Bir Murine Kuyruk Lenfödem Modeli
10 Şubat 2021
Lenfödem, lenfatik disfonksiyondan kaynaklanan ekstremite şişmesidir. Lenfödemin kronik bir murine kuyruk modelini ve kuyruğa genetik kargo teslimatı için doku nanotransfeksiyon teknolojisinin (TNT) yeni kullanımını anlatıyoruz.
Lenfödem tedavisi olmayan kronik bir durumdur. Meme kanseri tedavisinde aksiller lenf nodu ameliyatı ve radyasyon geçirmiş hastaların üçte birini etkiler. Geçerli bir hayvan modeline sahip olmak, yeni tedavi stratejilerinin mekanizmasını ve gelişimini anlamayı kolaylaştırır.
Lenfödemin fare kuyruğu modeli hızlı başlangıçlı güvenilir ve tekrarlanabilir. İnsan lenfödemi ile uyumlu histolojik değişiklikler sergiler. Prosedürü gösteren dr. Ganesh Mohan olacak, laboratuvarımdan doktora sonrası.
Başlamak için, sekiz haftalık sakinleştirilmiş fareyi sert bir şekilde yerleştirin ve kuyruğu% 70 izopropil alkolle hazırlayın. Kuyruk çapını kuyruğun tabanından 20 milimetreden başlayan beş milimetrelik artışlarla ölçmek için bir kaliper kullanın. Tabandan 20 milimetrelik kuyrukta üç milimetrelik bir çevresel eksizyon işaretleyin.
Cerrahi mikroskobik büyütme altında, alttaki tüm vaskülatları sağlam bırakarak titiz bir üç milimetre tam kalınlıklı cilt eksizyonu gerçekleştirin. Önce dermisten geçen üstün çevresel işareti, ardından ilk kesiye üç milimetre distal olan çevresel tam kalınlıkta bir kesiyi inkübize edin. İki kesiyi bağlamak için dik tam kalınlıklı dikey kesi yapın, ardından önde gelen bir kenarı kavramak için dişli ince bir pikap kullanın ve avasküler düzlemin derinliklerinde dermis ve mikro makasla damar adventitiasına yüzeysel olarak parçalanın.
Kuyruğun ucuna% 1 izosülfan mavisi deri altı proksimal 0.1 mililitre enjekte edin. Yanal kuyruk damarlarına bitişik enjeksiyon nedeniyle mavi görünen iki lenfatik kanalı tanımlayın. Lenfatikleri dikkatlice transekte edin, düz mikrocerrahi makasla lateral damar ile lenfatik arasındaki bir düzlemi parçalara ayırt edin.
Bir makas bıçağının ucunu lenfatik damar ile lateral damar arasına geçirin ve lenfatik damarı transekte etmek için bıçakları kapatın. Bittiğinde, kuyruk yarasını steril bir yapışan net adresleme ile giydirin. Ucun yakınındaki distal fare kuyruğuna indocyanine yeşil 0.1 mililitre deri altından verin.
Oda ışıklarını karartın, daha sonra tamponlama ayarında kızılötesi lazer anjiyografinin yakınına yerleştirin ve canlı görüntüleme gerçekleştirin. İsosulfan mavisinin kuyruk ucuna verilmesinden sonra, lenfatikler mavi renk sergiledi. Bitişik lateral damarlar korunurken lenfatikler bozuldu.
Lenfödem indüksiyonu sonrası fare kuyruğunda ilerleyici şişlik ve sürekli kalıcı lenfödem burada gösterilmiştir. Kesilmiş bir koni denklemi ile hesaplanan fare kuyruk hacmi, dördüncü haftada zirve yaptı ve altıncı haftaya kadar platolandı ve ardından 15. Lenfödem kuyruk modelinde fare kuyruğu perfüzyonunu doğrulamak için yüksek çözünürlüklü lazer benek kontrast görüntülemesi, kuyruk vaskülat açıklığının değerlendirilmesi için yaralı lateral damarları ve bozulmamış lateral damarları gösteren yapıldı.
