Name: Serotip 1 Streptococcus pneumoniae suşunda Mutantların İnşası 519/43 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: Öğrenin Streptococcus pneumoniae serotip 1 suşunda genetik modifikasyon yöntemini. Bu protokol, ply geninde izojenik mutant oluşturarak patogenez ve aşı geliştirme çalışmalarına olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Menenjit Vakfı'na ve MRC'ye bu çalışmaya finansman sağladıkları için teşekkür ederiz.

1. SOE-PCR23 ile mutasyona uğrayan amplikonun üretilmesi ve spektinomisin kasetinin amplifikasyonu
<ol><li>519/43 suşundan kat geninin yan bölgelerinin homoloji kollarının (sırasıyla kat 5' (488 bp) ve ply3' (715 bp) amplifikasyonu için PCR uygulayarak başlayın. plyFw1_NOTI (TTT GCGGCCGCCAGTAAATGACTTTATACTAGCTATG), ply5'R1_BamHI (CGAAATATAGACCAAAGGACGC GGATCC AGAACCAAACTTGACCTTGA), ply3'F1_BamHI (TCAAGGTCAAGTTTGGTTCTCTGGATCC GCGTCCTTTGGTCTATATTTCG) ve plyRv2_NotI (TTTGCGGCCGCCATTTTCTCTACCTCTCTCTCCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTTCTCCTCT) astarlarını kullanın.</li>
	<li>Ply5' için aşağıdaki PCR koşullarını kullanın: 60 sn için 94 °C'de denatür, adım 2: 30 s için 94 °C'de denatür, adım 3: 30 s için 58 °C'de tavlama, adım 4: 30 s için 72 °C'de uzatma, adım 5: adım 2'ye geri dönün ve 35 döngü için tekrarlayın, adım 6: 30 s için 72 °C'de son uzatma.<ol><li>60 s olması gereken adım 4 ve adım 6'daki uzatma süresi hariç, kat3' için aynı PCR koşullarını kullanın.</li>
	</ol></li>
	<li>PCR ürünlerini jel elektroforezi ile analiz edin ve amplikonu jelden çıkarın.</li>
	<li>PCR amplikonlarını, üreticinin talimatlarında (Malzeme Tablosu) açıklanan protokolü izleyerek saflaştırın.</li>
	<li>Her iki homoloji kolunun equimolar miktarlarını SOE-PCR'de şablon olarak kullanın. İki amplikonu primerleri kullanarak birleştirin plyFw1_ NOTI (TTT GCGGCCGCCAGTAAATGACTTTATACTAGCTATGTTATACTTATGTTATG) ve plyRv2_NotI (TTTGCGGCCGCCATTTTCTACCTCTCTCCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTTCTCCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTTCTCCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTTCTCCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTTCCC) iki amplikonu iki amplikonu birleştirin.</li>
	<li>Aşağıdaki SOE-PCR koşullarını kullanın (adım 1: 2 dakika boyunca 94 °C'de denatür, adım 2: 30 sn için 94 °C'de denatür, adım 3: 30 s için 58 °C'de tavlama, Adım 4: 60 s için 68 °C'de uzatma, adım 5: adım 2'ye geri dönün ve 25 döngü için tekrarlayın, adım 6: 90 s için 68 °C'de son uzatma).</li>
	<li>SOE-PCR ürününü jel elektroforezi ile analiz edin. Bir jel ekstraksiyon kiti kullanarak jelden tüketin ve verilen talimatları izleyin.</li>
	<li>Aşağıdaki PCR koşullarını kullanarak spektinomisin kasetini plazmid pR412'den yükseltin: adım 1: 60 s için 94 °C'de denatür, adım 2: 30 s için 94 °C'de denatüre etme, adım 3: 30 s için 55 °C'de tavlama, adım 4: 60 s için 68 °C'de uzatma, adım 5: adım 2'ye geri dönün ve 25 döngü boyunca tekrarlayın, Adım 6: 60 s için 68 ° C'de son uzatma.<ol><li>Astarları BamHI_SP2F2 (GGATCC CTA GAA CTA GTG GAT CCC CC) ve BamHI_SP2R2 (GGATCC AAT TCT GCA GAT TTT AC ATG ATC) kullanın. Plazmid pR412, Dr. Marc PrudHomme'dan (CNRS-Universite Paul Sabatier Toulouse Fransa) satın alındı.</li>
	</ol></li>
	<li>PCR amplikonlarını jel elektroforezi ile analiz edin. Elde edilen PCR amplikonunu yukarıda açıklandığı gibi tüketin ve saflaştırın.</li>
</ol>2. Plazmid pSD1 üretimi ve E. coli Dh5α'nın kimyasal dönüşümü
<ol><li>pGEMT-easy system I üretici talimatlarını (Malzeme Tablosu) izleyerek bir ligasyon gerçekleştirin. Bir mikrosantrifüj tüpünde, 20 μL'lik toplam hacme 5 μL 2x ligasyon tamponu, 1 μL pGEMTeasy, 2 μL ply_SOE ürünü, 1 μL T4 DNA ligaz ve su ekleyin. Gece boyunca 4 ° C'de inkübe edin. Bu, plazmid pSD1 üretir.</li>
	<li>Kimyasal olarak yetkin E. coli Dh5α'yı pSD1 ile dönüştürün. 50 μL kimyasal olarak yetkin E. coli Dh5α'yı buz üzerinde 15 dakika boyunca 3 μL pSD1 ligasyon reaksiyonu ile inkübe ederek başlayın. Daha sonra hücreleri termik şoka maruz bırakarak devam edin (42 ° C, 30 s). Hücreleri 2 dakika boyunca buzun üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Hücreleri buzdan çıkarın ve 350 μL S.O.C ortamı ekleyin. Kültürü 37 °C, 120 rpm'de 2 saat boyunca inkübe edin.</li>
	<li>Luria Bertani Agar (LBA) üzerindeki transformasyon, plakada büyüyen tüm kolonilerin plazmid omurgasına sahip olmasını sağlamak için mavi / beyaz seleksiyon için 0.4 mM IPTG, 0.24 mg / mL X-Gal ve 100 μg / mL ampisilin ile desteklenir. Beyaz koloniler pSD1 içerir.</li>
	<li>Üç beyaz koloni seçin ve 100 μg / mL ampisilin ile desteklenmiş 10 mL LB'de gece boyunca büyüme sağlayın. Kültürleri gece boyunca 37 ° C'de sallayarak inkübe edin.</li>
	<li>Ertesi gün kültürleri 3.082 x g'de santrifüj edin ve plazmid ekstraksiyonu için peleti kullanın.</li>
</ol>3. Plazmid DNA ekstraksiyonu, pSD1 ve spektinomisin geninin kısıtlanması sindirimi ve pSD2'nin montajı
<ol><li>Plazmid DNA'sını, ticari kit (Malzeme Tablosu) ile birlikte verilen talimatları izleyerek çıkarın.</li>
	<li>Hem pSD1 plazmid hem de daha önce güçlendirilmiş ve saflaştırılmış spektinomisin kaseti için bir BamHI kısıtlama sindirimi ayarlayın. Tablo 1'de açıklanan aşağıdaki koşulları ve miktarları kullanın.</li>
	<li>Kısıtlama sindirim reaksiyonlarını ve kontrollerini 3 saat boyunca 37 °C'de inkübe edin.</li>
	<li>Kısıtlama sindirimini elektroforez ile analiz edin, bandı tüketin ve ticari kit (Malzeme Tablosu) ile birlikte verilen talimatları izleyerek saflaştırın.</li>
	<li>Daha sonra, BamHI sindirilmiş pSD1 ve spektinomisin (adım 3.2'den itibaren) kullanarak üretici talimatlarını (Malzeme Tablosu) izleyerek bir ligasyon reaksiyonu hazırlayın. Bir mikrosantrifüj tüpüne, aşağıdaki reaksiyon bileşenlerini ekleyin: 5 μL 2x ligasyon tamponu, 2 μL pSD1, 2 μL spektinomisin kaseti, 1 μL T4 DNA ligaz ve 4 ° C'de gece boyunca inkübe edin. Bu, plazmid pSD2 üretir.</li>
	<li>Plazmid pSD2'yi, adım 2.2'de açıklandığı gibi kimyasal olarak yetkin E. coli Dh5α'ya dönüştürün.</li>
	<li>Plazmid pSD2 taşıyan transformantları, 100 μg / mL spektinomisin ve ampisilin ile desteklenmiş LBA'da büyüme yeteneklerine göre seçin.</li>
	<li>Yukarıda açıklandığı gibi ve üreticinin talimatlarını (μL) izleyerek bir plazmid DNA ekstraksiyonu (pSD2) gerçekleştirin.</li>
</ol>4. S. pneumoniae suşunun transformasyonu 519/43
<ol><li>BHI'da bir gecede S. pneumoniae 519/43 kültürü hazırlayın ve 37 ° C'de,% 5 CO2'de statik olarak büyümesine izin verin.</li>
	<li>Ertesi gün kültürleri 1:50 ve 1:100 olarak 10 mL taze BHI suyunda seyreltin. OD595nm 0.05 ile 0.1 arasında olana kadar kültürleri statik olarak 37 ° C'de inkübe edin (0.1 OD'ye daha yakın DNA'nın optimal kazanımı).</li>
	<li>0.1'lik bir OD'ye ulaşıldığında, 860 μL alın ve bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Aynı mikrosantrifüj tüpünde şunları ekleyin: 100 μL 100 mM NaOH, 10 μL% 20 (w / v) BSA, 10 μL 100 mM CaCl 2,2 μL 50 ng / mL CSP124 ve 500 ng pSD2.</li>
	<li>Reaksiyonu 3 saat boyunca 37 °C'de statik olarak inkübe edin.</li>
	<li>Plaka 330 μL, 3 inkübasyon saati boyunca her saat başı 100 μg / mL spektinomisin ile desteklenen% 5 kan agar plakaları (BA) üzerine.</li>
	<li>Plakaları gece boyunca 37 ° C'de,% 5 CO2'de inkübe edin. Yama spektinomisin'e dirençli koloniler, 100 μg / mL spektinomisin ile desteklenmiş başka bir BA plakasına ve ayrıca 100 μg / mL ampisilin ile desteklenmiş BA plakalarına yerleştirin. Her iki plaka setini de yukarıda belirtilen koşullar altında gece boyunca inkübe edin. Ampisilin plakaları, plazmid omurgasının varlığını test etmek içindir.</li>
	<li>NOTI (TTT GCGGCCGCAGTAAATGACTTTATACTAGCTATG) ve plyFw1_ (TAATTCCTCTAAGTCATAATTTCCG) primerlerini kullanarak spektinomisin kasetinin varlığını PCR SPEC_REV ile onaylayın. Mutasyona uğramış bölgenin dışına bağlanan primerler plySCN1 (CCAATGGAAATCGCTAGGCAAGAGATAA) ve plySCN2 (ATTACTTAGTCCAACCACGGCTGAT) kullanarak PCR ile mutasyonu onaylayın.</li>
	<li>Primerler plySCN1 (CCAATGGAAATCGCTAGGCAAGAGATAA), plySCN2 (ATTACTTAGTCCAACCACGGCTGAT) ve ayrıca spektinomisin kaset sqr1 (CCTGATCCAAACATGTAAGTACC) sqf2 (CGTAGTTATCTTGGAGAGAATA) spec_sqf1 (GGTACTTACATGTTTGGATCAGGCAGG) ve spec_sqr2 TATTCTCTCCAAGATAACTACG içindeki bağlanma bölgelerine sahip primerleri kullanarak genomun doğru konumundaki entegrasyonu onaylayın.</li>
</ol>

