Name: Farelerde Konjonktival Kommenal İzolasyon ve Tanımlama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Keşfedin farelerde konjonktival kommensal bakteri izolasyonu ve MALDI-TOF ile tanımlama yöntemini. Bu protokol yaşayan mikroorganizmaları belirleyerek göz mikrobiyomunu ve hastalık ilişkilerini anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

P30 DK034854'ten sağlanan finansman, Massachusetts Host-Microbiome Center'daki VY, LB ve çalışmaları ve NIH/NEI R01 EY022054'ten gelen fon MG'yi destekledi.

Farelerle ilgili tüm prosedürler Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi yönergelerine uyar. Mikroorganizmalar ve potansiyel olarak kontamine olmuş malzemelerle çalışırken laboratuvar güvenliği yönergelerini (Kurumsal Çevre Sağlığı ve Güvenliği departmanınız tarafından yönlendirildiği şekilde) izleyin. Biyolojik tehlikeyle kirlenmiş olabilecek malzemelerin bertaraf edilmeden önce uygun atık kaplarını ve dekontaminasyon prosedürlerini kullanın.
1. Göz çubuğu hazırlama, çalışma alanı kurulumu, fare gözü svabbing ve örnek zenginleştirme
<ol><li>Steril göz sürüntüleri hazırlayın NOT: Steril göz çubukları, lif ince pamuklu bir çubuk tabakası ile ince kaplanmış ahşap kürdanlardır ve evde yapılır.<ol>
<li>Sürünecek fare sayısı için uygun miktarda pamuklu vuruş ve kürdan alın.</li>
		<li>Başparmak ve işaret parmağıyla yarım santimetre uzunluğunda pamuklu bir parçayı kıstırın. Düz bir tek gözenekli tabaka oluşturmak için başparmak ve işaret parmağı ile kenarları çekerek vuruşu alaya almak, vuruş parçalanmadan hemen önce durmak (gerilmiş vuruş boyunca dağılmış küçük pamuk parçaları kabul edilebilir).</li>
		<li>Kıvrılırken kürdan ucundaki gerilmiş parçayı hafifçe tutarak vuruşu kürdanın keskin uçlarından birinin etrafında döndürün, bkz. "Tamamlanmış" göz çubuğu, ucun üzerine gerilmiş, ucundan yaklaşık yarım ila bir santimetre uzağa uzanan çok ince bir pamuk tabakasına sahip olacaktır.</li>
		<li>Küçük beher içine "tamamlanmış" sürüntüler yerleştirin, tarafı aşağı doğru sürün ve örtün. otoklav.</li>
	</ol></li>
	<li>Çalışma alanını ayarlama
	<ol>
<li>Steril 50 mL steril santrifüj tüpünde 2 mL ketamin (100 mg/mL), 400 μL ksilazin (100 mg/ml) ve 27,6 mL steril salin (dH2O'da %0,9 NaCl) içeren anestezi hazırlayın. Hemen kullanım için sterilize ve aliquot anestezisini filtreleyin (1 ay boyunca 4 °C'de saklanabilir; kullanmadan önce her zaman oda sıcaklığına eşit olmasına izin verin).</li>
		<li>Kirlenmeyi en aza indirmek için çalışma alanını dezenfektan ile temizleyin ve temizleyin.</li>
		<li>Aliquot 0.5 mL steril Beyin Kalbi İnfüzyon ortamı (BHI) etiketli 1.5 mL steril mikrosantrifüj tüpler (fare ve kontrol başına 1 tüp); mikrosantrifüj rafında düzenleyin. Rafı buza koy.</li>
		<li>İş akışını aşağıdaki gibi ayarlayın (soldan sağa): fare uyuşturma istasyonu (deneysel fareler içeren kafes, boş steril kafes, oda sıcaklığı anestezisi, 25 G iğne ve 1 mL şırınga), göz temizleme istasyonu (buz üzerinde aliquoted BHI, sterilize göz çubukları, temiz kağıt havlular, % 70 izopropanol spreyi) ve kaplama istasyonu (oda sıcaklığı kan agar plakaları, 10 μL boru , 10 μL steril tek kullanımlık uçlar, biyolojik tehlike atık konteyneri).</li>
	</ol></li>
	<li>Göz küreme
	<ol>
<li>Her yetişkin fareye sırasıyla 1 g fare ağırlığı ketamin ve ksilazin dozajı başına 10 μL anestezi uygulayın ve otoklavlı bir kafese yerleştirin. Arka ayak pedlerini sıkarak anesteziyi test edin; hiçbir hareket uygun anesteziyi gösterir.</li>
		<li>Bir elinizin sadece uyuşturulmış fareleri idare etmesi için, diğer elinin ise sadece göz bezini ve kültürü idare etmesi için atayın. Sürünme için, tamamen uyuşturuldulanmış fareyi kafesten çıkarın; sol gözü açıktayken kendi tarafına yerleştirilmiş temiz çalışma yüzeyinin üzerine yerleştirin. Eldivenli ellere izopropanol püskürtün, temiz kağıt havlu ile kurulayın.</li>
		<li>Uncap, özel medya işleme ipi ile BHI mikro santrifüj tüpünü özellikle etiketledi. Tüpü buz üzerindeki mikro santrifüj rafına geri yerleştirin.  Göz küreğinin pamuk kaplı ucunu BHI'ye batırın, fazla sıvıyı çıkarmak için ucu iç tüpe 2 kez döndürerek göz bezini tüpten çekin.</li>
		<li>Fare taşıma eliyle, fareyi boynun scruff'ından hafifçe tutun. Diğer taraftan, göz çubuğu ucunu sol gözün medial konjonktival bölgesine yerleştirin, bkz. Göz küresini hafifçe bastırın ve bezi bir pencere yıkama hareketiyle (Şekil 2B) ileri geri, alt göz kapağı ve göz arasında 10 kez hareket ettirin. Sürekli basıncı koruyun.</li>
		<li>Kürke dokunmadan, çubuk ucunu, yerleştirildiği yere dik olarak hafifçe çıkarın ve çubuk pamuk tarafını doğrudan BHI ortamı içeren etiketli bir mikro santrifüj tüpüne yerleştirin. Sürünmüş göze yağlayıcı bir göz damlası uygulayın.</li>
		<li>Fareyi kafese geri götür.</li>
		<li>Bez buz üzerinde 10 ila 15 dakika bekletin ve ucu 10 dönüş için medyada karıştırarak sterilize eldivenli elle göz bezini çıkarın. 5 dönüş için mikro santrifüj tüpünün iç duvarına uç döndürerek çubuğu çekin. Bezi biyolojik tehlike kabına atın.</li>
		<li>Her fare ve kontrol örnekleri (cilt veya kürk çubuğu) için 1.3.2 ile 1.3.7 adımlarını yineleyin. Eldivenleri her çubuk arasında uygun şekilde sterilize edin.</li>
	</ol></li>
	<li>zenginleşme
	<ol>
