Name: Astyanax mexicanusta Maksimal Üreme ve Yumurtlama için Artımlı Sıcaklık Değişiklikleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-14T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 36 s
Description: Öğrenin Astyanax mexicanus'ta artımlı sıcaklık rejimiyle maksimum yumurtlama protokolleri. Bu yöntem gelişimsel ve evrimsel biyoloji araştırmalarında genetik analiz için değerli bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Jeffery laboratuvarı A. mexicanus kültür tesisine değerli katkılarından dolayı David Martasian, Diedre Heyser, Amy Parkhurst, Craig Foote ve Mandy Ng'ye teşekkür ederiz. Jeffery laboratuvarındaki araştırma şu anda NIH hibe EY024941 tarafından desteklenmektedir.

Bu prosedür Maryland Üniversitesi, College Park Kurumsal Hayvan Bakımı yönergeleri tarafından onaylanmıştır (Şu anda IACUC 469 #R-NOV-18-59; Proje 1241065-1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61708/61708fig1.jpg"> Şekil 1. Bir üreme haftası ve üreme dışı bir hafta boyunca takvimler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61708/61708fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
1. Pazartesi
<ol><li>Sabah 9-10'da su testleri yapın ve aşağıdaki 1.1.1-4.<ol>
<li>Bir termometre kullanarak oda, tank ve rezervuar sıcaklıklarını kaydedin.</li>
		<li>Amonyak, nitrat ve nitrat seviyelerini kolorimetrik test kiti ile kaydedin.</li>
		<li>pH'ı izleme sisteminden ve kolorimetrik test kitinden kaydedin.</li>
		<li>Kary çocuk monitöründen ve ana sistem monitöründen iletkenliği kaydedin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sabah 10'dan itibaren tüm balıkları besleyin.<ol>
<li>Yetişkin sistemindeki tüm balıkları tetra pulları ile besleyin, tanklardaki pulları genç balıklarla ezin. Sadece bir balık tankı kadar pul besleyin, yaklaşık bir "parmak sıkışması" hakkında 3-5 dakika içinde tamamen tüketebilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Gelişmekte olan embriyoların parmak tozlarını barındırmak için kullanılan inkübatörü kontrol edin ve gerekirse suyu değiştirin.<ol>
<li>Embriyo inkübatörü açın ve tüm rezervuarlardaki su seviyelerini kontrol edin. Suları azalıyorsa, sistem suyu ekleyin. İnkübatör sıcaklık ayarlarını kontrol edin. Embriyoları 73-77 °F (23-25 °C) arasında yükseltin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Canlı yayını temizleyin.<ol>
<li>Kara kurtları temizlemek için, kültürlerini içeren açığa çıkarılmış Tupperware havzalarını canlı yem buzdolabından çıkarın ve solucan kümelerinin üzerindeki fazla suyu lavaboya dökün. Damıtılmış su kullanarak, dökülen su temizlenene kadar solucanları tekrar tekrar askıya alın ve durulayın.</li>
		<li>Solucan kümelerinin yaklaşık yarısını kaplar şekilde yeterli temiz su ekleyin. Kalan solucanları, ortaya çıkarılan canlı yem buzdolabında değiştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Balıkları besle.<ol>
<li>İlk beslemeden en az 30 dakika sonra, yumurta sarısı gevreği, kara kurtlar veya her ikisi ile üremenin istendiği tanklarda balık besleyin. Tank başına bir "fingerpinch" yumurta sarısı gevreği ekleyin. Tanktaki her balığın yaklaşık 5-10 solucan tüketmesine izin vermek için yeterli kara kurt kümesi ekleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Saat 10:00-13:00'te su sıcaklığını 74 °F olarak ayarlayın.</li>
	<li>Üreme tanklarını gerektiği gibi ovalayın ve üreme ağlarını ayarlayın.</li>
	<li>Tankları temizleyin ve ağları son beslemeden en az bir saat sonra yerleştirin. Ağların önceden yerleştirilecek tüm tankları temizleyin. Tanka hava beslemesini engellememek için üreme ağlarını dikkatlice ayarlayın.</li>
</ol>2. Salı
<ol><li>Embriyoları toplayın ve tüm üreme ağlarını yıkayın.<ol>
<li>Sabah 9-10'da, üreme ağlarını yetişkin sistem tanklarının dibinden çıkarın. Karyobeze bağlı hortumu kullanarak embriyoları hafifçe el ağlarına durulayın ve embriyoları dışarı çıkarmak için elde tutulan ağı temiz sistem suyunun bir parmak tonuna çevirin.</li>
		<li>Her embriyo setini toplayıp yıkayın ve ardından% 0.00003 metilen mavisi (mavi su) içeren temiz sistem suyunun bir parmak tokasına yerleştirin. Tek bir tanktan son derece fazla sayıda embriyo varsa, bunları birden fazla kaseye ayırın. Canlı embriyoların konsantrasyonu, her bir parmak ırağında 200 mL mavi su başına yaklaşık 100 olmalıdır.</li>
		<li>Yayınlanan A. mexicanus gelişimsel zaman tablosu17kullanarak embriyoları mikroskop altında evreleyerek döllenme zamanını tahmin edin.</li>
		<li>Embriyo içeren parmaklıkları sık sık izleyin. Ölü veya deforme olmuş embriyoları ve yenmemiş yiyecekler veya dışkı gibi döküntüleri pastör pipetle çıkarın. Mavi suyu sık sık parmaklıklarda değiştirin.</li>
		<li>Parmaklıkları 5-7 gün boyunca bir inkübatöre yerleştirin. Şu anda, yumurta sarısı kullanılmıştır ve daha fazla gelişme için canlı salamura karides ile beslenme kültürleri gereklidir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Yumurtlama verilerini alın.<ol>
<li>Embriyoları düşüren her tank için aşağıdaki bilgileri kaydedin.<ol>
<li>Tarihi ve tank numarasını kaydedin.</li>
			<li>Düşen yaklaşık embriyo sayısını kaydedin (Şekil 2): Yüksek (500+) Orta (200-500) Düşük(&lt;200)</li>
			<li>Düşen embriyoların kalitesini kaydedin (Şekil 2): Yüksek (%&gt;75 canlı) Orta (%-50 canlı) Düşük (%&lt;25 canlı)</li>
			<li>Astyanax mexicanus hazırlama tablosu17'yedanışarak orijinal yumurtlama süresini tahmin edin.</li>
			<li>Balıklar yumurtladığında sistemin ayarlanan sıcaklığı kaydedin.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bütün balıkları besle.</li>
	<li>Su sıcaklığını 76 °F olarak ayarlayın.</li>
	<li>Canlı yayın hazırlayın.</li>
	<li>Balık #2 besleyin.</li>
	<li>Tanklardan fazla yiyecek ve döküntüleri kepçeyle temizleyin ve ağları sıfırlamadan önce ovalayın.</li>
</ol>3. Çarşamba
<ol><li>2.1-2.2 arası adımları yineleyin. Embriyoları toplayın ve tüm üreme ağlarını yıkayın.</li>
	<li>Spawning verilerini daha önce olduğu gibi alın.</li>
	<li>Daha önce olduğu gibi su testleri yapın.</li>
	<li>Bütün balıkları besle.</li>
	<li>Su sıcaklığını 78 °F olarak ayarlayın.</li>
	<li>Canlı yayını hazırlayın.</li>
	<li>Kuluçka makinesindeki embriyoları kontrol et.<ol>
<li>Embriyoların suyunu, sonunda genel yetişkin üreme stoğunu yenilemek için kullanılacak olan parmaklıklarda temizleyin ve değiştirin. Metilen mavi arıtlı sistem suyu kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Balıkları tekrar besle.</li>
	<li>Tankları gerektiği gibi temizleyin ve ağları sıfırlayın.</li>
</ol>4. Perşembe
<ol><li>2.1-2.2 arası adımları yineleyin. Embriyoları toplayın ve üreme ağlarını yıkayın ve saklayın.</li>
	<li>Spawning verilerini daha önce olduğu gibi alın.</li>
	<li>Su sıcaklığını 76°F olarak ayarlayın.</li>
	<li>Canlı yayını temizleyin.</li>
	<li>Tüm tankları tek tek temizleyin.</li>
	<li>Kuluçka makinesindeki embriyoları kontrol et.</li>
	<li>Balık #2 besleyin.</li>
</ol>5. Cuma
<ol><li>Bütün balıkları besle.</li>
	<li>Su sıcaklığını 74 °F olarak ayarlayın.</li>
	<li>Canlı yayını temizleyin.</li>
	<li>Kuluçka makinesindeki embriyoları kontrol et.</li>
</ol>6. Cumartesi
<ol><li>Balıkları besle.</li>
</ol>7. Pazar
<ol><li>Balıkları besle.</li>
</ol>

