Name: Fibrin ile zenginleştirilmiş ve tPAya duyarlı fototrombotik inme modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-04T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: Öğrenin, trombin ve rose bengal kullanılarak geliştirilen modifiye fototrombotik inme modelini. Bu yöntem, tPA'ya duyarlı fibrin-platelet karışıklı pıhtılar oluşturarak klinik öncesi inme araştırmaları için güvenilir bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NIH hibeleri (NS108763, NS100419, NS095064 ve HD080429'den C.Y.K.'ye; NS106592 Y.Y.S.'ye) desteklenmiştir.

Bu protokol, Virginia Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'nu takip eder. Şekil 1A , bu protokolün cerrahi prosedürlerinin sırasını özetlemektedir.
1. Ameliyat kurulumu
<ol><li>Ameliyattan en az 15 dakika önce küçük hayvan adaptörünün üzerine 37 °C sıcaklık ayarlı bir ısıtma pedi yerleştirin. Hayvan kafasının dönmesine izin veren adaptör için bir burun klipsi rulosu hazırlayın. Anestezikleri hazırlayın Ketamin (60 mg / kg) / Ksilazin (10 mg / kg).</li>
	<li>Makas, forseps, mikro iğne tutucular, kanama durdurucular, pamuklu çubuklar ve sütürler dahil olmak üzere cerrahi aletleri otoklavla sterilize edin (60 dakika boyunca 15 psi'de 121 °C). Doku tutkalı ve göz merhemi hazırlayın. Cerrahlar için 532 nm lazer koruma gözlüğünü hazırlayın. NOT: Bu protokol büyük bir sağkalım cerrahisi prosedürünü açıklar ve aseptik teknikler kullanılarak yapılmalıdır.</li>
	<li>Aydınlatma sistemini 532 nm lazer kaynağıyla kurun. Bir diş matkabı hazırlayın.</li>
	<li>Gül Bengal çözeltisini salin (10 mg / mL) içinde hazırlayın. Buz kovasına bir alikot sığır trombini (0.1 U / μL) yerleştirin.</li>
	<li>Ketoprofen'i (4.0 mg / kg) ameliyattan 30 dakika önce analjezi olarak fareye deri altına enjekte edin veya yerel kurumsal kılavuzlar tarafından önerilen analjezik rejimi kullanın.</li>
</ol>2. İpsilateral ortak karotis arterin bağlanması
<ol><li>22 ila 30 g ağırlığındaki 10-14 haftalık erkek C57BL / 6NCrl farelerini kas içi Ketamin (60 mg / kg) ve Xylazine (10 mg / kg) enjeksiyonu ile uyuşturun. NOT: Serebral kan akışının izlenmesi yoluyla ipsilateral ortak karotis arterin bağlanmasını kapsayan tüm cerrahi prosedürün ~ 120 dakika sürmesi beklenmektedir. Anestezi rejimi tipik olarak tüm bu süre boyunca etkili olacaktır, ancak anestezik derinlik en az 15 dakikada bir yeniden değerlendirilmelidir. Bu prosedürleri öğrenirken anestezinin yeniden dozlanması gerekebilir.</li>
	<li>Hayvanın tamamen uyuşturulduğundan emin olmak için ayak parmağınızı sıkıştırın. CCA ligasyonu için sol boyundaki kılları ve kafatası inceltme için baştaki tüyleri tüy dökücü kremle alın.</li>
	<li>Fareyi sırtüstü pozisyonda küçük hayvan adaptörünün üzerine yerleştirin. Cildi üç alternatif povidon-iyot ve% 70 etanol ile silerek cerrahi alanı sterilize edin.</li>
	<li>Fare kafasını kulak çubuklarını kullanarak sabitleyin. Diseksiyon mikroskobu altında, orta hattın yaklaşık 0,2 cm lateralinde bir çift mikro makas ve düz forseps kullanarak 0,5 cm'lik sol servikal insizyon yapın.</li>
	<li>Sol ortak karotis arteri (LCCA) ortaya çıkarmak için yumuşak dokuyu ve fasyayı ayırmak için bir çift ince tırtıklı forseps kullanın. Bir çift ince düz forseps kullanarak sol CCA'yı vagal sinirden dikkatlice ayırın.</li>
	<li>20 mm'lik segmentler halinde kesilmiş 5-0 ipek sütür kullanarak LCCA'nın etrafına kalıcı bir çift düğümlü sütür yerleştirin ve ardından steril yara klipsleri kullanarak yarayı kapatın.</li>
</ol>3. MCA dalının üzerinde kafatası incelmesi ve fotoaktivasyon
<ol><li>Fareyi küçük hayvan adaptörüne yüzüstü pozisyona çevirin. Burun klipsi rulosunu 15° döndürün. Cildi üç alternatif betadin ve% 70 etanol ile silerek cerrahi alanı sterilize edin.</li>
