Name: Bir Kedi Büyük Hayvan Modelinde İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Retinal Dokunun Subretinal Transplantasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Keşfedin subretinal retinal organoid transplantasyonu için cerrahi tekniği, büyük hayvan modelinde insan embriyonik kök hücre kaynaklı doku kullanarak. Bu yöntem, retinal dejeneratif hastalıklar için hücre tedavisi geliştirmeye yönelik potansiyel sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NEI Fast-track SBIR hibesi R44-EY027654-01A1 ve SBIR hibe 3 R44 EY 027654 - 02 S1 (I.O.N., Lineage Cell Therapeutics; Dr. Petersen-Jones bir ortak PI'dir) tarafından finanse edilmiştir. Yazarlar, Bayan Janice Querubin'e (MSU RATTS) bu çalışmaya dahil edilen hayvanlar için anestezi ve genel bakım konusundaki yardımlarının yanı sıra cerrahi ayar ve alet hazırlama / sterilizasyon konusundaki yardımları için teşekkür eder. Yazarlar, organoidlerin implantasyondan önceki gün alınması ve medyaya yerleştirilmesindeki yardımı ve implantasyon günündeki yardımı için Dr. Paige Winkler'e teşekkür eder. Yazarlar ayrıca, retinal organoidlerin özenle nakliyesi, göndericinin montajı ve her sevkiyattan sonra sıcaklık ve G-stres kayıtlarının indirilmesi için Bay Randy Garchar'a (LCTX) minnettardır. Bu çalışma, yazar Igor Nasonkin'in Biotime (şimdi Lineage) tarafından istihdam edildiği sırada gerçekleştirildi.

Ratnesh K. Singh, Ph.D., Francois Binette, Ph.D. ve Igor O. Nasonkin Ph.D., Lineage Cell Therapeutics, Inc.'in çalışanlarıdır. Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

hPSC kaynaklı retina dokusunun (retinal organoidler) subretinal boşluğa implantasyonu, PR hücre ölümünün (derin veya terminal körlük) neden olduğu geç evre retinal dejeneratif hastalıklar için vizyonun geri kazanılması için umut verici bir deneysel yaklaşımdır. Sunulan yaklaşım, insan fetal retinal dokusunun bir parçasının subretinal greftlenmesine dayanan daha önce geliştirilmiş ve başarılı bir şekilde test edilmiş deneysel bir tedaviye dayanmaktadır23,24,25<sup...