<ol><li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cavefish+as+a+model+system+in+evolutionary+developmental+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Cavefish as a model system in evolutionary developmental biology.</a> Developmental Biology. 231, 1-12 (2001).</li>
<li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+model+systems+in+evo-devo%3A+cavefish+and+mechanisms+of+microevolution%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Emerging model systems in evo-devo: cavefish and mechanisms of microevolution.</a> Evolution & Development. 10, 265-272 (2008).</li>
<li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+development+in+the+cavefish+Astyanax%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Evolution and development in the cavefish Astyanax.</a> Current Topics in Developmental Biology. 86, 191-221 (2009).</li>
<li>Protas, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+cavefish+reveals+molecular+convergence+in+the+evolution+of+albinism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of cavefish reveals molecular convergence in the evolution of albinism.</a> Nature Genetics. 38, 107-111 (2006).</li>
<li>Protas, M., Conrad, M., Gross, J. B., Tabin, C. J., Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regressive+evolution+in+the+Mexican+cave+tetra%2C+Astyanax+mexicanus%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Regressive evolution in the Mexican cave tetra, Astyanax mexicanus.</a> Current Biology. 17, 452-454 (2007).</li>
<li>O'Quin, K. E., Yoshizawa, M., Doshi, P., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+genetic+analysis+of+retinal+degeneration+in+the+blind+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Quantitative genetic analysis of retinal degeneration in the blind cavefish.</a> PLoS ONE. 8 (2), 57281(2013).</li>
<li>Yoshizawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+genetic+architecture+underlies+the+emergence+of+sleep+loss+and+prey-seeking+behavior+in+the+Mexican+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biology%22%5BJournal%5D)">Distinct genetic architecture underlies the emergence of sleep loss and prey-seeking behavior in the Mexican cavefish.</a> BMC Biology. 13, 15(2015).</li>
<li>Elliot, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Astyanax+caves+of+Mexico.+Cavefishes+of+Tamaulipas%2C+San+Luis+Potosi%2C+and+Guerrero%5BTitle%5D)+AND+%22Association+for+Mexican+Cave+Studies+Bulletin%22%5BJournal%5D)">The Astyanax caves of Mexico. Cavefishes of Tamaulipas, San Luis Potosi, and Guerrero.</a> Association for Mexican Cave Studies Bulletin. 26, 1(2018).</li>
<li>Luo, S., Wu, B., Xiong, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+total+hardness+and+calcium%3Amagnesium+ratio+of+water+during+early+stages+of+rare+minnows+%28Gobiocypris+rarus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effects of total hardness and calcium:magnesium ratio of water during early stages of rare minnows (Gobiocypris rarus).</a> Comparative Medicine. 66, 181-187 (2016).</li>
<li>Balasch, J. C., Tort, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Netting+the+stress+responses+in+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Netting the stress responses in fish.</a> Frontiers in Endocrinology. 10, 62(2019).</li>
<li>Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBorowsky%2C+R+%22Determining+the+sex+of+adult+Astyanax+mexicanus%22">Determining the sex of adult Astyanax mexicanus</a>. , Cold Spring Harbor Protocols. (2008).</li>
<li>Paschos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+clocks%2C+feeding+time%2C+and+metabolic+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Circadian clocks, feeding time, and metabolic homeostasis.</a> Frontiers in Pharmacology. 6, 112(2015).</li>
<li>Scheiermann, C., Kunisaki, Y., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+control+of+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Circadian control of the immune system.</a> Nature Reviews Immunology. 13, 190-198 (2013).</li>
<li>Williams, M. B., Watts, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+basis+and+future+directions+of+zebrafish+nutrigenomics%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Current basis and future directions of zebrafish nutrigenomics.</a> Genes & Nutrition. 14, 34(2009).</li>
<li>Harper, C., Wolf, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologic+effects+of+the+stress+response+in+fish%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Morphologic effects of the stress response in fish.</a> ILAR Journal. 50, 387-396 (2009).</li>
<li>Neubauer, P., Andersen, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+performance+in+fish+is+explained+by+an+interplay+between+physiology%2C+behavior+and+ecology%5BTitle%5D)+AND+%22Conservation+Physiology%22%5BJournal%5D)">Thermal performance in fish is explained by an interplay between physiology, behavior and ecology.</a> Conservation Physiology. 7 (1), 025(2019).</li>
<li>Hinaux, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+staging+table+for+Astyanax+mexicanus%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Developmental staging table for Astyanax mexicanus.</a> Zebrafish. 8 (4), (2011).</li>
<li>Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBorowsky%2C+R+%22In+vitro+fertilization+of+Astyanax+mexicanus%22">In vitro fertilization of Astyanax mexicanus</a>. , Cold Spring Harbor Protocols. (2008).</li>
<li>Simon, V., Hyacinthe, C., Rétaux, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breeding+behavior+in+the+blind+Mexican+cavefish+and+its+river-dwelling+conspecific%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Breeding behavior in the blind Mexican cavefish and its river-dwelling conspecific.</a> PLoS One. 14 (2), 0212591(2019).</li>
<li>Harvey, B. J., Carolsfield, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+Breeding+in+Tropical+Fish+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22International+Development+Research+Centre%22%5BJournal%5D)">Induced Breeding in Tropical Fish Culture.</a> International Development Research Centre. , (1993).</li>
<li>Ma, L., Parkhurst, A., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+a+lens+survival+pathway+including+sox2+and+aA-crystallin+in+the+evolution+of+cavefish+eye+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22EvoDevo%22%5BJournal%5D)">The role of a lens survival pathway including sox2 and aA-crystallin in the evolution of cavefish eye degeneration.</a> EvoDevo. 5, 28(2014).</li>
<li>Krishnan, J., Rohner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cavefish+and+the+basis+for+eye+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Cavefish and the basis for eye loss.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 5 (372), 20150487(2017).</li>
<li>Bilandžija, H., Abraham, L., Ma, L., Renner, K., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+changes+controlled+by+catecholaminergic+systems+explain+recurrent+loss+of+pigmentation+in+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society%22%5BJournal%5D)">Behavioral changes controlled by catecholaminergic systems explain recurrent loss of pigmentation in cavefish.</a> Proceedings of the Royal Society. 285, (2018).</li>
<li>Ma, L., Jeffery, W. R., Essner, J. J., Kowalko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+editing+using+TALENs+in+blind+Mexican+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Genome editing using TALENs in blind Mexican cavefish.</a> PLoS ONE. 1093, 0119370(2015).</li>
<li>Klaassen, H., Wang, Y., Adamski, K., Rohner, N., Kowalko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR+mutagenesis+confirms+the+role+of+oca2+in+melanin+pigmentation+in+Astyanax+mexicanus%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">CRISPR mutagenesis confirms the role of oca2 in melanin pigmentation in Astyanax mexicanus.</a> Developmental Biology. 441, 313-318 (2018).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Astyanax mexicanus, sık sık yumurtlayan ve laboratuvarda kolayca yetiştirilebilen yeni bir biyolojik modeldir1,2. A. mexicanus mağara balıklarındaki evrimsel değişimlerin altında yatan gelişimsel mekanizmalarla ilgilendiğimiz için embriyo üretimi ve kullanımı araştırma hedeflerimiz için hayati önem taşımaktadır. Yetişkin bir balık stoğunun korunmasının birincil amacı, gelişim deneylerinde kullanılmak ve yetişkin üreme stoklarının yenilenmesi içi...

