fotoimmünoterapi

Belirli hücreleri diğer hücrelere zarar vermeden ortadan kaldırmak, özellikle kurulu dokularda son derece zordur, ancak doku mühendisliği alanında acil bir hücre eliminasyon yöntemine ihtiyaç vardır. Burada, yakın kızılötesi fotoimmünoterapi (NIR-PIT) kullanarak karışık bir 3D hücre kültüründen spesifik hücre eliminasyonu için bir yöntem sunuyoruz.

Bir Yakın Kızılötesi Photoimmunotherapy Tekniği Karışık 3D Kültür seçici hücre Eliminasyon

Pluripotent kök hücre kaynaklı teratomas tedavi stratejileri araştırma kök hücre tedavisi klinik çeviri için önemlidir. Burada, ilk olarak, fare ve daha sonra seçmeli olarak hedef için kök hücre kaynaklı teratomas oluşturmak ve bu tümörler içinde bir küçük-hayvan irradiator kullanarak vivo görmek için bir protokol açıklayın.

Pluripotent kök hücre kaynaklı Teratomas Dış Beam radyasyon bir küçük-hayvan modelinde kullanarak hedeflenen ve seçici tedavisinde

Bu makalede, h2052/484 mezotelyoma hücrelerinin immünazatlı atimik farelerin plevral kaviteye implantasyonu ile insan plevral mezotelyoma bir ortopik fare modeli nin üretimi açıklanmaktadır. İntraplevral tümörlerin gelişiminin uzunlamasına takibi non-invaziv multimodal[18F]-2-floro-2-deoksi-D-glukoz pozitron emisyon tomografisi ve bilgisayarlı tomografi görüntüleme ile değerlendirildi.

Athymic Farelerde İnsan Plevral Mezotelyoma'nın Ortotopik Modelinin PET/BT ile İmplantasyonu ve İzlenmesi

Bu protokol, bu tür bileşiklerin klinik öncesi taramasında kullanılabilecek fotoanahtarlanabilir antikanser peptitlerinin değerlendirilmesi için benimsenen bir dizi deney sunmaktadır. Bu, 2D ve 3D hücre kültürlerinde sitotoksisite değerlendirmesini, ex vivo (model doku) fotoizomerizasyon etkinliğinin değerlendirilmesini ve in vivo etkinliği içerir.

Fotokontrollü Biyolojik Olarak Aktif Bileşiklerin İn Vitro ve İn Vito Değerlendirilmesi - Kanser Fotofarmakolojisi için Potansiyel İlaç Adayları

Akciğer metastazlarından tümör hücresi yayılımını incelemek için, akciğer metastazlarının seçici fotokonversiyonu için cerrahi bir protokol ve ardından üçüncül organlarda redissemine tümör hücrelerinin tanımlanması için bir yöntem sunuyoruz.

Fotokonversiyon Kullanarak Akciğer Metastazlarından Tümör Hücresi Yayılımının İzlenmesi

İntravital mikroskopi bulgularının translasyonu, dokuya sığ derinlik penetrasyonu ile karşı karşıyadır. Burada, intravital mikroskopi bulgularının klinik translasyonunu potansiyel olarak kolaylaştıran, doğrudan uzamsal korelasyon için intravital mikroskopi ve klinik olarak uygulanabilir görüntüleme modalitelerinin (örneğin, BT, MRI) birlikte kaydedilmesini sağlayan bir dorsal pencere odası fare modelini açıklıyoruz.

Translasyonel Kanser Araştırmalarında Kombine İntravital Mikroskopi ve Manyetik Rezonans Görüntüleme için Dorsal Deri Kıvrımlı Pencere Odası Tümör Fare Modeli

Bu protokol, katı tümör modellerinde hedefe yönelik hipertermik tedavi için gerekli teknikleri ve metodolojiyi sunar. Yaklaşım, tümör mikroçevresinde lokalize ısınmayı indüklemek için intratümöral olarak enjekte edilen altın nanoçubuklar tarafından yakın kızılötesi ışığın fototermal dönüşümünden yararlanır.

Yakın Kızılötesi Işığın İntratümöral Altın Nanoçubuklar Tarafından Fototermal Dönüşümü Yoluyla Murin Tümör Modellerinde Hedeflenen Hafif Hiperterminin İndüklenmesi

Keşfedin, plevral yayılım akciğer kanserli fare modellerinde yakın kızılötesi fotoimmünoterapi ile tümör tedavi etkinliğini biyolüminesans görüntüleme kullanarak değerlendirin.

Plevral Yayılım Fare Modelleri için Yakın Kızılötesi Fotoimmünoterapi

Daha fazla video keşfet