Name: Farelerde Tüm Vücut Lipid Taşıma Kapasitesinin Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-11-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Öğrenin farelerde lipid metabolizmasını değerlendirmek için kolay ve erişilebilir yöntemleri. Bu basit analizler, sınırlı kaynağı olan araştırmacıların metabolik fonksiyonu in vivo çalışmalarla incelemesine olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH), R00-DK114498 hibesi ve Amerika Birleşik Devletleri Tarım Bakanlığı (USDA) tarafından desteklenmektedir, CRIS: 3092-51000-062 Y. Z.

Hayvanlar, Baylor Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (BCM) tarafından onaylanan hayvan bakımı ve deneysel protokolleri takiben standart koşullarda barındırılmaktadır. Hayvanlar standart veya özel bir diyet, su reklam libitum ile beslenir ve 12 saatlik gündüz / gece döngüsü ile tutulur.
1. Açlık serum lipitlerinin ölçülmesi
<ol><li>Fareleri 17:00'den sonra yeni bir kafese aktarın ve bir gecede suya ücretsiz erişimle hızlı olun (deneyden önce yaklaşık 16 saat oruçla). Gece orucu, farelerin gastrointestinal yollarının tamamen boşaltımını sağlar. NOT: Fareler oruç sırasında dışkılarını yerler, bu nedenle yiyecek çekme işlemi yeterince oruç tuttuklarından emin olamazlar.</li>
	<li>Ertesi sabah, fareyi kuyruğundan kavrayın ve bir yüzeye yerleştirin. Fareyi kısıtlayıcıya yerleştirmek için farenin kuyruğuna hafifçe geri çekin. Farenin nefes almasına izin verirken farenin hareketini yeniden eğitmek için burun kısıtlamasını yerleştirin. Burun kısıtlamasının düğmesini sıkın. Hayvanın normal nefes gördüğünden emin olmak için göğüs hareketlerini izleyin ve bir farenin kısıtlayıcılarda geçirdiği süreyi en aza indirin.</li>
	<li>Serbest hareket eden farenin kuyruk damarında yüzeysel bir kesi (çentik) yapın ve kesiden 25 μL kanı, fareyi kısıtlamadan cam bir kılcal damara (kılcal damarın yaklaşık 1/3'üni doldurarak) çekin. Kanı hızla bir mikrosantrifüj tüpüne üfleyin.</li>
	<li>Stilistik tozlar kullanarak kanamayı durdurun, kafesteki yemini yeniden doldurun ve farelerin stres belirtisi göstermemesini kesin.</li>
	<li>Tüm fareler için kan çekmeyi tamamlayın.</li>
	<li>Kanı oda sıcaklığında 1 saat boyunca bozulmadan bırakarak pıhtılaşmasını kesin. Pıhtılaşmış kan örneklerini 4 °C'de 2.000 x g'da, soğutulmuş bir tezgah üstü mikrosantrifüjde 10 dakika döndürün ve analiz için süpernatantı (serum) aktarın. NOT: Serum analize kadar birkaç hafta boyunca –20 °C'de saklanabilir. Uzun süreli depolama için serumu –70°C'de tutun.</li>
	<li>Üreticinin sağladığı protokolü kullanarak her lipid metabolitini analiz edin.</li>
</ol>2. Oral Intralipid Tolerans Testi
<ol><li>Saat 17:00'den sonra, ertesi gün kendilerine verilecek intralipid hacminin hesaplanması için fareleri tartın. Ardından, fareleri yeni bir kafese aktarın ve gece boyunca (16 saat) oruçlayın.</li>
	<li>Ertesi sabah, sonraki kanama adımlarında tanımlanmasına yardımcı olmak için bir kafeste bulunan farelerin kuyruklarını işaretleyin.</li>
	<li>Kuyruk damarında bir çentik yapın ve kesiden cam bir kılcal damara (kılcal damarın yaklaşık 1/5'ini doldurarak) 15 μL kan çekin ve kanı hızla T = 0 serum için bir mikrosantrifüj tüpüne üfleyin. NOT: Fareler fazla kanama göstermediği sürece tahlil sırasında kanamayı durdurmaya gerek yoktur.</li>
	<li>Gavage fareleri% 20 intralipid, 18G gavage iğnesi kullanarak gram vücut ağırlığı başına 15 μl oranında, oruç öncesi vücut ağırlığını kullanarak. Her fareyi 1 dakika istifle. NOT: Hayvanı tartın ve uygun gavage iğne boyutunu belirleyin. Genellikle, 18 kalibrelik bir gavage iğnesi fareler için >25 g uygundur ve 20-22 kalibrelik bir gavage iğnesi daha küçük hayvanlar için daha uygun olacaktır. Fareyi, hayvanın başını yerinde tutmak için cildi omuzların üzerinde kavrayarak reçete edin. Gavage iğnesini ağzına yerleştirin ve ardından yemek borusuna ulaşılana kadar üst damak boyunca hafifçe ilerleyin. Tüp direnç olmadan geçmelidir. Uygun derinliğe ulaşıldıktan sonra, Intralipid yavaşça uygulanabilir. Intralipid'i idare ettikten sonra iğne yerleştirme sırasında aynı açıyı izleyerek iğneyi yavaşça çıkarın. Hayvanı kafese geri koyun ve zahmetli solunum veya diğer sıkıntı belirtilerini izleyin. NOT: Oral gavage veya kuyruk kanaması teknikleri konusunda deneyimsiz olan araştırmacılar her fareyi 2 dakika veya daha uzun süre istifleyebilirler.</li>