	<li>Göz ile kulak arasında yer alan temporalis kasını ortaya çıkarmak için sol göz ve kulak boyunca bir çift mikro makas ve düz forseps kullanarak saçlı deride 0,8 cm'lik bir kesi yapın (Şekil 1B).</li>
	<li>Diseksiyon mikroskobu altında, bir çift ince tırtıklı forseps ile sol parietal kemikte temporalis kasının kenarı boyunca 0.5 cm'lik bir kesi yapın. Mikro makasla temporalis kası üzerinde 0,3 cm'lik ikinci bir dikey kesi yapın. Parietal kemiğin ve skuamöz kemiğin kenarını ortaya çıkarmak için temporal kası geri çekin. Frontal ve parietal kemikler arasındaki koronal sütürün dönüm noktasını görselleştirdiğinizden emin olun (Şekil 1B,C).</li>
	<li>Sol MCA'yı ortaya çıkarmak için steril salin uygulayarak kafatasını nemlendirin. Skuamöz kemikteki proksimal MCA dalını bir işaretleyici kalemle işaretleyin. Pnömatik diş matkabı ile işaretli alanı çevreleyen yaklaşık 1 mm çapında bir daire çizin (hız kontrol cihazının %50'sinde çapak hızı ayarı) ve ardından alt duraya dokunmadan kafatasını yaklaşık 0.2 mm derinliğinde inceltin. Çok ince bir kemik tabakası kalana kadar delmeyi durdurun.</li>
	<li>Trombin (T, 0.1 U / μL, 80 U / kg) ve Gül bengal (RB, 10 mg / mL, 50 mg / kg) çözeltisini farenin vücut ağırlığına göre karıştırın. Örneğin, 25 g vücut ağırlığına sahip bir fare için 20 μL trombin (0.1 U / μL) ve 125 μL RB (10 mg / mL) karıştırın.</li>
	<li>T + RB çözeltisini (25 g vücut ağırlığı başına 145 μL) bir insülin şırıngası (#31G iğnesi) ile retro-orbital sinüse yavaşça enjekte edin. NOT: Pilot deneylerde, standart RB boya dozu (50 mg / kg) ile karıştırılmış artan trombin dozlarının mortalite oranı fotoaktivasyon açısından incelenmiştir. Mortalite 80 U/kg trombin için %0 (n=13), 120 U/kg trombin için %43 (n=7) ve hem 160 U/kg (n=5) hem de 200 U/kg trombin (n=5) için %100 idi. Bu nedenle bu model için 80 U/kg'lık bir trombin dozu seçildi. Retro-orbital sinüs T+RB enjeksiyonundan sonra orbital boşluğun yakınında yaygın kan pıhtılaşması olasılığını dışlamak için lazer benek kasılma görüntüleme de kullanıldı (Ek Şekil 1) ve ayrıca lazer aydınlatmasına maruz kalmayan kontralateral hemisferde yaygın fibrin birikimi (Ek Şekil 2).</li>
	<li>Kuruluğu önlemek için her iki göze de göz merhemi sürün.</li>
	<li>Aydınlatıcıyı 532 nm lazer ışığıyla (0,5 mW enerji ile) delinmiş alana 2 inç mesafeyle 20 dakika boyunca uygulayın. MCA'nın proksimal dalındaki aydınlatmayı bir lazer koruma gözlüğü ile görselleştirin (Şekil 1C,D). NOT: 532 nm aydınlatmalı MCA, gözlüğün altında kırmızı floresan gösterir. Distal MCA, 10 dakikalık aydınlatmadan sonra kaybolacaktır. 20 dakikalık aydınlatmadan sonra distal MCA akışı hala mevcutsa hayvanı hariç tutun.</li>
	<li>20 dakika sonra lazer aydınlatmasını durdurun. Yarayı steril yara klipsleriyle kapatın.</li>
</ol>4. İntravital görüntüleme (isteğe bağlı)
NOT: Trombüs oluşumunu in vivo olarak karakterize etmek için, fotoaktivasyon sistemi23 ile bir spin-disk konfokal ile intraviral görüntüleme kullanın.
<ol><li>Kafatasının parietal kemiği üzerinde ~ 3 mm çapında bir kraniyal pencere yapın.</li>
	<li>Kraniyal pencereye bir kapak camı yerleştirin ve distal MCA'yı (~ 50 μm çapında) 20x suya daldırma hedefinin altına yerleştirin.</li>
	<li>Görüntülemeden 5 dakika önce DyLight488-konjuge anti-GPIbβ antikorunun (0.1 mg / kg) kuyruk damarı enjeksiyonu ile dolaşımdaki trombositi etiketleyin.</li>
	<li>Trombin (80 U / kg) ve Rose bengal (50 mg / kg) karışım solüsyonunu görüntülemeden 5 dakika önce retro-orbital ile enjekte edin.</li>
	<li>10 μm çapında lazer ışını ile 561 nm lazer sistemi kullanarak MCA'yı fotoaktif hale getirin ve görüntüyü trombüs oluşana kadar kaydedin.</li>
</ol>5. tPA yönetimi
<ol><li>Anestezi uygulanmış hayvanı 37 °C'lik ılık bir ped üzerine yerleştirin. Seçilen fotoaktivasyon sonrası zaman noktasında, bir gazlı bezi ~45 °C ılık suyla ıslatın ve 1 dakika boyunca kuyruğa sarın.</li>
	<li>Rekombinant insan tPA'sını (10 mg / kg) infüzyon pompası ile 30 dakika boyunca% 50 bolus ve% 50 ile kuyruk damarından enjekte edin. NOT: Akut iskemik inme tedavisi için rekombinant insan tPA'sının klinik dozu 0.9 mg / kg olmasına rağmen, kemirgenlerde azalmış türler arası tPA reaktivitesini telafi etmek için daha yüksek bir doz (10 mg / kg) yaygın olarak kullanılır. Ayrıca, klinik öncesi inme modellerinde %50'sini bolus olarak ve %50'sini 30 dakika boyunca kuyruk damarından infüze ederek standart tPA uygulama protokolünü izledik.24</li>
</ol>6. Serebral kan akışının izlenmesi (CBF)
NOT: tPA tedavisinden sonra CBF iyileşmesini doğrulamak için, iki boyutlu bir lazer benek kontrast görüntüleme sistemi15 kullanın ve fototrombozdan hemen sonra (adım 3.9) veya tPA tedavisinden 24 saat sonra kaydedin.
<ol><li>Anestezi uygulanmış hayvanı yüzüstü pozisyona getirin ve kafatası açıkta kalacak şekilde kafa derisinde orta hat kesisi yapın.</li>
	<li>Kafatasını steril salinle nemlendirin ve ultrason jelini kafatasına nazikçe uygulayın. Jölede CBF sinyalini engelleyecek herhangi bir saç ve kabarcıktan kaçının.</li>
	<li>CBF'yi her iki serebral hemisferde lazer benekli kontrast görüntüleyici altında 10 dakika boyunca izleyin.</li>
	<li>CBF görüntüsünü kaydettikten sonra, kafa derisini doku yapıştırıcısı ile kapatın ve hayvanı kafese geri koyun.</li>
	<li>Seçilen bölgelerde CBF'yi analiz edin ve kontralateral bölgeye kıyasla CBF iyileşme yüzdesini hesaplayın.</li>
	<li>Ardından, hayvanı iyileşmesi için sıcak bir kafese geri koyun. Fareleri anesteziden kurtulana kadar 5-10 dakika izleyin. Islanan yiyecekleri kafese koyun ve hayvan bakım tesisine geri koyun. NOT: Yerel kurumsal kılavuzların önerdiği şekilde ameliyat sonrası analjezi sağlayın.</li>
</ol>7. Trifenil tetrazolyum klorür (TTC) boyama ile enfarktüs hacmi ölçümü
<ol><li>Fototrombozdan yirmi dört saat sonra, hayatta kalmama cerrahisi için yerel kurumsal yönergelere göre hayvanı derinlemesine uyuşturun. NOT: Tribromoetanol (avertin) 250 mg/kg'ı intraperitoneal (IP) enjeksiyon yoluyla uyguluyoruz.</li>
	<li>PBS ile transkardiyal perfüzyon gerçekleştirin, taze beyin toplayın ve% 3 agar jeli içine gömün.</li>
	<li>Beyin dilimini 1 mm kalınlığında vibratom ile bölümlere ayırın ve% 2 TTC çözeltisinde 10 dakika inkübe edin.</li>
	<li>ImageJ yazılımı ile 6 beyin diliminden toplam enfarktüs hacmini mutlak hacim olarak ölçün. NOT: Beyin ödemi iki nedenden dolayı sonuç ölçümü olarak kullanılmamıştır. İlk olarak, TTC boyası, ödemden daha ciddi bir sonuç olan doku canlılığını (mitokondriyal redüksiyon aktivitesi yoluyla) ölçer. İkincisi, enfarktüs ilerledikçe hem vazojenik hem de sitotoksik ödem oluşur ve standart beyin ödemi ölçüm yöntemleriyle kolayca ayırt edilemez. Bununla birlikte, kan-beyin bariyerinin (BBB) bütünlüğünü değerlendirmek için anti-immünoglobin (IgG) etiketlemesi kullandık ve hem RB hem de T + RB inme modellerinde fotoaktivasyondan 6 saat sonra karşılaştırılabilir IgG ekstravazasyonu bulduk (Ek Şekil 3).</li>
</ol>8. Trombüs oluşumu ölçümü
NOT: Trombüs oluşumunu ölçmek için, immünokimya (IHC) ile MCA'da trombüs ölçümü için fototrombozdan 1 saat ve 2 saat sonra beyni toplayın ve immünoblot ile beyin hemisferinde fibrin ölçümü için sırasıyla.
<ol><li>Pıhtı kompozisyonunun karakterizasyonu için IHC'yi gerçekleştirin. Beyni gece boyunca% 4 paraformaldehit ile sabitleyin ve ardından OCT yerleştirme için beyni% 30 sükroz ile kurutun.</li>
	<li>Beyni 20 μm kalınlığında sagital yönelimle bölümlere ayırın ve fibrinojen, trombosit (glikoprotein IIb), kırmızı kan hücresi (TER119) ve kan damarına (izolektin GS-IB4) karşı spesifik antikorlarla IHC'yi gerçekleştirin.</li>
	<li>Fibrinojene karşı bir antikor ile immünoblot ile beyin yarımküresinde fibrin ölçümü yapın.</li>
</ol>