<li>Tüpü statik olarak 37 °C'de 1 saat inkübe ederek numuneyi zenginleştirir</li>
		<li>Kuluçka sırasında, bir oda sıcaklığındaki Trypticase Soya'yı fare başına% 5 koyun kanı agar plakası (TSA plakası) ile etiketlayın ve ikiye bölün.</li>
		<li>Göz bezi kültürü inkübasyonundan sonra, zenginleştirilmiş örnekleri inkübatörden çıkarın ve buza yerleştirin.</li>
		<li>Şekil 3A'dakişemaya göre karıştırmak ve plakalamak için kısaca girdap örnekleri. Numunenin Aliquot 10 μL'si TSA plakasına ve bir şerit oluşturmak için plakayı eğin, 2 kez tekrarlayın.</li>
		<li>Plakanın bölme çizgisinin diğer tarafında, agar üzerinde nokta 10 μL örnek, 9 kez tekrarlayın.</li>
		<li>37 °C'deki plakaları 18 saat, 2 gün ve 4 gün boyunca kuluçkaya bırakın (agar plakalarının kurumasını önleyen temiz bir odada). Şeritlerdeki kolonileri sayın, morfolojiye dikkat edin ve morfolojik olarak benzer izolatlar için sürüntü başına koloni oluşturan birimleri (CFO'lar) hesaplayın. Şeritler halinde yakalanmayan benzersiz organizmalar için noktalara bakın.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Ana plaka, karakterizasyon ve oküler mikropların tanımlanması
<ol><li>
Ana plaka
	<ol>
<li>Bir TSA plakasının arkasına ızgaralar çizin (Şekil 3B). Her fare gözü çubuk plakasından steril kürdanlı bir koloni seçin ve ana plaka karesini (ızgaralar), etiket ızgarasını koloni numarası ve fare bilgileriyle çizin. Morfolojik olarak farklı her koloni için üç farklı koloniyi seçin ve plakala.</li>
		<li>Plakayı 37 °C'de gece boyunca kuluçkaya yatırın. Kuluçkaya 96 saat devam edin, yeni izolelerin görünümünü günlük olarak kontrol edin. NOT: Commensal popülasyon fare yaşı, beslenme, hastalık durumu ve kafes uygulamalarına göre değişecektir. İzole karakterizasyonu laboratuvarımızda bulunan baskın aerobik ve öğretim üyesi anaerobik bakterilere dayanmaktadır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Karakterizasyonu
	<ol>
<li>Mannitol Salt Agar (MSA) ve MacConkey (MAC) plakalarında13 tabak mikrop kopyalayın, 37 °C'de bir gecede kuluçkaya yatırın. Msa'da haleli mumsu kolonilerin veya sarı kolonilerin her bir izolesi ve varlığı için büyümeye dikkat edin.</li>
		<li>Gram pozitif koksuzlar için katalaz testi ile test13,14. Temiz bir cam kaydırağın üzerine% 3 hidrojen peroksit damlası yerleştirin. Steril bir kürdan kullanarak, ilgili mikrobu göz bezi plakasından seçin. Hiçbir kabarcık oluşumu Streptococcus spp.gösterir, hafif kabarcık oluşumu Corynebacterium spp. ve belki de Aerococcus spp. ve hızlı kabarcık oluşumu Staphylococcus spp gösterir gösterir.
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Tanımlama: MALDI-TOF MS analizi NOT: Bakteri kimlikleri MALDI-TOF ve Yazılım Veritabanı kullanılarak gerçekleştirilir. Bu sistem, tanımlama için bilinen bakteri spektrası ile karşılaştırılan spektra profilleri geliştirmek için uçuş kütle spektrometresinin (MALDI-TOF MS) matris destekli lazer desorpsiyon iyonizasyon süresini kullanmaktadır. E.coli, ATCC 8739, sistem kalibrasyonu için kullanılır.<ol>
<li>Plaka bakteriyel, %5 koyun kanı içeren TSA plakalarına izole eder ve 37 °C'de % 5 karbondioksit ile bir gecede kuluçkaya yatırılır.</li>
		<li>1 μL döngü kullanarak, MALDI-TOF hedef slaydına ince bir saf bakteri tabakası uygulayın; 1 μL MALDI-TOF MS CHCA matris çözeltisi (alfa-cyano-4-hidroksinnamik asit) kaplanır ve kaydırağı MALDI-TOF cihazına yüklemeden önce tamamen kurumasına izin verilir.</li>
		<li>Her yalıtma yinelenen olarak görülür.</li>
		<li>Yüksek bir ayrımcılık değerine işaret eden %80'den büyük olasılık puanları içeren raporlar güvenilir sonuçlar olarak kabul edilir ve bakteriyel tanımlama kabul edilir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Arpaia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolites+produced+by+commensal+bacteria+promote+peripheral+regulatory+T+cell+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Metabolites produced by commensal bacteria promote peripheral regulatory T cell generation.</a> Nature. 504 (7480), 451-455 (2013).</li>
<li>Hooper, L. V., Littman, D. R., Macpherson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+the+microbiota+and+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Interactions between the microbiota and the immune system.</a> Science. 336 (6086), 1268-1273 (2010).</li>
<li>Nagpal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human-origin+probiotic+cocktail+increases+short+chain+fatty+acid+production+via+modulation+of+mice+and+human+gut+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Human-origin probiotic cocktail increases short chain fatty acid production via modulation of mice and human gut microbiome.</a> Scientific Reports. 8 (1), 12649(2018).</li>
<li>Graham, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+pathogen+or+commensal%3A+a+PCR+based+study+of+surface+bacterial+flora+in+normal+and+dry+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Ocular pathogen or commensal: a PCR based study of surface bacterial flora in normal and dry eyes.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (12), 5616-5623 (2007).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sj%C3%B6gren-Like+Lacrimal+Keratoconjunctivitis+in+Germ-Free+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Sjögren-Like Lacrimal Keratoconjunctivitis in Germ-Free Mice.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (2), 565-584 (2018).</li>
