Oosit Vitrifikasyonu ile Doğurganlığın Korunması: Klinik ve Laboratuvar Perspektifleri

Oosit vitrifikasyonu ve ısınma prosedürleri doğurganlığın korunması için gereklidir. Bu protokolü gösterildiği gibi izleyerek, kullanıcının bu yordamların etkinliğini en üst düzeye çıkarmasını sağlar. Oosit vitrifikasyonu için doğurganlık koruması günümüzde yerleşik ve etik olarak kabul edilebilir bir yaklaşımdır.

Etkili ve tutarlı klinik sonuçlar elde etmeyi ve embriyo kriyoprezervasyonu ile ilişkili ahlaki ve yasal sınırlamanın üstesinden gelmeyi sağlar. Vitrifikasyon sürecinde yeterliliğe ulaşmak için, örneklerin kriyoprotektantlara maruz kalma süresine özellikle dikkat etmenin protokolün tüm kritik noktalarına aşina olmak önemlidir. Alındıktan sonraki 38 saat içinde ve denudasyondan hemen sonra, tüm plastik malzemeleri hastanın adı, kimliği ve çözüm türü ile etiketleyin ve bir tanıktan hastanın kriyo cihazındaki bilgilerini onaylamasını isteyin.

Tüm malzemeler etiketlendiğinde, insan serum albümin ile desteklenmiş 30 mikroliter hepes tampon ortamını karıştırmak ve yerleştirmek için her bir şişe oositleri birkaç kez dikkatlice ters çevirin ve bir petri kabına 30 mikroliter bitişik bir denge çözeltisi damlası yerleştirin. Oositleri ilk damlaya yerleştirmek için striptizci pipetini kullanın ve kriyoprotektantların konsantrasyonunda kademeli bir artış elde etmek için orta ila 30 mikroliner bir denge çözeltisi damlası arasında bir köprü oluşturun. Üç dakika sonra, plakaya ikinci bir 30 mikroliter equilibrasyon çözeltisi damlası ekleyin ve çözelti damlaları arasında orta bir köprü oluşturmak için pipeti kullanın.

Oositler dengelenirken, plakaya kullanılacak her kriyo cihazı için bir adet 30 mikroliner equilibrasyon çözeltisi ekleyin. Üç dakika sonra, oositlerin başlangıç boyutlarına geri dönmesini sağlamak için oositleri altı ila dokuz dakika boyunca saf denge çözeltisine taşıyın. Oositler iyileştiğinde, bir mililitre vitrifikasyon çözeltisi içeren merkezi bir kuyu IVF yemeği hazırlayın.

Oositleri mümkün olduğunca az ortamda yemeğe aktarın ve fazla denge çözeltisini çıkarmak için dikkatlice hareket ettirin. Kuluçkanın bitiminden yaklaşık 10 saniye önce, hastanın bilgilerinin etiketli bir kriyo cihazını mikroskop altına yerleştirin ve kriyo cihazının ucuna odaklanmayı ayarlayın. Oositleri ucun yanındaki kriyo cihazına minimum miktarda vitrifikasyon çözeltisi halinde yerleştirin ve fazla vitrifikasyon çözeltisini çıkarmak için striptizci pipeti oositlerden uzaklaştırın ve oositleri ince bir ortam tabakası ile kaplı bırakın.

Kriyo cihazını hızlı bir şekilde sıvı nitrojene daldırın ve yüzeyindeki hava kabarcıklarını gidermek için cihazı hızla sallayın. Kriyo cihazının koruyucu kapağını cımbızla tutarak, propilen şeritlerini sıvı nitrojende tutarken cihazı kapağa yerleştirmeden önce kapağı sıvı nitrojenle doldurun. Ardından kriyo cihazını hastanın bilgileriyle etiketlenmiş bir visotubeda saklayın ve laboratuvar sayfasını güncelleyin.