Dünya çapında milyonlarca insan, ışığı algılayan fotoreseptörlerin (PR'ler) kaybıyla ilişkili görme bozukluğu veya körlük ile ortaya çıkan retinal dejenerasyondan (RD) etkilenmektedir. Yaşa bağlı makula dejenerasyonu (YBMD), genetik risk faktörleri ile çevresel/yaşam tarzı faktörlerinin birleşiminden kaynaklanan körlüğün önemli bir nedenidir. Ek olarak, 200'den fazla gen ve lokusun kalıtsal RD'ye (IRD)1 neden olduğu bulunmuştur. En yaygın IRD olan Retinitis pigmentosa (RP), genetik olarak heterojendir ve yaklaşık 70 gende 3.000'den fazla genetik mutasyon bildirilmiştir 2,3,4. Çocukluk çağında körlüğe neden olan Leber Konjenital Amaurosis (LCA) da genetik olarak heterojendir 5,6. Gen büyütme tedavisi geliştirilmiştir ve az sayıda IRD'nin tedavisi için klinik çalışmalardadır 3,7. Bununla birlikte, IRD'nin her bir farklı genetik formunun tedavisi için ayrı bir terapi geliştirilmeli ve böylece sadece hastaların küçük bir alt kümesi tedavi edilmelidir. Ayrıca, gen güçlendirme, kurtarılabilir fotoreseptörlerin bir popülasyonunun varlığına dayanır ve bu nedenle ileri dejenerasyon için geçerli değildir.
Bu nedenle, ileri RD'leri ele alan ve tedavi eden ve terminal körlüğe kadar derin tedavilerin geliştirilmesi için acil ve henüz karşılanmamış bir klinik ihtiyaç vardır. Son 2 yılda nöroprotez implantlar, insan kullanımından önce kedi gibi büyük hayvan modellerinde geliştirilmiş ve test edilmiştir 8,9,10,11,12,13,14. Benzer şekilde, son 20 yılda, subretinanal olarak aşılanmış embriyonik veya hatta olgun memeli retina tabakalarını kullanan retina replasman tedavileri 15,16,17,18,19,20,21,22 geliştirilmiş ve hatta RD hastalarında başarıyla test edilmiştir 23,24,25. Her iki yaklaşım da, dejenere PR'lerle retinaya yeni sensörler (nöroprotez cihazları26,27 durumunda fotovoltaik silikon fotodiyotlar ve retina tabakası implantasyonu durumunda tabakalar halinde düzenlenmiş sağlıklı mutasyonsuz fotoreseptörler) ekleme fikrini kullanmaktadır. Son zamanlarda yapılan çalışmalar, insan pluripotent kök hücre (hPSC) kaynaklı retinal progenitörlerin28,29, hPSC-fotoreseptörlerin 30 ve hPSC-retinal organoidlerin31,32,33 transplantasyonu gibi kök hücre temelli yaklaşımların kullanımını araştırmıştır. Retinal organoidler, bir çanakta retina dokusunun oluşumunu ve gelişmekte olan insan fetal retinasındaki fotoreseptör tabakasına benzeyen binlerce mutasyonsuz PR ile fotoreseptör tabakalarının türetilmesini sağlar 34,35,36,37,38,39,40 . RD koşulları olan hastaların subretinal boşluğuna hPSC kaynaklı retinal dokunun (organoidler) nakledilmesi, 31,32,41,42 numaralı ekip tarafından takip edilen yeni ve umut verici araştırmacı hücre tedavisi yaklaşımlarından biridir. Hücre süspansiyonunun transplantasyonu ile karşılaştırıldığında (genç fotoreseptörlerin veya retinal progenitörlerin), nakledilen fetal fotoreseptör tabakalarının klinik çalışmalarda görme iyileşmesi sağladığı gösterilmiştir23,24.
Burada sunulan protokol, ayrıntılı olarak, tüm retinal organoidlerin (organoid jantlar33,41 yerine) subretinal verilmesi için bir transplantasyon prosedürünü, sağlam retinal tabakaları PR'lerle tanıtmanın, greft sağkalımını arttırmanın ve tabaka korumasını iyileştirmenin potansiyel olarak daha iyi bir yolu olarak tanımlamaktadır. Düz bir insan retinası parçası ve ayrıca RPE yamaları için prosedürler geliştirilmiş olmasına rağmen43,44,45, daha büyük 3D greftlerin nakli araştırılmamıştır. Kök hücre kaynaklı retinal organoidler, görme restorasyon teknolojilerinin geliştirilmesi için tükenmez bir fotoreseptör tabaka kaynağı sağlar, etik kısıtlamadan arındırılmıştır ve ileri RD ve terminal körlüğün tedavisine odaklanan tedaviler için mükemmel bir insan retina dokusu kaynağı olarak kabul edilir46. Retinal organoidlerin retinal nişine (nöral retina, retina pigment epiteli ve retinal ve koroidal vaskülatür) minimum yaralanma ile hassas subretinal implantasyonu için cerrahi yöntemlerin geliştirilmesi, bu tedavinin klinik uygulamalara doğru ilerletilmesinde kritik adımlardan biridir31,32. Kediler, köpekler, domuzlar ve maymunlar gibi büyük hayvan modellerinin, cerrahi uygulama yöntemlerini araştırmanın yanı sıra implante edilmiş doku tabakalarının (retinal pigment epitel (RPE) hücreleri) güvenliğini göstermek ve organoidlerin kullanımını araştırmak için iyi modeller olduğu kanıtlanmıştır 41,44,45,47,48,49,50. Büyük hayvan gözü, insana benzer bir küre boyutuna ve insan makulasına benzeyen koniler (area centralis) dahil olmak üzere yüksek fotoreseptör yoğunluğuna sahip bir bölgenin varlığı da dahil olmak üzere benzer anatomiye sahiptir6,51,52.
Bu makalede, hPSC kaynaklı retinal dokunun (organoidler) kedi büyük hayvan modellerinin (hem vahşi tip hem de CrxRdy / + kedileri) subretinal boşluğuna implantasyonu için bir teknik tanımlanmıştır ve umut verici etkinlik sonuçları ile birlikte32,53, RD koşullarını tedavi etmek için klinik uygulamalara yönelik bu tür araştırma terapisinin daha da geliştirilmesi için bir temel oluşturmaktadır.