	<li>T = 1, 2, 3, 4, 5 ve 6 saatte kan alın: Kuyruk kanaması yoluyla fare başına 15 μL kan (1/5 kılcal damar) çekin ve kanı hızla bir mikrosenjrifuge tüpüne üfleyin.</li>
	<li>Kan örneklerini oda sıcaklığında 2.000 x g'da mikrosantrifüjde 10 dakika döndürün. Yüzen yağ tabakası da dahil olmak üzere süpernatant'ı depolama için bir PCR tüpüne aktarın. Süpernatant, analize kadar birkaç hafta boyunca –20 °C'de saklanabilir. NOT: Süpernatant plazma olmalıdır. Bazı örnekler santrifüjleme zamanında zaten pıhtılaşmışsa, trigliserit ölçümünü etkilemez.</li>
	<li>Son kan toplanmasından sonra, styptic tozları kullanarak kanamayı durdurun, kafesteki yemini yeniden doldurun ve farelerin aşırı stres belirtisi göstermemesini kesin.</li>
	<li>2 μL trigliserit standardı yükleyin ve 96 kuyulu bir plakaya süpernatantlar toplar.</li>
	<li>200 μL trigliserit reaktif ekleyin ve plakanın renk gelişimi için 37 °C'de 5 dakika kuluçkaya yatmasına izin verin.</li>
	<li>Laboratuvar plakası okuyucusunda 660 nm referans dalga boyu ile emiciliği 500 nm olarak ölçün ve numunenin konsantrasyonu hesaplayın.</li>
</ol>3. β3 Adrenerjik Reseptör Agonist CL 316,243 Uyarılmış Lipoliz Tahlil
<ol><li>CL 316,243'ü steril salin içinde 5 mg/mL (50x) stok çözeltisi olarak hazırlayın ve kullanıma kadar –20°C'de saklayın.</li>
	<li>Sabahları, deney için gereken seyreltilmiş CL 316.243 çözelti miktarını hesaplamak için fareleri tartın. Fare, 1 mg / kg vücut ağırlığının son dozu için seyreltilmiş CL 316,243'ün gram vücut ağırlığı başına 10 μL alacaktır.</li>
	<li>Fareleri suya ücretsiz erişim ile yeni bir kafese aktarın ve 4 saat boyunca oruçlayın.</li>
	<li>Tuzlu su kullanarak 50x stoktan yeterli 1x CL 316.243 çözeltisi yapın. 1x CL 316,243 çözeltisinin son konsantrasyonu 0,1 mg/mL'dir. Kontrol tedavi grubu için salin kullanın.</li>
	<li>Kanama adımları sırasında kolay tanımlama için aynı kafeste bulunan farelerin kuyruklarını işaretleyin.</li>
	<li>Kuyruk damarında bir çentik yapın ve kesiden cam bir kılcal damara 15 μL kan çekin (kılcal damarın yaklaşık 1/5'ini doldurun) ve kanı hızla T = 0 örneği için bir mikrosantrifüj tüpüne üfleyin. NOT: Fareler fazla kanama göstermediği sürece tahlil sırasında kanamayı durdurmaya gerek yoktur.</li>
	<li>Seyreltilmiş CL 316,243 çözeltisini (veya deneye dahil edilirse kontrol) intraperitoneal olarak 10 μL/ g vücut ağırlığı hacminde enjekte edin. Her fareyi 1 dakika istifle. Her 60 dakikalık deney için en fazla 5 fare veya iki kişilik bir ekip için 10 fare kullanın.</li>
	<li>T = 5, 15, 30, 60 dakika kan çekin: kuyruk kanaması yoluyla fare başına 15 μL kan (1/5 kılcal damar) çekin.</li>
	<li>Son kan toplanmasından sonra, styptic tozları kullanarak kanamayı durdurun, kafesteki yemini yeniden doldurun ve farelerin aşırı stres belirtisi göstermemesini kesin.</li>
	<li>4 °C'de 2.000 x g'da 5 dakika boyunca soğutmalı bir mikrosantrifüjde kan örnekleri döndürün. Süpernatant depolama için bir PCR tüpüne aktarın. Süpernatant, analize kadar birkaç hafta boyunca –20 °C'de saklanabilir.</li>
	<li>1 μL 2x seri seyreltilmiş gliserol standartlarını (0.156, 0.312, 0.625, 1.25 ve 2.5 mg/ml Trioleine eşdeğer konsantrasyonlar) yükleyin ve süpernatantları 96 kuyulu bir plakaya toplar. 100 μL serbest gliserol reaktif ekleyin ve rengin gelişmesi için plakanın 37 °C'de 5 dakika kuluçkaya yatmasına izin verin.</li>
	<li>Laboratuvar plakası okuyucu kullanarak emiciliği 540 nm olarak ölçün ve numunenin konsantrasyonu hesaplayın.</li>
</ol>

