Name: Mikroakışkan Cihazlarda Elektrik Alan Kaynaklı SinirSel Öncül Farklılaşma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Öğrenin, mikroakışkan sistemlerde doğru akım darbe stimülasyonu ile sinirsel öncül hücre farklılaşmasını. Bu yöntem, deneysel kurulum süresini ve reaktif hacmini azaltarak sinirbilim araştırmalarında verimlilik sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Fare sinir sapı ve progenitör hücrelerin (mNPC' ler) sağlanmasındaki yardımı için Academia Sinica Biyomedikal Bilimler Enstitüsü'nden Profesör Tang K. Tang'a teşekkür ediyor. Yazarlar ayrıca Profesör Tang K. Tang ve Bayan Ying-Shan Lee'ye MNPC'lerin farklılaşması konusundaki değerli tartışmaları için teşekkür ediyor.

1. MOE çipinin tasarımı ve imalatı
<ol><li>Tek tek polimetil methakril (PMMA) katmanları ve çift taraflı bant için uygun yazılımı kullanarak desenlerçizin(Şekil 1A, Malzeme Tablosu ). Hem PMMA levhalarını hem de çift taraflı bandı CO2 lazer makine katibi (Şekil 1B)ile kesin.<ol>
<li>CO2 lazer katipini aç ve kişisel bir bilgisayara bağla. Yazılımı kullanarak tasarlanmış desen dosyasını açın.</li>
		<li>PMMA levhaları (275 mm x 400 mm) veya çift taraflı bandı (210 mm x 297 mm) lazer katibinin platformuna yerleştirin (Şekil 2A). Otomatik odaklama aracını kullanarak lazeri PMMA levhalarının yüzeyine veya çift taraflı teybe odaklayın.</li>
		<li>Yazıcı olarak lazer katibi seçin ve ardından PMMA sayfasında veya çift taraflı bantta doğrudan ablasyonu başlatmak ve PMMA sayfasında veya bantta tek tek desenler elde etmek için lazer katibi kullanarak deseni "yazdırın"(Şekil 2B).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Koruyucu filmi PMMA levhalarından çıkarın ve yüzeyi azot gazı kullanarak temizleyin. NOT: PMMA deseninin çizimi ve PMMA levhasının doğrudan işlenmesi önceki bir rapora göregerçeklenmiştir 17.</li>
	<li>Pmma levhaların birden fazla katmanını bir araya getirmek için, 1 mm PMMA levhadan üç parça (Katman 1, 2 ve 3) istifleyin ve akış / elektrik stimülasyon kanalı montajını oluşturmak için110 ° C'de 30 dakika boyunca bir termal bonderde 5 kg / cm 2 basınç altında yapıştırın ( Şekil2C). NOT: Ticari olarak elde edilen farklı PMMA levha partileri biraz farklı cam geçiş sıcaklığına (Tg) sahiptir. Optimum yapıştırma sıcaklığının Tg'ye yakın 5 °C artışlarla test edilmesi gerekir.</li>
	<li>Hızlı etkili siyanoakrilat tutkal ile MOE çip tertibatının Katman 1'deki bireysel açıklıklara 12 parça adaptör yapıştırın. NOT: Adaptörler enjeksiyon kalıplama ile PMMA'dan yapılmıştır. Alttaki düz yüzeyler MOE çipine bağlanmak içindir. 1/4W-28 dişi vidalı diş taşıyan adaptörler, beyaz parmakla sıkı fişleri, düz alt konektörleri veya Luer adaptörlerini bağlamak içindir. Hızlı etkili siyanoakrilat tutkal kullanırken dikkatli olun. Gözlere sıçramaktan kaçının.</li>
	<li>Çipi monte etmeden önce 30 dakika boyunca ultraviyole (UV) ışınlama kullanarak 1 mm PMMA yüzeylerini (Katman 1-3), çift taraflı bandı (Katman 4) ve 3 mm optik sınıf PMMA'yı (Katman 5) dezenfekte edersiniz (Şekil 1A).</li>
	<li>PMMA montajını (Katmanlar 1-5)(Şekil 1A)tamamlamak için 3 mm optik sınıf PMMA'daki (Katman 1-3) 1 mm PMMA substratlarını (Katman 5) çift taraflı bantla (Katman 4) yapıştırın.</li>
	<li>Talaş üzerindeki montaj için temiz kapak camını hazırlayın.<ol>
<li>Deterjanın on kat seyreltilmesini bir boyama kavanozuna doldurun (Malzeme Masası'nabakın) ve bu deterjandaki kapak camını ultrasonik bir temizleyici kullanarak 15 dakika boyunca temizleyin.</li>
		<li>Deterjanın tüm izlerini gidermek için boyama kavanozunu akan musluk suyunun altında iyice durulayın.</li>
		<li>Musluk suyunun tüm izlerini gidermek için damıtılmış suyla durulama işlemine devam edin ve 1.7.2 adımını iki kez tekrarlayın.</li>
		<li>Temizlenen kapak camını azot gazı ile üfleyerek kurutun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PMMA tertibatını (Katmanlar 1-5), çift taraflı bandı (Katman 6) ve kapak camını (Katman 7) çipi monte etmeden önce 30 dakika boyunca bir biyogüvenlik kabini içinde UV ışınlamasını kullanarak dezenfekte etmeyin(Şekil 1A).</li>
	<li>Temizlenen kapak camını (Katman 7) çift taraflı bantla (Katman 6) (Şekil 1A) PMMA tertibatine (Katman1-5)yapıştırın.</li>
	<li>MOE çipini bir gecede bir vakum odasında kuluçkaya yatırın; sonraki prosedürler için MOE çip montajını kullanın (Şekil 3).</li>
</ol>2. Hücre kültürü bölgelerindeki substrat üzerindeki poli-L-lizin (PLL) kaplama
<ol><li>Politetrafloroetilen tüp, düz-alt konektör, koni konektörü, koni-Luer adaptörü, beyaz parmak sıkı fiş (stoper olarak da adlandırılır), Luer adaptörü, Luer kilit şırıngını ve siyah kauçuk bung'u hazırlayın (Şekil 4A, Malzeme Masası). Yukarıdaki tüm bileşenleri 121 °C'de bir otoklavda 30 dakika sterilize edin.</li>
	<li>Agar köprüsü adaptörlerinin açıklıklarını (Şekil 1A) beyaz parmak sıkı fişlerle kapatın. Düz tabanlı konektörü orta giriş ve çıkış adaptörleri(Şekil 4B)aracılığıyla MOE talaş tertibatine bağlayın. Koni-Luer adaptörini 3 yönlü stopcock'lara bağlayın.</li>
	<li>Orta girişin 3 yönlü stopcock'una bağlanan 3 mL şırıngır kullanarak 2 mL% 0.01 PLL çözeltisi ekleyin (Şekil 4B- <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/61917/1.png" style="vertical-align: middle;"> ).</li>
	<li>Orta çıkışın 3 yönlü stopcock'una boş bir 3 mL şırıngır bağlayın (Şekil 4B- <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/61917/2.png" style="vertical-align: middle;"> ).</li>
	<li>Hücre kültürü bölgelerini PLL çözümüyle doldurun. Kaplama solüsyonunu yavaşça ileri geri manuel olarak pompalar. Çözeltiyi kültür bölgelerine kapatmak için iki 3 yönlü stopcock'u kapatın.</li>
	<li>MOE çipini %5 CO2 atmosferi ile dolu bir inkübatörde bir gecede 37 °C'de kuluçkaya yatırın.</li>
</ol>3. Tuz köprüsü ağının hazırlanması
<ol><li>2.6. adımı takiben, iki şırınnayı kullanarak kaplama solüsyonunu kanala ileri geri manuel olarak pompalayarak iki 3 yönlü stopcock'u açın ve kanallardaki kabarcıkları yıkayın.</li>
	<li>3 mL komple ortam çizin (Dulbecco'nun modifiye Eagle orta/Ham besin karışımı F-12 (DMEM/F12), %2 B-27 takviyesinden oluşan kök hücre bakım ortamı, 20 ng/mL EGF ve 20 ng/mL bFGF), orta girişin 3 yönlü stopcock'una bağlanan 3 mL şırınna (Şekil 4B- <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/61917/1.png" style="vertical-align: middle;"> ve Şekil 4B- <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/61917/3.png" style="vertical-align: middle;"> ).</li>
	<li>Hücre kültürü bölgelerindeki kaplama çözeltisini değiştirmek için 3 mL tam orta ekleyin. Orta çıkışın 3 yönlü stopcock'una boş bir 5 mL şırıngır bağlayın (Şekil 4B- <img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/61917/4.png" style="vertical-align: middle;"> ).</li>
	<li>Tuz köprüsü ağını hazırlayın (Şekil 5).<ol>
<li>Bir boşluk oluşturmak için siyah kauçuk bung'u kesin ve gümüş (Ag)/gümüş klorür (AgCl) elektrotlarını siyah kauçuk bung'dan geçirip Luer kilit şırıngına yerleştirin (Şekil 4A).</li>