Yakın kızılötesi lazer lenfanjiografi preoperatif sağlam lenfatikler gösterdi ve ameliyat sonrası cerrahi bölgenin ötesinde ICG geçişi göstermedi, böylece şişmenin lenfatik disfüzyondan kaynaklandığını doğruladı. Doku nanotransfeksiyon teknolojisi kullanılarak genetik kargo teslimatının verimliliği, floresan amidit etiketli DNA'nın murin kuyruğuna verilmesiyle gösterilmiştir. Fare kuyruğu lenfödem modeli ve kızılötesi lazer anjiyografiye yakın ICG için uyarlamalar kullanmak, tedavi etkileri olan klinik olarak çevrilebilir ve heyecan verici bir hayvan modelidir.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu çalışma, lenfatik disfonksiyon nedeniyle ekstremite şişliği ile karakterize bir durum olan lenfödemin kronik fare kuyruk modelini sunmaktadır. Araştırma, genetik materyalin etkilenen kuyruğa iletilmesi için doku nanotransfeksiyon teknolojisinin (TNT) yenilikçi kullanımını vurgulamaktadır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Biyoloji
- Rejeneratif Tıp
Arka Plan
- Lenfödem, meme kanseri sonrası cerrahi işlem gören birçok hastayı etkileyen ve tedavisi olmayan kronik bir durumdur.
- Mekanizmaların anlaşılması ve tedavi stratejilerinin geliştirilmesi için güvenilir bir hayvan modeli elzemdir.
- Fare kuyruk modeli, insan lenfödemine benzer histolojik değişiklikler göstermektedir.
- Bu çalışma, prosedürü ve tedavideki etkilerini ortaya koymayı amaçlamaktadır.
Çalışmanın Amacı
- Tekrarlanabilir bir fare lenfödem modeli oluşturmak.
- Etkili genetik kargo iletimi için TNT kullanmak.
- Modelin gelecekteki terapötik uygulamalar için potansiyelini değerlendirmek.
Kullanılan Yöntemler
- Fare kuyruğunun hazırlanması ve cerrahi eksizyon teknikleri.
- Lenfatik kanalları görüntülemek için isosulfan blue enjeksiyonu.
- Lenfatiklerin canlı görüntülemesi için yakın kızılötesi lazer anjiyografi kullanımı.
- Kuyruk hacmi değişikliklerinin ve vasküler açıklığın zaman içindeki değerlendirmesi.
Ana Sonuçlar
- Model, progresif şişme ve kalıcı lenfödem sergilemiştir.
- Yüksek çözünürlüklü görüntüleme, komşu venlerin bütünlüğünü doğrulamıştır.
- TNT, genetik materyali kuyruğa başarıyla iletmiştir.
- Model, lenfödem tedavisi için klinik uygulamaya dönüştürülme potansiyeli göstermektedir.
Sonuçlar
- Fare kuyruk modeli, lenfödem çalışmalarında geçerli bir araçtır.
- TNT, genetik müdahaleler için yeni bir yaklaşım sunmaktadır.
- Bu araştırma, lenfödem yönetiminde gelecekteki terapötik stratejilerin önünü açmaktadır.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama ve Önemi
Lenfödem gibi karşılanmamış tıbbi ihtiyacı yüksek olan bir durum için terapötik hedef doğrulamasını riskten arındırmak adına, lenfatik disfonksiyonun güvenilir preklinik modellerinin oluşturulması kritik önem taşımaktadır. Bu kronik fare kuyruk lenfödem modeli, 15 hafta boyunca sürdürülebilir fenotip değerlendirmesini destekleyerek müdahale etkinliğinin boylamsal olarak incelenmesine olanak tanır. Fonksiyonel görüntüleme ve doku nanotransfeksiyon teknolojisinin entegrasyonu, vasküler olarak sağlam bir sistemde mekanistik çalışmalara ve hedeflenmiş genetik yük iletimine imkan sağlayarak translasyonel ilgiyi artırır.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Vasküler bozulma olmaksızın lenfödemin sürekli indüklenmesi yoluyla, lenfatik spesifik terapötik hipotezlerin sorgulanmasına olanak tanır.
- Operasyonel Değer: Lenfanjiyogenez, sıvı homeostazı ve fibrozis yolaklarında yer alan hedeflerin doğrulanması için tekrarlanabilir bir platform sağlar.
- Öngörücü Değer: Adipoz birikimi ve fibrozis dahil olmak üzere insan benzeri histolojik progresyonu modelleyerek mekanistik risk azaltımını destekler.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Bilimsel Değer: Gerçek zamanlı okumalar için indosiyanin yeşili yakın kızılötesi lenfanjiyografi kullanarak kantitatif lenfatik fonksiyon analizlerinin geliştirilmesini kolaylaştırır.