<table><tbody><tr><td>0.22 ve mikro; PES membranlı m gözenekli şırınga filtresi</td><td>Cameo</td><td>NA</td>, <td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr>: <tr><td>uzatılabilir 41 G kanüllü 23G subretinal enjektör</td>, <td>DORC</td><td>1270.EXT</td><td></td></tr><tr><td>250 &; mikro; L hamilton gaz geçirmez luer kilit şırınga</td><td>Hamilton</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>6-0 İpek sütür</td><td>Ethicon</td><td>707G</td><td></td></tr><tr><td>6-0 / 7-0 poliglaktin sütür</td><td>Ethicon</td><td>J570G</td><td></td></tr><tr><td>Asepromazin maleat 500mg / 5mL (Aceproject)</td> <td>Henry Schein Hayvan Sağlığı</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>Buprenorfin 0.3 mg / mL</td><td>Par Farmasötik</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>cSLO + SD-OCT</td><td>Heidelberg Mühendislik</td><td>Spectralis HRA + OCT</td><td></td></tr><tr><td>Siklosporin</td><td>Novartis</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>Deksametazon 2mg / mL (Azium)</td> <td>Vetone</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>Doksisilin 25mg / 5mL</td><td>Cipla</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>Fatal Plus çözümü (pentobarbital çözüm)</td><td>Vortech</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>Gentamicin 20mg / 2mL</td><td>Hospira</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>Cam kılcal damar (İnce Duvarlı Tek Namlulu Standart Borosilikat (Schott Duran) Cam Boru Dünyası</td><td>Hassas Aletler</td><td>TW150-4</td><td></td></tr><tr><td>Metilprednizolon aktetat 40 mg / mL</td><td>Pfizer</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>OCT ortamı (Doku-Tek OCT Bileşik)</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Olimpiyat Vac-Pac Boyut 23</td><td>Natus</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>Paraformaldehit% 16 çözelti</td><td>EMS</td><td>15719</td><td></td></tr><tr><td>Fenilefrin Hidroklorür% 10 Oftalmik Çözelti</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>Prednisolone 15mg / 5mL</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>Propofol 500mg / 50mL (10 mg / mL) (PropoFlo28)</td> <td>Zoetis</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>RetCam II video fundus kamera</td><td>Clarity Medical Systems</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>Triamsinolon 400mg / 10 mL (Kenalog-40)</td> <td>Bristol -Myers Squibb Company</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>Tropicamide %1 oftalmik çözelti</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>çeşitli tedarikçiler aracılığıyla bulunabilir</td></tr><tr><td>Vitrektomi 23G bağlantı noktası</td><td>Alcon</td><td>Accurus sistemleri</td><td></td></tr><tr><td>Vitrektomi makinesi</td><td>Alcon</td><td>Accurus sistemleri</td><td></td></tr><tr><td>Vitreo-retinal dikey 80 derece sıkma saplı makas</td><td>Frimen</td><td>FT170206T</td><td></td></tr></tbody></table>

bir kedi büyük hayvan modelinde İnsan embriyonik kök hücre kaynaklı retinal dokunun subretinal transplantasyonu