		<li>Beyaz parmak ucu fişini Luer adaptörü ile değiştirin ve Luer adaptörünü doldurmak için% 3 sıcak agarose enjekte edin. NOT: Sıcak agazozun hazırlanması için, 3 g agarose tozunun 100 mL fosfat tamponlu salin (PBS) içinde çözün ve 121 °C'de bir otoklavda 30 dakika sterilize edin.</li>
		<li>Luer kilit şırındını Luer adaptörüne bağlayın. Şırıngayı iğneyle kullanarak Luer kilit şırıngasını doldurmak için siyah kauçuk bung'dan% 3 sıcak agarose enjekte edin. Agarose'un soğuması ve katılaşması için 10 ila 20 dakika bekleyin. NOT: Agarose'un hacim kapasitesini artırmak için, Luer kilit şırıngası Luer adaptörüne monte edilir (Şekil 4 ve Şekil 5). Daha sonra, büyük elektrotlar Luer kilit şırındıcına yerleştirilir. Elektrot, uzun süreli deney için istikrarlı bir elektriksel uyarım sağlayabilir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. MNPC'lerin Hazırlanması
<ol><li>MNPC'leri1'i% 5 CO 2 atmosferi ile dolu bir inkübatörde 37 ° C'de25T hücre kültürü şişesinde tam ortamda kültür edin. Hücreleri her 3-4 günde bir alt kültüre alın ve orijinal kaynaktan 3-8 geçiş geçirmiş hücrelerle tüm deneyleri yapın.</li>
	<li>Hücre süspansiyonu 15 mL konik bir tüpe aktarın ve nörosferleri 5 dakika boyunca 100 × g'da aşağı çevirin. Süpernatantı aspire edin ve nörosferleri 1x Dulbecco PBS (DPBS) ile yıkayın. Nörosferleri 5 dakika boyunca 100 × g'da aşağı çevirin.</li>
	<li>1x DPBS'yi aspire edin ve ardından nörosferleri tam ortamda yeniden diriltin. İyice ve nazikçe karıştırın.</li>
	<li>Çıkışın 3 yönlü stopcock'una bağlanan 1 mL şırıngır kullanarak nörosfer süspansiyonunun 1 mL'lik kısmını ekleyin (Şekil 4B- <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/61917/2.png" style="vertical-align: middle;"> ).</li>
</ol>5. DC darbe stimülasyonu için mikroakışkan sistemin kurulumu (Şekil 6)
<ol><li>Hücre tohumlu MOE çipini programlanabilir bir X-Y-Z motorlu sahneye tutturulmuş şeffaf ITO ısıtıcıya takın. NOT: ITO yüzey sıcaklığı orantılı-integral türev kontrolör tarafından kontrol edilir ve 37 °C'de tutulur. Çip içindeki hücre kültürü bölgelerinin sıcaklığını izlemek için çip ve ITO ısıtıcısı arasına K tipi bir termokuple kenetlenir. MOE çipi programlanabilir bir X-Y-Z motorlu sahneye monte edilir ve tek tek kanal bölümlerinde otomatik zaman atlamalı görüntü alımı için uygundur. ITO ısıtıcının imalatı ve hücre kültürü ısıtma sisteminin kurulumu daha önceaçıklanmıştır 18,19.</li>
	<li>MNPC'leri, orta çıkış üzerinden MOE çipine manuel pompalayarak demleyin. Hücre tohumlu MOE çipini 37 °C ITO ısıtıcıda 4 saat boyunca kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>4 saat sonra, bir şırıng pompası kullanarak 20 μL/ s akış hızında orta giriş yoluyla MOE çipi aracılığıyla tam ortamı pompalayın. NOT: MNPC'ler, hücre bağlanmasına ve büyümesine izin vermek için EF stimülasyonundan önce 24 saat daha çipte yetiştirilir ve korunur. Atık sıvı, Şekil 6A'da"atık" olarak gösterilen çıkışın 3 yönlü stopcock'una bağlı boş bir 5 mL şırınna içinde toplanır. MOE mikroakışkan sistem yapılandırması Şekil 6'da gösterilmiştir. Bu mikroakışkan sistem hücrelere sürekli beslenme sağlar. Tam taze ortam, sabit bir pH değerini korumak için sürekli olarak MOE çipine pompalanır. Bu nedenle, hücreler bir CO2 inkübatörü dışında kültürlenebilir.</li>
	<li>Çip üzerindeki Ag/AgCl elektrotları aracılığıyla MOE çipine bir EF çoklayıcı bağlamak için elektrik kablolarını kullanın. P görev döngüsünde (P zaman açık ve P zaman kaybetme) 100 Hz frekansta 300 mV/mm şiddetinde kare dalga DC darbeleri çıkarmak için bir EF çoklayıcı ve bir fonksiyon üreteciyi amplifikatöre bağlayın(Şekil 6B).<ol>
<li>Elektrik kablolarını EF çoklayıcıya bağlayın. Elektrik kablolarını Ag/AgCl elektrotları aracılığıyla MOE çipine bağlayın.</li>
		<li>EF çoklayıcıyı elektrik tellerini kullanarak amplifikatöre bağlayın. Fonksiyon jeneratörünü amplifikatöre ve dijital osiloskopa bağlayın. NOT: EF çoklayıcı, devredeki kültür odasının empedansını içeren ve tüm bireysel odaları paralel bir elektronik ağa bağlayan bir devredir. Üç kültür odasının her biri, çoklayıcıdaki değişken bir direnç (Vr) ve bir ammetreye (Şekil 6A'da μAolarak gösterilir) seri olarak bağlanır. Her kültür odasındaki elektrik akımı Vr'ı kontrol ederek değişir ve akım ilgili ammetrede gösterilir. Her hücre kültürü bölgesindeki elektrik alanı gücü Ohm Yasası, I= φEA, elektrik akımı olduğum, σ (DMEM/ F12 20 için1.38 S·m-1olarak ayarlanır) kültür ortamının elektrik iletkenliği, E elektrik alanı ve A elektrottik odanın kesit alanıdır. Şekil 1'degösterilen hücre kültürü bölge boyutu için, elektrik akımı sırasıyla P görev döngüsünde DC ve DC darbesi için ~87 mA ve ~44 mA'dır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>MNPC'leri 48 saat boyunca 100 Hz frekansta 300 mV/mm büyüklüğünde kare DC darbelere tabi edin. Hücrelere yeterli beslenmeyi sağlamak ve ortamda sabit bir pH değerini korumak için tam ortamı 10 μL/s hızında sürekli pompalayın.</li>
</ol>6. Darbeli DC stimülasyonundan sonra mNPC'lerin immünofluoresans tahlilleri
NOT: Bu adımda, tüm reaktifler bir şırınna pompası kullanılarak orta giriş yoluyla pompalanır.
<ol><li>Tohumlamadan sonra 3, 7 veya 14 gün in vitro (DIV) kültlemeden sonra1, hücreleri 25 μL / dk akış hızında 1x PBS ile 20 dakika yıkayın.</li>
	<li>Hücreleri %4 paraformaldehit (PFA) ile sabitle. 1x PBS'yi değiştirmek için 20 dakika boyunca 25 μL/dk akış hızında çipe %4 PFA pompala. % 4 PFA'yı değiştirmek için, hücreleri 20 dakika boyunca 25 μL / dk akış hızında 1x PBS ile yıkayın.</li>
	<li>Hücrelerin dengesini sağlamak için 6 dakika boyunca 50 μL/dk akış hızında çipe %0,1 Triton X-100 pompala. Hücrelere tepki vermek için 30 dakika daha akış hızını 50 μL/s'ye düşürün. % 0,1 Triton X-100'ü değiştirmek için, hücreleri 6 dakika boyunca 50 μL / dk akış hızında 1x PBS ile yıkayın.</li>
	<li>Spesifik olmayan antikor bağlanmasını azaltmak için % 1 sığır serum albümini (BSA) içeren PBS ile hücreleri engelleyin. Çipe 6 dakika boyunca 50 μL/dk debide %1 BSA pompala. Debiyi 100 μL/s'ye düşürün ve 1 saat pompaya düşürün.</li>
	<li>Çift immünostaining için antikorları 6 dakika boyunca 50 μL/ dk akış hızında çipe pompala ve çipi 4 °C'de 18 saat kuluçkaya yatır. Hücreleri 1x PBS ile 50 μL/dk akış hızında 15 dakika boyunca yıkayın.</li>
	<li>Alexa Fluor konjuge ikincil antikorları 6 dakika boyunca 50 μL/dk akış hızında çipe pompala. Akış hızını 50 μL/s'ye düşürün ve antikorları karanlıkta oda sıcaklığında 1 saat pompalayın. Hücreleri 1x PBS ile 50 μL/dk akış hızında 15 dakika boyunca yıkayın.</li>
	<li>Nükleer boyama için Hoechst 33342'yi karanlıkta oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 20 μL/dk akış hızında talaşın içine pompalayın. Hücreleri 1x PBS ile 50 μL/dk akış hızında 15 dakika boyunca yıkayın.</li>
	<li>İmmünasyondan sonra, konfokal floresan mikroskop kullanarak hücreleri gözlemleyin.</li>
</ol>7. Görüntü analizi ve veri işleme
<ol><li>Floresan görüntüleri yerleşik ölçüm araçlarıyla yazılım kullanarak analiz edin (Bkz. Malzeme Tablosu).</li>
	<li>Kontrol ve tedavi gruplarındaki Hoechst-counterstained çekirdeklerini (toplam hücre sayısı) karşılaştırın ve her fenotipik işaretçiyi ifade eden hücrelerin yüzdesini hesaplayın.</li>
</ol>