<ol><li>Lyden, P. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLyden%2C+PD+%22Thrombolytic+Therapy+for+Acute+Stroke.+3%2Fe%22">Thrombolytic Therapy for Acute Stroke. 3/e</a>. , Springer. (2015).</li>
<li>Linfante, I., Cipolla, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+reperfusion+therapies+in+the+era+of+mechanical+thrombectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Stroke+Research%22%5BJournal%5D)">Improving reperfusion therapies in the era of mechanical thrombectomy.</a> Translational Stroke Research. 7 (4), 294-302 (2016).</li>
<li>Campbell, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endovascular+Therapy+for+Ischemic+stroke+with+perfusion-imaging+selection%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Endovascular Therapy for Ischemic stroke with perfusion-imaging selection.</a> The New England Journal of Medicine. 372 (11), 1009-1018 (2015).</li>
<li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+two+pathophysiologies+of+focal+brain+ischemia%3A+implications+for+translational+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">The two pathophysiologies of focal brain ischemia: implications for translational stroke research.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 32 (7), 1310-1316 (2012).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.</a> Annals of Neurology. 17 (5), 497-504 (1985).</li>
<li>Watson, B. D., Prado, R., Veloso, A., Brunschwig, J. P., Dietrich, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+blood+flow+restoration+and+reperfusion+injury+after+ultraviolet+laser-facilitated+middle+cerebral+artery+recanalization+in+rat+thrombotic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral blood flow restoration and reperfusion injury after ultraviolet laser-facilitated middle cerebral artery recanalization in rat thrombotic stroke.</a> Stroke. 33 (2), 428-434 (2002).</li>
<li>Uzdensky, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photothrombotic+stroke+as+a+model+of+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Stroke+Research%22%5BJournal%5D)">Photothrombotic stroke as a model of ischemic stroke.</a> Translational Stroke Research. 9 (5), 437-451 (2018).</li>
<li>Karatas, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombotic+distal+middle+cerebral+artery+occlusion+produced+by+topical+FeCl%283%29+application%3A+a+novel+model+suitable+for+intravital+microscopy+and+thrombolysis+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 31 (3), 1452-1460 (2011).</li>
<li>Orset, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+in+situ+thromboembolic+stroke+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mouse model of in situ thromboembolic stroke and reperfusion.</a> Stroke. 38 (10), 2771-2778 (2007).</li>
<li>Orset, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+Alteplase+in+a+mouse+model+of+acute+ischemic+stroke%3A+A+retrospective+pooled+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Efficacy of Alteplase in a mouse model of acute ischemic stroke: A retrospective pooled analysis.</a> Stroke. 47 (5), 1312-1318 (2016).</li>
<li>Kudo, M., Aoyama, A., Ichimori, S., Fukunaga, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+animal+model+of+cerebral+infarction.+Homologous+blood+clot+emboli+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">An animal model of cerebral infarction. Homologous blood clot emboli in rats.</a> Stroke. 13 (4), 505-508 (1982).</li>
<li>Busch, E., Kruger, K., Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+model+of+thromboembolic+stroke+and+rt-PA+induced+reperfusion+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Improved model of thromboembolic stroke and rt-PA induced reperfusion in the rat.</a> Brain Research. 778 (1), 16-24 (1997).</li>
<li>Lapchak, P. A., Araujo, D. M., Zivin, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Tenecteplase+with+Alteplase+on+clinical+rating+scores+following+small+clot+embolic+strokes+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Comparison of Tenecteplase with Alteplase on clinical rating scores following small clot embolic strokes in rabbits.</a> Experimental Neurology. 185 (1), 154-159 (2004).</li>
<li>Sun, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy+of+combined+tPA-Edaravone+therapy+in+experimental+thrombotic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Synergy of combined tPA-Edaravone therapy in experimental thrombotic stroke.</a> PLoS One. 9 (6), 98807(2014).</li>
<li>Sun, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prophylactic+Edaravone+prevents+transient+hypoxic-ischemic+brain+injury%3A+Implications+for+perioperative+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Prophylactic Edaravone prevents transient hypoxic-ischemic brain injury: Implications for perioperative neuroprotection.</a> Stroke. 46 (7), 1947-1955 (2015).</li>
<li>Sun, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sickle+mice+are+sensitive+to+hypoxia%2Fischemia-induced+stroke+but+respond+to+tissue-type+plasminogen+activator+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Sickle mice are sensitive to hypoxia/ischemia-induced stroke but respond to tissue-type plasminogen activator treatment.</a> Stroke. 48 (12), 3347-3355 (2017).</li>
<li>Sun, Y. Y., Kuan, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thrombotic+stroke+model+based+on+transient+cerebral+hypoxia-ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A thrombotic stroke model based on transient cerebral hypoxia-ischemia.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52978(2015).</li>
<li>Pena-Martinez, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+modulation+of+neutrophil+extracellular+traps+reverses+thrombotic+stroke+tPA+%28tissue-type+plasminogen+activator%29+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Pharmacological modulation of neutrophil extracellular traps reverses thrombotic stroke tPA (tissue-type plasminogen activator) resistance.</a> Stroke. 50 (11), 3228-3237 (2019).</li>
<li>Denorme, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ADAMTS13-mediated+thrombolysis+of+t-PA-resistant+occlusions+in+ischemic+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">ADAMTS13-mediated thrombolysis of t-PA-resistant occlusions in ischemic stroke in mice.</a> Blood. 127 (19), 2337-2345 (2016).</li>
<li>Marder, V. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+thrombi+retrieved+from+cerebral+arteries+of+patients+with+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Analysis of thrombi retrieved from cerebral arteries of patients with acute ischemic stroke.</a> Stroke. 37 (8), 2086-2093 (2006).</li>
<li>Bacigaluppi, M., Semerano, A., Gullotta, G. S., Strambo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+from+thrombi+retrieved+in+stroke+due+to+large+vessel+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Insights from thrombi retrieved in stroke due to large vessel occlusion.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 39 (8), 1433-1451 (2019).</li>
<li>Sun, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+photothrombotic+stroke+model+with+an+increased+fibrin+content+and+improved+responses+to+tPA-lytic+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Advances%22%5BJournal%5D)">A murine photothrombotic stroke model with an increased fibrin content and improved responses to tPA-lytic treatment.</a> Blood Advances. 4 (7), 1222-1231 (2020).</li>
<li>Su, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+PDGF-CC+by+tissue+plasminogen+activator+impairs+blood-brain+barrier+integrity+during+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Activation of PDGF-CC by tissue plasminogen activator impairs blood-brain barrier integrity during ischemic stroke.</a> Nature Medicine. 14 (7), 731-737 (2008).</li>
<li>Gupta, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+gelsolin+in+acute+pulmonary+thromboembolism+and+thrombosis+in+the+carotid+artery+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Protective effects of gelsolin in acute pulmonary thromboembolism and thrombosis in the carotid artery of mice.</a> PLoS One. 14 (4), 0215717(2019).</li>
<li>Carroll, B. J., Piazza, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypercoagulable+states+in+arterial+and+venous+thrombosis%3A+When%2C+how%2C+and+who+to+test%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Hypercoagulable states in arterial and venous thrombosis: When, how, and who to test.</a> Vascular Medicine. 23 (4), 388-399 (2018).</li>
<li>Coutts, S. B., Berge, E., Campbell, B. C., Muir, K. W., Parsons, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tenecteplase+for+the+treatment+of+acute+ischemic+stroke%3A+A+review+of+completed+and+ongoing+randomized+controlled+trials%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">Tenecteplase for the treatment of acute ischemic stroke: A review of completed and ongoing randomized controlled trials.</a> International Journal of Stroke. 13 (9), 885-892 (2018).</li>
<li>McFadyen, J. D., Schaff, M., Peter, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+and+future+antiplatelet+therapies%3A+emphasis+on+preserving+haemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Current and future antiplatelet therapies: emphasis on preserving haemostasis.</a> Nature Reviews Cardiology. 15 (3), 181-191 (2018).</li>
<li>Bang, O. Y., Goyal, M., Liebeskind, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collateral+crculation+in+ischemic+stroke%3A+Assessment+tools+and+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Collateral crculation in ischemic stroke: Assessment tools and therapeutic strategies.</a> Stroke. 46 (11), 3302-3309 (2015).</li>
<li>Faber, J. E., Chilian, W. M., Deindl, E., van Royen, N., Simons, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+brief+etymology+of+the+collateral+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombsis%2C+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">A brief etymology of the collateral circulation.</a> Arteriosclerosis, Thrombsis, Vascular Biology. 34 (9), 1854-1859 (2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