<li>Ham, B., Hwang, H. B., Jung, S. H., Chang, S., Kang, K. D., Kwon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+and+diversity+of+ocular+microbial+communities+in+diabetic+patients+compared+with+healthy+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Distribution and diversity of ocular microbial communities in diabetic patients compared with healthy subjects.</a> Current Eye Research. 43 (3), 314-324 (2018).</li>
<li>Doan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paucibacterial+microbiome+and+resident+DNA+virome+of+the+healthy+conjunctiva%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Paucibacterial microbiome and resident DNA virome of the healthy conjunctiva.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 57 (13), 5116-5126 (2016).</li>
<li>Kugadas, A., Gadjeva, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+microbiome+on+ocular+health%5BTitle%5D)+AND+%22Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">Impact of microbiome on ocular health.</a> Ocular Surface. 14 (3), 342-349 (2016).</li>
<li>Dong, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diversity+of+bacteria+at+healthy+human+conjunctiva%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Diversity of bacteria at healthy human conjunctiva.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 53 (8), 5408-5413 (2011).</li>
<li>Zegans, M. E., Van Gelder, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+in+understanding+the+ocular+surface+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Opthalmology%22%5BJournal%5D)">Considerations in understanding the ocular surface microbiome.</a> American Journal of Opthalmology. 158 (3), 420-422 (2014).</li>
<li>Fleiszig, S. M., Efron, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+flora+in+eyes+of+current+and+former+contact+lens+wearers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Microbial flora in eyes of current and former contact lens wearers.</a> Journal of Clinical Microbiology. 30 (5), 1156-1161 (1992).</li>
<li>Lu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+L-Plastin+Controls+Ocular+Paucibacteriality+and+Susceptibility+to+Keratitis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil L-Plastin Controls Ocular Paucibacteriality and Susceptibility to Keratitis.</a> Frontiers in Immunology. 11, 547(2020).</li>
<li>Johnson, T. R., Case, C. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJohnson%2C+TR+%22Laboratory+Experiments+in+Microbiology%22">Laboratory Experiments in Microbiology</a>. , Pearson Benjamin Cummings Pubs. San Francisco, CA. (2010).</li>
<li>Reiner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catalase+Test+Protocol%5BTitle%5D)+AND+%22American+Society+for+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Catalase Test Protocol.</a> American Society for Microbiology. , (2010).</li>
<li>UK SMI. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Standards+for+Microbiology+Investigation.+UK+SMI%22">Standards for Microbiology Investigation. UK SMI</a>. , Gov.UK. (2014).</li>
<li>Sharp, S. E., Searcy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+mannitol+salt+agar+and+blood+agar+plates+for+identification+and+susceptibility+testing+of+Staphylococcus+aureus+in+specimens+from+cystic+fibrosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Comparison of mannitol salt agar and blood agar plates for identification and susceptibility testing of Staphylococcus aureus in specimens from cystic fibrosis patients.</a> Journal of Clinical Microbiology. 44 (12), 4545-4546 (2006).</li>
<li>Siegman-Igra, Y., Azmon, Y., Schwartz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milleri+group+streptococcus--a+stepchild+in+the+viridans+family%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Clinical+Microbiology+and+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Milleri group streptococcus--a stepchild in the viridans family.</a> European Journal of Clinical Microbiology and Infectious Diseases. 31 (9), 2453-2459 (2012).</li>
<li>Mohan, B., Zaman, K., Anand, N., Taneja, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aerococcus+Viridans%3A+A+Rare+Pathogen+Causing+Urinary+Tract+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+and+Diagnostic+Research%22%5BJournal%5D)">Aerococcus Viridans: A Rare Pathogen Causing Urinary Tract Infection.</a> Journal of Clinical and Diagnostic Research. 11 (1), 1-3 (2017).</li>
<li>Senneby, E., Nilson, B., Petersson, A. C., Rasmussen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-assisted+laser+desorption+ionization-time+of+flight+mass+spectrometry+is+a+sensitive+and+specific+method+for+identification+of+aerococci%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry is a sensitive and specific method for identification of aerococci.</a> Journal of Clinical Microbiology. 51 (4), 1303-1304 (2013).</li>
<li>Wan, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-1R+and+MyD88+contribute+to+the+absence+of+a+bacterial+microbiome+on+the+healthy+murine+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">IL-1R and MyD88 contribute to the absence of a bacterial microbiome on the healthy murine cornea.</a> Frontiers in Microbiology. 9, 1117(2018).</li>
