Name: Sıçanlarda Hücreden Sönmemiş Böbrek İskelelerinin Hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-18T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: Keşfedin, sıçan böbreklerinden damarlanmış iskeleler geliştirmek için hücreden arındırma protokolünü. Bu yöntem, ekstraselüler matris yapısını koruyarak çekirdekleri etkili şekilde kaldırır ve doku mühendisliği ile transplantasyon tıbbında uygulama sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Pusan Ulusal Üniversite Hastanesi'nden Biyomedikal Araştırma Enstitüsü Hibesi ile desteklendi.

Bu çalışma Pusan Ulusal Tıp Üniversitesi yönetimi tarafından onaylanmış ve hayvanların kullanımı ve bakımı için etik kurallara uygun olarak yapılmıştır. (sertifika no. 2017-119). Herhangi bir hayvan çalışması öncesinde kurumsal onay alınmalıdır. NOT: Karın organlarının başarılı cerrahi sunumu ve görüntülenmesi için önerilen tüm cerrahi ve anestezik aletler/ekipmanlar ve reaktifler Tablo 1'deayrıntılı olarak açıklanmıştır.
1. Sıçan böbreklerinin toplanması için hazırlık prosedürleri
<ol><li>Ameliyata hazırlanırken, 8 haftalık Sprague-Dawley sıçanlarını (200-250 g ağırlığında) bir ısınma yastığına yerleştirin. Çekirdek sıcaklığını izlemek için rektum içine bir rektal termometre probu yerleştirin.</li>
	<li>Sıçanı% 5 izofluran gazı karışımı ile uyuşturun (indüksiyon: % 5, bakım: % 3).</li>
	<li>Operasyona başlamak için, anestezinin verilmesinden sonra sıçanı bir supine pozisyonuna yerleştirin. Sıçanın dört uzuvlarını bantla ameliyat masasına monte edin.</li>
	<li>Donör sıçanın karnını mikrop öldürücü sabunla tıraş edin ve temizleyin. En az 1-2 dakika boyunca% 2 betadin uygulayın ve% 70 etanol çözeltisi ile silin. Bu sırayı üç kez tekrarlayın.</li>
	<li>Ameliyat alanını steril bir fenestratlı örtü ile örtün.</li>
	<li>Dikey bir karın kesiği yapın ve sol böbreği, üretteri, abdominal aortu ve alt vena kavayı ortaya çıkarın.</li>
	<li>Pedileyi kesmeden hemen önce sol böbreği, üretteri, abdominal aortu ve alt vena kavayı görselleştirin ve parçalara ayırın.</li>
</ol>2. Transkardiyal perfüzyon
<ol><li>Ameliyattan önce perfüzyon çözeltisini hazırlayın.<ol>
<li>Sıçan başına 50 mL perfüzyon çözeltisi yapın.</li>
		<li>1x PBS'i yaklaşık 10 U/mL heparin ile karıştırın (1 25 kU şişe 2,5 L PBS +Hep yapacaktır).</li>
		<li>%4 PFA/1xPBS çözümünü yapmak için 1x PBS ile %8'lik eşit hacimlerde paraformaldehit karıştırın. NOT: Suda yapılan %8 PFA 2 aya kadar 4 °C'de saklanabilir. Bununla birlikte, PBS'de seyreltilmiş% 4 PFA sadece 4 ° C'de 1 hafta boyunca stabildir. Seyreltme taze olsun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dikey karın kesisini kranially olarak uzatın. İç organlara zarar vermemek için keserken makası organlardan çektiğinizden emin olun.</li>
	<li>Kesiği göğüs kafesinden devam ettirin ve ardından sternumu kaldırarak diyaframı kesin.</li>
	<li>Derinin gevşek kapağını yoldan çekin ve herhangi bir bağ dokusunups ile yırtarak kalbi serbest bırakın. DİkKAT: Kalbi serbest bırakmamak için makası kullanmayın ve bu istenmeyen kanamalara neden olabilir.</li>
	<li>Fosfat tamponlu salin (PBS) hattını açın ve iğneyi sol ventriküle yerleştirmeden önce hattın aktığından emin olun. Kalbi künt tokmaklarla hafifçe tutun ve iğneyi kontrol etmek için bir hemostat kullanın. İğne en fazla 1/4 inç sokulmalıdır. NOT: 1/4 inçten büyük ekleme, dokunun diğer tarafına delik açabilir.</li>
	<li>İğne ve hemostat ile kalbi desteklerken, sağ kulakçığı bulun ve iridektomi makası ile içinden kesin. Hemostat farenin vücuduna yaslanın ve iğnenin hala kalbin içine yerleştirilmiş olduğundan emin olun. NOT: Kesik yeterliyse, PBS'den sıçana akan basınç hafiflemiş olduğu için vücut boşluğunda kan olmalıdır.</li>
	<li>Ön ayakları ve cilt kapağını dikkatlice sabitle.</li>
	<li>Böbrek ve karaciğerde hala kan görünüyorsa PBS'ye 4 dakika veya daha uzun süre perfüzyona devam edin.</li>
</ol>3. Böbrek hasadı ve hücreden arındırma
<ol><li>Sol böbreği abdominal aort ve inferior vena kava ile hasat edin.</li>
	<li>Üretter, torasik aort, üstün vena kava ve abdominal aortu dallarını ligat.</li>
	<li>Dulbecco'nun PBS'sinde (DPBS) 10 cm'lik petri kabında organı nemli tutun.</li>
	<li>Abdominal aort ve inferior vena kavayı 23 Gauge kateter ile yalıtın. Artık kanı çıkarmak için kanülleri peristaltik bir pompaya bağlayın ve DPBS (500 mL) ve 16 U/mL heparin ile 37 °C'de 5 rpm hızında 90 dakika yıkayın.</li>
	<li>Böbreği desellülerize etmek için, böbreği 3 saat boyunca% 1 Triton X-100 (1 L) ve daha sonra 40 mmHg sabit basınçta 6 saat boyunca% 0.75 sodyum dodecyl sülfat (SDS) çözeltisi (2 L) ile perfuse edin. NOT: Böbrek 8 saat sonra şeffaf hale gelecektir.</li>
	<li>Artık SDS'yi çıkarmak için, numuneyi damıtılmış suda (6 L) %1 penisilin ile 18 saat (geceleme) ve ardından steril DPBS (500 mL) ve 16 U/mL heparin ile 90 dakika boyunca perfuse edin.</li>
</ol>