Teleost Astyanax mexicanus, yüzeyde yaşayan (yüzey balığı) bir forma sahiptir ve birçok farklı kör mağarada yaşayan (mağara balığı)form 1,2. Mağara balıkları sürekli karanlıkta ve yiyecek sınırlamaları altında evrimleşmiştir, bu da yeni yapıcı ve gerileyen özelliklerin ortaya çıkmasına neden3. Yapıcı özellikler arasında tat tomurcukları ve çene büyüklüğündeki artışlar, yanal çizginin duyu organları ve yağ rezervleri bulunur. Regresif özellikler melanin pigmentasyonunun, gözlerin ve uyku, okul ve saldırganlık gibi davranışların kaybını veya azaltılmasını içerir. Astyanax sisteminin bir özelliği, yapıcı ve gerici evrim4,5,6,7ile ilişkili genomik bölgeleri belirlemek için nicel özellik loci (QTL) eşlemesinin kullanılmasına izin vererek iki form arasındaki tam doğurganlıktır. A. mexicanus, laboratuvarda sık sık yumurtlamaya indüklenebildiğinden, gelişimi incelemek için avantajlı bir sistem sunar. A. mexicanus embriyoları yarı saydamdır, zebra balıklarından biraz daha büyüktür, büyük miktarlarda üretilir ve yaklaşık 8-12 ay içinde cinsel olarak olgun yetişkinlere dönüşür. Maksimum yumurtlama kapasiteleri yaklaşık 5 yıldır. Bu protokol, tipik bir üreme haftasında bir A. mexicanus kültür tesisinde ihtiyaç duyulan iş akışını açıklar ve balık sistemi bakımı ve maksimum yumurtlama için sıcaklık kontrol rejiminin ayrıntılarını içerir.
A. mexicanus kireçtaşı platolarından (yüzey balıkları) kaynaklanan nehirlerde ve kireçtaşı mağaralarındaki havuzlarda (mağara balıkları) yaşayan tropikal bir balıktır8. Kireçtaşı sert su üretmek için çözünür ve A. mexicanus sert suda gelişir. Sert su koşullarına uyarlanmış balıklar bir dizi tuzlu durumu tolere edebilir, ancak genellikle belirli olanlarda ürer9. Yumurtlama davranışının indüksiyonu faktörlerin bir kombinasyonu ile gerçekleştirilir. Balıklar soğukkanlı olduklarından ve homeostazlarını korumak için çevrelerine güvendikleri için, metabolizmaları çevresel değişikliklere duyarlıdır ve stresörlere daha hızlı tepki verirler10. A. mexicanus, su akışı, pH, iletkenlik, ozmotik basınç, aydınlatma ve su sıcaklıklarının özenle düzenlenmiş koşulları altında su sistemlerinde kültürlenmelidir.
Jeffery laboratuvarında, balıklar iki akan su sisteminde tutulur: (1) cinsel olgunluluk öncesinde genç yetişkin balıklar için bir "bebek sistemi" ve (2) cinsel olarak olgun, üreme yetişkinleri için yetişkin (veya ana) bir sistem. "Bebek sistemi", akan su ile birlikte verilen 8 L ve 15 L tanklardan oluşur. "Bebek sistemi", larvalardan yetiştirilen yavru ve genç metamorfozize yavrular tarafından daha küçük (1-10 L) tanklarda tohumlanır ve bu tanklarda haftalık olarak su alışverişi yapılır. Larvalar, yavrular ve gençler son derece gıdaya bağımlıdır ve yüksek oranda hayatta kalma sağlamak için günde bir kez canlı yiyeceklerle (salamura karides) beslenmelidir. "Bebek sisteminden" genç gençler yaklaşık 1-1,5 yıl sonra yetişkin sistemine yerleştirilir. İlk başta, toz haline getirilmiş tetra pulları ile beslenirler ve daha fazla büyümeden sonra normal yetişkin beslenme rejimine aktarılırlar. Cinsel olgunluk kadınlarda karın hacmi ile değerlendirilebilir ve cinsiyet belirleme yöntemleritanımlanmıştır 11. Yetişkin sisteminde, su 24 saatlik periyotta 3 kez 42 L tankta otomatik olarak değiştirilir. Yetişkin sistemi her gün görsel muayene ve problardan gelen otomatik sıcaklık, pH ve iletkenlik okumaları ile izlenir. Optimum pH yaklaşık 7,4'tür ve 6,8-7,5 arasında değişebilir, sistemin taban sıcaklığı 72/73 °F ve ideal iletkenlik 600-800 mS arasında değişir. Su kalitesi üzerinde bağımsız kontroller, renk ölçümü testi kullanılarak pH, amonyak ve nitrat için sıcaklık ve ölçüm suyu kalite parametrelerinin ölçülmesi ile haftalık olarak yapılır. Amonyak ve nitrat seviyeleri, sisteme yararlı bakteriler (örneğin Nutafin Döngüsü) eklenerek sıfıra yakın veya sıfıra yakın tutulur. Oda aydınlatması, 14 saatlik ışığa ve 10 saatlik karanlık periyotlara göre ayarlanmış bir zamanlayıcı ile kontrol edilir. Yukarıda belirtilen genel su kalitesi parametrelerine ek olarak, aşağıdaki hususların bir üreme haftasında özel dikkat edilmesi gerekir.