<ol><li>Dixon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+chylomicron+uptake+into+lacteals%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of chylomicron uptake into lacteals.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1207, Suppl 1 52-57 (2010).</li>
<li>Nuno, J., de Oya, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoprotein+lipase%3A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+Cl%C3%ADnica+Espa%C3%B1ola%22%5BJournal%5D)">Lipoprotein lipase: review.</a> Revista Clínica Española. 170 (3-4), 83-87 (1983).</li>
<li>Williams, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+processes+that+handle+--+and+mishandle+--+dietary+lipids%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Molecular processes that handle -- and mishandle -- dietary lipids.</a> Journal of Clinical Investigation. 118 (10), 3247-3259 (2008).</li>
<li>Burla, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MS-based+lipidomics+of+human+blood+plasma%3A+a+community-initiated+position+paper+to+develop+accepted+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">MS-based lipidomics of human blood plasma: a community-initiated position paper to develop accepted guidelines.</a> Journal of Lipid Research. 59 (10), 2001-2017 (2018).</li>
<li>Umpleby, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormone+measurement+guidelines%3A+Tracing+lipid+metabolism%3A+the+value+of+stable+isotopes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Hormone measurement guidelines: Tracing lipid metabolism: the value of stable isotopes.</a> Journal of Endocrinology. 226 (3), 1-10 (2015).</li>
<li>Mitchell, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+paired+sibling+analysis+of+the+beta-3+adrenergic+receptor+and+obesity+in+Mexican+Americans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">A paired sibling analysis of the beta-3 adrenergic receptor and obesity in Mexican Americans.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (3), 584-587 (1998).</li>
<li>Mahoney, L. B., Denny, C. A., Seyfried, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caloric+restriction+in+C57BL%2F6J+mice+mimics+therapeutic+fasting+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids+in+Health+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Caloric restriction in C57BL/6J mice mimics therapeutic fasting in humans.</a> Lipids in Health and Disease. 5, 13(2006).</li>
<li>Hayek, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+fat+increases+high+density+lipoprotein+%28HDL%29+levels+both+by+increasing+the+transport+rates+and+decreasing+the+fractional+catabolic+rates+of+HDL+cholesterol+ester+and+apolipoprotein+%28Apo%29+A-I.+Presentation+of+a+new+animal+model+and+mechanistic+studies+in+human+Apo+A-I+transgenic+and+control+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Dietary fat increases high density lipoprotein (HDL) levels both by increasing the transport rates and decreasing the fractional catabolic rates of HDL cholesterol ester and apolipoprotein (Apo) A-I. Presentation of a new animal model and mechanistic studies in human Apo A-I transgenic and control mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 91 (4), 1665-1671 (1993).</li>
<li>Hogarth, C. A., Roy, A., Ebert, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+evidence+for+the+absence+of+a+functional+cholesteryl+ester+transfer+protein+gene+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Biochemistry+and+Physiology+-+Part+B%3A+Biochemistry+%26+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Genomic evidence for the absence of a functional cholesteryl ester transfer protein gene in mice and rats.</a> Comparative Biochemistry and Physiology - Part B: Biochemistry & Molecular Biology. 135 (2), 219-229 (2003).</li>
<li>Tall, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functions+of+cholesterol+ester+transfer+protein+and+relationship+to+coronary+artery+disease+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Lipidology%22%5BJournal%5D)">Functions of cholesterol ester transfer protein and relationship to coronary artery disease risk.</a> Journal of Clinical Lipidology. 4 (5), 389-393 (2010).</li>
<li>Singh, A. K., Singh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Triglyceride+and+cardiovascular+risk%3A+A+critical+appraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Triglyceride and cardiovascular risk: A critical appraisal.</a> Indian Journal of Endocrinology and Metabolism. 20 (4), 418-428 (2016).</li>
<li>Miller, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Triglycerides+and+cardiovascular+disease%3A+a+scientific+statement+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Triglycerides and cardiovascular disease: a scientific statement from the American Heart Association.</a> Circulation. 123 (20), 2292-2333 (2011).</li>
<li>Dron, J. S., Hegele, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+Hypertriglyceridemia%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Genetics of Hypertriglyceridemia.</a> Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 11, 455(2020).</li>
<li>Dole, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+relation+between+non-esterified+fatty+acids+in+plasma+and+the+metabolism+of+glucose%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">A relation between non-esterified fatty acids in plasma and the metabolism of glucose.</a> Journal of Clinical Investigation. 35 (2), 150-154 (1956).</li>
<li>Bartelt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+adipose+tissue+activity+controls+triglyceride+clearance%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Brown adipose tissue activity controls triglyceride clearance.</a> Nature Medicine. 17 (2), 200-205 (2011).</li>
<li>de Souza, C. J., Burkey, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta+3-adrenoceptor+agonists+as+anti-diabetic+and+anti-obesity+drugs+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pharmaceutical+Design%22%5BJournal%5D)">Beta 3-adrenoceptor agonists as anti-diabetic and anti-obesity drugs in humans.</a> Current Pharmaceutical Design. 7 (14), 1433-1449 (2001).</li>
<li>Braun, K., Oeckl, J., Westermeier, J., Li, Y., Klingenspor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-adrenergic+control+of+lipolysis+and+thermogenesis+in+adipose+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Non-adrenergic control of lipolysis and thermogenesis in adipose tissues.</a> Journal of Experimental Biology. 221, Pt Suppl 1 (2018).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Açıklanan üç tahlil, laboratuvarda birkaç kritik hususla birlikte sağlam bir şekilde işlev görür. Açlık serum lipit düzeylerinin belirlenmesi ve oral intralipid tolerans testi için gece oruç gereklidir. Oral intralipid tolerans testi için, özellikle 1 ve 2 saatlik zaman noktalarında bir yağ tabakası oluşumunu en aza indirmek için kanı oda sıcaklığında döndürmek önemlidir; oluşursa bu yağ tabakasını atmamak önemlidir. Süpernatant lipid tabakası ile transfer emin olun ve trigliserit tayini için birbirine karıştırmak için h...