1985 yılında tanıtılan geleneksel RB fototrombotik inme, basit cerrahi prosedürler, düşük mortalite ve beyin enfarktüsünün yüksek tekrarlanabilirliği için çekici bir fokal serebral iskemi modelidir. 5 Bu modelde, fotodinamik boya RB, ışık uyarımı üzerine trombositleri hızla aktive eder ve kan damarını tıkayan yoğun agregalara yol açar 5,8,23. Bununla birlikte, RB ile indüklenen kan pıhtılarındaki az mikta...

Endovasküler trombektomi ve tPA aracılı tromboliz, Amerika Birleşik Devletleri'nde yılda ~ 700.000 hastayı etkileyen akut iskemik inmenin ABD Gıda ve İlaç İdaresi (FDA) onaylı iki tedavisidir1. Trombektomi uygulaması büyük damar tıkanıklığı (LVO) ile sınırlı olduğundan, tPA-tromboliz küçük damar tıkanıklıklarını hafifletebildiğinden, her ikisi de akut iskemik inme için değerli tedavilerdir2. Ayrıca, her iki tedavinin kombinasyonu (ör., inme başlangıcından sonraki 4.5 saat içinde tPA-trombolizin başlatılması, ardından trombektomi) reperfüzyonu ve fonksiyonel sonuçları iyileştirir3. Bu nedenle, trombolizi optimize etmek, trombektomi çağında bile inme araştırmaları için önemli bir hedef olmaya devam etmektedir.
Tromboembolik modeller, trombolitik tedavileri iyileştirmeyi amaçlayan klinik öncesi inme araştırmaları için önemli bir araçtır. Bunun nedeni, mekanik vasküler oklüzyon modellerinin (örneğin, intraluminal sütür MCA oklüzyonu) kan pıhtıları üretmemesi ve mekanik oklüzyonun çıkarılmasından sonra serebral kan akışının hızlı bir şekilde geri kazanılmasının aşırı derecede idealize edilmesidir 4,5. Bugüne kadar, başlıca tromboembolik modeller arasında fototromboz 6,7,8, topikal ferrik klorür (FeCl3) uygulaması9, MCA dalına trombin mikroenjeksiyonu10,11, MCA veya ortak karotis artere (CCA) ex vivo (mikro) emboli enjeksiyonu12,13,14 ve geçici hipoksi-iskemi (tHI)15,16, 17,18. Bu inme modelleri, takip eden pıhtıların histolojik bileşimi ve tPA aracılı litik tedavilere duyarlılık açısından farklılık gösterir (Tablo 1). Ayrıca kraniotominin cerrahi gereksinimi (in situ trombin enjeksiyonu ve FeCl3'ün topikal uygulaması için gereklidir), enfarktüs boyutunun ve yerinin tutarlılığı (ör., mikroembolinin CCA infüzyonu çok değişken sonuçlar verir) ve kardiyovasküler sistem üzerindeki küresel etkiler (örneğin, tHI, hipoksi kaynaklı periferik vazodilatasyonu telafi etmek için kalp atış hızını ve kalp debisini arttırır).
RB boya bazlı fototrombotik inme (PTS) modeli, basit kraniyotomi içermeyen cerrahi prosedürler, düşük mortalite (tipik olarak %5'<) ve öngörülebilir bir enfarktüs boyutu ve yeri (MCA sağlayan bölgede) dahil olmak üzere birçok çekici özelliğe sahiptir, ancak iki ana sınırlaması vardır. 8 İlk uyarı, aynı zamanda FeCl3 modeli 7,19,20'nin bir dezavantajı olan tPA aracılı trombolitik tedaviye zayıftan sıfıra yanıttır. PTS ve FeCl3 inme modellerinin ikinci uyarısı, takip eden trombüslerin az miktarda fibrin içeren yoğun paketlenmiş trombosit agregatlarından oluşmasıdır, bu sadece tPA-litik tedaviye karşı direncine yol açmakla kalmaz, aynı zamanda akut iskemik inme hastalarında karıştırılmış trombosit:fibrin trombüs modelinden de sapar21,22. Buna karşılık, in situ trombin-mikroenjeksiyon modeli esas olarak polimerize fibrin ve belirsiz bir trombosit içeriğiiçerir 10.
Yukarıdaki mantık göz önüne alındığında, inceltilmiş kafatası yoluyla MCA hedefli fotoaktivasyon için RB ve sub-trombotik trombin dozunun karışımının, ortaya çıkan trombüsteki fibrin bileşenini artırabileceğini ve tPA aracılı litik tedaviye duyarlılığı artırabileceğini varsaydık. Bu hipotezi doğruladık,23 ve burada modifiye (T+RB) fototrombotik inme modelinin ayrıntılı prosedürlerini açıklıyoruz.

<table><tbody><tr><td>2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür (TTC)</td><td>Sigma</td><td>T8877</td><td>enfarktüs</td></tr><tr><td>4-0 Naylon monofilament sütür</td><td>LOOK</td><td>766B</td><td>cerrahi malzemeler</td></tr><tr><td>5-0 ipek sütür</td><td>Harvard Aparatı</td><td>624143</td><td>cerrahi malzemeler</td></tr><tr><td>543nm lazer ışını</td><td>Melles Griot</td><td>25-LGP-193-249</td><td>fototromboz</td></tr><tr><td>yetişkin erkek fareler</td><td>Charles Nehri</td><td>C57BL / 6</td><td>10 ~ 14 haftalık (22 ~ 30 g)</td></tr> <tr><td>Fare adaptörü makine atölyesi için anestezi çubuğu</td><td>, UVA</td><td></td><td>cerrahi kurulum</td></tr><tr><td>Avertin (2, 2, 2-Tribromoetanol)</td> <td>Sigma</td><td>T48402</td><td>ötenazi</td></tr><tr><td>Diş matkabı</td><td>Dentamerica</td><td>Rotex 782</td><td>cerrahi kurulum</td></tr><tr><td>Dijital mikroskop</td><td>Dino-Lite</td><td>AM2111</td><td>beyin görüntüleme</td></tr><tr><td>Diseksiyonu mikroskop</td><td>Olympus</td><td>SZ40</td><td>cerrahi kurulum</td></tr><tr><td>İnce kavisli forseps (tırtıklı)</td><td>FST</td><td>11370-31</td><td>cerrahi alet</td></tr><tr><td>İnce kavisli forseps (pürüzsüz)</td><td>FST</td><td>11373-12</td><td>cerrahi alet</td></tr><tr><td>keçi anti-tavşan Alexa Fluro 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>İmmünohistokimya</td></tr><tr><td>Halsted-Sivrisinek kanama durdurucular</td><td>FST</td><td>13008-12</td><td>cerrahi alet</td></tr><tr><td>Isıtma pedli ısı pompası</td><td>Gaymar</td><td>TP700</td><td>cerrahi kurulum</td></tr><tr><td>infüzyon pompası</td><td>KD Scientific</td><td>200</td><td>trombolitik tedavi</td></tr><tr><td>31G iğneli insülin şırıngası</td><td>BD</td><td>328291</td><td>fototromboz</td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>CCM, UVA</td><td></td><td>anestezi</td></tr><tr><td>Lazer koruyucu google 532nm</td><td>Thorlabs</td><td>LG3</td><td>fototrombozu</td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>CCM, UVA</td><td></td><td>NSAID analjezi</td></tr><tr><td>mikro iğne tutucular</td><td>FST</td><td>12060-01</td><td>cerrahi alet</td></tr><tr><td>mikro makas</td><td>FST</td><td>15000-03</td><td>cerrahi alet</td></tr><tr><td>MoorFLPI-2 kan akışı görüntüleyici</td><td>Moor</td><td>780-nm lazer kaynağı</td><td>Lazer Benek Kontrast</td></tr><tr><td>Görüntüleme Fare adaptörü</td><td>RWD</td><td>68014</td><td>cerrahi kurulum</td></tr><tr><td>Puralube Vet merhem</td><td>Fisher</td><td>NC0138063</td><td>göz kuruluğu önleme</td></tr><tr><td>Ekartör ipuçları</td><td>Kent Scientific</td><td>Surgi-5014-2</td><td>cerrahi kurulum</td></tr><tr><td>Rose Bengal</td><td>Sigma</td><td>198250</td><td>fototromboz</td></tr><tr><td>Trombin</td><td>Sigma</td><td>T7513</td><td>fototromboz</td></tr><tr><td>Doku yapıştırıcısı</td><td>Abbott</td><td>Laboratuvarları</td><td>NC9855218 cerrahi malzemeler</td></tr><tr><td>tPA</td><td>Genetech</td><td>Cathflo aktivaz 2mg</td><td>trombolitik tedavi</td></tr><tr><td>Vibratom</td><td>Çalma</td><td>51425</td><td>TTC infacrt Xylazine</td></tr><tr><td></td><td>CCM, UVA</td><td></td><td>anestezi</td></tr></tbody></table>