<ol><li>Chang, H. F., Lee, Y. S., Tang, T. K., Cheng, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsed+DC+electric+field-induced+differentiation+of+cortical+neural+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Pulsed DC electric field-induced differentiation of cortical neural precursor cells.</a> PLoS One. 11 (6), e0158133(2016).</li>
<li>Li, S., Li, H., Wang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orientation+of+spiral+ganglion+neurite+extension+in+electrical+fields+of+charge-balanced+biphasic+pulses+and+direct+current+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+research%22%5BJournal%5D)">Orientation of spiral ganglion neurite extension in electrical fields of charge-balanced biphasic pulses and direct current in vitro.</a> Hearing research. 267 (1-2), 111-118 (2010).</li>
<li>Rajnicek, A. M., Robinson, K. R., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+direction+of+neurite+growth+in+a+weak+DC+electric+field+depends+on+the+substratum%3A+contributions+of+adhesivity+and+net+surface+charge%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">The direction of neurite growth in a weak DC electric field depends on the substratum: contributions of adhesivity and net surface charge.</a> Developmental biology. 203 (2), 412-423 (1998).</li>
<li>Kim, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+proliferation+and+differentiation+in+neural+precursor+cells+by+the+Jak+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of proliferation and differentiation in neural precursor cells by the Jak pathway.</a> Stem Cells. 28 (10), 1816-1828 (2010).</li>
<li>Cunha, F., Rajnicek, A. M., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+stimulation+directs+migration%2C+enhances+and+orients+cell+division+and+upregulates+the+chemokine+receptors+CXCR4+and+CXCR2+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Electrical stimulation directs migration, enhances and orients cell division and upregulates the chemokine receptors CXCR4 and CXCR2 in endothelial cells.</a> Journal of Vascular Research. 56 (1), 39-53 (2019).</li>
<li>Chang, H. F., Cheng, H. T., Chen, H. Y., Yeung, W. K., Cheng, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxycycline+inhibits+electric+field-induced+migration+of+non-small+cell+lung+cancer+%28NSCLC%29+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Doxycycline inhibits electric field-induced migration of non-small cell lung cancer (NSCLC) cells.</a> Scientific Reports. 9 (1), 8094(2019).</li>
<li>Tsai, H. F., Peng, S. W., Wu, C. Y., Chang, H. F., Cheng, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrotaxis+of+oral+squamous+cell+carcinoma+cells+in+a+multiple-electric-field+chip+with+uniform+flow+field%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">Electrotaxis of oral squamous cell carcinoma cells in a multiple-electric-field chip with uniform flow field.</a> Biomicrofluidics. 6 (3), 34116(2012).</li>
<li>Huang, C. W., Cheng, J. Y., Yen, M. H., Young, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrotaxis+of+lung+cancer+cells+in+a+multiple-electric-field+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip.</a> Biosensors and Bioelectronics. 24 (12), 3510-3516 (2009).</li>
<li>Jing, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+electrical+stimulation+with+different+electric-field+intensities+in+the+regulation+of+the+differentiation+of+PC12+cells%5BTitle%5D)+AND+%22American+Chemical+Society+Chemical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Study of electrical stimulation with different electric-field intensities in the regulation of the differentiation of PC12 cells.</a> American Chemical Society Chemical Neuroscience. 10 (1), 348-357 (2019).</li>
<li>Guo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-powered+electrical+stimulation+for+enhancing+neural+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells+on+graphene-poly%283%2C4-ethylenedioxythiophene%29+hybrid+microfibers%5BTitle%5D)+AND+%22American+Chemical+Society+Nano%22%5BJournal%5D)">Self-powered electrical stimulation for enhancing neural differentiation of mesenchymal stem cells on graphene-poly(3,4-ethylenedioxythiophene) hybrid microfibers.</a> American Chemical Society Nano. 10 (5), 5086-5095 (2016).</li>
<li>Manabe, M., Mie, M., Yanagida, Y., Aizawa, M., Kobatake, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+effect+of+electrical+stimulation+and+cisplatin+in+HeLa+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Combined effect of electrical stimulation and cisplatin in HeLa cell death.</a> Biotechnology and Bioengineering. 86 (6), 661-666 (2004).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+moderate+exogenous+electric+field+stimulation+on+activating+netrin-1%2FDCC+expression+against+mechanical+stretch-induced+injury+in+spinal+cord+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicity+Research%22%5BJournal%5D)">Protective effect of moderate exogenous electric field stimulation on activating netrin-1/DCC expression against mechanical stretch-induced injury in spinal cord neurons.</a> Neurotoxicity Research. 34 (2), 285-294 (2018).</li>
<li>Haan, N., Song, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+application+of+electric+fields+in+the+injured+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Wound+Care%22%5BJournal%5D)">Therapeutic application of electric fields in the injured nervous system.</a> Advances in Wound Care. 3 (2), 156-165 (2014).</li>
<li>Ariza, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+electric+fields+on+hippocampal+neural+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews+and+Reports%22%5BJournal%5D)">The influence of electric fields on hippocampal neural progenitor cells.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 6 (4), 585-600 (2010).</li>
<li>Huang, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+of+human+lung+cancer+cell+line+CL1-5+in+response+to+a+direct+current+electric+field%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Gene expression of human lung cancer cell line CL1-5 in response to a direct current electric field.</a> PLoS One. 6 (10), e25928(2011).</li>
<li>Sun, Y. S., Peng, S. W., Lin, K. H., Cheng, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrotaxis+of+lung+cancer+cells+in+ordered+three-dimensional+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">Electrotaxis of lung cancer cells in ordered three-dimensional scaffolds.</a> Biomicrofluidics. 6 (1), 14102-14114 (2012).</li>
<li>Hou, H. S., Chang, H. F., Cheng, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrotaxis+studies+of+lung+cancer+cells+using+a+multichannel+dual-electric-field+microfluidic+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Electrotaxis studies of lung cancer cells using a multichannel dual-electric-field microfluidic chip.</a> Journal of Visualized Experiments. 106, e53340(2015).</li>
<li>Cheng, J. Y., Yen, M. H., Hsu, W. C., Jhang, J. H., Young, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ITO+patterning+by+a+low+power+Q-switched+green+laser+and+its+use+in+the+fabrication+of+a+transparent+flow+meter%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Micromechanics+and+Microengineering%22%5BJournal%5D)">ITO patterning by a low power Q-switched green laser and its use in the fabrication of a transparent flow meter.</a> Journal of Micromechanics and Microengineering. 17 (11), 2316-2323 (2007).</li>
<li>Cheng, J. Y., Yen, M. H., Kuo, C. T., Young, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transparent+cell-culture+microchamber+with+a+variably+controlled+concentration+gradient+generator+and+flow+field+rectifier%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">A transparent cell-culture microchamber with a variably controlled concentration gradient generator and flow field rectifier.</a> Biomicrofluidics. 2 (2), 24105(2008).</li>
<li>Fuhr, G., Shirley, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+handling+and+characterization+using+micron+and+submicron+electrode+arrays%3A+state+of+the+art+and+perspectives+of+semiconductor+microtools%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Micromechanics+and+Microengineering%22%5BJournal%5D)">Cell handling and characterization using micron and submicron electrode arrays: state of the art and perspectives of semiconductor microtools.</a> Journal of Micromechanics and Microengineering. 5 (2), 77-85 (1995).</li>
<li>AChang, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biphasic+electrical+currents+stimulation+promotes+both+proliferation+and+differentiation+of+fetal+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Biphasic electrical currents stimulation promotes both proliferation and differentiation of fetal neural stem cells.</a> PLoS One. 6 (4), e18738(2011).</li>
<li>Lim, J. H., McCullen, S. D., Piedrahita, J. A., Loboa, E. G., Olby, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternating+current+electric+fields+of+varying+frequencies%3A+effects+on+proliferation+and+differentiation+of+porcine+neural+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reprogram%22%5BJournal%5D)">Alternating current electric fields of varying frequencies: effects on proliferation and differentiation of porcine neural progenitor cells.</a> Cell Reprogram. 15 (5), 405-412 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