- Operasyonel Değer: Arteriyel ve venöz bütünlüğü onaylamak için yüksek çözünürlüklü lazer speckle kontrast görüntüleme aracılığıyla perfüzyon değerlendirmesinin standartlaştırılmasını sağlar.
- Ölçeklenebilirlik Değeri: Lenfatik onarımı etkileyen bileşiklerin veya genetik modifikasyonların yüksek içerikli taraması için adaptasyonu destekler.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Translasyonel Değer: Kuyruk perfüzyonunu ve 15 hafta boyunca süregelen ödemi koruyarak, akut modellere kıyasla klinik translasyonel uygunluğu artırır.
- Biyobelirteç Uyumu: Görüntüleme tabanlı lenfatik disfonksiyonun, insan hastalığıyla ilgili volumetrik ve histolojik sonlanım noktalarıyla korelasyonuna olanak tanır.
- Terapötik Süreklilik: Vaskülarize dokuda lokalize genetik müdahale stratejisi olarak doku nanotransfeksiyon aracılı iletimin değerlendirilmesini destekler.
Boru Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu model, aday bileşik optimizasyonu ve hastalıkla ilgili bağlamlarda etkinlik testlerinden önce, hedef etkileşimi çalışmaları için valide edilmiş bir sistem sağlayarak keşiften preklinik aşamaya kadar olan sürekliliğe uyum sağlar.
- Keşif Biyolojisi: Fonksiyonel bozulma ve fenotipik okumalar yoluyla lenfatik spesifik hedeflerin hipotez odaklı doğrulanmasını destekler.
- Analiz Hazırlığı: Kuyruk hacmi ölçümleri, lenfatik akış görüntüleme ve vasküler açıklık onayını içeren nicelendirilebilir çıktılar üretir.
- Analitik İmkanlar: 15. haftaya kadar olan zaman noktalarında müdahale etkilerinin istatistiksel karşılaştırması için boylamsal veri setleri sağlar.
- Translasyonel Köprü: Klinik olarak ilgili görüntüleme yöntemleri ve sürdürülebilir fenotip aracılığıyla mekanistik bulguları preklinik doğrulamaya bağlar.
- Platformun Yeniden Kullanımı: Tutarlı model üretimi için laboratuvarlar arası uyarlanabilir standart bir cerrahi ve görüntüleme iş akışı oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Klinik olarak ilgili ve cerrahi açıdan hassas bir model aracılığıyla, lenfatik hedef doğrulamadaki biyolojik belirsizliği azaltır.
- Operasyonel Değer: Standardize edilmiş eksizyon, lenfatik klipleme ve perfüzyon onay protokolleri ile tekrarlanabilirliği artırır.
- Stratejik Değer: Geçici şişme modellerinin ötesinde sürekli fenotip değerlendirmesine olanak tanıyarak, devam/dur karar güvenini geliştirir.
- Portföy Etkisi: 15 haftalık stabilitesi kanıtlanmış bir model kullanarak, lenfatik hedefli adayların riskle uyumlu önceliklendirilmesini destekler.
Uygulama Hususları
- Hassas doku eksizyonu ve lenfatik tanımlama için mikrocerrahi uzmanlığı ve cerrahi mikroskopi erişimi gerektirir.
- Fonksiyonel doğrulama için lazer spekle kontrastı ve yakın kızılötesi anjiyografi sistemleri dahil olmak üzere görüntüleme altyapısına bağlıdır.
- Kuyruk canlılığını ve model tutarlılığını sağlamak için ameliyat sonrası bakım ve izleme protokollerinin standardizasyonunu gerektirir.
- Modelin farklı genetik arka planlara veya komorbidite modellerine uyarlanması durumunda adaptasyon değerlendirmeleri gerektirir.
- Genetik kargo uygulamaları için doku nanotransfeksiyon iletim tekniklerinde özel eğitim gereksinimi nedeniyle sınırlıdır.
Biyofarma SSS
Chapters in this video
0:04
Introduction
0:53
Surgical Disruption of Mouse Tail Lymphatics
2:33
Functional Lymphatic Evaluation with Near Infrared Laser Angiography
2:54
Result: Assessment of Progressive Swelling, Lymphatic Function, and Focal Delivery of Genetic Cargo in the Mouse Tail Lymphedema Model
4:09
Conclusion