fibrin ile zenginleştirilmiş ve tpa'ya duyarlı fototrombotik inme modeli

A Fibrin-Enriched and tPA-Sensitive Photothrombotic Stroke Model

İdeal bir tromboembolik inme modeli, düşük mortaliteye sahip nispeten basit cerrahi prosedürler, tutarlı bir enfarktüs boyutu ve yeri, trombositin çökelmesi: hastalardakine benzer fibrin karışımlı kan pıhtıları ve fibrinolitik tedaviye yeterli duyarlılık gibi belirli özellikler gerektirir. Gül bengal (RB) boya bazlı fototrombotik inme modeli ilk iki gereksinimi karşılar, ancak muhtemelen trombosit açısından zengin, ancak fibrin açısından fakir pıhtı bileşimi nedeniyle tPA aracılı litik tedaviye oldukça dirençlidir. Orta serebral arterin (MCA) proksimal dalına yönelik fotoaktivasyon için RB boyası (50 mg/kg) ve subtrombotik trombin dozu (80 U/kg) kombinasyonunun fibrin ile zenginleştirilmiş ve tPA'ya duyarlı pıhtılar üretebileceğini düşünüyoruz. Gerçekten de, trombin ve RB (T + RB) kombine fototromboz modeli, immün boyama ve immünoblotlarla gösterildiği gibi karışık trombosit: fibrin kan pıhtılarını tetikledi ve tutarlı enfarktüs boyutları ve konumları ile düşük mortaliteyi korudu. Ayrıca, fotoaktivasyondan sonraki 2 saat içinde intravenöz tPA (Alteplaz, 10 mg/kg) enjeksiyonu, T+RB fototrombozunda enfarktüs boyutunu önemli ölçüde azalttı. Bu nedenle, trombin ile zenginleştirilmiş fototrombotik inme modeli, yeni trombolitik tedavileri test etmek için yararlı bir deneysel model olabilir.

İlk olarak, RB ile T + RB fototrombozunun neden olduğu kan pıhtılarındaki fibrin içeriğini karşılaştırdık. Fareler, fotoaktivasyondan 2 saat sonra fiksatiflerin transkardiyal perfüzyonu ile sakrifiye edildi ve uzunlamasına ve enine düzlemlerde MCA dalının immünofloresan boyanması için beyinler çıkarıldı. RB fototrombozunda, MCA dalı yoğun olarak CD41+ trombositler ve az miktarda fibrin ile doluydu (Şekil 2A,C). Buna karşılık, T+RB fototrombozunda MCA dalı rastgele...

Geleneksel fototrombotik inme (PTS) modelleri esas olarak doku plazminojen aktivatörü (tPA) litik tedavisine karşı yüksek dirençli yoğun trombosit agregatlarını indükler. Burada, fotoaktivasyon için trombin ve ışığa duyarlı boyanın birlikte enjekte edilmesiyle modifiye edilmiş bir murin PTS modeli tanıtıldı. Trombin ile zenginleştirilmiş PTS modeli, karışık trombosit:fibrin pıhtıları üretir ve tPA-trombolizine karşı oldukça hassastır.

Fibrin ile zenginleştirilmiş ve tPA'ya duyarlı fototrombotik inme modeli

An ideal thromboembolic stroke model requires certain properties, including relatively simple surgical procedures with low mortality, a consistent ...

Hasta örneklerine benzer kan pıhtısı üreten ve klinik ilgili trombolitik tedaviye yanıt veren bir inme modeli oluşturmak istiyoruz. Bu nedenle, klasik fototrombotik inme modelini değiştiriyoruz ve fotoaktivasyondan önce trombin ve fotodinamik boya gül bengalini karıştırıyoruz. Bu prosedürün gerçekten de tPA aracılı tromboliz için oldukça hassas olan kan pıhtısı oluşturmasından memnunuz.Bu modifiye fototrombotik inme modeli, düşük mortalite oranına sahip çok basit cerrahi prosedürler kullanır ve oldukça tutarlı bir enfarktüs boyutu ve konumu üretir. Ayrıca akut inme hastasındakine benzer bir fibrin ve trombosit karışık kan pıhtısı üretirsiniz. Bu nedenle, daha etkili trombolitik tedaviler geliştirmek için klinik öncesi inme araştırmaları için oldukça yararlı olduğunu düşünüyoruz.Modelimizi daha fazla insanın kullanmasını umuyoruz. Prosedürü gösteren, grubumuzdaki araştırma görevlisi doçentimiz Dr.Yu-Yo Sun olacaktır. Ameliyattan 30 dakika önce, bir analjezik enjekte ederek fareyi hazırlayın.Fareyi uyuşturduktan sonra, tamamen uyuşturulduğundan emin olmak için ayak parmağınızı sıkıştırın. Daha sonra sol boyun ve baştaki tüyleri tüy dökücü kremle alın. Fareyi sırtüstü pozisyonda küçük hayvan adaptörünün üzerine yerleştirin ve cerrahi cilt bölgesini üç alternatif povidon iyot ve %70 etanol ile silerek sterilize edin.Diseksiyon mikroskobu altında, orta hattın yaklaşık 0,2 santimetre lateralinde bir çift mikro makas ve düz forseps kullanarak 0,5 santimetre sol servikal kesi yapın. Daha sonra, bir çift ince tırtıklı forseps kullanarak, LCCA'yı ortaya çıkarmak için yumuşak dokuyu ve fasyayı ayırın. Daha sonra bir çift ince pürüzsüz forseps kullanarak, LCCA'yı vagal sinirden dikkatlice ayırın.5-0 ipek sütür kullanarak LCCA'nın etrafına kalıcı bir çift düğümlü sütür yerleştirin. Fareyi yüzüstü konuma çevirin ve burun klipsi rulosunu 15 derece döndürün. Daha sonra cildi üç alternatif Betadine ve% 70 etanol ile silerek cerrahi alanı sterilize edin.Temporalis kasını ortaya çıkarmak için sol göz ve kulak boyunca bir çift mikro makas ve düz forseps kullanarak kafa derisinde 0,8 santimetrelik bir kesi yapın. Daha sonra, sol parietal kemikteki temporalis kasının kenarı boyunca 0,5 santimetrelik bir kesi yapın. Daha sonra temporalis kası üzerinde 0.3 santimetrelik ikinci bir dikey kesi yapın ve parietal kemiğin ve skuamöz kemiğin kenarını ortaya çıkarmak için kası geri çekin.Frontal ve parietal kemikler arasındaki koronal sütürün dönüm noktasını görselleştirdiğinizden emin olun. Daha sonra, sol MCA'yı ortaya çıkarmak için steril salin uygulayarak kafatasını nemlendirin ve skuamöz kemik üzerindeki proksimal MCA dalını bir işaretleyici ile işaretleyin. Pnömatik bir diş matkabı ile bu işaretli alanı çevreleyen bir milimetre çapında bir daireyi yavaşça çizin.Ardından, alt duraya dokunmadan kafatasını yaklaşık 0,2 milimetre derinliğinde inceltin. Çok ince bir kemik tabakası kaldığında delmeyi durdurun. Daha sonra, farenin vücut ağırlığına göre trombin ve gül bengal çözeltisini karıştırın ve karışımı 31 gauge iğne ile retro-orbital sinüse yavaşça enjekte edin.Kuruluğu önlemek için her iki göze de göz merhemi sürün. Aydınlatıcıyı 532 nanometre lazer ışığıyla delinmiş alana 20 dakika boyunca iki inçlik bir mesafede uygulayın. Lazer projeksiyon gözlükleri ile MCA'nın proksimal dalındaki aydınlatmayı görselleştirin.20 dakika sonra lazer aydınlatmasını durdurun. Kafatasının parietal kemiği üzerinde üç milimetre çapında bir kafatası penceresi yapın ve üzerine bir kapak camı yerleştirin. Ardından distal MCA'yı 20x suya daldırma objektif merceğinin altına yerleştirin.Görüntülemeden beş dakika önce DyLight 488 konjuge anti-GP1b-beta antikorunun kuyruk damarı enjeksiyonu ile dolaşımdaki trombositi etiketleyin. Daha sonra retro-orbital olarak trombin ve gül bengal çözeltisi karışımını enjekte edin. 10 mikrometre çapında bir lazer ışını ile 532 nanometre lazer sistemi kullanarak MCA'yı fotoaktif hale getirin ve görüntüyü trombüs oluşana kadar kaydedin.TPA uygulaması için, anestezi uygulanmış hayvanı 37 santigrat derece ılık bir ped üzerine yerleştirin. Kuyruğunu, seçilen fotoaktivasyon sonrası zaman noktasında bir dakika boyunca 45 santigrat derece ılık ıslak gazlı bezle sarın. Daha sonra, rekombinant insan tPA'sını kuyruk damarından enjekte edin.%50'sini bolus olarak enjekte edin ve kalan %50'yi bir infüzyon pompası kullanarak 30 dakika boyunca demleyin. Serebral kan akışını izlemek için, kafatası açıkta kalacak şekilde kafa derisinde orta hat kesisi yapın. Kafatasını steril tuzlu suyla nemlendirin ve üzerine ultrason jelini nazikçe uygulayın, jelde saç veya hava kabarcıkları olmadığından emin olun.Lazer benek kontrast görüntüleyici altında her iki serebral hemisferdeki serebral kan akışını 10 dakika boyunca izleyin. İmmünofloresan etiketleme, gül bengal boyası bazlı fototrombozda, MCA dalının CD41 pozitif trombositler ve az miktarda fibrin ile yoğun bir şekilde paketlendiğini göstermektedir. Buna karşılık, trombin artı gül bengal fototrombozunda, MCA dalı rastgele karışık trombosit ve fibrin pıhtıları ile tıkandı.İmmünoblotlama analizi, trombin artı gül bengal fototrombozunda ipsilateral hemisferde fibrin birikiminde tek başına gül bengal'e kıyasla iki kattan fazla bir artış gösterdi. Konfokal mikroskop tabanlı intravital görüntüleme, intravenöz trombin enjeksiyonunun lazer aydınlatması altında bile trombosit agregatlarını indükleyemediğini gösterdi. Trombositler, gül bengal fototrombozu modelinde homojen pıhtılar oluştururken, trombin artı gül bengal modelinde çok sayıda soluk bölgeye sahip düzensiz agregalar oluşturdu.Aynı farenin tPA öncesi ve sonrası 24 saat içinde araç tedavisine karşı CBF'si, lazer benek kontrast görüntüleme ile ölçüldü ve kontralateral hemisfere normalize edildi. Gül bengal fototrombozunda, tPA tedavisi, özellikle iskemik sınır bölgesinde, araçla tedavi edilen farelere kıyasla CBF iyileşme eğilimine yol açtı. Trombin artı gül bengal fototrombozunda, tPA ile tedavi edilen farelerde CBF'nin iyileşmesi daha belirgindi ve proksimal MCA dalları genellikle 24 saatte görünür hale geldi.Gül bengal fototrombozunda, araçla tedavi edilen ve tPA ile tedavi edilen farelerde benzer bir enfarktüs boyutu tespit edildi. Buna karşılık, trombin artı gül bengal fototrombozunda, tPA litik tedavisi, araçla tedavi edilen farelere kıyasla fotoaktivasyondan altı saat sonra 0.5, bir veya iki saatte enfarktüsü önemli ölçüde azalttı, Trombin aracılı fibrin üretimi bu prosedürde trombüs oluşumu için çok önemlidir. Bu yöntem, pıhtı kompozisyonunu araştırmak ve trombolitik tedavileri daha fazla incelemek için kullanılabilir.Bu işlemi takiben, tromboliz tedavisinin diğer yöntemleri uygulanabilir ve daha sonra etkinliği belirlenebilir. Trombin eklenmesi, pıhtı kompozisyonunu fibrin açısından fakirden fibrin fakirine ayarlamayı mümkün kılar ve araştırmacıların klinik olarak ilgili terapötik stratejiler geliştirmelerine olanak tanır.