Balıklar (laboratuvardaki mağara balıkları bile) sirkadiyen saatlerini ayarlamak için ışık döngülerine bağlı olduğundan, ilk dikkat edilmesi gereken fotoperiyoddur. Sirkadiyen ritimler üreme ve beslenmeden bağışıklık sistemi sağlığına kadar her şeyi etkileyebilir12,13 ve maksimum sağlık yararları için tutarlı olmalıdır. Balıklar 14 saatlik ışık ve 10 saatlik karanlık fotoperiyod üzerinde akan su sisteminde tutulur. Yüzey balıkları genellikle sistem karardıktan bir saat sonra yumurtlamaya başlar ve bu süre zarfında tanıtılan ışık yumurtlamaya müdahale edebilir ve sonlandırabilir. Kör mağara balıklarının yumurtlaması ışıktan daha az rahatsızdır. Yüzey balıklarının yumurtlamasıyla karşılaştırıldığında, mağara balıklarının yumurtlaması gecikir, genellikle sistem karardıktan dört ila beş saat sonra başlar.
İkinci husus beslenmedir. Yetişkin balıklar normalde günde bir kez tetra gevreği diyeti ile beslenir. Yumurtlamadan önce, balıklar ekstra miktarlarda tetra gevreği ve diğer yiyeceklerle desteklenmiş protein bakımından zengin bir diyetle beslenir: yumurta sarısı gevreği ve bazen yaşayan Kaliforniya kara kurtları (Lumbriculus variegatus) önceki yumurtlama döngüsü sırasında yumurta üretimi nedeniyle protein kaybını telafi etmek için. Üreme haftasında, balıklar günde iki kez, sabah bir kez ve öğleden sonra / akşam tekrar beslenir. Günde sadece bir kez beslenen balıklar, ancak yiyeceklerin çok büyük bir kısmı ile kaçınılmalıdır, çünkü bu yetersiz beslenmeye neden olabilir14.
Üçüncü husus uzaydır. Alan gereksinimleri, bir yetişkinin ortalama vücut kütlesinin yanı sıra balıkların okul davranışına veya agresif davranışlara sahip olup olmadığı gibi davranışsal hususlara dayanmaktadır. Aşırı veya az kalabalık tanklar, artan saldırganlık ve sürekli strese yol açabilir, balıkları tank arkadaşlarının yaralanmasına karşı savunmasız hale getirir ve yumurtlamaya katılmak için isteksiz15. Genellikle 42 L tank başına 10-20 balık barındırıyoruz.
Dördüncü husus sıcaklıktır. Yukarıda belirtildiği gibi, balıklar soğukkanlı hayvanlardır ve vücut sıcaklığını korumak için çevreye güvenirler. Sıcaklığın metabolik süreçler üzerinde doğrudan bir etkisi olduğundan, sıcaklıktaki değişiklikler balıklarda davranış değişikliklerini tetikleyebilir16. Bu üreme programı sıcaklıkta iki haftalık döngülerden oluşur: ilk hafta 78 ° F'ye bir sıcaklık artışı sağlar ve ertesi hafta 72 ° F statik sıcaklığı korur. İlk (üreme) hafta boyunca, her akşam tankların dibine plastik kenarlı üreme ağları yerleştirilir. Üreme ağları, tanklardaki balıklar ile yumurtlanan yumurtalar arasında bir bariyer görevi görer, aksi takdirde tüketilir. Sıcaklık hafta ortasına kadar günde 2 ° F ile maksimum 78 ° F'ye yükseltilir ve yumurtlama bu haftanın ilk 2-3 akşamındaki ışık döngüsüne göre indüklendi. Sıcaklık daha sonra haftanın kalan günlerinde 2 ° F artışla 72 ° F'ye düşürülür ve baz sıcaklık bir sonraki üreme haftasının başına kadar korunur. Üreme genellikle balık zamanının iyileşmesine izin vermek için ayda en fazla iki kez uyarılır.
Genel olarak, bu yöntem daha uzun bir süre boyunca en yüksek kaliteli embriyoların büyük miktarlarda yumurtlasını sağlar.