MOE çipinin imalatı sırasında, adaptörler hızlı etkili siyanoakrilat tutkal ile MOE çipinin Katman 1'ine bağlanır. Tutkal adaptörlerin 4 köşesine uygulanır ve daha sonra adaptörlerin üzerine eşit basınç uygulanır. Tutkalın tam polimerizasyonunu sağlamak için fazla miktarda tutkaldan kaçınılmalıdır. Ayrıca, tamamlanan MOE talaş montajı bir vakum odasında inkübe edilir. Bu adım PMMA katmanı, çift taraflı bant ve kapak camı arasındaki kabarcıkların giderilmesine yardımcı olur.
Elektrot malzemesin...

Nöral öncül hücreler (NPC'ler, nöral kök ve progenitör hücreler olarak da bilinir) nörodejeneratif terapötik strateji için umut verici bir aday olabilir1. Farklılaşmamış NPC'ler kendi kendini yenileme kapasitesine, çoklu güçlülüğe ve proliferatif yete sahip2,3. Daha önceki bir çalışmada hücre dışı matris ve moleküler arabulucuların NPC'nin farklılaşmasını düzenlediği bildirilmiştir. Epidermal büyüme faktörü (EGF) ve temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF) NPC çoğalmasını teşvik eder, böylece farklılaşmamış durumu korur4.
Önceki çalışmalar, elektriksel stimülasyonun bölüm 5 , göç 6 , 7,8, farklılaşma1,9,10ve hücreölümü11gibi hücre fizyolojik faaliyetlerini düzenleyebileceğini bildirmiştir. Elektrik alanları (EF'ler) merkezi sinir sistemi gelişiminin geliştirilmesinde ve yenilenmesinde hayati roller oynar12,13,14. 2009'dan 2019'a kadar bu laboratuvar, EF'nin mikroakışkan sistem 1 ,6 , 7 ,8,15,16,17'dekiuygulamasına verilen hücresel yanıtları araştırmıştır. Çok kanallı, optik olarak şeffaf, elektroaktik (MOE) çip, konfokal mikroskopi için immünofluoresans boyamaya uygun olacak şekilde tasarlanmıştır. Çip yüksek optik şeffaflığa ve iyi dayanıklılığa sahipti ve tek bir çalışmada üç bağımsız stimülasyon deneyinin ve birkaç immünostained koşulun aynı anda yapılmasına izin verdi. Mikroakışkan sistem, genel deneysel kurulumu ve buna karşılık reaktif ve numune tüketimini basitleştirmede faydalıdır. Bu makalede, uzun süreli hücre farklılaşması çalışması için kullanılan mikroakışkan hücre kültürü sisteminin gelişimi açıklanmaktadır.