a-fibrin-enriched-and-tpa-sensitive-photothrombotic-stroke-model

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, ışığa duyarlı boya uygulandıktan sonra sağlam bir kafatasının lazerle aydınlatılmasıyla bir fare modelinde fototrombotik vuruş oluşturma prosedürünü göstermektedir.

Fare Modelinde Fototrombotik İnmenin Modellenmesi: Fototrombozu İndüklemek İçin Işığa Duyarlı Boya Uygulamasını Takiben Fare Kafatasından Bir Lazer Aydınlatma Tekniği

Fototromboz son derece tekrarlanabilir bir şekilde ilgi alanları küçük ve iyi ayrılmış enfarktüsü uyaran için hızlı, minimal invaziv bir tekniktir. Bu transgenik farelerde beyin plastisitesi oluşturan hücresel ve moleküler okuyan cevapları için özellikle uygundur.

Photothrombotic İskemi: Fare İnme Araştırmalar bir Minimal İnvaziv ve tekrarlanabilir fotokimyasal Kortikal Lezyon Model

Burada, in vivo olarak bir farenin somatosensoriyel korteksinde bir Rose Bengal fototrombotik pıhtısının indüksiyonu için yarı invaziv bir optik mikroskopi yaklaşımını açıklıyoruz.  Görüntüleme prosedürünün teknik yönleri, fototrombotik bir olayın indüksiyonundan uygulama ve veri toplamaya kadar açıklanmaktadır.

Konfokal Optik Görüntüleme ile Rose Bengal Fototromboz<em&gt; In Vivo</em&gt;: Tek Gemi İnme Bir Model

Tromboembolik inme modelleri, rekanalizasyon tedavisini optimize etmek için hayati araçlardır. Burada, tromboz ve enfarktüsü tetikleyen ve inme hastalarındakine benzer bir terapötik pencerede doku plazminojen aktivatörü (tPA) aracılı fibrinolize olumlu yanıt veren geçici serebral hipoksik-iskemik (tHI) insafa dayalı bir murin trombotik inme modeli sunulmaktadır.

Geçici Serebral Hipoksi-iskemi Dayalı Bir Trombotik İnme Modeli

Bu el yazması kapsül enfarktüs bir modelleme tekniği anlatılmaktadır. Burada ön ameliyat hedef haritalama sonra ışık düşük yoğunluğu ile modifiye Fototrombotik tekniği kullanılmıştır. Bu tekniği kullanarak, biz kalıcı motorlu bozukluğu olan bir sınırlı kapsül infarkt modeli yarattı.

Bir FOTOTROMBOTİK Tekniği sınırlı Kapsül Enfarktüs Modelleme

Biz trombüsler oluşumunu tıkayıcı zaman izlemek için intravital mikroskopi kullanılarak etkin bir şekilde karakterize bir rafine demir klorür (FeCl3) karotis ve mezenterik arter üzerinde indüklenen trombozu modelleri prosedürü yanı sıra damar, rapor.

Ferrik klorit indüklenen fare tromboz modellerinde

Burada açıklanan fototrombotik inme modeli, bir inmenin, ışığa duyarlı bir boyanın kullanılmasından sonra lazer aydınlatma kullanılarak kalıcı mikrovasküler tıkanıklık indüklenerek sağlam kafatasından üretildiği yerdir.

Farelerde Modelleme İnme: Fototomboz ile Fokal Kortikal Lezyonlar

Tamamen optik bir yaklaşım kullanılarak, uyanık, davranan bir farenin ortaya çıkan inme çekirdeğinde ortaya çıkan bir floresan biyosensör kullanılarak nöronalCa2+ aktivitesi aynı anda kaydedilirken iskemik inme indüklenir.

Davranan farelerde iskemik inmeyi indüklemek ve izlemek için eşzamanlı fototromboz ve lif fotometrisi

Tromboembolik inmeyi simüle etmek için, heterolog fare kanından hazırlanan embolileri orta beyin arterine enjekte edildi ve ardından rekanalizasyon için sistemik tromboliz uygulandı. Bu model versiyonu, çoklu laboratuvar ağında kullanılmak üzere optimize edilmiştir ve birden fazla aday tedavi yönteminin test edilmesini destekler.

İnme Preklinik Değerlendirme Ağı Tromboembolik İnme ve Trombolizli Çok Laboratuvarlı Modeli: TE-MCAo

Bu protokol, viral teslimat, optrod implantasyonu, fototrombotik indüksiyon, astrosit ve nöron aktivitesinin eşzamanlı kaydı ve astrositlerin optogenetik uyarılmasını içeren entegre bir yöntem sağlar. Bu entegre yöntem, iskemik incinin akut ve kronik evreleri arasında astrosit-nöron ilişkisinin eşzamanlı incelenmesini sağlamayı amaçlamaktadır.

Fototrombotik İnme Modelleme ve Davranış Eden Farelerde Nöronal ve Astrositik Aktivitenin In Vivo Optrode Kaydı İçin Entegre Bir Yöntem

Öğrenin, trombin ve rose bengal kullanılarak geliştirilen modifiye fototrombotik inme modelini. Bu yöntem, tPA'ya duyarlı fibrin-platelet karışıklı pıhtılar oluşturarak klinik öncesi inme araştırmaları için güvenilir bir platform sunar.

Fibrin ile zenginleştirilmiş ve tPA'ya duyarlı fototrombotik inme modeli

Daha fazla video keşfet