Karbonhidratlar ve lipitler enerji metabolizması için iki ana substrattır. Anormal lipid metabolizması tip II diyabet, kardiyovasküler hastalıklar, yağlı karaciğer hastalıkları ve kanserler de dahil olmak üzere birçok insan hastalığı ile sonuçlanır. Diyet lipitleri, özellikle trigliseritler, bağırsak yoluyla lenfatik sisteme emilir ve kalbe yakın chylomicronlarda venöz dolaşıma girer1. Lipitler, yağ asidi moietiesinin kas ve yağ dokusu gibi periferik organlarda lipoprotein lipazının etkisiyle kurtarıldığı kan dolaşımındaki lipoprotein parçacıkları tarafından taşınır2. Kalan kolesterol bakımından zengin kalıntı parçacıkları karaciğer tarafından temizlenir3. Fareler, lipid metabolizmasını incelemek için laboratuvarlarda bir araştırma modeli olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Kapsamlı genetik araç seti ve nispeten kısa bir üreme döngüsü ile, lipitlerin nasıl emdiğini, sentezlendiğini ve metabolize edildiğini incelemek için güçlü bir modeldir.
Lipid metabolizmasının karmaşıklığı nedeniyle, sofistike lipidomik çalışmalar veya izotopik izleyici çalışmaları genellikle lipit türlerinin veya lipid ile ilgili metabolik akıların ve kaderlerin koleksiyonlarını ölçmek için kullanılır4,5. Bu, özel ekipman veya uzmanlığa sahip olmayan araştırmacılar için büyük bir zorluk yaratır. Bu yazıda teknik olarak zorlu teknikler kullanılmadan önce ilk test görevi görebilecek üç tahlil sunuyoruz. Fareler için terminal olmayan prosedürlerdir ve bu nedenle lipid taşıma kapasitesindeki potansiyel farklılıkları belirlemek ve etkilenen süreçleri daraltmek için çok yararlıdır.
İlk olarak, açlık serumu lipid moleküllerinin ölçülmesi, bir farenin genel lipit profilinin tespitine yardımcı olabilir. Fareler oruç tutmalıdır, çünkü birçok lipit türü yemeklerden sonra yükselir ve artışın boyutu diyetin bileşimini güçlü bir şekilde etkiler. Toplam kolesterol, trigliserit ve esterlenmemiş yağ asidi (NEFA) dahil olmak üzere birçok lipid molekülü, ticari bir kit ve emiciliği okuyabilen bir plaka okuyucu kullanılarak ölçülebilir.
İkinci olarak, oral intralipid tolerans testi lipid işleme yeteneğini emilim ve metabolizmanın net bir etkisi olarak değerlendirir. Ağızdan uygulanan bir intralipid dolaşımdaki trigliserit seviyelerinde (1-2 saat) bir artışa neden olur, daha sonra serum trigliserit seviyeleri bazal seviyelere (4-6 saat) geri döner. Bu tahlil, bir farenin eksojen lipitleri ne kadar iyi idare edebileceği hakkında bilgi sunar. Kalp, karaciğer ve kahverengi yağ dokusu trigliseritlerin aktif tüketicileridir, beyaz yağ dokusu ise onu bir enerji rezervi olarak depolar. Bu işlevlerdeki değişiklikler test sonuçlarında farklılıklara yol açacaktır.
Son olarak, depolanan lipitleri harekete geçirmek için lipoliz teşvik etmek kilo kaybı için olası bir strateji olarak kabul edilir. Yağ dokusundaki β3-adrenerjik reseptör sinyal yolu adiposit lipolizinde önemli bir rol oynar ve insan genetiği obezite ile ilişkili β3-adrenerjik reseptörde fonksiyon kaybı polimorfizmi Trp64Arg tespit etti6. Cl 316,243, spesifik ve güçlü bir β3-adrenerjik reseptör agonisti, yağ dokusu lipolizini ve gliserol salınımını uyarır. Bir farenin CL 316,243'e verdiği yanıtın değerlendirilmesi, bileşiğin gelişimi, iyileştirilmesi ve etkinliğinin anlaşılması hakkında değerli bilgiler sağlayabilir.
Toplu olarak, bu testler farelerin lipid metabolik durumundaki değişiklikler için bir başlangıç ekranı olarak kullanılabilir. Enstrümanların ve reaktiflerin erişilebilirliği için seçilirler. Bu testlerden elde edilen sonuçlarla araştırmacılar, hayvanlarının metabolik uygunluğunun genel bir resmini oluşturabilir ve daha sofistike ve hedefli yaklaşımlara karar verebilirler.