<li>Ozkan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+Stability+and+Composition+of+the+Ocular+Surface+Microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Temporal Stability and Composition of the Ocular Surface Microbiome.</a> Scientific Reports. 7 (1), 9880(2017).</li>
<li>Oliver, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+viable+but+non-culturable+state+in+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The viable but non-culturable state in bacteria.</a> Journal of Microbiology. 43 (1), 93-100 (2005).</li>
<li>Epstein, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+phenomenon+of+microbial+uncultivability%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The phenomenon of microbial uncultivability.</a> Current Opinion in Microbiology. 16 (5), 636-642 (2013).</li>
<li>Whelan, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture-enriched+metagenomic+sequencing+enables+in-depth+profiling+of+the+cystic+fibrosis+lung+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Culture-enriched metagenomic sequencing enables in-depth profiling of the cystic fibrosis lung microbiota.</a> Nature Microbiology. 5 (2), 379-390 (2020).</li>
<li>Raymond, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture-enriched+human+gut+microbiomes+reveal+core+and+accessory+resistance+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Culture-enriched human gut microbiomes reveal core and accessory resistance genes.</a> Microbiome. 7, 56(2019).</li>
<li>Peto, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+culture+enrichment+and+sequencing+of+feces+to+enhance+detection+of+antimicrobial+resistance+genes+in+third-generation+cephalosporin+resistant+Enterobacteriaceae%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Selective culture enrichment and sequencing of feces to enhance detection of antimicrobial resistance genes in third-generation cephalosporin resistant Enterobacteriaceae.</a> PLoS One. 14 (11), 0222831(2019).</li>
<li>Lauer, B. A., Masters, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxic+effect+of+calcium+alginate+swabs+on+Neisseria+gonorrhoeae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Toxic effect of calcium alginate swabs on Neisseria gonorrhoeae.</a> Journal of Clinical Microbiology. 26 (1), 54-56 (1988).</li>
<li>Dubois, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performances+of+the+Vitek+MS+matrix-assisted+laser+desorption+ionization-time+of+flight+mass+spectrometry+system+for+rapid+identification+of+bacteria+in+routine+clinical+microbiology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Performances of the Vitek MS matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry system for rapid identification of bacteria in routine clinical microbiology.</a> Journal of Clinical Microbiology. 50 (8), 2568-2576 (2012).</li>
<li>Kawakita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((double-blind+study+of+the+safety+and+Efficacy+of+1%25D-3-Hydroxybutyrate+eye+drops+for+Dry+Eye+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">double-blind study of the safety and Efficacy of 1%D-3-Hydroxybutyrate eye drops for Dry Eye Disease.</a> Scientific Reports. 6, 20855(2016).</li>
<li>Lee, H. S., Hattori, T., Stevenson, W., Cahuhan, S. K., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+toll-like+receptor+4+contributes+to+corneal+inflammation+in+experimental+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Expression of toll-like receptor 4 contributes to corneal inflammation in experimental dry eye disease.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 53 (9), 5632-5640 (2012).</li>
<li>Simmons, K. T., Xiao, Y., Pflugfelder, S. C., de Paiva, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+response+to+lipopolysaccharide+on+the+ocular+surface+in+a+murine+dry+eye+model%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Inflammatory response to lipopolysaccharide on the ocular surface in a murine dry eye model.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 57 (6), 2444-2450 (2016).</li>
<li>Miller, D., Ioviano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+microbial+flora+on+the+ocular+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">The role of microbial flora on the ocular surface.</a> Current Opinion in Allergy and Immunology. 9 (5), 466-470 (2009).</li>
<li>Nayyar, A., Gindina, S., Barron, A., Hu, Y., Danias, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+epigenetic+changes+caused+by+commensal+microbiota+contribute+to+development+of+ocular+disease%3F+A+review+of+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Genomics%22%5BJournal%5D)">Do epigenetic changes caused by commensal microbiota contribute to development of ocular disease? A review of evidence.</a> Human Genomics. 14 (1), 11(2020).</li>
<li>Stevenson, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+disease%3A+an+immune-mediated+ocular+surface+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Dry eye disease: an immune-mediated ocular surface disorder.</a> Archives of Ophthalmology. 130 (1), 90-100 (2012).</li>
</ol>