<table><tbody><tr><td>Karakurtlar</td><td>Doğu Su Sporları, Lancaster, PA</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Üreme Ağları</td><td>Özel yapım</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Salamura karides yumurtaları</td><td>AquaCave Gölü Ormanı, IL.</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Kolorimetrik test kiti</td><td>Petco</td><td>SKU:11916</td><td>API Tatlı su pH Test</td></tr><tr><td>Kiti Yumurta sarısı gevreği</td><td>Pentair, Minneapolis, MN</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Parmak Kaseleri</td><td>Carolina Biyolojik Tedarik</td><td>741004</td><td>Kültür kapları, 4,5 inç, 250 mL</td></tr><tr><td>El ağları Embriyolar</td> için <td>Herhangi Bir Evcil Hayvan Mağazası</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kuluçka</td><td>Makinesi Fisher Scientific</td><td>51-029-321HPM</td><td>405 L</td></tr><tr><td>Anında Okyanus deniz tuzları</td><td>Spektrum Markaları, Blacksburg, VA</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Metilen Mavisi</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>M9140</td><td></td></tr><tr><td>Pastör Pipetleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20</td><td>5.75 inç.</td></tr><tr><td>Net ıslatma çözümü</td><td>Herhangi Bir Evcil Hayvan Mağazası</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nutrafin Döngüsü</td><td>Amazon</td><td>Yok</td><td>Canlı</td></tr><tr><td>besleme için bakteri</td> takviyeli buzdolabı <td>Herhangi bir kaynak</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Herhangi bir kaynak</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Termometre</td><td>Herhangi bir kaynak</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tetra Tropikal Cips</td><td>Spektrum Markaları, Blacksburg, VA</td><td>Yok</td><td></td></tr></tbody></table>