<table><tbody><tr><td>% 20 İntralipid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I141</td><td></td></tr><tr><td>BD Kayma Ucu Steril Şırıngalar 1ml</td><td>Shaotong</td><td>B07F1KRMYN</td><td></td></tr><tr><td>CL 316,243 Hidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5976</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli Besleme İğneleri (18 Gauge)</td><td>Kent Scientific</td><td>FNC-18-2-2</td><td></td></tr><tr><td>Serbest Gliserol Reaktifi</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F6428</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol Standart Çözelti</td><td>Sigma</td><td>G7793</td><td></td></tr><tr><td>HR SERİSİ NEFA-HR(2)RENK REAKTİFİ A</td><td>Fujifilm Wako Diagnostics</td><td>999-34691</td><td></td></tr><tr><td>HR SERİSİ NEFA-HR(2)RENK REAKTİFİ B</td><td>Fujifilm Wako Diagnostics</td><td>991-34891</td><td></td></tr><tr><td>HR SERİSİ NEFA-HR(2)SOLVENT A</td><td>Fujifilm Wako Diagnostics</td><td>995-34791</td><td></td></tr><tr><td>HR SERİSİ NEFA-HR(2)SOLVENT B</td><td>Fujifilm Wako Teşhis</td><td>993-35191</td><td></td></tr><tr><td>Matrix Plus Kimya Referans Kiti</td><td>Verichem</td><td>9500</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Santrifüj Tüpleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-222-168</td><td></td></tr><tr><td>Mikrohematrit Kılcal Tüp, Heparinize Değil</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-362-574</td><td></td></tr><tr><td>NEFA STANDART ÇÖZÜM</td><td>Fujifilm Wako Teşhis</td><td>276-76491</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Tuzlu</td><td>Boston Biyoürünleri</td><td>BM-220</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Trigliserit Reaktifi</td><td>Fisher Scientific</td><td>TR22421</td><td></td></tr><tr><td>Toplam Kolesterol Reaktifleri</td><td>Thermo Scientifi</td><td>TR13421</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde tüm vücut lipid taşıma kapasitesinin değerlendirilmesi

Assessing Whole-Body Lipid-Handling Capacity in Mice

Lipid metabolizmasının değerlendirilmesi metabolik fonksiyonun değerlendirilmesinin temel taşıdır ve in vivo metabolizma çalışmaları için gerekli kabul edilir. Lipitler, sentezlerinde ve metabolizmalarında yer alan birçok yolak ile birçok farklı molekülden oluşan bir sınıftır. Beslenme ve obezite araştırmaları için lipid hemostazını değerlendirmek için bir başlangıç noktasına ihtiyaç vardır. Bu makalede, ustalaşmak için çok az uzmanlık veya pratik gerektiren ve çoğu laboratuvar tarafından farelerdeki lipid metabolizması anormalliklerini taramak için uyarlanabilen üç kolay ve erişilebilir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntemler (1) oral intralipid tolerans testi yoluyla diyet lipid işleme yeteneği için ticari kitler (2) tahlilleri kullanarak birkaç açlık serum lipit molekülünün ölçülmesi ve (3) farelerde CL 316.243 adlı bir farmasötik bileşiğin yanıtının değerlendirilmesidir. Birlikte, bu yöntemler farelerde lipit işleme yeteneğine üst düzey bir genel bakış sağlayacaktır.