Açıklayamak için çıkar çatışması yok.

Oküler yüzeyin paucibacterial durumu nedeniyle, birçok laboratuvar oküler commensals7,20izole etmektezorlandı,bu da büyüme, düşük bolluk ve düşük çeşitlilik ile düşük numune sayısına neden oldu8. Bu yöntem, bir zenginleştirme adımının yanı sıra MALDI-TOF MS tarafından yeniden tasarlanmış bir göz çubuğu ve tanımlaması eklenerek standart kültür uygulamaları4,21'i önemli ölçüde gelişt...

Bu protokolün amacı, oküler mikrobiyomu karakterize etmek için oküler konjonktivadan canlı ve nadir aerobik ve öğretim üyesi anaerobik mikropların spesifik izolasyonunu arttırmaktır. Kapsamlı çalışmalar cilt, bağırsak, solunum ve genital sistemlerdeki kommensal mukozal toplulukların profilini çıkarmıştır ve bu toplulukların bağışıklık sisteminin gelişimini ve yanıt1, 2,3'üetkilediğini göstermektedir. Göz eti kommenal topluluklarının Kuru göz hastalığı4, Sjogren sendromu5 ve diyabet6gibi bazı hastalık patolojileri sırasında değiştiği gösterilmiştir. Yine de, tipik bir oküler yüzey kommenal topluluğunu tanımlama yeteneği, diğer mukozal sitelere kıyasla nispeten düşük bollukları ile engellenir6,7,8. Bu, yerleşik bir oküler mikrobiyom olup olmadığı ve varsa, cilt mikrobiyomundan farklı olup olmadığı ve sonuç olarak doğuştan gelen bağışıklık sistemi gelişimi ve yanıtı üzerindeki yerel etkisi hakkında bir tartışmaya neden olur. Bu protokol bu sorunun çözülmesine yardımcı olabilir.
Genel olarak, oküler kommensal niş tanımlamak için yaklaşımlar sıralama ve kültür tabanlı tekniklere dayanır4,7,9. 16 S rDNA dizilimi ve BRISK analizi7, kültür tabanlı tekniklerden daha geniş bir çeşitlilik gösterir, ancak canlı ve ölü mikroplar arasında ayrım yapamaz. Göz yaşartıcı filmin anti-mikrobiyal özellikleri4 nedeniyle göz yüzeyi birçok mikroplara düşman olduğundan, DNA tabanlı yaklaşımlar, ölü bakterilerin kirleticiler yerine yerleşik kommensallar olarak tanımlanmasına yönelik verileri çarpıtabilecek bu eserleri tespit edecektir. Bu, oküler alanın mikrop bolluğu ve çeşitliliğinde daha yüksek olarak anormal kommensal tanımlama ve niteleme ile sonuçlanır10. Bu, yerleşik oküler mikrobiyomun DNA tabanlı yöntemlerle tanımlanmasını zorlaştırır. Standart kültür tabanlı teknikler, yük çok düşük olduğundan virgülleri algılayamaz11. Yöntemimiz, konjonktivayı hedefleyebilen ince bir çubuk kullanarak standart uygulamaları geliştirir, böylece komşu ciltlerden kontaminasyonu önler, ayrıca canlı organizmaların canlı ama kült olmayan mikropları canlandırmak ve nadir uygulanabilir mikroplar için zenginleştirmek amacıyla besin yoğun ortamlarında kısa kültürle zenginleştirilebileceği kavramını da önler.
Sonuçlar, göz çubuğu başına göreceli oküler kommensal bolluğu, konjonktiva yerleşik mikrobiyomu karakterize eder ve karşılaştırmalı amaçlar için önemlidir. Verilerimiz, cilt ve konjonktival mikrobiyota arasında bir fark olduğunu, ayrıca artan yaş ve bol miktarda cinsiyete özgü bir fark ile daha fazla çeşitlilik olduğunu göstermektedir. Ayrıca, bu yaklaşım tekrar tekrar nakavt farelerde övgüye yersiz farklılıklar buldu12. Bu protokol, kafes uygulamaları, coğrafya veya hastalık durumuna bağlı olarak değişebilen oküler mikrobiyomun yanı sıra kommensal metabolitlerin ve ürünlerin bağışıklık sistemi gelişimi ve yanıtı üzerindeki yerel etkilerini tanımlamak için uygulanabilir.

<table><tbody><tr><td>0,1 ila 10 ve mikro; l pipet ucu</td><td>USA Scientific</td><td>1110-300</td><td>kullanmadan önce otoklav</td></tr><tr><td>0,5 ila 10 & mikro; l Eppendorf pipeti</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-690-026</td><td></td></tr><tr><td>1 ml şırınga</td><td>Fisher Scientific</td><td>BD309623</td><td>Her göz çubuğu grubu için 1 şırınga</td></tr><tr><td>1.5 ml Eppendorf tüpleri</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5500</td><td>kullanmadan önce otoklav</td></tr><tr><td>1000 ve ml pipet ucu</td><td>USA Scientific</td><td>1111-2021</td><td>kullanmadan önce otoklav</td></tr><tr><td>200 ila 1000 & mikro; l Gilson pipetman (P1000)</td><td>Fisher Scientific</td><td>F123602G</td><td></td></tr><tr><td>25 G iğne</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826AA</td><td>göz başına 1 iğne sürüntü grubu</td></tr><tr><td>%3 Hidrojen Peroksit</td><td>Fisher Scientific</td><td>S25359</td><td></td></tr><tr><td>37 &deg; C Kuluçka Laboratuvarı</td><td>ekipmanı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>% 70 İzopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>PX1840-4</td><td></td></tr><tr><td>Ana-Sed Enjeksiyonu (Ksilazin 100 mg / ml)</td> <td>Santa Cruz Hayvan Sağlığı</td><td>SC-362949Rx</td><td></td></tr><tr><td>BD BBL Gram Leke kiti</td><td>Fisher Scientific</td><td>B12539</td><td></td></tr><tr><td>Bunsen Brülör Laboratuvarı</td><td>ekipmanı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Temiz kağıt havlu</td><td>Laboratuvarı ekipman</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pamuk Vuruş / Steril haddelenmiş pamuk</td><td>CVS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık 1 ml Pipetler</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-9AM</td><td>Gram boyama ve katalaz testleri için</td></tr> <tr><td>E.coli</td><td>ATTC</td><td>ATCC 8739</td><td></td></tr><tr><td>Cam slaytlar</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-A3</td><td>Gram boyama ve katalaz testleri için</td></tr><tr><td>Ketamin ( 100mg / ml)</td> <td>Henry Schein</td><td>9950001</td><td></td></tr><tr><td>Mac Conkey Agar Plakaları</td><td>Fisher Scientific</td><td>4321270</td><td>mağazası 4 & derece; Kullanıma hazır olana kadar</td></tr><tr><td>C Mannitol Tuzu Agar</td><td>Carolina Biyolojik Tedarik</td><td>784641</td><td>Plakaları mfr'nin talimatlarına göre hazırlayın, 4 ° C'de saklayın; 1 hafta boyunca C</td></tr><tr><td>Fareler</td><td>Jackson Labs</td><td>C57 / BL6J</td><td></td></tr><tr><td>Petri Kapları</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td>Mannitol için Tuz agar plakaları</td></tr><tr><td>RPI Beyin Kalp İnfüzyon Ortamı</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-488525</td><td>talimatlara ve otoklava göre hazırlayın</td></tr><tr><td>SteriFlip (0.22 &; m gözenek boyutu polyester sülfon)</td><td>EMD/Millipore, Fisher Scientifc</td><td>anesteziyi sterilize etmek için</td><td>SCGP00525</td></tr><tr><td>Steril Corning Santrifüj Tüpü</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>430829</td><td>anestezi hazırlığı</td></tr><tr><td>Steril fare kafesi</td><td>Laboratuvar ekipmanları</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kürdan (yuvarlak bambu)</td><td>Kitchen Essentials</td><td></td><td>kullanmadan önce otoklav ve sürüntü hazırlama</td></tr><tr><td>%5 Koyun Kanı Plakalı Triptikaz Soya Agar</td> II <td>Fisher Scientific</td><td>4321261</td><td>mağazası 4 &°C; Kullanıma hazır olana kadar C</td></tr><tr><td>Vitek hedef slaytı</td><td>BioMérieux Inc. Durham,NC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vitek-MS</td><td>BioMérieux Inc. Durham,NC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vitek-MS CHCA matris çözümü</td><td>BioMérieux Inc. Durham, NC</td><td>411071</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık göz damlası</td><td>CVS Eczane</td><td></td><td>Bausch ve Lomb Yatıştırıcı Kayganlaştırıcı Göz Damlası, 28 şişe, 0,02 fl oz. her biri</td></tr></tbody></table>