astyanax mexicanus'ta maksimal Üreme ve yumurtlama için artımlı sıcaklık değişiklikleri

Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus

Meksika tetrası, Astyanax mexicanus, gelişim ve evrim çalışmaları için gelişmekte olan bir model sistemidir. Bu türdeki göz yüzeyi (yüzey balıkları) ve kör mağara (mağara balıkları) morflarının varlığı, morfolojik ve davranışsal evrimin altında kalan mekanizmaları sorgulamak için bir fırsat sunun. Mağara balıkları yeni yapıcı ve gerici özellikler geliştirmişler. Yapıcı değişiklikler arasında tat tomurcukları ve çenelerdeki artışlar, yanal çizgi duyu organları ve vücut yağları bulunur. Gerileyen değişiklikler arasında gözlerin kaybı veya azalması yer almaktadır. melanin pigmentasyonu, okul davranışı, saldırganlık ve uyku. Bu değişiklikleri deneysel olarak sorgulamak için, çok sayıda yumurtlanmış embriyo elde etmek çok önemlidir. Orijinal A. mexicanus yüzey balıkları ve mağara balıkları 1990'larda Teksas ve Meksika'da toplandığından beri, torunları Jeffery laboratuvarında iki ayda bir çok sayıda embriyo yetiştirmeleri ve doğurmaları için rutin olarak uyarıldı. Üreme gıda bolluğu ve kalitesi, açık-karanlık döngüler ve sıcaklık tarafından kontrol edilmesine rağmen, artımlı sıcaklık değişikliklerinin maksimum yumurtlamayı teşvik etmede önemli bir rol oynadığını bulduk. Bir üreme haftasının ilk üç gününde sıcaklığın 72 ° F'den 78 ° F'ye kademeli olarak artması, maksimum sayıda yüksek kaliteli embriyo ile art arda iki-üç yumurtlama günü sağlar ve ardından yumurtlama haftasının son üç gününde sıcaklığın kademeli olarak 78 ° F'den 72 ° F'ye düşmesi takip edilir. Bu videoda gösterilen prosedürler, artımlı sıcaklık uyarılmış yumurtlama için bir laboratuvar üreme haftasından önce ve sırasında iş akışını özetler.

Genellikle San Luis Potosi'deki Nacimiento del Rio Choy'da toplanan yüzey balıklarının torunlarını yetiştirir ve yumurtlarız. Meksika (Rio Choy yüzey balığı) ve San Solomon Springs Balmorhea Eyalet Parkı, Teksas (Teksas yüzey balıkları) ve Cueva de El Pachón (Pachón mağara balığı) Tamaulipas, Meksika'da türetilen mağara balıkları ve San Luis Potosi'deki Cueva de los Sabinos (Los Sabinos mağara balığı) ve Sotano de la Tinaja (Tinaja mağara balığı) Meksika.
Bir üreme haftası boyunca, çeşitli tan...

Bu makale, gelişimsel ve evrimsel çalışmalar için ortaya çıkan bir model olan Meksika tetra Astyanax mexicanus'tamaksimum yumurtlamayı teşvik etmek için artımlı bir sıcaklık rejimi için temel laboratuvar koşullarını ve protokollerini özetlemektedir.

Astyanax mexicanus'ta Maksimal Üreme ve Yumurtlama için Artımlı Sıcaklık Değişiklikleri

The Mexican tetra, Astyanax mexicanus, is an emerging model system for studies in development and evolution. The existence of eyed surface (surface fish) ...