<ol><li>Bentley, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+Analysis+of+the+Capsular+Biosynthetic+Locus+from+All+90+Pneumococcal+Serotypes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic Analysis of the Capsular Biosynthetic Locus from All 90 Pneumococcal Serotypes.</a> PLoS Genetics. 2 (3), 31(2006).</li>
<li>Calix, J. J., Nahm, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+pneumococcal+serotype%2C+11E%2C+has+a+variably+inactivated+wcjE+gene%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A new pneumococcal serotype, 11E, has a variably inactivated wcjE gene.</a> The Journal of Infectious Diseases. 202 (1), 29-38 (2010).</li>
<li>Park, I. H., Pritchard, D. G., Cartee, R., Brandao, A., Brandileone, M. C. C., Nahm, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery+of+a+New+Capsular+Serotype+%286C%29+within+Serogroup+6+of+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Discovery of a New Capsular Serotype (6C) within Serogroup 6 of Streptococcus pneumoniae.</a> Journal of Clinical Microbiology. 45 (4), 1225-1233 (2007).</li>
<li>Jin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+Report+of+Putative+Streptococcus+pneumoniae+Serotype+6D+among+Nasopharyngeal+Isolates+from+Fijian+Children%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">First Report of Putative Streptococcus pneumoniae Serotype 6D among Nasopharyngeal Isolates from Fijian Children.</a> The Journal of Infectious Diseases. 200 (9), 1375-1380 (2009).</li>
<li>Oliver, M. B., vander Linden, M. P. G., Küntzel, S. A., Saad, J. S., Nahm, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery+of+Streptococcus+pneumoniae+Serotype+6+Variants+with+Glycosyltransferases+Synthesizing+Two+Differing+Repeating+Units%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Discovery of Streptococcus pneumoniae Serotype 6 Variants with Glycosyltransferases Synthesizing Two Differing Repeating Units.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (36), 25976-25985 (2013).</li>
<li>Calix, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serological+Characterization+of+Two+Capsule+Subtypes+among+Streptococcus+pneumoniae+Serotype+20+Strains%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Serological Characterization of Two Capsule Subtypes among Streptococcus pneumoniae Serotype 20 Strains.</a> Journal of Biological Chemistry. 287 (33), 27885-27894 (2012).</li>
<li>Park, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((and+Serological+Characterization+of+a+New+Pneumococcal+Serotype%2C+6H%2C+and+Generation+of+a+Pneumococcal+Strain+Producing+Three+Different+Capsular+Repeat+Units%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Vaccine+Immunology%22%5BJournal%5D)">and Serological Characterization of a New Pneumococcal Serotype, 6H, and Generation of a Pneumococcal Strain Producing Three Different Capsular Repeat Units.</a> Clinical and Vaccine Immunology. 22 (3), 313-318 (2015).</li>
<li>O'Brien, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+disease+caused+by+Streptococcus+pneumoniae+in+children+younger+than+5+years%3A+global+estimates%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Burden of disease caused by Streptococcus pneumoniae in children younger than 5 years: global estimates.</a> The Lancet. 374 (9693), 893-902 (2009).</li>
<li>Henriques-Normark, B., Tuomanen, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Pneumococcus%3A+Epidemiology%2C+Microbiology%2C+and+Pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">The Pneumococcus: Epidemiology, Microbiology, and Pathogenesis.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 3 (7), 010215(2013).</li>
<li>Leimkugel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Outbreak+of+Serotype+1+Streptococcus+pneumoniae+Meningitis+in+Northern+Ghana+with+Features+That+Are+Characteristic+of+Neisseria+meningitidis+Meningitis+Epidemics%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">An Outbreak of Serotype 1 Streptococcus pneumoniae Meningitis in Northern Ghana with Features That Are Characteristic of Neisseria meningitidis Meningitis Epidemics.</a> The Journal of Infectious Diseases. 192 (2), 192-199 (2005).</li>
<li>Yaro, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiological+and+Molecular+Characteristics+of+a+Highly+Lethal+Pneumococcal+Meningitis+Epidemic+in+Burkina+Faso%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Epidemiological and Molecular Characteristics of a Highly Lethal Pneumococcal Meningitis Epidemic in Burkina Faso.</a> Clinical Infectious Diseases. 43 (6), 693-700 (2006).</li>
<li>Antonio, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+epidemiology+of+pneumococci+obtained+from+Gambian+children+aged+2-29+months+with+invasive+pneumococcal+disease+during+a+trial+of+a+9-valent+pneumococcal+conjugate+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Molecular epidemiology of pneumococci obtained from Gambian children aged 2-29 months with invasive pneumococcal disease during a trial of a 9-valent pneumococcal conjugate vaccine.</a> BMC Infectious Diseases. 8 (1), 81(2008).</li>
<li>Kwambana-Adams, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+outbreak+of+pneumococcal+meningitis+among+older+children+%28%E2%89%A55+years%29+and+adults+after+the+implementation+of+an+infant+vaccination+programme+with+the+13-valent+pneumococcal+conjugate+vaccine+in+Ghana%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">An outbreak of pneumococcal meningitis among older children (≥5 years) and adults after the implementation of an infant vaccination programme with the 13-valent pneumococcal conjugate vaccine in Ghana.</a> BMC Infectious Diseases. 16 (1), 575(2016).</li>
<li>Antonio, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonality+and+outbreak+of+a+predominant+Streptococcus+pneumoniae+serotype+1+clone+from+The+Gambia%3A+Expansion+of+ST217+hypervirulent+clonal+complex+in+West+Africa%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Seasonality and outbreak of a predominant Streptococcus pneumoniae serotype 1 clone from The Gambia: Expansion of ST217 hypervirulent clonal complex in West Africa.</a> BMC Microbiology. 8 (1), 198(2008).</li>
<li>Staples, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+of+an+Australian+serotype+1+Streptococcus+pneumoniae+outbreak%5BTitle%5D)+AND+%22Epidemiology+and+Infection%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization of an Australian serotype 1 Streptococcus pneumoniae outbreak.</a> Epidemiology and Infection. 143 (2), 325-333 (2015).</li>