farelerde konjonktival kommenal İzolasyon ve tanımlama

Conjunctival Commensal Isolation and Identification in Mice

Oküler yüzey bir zamanlar immün ayrıcalıklı ve abiyotik olarak kabul edildi, ancak son zamanlarda küçük, ancak kalıcı bir kommensal varlık olduğu görülüyor. Oküler mukozadaki bakteri türlerinin tanımlanması ve izlenmesi, düşük bollukları ve kommensal büyüme ve tanımlama için uygun metodolojinin sınırlı metodolojisi nedeniyle zor olmuştur. İki standart yaklaşım vardır: kültür tabanlı veya DNA dizileme yöntemleri. İlk yöntem, sınırlı geri kazanılabilir bakteriler nedeniyle sorunludur ve ikinci yaklaşım, oküler alanın anormal bir temsiline yol açan hem canlı hem de ölü bakterileri tanımlar. Standart mikrobiyolojik kültleme tekniklerini geliştirerek bakteri izolasyonu için sağlam ve hassas bir yöntem geliştirdik. Bu, alt konjonktivayı hedefleyen "laboratuvar içi" yapılmış ince bir çubuk kullanan, ardından aerobik ve öğretim üyesi anaerobik cins için bir amplifikasyon adımı kullanan çubuk tabanlı bir tekniktir. Bu protokol, Corynebacterium spp., Coagulase Negative Staphylococcus spp., Streptococcus spp., vb. Yaklaşım, farklı hastalık koşullarında farelerde kommensal çeşitliliği tanımlamak için uygundur.

Kaplama için farklı yöntemleri gösteren bir göz çubuğu plakası için temsili sonuçlar, C57BL / 6 fareden morfolojik olarak farklı izolatları gösteren Şekil 3A'da resmedilmiştir. Her ayrı izole için, koloniler şeritte sayıldı ve göreceli bolluk, göz çubuğu başına benzersiz Koloni Şekillendirme Birimleri (CFO'lar), karşılaştırma amacıyla hesaplandı ve çizildi. Mikrobiyolojik karakterizasyon için, bakteriler ana bir TSA plakası üretmek için tek tek fare gözü çubuk plakalarından seçildi (her fare...

Burada sunulan, mikrobiyolojik tabanlı yöntemler ve MALDI-TOF kütle spektrometresi ile daha sonra tanımlanması ile benzersiz bir göz çubuğu ve kültür tabanlı zenginleştirme adımı kullanılarak aerobik ve öğretim üyesi anaerobik fare konjonktival commensal bakterilerin izolasyonu ve amplifikasyonu için bir protokoldür.

Farelerde Konjonktival Kommenal İzolasyon ve Tanımlama

The ocular surface was once considered immune privileged and abiotic, but recently it appears that there is a small, but persistent commensal presence. ...