Yani Astyanax mexicanas küçük bir balık olduğu için. Kuzeydoğu Meksika ve Güney Teksas'a özgüdür. Bununla ilgili önemli olan iki şekilde var olmasıdır.Formlardan biri büyük gözlere ve pigmentasyona sahip yüzeyde yaşayan bir balık, diğer form ise gözlerini kaybetmiş ve pigmentasyonunu kaybetmiş mağarada yaşayan bir balıktır. Hala yumurtlama, birbirleriyle melezleme yeteneğine sahiptirler, böylece genetik ve gelişimi incelemek için ileri genetik analizde kullanılabilirler. Ayrıca şeffaf olan büyük embriyolara sahiptir ve karşılaştırmalı gelişim biyolojisi çalışmak için kullanılabilirler.Bu yüzden uzun yıllardır gelişimin evrimini anlamak için bir sistem olarak kullanılıyorlar. Yumurtlama istenmeden birkaç gün önce, balıkları daha iyi beslemeye başlarız. Ayrıca sıcaklığı artarak arttırırız, böylece yumurtlamalarını istediğimiz süre içinde, yaklaşık iki veya üç günlük aşırı yumurtlama geçirirler ve iyi gelişen çok sayıda döllenmiş embriyo üretirler ve larva aşamalarından yetişkinlere.Balıkları.m saat 10:00'da bir tutam Tetra gevreği ile besledikten sonra, gelişmekte olan embriyoların parmak kaselerini barındırmak için kullanılacak inkübatöre bakın ve gerekirse suyu değiştirin. Tüm rezervuarlardaki su seviyesini kontrol edin ve düşük olan rezervuarlara sistem suyu ekleyin.Daha sonra inkübörü 23 santigrat dereceye ayarlayın İlk beslemeden en az 30 dakika sonra, üreme tanklarındaki balıkları bir tutam yumurta sarısı gevreği, tanktaki her balığın yaklaşık beş ila 10 solucan veya her ikisini de tüketmesine izin vermek için yeterli siyah solucan kümesi ile besleyin. İkinci beslemeden en az bir saat sonra, üreme tanklarını gerektiği gibi ovalayın ve tank hava kaynağına müdahale etmeden üreme ağlarını dikkatlice kurun. Ertesi sabah, üreme ağlarını yetişkin sistem tanklarının altlarından 9:00-10:00 saatleri arasında çıkarın.m.ve embriyoları hafifçe bir el ağına durulamak için bağlı hortumu kullanın. Ağı bir parmak kabı temiz sistem suyuna çevirin ve parmak kasesi başına yaklaşık 100 embriyoyu 0.00003% metilen mavisi ile desteklenmiş 200 mililitre temiz sistem suyuna aktarın. A-mexicanas gelişim takvimine göre döllenme zamanını tahmin etmek için embriyoları hafif bir mikroskop altında düzenleyin.Sahneledikten sonra, parmak kaselerini beş ila yedi gün boyunca bir inkübatöre yerleştirin ve kültürleri canlı salamura karidesle besleyin. Embriyoları düşüren her tank için, tarih ve tank sayısını kaydedin ve düşen embriyoların sayısını ve kalitesini kaydedin. Evreleme tablosuna göre ortalama yumurtlama süresini kaydedin ve balığın yumurtlama zamanında sistemin sıcaklığını kaydedin.Gün boyunca embriyoların parmak kaselerini izleyin, ölü veya deforme olmuş embriyoları ve yenmemiş yiyecekler veya dışkı gibi kalıntıları çıkarmak için bir mera pipeti kullanarak ve gerektiğinde mavi suyu değiştirerek izleyin. Saat 13:00'te.m. gösterildiği gibi üreme tanklarındaki balıkları besleyin ve su sıcaklığını 24 santigrat dereceye ayarlayın.Daha sonra tanklardaki fazla yiyecek ve döküntüleri çıkarın ve ağları sıfırlamadan önce tankları ovalayın. Çarşamba ve Perşembe günü, salı günü için gösterildiği gibi embriyo toplama ve değerlendirmesini tekrarlayın. Balıkları besleyin ve suyu uygun sıcaklığa ayarlayın.İnkübatördeki embriyoları kontrol edin ve parmak kase suyunu taze metilen mavisi arıtmalı sistem suyu ile değiştirin. Daha sonra üreme tanklarını gerektiği gibi temizleyin ve ağları sıfırlayın. Cuma günü, balıkları besledikten sonra, su sıcaklığını 23 santigrat dereceye ayarlayın ve inkübatördeki embriyoları kontrol edin.Cumartesi ve pazar günü balıkları besleyin. Bu şekilde, Rio Choy ve Texas Surface Fish ve Los Sabinos, Tinaha ve Pachon mağara balıkları için Temmuz 2017'den Mart 2020'ye kadar üreme verileri gösterilmiştir. Veriler üreme haftası ve tek bir üreme haftasında günde toplanan ortalama embriyo sayısı ile analiz edildi.Veriler, Rio Choy ve Texas Surface balıklarında ve Pachon mağara balıklarında üremenin yıl boyunca sürekli olduğunu göstermektedir. Çoğu Rio Choy yüzey balığının miktarı ve kalitesi düşük ve yüksek arasında, çoğu Teksas yüzey balığının ve Pachon mağara balığının miktarı ve kalitesi düşük ve orta arasındaydı. Yumurtlama oluşumu Tinaja veya Los Sabinos mağara balıklarında sürekli değildi, yumurtlama bu balıklarda yaz sonundan sonbahara kadar düşük veya yok.Los Sabinos mağara balıkları için en düşük yumurtlama seviyeleri kaydedilmiş olsa da, embriyoların kalitesi en iyisiydi. Genel olarak, bu yüzey balığı mağara balıklarına göre daha iyi bir yumurtlama miktarı ve kalitesi sergiledi. Bu sistemi kullanarak, iki ayda bir yüzlerce, aslında binlerce yumurta yumurtlayabiliriz ve bu yumurtalar daha sonra kullanılır, bu embriyolar daha sonra birçok farklı amaç için kullanılır.