<li>Gessner, B. D., Mueller, J. E., Yaro, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((African+meningitis+belt+pneumococcal+disease+epidemiology+indicates+a+need+for+an+effective+serotype+1+containing+vaccine%2C+including+for+older+children+and+adults%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">African meningitis belt pneumococcal disease epidemiology indicates a need for an effective serotype 1 containing vaccine, including for older children and adults.</a> BMC Infectious Diseases. 10 (1), 22(2010).</li>
<li>Hill, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasopharyngeal+carriage+of+Streptococcus+pneumoniae+in+Gambian+infants%3A+a+longitudinal+study%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Nasopharyngeal carriage of Streptococcus pneumoniae in Gambian infants: a longitudinal study.</a> Clinical Infectious Diseases. 46 (6), 807-814 (2008).</li>
<li>Ebruke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+changes+in+nasopharyngeal+carriage+of+Streptococcus+pneumoniae+serotype+1+genotypes+in+healthy+Gambians+before+and+after+the+7-valent+pneumococcal+conjugate+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22PeerJ%22%5BJournal%5D)">Temporal changes in nasopharyngeal carriage of Streptococcus pneumoniae serotype 1 genotypes in healthy Gambians before and after the 7-valent pneumococcal conjugate vaccine.</a> PeerJ. 3, 90(2015).</li>
<li>Adegbola, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotype+and+antimicrobial+susceptibility+patterns+of+isolates+of+Streptococcus+pneumoniae+causing+invasive+disease+in+The+Gambia+1996-2003%5BTitle%5D)+AND+%22Tropical+Medicine+and+International+Health%22%5BJournal%5D)">Serotype and antimicrobial susceptibility patterns of isolates of Streptococcus pneumoniae causing invasive disease in The Gambia 1996-2003.</a> Tropical Medicine and International Health. 11 (7), 1128-1135 (2006).</li>
<li>Marks, L. R., Reddinger, R. M., Hakansson, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+Levels+of+Genetic+Recombination+during+Nasopharyngeal+Carriage+and+Biofilm+Formation+in+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">High Levels of Genetic Recombination during Nasopharyngeal Carriage and Biofilm Formation in Streptococcus pneumoniae.</a> mBio. 3 (5), (2012).</li>
<li>Ritchie, N. D., Mitchell, T. J., Evans, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+different+about+serotype+1+pneumococci%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Microbiology%22%5BJournal%5D)">What is different about serotype 1 pneumococci.</a> Future Microbiology. 7 (1), 33-46 (2012).</li>
<li>Harvey, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+variable+region+of+pneumococcal+pathogenicity+island+1+is+responsible+for+unusually+high+virulence+of+a+serotype+1+isolate%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">The variable region of pneumococcal pathogenicity island 1 is responsible for unusually high virulence of a serotype 1 isolate.</a> Infection and Immunity. 84 (3), 822-832 (2016).</li>
<li>Horton, R. M., Cai, Z. L., Ho, S. N., Pease, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+splicing+by+overlap+extension%3A+tailor-made+genes+using+the+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Gene splicing by overlap extension: tailor-made genes using the polymerase chain reaction.</a> BioTechniques. 8 (5), 528-535 (1990).</li>
<li>Alioing, G., Granadel, C., Morrison, D. A., Claverys, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Competence+pheromone%2C+oligopeptide+permease%2C+and+induction+of+competence+in+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Competence pheromone, oligopeptide permease, and induction of competence in Streptococcus pneumoniae.</a> Molecular Microbiology. 21 (3), 471-478 (1996).</li>
<li>Lund, E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLund%2C+E+%22Enumeration+and+description+of+the+strains+belonging+to+the+State+Serum+Institute%2C+Copenhagen+Denmark%22">Enumeration and description of the strains belonging to the State Serum Institute, Copenhagen Denmark</a>. , (1951).</li>
<li>Barany, F., Tomasz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+transformation+of+Streptococcus+pneumoniae+by+heterologous+plasmid+deoxyribonucleic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">Genetic transformation of Streptococcus pneumoniae by heterologous plasmid deoxyribonucleic acid.</a> Journal of Bacteriology. 144 (2), 698-709 (1980).</li>
<li>Terra, V. S., Homer, K. A., Rao, S. G., Andrew, P. W., Yesilkaya, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+novel+%CE%B2-galactosidase+activity+that+contributes+to+glycoprotein+degradation+and+virulence+in+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Characterization of novel β-galactosidase activity that contributes to glycoprotein degradation and virulence in Streptococcus pneumoniae.</a> Infection and Immunity. 78 (1), (2010).</li>
<li>Terra, V. S., Zhi, X., Kahya, H. F., Andrew, P. W., Yesilkaya, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumococcal+6-phospho-%CE%B2-glucosidase+%28BglA3%29+is+involved+in+virulence+and+nutrient+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Pneumococcal 6-phospho-β-glucosidase (BglA3) is involved in virulence and nutrient metabolism.</a> Infection and Immunity. 84 (1), (2015).</li>
<li>Harvey, R. M., Ogunniyi, A. D., Chen, A. Y., Paton, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumolysin+with+Low+Hemolytic+Activity+Confers+an+Early+Growth+Advantage+to+Streptococcus+pneumoniae+in+the+Blood%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Pneumolysin with Low Hemolytic Activity Confers an Early Growth Advantage to Streptococcus pneumoniae in the Blood.</a> Infection and Immunity. 79 (10), 4122(2011).</li>
<li>Terra, V. S., Plumptre, C. D., Wall, E. C., Brown, J. S., Wren, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+of+a+pneumolysin+deficient+mutant+in+Streptococcus+pneumoniae+serotype+1+strain+519%2F43+and+phenotypic+characterisation%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Pathogenesis%22%5BJournal%5D)">Construction of a pneumolysin deficient mutant in Streptococcus pneumoniae serotype 1 strain 519/43 and phenotypic characterisation.</a> Microbial Pathogenesis. 141, 103999(2020).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Streptococcus pneumoniae, özellikle serotip 1, invaziv pnömokok hastalığına ve menenjite neden olan küresel bir tehdit olmaya devam etmektedir. Serotip 1'e karşı koruyucu olması gereken çeşitli aşıların uygulanmasına rağmen, Afrika'da bu serotip hala yüksek morbidite ve mortaliteye yol açan salgınlara neden olabilir13. Bu serotipi genetik olarak manipüle etme yeteneği, klinik alaka düzeyi nedeniyle kritik öneme sahiptir. Bu çalışmada açıklanan yöntem, bu serotip içindeki temsili bir suşun...

Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae, pnömokok) tüm dünyada morbidite ve mortalitenin başlıca nedenlerinden biridir. Yakın zamana kadar, 100'e yakın S. pneumoniae serotipi 1,2,3,4,5,6,7 keşfedilmiştir. Yıllık, invaziv pnömokok hastalığı (IPD), 5 yaşından küçük çocukların yaklaşık 700.000 ölümünü iddiaetmektedir 8. S. pneumoniae, tüm dünyada bakteriyel pnömoni, otitis media, menenjit ve septiseminin başlıca nedenidir9.
Afrika menenjit kuşağında, serotip 1, son derece virülan bir sekans tipi olan sekans tipi (ST) ST217'nin baskın olduğu menenjit salgınlarından sorumludur10,11,12,13,14,15. Menenjit patolojisindeki önemi, Afrika menenjit kuşağı16'daki Neisseria meningitidis'inkine benzetilmiştir. Serotip 1 genellikle IPD'nin ana nedenidir; ancak, taşımacılıkta çok nadiren bulunur. Aslında, Gambiya'da, bu serotip tüm invaziv hastalıkların% 20'sinden sorumludur, ancak sağlıklı taşıyıcıların sadece% 0.5'inde bulunmuştur14,17,18,19. Yetkin pnömokoklarda genetik değişim ve rekombinasyon genellikle invaziv hastalıktan ziyade taşıyıcılıkta meydana gelir20. Ayrıca, serotip 1'in pnömokoklar arasında tarif edilen en kısa taşıma oranlarından birine sahip olduğu gösterilmiştir (sadece 9 gün). Bu nedenle, bu serotipin diğerlerinden çok daha düşük bir rekombinasyon oranına sahip olabileceği öne sürülmüştür21.
Serotip 1 suşlarının düşük taşıma hızının arkasındaki nedeni ve Sahra altı Afrika'daki invaziv hastalıklardaki önemini anlamak için derinlemesine çalışmalar gereklidir.
Burada, belirli bir serotip 1 suşunun genom çapında mutagenezine izin veren bir protokol sunuyoruz, 519/43. Bu suş, yeni DNA'yı kolayca elde edebilir ve genomuna yeniden birleştirebilir. Bu yöntem henüz gerginlikler arasında değildir, ancak 519/43 arka planında yapıldığında çok etkilidir (diğer hedefler mutasyona uğramıştır, el yazmaları hazırlanmaktadır). Sadece 519/43 suşunu kullanarak ve doğal yeterliliğinden yararlanarak ve ekzojen DNA'nın sağlanma şeklini değiştirerek, bu serotip 1 suşunda pnömolizin genini (kat) mutasyona uğratabildik. Bu yöntem, Harvey ve ark.22 tarafından sunulana göre bir gelişmeyi temsil eder, çünkü DNA'yı farklı bir serotipten geçirmeye gerek kalmadan tek adımda yapılır. Bununla birlikte, gerinimler arası değişkenlik nedeniyle, hiçbir yöntem tüm suşlar için standartlaştırılmamıştır. Belirli genleri mutasyona uğratma ve etkilerini gözlemleme yeteneği, serotip 1 S. pneumoniae suşlarının derinlemesine anlaşılmasını sağlayacak ve bu suşların Sahra altı Afrika'daki menenjitteki rolüne cevaplar sağlayacaktır.