Her testin farelerin lipit metabolizması hakkında değerli bilgiler sunduğunu üç alıntı ile gösteriyoruz. Sekiz haftalıktan başlayarak sekiz haftalık yüksek yağlı diyet (HFD) beslenmesi ile zorlanan C57BL / 6J erkek fareler için, toplam kolesterol seviyeleri önemli ölçüde yükselirken, serum trigliserit ve NEFA değildi (Tablo 1), kandaki trigliserit ve NEFA'nın ağırlıklı olarak bir diyet yağ zorluğu ile düzenlenmediğini düşündürmektedir. İkinci fare kohortunda, C57BL6'nın C57BL/6J ve C57BL6/N alt kısıtlılı...

Bu makale, farelerde lipid metabolizmasını değerlendirmek için üç kolay ve erişilebilir test sağlar.

Farelerde Tüm Vücut Lipid Taşıma Kapasitesinin Değerlendirilmesi

Assessing lipid metabolism is a cornerstone of evaluating metabolic function, and it is considered essential for in vivo metabolism studies. Lipids are a ...

Lipid metabolizmasının değerlendirilmesi, metabolik fonksiyonun değerlendirilmesinin temel taşıdır ve in vivo metabolizma çalışmaları için gerekli olduğu düşünülmektedir. Lipid metabolizmasının karmaşıklığı nedeniyle, genellikle karmaşık lipidomik çalışmalar veya izotopik izleyici çalışmaları kullanılır ve bu da özel ekipman veya uzmanlığa sahip olmayan araştırmacılar için büyük bir zorluk yaratır. Bu protokol, farelerde lipid metabolizmasını değerlendirmek için kolay ve erişilebilir tahlilleri göstermektedir.Prosedürü göstermek, Zhu laboratuvarından bir araştırma görevlisi olan Mingyang Huang olacak. Fareleri yeni bir kafese aktararak ve deneyden 16 saat önce suya ücretsiz erişimle gece boyunca oruç tutarak başlayın, bu da farelerin gastrointestinal sistemlerinin tamamen boşalmasını sağlar. Ertesi sabah, farenin kuyruk damarında yüzeysel bir kesi yapın.Ve kesiden 25 mikrolitre kanı bir cam kılcal damara çekin. Kanı hızlı bir şekilde bir mikrosantrifüj tüpüne üfleyin. Septik tozlar kullanarak kanamayı durdurun, ardından kafesteki yemi yeniden doldurun ve farelerin aşırı stres belirtisi göstermediğinden emin olun.Tüm farelerde kan alma işlemini gerçekleştirin. Kanın oda sıcaklığında bir saat boyunca rahatsız edilmeden bırakarak pıhtılaşmasına izin verin, ardından pıhtılaşmış kan örneklerini soğutmalı bir tezgah üstü mikrosantrifüjde 10 dakika boyunca dört santigrat derecede 2000 x g'da döndürün. Lipid metabolit analizi için süpernatanı toplayın.Saat 17:00'den sonra, ertesi gün onlara verilecek intralipid hacmini hesaplamak için fareleri tartın. Daha sonra onları yeni bir kafese aktarın ve gece boyunca oruç tutun. Ertesi sabah, sonraki kanama adımlarında onları tanımlamaya yardımcı olmak için bir kafeste barındırılan farelerin hikayelerini işaretleyin.Kuyruk damarında bir çentik yapın ve kesiden 15 mikrolitre kanı bir cam kılcal damara bırakın ve kanı T 0 serumu için hızlı bir şekilde bir mikrosantrifüj tüpüne üfleyin. Oruç öncesi vücut ağırlığını kullanarak vücut ağırlığının gramı başına 15 mikrolitre oranında 18 gauge gavaj iğnesi kullanarak% 20 intralipid içeren gavaj fareleri. 1, 2, 3, 4, 5 ve 6 saatlerde kan alın.Kan örneklerini bir mikrosantrifüjde 10 dakika boyunca 2000 x g'da döndürün. Yüzen yağ tabakası da dahil olmak üzere süpernatanı depolama için bir PCR tüpüne aktarın. Süpernatant, analize kadar birkaç hafta boyunca eksi 20 santigrat derecede saklanabilir.Son kan alımından sonra, septik tozlar kullanarak kanamayı durdurun, kafesteki yemi yeniden doldurun ve farelerin aşırı stres belirtisi göstermediğinden emin olun. İki mikrolitre trigliserit standardı yükleyin ve süpernatanları 96 oyuklu bir plakaya toplayın. 