Oosit ısınması için, oda sıcaklığına ısıtılmış her bir çözdürme, seyreltme ve yıkama çözeltisi şişesini dikkatlice ters çevirin ve bir petri kabının merkezi kuyusuna 37 santigrat derecede en az bir saatlik kuluçka için bir mililitre çözünme çözeltisi ekleyin. Tüm plastik malzemeleri hastanın adı, kimliği ve çözüm türü ile etiketleyin ve bir tanıktan hastanın kriyo cihazındaki bilgilerini onaylamasını isteyin. Isınacak her cihaz için, altı kuyu plakasının ilk kuyusuna 200 mikrolitre seyreltme çözeltisi ekleyin ve plakanın ikinci ve üçüncü kuyularına eşit miktarda yıkama çözeltisi ekleyin.

Çözelti buharlaşmasını önlemek için kuyuların dışındaki alana PBS ekleyin. Çözdürme çözeltisi kabını stereo mikroskobun altına yerleştirin ve odağı yemeğin ortasına ayarlayın. Propilen şeritlerini sıvı nitrojende tutarken bir kriyo cihazının koruyucu kapağını çıkarmak için dikkatlice bükün ve sapma riskini önlemek için kriyo cihazını sıvı nitrojenden çözme çözeltisine mümkün olan en kısa sürede aktarın.

Bir dakika sonra, oositleri bulmak için kriyo cihazının ucuna odaklanın ve sonunda oositleri cihazdan hafifçe serbest bırakmak için bir striptizci pipeti kullanın. Oositleri ve küçük hacimli bir çözme çözeltisini altı kuyu plakasının ilk kuyusundaki seyreltme çözeltisine aktarmak için 170 mikron çapında bir striptizci pipet kullanın. Üç dakika sonra, oositleri beş dakika boyunca yıkama çözeltisinin ilk kuyusuna taşıyın.

Kuluçkanın sonunda, oositleri ikinci yıkama çözeltisi kuyusuna aktarın ve oositleri bir saat boyunca uygun bir ön dengelenmiş IVF kültür ortamı hacmine aktarmadan ve laboratuvar sayfasını güncellemeden önce bir dakika boyunca 37 santigrat derecede kuluçkalayın. 12 yıllık bir süre boyunca, 285 kadın, toplanan olgun yumurtaların tüm kohortunun vitrifikasyonu gerektiren en az bir oosit alımı geçirdi. Bu kadınların çoğu tek bir geri alma işlemine tabi t başlandı.

35'i birden fazla geri alma işlemi geçirdi. Yumurta vitrifikasyonu için oosit alımının nedenleri genellikle kanser, kanser, tıbbi olmayan ve diğer tıbbi olarak karakterize edildi. Yumurta vitrifikasyonu için tıbbi bir nedeni olan hastalar ve kanser nedeniyle doğurganlık koruması uygulanan hastalar daha gençti ve tıbbi olmayan veya başka nedenleri olan hastalara göre daha yüksek antral foliküler sayı gösterdi.

Ancak hastaların tıbbi nedenlerinde ortalama olgunlaşma oranları biraz daha düşük olduğu için ortalama vitrifiye edilen oosit sayısı gruplar arasında benzerdi. Kanser dışında tıbbi nedeni olan hastaların yaklaşık yarısı ve yumurta vitrifikasyonu için başka nedenleri olan hastaların çoğunluğu aslında ısınmak için geri döndü. Tersine, kanser veya tıbbi olmayan nedenlerle doğurganlık koruması uygulanan çok az hasta vitrifiye oositlerini IVF için kullandı.

Vitrifikasyon ve ısınma arasında geçen süredeki farklılıklara rağmen, oositlerin sağkalım oranı hasta grupları arasında benzerdi ve oosit vitrifikasyon ve ısınma protokollerinin etkinliğini ve güvenliğini doğruladı. Ayrıca, sağkalım oranı vitrifikasyon ve ısınma operatörünün deneyiminden bağımsızdı. Sonuçların tutarlılığını etkileyebilecek en önemli adımlar ısınma ile ilgili adımlardır.

Bu nedenle, çözülme çözeltilerinin hacmini ve sıcaklığını dikkatlice kontrol etmek gerçekten önemlidir. Yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonu, pubertal öncesi hastalar için bir seçenek olarak şu anda incelenme aşamasında olan tek stratejidir. Umut verici olmasına rağmen, bu yaklaşımın uygulamasını sınırlayan önemli bir sınırlaması vardır.