<table><tbody><tr><td>1 mm PMMA yüzeyleri (Katmanlar 1-3)</td><td>BHT</td><td>K2R20</td><td>Polimetil metakrilat (PMMA), http://www.bothharvest.com/zh-tw/product-421076/Optical-PMMA-Non-Coated-BHT-K2Rxx-xx=-thickness-choices.html</td></tr><tr><td>15 mL plastik tüp</td><td>Protech Technology Enterprise Co., Ltd</td><td>CT-15-PL-TW</td><td>Kapaklı konik tabanlı tüp, monte edilmiş, önceden sterilize edilmiş</td></tr><tr><td>3 mL şırınga</td><td>TERUMO</td><td>DVR-3413</td><td>3 mL oral şırınga, iğnesiz</td></tr><tr><td>3 mm optik sınıf PMMA (Katman 5)</td><td>CHI MEI Corporation</td><td>ACRYPOLY PMMA Levha</td><td>Optik sınıf PMMA</td></tr><tr><td>3 musluk</td><td>NIPRO</td><td>NCN-3L</td><td>Steril tek kullanımlık 3 musluk</td></tr><tr><td>5 mL şırınga</td><td>TERUMO</td><td>DVR-3410</td><td>5 mL oral şırıngalar, iğnesiz</td></tr><tr><td>Adaptör</td><td>Dong Zhong Co., Ltd.</td><td>Özelleştirilmiş</td><td>PMMA adaptörü</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9414</td><td>Agaroz, düşük jelleşme sıcaklığı</td></tr><tr><td>Amplifikatör</td><td>AA Lab Systems Ltd A-304</td><td></td><td>Yüksek gerilim amplifikatörü</td></tr><tr><td>AutoCAD yazılımı</td><td>Autodesk</td><td>Eğitim</td><td>Sürümü Taslağı</td></tr><tr><td>B-27 eki</td><td>Gibco</td><td>12587-010</td><td>B-27 takviyesi (50x), eksi A vitamini</td></tr><tr><td>Temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF)&nbsp;</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-18B</td><td>Rekombinant insan FGF-bazik olarak da adlandırılır</td></tr><tr><td>Siyah kauçuk sap</td><td>TERUMO</td><td>DVR-3413</td><td>3 mL oral şırıngalardan, iğnesiz</td></tr><tr><td>Sığır serum albümini (BSA)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>B4287</td><td>Bloke edici reaktif&nbsp;</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>HSIANGTAI</td><td>CV2060</td><td>Santrifüj</td></tr><tr><td>CO2 lazer yazıcı</td><td>Lazer Araçları ve Teknikleri A.Ş. & nbsp;</td><td>ILS-II</td><td>http://www.lttcorp.com/index.htm Koni konektöründen satın alındı</td></tr><tr><td></td><td>IDEX Health & Bilim</td><td>F-120X</td><td>Tek parça parmak geçirmez 10-32 koni, 1/16 "OD doğal</td></tr><tr><td>Koni-Luer adaptörü</td><td>IDEX Sağlık & Science</td><td>P-659</td><td>Luer Adaptörü 10-32 Dişi - Dişi Luer, PEEK</td></tr><tr><td>Konfokal floresan mikroskobu</td><td>Leica Microsystems</td><td>TCS SP5</td><td>Leica TCS SP5 kullanım kılavuzu, http://www3.unifr.ch/bioimage/wp-content/uploads/2013/10/User-Manual_TCS_SP5_V02_EN.pdf</td></tr><tr><td>Dijital kamera</td><td>OLYMPUS</td><td>E-330</td><td>Otomatik hızlandırılmış görüntü yakalama</td></tr><tr><td>Dijital osiloskop</td><td>Tektronix</td><td>TDS2024</td><td>Genlik ve frekansı görüntülemek için bir elektronik devrede veya bileşende zaman içindeki voltaj veya akım sinyallerini ölçün.</td></tr><tr><td>Çift taraflı bant</td><td>3M&nbsp;</td><td>PET 8018</td><td>http://en.thd.com.tw/</td></tr> <tr><td>Dulbecco'dan satın alındı s değiştirilmiş Kartal' s orta/Jambon besin karışımı F-12 (DMEM/F12)</td><td>Gibco</td><td>12400024</td><td>DMEM/F-12, toz, HEPES</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun fosfat tamponlu tuzlu su (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>21600010</td><td>DPBS, toz, kalsiyum yok, magnezyum yok</td></tr><tr><td>EF çoklayıcı</td><td>Asiatic Sky Co., Ltd.</td><td>özelleştirilmiş</td><td>Bireysel kanallarda elektrik akımını izleyin ve kontrol edin</td></tr><tr><td>Epidermal büyüme faktörü (EGF)</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td>Rekombinant insan EGF olarak da adlandırılır</td></tr><tr><td>Hızlı etkili siyanoakrilat yapıştırıcı</td><td>3M&nbsp;</td><td>7004T</td><td>Mukavemetli anında yapıştırıcı (sıvı)</td></tr><tr><td>Düz tabanlı konektör</td><td>IDEX Health & Science</td><td>P-206</td><td>Flanşsız erkek somun Delrin, 1/4-28 düz tabanlı, 1/16" OD mavi için</td></tr><tr><td>Fonksiyon üreteci</td><td>Agilent Technologies</td><td>33120A</td><td>Yüksek performanslı 15 MHz sentezlenmiş&nbsp; Fonksiyon üreteci&nbsp; yerleşik rasgele dalga biçimi özelliği ile</td></tr><tr><td>Keçi anti-fare IgG H & L (Alexa Fluor 488)</td><td>Abcam</td><td>ab150117</td><td>Keçi anti-fare IgG H & L (Alexa Fluor 488) önceden empoze edilmiş</td></tr><tr><td>Keçi anti-tavşan IgG H & L (Alexa Fluor 555)</td><td>Abcam</td><td>ab150086</td><td>Tavşan IgG'ye keçi poliklonal ikincil antikoru - H& L (Alexa Fluor 555), önceden emilmiş</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Invitrogen</td><td>H3570</td><td>Nükleer boyama</td></tr><tr><td>ImageJ yazılımı</td><td>Ulusal Sağlık Enstitüleri</td><td>1.48v</td><td>Floresan görüntüleri analiz edin&nbsp;</td></tr><tr><td>İndiyum&ndash; kalay&ndash; oksit (ITO) cam</td><td>Merck</td><td>300739</td><td>ITO ısıtıcı için</td></tr><tr><td>Ters faz kontrast mikroskobu</td><td>OLYMPUS</td><td>CKX41</td><td>Hücre morfolojisi gözlemi için</td></tr><tr><td>K-tipi termokupl</td><td>Tecpel</td><td>TPK-02A</td><td>Sıcaklık&nbsp; termokupllar</td></tr><tr><td>Luer adaptörü</td><td>IDEX Sağlık & Bilim</td><td>P618-01</td><td>Luer adaptörü dişi Luer 1 / 4-28 erkek polipropilen</td></tr><tr><td>Luer kilit şırınga</td><td>TERUMO</td><td>DVR-3413</td><td>Agar tuz köprüleri için</td></tr><tr><td>Fare anti-GFAP</td><td>eBioscience</td><td>14-9892</td><td>Astrosit işaretleyici</td></tr><tr><td>Oligodendrosit &nbsp; işaretleyici&nbsp; O4&nbsp; antikor</td><td>R & D Systems</td><td>MAB1326</td><td>Oligodendrosit işaretleyici</td></tr><tr><td>Paraformaldehit (PFA)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>Fiksaj&nbsp; </td></tr><tr><td>ajan Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS)</td><td>Temel Ömür</td><td>BL2651</td><td>Yıkama çözeltisi</td></tr><tr><td>Poli-L-Lizin (PLL)</td><td>SIGMA</td><td>P4707</td><td>Kaplama çözeltisi</td></tr><tr><td>Hassas kapak camları kalınlığı No. 1.5H</td><td>MARIENFELD</td><td>107242</td><td>https://www.marienfeld-superior.com/precision-cover-glasses-thickness-no-1-5h-tol-5-m.html</td></tr><tr><td>Programlanabilir XYZ motorlu sahne</td><td>Tanlian Inc</td><td>Özelleştirilmiş</td><td>http://www.tanlian.tw/ndex.files/motort.htm</td></tr><tr><td>Orantılı&ndash; İntegral&ndash; türev (PID) kontrol cihazı</td><td>Toho Electronics</td><td>TTM-J4-R-AB</td><td>Sıcaklık kontrol cihazı&nbsp;</td></tr><tr><td>PTFE tüp</td><td>Professional Plastics Inc. Tayvan Şubesi</td><td>Dış çap 1/16 İnç</td><td>Beyaz yarı saydam PTFE boru</td></tr><tr><td>Tavşan anti-Tuj1</td><td>Abcam</td><td>ab18207</td><td>Nöron işaretleyici</td></tr><tr><td>Şırınga pompası</td><td>New Era Systems Inc</td><td>NE-1000</td><td>NE-1000 programlanabilir tek şırınga pompası</td></tr><tr><td>TFD4 deterjan</td><td>FRANKLAB</td><td>TFD4</td><td>Kapak cam temizleyici</td></tr><tr><td>Termal bağlayıcı</td><td>Kuan-MIN Teknoloji A.Ş.</td><td>özelleştirilmiş</td> http://kmtco.com.tw/ Triton X-100 Sigma-Aldrich T8787'den <td>satın alındı</td></tr> <tr><td></td><td></td><td></td><td>Geçirgen çözelti</td></tr><tr><td>Ultrasonik temizleyici</td><td>LEO</td><td>LEO-300S</td><td>Ultrasonik steri-temizleyici</td></tr><tr><td>Vakum odası</td><td>DENG YNG INSTRUMENTS CO., Ltd.</td><td>DOV-30</td><td>Vakumlu kurutma fırını</td></tr><tr><td>Beyaz parmak geçirmez fiş</td><td>IDEX Health & Science</td><td>P-316</td><td>1/4-28 Düz Tabanlı, https://www.idex-hs.com/store/fluidics/fluidic-connections/plug-teflonr-pfa-1-4-28-flat-bottom.html</td></tr></tbody></table>

mikroakışkan cihazlarda elektrik alan kaynaklı sinirsel Öncül farklılaşma

Electric-Field-Induced Neural Precursor Cell Differentiation in Microfluidic Devices

Fizyolojik elektrik alanları (EF) hücre göçü, farklılaşma, bölünme ve ölümde hayati roller oynar. Bu makalede, mikroskopi kullanılarak uzun süreli hücre farklılaşması çalışması için kullanılan mikroakışkan hücre kültürü sistemi açıklanmaktadır. Mikroakışkan sistem aşağıdaki ana bileşenlerden oluşur: optik olarak şeffaf bir elektrotaktik çip, şeffaf bir indiyum-kalay-oksit (ITO) ısıtıcı, bir kültür medya dolum pompası, bir elektrik güç kaynağı, yüksek frekanslı bir güç amplifikatörü, bir EF çoklayıcı, programlanabilir bir X-Y-Z motorlu aşama ve dijital kamera ile donatılmış ters faz kontrastlı mikroskop. Mikroakışkan sistem, genel deneysel kurulumu ve buna karşılık reaktif ve numune tüketimini basitleştirmede faydalıdır. Bu çalışma, doğru akım (DC) darbe stimülasyonu ile indüklenen nöral kök ve progenitör hücrelerin (NPC' ler) farklılaştırılmasını içerir. Kök hücre bakım ortamında, fare NPC'leri (mNPC'ler) DC darbe stimülasyonundan sonra nöronlara, astrositlere ve oligodendrositlere farklılaştı. Sonuçlar, basit DC nabız tedavisinin mNPC'lerin kaderini kontrol edebileceğini ve sinir sistemi bozuklukları için terapötik stratejiler geliştirmek için kullanılabileceğini göstermektedir. Sistem, birden fazla kanalda hücre kültürü, uzun süreli EF stimülasyonu, hücre morfolojik gözlemi ve otomatik zaman atlamalı görüntü alımı için kullanılabilir. Bu mikroakışkan sistem sadece gerekli deneysel süreyi kısaltmakla kalmaz, aynı zamanda mikroçevrim üzerindeki kontrol doğruluğunu da arttırır.

MOE çipinin ayrıntılı yapılandırması Şekil 1'de gösterilmiştir. Mikroakışkan çip, deneysel kurulum boyutunu, numune hacmini ve reaktif hacmini azaltmak için yararlı bir yaklaşım sağlar. MOE çipi, tek bir çalışmada aynı anda üç bağımsız EF stimülasyon deneyi ve birkaç immünostaining koşulu gerçekleştirmek için tasarlanmıştır (Şekil 3). Ek olarak, yüksek optik şeffaflığa sahip MOE çipi konfokal mikroskopi incelemeleri için uygundur...

Bu çalışmada, sadece mikroakışkan bir sistemde doğrudan akım (DC) darbe stimülasyonu ile indüklenen nöral kök ve progenitör hücrelerin (NPC' ler) farklılaşması için bir protokol sunuyoruz.

Mikroakışkan Cihazlarda Elektrik Alan Kaynaklı SinirSel Öncül Farklılaşma

Physiological electric fields (EF) play vital roles in cell migration, differentiation, division, and death. This paper describes a microfluidic cell ...

Bu çalışma, sadece mikroakışkan bir sistemde doğrudan akım darbe stimülasyonu ile indüklenen nöral öncül hücrelerin farklılaşması için bir protokol sunun. Bu teknik, deneysel kurulum süresini, örnek hacmi ve reaktif hacmini azaltmak için yararlı bir yaklaşım sağlar. Ayrıca, MOE çipi konfokal mikroskopi gözlemleri için uygundur.Basit doğru akım darbe tedavisi fare sinirsel öncül hücrelerin kaderini kontrol edebilir ve sinir sistemi bozuklukları için terapötik stratejiler geliştirmek için kullanılabilir. Başlamak için, uygun yazılımı kullanarak tek tek PMMA katmanları ve çift taraflı bant için desenler çizin. Karbondioksit lazer katipini aç ve kişisel bir bilgisayara bağla.Yazılımı kullanarak tasarlanmış desen dosyasını açın. PMMA levhalarını veya çift taraflı bandı lazer katibinin platformuna yerleştirin, ardından otomatik odaklama aracını kullanarak lazeri PMMA levhalarının yüzeyine veya çift taraflı bant üzerine odaklayın. Yazıcı olarak lazer katibi seçin, ardından PMMA sayfasında veya çift taraflı bantta doğrudan ablasyonu başlatmak için lazer katibi kullanın.Koruyucu filmi PMMA levhalarından çıkarın ve azot gazı kullanarak yüzeyi temizleyin. Birden fazla PMMA levha katmanını birleştirmek için, bir milimetre PMMA levhadan üç parça istifleyin ve akış veya elektrik stimülasyon kanalı montajını oluşturmak için 110 santigrat derecede 30 dakika boyunca bir termal bonder'da santimetrekare başına beş kilogram basınç altında yapıştırın. Hızlı etkili siyanoakrilat tutkallı MOE talaş tertibatının birinci katmanındaki ayrı açıklıklara 12 parça adaptör yapıştırın.Çipi monte etmeden önce 30 dakika boyunca ultraviyole ışınlama kullanarak bir milimetre PMMA substratlarını, çift taraflı bandı ve üç milimetre optik sınıf PMMA'yı dezenfekte edin. PMMA montajını tamamlamak için üç milimetre optik sınıf PMMA'daki bir milimetre PMMA substratlarını çift taraflı bantla yapıştırın. Temizlenmiş örtü örtüsünü çift taraflı bantla PMMA tertibatine yapıştırın.Agar köprüsü adaptörlerinin açıklıklarını beyaz parmakla sıkı fişlerle kapatın. Düz alt konektörü orta giriş ve çıkış adaptörleri aracılığıyla MOE talaş tertibatine bağlayın, ardından koni Luer adaptörünü üç yönlü stopcock'lara bağlayın. Orta girişin üç yönlü stopcock'una bağlanan üç mililitrelik bir şırınna kullanarak iki mililitre% 0,01 PLL çözeltisi ekleyin ve orta çıkışın üç yönlü stopcock'una boş bir üç mililitre şırınna bağlayın.Hücre kültürü bölgelerini PLL çözeltisi ile doldurun ve kaplama solüsyonunun ileri geri yavaşça pompalasının. Çözeltiyi kültür bölgelerinde kapatmak için iki üç yönlü stopcock'u kapatın. MOE çipini%5 karbondioksit atmosferiyle dolu bir inkübatörde bir gecede 37 santigrat derecede kuluçkaya yatır.İki şırınna kullanarak kaplama solüsyonunu kanala ileri geri manuel olarak pompalayarak iki üç yönlü stopcock'u açın ve kanallardaki kabarcıkları boşaltın. Orta girişin üç yönlü stopcock'una bağlanan üç mililitrelik bir şırınna üç mililitrelik tam orta çizin ve hücre kültürü bölgelerindeki kaplama çözeltisini değiştirmek için ekleyin. Beyaz parmakla sıkı fişi Luer adaptörüyle değiştirin ve adaptörü doldurmak için %3 sıcak agarose enjekte edin.Luer kilit şırıngasını Luer adaptörüne bağlayın ve Luer kilit şırıngasını doldurmak için siyah kauçuk nargileden% 3 sıcak agarose enjekte edin. Agarose'un soğuması ve katılaşması için 10 ila 20 dakika bekleyin. Hücre tohumlu MOE çipini, 37 santigrat derecede tutulan programlanabilir bir XYZ motorlu sahneye tutturulmuş şeffaf ITO ısıtıcısına takın.MNPC'leri orta çıkış üzerinden MOE çipine manuel olarak pompalayarak aşıleyin, ardından ito ısıtıcısındaki hücre tohumlu MOE çipini dört saat boyunca kuluçkaya bırakın. Çip üzerindeki elektrotlar aracılığıyla MOE çipine bir EF çoklayıcı bağlamak için elektrik kablolarını kullanın. Kare dalga DC darbelerini çıkarmak için bir EF çoklayıcı ve bir fonksiyon üreteciyi bir amplifikatöre bağlayın.MOE çipi üzerindeki tüm düz alt konektör ve adaptörleri çıkarın ve adaptörleri PBS ile doldurun, ardından adaptör açıklıklarını parafilm ile kapatın. İmmünasyondan sonra, konfokal floresan mikroskop kullanarak hücreleri gözlemleyin. DC darbe stimülasyonu, kök hücre bakım ortamında eşzamanlı mNPC'lerin nöronlara, astrositlere ve oligodendrositlere farklılaşmasına neden oldu.Kontrol grubunda ve stimülasyon grubunda nöron, astrosit ve oligodendrositlerin yüzdeleri burada gösterilmiştir. DC nabız tedavisinden sonra, MNPC'ler DIV yedide önemli sayıda nöron, DIV üç'te astrositler ve DIV yedi ve DIV 14'te oligodendrositler stimülasyon gruplarında kontrol grubuna göre nispeten daha yüksek seviyelerde mevcuttu. MNPC farklılaşması başlatmak için 30 ila 40 hücrenin oluşturduğu nörosferler tercih edilir.MNPC'lerin aşırı büyümesi, farklılaşma sürecinde hücre sağkalımını bozacaktır.

