Name: Farelerde Transuterin Fetal Trakeal Oklüzyon Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 31 s
Description: Öğrenin farelerde transuterin fetal trakeal oklüzyon tekniğini kullanarak doğuştan diyafragma hernisinin patofizyolojisini incelemeyi. Bu yöntem akciğer gelişimi ve ilgili hastalıklar üzerine araştırmalar için yenilikçi bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, kamu, ticari veya kar amacı gütmeyen sektörlerdeki fon kuruluşlarından belirli bir hibe almamaktadır. Tüm yazarlar, çalışmanın gebeliğine ve tasarımına, verilerin edinilmesine, analizine ve yorumlanmasına, makalenin hazırlanmasına ve önemli entelektüel içerik ve sunulacak sürümün nihai onayı için revize edilmesine önemli katkılarda bulundular. Yazarlar Can Sabuncuoğlu'na cerrahi tekniğin sanat eserinin üretilmesi konusundaki nazik çabaları için teşekkür ediyor.

Tüm deneyler, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri Rehberi'ne (NIH Yayınları No. 80023, revize 1978) uygundur. Prosedür, Cincinnati Çocuk Araştırma Vakfı Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından #2016-0068 IACUC protokolü ile onaylandı.
1. Hazırlık
<ol><li>Yaşla eşleşen vahşi tip (WT) C57BL/6 fareleri çiftleşmek için, onları saat 18:00'de aynı kafese yerleştirin.m ve ertesi gün saat 9:00'da.m ayırın.</li>
	<li>Embriyonik gün 0'ı (E0) belirlemek için, vajina duvarına bağlı homojen bir dış bölgeye ve lifli bir iç bölgeye sahip olan ve fiş malzemesinin lifleriyle karıştırılmış dolaşmış kitleler oluşturan bazı spermatozoa içeren vajinal tıkaçlara bakın.</li>
	<li>Çiftleşme anında farelerin ağırlığını kaydedin.</li>
	<li>Devam eden hamileliği sağlamak için fareleri E10'da yeniden tartın.</li>
	<li>Ameliyatı E16.5 (erken canaliküler evre) üzerinde gerçekleştirin.</li>
	<li>Ameliyat sırasında kullanılacak aletleri sterilize edin: makas, iğne tutucu, tokalar, kelepçeler ve cerrahi bıçaklar ve tutamaklar.</li>
	<li>Ameliyat platformunu 24 °C'ye ısıtın ve ameliyattan önce ılık salin (24 °C) hazırlayın.</li>
	<li>İyileşme için sıcak bir ortam yaratın ve erken beslenme için kafesin içinde ıslak yiyecekler bırakın.</li>
	<li>Kendilerini besleyene kadar işletilen hayvanların yanında kalın.</li>
	<li>Ameliyat edilen fareleri ameliyattan sonra bireysel kafeslerinde yalnız tutun.</li>
</ol>2. Anestezi
<ol><li>İşlemden 1 saat önce hamile barajlarına 0,1 mg/kg buprenorfin deri altı uygulayın.</li>
	<li>İndüksiyon için inhale 5 mL/h izofluran ve anestezi işlemi sırasında sürekli olarak 2 mL/sa kullanın.</li>
	<li>Hamile farelerin çene hareketlerini izleyin.</li>
</ol>3. Laparotomi
<ol><li>Karın yüzeyini alkol ve povidon-iyot ile temizleyin. Operasyon boyunca steril koşulları koruyun.</li>
	<li>Hamile barajların laparotomi için dikey bir kesi gerçekleştirin. Tüm katmanları ayrı ayrı kesin.</li>
	<li>Her iki taraftaki rahim boynuzlarını tanımlayın.</li>
	<li>Ameliyat için aday fetüsleri belirleyin. NOT: Vajinaya en yakın olan fetüsleri ameliyat etmeyin.</li>
	<li>Her iki tarafta eşit sayıda fetüs varsa (çoğu zaman 4) her rahim boynuzunda iki fetüs ve uterusun tek bir sayısı varsa her rahim boynuzunda 1 fetüs üzerinde (çoğu zaman 3) ameliyat et.</li>
</ol>4. Trakeal tıkanma