Bu yöntem, gözlerin düşmanca ortamı nedeniyle zorlayıcı olan uygulanabilir oküler konjonktival mikroorganizmaları tanımlar. Oküler mikrobiyomun var olup olmadığını ve göz hastalığında bakteri varlığının nasıl değiştiğini cevaplana yardımcı olabilir. Hem uygulanabilir hem de canlı olmayan mikroorganizmaları tanımlayan DNA diziliminin aksine, bu yöntem sadece uygulanabilir mikroorganizmaları tanımlar ve bu da öküler kommenal topluluğun daha net anlaşılmasını sağlamakla sonuçlanır.Çalışmalar, otoimmün olmayan ve otoimmün kuru göz gibi göz hastalıklarını teşhis örülmenin zor olduğunu ve benzersiz oküler bakteri varlığına sahip olduğunu göstermektedir. Bu yöntem, ayırt edici mikrobiyal imzalara sahip göz hastalıklarını teşhis etmek için kullanılabilir. Sürünecek fare sayısı için uygun miktarda pamuk vuruşu ve kürdanı otomatik olarak kapatarak başlayın, ardından 1/2 santimetre uzunluğunda pamuk vuruşu parçasını kıstırın ve vuruş dağılmadan hemen önce duran düz bir gözenekli tabaka oluşturmak için kenarları çekerek alay edin.Bükülmüş olarak gerilmiş parçayı kürdan ucunda hafifçe tutarak vuruşu kürdanın keskin uçlarından birinin etrafında döndürün. Bitmiş göz çubuğu, uçtan yaklaşık 1/2 ila bir santimetre uzağa uzanan ucun üzerine gerilmiş çok ince bir pamuk tabakasına sahip olacaktır. Sürüntüleri küçük bir behere yerleştirin, aşağı doğru sürün, sonra örtün ve otoklavlayın.Kontaminasyonu ve 0,5 mililitre steril beyin kalbi infüzyonunu veya BHI ortamını etiketli 1,5 mililitre steril mikro santrifüj tüplerine en aza indirmek için çalışma alanını bir dezenfektanla temizleyin. Tüpleri bir rafa takın ve rafı buza yerleştirin. Deneysel fareler, boş steril kafes, oda sıcaklığı anestezisi, 25 kalibre iğne ve bir mililitre şırınga ile kafesi içeren fare anestezi istasyonundan başlayarak soldan sağa iş akışını ayarlayın.Daha sonra, buz üzerinde aliquoted BHI, sterilize göz çubukları, yağlama damlaları, biyolojik tehlike kabı, temiz kağıt havlular ve% 70 izopropanol spreyi içeren bir göz tarama istasyonu hazırlayın. Son olarak, oda sıcaklığında kan agar plakaları, 10 mikroliter pipet, 10 mikroliter steril tek kullanımlık uç ve biyolojik tehlike atık kabı ile kaplama istasyonunu kurun. Bir arka ayak pedi sıkarak farenin düzgün bir şekilde uyuşturulduğından emin olun.Sadece hareket yoksa devam edin. Anesteziye bulaşmış fareleri işlemek için bir el, göz bezini ve kültürü işlemek için diğer ellerinizi atayın. Fareyi kafesten çıkarın ve sol gözü açıktayken yan tarafına yerleştirilmiş çalışma yüzeyinin üzerine yerleştirin.Eldivenli ellere izopropanol püskürtün ve kağıt havlu ile kurulayın. Etiketli BHI mikro santrifüj tüpünü özel medya işleme eliyle çıkarın ve ikisini rafa geri yerleştirin. Göz küreğinin pamuk kaplı ucunu BHI'ye batırın, ardından fazla sıvıyı çıkarmak ve çıkarmak için ucu iç tüpe iki kez döndürürken küveti tüpten çekin.Fare taşıma eliyle, fareyi boynun scruff'ından hafifçe tutun. Diğer taraftan, göz bezinin ucunu sol gözün medial konjonktival bölgesine yerleştirin. Göz küresini hafifçe bastırın ve bezi alt göz kapağı ile göz arasındaki bir pencere yıkama hareketinde 10 kez hareket ettirerek sürekli basıncı koruyun.Kürke dokunmadan, çubuğun ucunu yerleştirildiği yere dik olarak hafifçe çıkarın. Çubuk pamuk tarafını doğrudan BHI ortamlı etiketli bir mikro santrifüj tüpüne yerleştirin. Sürünmüş göze bir göz damlası uygulayın.İsterseniz, kontrol numuneleri için cilt veya kürk sürüntüleri alın, eldivenleri her çubuk arasında uygun şekilde sterilize edin. İşiniz bittiğinde, fareyi kafese geri döndürün. Bez buz üzerinde 10 ila 15 dakika bekletin, ardından eldivenli elleri sterilize edin ve ucu 10 dönüş boyunca medyada karıştırırken çubuğu çıkarın.Ucu tüpün iç duvarına doğru beş dönüş boyunca döndürerek çubuğu çekin ve biyolojik tehlike kabına atın. Her fare için işlemi yineleyin. Tüpü statik olarak 37 santigrat derecede bir saat inkübe ederek numuneyi zenginleştirin.Kuluçka sırasında, fare gözü çubuğu başına bir oda sıcaklığı TSA plakasını etiketleyin veya çubuğu kontrol edin ve ikiye bölün. Zenginleştirilmiş numuneleri inkübatörden çıkarın ve buza yerleştirin. Karıştırmak için örnekleri kısaca girdaplayın, ardından numunenin 10 mikrolitresini TSA plakasına koyun ve bir şerit oluşturmak için plakayı eğin.Bunu iki kez tekrarlayın. Plakaların çizgiyi bölen diğer tarafında, her biri 10 mikrolitre örnekle 10 nokta oluşturun. Tabakları 37 santigrat derecede 18 saat, iki gün ve dört gün boyunca agar plakalarının kurumasını önleyen temiz bir odada kuluçkaya yatırın.Şeritlerdeki kolonileri sayın. Morfolojiye dikkat edin ve morfolojik olarak benzer izolatlar için çubuk başına koloni oluşturma birimlerini hesaplayın. Şeritlerde benzersiz organizmaların yakalanmadığı noktalara bakın.Görselleştirmeyi kolaylaştırmak için bakterileri orta ve sağ plakalarda yoğun bir şekilde kapladık. Tipik olarak, göz bezi plakalarında çok daha az bakteri gözlemledik. Bazen, göz sürüntülerinin geri kazanılabilir bakteriler vermeyebileceğini unutmayın.Burada C57 siyah altı fareden morfolojik olarak farklı izolelere sahip temsili bir göz çubuğu plakası gösterilmiştir. Her ayrı izole için, koloniler şeritte sayıldı ve göreceli bolluk hesaplandı ve çizildi. Mikrobiyolojik karakterizasyon için, bakteriler ana bir TSA plakası üretmek için bireysel fare gözü çubuk plakalarından seçildi.Büyüme ortaya çıktığında, mikropları karakterize etmek veya tanımlamak için ek testler yapıldı. Ana plaka, ilgili izolatları genişletmek için yeterli inokülyum sağlamak için kullanılmıştır. İzoleleri tanımlamak için bir gecede bir TSA plakası çizildi ve inkübe edildi ve MALDI-TOF MS yapıldı.Burada gösterilen izolat örnekleri Streptococcus acidominimus ve Aerococcus viridans olarak tanımlanmıştır. Erkek ve dişi C57 siyah altı fareden önemli ölçüde farklı düzeylerde östensel organizmalar elde edildi. Streptococcus acidominimus, Aerococcus viridans coagulates negatif Staphylococci ve E.coli C57 siyah altı N fareden izole edildi.Bu protokolü denerken, en iyi sonucun çubuğu ince bir şekilde kaplayarak ve göz çubuğu adımı sırasında zaman alarak elde edileceğini unutmayın. MALDI-TOF MS'e erişim sınırlıysa, izolatlar mikrobiyolojik ve biyokimyasal testlerle tanımlanabilir.

conjunctival-commensal-isolation-and-identification-in-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Herpetik kornea hastalığı çalışmaların çoğu birincil enfeksiyon modeli kullanın. Ancak, HSV-1 ile birincil infeksiyon genellikle insan hastalığına yol açmaz. Burada daha yakından insan hastalığı taklit herpetik kornea hastalığı, tekrarlayan modeli açıklamak.