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

Yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD), retinitis pigmentosa (RP) ve Leber Konjenital Amaurosis (LCA) gibi fotoreseptör kaybı ile ilişkili retinal dejeneratif (RD) durumlar ilerleyici ve zayıflatıcı görme kaybına neden olur. Fotoreseptörler kaybolduktan sonra vizyonu geri kazanabilecek tedavilere karşılanmamış bir ihtiyaç vardır. İnsan pluripotent kök hücre (hPSC) kaynaklı retina dokusunun (organoidler) gelişmiş RD'li bir gözün subretinal boşluğuna nakledilmesi, retinal doku tabakalarını binlerce sağlıklı mutasyonsuz fotoreseptörle birlikte getirir ve fotoreseptör dejenerasyonu ile ilişkili körleştirici hastalıkların çoğunu / tümünü onaylanmış bir protokolle tedavi etme potansiyeline sahiptir. Fetal retinal dokunun hayvan modellerinin ve ileri RD'li kişilerin subretinal boşluğuna transplantasyonu başarılı bir şekilde geliştirilmiştir, ancak etik kaygılar ve sınırlı doku arzı nedeniyle rutin bir tedavi olarak kullanılamamaktadır. Büyük göz kalıtsal retinal dejenerasyon (IRD) hayvan modelleri, retina hücrelerini / dokusunu subretinal boşluğa nakletmek için gelişmiş cerrahi yaklaşımları kullanan görme restorasyon terapileri geliştirmek için değerlidir. Dünya büyüklüğündeki benzerlikler ve fotoreseptör dağılımı (örneğin, makula benzeri bölge alanı centralis'in varlığı) ve insan IRD'sini yakından özetleyen IRD modellerinin mevcudiyeti, umut verici bir tedavinin kliniğe hızlı bir şekilde çevrilmesini kolaylaştıracaktır. Burada, hPSC kaynaklı retinal dokunun büyük bir hayvan modelinin subretinal boşluğuna nakledilmesinin cerrahi bir tekniği sunulmakta ve hayvan modellerinde bu umut verici yaklaşımın değerlendirilmesine izin verilmektedir.

Bu prosedür, hPSC kaynaklı retinal organoidlerin büyük bir göz hayvanı modelinin subretinal boşluğuna başarılı ve tekrarlanabilir implantasyonunu sağlar (burada 2 örnek kullanılarak gösterilmiştir: sağlıklı fotoreseptörlere (PR'ler) sahip vahşi tip kediler ve dejenere PR'ler ve retina ile CrxRdy / + kedileri). Şekil 1'de belirtilen adımları kullanarak, hPSC türevli retinal organoidleri, organoidlerin zarar görmemesi için enjeksiyon cihazının borosilikat cam kanül...

Burada, insan pluripotent kök hücresi (hPSC) kaynaklı retinal dokunun büyük bir hayvan modelinin subretinal boşluğuna nakledilmesi için cerrahi bir teknik sunulmaktadır.

Bir Kedi Büyük Hayvan Modelinde İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Retinal Dokunun Subretinal Transplantasyonu

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...