incremental-temperature-changes-for-maximal-breeding-spawning

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Gen hedefleme mutajenez genom düzenleme teknikleri kullanılarak organizmaların geniş bir mümkündür. Burada, Astyanax mexicanus, yüzey balık ve cavefish içeren balık türlerinin efektör nükleazlar (Talens) gibi transkripsiyon aktivatörü kullanılarak hedeflenen gen mutasyon için bir protokol göstermektedir.

genom Düzenleme<em&gt; Astyanax mexicanustan</emKullanma&gt; Transkripsiyon Aktivatör benzeri Efektör Nükleazlar (Talens)

Akvaryumda tutulan balıkların üreme ekolojisinin incelenmesini sağlayacak bir dizi temel yöntem anlatılmıştır. Bunlar, SCUBA kullanarak balık toplamak, canlı balık taşımak ve akvaryumda tutulan vahşi balıkların üreme davranışlarını gözlemlemek için yararlı protokollerdir.

Akvaryumda Balıkların Üreme Ekolojisi Araştırmaları İçin Temel Yöntemler

Uzun vadeli çalışmalar evrim süreci ve adaptasyon mekanizmaları anlamak için gerekli. Genel olarak, bu çalışmalar araştırmacıların ömür boyu ötesinde taahhütleri gerektirir. Burada, güçlü bir yöntem büyük ölçüde doğal sistemlerinde boyuna verileri oluşturmak için state-of--art veri toplama gelişmeler açıklanmıştır.

Diriliş uyuyan Daphnia magna: Protokolü ve uygulamaları

Bu çalışmada, akut, kronik ve multigenerational bir bioassay turkuaz killifish Nothobranchius furzeritek ve kombine stresler etkilerini çalışmaya açıklar. Bu iletişim kuralı hayat-Tarih özellikleri (ölüm, büyüme, verimlilik, ağırlık) ve kritik termal maksimum çalışma için tasarlanmıştır.

Akut ve kronik Ecotoxicity test turkuaz Killifish Nothobranchius furzeri için iletişim kuralı

Bu iletişim kuralı, biz Astyanax mexicanus yetişkin doğurmak, larvalar yükseltmek nasıl gösterir ve bütün Dağı immünhistokimya yüzey fenotipleri karşılaştırmak ve morphotypes mağara sonrası larva balık gerçekleştirin.

Meksika Tetra Astyanax mexicanus analiz Post-larval fenotipleri ve bütün Dağı immünhistokimya için yetiştirme

Evrimsel modeli sistem Astyanax mexicanusgenler manipülasyon yaklaşımları açıklar. Üç farklı teknikler açıklanmıştır: Tol2-aracılı transgenesis, CRISPR/Cas9 ve nakavt morpholinos kullanarak ifade kullanarak genom hedeflenen manipülasyon. Bu araçları doğrudan soruşturma yüzey ve mağaralarda yaşayan biçimler arasında varyasyon yatan genlerin kolaylaştıracaktır.

Meksika Cavefish işlevinde Gene manipülasyon

Burada, davranışları ve hayati bir mechanosensory sistem boyama yöntemleri için yüksek üretilen iş çalışma Meksika cavefish bir dizi mevcut. Bu yöntemler davranışları çalışmaları için pratik ve düşük maliyetli bir yöntem sağlayan ücretsiz yazılım ve özel komut dosyalarını kullanın.

Davranışsal izleme ve Meksika Cavefish Neuromast görüntüleme

Bu iletişim kuralı embriyonik Astyanax cavefish gen ifadesinde görselleştirme sağlar. Bu yaklaşım belirsiz arka plan boyama en aza indirerek gen ifade sinyal, en üst düzeye çıkarma amacı ile geliştirilmiştir.

İn Situ hibridizasyon Astyanax embriyo için Wholemount

In vitro fertilizasyon, laboratuvar nüfusunu korumak ve akım uygulamaları için senkronize embriyolar üretmek için çeşitli model organizmalar ile yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. Burada, biz Meksika Tetra balık, Astyanax mexicanusfarklı nüfusu için bu tekniği uygulayan bir protokol sunuyoruz.

Gamete koleksiyonu ve Astyanax mexicanus In vitro fertilizasyon

Bu protokolün amacı, embriyonik doku aşılama teknikleri kullanılarak Cas9-mutajenize donör dokusundan elde edilen haploid forelimbs ile şimerik axolotls üretmektir.

Embriyonik Greftleme Yoluyla Mutant Haploid Ekstremiteler ile Şemerik Axolotls Üretimi

Mevcut protokol, kararlı ve doğrusal bir termal gradyan oluşturmak için ticari olarak temin edilebilen bileşenlerin kullanımını göstermektedir. Bu gradyan daha sonra planktonik organizmaların, özellikle omurgasız larvaların üst termal sınırını belirlemek için kullanılabilir.

Isı Bloğu Kullanarak Zooplankton için Termal Sınırların Belirlenmesi

Öğrenin Astyanax mexicanus'ta artımlı sıcaklık rejimiyle maksimum yumurtlama protokolleri. Bu yöntem gelişimsel ve evrimsel biyoloji araştırmalarında genetik analiz için değerli bir model sunar.

Astyanax mexicanus'ta Maksimal Üreme ve Yumurtlama için Artımlı Sıcaklık Değişiklikleri

Daha fazla video keşfet