electric-field-induced-neural-precursor-cell-differentiation

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Biz yeni bir agaroz jel tabanlı mikroakışkan cihaz kullanarak nöral kök hücreler (NSC'lerde) motilite epidermal büyüme faktörü reseptörleri (EGFR) aşırı ifade artırdığını göstermektedir. Bu teknoloji, insan sinir kök hücreleri gibi hücre kaynakları kıt olan diğer memeli hücre sistemleri, kolayca adapte olabilir ve zaman etrafında dönüş kritik öneme sahiptir.

Nöral Kök Hücre Motilite değerlendirilmesi Agaroz Jel tabanlı mikroakışkan Cihaz Kullanımı

Bu protokol hücreleri izleyebilirsiniz özel tasarımlı electrotactic odalarında 2D ve 3D ortamlar oluşturmak için kullanılan yöntemler,...

2D ve 3D Ortamlarda Sinir Progenitör Hücreleri Elektrik Alanı kontrollü Yönetmen Göç

Bu protokolü biz galvanotaksis sırasında nöral prekürsör hücre translokasyon edilen erişkin beyninin time-lapse görüntüleme sağlamak için bir doğru akım elektrik alanın uygulanmasına izin özel odaları oluşturmak nasıl gösterilmektedir.

Dıştan Uygulanan Doğru Akım Elektrik Alanında Nöral Prekürsör Hücre Göç Kinetik Analizi için galvanotaksis Assay

Bu video, elektriksel stimülasyon yoluyla nöral kök ve progenitör hücreleri veya NPC'leri ayırt etmek için hücre dışı matris kaplı bir mikroakışkan çipin kullanımını göstermektedir. Tohumlandıktan ve kaplanmış bölgeye yapıştıktan sonra, NPC'ler büyür ve doğru akımın uygulanması, nöronlara, astrositlere ve oligodendrositlere farklılaşmalarını tetikler.

Nöral Kök ve Progenitör Hücrelerin Elektriksel Stimülasyona Bağlı Farklılaşması

Video, mikroakışkan bir cihaz kullanılarak nöromüsküler kavşakların oluşumunu göstermektedir. Nöral öncü hücreler ve kas progenitör hücreleri, cihaz içindeki farklı kuyucuklara ekilir ve sırasıyla motor nöronlara ve miyotüplere olgunlaşmaya bırakılır. Bir hacim ve kimyasal gradyanın oluşturulması, aktif nöromüsküler kavşakların gelişmesine yol açar.

Mikroakışkan bir cihaz kullanarak nöromüsküler kavşakların oluşturulması

Video, bir mikro oluk bariyeri ile ayrılmış somatik ve aksonal bir bölme içeren bir mikroakışkan cihaz kullanılarak nöral kök hücrelerin (NSC'ler) farklılaşmasını göstermektedir. NSC'ler somatik bölmeye sokulur ve yapışmalarına izin verilir. NSC'ler somatik bölme içindeki nöronlara farklılaşır ve aksonları mikro oluk bariyerinden aksonal bölmeye kadar uzatır.

Bölümlere Ayrılmış Bir Mikroakışkan Cihaz Kullanılarak Nöral Kök Hücrelerin Nöronlara Farklılaşması

Tek bir nöron mikroakışkan arraying ve biyomalzeme kaplamaların içinde-çip plazma desenlendirme için su maskeleme için protokoller anlatılmıştır. Yüksek birbirine eş hücre kültürleri en az girişler kullanılarak hazırlanabilir.

Tek Hücre Hassas Nevronik Co-kültürler hazırlanması

Bu protokol, bölümlenmiş mikrofluidik çiplerin kullanımını gösterir, insan kök hücrelerinden ayırt edilen kültürlü nöronlara döngüsel olefin kopolimer enjeksiyon kalıplı. Bu cips önceden montajlı ve daha kolay-geleneksel bölümleşmiş Poly (dimetilsiloxane) cihazlar daha kullanımı. Viral etiketleme, fluidik izolasyon, akotomi ve immünostasyon gibi çoklu yaygın deneysel paradigmalar burada açıklanmıştır.

Ön montajlı plastik mikrofluidik cips içinde ınsan kök hücresi türeyen neurons compartmentalization

1500 kültür ünitesi, bir dizi gelişmiş peristaltik pompa ve yerinde karıştırma modülünden oluşan karmaşık yaşam makineleri üzerinde yüksek verimli çalışmalar için mikroakışkan bir sistem sunuyoruz. Mikroakışkan çip, vivodaki son derece karmaşık ve dinamik mikro çevresel koşulların analizini sağlar.

Yüksek Verimli Mikroakışkan Cihaz Kullanarak Dinamik ÇevreSel Koşulların Üretilmesi

fonksiyonel olarak aktif nöromüsküler kavşakların oluşumuyla sonuçlanan insan primer mezoangioblast türevli miyotüplerle birlikte insan kaynaklı pluripotent kök hücre türevi motor nöronları birlikte kült haline getirmekle ticari olarak mevcut mikroakışkan cihazlarda insan motor üniteleri üretmek için bir yöntem açıklıyoruz.

Mikroakışkan Cihazlarda Fonksiyonel Nöromüsküler Kavşaklara Sahip İnsan Motor Ünitelerinin Üretimi

Meme kanseri hücreleri, tümör dışı meme epitel hücrelerine kıyasla farklı dielektrik özellikler gösterir. Dielektrik özelliklerdeki bu farklılığa dayanarak, iki popülasyonun immünoterapi amacıyla ayrılabileceği varsayılmıştır. Bunu desteklemek için, MCF-7 ve MCF-10A hücrelerini sıralamak için mikroakışkan bir cihaz modelliyoruz.

Metastatik Olmayan (MCF-7) ve Tümörsüz (MCF-10A) Meme Kanseri Hücrelerinin AC Dielektroforez Kullanılarak Ayrılması için Mikroakışkan Cihaz

Öğrenin, mikroakışkan sistemlerde doğru akım darbe stimülasyonu ile sinirsel öncül hücre farklılaşmasını. Bu yöntem, deneysel kurulum süresini ve reaktif hacmini azaltarak sinirbilim araştırmalarında verimlilik sağlar.

Mikroakışkan Cihazlarda Elektrik Alan Kaynaklı SinirSel Öncül Farklılaşma

Daha fazla video keşfet