Mevcut protokol, retinal dejenerasyon için hücre tedavisi yaklaşımları geliştirmeyi amaçlayan büyük bir hayvan modelinde tüm retinal organoidlerin subretinal dağıtımını ayrıntılı olarak göstermektedir. Bu tekniğin temel avantajı, organoidlerin doğrudan hedef dokuya, retinaya verilmesine izin vermesidir. Bu teknik, yaşa bağlı makula dejenerasyonu, retinitis pigmentosa veya leber konjenital amauroz gibi ileri kör edici retinal dejeneratif durumları tedavi etmeyi amaçlamaktadır.Prosedürü gösteren Dr. Peterson Jones olacaktır. Organoidlerin subretinal implantasyonu için, dört aylık bir gece açlıklı anestezi uygulanan bir kedide 0.5 ila 1 santimetre lateral kantotomi yapmak için Stevens Tenotomi Makası kullanın ve göz kapaklarını açık tutmak için insizyona uygun büyüklükte bir Barraquer göz kapağı spekulumu yerleştirin. Limbusun yanındaki bulber konjonktivayı nazikçe kavramak için 0.5 Castroviejo kornea bağlama forseps ve küçük bir sivrisinek hemostatı kullanın.Gözü birincil bakışta tutmak ve üçüncü göz kapağını geri çekmek için limbusun hemen bitişiğindeki konjonktivaya saat 4 ve 8 pozisyonlarında iki adet 6-0 ipek sütür yerleştirin. Manipülasyonlarına yardımcı olmak için dikişlerin uçlarını küçük sivrisinek hemostatlarıyla sıkıştırın ve göze nüfuz etmemeye dikkat ederek limbusun kalınlığı boyunca limbustaki saat 12 pozisyonunda başka bir dikiş yerleştirin. Sütürü gevşek bir şekilde düğümleyin, ucu kısa kesin ve gözü ve birincil bakışı tutmak için saat 4 pozisyonunda limbusun hemen bitişiğindeki konjonktivaya bir kalış sütürü yerleştirin.Bulber konjonktivayı saat 10 ila 2 arasında yansıtın ve konjonktivayı limbustan iki ila üç milimetre kesmek için tenotomi makası kullanın. Konjonktivayı zayıflatın ve sklerayı limbustan üç ila beş milimetre uzaklıktaki saat iki ve 10 vitrektomi liman bölgelerinde açığa çıkarmak için Tenon'un kapsülünü temizleyin. Sklerotomi bölgelerini tanımlamak için kumpaslar kullanın, kedide belirgin olabilecek ana skleral damarlardan kaçının.Sağ elini kullanan bir cerrah için saat 10 pozisyonundaki alet portunda üç milimetrelik bir bölge için planlama yaparak, önerilen sklerotominin bölgelerine bağlamadan 6-0 veya 7-0 poliglactin haç desenli dikişleri önceden yerleştirin. Dikişler yerleştirildikten sonra, asistanın dünyayı yerinde tutmaya yardımcı olmak için saat 12 pozisyonundaki dikişleri kavramasını sağlayın ve dokuyu sklerotomi bölgesinin yanında tutmak için 0.12 milimetre Castroviejo forseps kullanın. Lensle temas etmekten kaçınmak için optik sinire doğru açılı saat 2 ve 10 pozisyonlarında sklera boyunca 23 gauge vitrektomi portu sokmak için bir trokar kullanır ve uçların vitreus içinde görselleştirilip görselleştirilemeyeceğini belirlemek için sulama portunu hafifçe itmek için bağlama forsepsleri kullanır.Asistanın, gözün arka segmentinin görselleştirilmesine izin vermek için korneaya Machemer büyütücü sulama vitrektomi lensi yerleştirmesini ve kısmi çekirdek vitrektomi gerçekleştirmek için alet portundan 23 gauge vitrektomi probu kesicisini yerleştirmesini sağlayın. Daha sonra, bir mililitre triamsinolon çözeltisi içeren bir mililitrelik bir şırınganın iğnesini cihaz portuna sokun ve kristal süspansiyonun 250 ila 500 mikrolitresini enjekte edin. Çözelti verildiğinde, vitrektomi probunu alet portundan geçirerek, port retinal yüzeyden uzağa bakacak şekilde optik sinir kafasına yakın olacak şekilde ilerletin.Vitreal yüzün retinadan ayrılmasına yardımcı olmak için yüksek vakum kullanın, enjektörü alet portundan retina yüzeyine doğru yerleştirin ve kanül ucunu ekstrüde edin. Retina yüzeyinin ucuna hafifçe bastırın ve asistanın retina dekolmanı başlatmak için şırınga pistonuna hafif bir hızlı itme yapmasını sağlayın, istenen boyuta ulaşana kadar retina dekolmanı yavaş bir şekilde artmasına izin vermek için enjeksiyon basıncını azaltın. Retina makası sokulana kadar dekolmanı hafifçe büyütmek için enjektörün 41 gauge kanülünü kullanın ve saat 10 pozisyonundaki skleral portu çıkarın.Ardından, bu bölgedeki sklerotomiyi büyütmek için lense dokunmaktan kaçınmak için optik sinire doğru yönlendirilmiş düz bir 2.850 milimetre yarık bıçak kullanın. Nakledilen bölgeden kaynaklanan retinal sinir liflerine zarar vermemek için bleb üzerindeki retinotomiyi optik sinirden uzaklaştırın ve kanama riskini azaltmak için büyük retina damarlarını kesmekten kaçının. Organoidleri implante etmek için, genişlemiş sklerotomi yoluyla retinotomi bölgesine doğru organoidlerle yüklü bir cam kılcal damar yerleştirin ve subretinal bleb açıklığına erişime izin vermek için retinotomiyi hafifçe açmak için kılcal damarın ucunu kullanın.Organoidleri subretinal bleb içine enjekte etmek için asistanın enjektörün pistonuna yavaşça tekrar basmasını sağlayın. BSS organoidleri, organları ilerletmeli ve retinotomi açık bırakmalıdır. Tüm organoidler teslim edildiğinde, kılcal damarı gözden yavaşça çıkarmadan önce cam kılcal damarı birkaç saniye yerinde bırakın ve ani sıvı salınımını önlemeye özen gösterin.Kılcal damar çıkarıldığında, önceden yerleştirilmiş dikişi çapraz bir düzende kullanarak sklerotomiyi kapatın. Asistanın infüzyon portunu çıkarmasını sağlayın ve sklerotomi sütürünü hızlı bir şekilde bağlayın ve peritomiyi poliglactin sütürleri ile basit bir sürekli düzende kapatın. Lateral kantotomiyi 6-0 poliglactin sütürü ve lateral kanthus yapmak için sekiz rakamlı deri sütürleri ile kapatın ve yaranın geri kalanını kapatmak için basit kesilmiş cilt sütürleri kullanın.Daha sonra uygun ameliyat sonrası steroid ve antibiyotik kokteylini uygulayın. İnsan pluripotent kök hücre kaynaklı retinal organoid yüklemesi, enjeksiyon cihazının cam kanülü içinde ve ameliyat sırasında doğrudan görselleştirme ile doğrulanabilir. Subretinal boşlukta organoidlerin varlığı postoperatif olarak oftalmik muayene ve fundus görüntülemesi ile doğrulanabilir.Ötanaziden önce, organoidlerin pozisyonunu değerlendirmek için konfokal taramalı lazer oftalmoskopi ve spektral alan optik koherens tomografi görüntüleme de yapılabilir. Bu teknikler, retinal organoidlerin nöral retina ile alıcı gözün retinal pigment epiteli arasındaki subretinal boşlukta kalıcılığını göstermek için kullanılabilir. Histolojik ve immünohistokimyasal analizler, immünsüprese bir hayvanda büyük bir gözün subretinal boşluğundaki ksenojenik grafiklerin hayatta kalmasını göstermek için kullanılabilir.Sadece eğitimli veteriner oftalmologlar veya vitreoretinal cerrahlar gibi vitreoretinal cerrahide yetenekli olanlar, insan gözüne kıyasla kedi gözündeki tür farklılıklarına aşina olanlar bu prosedürü üstlenmelidir. Bu videoda sunulan teknik, vitreoretinal cerrahi tekniklerin kliniklere çevrilmesinde kullanılan diğer büyük hayvan modellerine uygulanabilir olmalıdır.

subretinal-transplantation-human-embryonic-stem-cell-derived-retinal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Hücre nakli fotoreceptör kaybı ile karakterize retina dejenerasyonu tedavisi için bir stratejiyi temsil eder. Burada, nakledilebilir fotoreceptörlerin zenginleştirilmesi ve yetişkin farelere alt deri nakli için bir yöntem açıklıyoruz.

MACS Saflaştırılmış Fotoreceptör Öncü Hücrelerinin Yetişkin Fare Retinasına Subretinal Transplantasyonu

Burada, sıçanlarda ve farelerde bir RPE hücresi bolusunu subretinal olarak enjekte etmek için multimedya formatında topluluk tarafından kabul edilen bir protokol sunuyoruz. Bu yaklaşım, retinal dejenerasyonun hayvan modellerinde implantasyon üzerine aşılanmış RPE hücrelerinin kurtarma potansiyellerini, güvenlik profillerini ve hayatta kalma kapasitelerini belirlemek için kullanılabilir.

Süspansiyon Retina pigment epiteli Hücreleri sunun Kemirgenler Subretinal Enjeksiyonları Sahne

Subretinal enjeksiyon kök hücre replasman tedavisi için yaşa bağlı makula dejenerasyonu preklinik çalışmalarda yaygın olarak uygulanmıştır. Görüntülenmeyecektir bu makalede, biz daha az riskli, tekrarlanabilir ve tam olarak değiştirilmiş subretinal enjeksiyon tekniğini hücrelerin sıçan gözlerinin içine sunmak için trans-scleral yaklaşım yoluyla tanımlamak.

Sıçan gözlerinin içine insan retina Pigment epitel hücrelerinin Trans-scleral Subretinal nakli için rafine bir protokol geliştirilmesi

Retina pigment epitel hücreleri hücre-replasman tedavisi için Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu gelişmiş form olarak hizmet verebilir. Bu iletişim kuralı coğrafi Atrofi büyük gözlü modeli ve hastalık bu modeline insan embriyonik kök hücre kaynaklı retina pigment epitel hücrelerinin nakli subretinal nesil açıklar.

Büyük gözlü manken coğrafi Atrofi, içine insan embriyonik kök hücre elde edilen retina Pigment epitel hücrelerinin subretinal nakli

İnsan olmayan primat (NHP), anatomik ve genetik benzerlikler nedeniyle insan retina hücresel terapötiklerini incelemek için ideal bir modeldir. Bu makalede, NHP gözündeki retina pigment epitel hücrelerinin submaküler nakli için bir yöntem ve makula manipülasyonu ile ilişkili intraoperatif komplikasyonları önleme stratejileri açıklanmaktadır.

Dejeneratif Retina Hastalıkları için İnsan Dışı Primat Modelinde Retina Pigment Epitel Transplantasyonu

Bu protokol, retina dejenerasyonu olan veya olmayan fare alıcılarında düşük cerrahi komplikasyon oranıyla subretinal hücresel greftleri güvenli ve hassas bir şekilde vermek için transpupiller görme kılavuzluğunda trans-skleral bir yaklaşım sunar.

Retinal Dejenerasyon Fare Modelinde Subretinal Greftlerin Transpupiller Kılavuzluğunda Transskleral Transplantasyonu

Kriyoprezervasyon sonrası hESC kaynaklı fotoreseptör progenitör hücrelerin hazırlanması ve bu hücrelerin rd10 farelerde retina altı verilmesi için ayrıntılı bir protokol tanımladık.

Rd10 Farelerde İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Fotoreseptör Progenitörlerinin Sub-Retinal Verilmesi

Biz insan nöronal atalarıdır ve sinir onarımı için gelişmekte olan MSS nöronal hücre tipleri büyük bir arz türetme sağlayan küçük moleküller ile tanımlanan koşullar altında tutulan pluripotent insan embriyonik kök hücreleri doğrudan neuroblasts indüksiyonu için bir protokol kurduk.

Küçük Molekül İndüksiyon Pluripotent İnsan Embriyonik Kök Hücreleri İnsan Nöronal atalarıdır ve Nöronlar Verimli türetilmesi

Nöral tüpten embriyonik nöral krest izolasyonu kullanımını...

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

Xenopus laevis hücre kaderinin şartname ve primer hücre kültüründe bireyin retina hücrelerinin fizyolojik fonksiyonu eğitim için ideal bir model sistem sağlar. Burada retina dokuları diseksiyon ve kalsiyum etkinliği için görüntülü ve in situ hibridizasyon ile analiz edilir primer hücre kültürlerinde üretmek için bir yöntem mevcut.

Diseksiyon, Kültür ve Analizi<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embriyonik Retina Doku

Keşfedin subretinal retinal organoid transplantasyonu için cerrahi tekniği, büyük hayvan modelinde insan embriyonik kök hücre kaynaklı doku kullanarak. Bu yöntem, retinal dejeneratif hastalıklar için hücre tedavisi geliştirmeye yönelik potansiyel sağlar.

Bir Kedi Büyük Hayvan Modelinde İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Retinal Dokunun Subretinal Transplantasyonu

Daha fazla video keşfet