Farelerde Tekrarlayan Herpetik Stromal Keratit, İnsan HSK Eğitim İçin Bir Model

Bu videoda, canlı kommensal bakterileri oküler konjonktivadan izole etmek için sürüntü tabanlı bir teknik açıklanmaktadır. Teknik, patojenlere karşı savunma rolü oynayan konjonktivanın kommensal bakteriyel mikrobiyomunun profilini çıkarmak için kullanılabilir.

Sürüntü Bazlı Konjonktival Kommensal Bakteri İzolasyonu: Murin Modelinin Konjonktivasından Kommensal Bakterileri İzole Etme Tekniği

Bu videoda, Bacillus cereus'un neden olduğu bakteriyel endoftalminin bir fare modelinden elde edilen göz homojenatlarından bakteriyel enfeksiyonun ölçülmesi tekniği açıklanmaktadır. Bu teknik, murin modellerinde konak bağışıklık tepkisini ve bunun konakçıya ve oküler bakteriyel gen ekspresyonuna bağımlılığını incelemeye yardımcı olur.

Bakteriyel Enfeksiyon Kantitasyon Testi: Bakteriyel Endoftalmilerin Fare Modelinde Göz İçi Bakteri Yükünü Ölçmek İçin Bir Yöntem

Maruz kalan normal oküler yüzey kornea ve konjonktivadan oluşur. Konjunktiva içerisinde epitel hücreleri, goblet hücreleri ve immün hücreler bulunur. Burada, non-invaziv bir izlenim sitolojisi yöntemi, konjonktivadaki bağışıklık hücrelerini analiz etmek için bir impresyon sitolojisi cihazı ve akış sitometrisi kullanılarak tarif edilmiştir.

Conjunktiva&#39;dan Hücreleri İzole Etmek ve Fenotip Hedeflemek İçin İnvaziv Olmayan Bir Yöntem

Bu protokol, fare göz küresinin göz kapağı, göz yüzeyi, anterior ve posterior segmentleri ile nispeten sağlam konumda izolasyonu için bir yöntem açıklanmaktadır.

Histolojik Muayene ve İmmünohistokimya için İntegral Göz Yüzey Dokusu Elde Etmek Için Bozulmamış Göz Küresinin İzolasyon

Burada sunulan canlı fare oküler yüzey görüntüleme için bir multifoton mikroskobik platformdur. Floresan transgenik fare hücre çekirdekleri, hücre zarları, sinir lifleri ve oküler yüzey içinde kılcal damarların görüntülenmesi sağlar. Kolaj nasyonal yapılardan elde edilen doğrusal olmayan ikinci harmonik nesil sinyalleri stromal mimariler için etiketsiz görüntüleme sağlar.

Fare Kornea ve Konjonktiva Canlı Görüntüleme için Özel Multifoton Mikroskop platformu

Burada bakteriyel endoftalmitin fare modelinde intravitreal enjeksiyon ve sonraki bakteriyel nicel bir yöntem tanımladık. Bu protokol, konak bağışıklık yanıtlarını ve bakteriyel ve konak gen ekspresyonunu ölçmek için genişletilebilir.

Bakteriyel Endoftalmitin Fare Modelinde İntravitreal Enjeksiyon ve Enfeksiyon Parametrelerinin Niceliği

Oküler yüzey iltihabı oküler yüzey dokularına zarar verir ve gözün hayati fonksiyonlarını tehlikeye atar. Mevcut protokol, oküler inflamasyonu indüklemek ve Meibomian bezi disfonksiyonunun (MGD) bir fare modelinde tehlikeye atılmış dokuları toplamak için bir yöntemi açıklamaktadır.

Oküler Yüzey Enflamasyonunun İndüklenmesi ve Tutulan Dokuların Toplanması

Retina pigment epiteli (RPE), koroid ve retina arasında çok önemli bir bariyer görevi görür ve fotoreseptörler gibi retina hücre tiplerinin sağlığını ve işlevini destekler. Burada, yetişkin murin RPE'yi izole etmek ve kültürlemek için basit ve etkili bir protokol açıklıyoruz.

Yetişkin Farelerden Retinal Pigment Epitel Hücrelerinin İzolasyonu ve Kültürü için Basitleştirilmiş Bir Yöntem

Bu makale, kuru göz tanı ve tedavisinde in vivo konfokal mikroskopinin işleyişini ve etkisini göstermekte ve gelecekteki araştırmalara temel oluşturmak için in vivo konfokal mikroskopinin uygulama ve sonuçlarını araştırmaktadır.

İn vivo Kuru Göz Tanı ve Tedavisinde Konfokal Mikroskopi: Görüntüleme Protokolleri ve Yorumlamaya Odaklanma

Keşfedin farelerde konjonktival kommensal bakteri izolasyonu ve MALDI-TOF ile tanımlama yöntemini. Bu protokol yaşayan mikroorganizmaları belirleyerek göz mikrobiyomunu ve hastalık ilişkilerini anlamaya yardımcı olur.

Farelerde Konjonktival Kommenal İzolasyon ve Tanımlama

Daha fazla video keşfet