<ol><li>Kawai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+report%3A+HLA-mismatched+renal+transplantation+without+maintenance+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Brief report: HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression.</a> New England Journal of Medicine. 358 (4), 353-361 (2008).</li>
<li>Rana, D., Zreiqat, H., Benkirane-Jessel, N., Ramakrishna, S., Ramalingam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+decellularized+scaffolds+for+stem+cell-driven+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Development of decellularized scaffolds for stem cell-driven tissue engineering.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (4), 942-965 (2017).</li>
<li>Fu, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+and+recellularization+technologies+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Decellularization and recellularization technologies in tissue engineering.</a> Cell Transplantation. 23 (4-5), 621-630 (2014).</li>
<li>Hopkinson, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+amniotic+membrane+%28AM%29+denuding+for+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of amniotic membrane (AM) denuding for tissue engineering.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 14 (4), 371-381 (2008).</li>
<li>Shupe, T., Williams, M., Brown, A., Willenberg, B., Petersen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+the+decellularization+of+intact+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Method for the decellularization of intact rat liver.</a> Organogenesis. 6 (2), 134-136 (2010).</li>
<li>Petersen, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+lungs+for+in+vivo+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered lungs for in vivo implantation.</a> Science. 329 (5991), 538-541 (2010).</li>
<li>Fernandez-Perez, J., Ahearne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+decellularization+methods+on+extracellular+matrix+derived+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The impact of decellularization methods on extracellular matrix derived hydrogels.</a> Scientific Reports. 9 (1), 14933(2019).</li>
<li>Naik, A., Griffin, M., Szarko, M., Butler, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+the+decellularization+process+of+an+upper+limb+skeletal+muscle%3B+implications+for+muscle+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Organs%22%5BJournal%5D)">Optimizing the decellularization process of an upper limb skeletal muscle; implications for muscle tissue engineering.</a> Artificial Organs. 44 (2), 178-183 (2020).</li>
<li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li>
<li>Mason, C., Dunnill, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+brief+definition+of+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">A brief definition of regenerative medicine.</a> Regenerative Medicine. 3 (1), 1-5 (2008).</li>
<li>Guyette, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+decellularization+of+whole+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Perfusion decellularization of whole organs.</a> Nature Protocols. 9 (6), 1451-1468 (2014).</li>
<li>Song, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+and+experimental+orthotopic+transplantation+of+a+bioengineered+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Regeneration and experimental orthotopic transplantation of a bioengineered kidney.</a> Nature Medicine. 19 (5), 646-651 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak çıkar çatışmaları yoktur.

Organların ve diğer dokuların hücreden arındırılması için çeşitli protokoller kullanılmıştır. En uygun hücre dışılaştırma protokolü, hücre dışı matrisin (ECM) üç boyutlu mimarisini korumalıdır. Genel olarak, bu tür protokoller hücre zarının fiziksel işleme veya iyonik çözeltilerle lizin edilmesi, sitoplazma ve çekirdeğin enzimatik işleme veya deterjanlarla ECM'den ayrıştırması ve daha sonra hücresel kalıntıların dokudan çıkarılmasından oluşur3. Fiziksel süreçler arasında kazıma, çözelti ajitasyonu...

Hücre kültürü teknikleri, hastalıklı veya hasarlı organların yerini alacak fonksiyonel doku ve organların yenilenmesi için uygulanır. Allojenik organ nakli şu anda geri dönüşü olmayan organ hasarının en yaygın tedavisidir; ancak bu yaklaşım, nakledilen organın reddedilmesini önlemek için immünosupresyon kullanılmasını gerektirir. Ayrıca, transplant immünolojislerindeki gelişmelere rağmen, nakil alıcılarının% 20'si 5 yıl içinde akut ret yaşayabilir ve transplantasyondan sonraki 10 yıl içinde, alıcıların% 40'ı nakledilen greftini kaybedebilir veya1ölebilir.
Doku mühendisliği teknolojilerindeki gelişmeler, farklılaştırılmış kök hücreler kullanılarak bağışıklık reddi olmadan yeni organların nakli için yeni bir paradigma ortaya koymuştur. Kök hücre farklılaşmasından sonra, üç boyutlu organların üretilmesini kolaylaştırmak ve yeni dokunun alıcı içinde gelişmesini sağlamak için sentetik hücre dışı matris adı verilen bir iskeleye ihtiyaç vardır. Hücre dışılaştırılmış yerli organlardan gelen iskeleler, hücrelerin kurulması ve kök hücre çoğalmasının artırılması için daha etkili bir ortam da dahil olmak üzere avantajlara sahiptir, ancak bu mekanizmalar tam olarak aydınlatılmamıştır2. Özellikle böbrek, bol dolaşıma ve kök hücre kuruluşu için bir nişe sahip olduğu için iskele üretimi için uygun bir organdır. Ek olarak, böbreğin karmaşık yapısı nedeniyle, organ nakli için böbrekleri yapay olarak yenilemek zordur.
Bu raporda, doku mühendisliği amacıyla gelecekteki hayvan çalışmalarını kolaylaştırmak için bir sıçan modelinde hücreden sönmemiş organlar kullanarak damarlı iskeleler geliştirme yöntemini tanıtıyoruz.

<table><tbody><tr><td>1 cc şırınga (enjeksiyon probları ve araç solüsyonları</td><td>Becton Dickinson</td><td>305217</td><td></td></tr><tr><td>Damar anastomozu için 10-0 ethilon</td><td>Ethicon</td><td>9032G</td><td></td></tr><tr><td>25 gauge inç kılavuz iğnesi (vasküler kateterler için)</td><td>Becton Dickinson</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>3-0 PDS insizyon kapatma faresi</td><td>Ethicon</td><td>Z316H</td><td></td></tr><tr><td>3-0 Prolene insizyon kapatma faresi</td><td>Sıçanlarda Ethicon</td><td>8832H</td><td></td></tr><tr><td>3-0 ipek makara vasküler erişim/ligasyon</td><td>Braintree Scientific</td><td>SUT-S 110</td><td></td></tr><tr><td>4-0 PDS insizyon kapama faresi</td><td>Ethicon</td><td>Z773D</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Prolene insizyon kapatma faresi</td><td>Ethicon</td><td>8831H</td><td></td></tr><tr><td>farede 5-0 ipek makara vasküler erişim/ligasyon</td><td>Braintree Scientific</td><td>SUT-S 106</td><td></td></tr><tr><td>Fasya / bağ dokusunu kesmek için İnce Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>Halsey iğne tutucu</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>12001-13</td><td></td></tr><tr><td>Sıçanlar için Kelly Hemostat: kesildiğinde kanamayı en aza indirmek için kas kelepçesi</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>13018-14</td><td></td></tr><tr><td>Polietilen 50 boru, kateter borusu 100 ft</td><td>Braintree</td> <td>Scientific.023 "& kez; .038"</td><td></td></tr><tr><td>Schwartz mikroserrefine vasküler klempler</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18052-01 (düz)</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>18052-03 (kavisli)</td><td></td></tr><tr><td>Cildi kesmek için Cerrahi Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14002-12</td><td></td></tr><tr><td>Vannas-Tübingen Arteriyotomi için yaylı makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15003-08</td><td></td></tr></tbody></table>

sıçanlarda hücreden sönmemiş böbrek İskelelerinin hazırlanması

Preparation of Decellularized Kidney Scaffolds in Rats

Doku mühendisliği biyotıpta son teknoloji bir disiplindir. Hastalıklı veya hasarlı organların yerine fonksiyonel doku ve organların yenilenmesi için hücre kültürü teknikleri uygulanabilir. Vivo olarak farklılaştırılmış kök hücreler kullanılarak üç boyutlu organ veya dokuların üretilmesini kolaylaştırmak için iskelelere ihtiyaç vardır. Bu raporda, hücreden sönmemiş sıçan böbrekleri kullanarak damarlı iskeleler geliştirmek için yeni bir yöntem anlatıyoruz. Bu çalışmada sekiz haftalık Sprague-Dawley sıçanları kullanıldı ve heparin böbrek damarlarına akışı kolaylaştırmak için kalbe enjekte edildi ve heparinin böbrek damarlarına nüfuz etmesini sağladı. Karın boşluğu açıldı ve sol böbrek toplandı. Toplanan böbrekler, dokuyu hücreden çıkarmak için Triton X-100 ve sodyum dodecyl sülfat gibi deterjanlar kullanılarak 9 saat boyunca perfüzyona uğradı. Hücreden çıkarıcı böbrek iskeleleri daha sonra hücresel kalıntıları ve kimyasal kalıntıları gidermek için% 1 penisilin / streptomisinin ve heparin ile nazikçe yıkandı. Kök hücrelerin hücre dışılaştırılmış damar iskeleleri ile naklinin yeni organların üretilmesini kolaylaştırması beklanmaktadır. Böylece, damarlı iskeleler gelecekte organ greftlerinin doku mühendisliği için bir temel sağlayabilir.

Sıçan böbreklerinin brüt morfolojisi koyu kırmızıydı (Şekil 1A). Hücreden arındırma sonrası böbrek soluk ve yarı saydam hale geldi(Şekil 1D<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61856/61856fig01.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/...

Bu protokol, hücreden sönmemiş sıçan böbrekleri kullanarak bir iskele geliştirmek için bir yöntem sunar. Protokol, biyoyararlanıcılığı doğrulamak için hücreden arındırma ve yeniden hücreleştirme süreçlerini içerir. Desellülerizasyon Triton X-100 ve sodyum dodecyl sülfat kullanılarak gerçekleştirilir.

Sıçanlarda Hücreden Sönmemiş Böbrek İskelelerinin Hazırlanması

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs ...

Bu protokol, bir sıçan modelinde böbrekler kullanılarak damarlı iskelelerin geliştirilmesini mümkün kılar. Böbrek, farklılaşmış kök hücrelerin iskeleleri için en uygun organdır. Bu, böbreğin hücreden arındırılması için oldukça başarılı bir protokoldür.ECM ultrayapısının minimum tahribatı ile çekirdekleri etkili bir şekilde temizler. Bu teknik transplantasyon tıbbı ve doku mühendisliğine uygulanabilir. Prosedürü gösteren kim Joo Hyoung, laboratuvarımdan plastik cerrahi yüksek lisans/doktora doçenti.Başlamak için, sekiz haftalık Sprague Dawley sıçanını bir ısınma yastığına yerleştirin ve çekirdek sıcaklığını izlemek için rektumda bir rektal termometre probu yerleştirin. Sıçanı uyuşturuyorktan sonra, bir supine pozisyonuna getirin ve dört uzvu bantla masaya sabitleyin. Karnı mikrop öldürücü sabunla tıraş edin ve temizleyin.%2 Betadin'i en az bir ila iki dakika uygulayın, ardından% 70 etanol çözeltisi ile silin. Bu sırayı üç kez tekrarlayın. Ameliyat alanını steril, fenestratlı bir örtü ile örtün.Dikey bir karın kesiği yapın ve sol böbreği, üretteri, abdominal aortu ve alt vena kavayı ortaya çıkarın. Pedileyi kesmeden hemen önce dokuyu parçalara ayrıştırın. PBS'yi mililitre heparin başına yaklaşık 10 ünite ile karıştırarak sıçan başına 50 mililitre perfüzyon çözeltisi hazırlayın.%4 PFA çözümünü yapmak için PBS ile %8 PFA eşit hacimleri karıştırın. Dikey karın kesisini krank olarak uzatın, hasar görmemesi için keserken makası organlardan uzaklaştırdığınızdan emin olun. Kesiği göğüs kafesinden devam ettirin ve ardından sternumu kaldırarak diyaframı kesin.Bir Allis kelepçesi ile gevşek deri kapağını geri çekin ve herhangi bir bağ dokusunups ile yırtarak kalbi serbest bırakın. PBS hattını açın ve iğneyi sol ventriküle yerleştirmeden önce aktığından emin olun. Kalbi künt tokmaklarla hafifçe tutun ve iğneyi kontrol etmek için bir hemostat kullanın.İğne en fazla çeyrek inç sokulmalıdır. İğne ve hemostat ile kalbi desteklerken, sağ kulakçığı bulun ve iridektomi makası ile içinden kesin. Hemostat farenin vücuduna yaslanın ve iğnenin hala kalbin içine yerleştirilmiş olduğundan emin olun.Böbrek ve karaciğerde hala kan görünüyorsa, PBS'ye dört dakika veya daha uzun süre perfüzyona devam edin. Sol böbreği abdominal aort ve inferior vena kava ile hasat edin. Üretter, torasik aort, üstün vena kava ve abdominal aortu dallarını ligat.Organı 10 santimetrelik petri kabında DPBS'de nemlendirin. Abdominal aort ve inferior vena kavayı 23-gauge kateter ile yalıtın. Artık kanı çıkarmak için, kanülleri peristaltik bir pompaya bağlayın ve organı 500 mililitre DPBS ve mililitre heparin başına 16 ünite ile beş rpm ve 37 santigrat derecede 90 dakika yıkayın.Böbreği hücreden çıkarmak için, üç saat boyunca% 1 Triton X-100 ve ardından 40 mililitre cıva sabit basıncında altı saat boyunca% 0.75 SDS çözeltisi ile perfuse edin. Artık SDS'yi çıkarmak için, numuneyi damıtılmış suda%1 penisilin ile 18 saat ve daha sonra steril DPBS ve mililitre heparin başına 16 ünite ile 90 dakika boyunca perfuse edin. Sıçan böbreklerinin brüt morfolojisi koyu kırmızıydı.Hücreden arındırma sonrasında böbrek soluk ve yarı saydam hale geldi. Artık genomik DNA hücre dışı böbrek iskelelerinde ölçüldü ve yerli böbreklerdekiyle karşılaştırıldığında, doku genomik DNA'sının hücreden arındırıldıktan sonra neredeyse ortadan kaldırıldığını doğruladı. 14 vakadan ortalama DNA içeriği kontrol için mikroliter başına 115,05 nanogram, hücreden çıkarılanmış iskele için mikroliter başına 1,96 nanogramdı.Toplamda DNA'nın %98,3'ü çıkarıldı. Kortikal parenkimde üç boyutlu yapı korunmuş ve asellüler glomeruli korunmuştur. İğneyi sol ventrikül içine yerleştirirken, çeyrek inçten fazla yerleştirilmemelidir.Başka bir ekleme diğer taraftan çıkabilir. Bu tekniğin doku mühendisliği alanında yeni bir umut açacağına olan güvenimiz tamdır.

preparation-of-decellularized-kidney-scaffolds-in-rats

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, hücresi kaldırılmış bir sıçan böbreğinin hazırlanışı anlatılmaktadır. Elde edilen aselüler vasküler iskele, organ greftlerinin doku mühendisliği için umut verici bir platform görevi görebilir.

Hücresizleştirilmiş Sıçan Böbreğinin Hazırlanması: Hasat Edilmiş Bir Sıçan Böbreğinden Aselüler Vaskülarize Tüm Organ İskelesi Oluşturma Prosedürü

Tescilli cihazımızı kullanarak karaciğer toplama, kanülasyon ve perfüzyon için sunulan teknikler, sıçan karaciğerlerinde hücre giderme ve yeniden hücreselleştirme deneylerini iyileştirmek için karmaşık perfüzyon kurulumlarını mümkün kılar.

Bir Salınım basınçlı perfüzyon Aygıt Sıçan karaciğerinin decellularization Prosedürü

Bu protokol, Sprague Dawley sıçan böbreklerinin, deterjanların vaskülatür yoluyla antegrad perfüzyonu yoluyla hücreden arındırılmasını tanımlar ve insan böbrek epitel hücreleri ile yeniden popülasyon için şablon görevi gören aselüler renal hücre dışı matrisler üretir. Büyümeyi izlemek için resazurin perfüzyon testinin yeniden hücreselleştirilmesi ve kullanımı, özel olarak tasarlanmış perfüzyon biyoreaktörleri içinde gerçekleştirilir.

Epitel Hücre Repopulation ve Böbrek Doku Kalkınma Kemirgen Ekstrasellüler Matriks iskelelerinin hazırlanması

Böbrek yapıları doku Mühendisliği zararlı etkileri diyaliz ve organ sıkıntısı için bir çözüm sağlar. Burada, bir protokol mikro tarif yalıtım kortiko-medüller segmentleri için fare böbrekler incelemek. Bu segmentler oluşturan böbrek organoids iskele-Alerjik Hücresel yapıları implante edilir.

Mikrodiseksiyon birincil böbrek doku parçaları ve roman iskele-Alerjik yapı teknolojisi ile birleşme

Burada bir iletişim kuralı yerel böbrek hücre dışı matriks (ECM) yapısal ve biyokimyasal kompozisyonu tutulacağı bir böbrek korteks ekstraselüler matrisi elde edilen hidrojel imal etmek mevcut. İmalat süreci ve uygulamaları açıklanmıştır. Son olarak, böbrek özel cep ve doku rejenerasyonu ve Biyomühendislik desteklemek için bu hidrojel kullanarak bir bakış açısı ele alınmıştır.

Bir böbrek korteks ekstraselüler matrisi elde edilen hidrojel imalatı

Bu protokol, desellülarize hassas kesilmiş akciğer dilimlerini alveoler epitel tip 2 hücreleri, fibroblastlar ve endotel hücreleri ile yeniden doldurarak tekrarlanabilir, küçük ölçekli mühendislik ürünü akciğer dokuları oluşturmak için bir yöntemi açıklar.

Desellülerize Akciğer Dilimlerinden Hazırlanan Mühendislik Akciğer Dokuları

Bu yazıda kompozit sıçan arka bacakları için cerrahi teknik ve desellülarizasyon süreci anlatılmaktadır. Desellülarizasyon, bir ex vivo makine perfüzyon sistemi aracılığıyla düşük konsantrasyonlu sodyum dodesil sülfat kullanılarak gerçekleştirilir.

Vaskülarize Kompozit Allotransplantasyon için Ex Vivo Perfüzyon Bazlı Biyoreaktör Kullanılarak Sıçan Arka Bacaklarının Tedariği ve Desellülarizasyonu

Bu çalışmada, fetal fare iskelet kasının desellülarize matrislerini elde etmek için bir desellülarizasyon protokolü optimize edilmiştir. C2C12 miyoblastlar bu matrisleri kolonize edebilir, çoğalabilir ve farklılaşabilir. Bu in vitro model, kas distrofileri gibi iskelet kası hastalıkları bağlamında hücre davranışını incelemek için kullanılabilir.

Hücre Kültürü için Fetal Fare İskelet Kasından 3D Desellülarize Matrislerin Hazırlanması

Bu çalışmada, bitki bazlı biyomalzemelerin hücre çözme, fiziksel karakterizasyon, görüntüleme ve in vivo implantasyon yöntemlerinin yanı sıra yapı iskelelerinde hücre tohumlama ve farklılaşma yöntemlerini detaylandırıyoruz. Açıklanan yöntemler, kemik dokusu mühendisliği uygulamaları için bitki bazlı biyomalzemelerin değerlendirilmesine izin verir.

In Vitro ve In Vivo Kemik Doku Mühendisliği için Hücrelerden Arındırılmış Elma Türevi İskeleler

Hücrelerden arındırılmış dalak matrisi (DSM), karaciğer doku mühendisliği alanında umut verici uygulamalara sahiptir. Bu protokol, sıçan dalaklarının hasat edilmesini, perfüzyon yoluyla hücrelerden arındırılmasını ve özelliklerini doğrulamak için elde edilen DSM'nin değerlendirilmesini içeren sıçan DSM'si hazırlama prosedürünü ana hatlarıyla belirtir.

Sıçanlardan Türetilen Decellularized Spleen Matrix'in İmalatı

Bu protokol, alıcı bir fareye daha sonra transfer edilmek üzere fare böbreğinin ex vivo normotermik makine perfüzyonu ile uygulanmasını tanımlar.

Nakil için Fare Böbreklerinin Normothermic Makine Perfüzyonu

Keşfedin, sıçan böbreklerinden damarlanmış iskeleler geliştirmek için hücreden arındırma protokolünü. Bu yöntem, ekstraselüler matris yapısını koruyarak çekirdekleri etkili şekilde kaldırır ve doku mühendisliği ile transplantasyon tıbbında uygulama sağlar.

Sıçanlarda Hücreden Sönmemiş Böbrek İskelelerinin Hazırlanması

Daha fazla video keşfet