200 mikrolitre trigliserit reaktifi ekleyin ve renk gelişimi için plakanın 37 santigrat derecede beş dakika inkübe etmesine izin verin.Bir plaka okuyucuda 660 nanometre referans dalga boyu ile 500 nanometrede absorbansı ölçün ve numunenin konsantrasyonunu hesaplayın. Sabahları, deney için gereken seyreltilmiş CL 316, 243 bileşik çözeltisinin miktarını hesaplamak için fareleri tartın. Fareleri suya serbest erişimi olan yeni bir kafese aktarın ve dört saat boyunca oruç tutun.Beş miligram CL 316, 243 tozunun bir mililitre steril salin veya PBS içinde çözülmesiyle hazırlanan 50X stoğundan yeterli miktarda 1X CL bileşik çözeltisi yapın. Kontrol tedavi grubu için steril salin veya PBS kullanın. Çözeltiyi sterilize etmek için Millipore 0.22 mikron PES membran filtre ünitesinden süzün.Kanama adımı sırasında kolay tanımlama için aynı kafeste barındırılan farelerin hikayelerini işaretleyin. Kuyruk damarında bir çentik yapın ve kesiden 15 mikrolitre kanı bir cam kılcal damara çekin, ardından kanı T 0 numunesi için hızlı bir şekilde bir mikrosantrifüj tüpüne akıtan. Seyreltilmiş CL bileşik çözeltisini, vücut ağırlığının gramı başına 10 mikrolitre hacimde intraperitoneal olarak enjekte edin.Her 60 dakikalık deney için en fazla beş fare veya iki kişilik bir ekip için 10 fare kullanın. Enjeksiyondan 5, 15, 30 ve 60 dakika sonra kan alın. Son kan alımından sonra, septik tozlar kullanarak kanamayı durdurun, kafesteki yemi yeniden doldurun ve farelerin aşırı stres belirtisi göstermediğinden emin olun.Kan örneklerini soğutulmuş bir mikrosantrifüjde beş dakika boyunca dört santigrat derecede 2000 x g'da döndürün, ardından süpernatanı saklamak için bir PCR tüpüne aktarın. Süpernatant, analize kadar birkaç hafta boyunca eksi 20 santigrat derecede saklanabilir. Bir mikrolitre 2X seri olarak seyreltilmiş gliserol standartlarını ve toplanan süpernatanları 96 oyuklu bir plakaya yükleyin.100 mikrolitre serbest gliserol reaktifi ekleyin ve rengin gelişmesi için plakanın 37 santigrat derecede beş dakika inkübe etmesine izin verin. Bir laboratuvar plakası okuyucusu kullanarak absorbansı 540 nanometrede ölçün ve her numunenin konsantrasyonunu hesaplayın. C57BL6 / J erkek fareler, sekiz haftalık yüksek yağlı bir diyetle karşı karşıya kaldığında, toplam kolesterol seviyeleri önemli ölçüde yükseldi.Bu arada, serum trigliserit ve NEFA değildi, bu da kandaki trigliserit ve NEFA'nın ağırlıklı olarak kronik yüksek yağlı diyet zorluğundan etkilenmediğini düşündürdü. Farelerin ikinci kohortunda, C57BL6'nın alt suşları, sekiz haftalıktan başlayarak sekiz hafta boyunca yüksek yağlı diyetle beslendi. Serum trigliserit düzeyleri oral intralipid zorluğundan sonra karşılaştırıldı.6 / J alt suşu, 6 / N alt suşuna kıyasla önemli ölçüde daha yüksek bir tepe noktasına sahipti, bu da gelişmiş bir emilim veya çok daha yavaş bir trigliserit klerensi olduğunu gösteriyor. Normal yemekle beslenen sekiz haftalık C57BL6 / J fareleri için, tek bir CL 316, 243 tedavisi serum gliserolde önemli bir artışa yol açtı. Bununla birlikte, farelerin bir hafta boyunca CL bileşiği ile günlük intraperitoneal ön işlemi, CL bileşik tedavisine karşı körelmiş bir reaksiyona yol açmıştır, bu da bileşiğe karşı hızlı bir direnç gelişimini düşündürmektedir.Basitlik, bu protokolün hem gücü hem de zayıflığıdır. Deneycilere önemli bir teknik engel getirmez, ancak sonuçların dikkatli bir şekilde yorumlanması gerekir. Takip çalışmaları için kütle spektrometresi veya daha kapsamlı lipidomikler ile spesifik bir lipid molekülünün ölçümü yapılmalıdır.Lipid metabolizmasının akışını anlamak için genellikle bir izotop izleme tekniği kullanılır.

assessing-whole-body-lipid-handling-capacity-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz eğitim için sağlam biyokimyasal ve mikroskobik yöntemler...