<ol><li>Görselleştirme için 2,5x büyütme gözlüğü kullanın.</li>
	<li>Rahim boynuzu enine bir şekilde konumlandırın.</li>
	<li>Yavruları yukarı bakacak şekilde, yavruların gözlerini ve kuyruğunu fetüse konumlandırmak için bir rehber olarak kullanarak iki parmak arasına alın.</li>
	<li>Başın uzatılmasına ve dolayısıyla boynun görselleştirilmesine izin vermek için yavrunun kafasına hafif basınç uygulayın.</li>
	<li>TO(Şekil 1)gerçekleştirmek için atravmatik iğne ile 6.0 polipropilen dikiş kullanın. Plastantayı iğnenin giriş ve çıkış noktalarından uzakta ve yan tarafta tutun.</li>
	<li>İğneyi uterusun yanından enine bir şekilde plasetadan boynun 1/3rd ön kısmına yerleştirin.</li>
	<li>İğneyi boynun orta çizgisine kadar hafifçe hareket ettirip ön kısmaya yönlendirin, ardından boyundan trakea arasında ve şahdabı kılıfı ve uterusun karşısında çıkın.</li>
	<li>Dikişi düğümle, zarların ve rahim duvarının bütünlüğünü korumaya ve düğümleme sırasında göbek kordonu güvende tutmaya özen göster.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61772/61772fig01.jpg"> Şekil 1: Trakeal oklüzyon. (A) Boyundan geçen transuterin dikiş. (B) Dikiş geçtikten sonra ve düğümden önce yapıların şematik gösterimi. Kısaltmalar: C = Karotid arter; J = Şahdamarı; T =Trakea; E = Yemek Borusu; V = Omur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61772/61772fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
5. Karın duvarı kapatma
<ol><li>Karın bölgesindeki rahim boynuzu değiştirin.</li>
	<li>Kapanmadan önce periton boşluğuna 2 mL ılık steril salin enjekte edin.</li>
	<li>Karın duvarını kapatmak için çalışan bir 5/0 poliglactin dikişi koyun ve cildi çalışmayan bir ipek dikişle kapatın.</li>
	<li>Analjezi için intraperitoneal olarak 0,1 mg/kg buprenorfin uygulayın ve barajın ılık bir inkübatörde geri kazanılmasına izin verin.</li>
</ol>6. Hasat
<ol><li>Gebe barajına anestezi uygulayın ve E18.5'teki tüm fetüsleri sezaryenle hasat edin.</li>
	<li>Fetüslerin hareketlerini izleyerek fetüslerin canlılığını kontrol edin.</li>
	<li>Ötenazi için en az iki farklı teknik kullanın: karbondioksit insufflation ve servikal çıkık.</li>
	<li>Veteriner laboratuvarının yönetmeliğine göre cesetleri çıkarın.</li>
	<li>Tüm fetüsleri tartın.</li>
	<li>Akciğerleri çıkarmak için toraksotomi için toraks üzerinde dikey bir kesi gerçekleştirin.</li>
	<li>Embriyoların akciğerlerini parçalara ayrılın ve toplam akciğer-vücut ağırlığı oranını hesaplamak için tartın (LBWR = (sol akciğer ağırlığı + sağ akciğer ağırlığı)/vücut ağırlığı x100).</li>
</ol>7. Histoloji
<ol><li>Dokuları sıvı nitrojen, optimum kesme sıcaklığı bileşiği ve kuru buzda çıtlatın.</li>
	<li>Numuneleri kriyostat kullanarak 10 μm bölümde kesin ve poli lizin kaplı slaytlara monte edin.</li>
	<li>Slaytları gece boyunca 60 °C'de pişirin ve pişmiş slaytları hematoksilin ve eozin ile lekeleyin ve geniş alan mikroskobu kullanarak 10-20x büyütmede görüntü alımı için monte edin.</li>
</ol>8. Protein ve DNA analizleri için doku işleme
<ol><li>Parçalanmış fetal akciğerleri çıtlatın ve 300 μL radyoimmünötepektasyon test tamponunda homojenize edin. 4 °C'de 5 dakika 18.000 × g'da santrifüj.</li>
	<li>Protein, DNA ve RNA10,12'yiçıkarın ve ölçün.</li>
</ol>

<ol><li>Wright, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+PaedSurg+Research+Collaboration.+Management+and+outcomes+of+gastrointestinal+congenital+anomalies+in+low%2C+middle+and+high+income+countries%3A+protocol+for+a+multicentre%2C+international%2C+prospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ+Open%22%5BJournal%5D)">Global PaedSurg Research Collaboration. Management and outcomes of gastrointestinal congenital anomalies in low, middle and high income countries: protocol for a multicentre, international, prospective cohort study.</a> BMJ Open. 9, 030452(2019).</li>
<li>Aydin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+approach+for+prenatally+diagnosed+congenital+anomalies+that+requires+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Turkish+Clinics+Journal+of+Gynecology+and+Obstetrics%22%5BJournal%5D)">Current approach for prenatally diagnosed congenital anomalies that requires surgery.</a> Turkish Clinics Journal of Gynecology and Obstetrics. 27, 193-199 (2016).</li>
<li>Nolan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemorrhage+after+on-ECMO+repair+of+CDH+is+equivalent+for+muscle+flap+and+prosthetic+patch%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Hemorrhage after on-ECMO repair of CDH is equivalent for muscle flap and prosthetic patch.</a> Journal of Pediatric Surgery. 54 (10), 2044-2047 (2019).</li>
<li>Aydin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+diaphragmatic+hernia%3A+the+good%2C+the+bad%2C+and+the+tough%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Surgery+International%22%5BJournal%5D)">Congenital diaphragmatic hernia: the good, the bad, and the tough.</a> Pediatric Surgery International. 35 (3), 303-313 (2019).</li>
<li>Aydın, E., Özler, O., Burns, P., Lim, F. Y., Peiró, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left+congenital+diaphragmatic+hernia-associated+musculoskeletal+deformities%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Surgery+International%22%5BJournal%5D)">Left congenital diaphragmatic hernia-associated musculoskeletal deformities.</a> Pediatric Surgery International. 35 (11), 1265-1270 (2019).</li>
<li>Aydın, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+primary+repair+is+not+enough%3A+a+comparison+of+synthetic+patch+and+muscle+flap+closure+in+congenital+diaphragmatic+hernia%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Surgery+International%22%5BJournal%5D)">When primary repair is not enough: a comparison of synthetic patch and muscle flap closure in congenital diaphragmatic hernia.</a> Pediatric Surgery International. 36 (4), 485-491 (2020).</li>
<li>Wilson, M., Difiore, J. W., Peters, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+fetal+tracheal+ligation+prevents+the+pulmonary+hypoplasia+associated+with+fetal+nephrectomy%3A+Possible+application+for+congenital+diaphragmatic+hernia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Experimental fetal tracheal ligation prevents the pulmonary hypoplasia associated with fetal nephrectomy: Possible application for congenital diaphragmatic hernia.</a> Journal of Pediatric Surgery. 28 (11), 1433-1440 (1993).</li>
<li>Mudri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+tracheal+occlusion+on+Wnt+signaling+in+a+rabbit+model+of+congenital+diaphragmatic+hernia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">The effects of tracheal occlusion on Wnt signaling in a rabbit model of congenital diaphragmatic hernia.</a> Journal of Pediatric Surgery. 54 (5), 937-944 (2019).</li>
<li>Khan, P. A., Cloutier, M., Piedboeuf, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracheal+occlusion%3A+a+review+of+obstructing+fetal+lungs+to+make+them+grow+and+mature%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Medical+Genetics.+Part+C%2C+Seminars+in+Medical+Genetics%22%5BJournal%5D)">Tracheal occlusion: a review of obstructing fetal lungs to make them grow and mature.</a> American Journal of Medical Genetics. Part C, Seminars in Medical Genetics. 145 (2), 125-138 (2007).</li>
<li>Chomczynski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reagent+for+the+single-step+simultaneous+isolation+of+RNA%2C+DNA+and+proteins+from+cell+and+tissue+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples.</a> Biotechniques. 15 (3), 532-537 (1993).</li>
<li>Beurskens, N., Klaassens, M., Rottier, R., De Klein, A., Tibboel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+animal+models+to+human+congenital+diaphragmatic+hernia%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research+Part+A%3A+Clinical+and+Molecular+Teratology%22%5BJournal%5D)">Linking animal models to human congenital diaphragmatic hernia.</a> Birth Defects Research Part A: Clinical and Molecular Teratology. 79 (8), 565-572 (2007).</li>
<li>Varisco, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excessive+reversal+of+epidermal+growth+factor+receptor+and+ephrin+signaling+following+tracheal+occlusion+in+rabbit+model+of+congenital+diaphragmatic+hernia%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Excessive reversal of epidermal growth factor receptor and ephrin signaling following tracheal occlusion in rabbit model of congenital diaphragmatic hernia.</a> Molecular Medicine. 22, 398-411 (2016).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Bu yöntem, farelerde fetal trakeal tıkanıklık cerrahi bir prosedürü ve akciğer gelişimi üzerindeki etkisini açıklar. Başarılı TO için protokolde dikkatle gerçekleştirilmesi gereken bazı kritik adımlar vardır. Ameliyatın gerçekleştiği platformun sıcaklığı ve periton boşluğuna sokulan salin gebeliğin ilerlemesi için çok önemlidir. Ek olarak, boynun maruz kalmasını sağlamak için yavruların başına hafif bir basınç uygulanmalıdır.
6.0 polipropilen dikiş bu teknik için kullanılabilecek tek dikiştir....

Konjenital diyafram fıtığı (CDH) 1:2500 gebelikte ortaya çıkar ve pulmoner hipoplazi ve yenidoğan pulmoner hipertansiyon 1,2 ,3,4,5,6ile sonuçlanır. Fetal trakeal oklüzyon (TO), 26-30. gebelik haftasında fetoskopi içeren ağır CDH hastalarında, bir balonun karinanın hemen üzerine yerleştiği ve daha sonra 32nd gebelik haftasında çıkarıldığı yerleşik bir prenatal tedavidir. Bu geçici TO fetal akciğer büyümesini teşvik eder ve sağkalım geliştirir. Konjenital Yüksek Hava Yolu Tıkanıklığı Sendromu, cerrahlara salgılanan epitel sıvısının tutulmasını teşvik etmek için trakeanın yapay tıkanıklığını gerçekleştirmeleri için ilham veren akciğer hiperplazisi ile ilişkili ölümcül bir durumdur. Bu tıkanma ışık basıncıyı artırdı ve akciğer büyümesine neden oldu7. Bununla birlikte, epitel hücre olgunlaşmasını sağlamak için tıkanıklık tersine çevrilmelidir.
CDH ve TO'nun çeşitli hayvan modelleri - yumurta, tavşan, sıçan ve fare - CDH ve TO'nun patofizyolojisini anlamak için geliştirilmiştir. Tekniğin zorluğu, hayvanın büyüklüğü, maliyet, yüksek ölüm oranları ve genetik araçların mevcudiyeti gibi hepsinin kendi avantajları ve dezavantajları vardır. Yumurta modeli için kullanılan cerrahi teknik insanlarda kullanılana çok benzer ve tersine çevrilebilir olsa da, bu modelin en büyük dezavantajları hayvanın masrafı, uzun gebelik süresi ve mümkün olan sınırlı sayıda ameliyattır. Tavşan modeli daha kısa bir gebelik süresine sahiptir ve koyun modelinden daha ucuzdur. Ancak, tavşan modeli geri döndürülemez8,9. Murine modeli en düşük maliyete, gebelik başına en yüksek fetüs sayısına, en iyi karakterize genoma ve hücresel ve moleküler analizler için yaygın olarak bulunan araçlara sahiptir. Bununla birlikte, önemli bir dezavantaj, TO'nun etkisinin tam olarak anlaşılmasını önleyen, TO'nun geri döndürülebilir olmamasıdır. Burada, daha önce bahsedilen modellerin tüm avantajlarını birleştiren ve kolay, potansiyel olarak geri döndürülebilir ve minimal invaziv bir kemirgen TO modeli oluşturan bir yöntem sunulmaktadır.

<table><tbody><tr><td>Buprenorfin&nbsp;</td><td>Par Pharmaceutical</td><td>NDC 42023-179-05</td><td>Bölgesel anestezi için</td></tr><tr><td>İzofluran&nbsp;</td><td>&nbsp; Halokarbon Yaşam Bilimleri</td><td>NDC 66794-017-25</td><td>Genel anestezi için</td></tr><tr><td>Büyütme gözlükleri</td><td>ABD Tıbbi-Cerrahi</td><td>SLR-250LBLK</td><td>En az 2.5x</td></tr><tr><td>Nikon 90i mikroskop</td><td>Nikon</td><td>3417</td><td>Motorlu Floresan</td></tr><tr><td>Nucleospin Doku Kiti&nbsp;</td><td>Macherey-Nagel, D&uuml; ren, Almanya</td><td>740952.5</td><td>DNA izolasyonu</td></tr><tr><td>Pierce BCA Protein Test Kiti&nbsp;</td><td>Thermo Fisher, IL, ABD</td><td>23225</td><td>Protein miktar tayini</td></tr><tr><td>Poliglaktin sütür</td><td>Ethicon</td><td>VCP451H</td><td>4-0, 24 mm,</td></tr><tr><td>Polilisin slaytlarının kesilmesi&nbsp;</td><td>VWR&nbsp;</td><td>48382-117</td><td>Mikroskop yapışma slaytları</td></tr><tr><td>Polipropilen sütür</td><td>Ethicon</td><td>Y432H</td><td>6-0, 13 mm 1/2c Taperpoint</td></tr><tr><td>RIPA tamponu&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich, Missouri, ABD</td><td>R0278-50ml</td><td>Protein izolasyonu</td></tr><tr><td>İpek sütür</td><td>Ethicon</td><td>VCP682G</td><td>4-0, 24 mm, kesme</td></tr><tr><td>Trizol&nbsp;</td><td>Canlandırıcı&nbsp;</td><td>15596026</td><td>RNA izolasyonu</td></tr></tbody></table>

farelerde transuterin fetal trakeal oklüzyon modeli

Transuterine Fetal Tracheal Occlusion Model in Mice

Yerleşik bir tedavi yöntemi olan fetal trakeal oklüzyon (TO), şiddetli konjenital diyafram fıtığı (CDH) fetal akciğer büyümesini ve sağkal sağkalımı destekler. TO'yu takiben, salgılanan epitel sıvısının tutulması ışık basıncını arttırır ve akciğer büyümesine neden olan. CDH ve TO patofizyolojisini anlamak için çeşitli hayvan modelleri tanımlanmıştır. Tekniğin zorluğu, hayvanın büyüklüğü, maliyet, yüksek ölüm oranları ve genetik araçların mevcudiyeti gibi hepsinin kendi avantajları ve dezavantajları vardır. Burada, murine fetal TO'nun yeni bir transuterin modeli tanımlanmıştır. Hamile fareler uyuşturuldu ve rahim orta çizgi laparotomi yoluyla maruz kaldı. Seçilen fetüslerin trakeası, trakeanın arkasına yerleştirilen tek bir transuterin dikiş, bir şahdamar ve bir şah damarı ile bağlandı. Baraj kapatıldı ve iyileşmesine izin verildi. Fetüsler parçalandırılmadan hemen önce toplandı. TO fetüslerinde akciğer-vücut ağırlığı oranı kontrol fetüslerindekinden daha yüksekti. Bu model, araştırmacılara hem TO'nun hem de artan ışık basıncının akciğer gelişimi üzerindeki etkisini incelemek için yeni bir araç sağlar.

<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61772/61772fig02.jpg"> </strong...

Konjenital diyafram fıtığı ve fetal trakeal tıkanıklık gibi çeşitli hayvan modelleri etik konular, maliyet, cerrahi zorluk, boyut, sağkalım oranları ve genetik araçların mevcudiyeti ile ilgili avantaj ve dezavantajlar sürmektedir. Bu model, hem trakeal tıkanıklık hem de artan ışık basıncının akciğer gelişimi üzerindeki etkisini incelemek için yeni bir araç sağlar.

Farelerde Transuterin Fetal Trakeal Oklüzyon Modeli

Fetal tracheal occlusion (TO), an established treatment modality, promotes fetal lung growth and survival in severe congenital diaphragmatic hernia (CDH). ...

Bu tekniğin en önemli avantajları geri dönüşümlü, hayvanların maliyetinde ve bakımında azalma ve daha kısa bir hamilelik süresidir. Ayrıca histerektomiye gerek olmadığı için hayvan ölümleri de azalmıştır. Ve genetik çalışmalar için daha geniş fırsatlar var.Bu teknik konjenital diyafram fıtığı patofizyolojisini araştırmak için kullanılabilir. İnekler ve pulmoner hipoplazi gibi akciğerdeki diğer hastalıkları anlamak için de uygulanabilir. Farelerin aynı kafeste 18:00-09:00 saatleri arasında çiftleşmelerine izin vererek başlayın.E0'ı belirlemek için, vajina duvarına bağlı homojen, dış bölgeye ve lifli bir iç bölgeye sahip olan ve fiş malzemesinin lifleriyle karıştırılmış dolaşmış kitleler oluşturan bazı spermatozoa içeren vajinal tıkacı gözlemleyin. Devam eden hamileliği sağlamak ve ameliyatı E16.5'te gerçekleştirmek için çiftleşme sırasında ve E10'da farelerin ağırlığını kaydedin. Ameliyat sırasında kullanılacak aletleri sterilize edin.Ameliyat platformunu 24 santigrat dereceye kadar önceden ısıtın ve ameliyattan önce ılık salin hazırlayın. İyileşme için sıcak bir ortam yaratın ve erken beslenme için kafesin içine ıslak yiyecek bırakın. Karın yüzeyini alkol ve povidon iyot ile temizleyin ve operasyon boyunca steril koşulları koruyun.Hamile barajların laparotomisi için dikey bir kesi yapın ve tüm katmanları ayrı ayrı kesin. Her iki taraftaki rahim boynuzlarını tanımlayın ve ameliyat için aday fetüsleri belirleyin. Her iki tarafta eşit sayıda fetüs varsa, her rahim boynuzunda iki fetüs ameliyat edin.Ve her rahim boynuzunda bir fetüste eğer tek bir sayı varsa. Görselleştirme için 2X büyütme gözlükleri kullanarak, rahim boynuzu enine bir şekilde konumlandırın. Yavruları, gözleri ve kuyruğu rehber olarak kullanarak iki parmak arasında yukarı bakacak şekilde konumlandırın.Başın uzatılmasına ve boynun görselleştirilmesine izin vermek için yavrunun kafasına hafif basınç uygulayın. Trakeal tıkanıklık veya TO'yu atravmatik bir iğne ve 6'ya 0 polipropilen dikiş kullanarak gerçekleştirin. Plastantayı iğnenin giriş ve çıkış noktalarından uzakta ve yan tarafta tutun.İğneyi uterusun yanından enine, plastantadan boynun üçte bir ön kısmına doğru yerleştirin. Daha sonra iğneyi boynun orta çizgisine hafifçe hareket ettirin. Ön kısmaya yönlendirin.Daha sonra boyundan nefes borusu arasında ve şahdabı kılıfı ve uterusun karşısında çıkın. Dikişi düğümle, zarların ve rahim duvarının bütünlüğünü korumaya özen göstererek. Karın bölgesindeki rahim boynuzu değiştirin ve kapanmadan önce periton boşluğuna iki mililitre sıcak steril salin enjekte edin.Karın duvarını kapatmak için çalışan bir 5'e 0 poliglactin dikişi yerleştirin. Ve cildi çalışmayan ipek bir dikişle kapatın. Analjezi için intraperitoneal olarak kilogram başına 0,1 mikrogram uygulayın ve barajın ılık bir inkübatörde toparlanmasını sağlamak.Ameliyat edilen hayvanın kendini besleyebileceğini ve bireysel kafesinde tek başına tutabileceğini gözlemleyin. Tüm fetüsleri E18.5 ile ceasarean bölümüne kadar hasat edin ve hareketlerini izleyerek canlılıklarını kontrol edin. Tüm fetüsleri tartın.Akciğerleri parçalamak için toraks üzerinde bir toraktomi için dikey bir kesi gerçekleştirin. Ve toplam akciğer-vücut ağırlığı oranını hesaplamak için onları tartın. Sıvı nitrojen, optimum kesme sıcaklığı bileşiği ve kuru buzda dokuyu dondurun.Numuneleri kriyostat kullanarak 10 mikrometrelik bölümler halinde kesin ve polilizin kaplı slaytlara monte edin. Slaytları 60 santigrat derecede geceleyin pişirin ve pişmiş slaytları hematoksilin ve eozin ile lekeleyin. Geniş alan mikroskobu kullanarak 10 ila 20X büyütme slaytlarının görüntüsü.Protein ve DNA analizleri için, dokuyu dondurun ve 300 mikrolitre radyoimmünötepiasyon test tamponunda homojenleştirdi. Beş dakika boyunca 18.000 x g ve 4 santigrat derecede santrifüj. Daha sonra protein, DNA ve RNA'yı ayıklayın ve ölçün.Ortalama vücut ağırlığı, akciğer ağırlığı ve LBWR TO grubunda kontrol grubuna göre daha yüksekti. To grubunda akciğer DNA'sı miktarları ve DNA'nın protein oranı daha yüksekti. Akciğer RNA'sında fark gözlenmedi ve protein miktarları TO grubunda kontrol grubuna göre daha düşüktü.E18.5 kontrol akciğerlerinin histolojik analizleri, gelişen hava sahaları ve epitel yüzeyler arasında kalınlaşmış intersityum ile akciğer gelişiminin geç veya erken sakküler evresini göstermiştir. TO grubundaki akciğerler, subsüratif olarak daha yüksek sayıda çekirdekle merkezi ve distal hava sahalarını genişletmişti. Bu protokolü denerken dikişleri fetüsün gözleri görünür olacak şekilde sabitleyeceğiz ve iğnenin ayarlanan yapıları bozmaması için boyun uzatılır.CDH'nin nitril fan ve nakavt modellerinde yapıların fetüsün yeniden doğuşu için çıkarılması bu tekniğin gelecekteki uygulamaları olacaktır.

transuterine-fetal-tracheal-occlusion-model-in-mice

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu video gösterileri ve farelerde obliteratif hava yolu hastalığı (OAD) geliştirilmesi, heterotopik ve ortotopik trakeal nakli modeli incelemek için iki deneysel modeller karşılaştırır.

Obliteratif Havayolu Hastalığı Geliştirme Eğitim Modeli olarak kullanılan Farelerde Heterotopik ve Ortotopik Trakeal Nakli

Fare Enine aort daralma (TAC), kalp hipertrofisi ve kalp yetmezliği gelişme yatan mekanizmaları incelemek için yaygın olarak kullanılan bir deneysel model. Burada, prosedürler, farelerde kalp hipertrofisi tekrarlanabilir bir derece oluşturmak için aort sıkmak için açıklanmaktadır.

Farelerde Enine Aort Konstrüksiyon

Transgenik farelerin genleriyle fizyolojik fonksiyonu atfedilmesi de son derece yararlı olmuştur. Genel olarak böyle, araştırma ve hava yolunun fonksiyonel çalışmalar gibi, özellikle, sıçan modellerinde doğru dikkate değer bir değişim geçirmiş. Burada protokolleri...

Fare kullanarak Trakeal Konstrüksiyon in vitro ölçümleri ise

Biz fare fetüs olarak biyoaktif ajanların intratrakeal yönetimi için yeni bir cerrahi yaklaşım geliştirdi. Teslimat güzergahı sık kullanılan intra-amniyotik enjeksiyon dışında fetal fare akciğerlere hedefleme daha verimlidir. Bu işlem, bir fare modeli tarif edilmemiştir tarihe sahiptir.

Bir Fetal Fare Modelinde Biyoaktif Ajan intratrakeal Yönetimi İçin Yeni Bir Cerrahi Yaklaşım

Bu video, hamile bir farede bir fare fetüsünün transuterin trakeal oklüzyon prosedürünü göstermektedir. Bu model, tıkalı trakeanın akciğer gelişimi üzerindeki etkisini incelemek için kullanılabilir.

Murin Modelinde Transuterin Fetal Trakeal Oklüzyonun Modellenmesi: Gebe Bir Farede Fetal Trakeanın Ligasyonu İçin Cerrahi Bir Prosedür

Biz 2.0 mm spekulum ile bir otoskop kullanarak direkt laringoskopi yoluyla farelerde entübasyon için, basit, güvenilir ve nispeten ucuz bir yöntem geliştirdik. Bu teknik, atravmatik ve kronik deneylerde tekrarlanan ölçümler için de kullanılabilir. Biz üstün trakeostomi veya daha önce cerrahi dışı teknikler bildirdi bulabilirsiniz.

Farelerde Endotrakeal Entübasyon<em&gt; Via</emBir Otoskop Kullanma&gt; Doğrudan Larengoskopi

Burada, transvers aort daralma (TAC) lateral Torakotomi ile bir protokol mevcut. Bu teknik basınç aşırı yük ve kalp yetmezliği standart TAC laboratuvar ayarları kullanan farelerde benzetimini yapmak için amaçlayan bir minimal invaziv, kapalı göğüs cerrahi işlemdir.

Transvers aort daralma farelerde ikna etmek için kapalı-göğüs manken

Greft stenoz mühendislik doku hava yolu değiştirme kritik bir engel teşkil etmektedir. Stenoz temel hücresel mekanizmaları araştırmak için bir fare modeli doku Mühendisliği trakeal değiştirme numaralı seribaşı kemik iliği mononükleer hücreler (BM-MNC) kullanmaktadır. Burada, iskele imalatı, BM-MNC yalıtım, greft tohum ve implantasyon dahil olmak üzere bizim Protokolü ayrıntılı.

Tohum ve bir biyosentetik doku Mühendisliği trakeal greft bir fare modeli implantasyonu

Bu makalenin amacı, laboratuvar faresinin entübasyonunun rafine bir yöntemini açıklamaktır. Yöntem noninvaziv ve bu nedenle, solunum fonksiyonu ve / veya akciğer içine tedavilerin indaşseri izleme gerektiren çalışmalar için idealdir.

Farelerde Tekrarlanan Orotracheal Entübasyon

Ventilasyonu korurken ve hipoksiden kaçınırken sol akciğer iskemisi reperfüzyonu (IR) hasarı oluşturmak için bir fare cerrahi modeli.

Orotrakeal Entübasyon ve Ventilasyonlu Akciğer İskemisi Reperfüzyon Cerrahisinin Bir Fare Modeli

Murin intrapulmoner trakeal transplantasyon (IPTT) modeli, akciğer transplantasyonu sonrası obliteratif hava yolu hastalığını (OAD) incelemek için değerlidir. Allotransplantasyon sonrası hava yolu obliterasyonunda akciğere özgü immünolojik ve anjiyojenik davranış hakkında yüksek tekrarlanabilirlik ile bilgi sunar. Burada, IPTT prosedürünü ve beklenen sonuçlarını açıklıyoruz.

Murin İntrapulmoner Trakeal Transplantasyon: Akciğer Transplantasyonu Sonrası Obliteratif Hava Yolu Hastalığının Araştırılmasında Bir Model

Öğrenin farelerde transuterin fetal trakeal oklüzyon tekniğini kullanarak doğuştan diyafragma hernisinin patofizyolojisini incelemeyi. Bu yöntem akciğer gelişimi ve ilgili hastalıklar üzerine araştırmalar için yenilikçi bir model sunar.

Farelerde Transuterin Fetal Trakeal Oklüzyon Modeli

Daha fazla video keşfet