<table><tbody><tr><td>AccuPrime Pfx DNA polimeraz</td><td>Invitrogen</td><td>12344024</td><td>Fragmanların amplifikasyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>Ampisilin sodyum tuzu</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9518</td><td>Aşama 1'de bakteri seçimi için kullanılır (pSD1)</td></tr> <tr><td>Kan Agar Tabanı</td><td>Oksoit</td><td>CM0055</td><td>S. pneumoniae dönüştürücüleri kaplamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümin</td><td>sigması</td><td>55470</td><td>S. pneumoniae Dönüşüm</td></tr><tr><td>için kullanılır Beyin Kalp İnfüzyonu</td><td>Oxoid</td><td>CM1135</td><td>, S. pneumoniae hücrelerini büyütmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Kalsiyum Klorür Cacl2</td><td>Sigma</td><td>449709</td><td>S. pneumoniae Dönüşüm</td></tr><tr><td>Yeterliliği uyarıcı peptit 1</td><td>AnaSpec</td><td>AS-63779</td><td>S. pneumoniae Dönüşüm</td></tr><tr><td>Luria Suyu Agar</td><td>Gibco</td><td>22700025</td><td>pSD1 ve pSD2'nin kaplanması ve seçimi için kullanılır</td></tr><tr><td>Luria Suyu Tabanı (Miller'ın formülasyonu)</td> <td>Gibco</td><td>12795027</td><td>pSD1 ve pSD2'nin kaplanması ve seçimi için kullanılır</td></tr><tr><td>Monarch Jel Ekstraksiyon Kiti</td><td>NEB</td><td>T1020S</td><td>DNA jeli Monarch Plasmid'den bantları çıkarmak için kullanılır</td></tr><tr><td> Miniprep Kiti</td><td>NEB</td><td>T1010S</td><td>Hücrelerden plazmidi çıkarmak için kullanılır</td></tr><tr><td>pGEM T-easy</td><td>Promega</td><td>A1360</td><td>intihar plazmidi</td></tr><tr><td>S.O.C.</td> olarak kullanılır.<td>Dönüşümden sonra hücrelerin geri kazanılması için kullanılan</td> <td>invitrojen</td><td>15544034</td></tr><tr><td>Sodyum Hidroksit (NaOH)</td> <td>Sigma</td><td>S0899</td><td>S.pneumoniae Dönüşüm</td></tr><tr><td>Spektinomisin Hidroklorür</td><td>SigmaAldrich</td><td>PHR1426</td><td>Bakteri seçimi için kullanılır</td></tr><tr><td>Alt klonlama verimliliği DH5 ve alfa; Yetkili Hücreler</td><td>pSD1 ve pSD2'nin oluşturulması için kullanılan</td> <td>invitrojen</td><td>18265017</td></tr></tbody></table>

serotip 1 streptococcus pneumoniae suşunda mutantların İnşası 519/43

Constructing Mutants in Serotype 1 Streptococcus pneumoniae strain 519/43

Streptococcus pneumoniae serotip 1, düşük ve orta gelirli ülkelerde, özellikle Sahra altı Afrika'da büyük bir sorun olmaya devam etmektedir. Önemine rağmen, bu serotipteki çalışmalar, onu değiştirmek için genetik araçların eksikliği nedeniyle engellenmiştir. Bu çalışmada, bir serotip 1 klinik izolatı genetik olarak değiştirmek için bir yöntem tarif edilmiştir (suş 519/43). İlginç bir şekilde, bu, Pnömokokların doğal olarak DNA elde etme yeteneğinden yararlanarak elde edildi. Bununla birlikte, çoğu pnömokoktan farklı olarak, lineer DNA kullanımı başarılı değildi; Bu önemli suşu mutasyona uğratmak için bir intihar plazmidinin kullanılması gerekiyordu. Bu metodoloji, hem biyolojisi hem de patojenitesi açısından bu zor serotipin daha derin bir şekilde anlaşılması için araçlar sağlamıştır. Yöntemi doğrulamak için, bilinen başlıca pnömokok toksini olan pnömolizin, iyi bilinen ve takip edilmesi kolay bir fenotipe sahip olduğu için mutasyona uğradı. Mutantın, beklendiği gibi, kırmızı kan hücrelerini lize etme yeteneğini kaybettiğini gösterdik. İlgilenilen serotipte önemli bir geni mutasyona uğratarak, intraperitoneal ve intranazal enfeksiyonlar üzerine fonksiyon kaybı mutantları için diğer serotipler için gözlenenlerden farklı fenotipler gözlemleyebildik. Özetle, bu çalışma 519/43 suşunun (serotip 1) genetik olarak değiştirilebileceğini kanıtlamaktadır.

Burada açıklanan protokol, sol ve sağ homoloji kollarını yükseltmek için PCR kullanarak başlar ve aynı zamanda kat geninin orta bölgesinden 191 bp'yi siler. PCR yapılırken sol homoloji kolunun 3' ucunda ve sağ homoloji kolunun 5' ucunda bir BamHI bölgesi tanıtılır (Şekil 1A). Bunu, sol ve sağ homoloji kollarının bir amplikon halinde kaynaştırıldığı PCR-SOE izler (Şekil 1B). Bu SOE-PCR amplikonu daha sonra plazmid pSD1 üretmek için TA klonlaması kullanıl...

Burada, doğal olarak DNA ve intihar plazmidini elde etme kabiliyeti kullanılarak genetik olarak değiştirilebilen bir S. pneumoniae serotip 1 suşu 519/43'ü tanımlıyoruz. İlke kanıtı olarak, pnömolysin (kat) geninde izojenik bir mutant yapıldı.

Serotip 1 Streptococcus pneumoniae suşunda Mutantların İnşası 519/43

Streptococcus pneumoniae serotype 1 remains a huge problem in low-and-middle income countries, particularly in sub-Saharan Africa. Despite its importance, ...

Bu protokol önemlidir, çünkü daha önce izlenemeyen bir serotipin genetik modifikasyonuna izin verir, bu da serotipin araştırılmasını ve anlaşılmasını mümkün kılar. Bu, aşı geliştirme gibi biyolojik çalışmalar için yollar açar. Prosedürü göstermek, Londra Hijyen ve Tropikal Tıp Okulu'ndan yardımcı doçent Vanessa S.Terra olacak.Başlamak için, pGEM-T Easy System I üretici talimatlarını izleyerek bir ligasyon gerçekleştirerek plazmid pSD1 oluşturun. Reaksiyonu gece boyunca dört santigrat derecede inkübe edin. Ertesi gün, kimyasal olarak yetkin E.coli Dh5-alfa'yı pSD1 ile dönüştürün, hücrelerin 50 mikrolitresini üç mikrolitre pSD1 ligasyon reaksiyonu ile buz üzerinde 15 dakika inkübe edin, ardından hücreleri termik şoka maruz bırakın ve hücreleri iki dakika boyunca buzun üzerine yerleştirin.Hücreleri buzdan çıkarın ve 350 mikrolitre SOC ortamı ekleyin, ardından kültürü 37 santigrat derece ve 120 RPM'de iki saat inkübe edin. Plaka üzerinde büyüyen tüm kolonilerin plazmid omurgasına sahip olmasını sağlamak için 0.4 milimolar IPTG, mavi-beyaz seçim için mililitre X-Gal başına 0.24 miligram ve mililitre ampisilin başına 100 mikrogram ile desteklenmiş Luria-Bertani agar üzerindeki dönüşümü plakalayın. pSD1 içeren üç beyaz koloni seçin ve mililitre ampisilin başına 100 mikrogram ile desteklenmiş 10 mililitre L-B'de gece boyunca büyümeler ayarlayın.Kültürleri gece boyunca 37 santigrat derecede çalkalayarak inkübe edin. Ertesi gün, kültürleri 3.082 G'de santrifüjleyin ve peleti plazmit ekstraksiyonu için kullanın. Plazmit DNA'sını çıkardıktan sonra, hem pSD1 plazmidi hem de spektinomisin kaseti için bir BamH1 kısıtlama sindirimi ayarlayın.Kısıtlama sindirim reaksiyonlarını ve kontrollerini 37 santigrat derecede üç saat boyunca inkübe edin. Kısıtlama bittiğinde, ürünleri elektroforez ile analiz edin, ardından doğru bandı çıkarın ve ticari bir kit kullanarak saflaştırın. Ardından, BamH1 ile sindirilmiş pSD1 ve spektinomisin kullanarak bir ligasyon reaksiyonu çalıştırın.Bu, plazmid pSD2'yi üretecektir. pSD2'yi daha önce açıklandığı gibi kimyasal olarak yetkin E.coli DH5-alfa'ya dönüştürün. Daha sonra, mililitre başına 100 mikrogram spektinomisin ve ampisilin ile desteklenmiş LBA'da büyüme yeteneklerine göre plazmid pSD2 taşıyan transformatörleri seçin ve plazmit DNA'sını çıkarın.BHI'da bir gece boyunca S.pneumoniae 519/43 kültürü hazırlayın ve 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte statik olarak büyümesine izin verin. Ertesi gün, kültürleri 1:50 ve 1:100 oranında 10 mililitre taze BHI suyunda seyreltin. Kültürü, 595 nanometredeki OD 0.05 ile 0.1 arasında olana kadar 37 santigrat derecede statik olarak inkübe edin.Uygun OD'ye ulaşıldığında, 860 mikrolitre kültür alın ve bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. 100 mikrolitre 100 milimolar sodyum hidroksit, 10 mikrolitre% 20 BSA, 10 mikrolitre 100 milimolar kalsiyum klorür, mililitre CSP1 başına iki mikrolitre 50 nanogram ve 500 nanogram pSD2 ekleyin. Reaksiyonu statik olarak 37 santigrat derecede üç saat inkübe edin.Daha sonra, üç saatlik bir inkübasyon süresi boyunca her saat mililitre başına 100 mikrogram spektinomisin ile desteklenmiş% 5 kan agar plakalarına 330 mikrolitre plaka. Ardından, plakaları gece boyunca 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte inkübe edin. Spektinomisine dirençli kolonileri, mililitre başına 100 mikrogram spektinomisin ile takviye edilmiş başka bir kan agar plakasına ve plazmit omurgasının varlığını test eden mililitre ampisilin başına 100 mikrogram takviye edilmiş kan agar plakalarına yamalayın.Her iki plaka setini de gece boyunca inkübe edin. pSD2'nin doğru montajı, kısıtlama sindirimi ile doğrulandı. pSD2 daha sonra 519.43 vahşi tip hücreyi dönüştürmek için kullanıldı.Bir gece inkübasyondan sonra spektinomisin üzerinde büyüyen koloniler pozitif dönüştürücüler olarak kabul edildi. Pnömolizin mutasyonunun fenotipik doğrulaması, D39, 519/43 vahşi tip ve mutant 519/43 delta kat için hemolitik aktivite değerlendirilerek gerçekleştirildi. Bu, kırmızı kan hücrelerinin hemolizi ile karşılaştırıldı% 0.5 saponin,% 100 olarak kabul edilir. Mutant, kırmızı kan hücrelerini parçalama yeteneğini kaybetti.Tüm pozitif koloniler, yerleştirmenin yerini değerlendirmek için dizileme ile daha da doğrulandı. Homoloji bölgesi dışında bağlanma yerleri olan primerler kullanıldı. Dönüşüm reaksiyonunu gerçekleştirirken, reaktifleri doğru sırayla eklemek önemlidir.

constructing-mutants-serotype-1-streptococcus-pneumoniae-strain

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Sistematik, büyük ölçekli sentetik gen (bir gen ya da gen-epistasis) etkileşim ekranlar genetik ve fazlalık yolu çapraz konuşma keşfetmek için kullanılabilir. Burada, yüksek-throughput kantitatif sentetik genetik dizi tarama teknolojisi tarif eSGA biz epistatik ilişkileri durulaştırmada ve genetik etkileşim ağları keşfetmek için geliştirilen...

Bakteriyel Fonksiyonel Ağlar ve tanımında Haritalama<em&gt; Escherichia Coli</em&gt; Sentetik Genetik Diziler kullanarak

Kaynak: Bennett, J. A. ve diğerleri. Streptomyces Gelişimsel Mutantlarının Görsel ve Mikroskobik Değerlendirmesi. J. Vis. Uzm. (2018)Bu video, vahşi tip ve mutant Streptomyces coelicolor arasındaki fenotipik farklılıkları incelemek için faz kontrast mikroskobunun kullanımını göstermektedir. Spor oluşumundaki gelişimsel kusurları tespit etmek için hava filamentlerinin hazırlanması ve görüntülenmesiyle ilgili adımları özetlemektedir.

Streptomyces'te Gelişimsel Mutantların Değerlendirilmesi için Faz Kontrast Mikroskobu

Streptococcus pneumoniae ciddi toplum kökenli pnömoni ve dünya çapında 2 milyondan fazla kişinin ölümünden sorumludur neden lider patojen olduğunu. Spor ya da virülans karıştığı bakteriyel faktörlerin etkisi biyolüminesens bakterileri kullanarak akut fare pnömoni veya bakteriyemi modelinde gerçek zamanlı olarak izlenebilir.

Biyoluminesen Bakteriler Kullanılarak Gerçek Zamanda Bir Akut Fare Pnömoni Modelinde Pnömokok virulans faktörlerinin etkisi aşağıdaki

Siyanobakterilere çoklu genomik değişikliklerin sokulması, endüstriyel ve temel araştırma amaçları için suşların geliştirilmesinde önemli bir araçtır. Model siyanobakteri türü Synechocystis sp. PCC6803'da işaretlenmemiş mutantlar ve Synechococcus sp. PCC7002'da işaretli mutantlar üretmek için bir sistem tarif ediyoruz.

Model siyanobakteri Türlerinde İşaretli ve belirtisiz Mutants Üretimi

Streptococcus mutans çoğunlukla gen kesintiye üretimi için facile, hızlı ve nispeten ucuz bir yöntem tarif suşları; Bu teknik gen kesintiye suşların çeşitli tür üretimi için adapte olabilir.

Nesil bir gen kesintiye Streptococcus mutans çoğunlukla zorlanma olmadan Gen Klonlama

Pseudomonas aeruginosa enfeksiyon savunmasız konaklarda önemli morbidite neden olur. Nonredundant transposon ekleme mutant Kütüphane P. aeruginosa baskı PA14 PA14NR grubu olarak belirlenmiş, analiz çok sayıda süreçlerde gen işlevlerinin kolaylaştırır. Burada sunulan yüksek kaliteli PA14NR ayarla mutant kitaplığın kopyalarını oluşturmak üzere bir protokoldür.

Sipariş edilmiş, Pseudomonas aeruginosa baskı PA14 Transposon ekleme mutantlar Nonredundant Kütüphane çoğaltılması

Burada açıklanan Streptococcus mutansbir gen ürün saflaştırma için basit bir yöntemdir. Bu teknik proteinlerin saflaştırılmasında, özellikle membran proteinlerinde ve yüksek moleküler kütle proteinlerinde avantajlı olabilir ve diğer çeşitli bakteri türleri ile birlikte kullanılabilir.

Streptococcus mutans'larda Yüksek Moleküler Kütle Proteininin Saflaştırılması

Genetik kod genişlemesi, tanımlanmış bir bölgede taşıyıcı protein üzerinde biyortgonal fonksiyonel bir grup taşıyan doğal olmayan bir amino asitin getirilmesi için uygulanır. Biorthogonal fonksiyon daha homojen bir glikokonjugate aşısı sağlamak için bir karbonhidrat antijen site seçici kaplin için kullanılır.

Homojen Glikokonkonjuggate Kombine Doğal Olmayan Amino Asit Birleşme ve Tıklama-Kimya Aşı Amaçlı Tarafından Üretilen

Küçük bir kodlamayan RNA micC'nin delesyon mutantını oluşturmak için λ-Kırmızı aracılı bir rekombinasyon sistemi kullanıldı.

Kodlamayan küçük RNA MicC, salmonella enteritidisteki dış zar proteinlerinde virülansa katkıda bulunur

Burada, Aeromonas'ın boş mutantlarının spesifik glikoziltransferazlarda veya glikoziltransferazlar içeren bölgelerde yapımını, motilitesi testlerini ve flagella saflaştırmasını, kodlanmış enzimlerinin bir glikanın biyosentezindeki katılımını ve işlevini ve bu glikanın bakteriyel patogenezdeki rolünü tanımlamaktayız.

Bakteriyel Glikoziltransferazların Bakteriyel Motilitedeki Rolünü Aydınlatmak için Boş Mutantların Üretilmesi

Bu yazıda, viral enfeksiyon sırasında pnömokokların asemptomatik bir kolonizatörden hastalığa neden olan bir patojene geçişi için yeni bir fare modeli açıklanmaktadır. Bu model, hastalık progresyonunun farklı aşamalarında ve çeşitli konakçılarda polimikrobiyal ve konakçı-patojen etkileşimlerini incelemek için kolayca uyarlanabilir.

Streptococcus pneumoniae'nin Viral Ko-Enfeksiyon Üzerine Kolonizatörden Patojene Geçişi İçin Bir Fare Modeli, Yaşın Şiddetlendirdiği Hastalıkları Özetler

Öğrenin Streptococcus pneumoniae serotip 1 suşunda genetik modifikasyon yöntemini. Bu protokol, ply geninde izojenik mutant oluşturarak patogenez ve aşı geliştirme çalışmalarına olanak tanır.

Serotip 1 Streptococcus pneumoniae suşunda Mutantların İnşası 519/43

Daha fazla video keşfet