Fat Kütle Biyokimyasal ve Yüksek Verimli Mikroskobik Değerlendirme<em&gt; Caenorhabditis Elegans</em

De novo lipogenez ve β-yağ asidi oksidasyon hepatosit kilit metabolik, yağlı karaciğer hastalığı da dahil olmak üzere birçok metabolik bozukluklar, içinde tedirgin olan yollar oluşturmaktadır. Burada fare primer hepatositlerin izolasyonu göstermek ve β-yağ asidi oksidasyon ve lipogenez ölçümü açıklar.

Fare İlköğretim Hepatositlerde Yağ Asidi Oksidasyon ve lipogenez Belirlenmesi

Burada, hepatik steatozun in vivo ve in vitro modellerini oluşturmak ve steatotik fenotipleri ve ilgili fizyolojik parametreleri analiz etmek için optimize edilmiş yöntemler açıklanmaktadır.

Optimize Analizi<em&gt; İn Vivo</em&gt; ve<em&gt; İn Vitro</em&gt; Karaciğer Steatoz

Bu iletişim kuralı bir vücut kompozisyon analiz ve metabolik hayvan izleme sistemi vücut kompozisyonu ve farelerde metabolik parametreleri tanımlamak için kullanımını açıklar. Yüksek yağlı beslenme tarafından indüklenen bir obezite modeli örnek olarak bu tekniklerin uygulanması için kullanılır.

Vücut kompozisyonu ve metabolik Caging Analizi yüksek yağ Fed farelerde

Av tüfeği kütle spektrometrisine dayalı lipidomikler, çeşitli kemirgen dokularından tek bir ölçümde aynı anda geniş bir lipit sınıfları spektrumunun hassas bir kantitatif görüntüsünü sunar.

Kemirgen Dokularının Av Tüfeği Lipidomikleri

Bu protokol, farelerde intraduodenal besin infüzyonlarına yanıt olarak akan bağırsak lenfini izole etmek için ayrıntılı bir cerrahi protokolü tanımlamaktadır. Bu, çeşitli deneysel besinlere yanıt olarak toplam bağırsak lipit emiliminin ve şilomikron sentezinin ve sekresyonunun fizyolojik olarak belirlenmesini sağlar.

Diyet Lipid Emiliminin ve Şilomikron Sekresyonunun İn Vivo Kinetiğini Ölçmek için Farelerde Akan Mezenterik Lenflerin İzolasyonu

Adipositlerde trigliserit lipoliz, serbest yağ asitlerinin ve gliserolün serbest bırakılmasıyla sonuçlanan önemli bir metabolik süreçtir. Burada, adipositlerde bazal ve uyarılmış lipolizi ve farelerden ex vivo yağ dokusunu ölçmek için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

Lipoliz Oranının Ex Vivo Murin Yağ Dokusu ve İn Vitro Diferansiye Primer Preadipositlerin Ölçülmesi

Bu protokol, korunmuş ejeksiyon fraksiyonu (HFpEF) ile hiperlipidemiye bağlı kalp yetmezliğinin bir murin modelini çoğaltmak için ayrıntılı bir yaklaşım sunar. Tasarım, adeno ile ilişkili virüs 9-kardiyak troponin T-düşük yoğunluklu lipoprotein reseptörü (AAV9-cTnT-LDLR) ve poloksamer-407'nin (P-407) uygulanmasını birleştirir.

Korunmuş Ejeksiyon Fraksiyonu ile Hiperlipidemiye Bağlı Kalp Yetmezliğinin Murin Modeli

Hepatik insülin klerensi, glikoz homeostazını düzenlemek için kritik öneme sahiptir. Bu makale, farelerde yerinde karaciğer insülin klerens oranını doğrudan değerlendirmek için kullanıcı dostu bir hepatik perfüzyon prosedürünü açıklamaktadır.

Farelerde İnsitülin Klerensinin Yerinde Karaciğer Perfüzyonu ile Değerlendirilmesi

Programlı elektrik stimülasyonu, kalp iletim özellikleri belirlemek için yeteneği ve çeşitli pacemaker protokolleri kullanarak kardiyak aritmiler neden ve sona erdirme imkanı sağlar. Transvenöz bir kateter yardımıyla, intrakardiyak elektrogram kayıtları, programlı elektrik stimülasyonu protokolleri aritmojenik substratlar tanımlamak için aşağıdaki farelerde elde edilebilir.

Farelerde Programlı Elektrik Stimülasyon

Öğrenin farelerde lipid metabolizmasını değerlendirmek için kolay ve erişilebilir yöntemleri. Bu basit analizler, sınırlı kaynağı olan araştırmacıların metabolik fonksiyonu in vivo çalışmalarla incelemesine olanak tanır.

Farelerde Tüm Vücut Lipid Taşıma Kapasitesinin Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet