Name: Oosit Vitrifikasyonu ile Doğurganlığın Korunması: Klinik ve Laboratuvar Perspektifleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Öğrenin oosit vitrifikasyonu ve ısıtma prosedürleri ile üreme biyolojisinde doğurganlık koruma yöntemlerini. Bu protokol, etik ve klinik açıdan güvenilir sonuçlar elde etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. İş ve klinik danışmanlık
NOT: Onkolojik nedenlerle doğurganlığın korunmasını gerektiren hastalarda, konsültasyon planlama için bekleme listesi olmadığından ve randevunun mümkün olan en kısa sürede sağlandığından emin olun.
<ol><li>Tıbbi geçmişi ve önceki belgeleri inceleyin ve hastanın genel sağlık durumunu değerlendirin.</li>
	<li>Tüm bilgileri (kanser hastalarında yumurtalık stimülasyonuna tabi tutulmak için onkolog onayı dahil) ilişkisel bir veritabanına kaydedin.</li>
	<li>Hastaya prosedürün fizibilitesi hakkında özel danışmanlık sağlayın. Prosedürün adımlarını (yumurtalık stimülasyonu, oosit alımı, oosit vitrifikasyonu) açıklayın ve gerçekçi başarı şansı (esas olarak anne yaşına ve oosit alımı sırasında beklenen MII oosit sayısına bağlı) ve prosedürün maliyeti ve sınırlamaları hakkında onu bilgilendirin.</li>
	<li>Yumurtalık rezervi (yani AFC) hakkında bilgi edinmek ve yumurtalıkların yumurta toplama için erişilebilirliğini değerlendirmek için transvajinal ultrason işlemi gerçekleştirin.</li>
	<li>Kan grubu ve Rhesus faktörünü, pıhtılaşma taramasını (kan sayımı, protrombin, tromboplastin, fibrinojen, Protein C, Protein S, anti-trombin III, homosistein) ve bulaşıcı hastalıkları (Hepatit B, Hepatit C, HIV, Zührevi Hastalık Araştırma Laboratuvarı/Treponema pallidum Hemagglutination Assay) değerlendirmek için kan testleri isteyin. NOT: Hastaların acil olmayan tıbbi nedenlerle doğurganlık koruma programına erişmesi durumunda, daha kapsamlı bir değerlendirme bazal folikül uyarıcı hormon (FSH), luteinize edici hormon (LH), estradiol, AMH, meme muayenesi, Papanicolaou testi, pıhtılaşmanın genetik taraması (Leiden ve protrombin faktör V) ve TORCH taramasını (toksoplazmoz, kızamıkçık, sitomegalovirüs) içerebilir.</li>
	<li>Kardiyolojik değerlendirme (elektrokardiyogram) isteyin.</li>
	<li>Psikolojik danışmanlık tavsiye edin.</li>
</ol>2. Doğurganlığın korunması için kontrollü yumurtalık stimülasyon protokolleri
NOT: Kanser tedavisine başlamadan önce mevcut süre sınırlı olduğunda, doğurganlığın korunmasına aday onkolojik hastalarda yumurtalık stimülasyonu için rastgele başlangıç protokolü (yani adet döngüsü sırasında herhangi bir zamanda yumurtalık stimülasyonuna başlama) önerilir. Acil olmayan tıbbi nedenlerle veya sosyal nedenlerle doğurganlık koruma programında, erken foliküler fazda başlayan konvansiyonel stimülasyon tercih edilir ve adet döngüsüne göre yumurtalık stimülasyonuna başlanır. Kontrollü yumurtalık stimülasyonu (COS) yaklaşımları son Avrupa İnsan Üreme ve Embriyoloji Derneği (ESHRE) yönergelerine göre yapılmalıdır24.

<ol><li>COS'yi hastanın özelliklerine ve yumurtalık rezervi belirteçlerine göre, özellikle anne yaşı, FSH, AMH ve AFC'ye göre uyarlar.</li>
	<li>Cos'a adet döngüsünün 5. gününde 150-300 IU/gün sabit dozda rekombinant veya üriner FSH kullanarak başlayın (antagonist protokol). NOT: LH eksikliği veya zayıf-yetersiz yanıt ile belirli bir hasta popülasyonunda, yumurtalık yanıtına, LH seviyelerine ve jinekologun kararına göre ek LH 75/150 IU/gün uygulanabilir.</li>
	<li>Östrojene duyarlı hastalıkları olan hastalarda, stimülasyonun 1. gününden oosit alımından sonraki 7. güne kadar aromataz inhibitörleri (letrozol) ile ilişkili gonadotropinleri içerir.</li>
	<li>4 gün boyunca sabit bir doz gonadotropin sürün.</li>
	<li>Foliküler büyümeyi 5. günde ve daha sonra her 2-3 günde bir izleyin; sonunda, gonadotropin dozajını ayarlayın.</li>
	<li>En az 3 folikül 17-18 mm çapa ulaştığında, son oosit olgunlaşması için tetiği 0,5 mL dozda tek bir GnRH agonist altı bolusu ile uygulayın.</li>
</ol>3. Oosit alımı
<ol><li>Oosit alımına hazırlanıyor<ol>
<li>Gerekli malzemeler için, Malzeme Masası'nabakın ve laboratuvar ayakkabısı ve kıyafetini, cerrahi yüz maskesini, saç örtüsünü, cerrahi eldivenleri, kalıcı toksik olmayan bir işaretleyiciyi, cımbızları, steril küçük gazlı bezleri, tek kullanımlık veya yeniden kullanılabilir spekulum, vajinal cerrahi ekipmanı ve yüzey dezenfektanını hazır tutun. Resüstisyasyon ekipmanının, ters çevrilmesi için anestezik ilaçların, anafilaktik şokun tedavisi için hazırlanmış bir kitin ve ameliyathanede oksijenin kullanılabilirliğini sağlayın.</li>
		<li>Yardımcı üreme teknolojilerinde Ultrasonda ESHRE Çalışma Grubu'nun önerilerine göre oosit alma prosedürünü gerçekleştirin (ART)25.<ol>
<li>Sedasyon veya genel anestezi ve profilaksi için antibiyotikler sunun. NOT: Bu protokolde propofol (dozajı hastanın ağırlığına göre ayarlanmıştır) ve 50-100 μg fentanil, 1000 mg parasetamol ve oksijen ile destekli maske havalandırması yönetilerek derin sedasyon sağlanmıştır.</li>
			<li>Vakum pompası, 17 G tek lümen iğneye bağlı bir toplama tüpü ve bir oosit toplama tüpünden oluşan bir aspirasyon ünitesi kullanarak oosit alımını gerçekleştirin. Toplama sırasında, kümülüs hücrelerini sıyırma veya zona pellucida'yı kırma gibi oositlerin zarar görme riskini önlemek için ~ 120 mmHg'lik bir basıncı aşmayın.</li>
			<li>Kültür ortamlarında 37 °C'den emin olmak için çalışma yüzeyi sıcaklığını kalibre edin. Tüm prosedür sırasında, gelişimsel yeterliliklerini etkileyebilecek geçici sıcaklığa bile oosit maruziyetini en aza indirin.</li>
			<li>Oosit alımının sonunda, taburcu olmadan önce hastayı 3-4 saat gözlemleyin.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>Operasyon tiyatrosu<ol>
<li>Ameliyathaneye girmeden önce hastayı tanımlayın ve yumurtlama tetikleyicisinin zamanını onaylayın.</li>
		<li>Hasta ameliyat masasına jinekolojik pozisyonda yatsa.</li>
		<li>Bakteriyel kontaminasyonu en aza indirmek için oosit alımından önce vajinayı/serviksi temizleyin.</li>
		<li>Yumurtalıkların konumunu ve çeşitli organlar ve kan damarları ile anatomik ilişkileri değerlendirmek için bir ön transvajinal ultrason gerçekleştirin.</li>
		<li>Ultrason rehberliğinde, vajina duvarı ile yumurtalık arasında bulunan organlara veya kan damarlarına yaralanmamaya dikkat ederek vajinal duvardan ve yumurtalık folikülüne tek lümenli bir iğne yerleştirin.</li>
		<li>Aspirasyona en yakın folikülün içinden başlayın ve en distal olanlara ilerleyin.</li>
		<li>11-12 mm'den büyük bir çaptaki tüm folikülleri delin, tüm foliküler sıvıyı aspire etmek için iğnenin "bükülme hareketlerini" gerçekleştirin, daha sonra ameliyathanenin blok ısıtıcısında önceden ısıtılmış steril bir tüpe (yuvarlak alt 14 mL) salınır.</li>
		<li>Aldıktan hemen sonra, tüpü hastanın kimliğinin ayrıntılarıyla kapatın ve etiketleyin.</li>
		<li>Hemşirenin tüpü laboratuvara getirdiğinden emin olun, burada kümülüs-oosit komplekslerinin (COC) varlığı için hemen taranır.</li>
		<li>Embriyologlara, alınan toplam COC sayısı hakkında klinisyeni bilgilendirmelerini söyleyin.</li>
		<li>İlk yumurtalık için işlem tamamlandıktan sonra, iğneyi temiz ortamla yıkayın ve aynı prosedürü kullanarak ikinci yumurtalığa devam edin.</li>
		<li>Oosit alımından sonra, parametriumun yumurtalıklarından veya kan damarlarından ve Douglas'ın kesesinde serbest sıvıdan kaynaklanan kanamaları değerlendirin. NOT: Gamet ve embriyo izlenebilirliğinin klinik düzeydeki etkinliğini otomatikleştirmek ve iyileştirmek için merkezde elektronik tanık sistemi (EWS) uygulanmıştır26. Bununla birlikte, bu protokol, protokolün herhangi bir IVF laboratuvarında tekrarlanabilirliğini sağlamak için EWS'den bahsetmemektedir. Yine de, prosedürün tüm adımlarının gamet ve embriyo izlenebilirliğini sağlamak için ikinci bir operatör (yani bir tanık) gerektirdiğini düşünün.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Tüp bebek laboratuvarı
<ol><li>Oosit alma işleminden bir gün önce<ol>
<li>Oosit toplama tüpleri hazırlayın (Malzeme Tablosunabakın).<ol>
<li>Embriyo kültürü için her oosit toplama tüpüne (yuvarlak alt, 5 mL) 1 mL IVF ortamı dağıtın (MalzemeTablosuna bakın) ve 0,2 mL mineral yağ (Malzeme Tablosunabakın) ile örtün. NOT: Tüp sayısı, alınması beklenen folikül sayısına göre tanımlanacaktır. Her tüp en fazla 4 COC içerebilir.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Tüpleri kapakla kapatın (ilk çıtçıt). Tüpleri orta ve hazırlık tarihinin ayrıntılarıyla etiketle. Tüpleri kontrollü bir atmosferde 37 °C'de bir gecede kuluçkaya yatırın (%6 CO2,%5 02).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Oosit alma gününde<ol>
<li>Plastik malzemeleri 37 °C'de (steril kültür yemekleri ve Pasteur pipetler) önceden ısıtın.</li>
		<li>Hastalardan kimliklerini (tam adı ve doğum tarihi) ve yumurtlama tetikleyici zamanını onaylamalarını isteyin. Laboratuvar sayfasında tanımlama (ID) prosedürünün tamamlandığını ve yumurtlama tetikleyicisinin zamanının doğrulandığını belirtin.</li>
		<li>Oosit toplama tüplerini inkübatörden alın (prosedür başlamadan hemen önce) ve sıkı kapanmayı sağlamak için kapağı aşağı itin. Oosit toplama tüplerini hastanın bilgileriyle etiketle. Oosit toplama tüplerini 37 °C'de blok ısıtıcıya yerleştirin.</li>
		<li>Önceden ısıtılan steril kültür yemeklerindeki foliküler sıvıyı inceleyin ve COC'leri tanımlayın. Bir veya daha fazla COC tanımlandıktan sonra, foliküler sıvıyı ve kan kirlenmesini gidermek için iki damla ortamda iki kez durulayın.</li>
		<li>COC'leri oosit toplama tüplerine aktarın ve tüpteki COC sayısına açıklama ekleme. Orta tüplerin kapaklarını gevşetin ve derhal% 6 CO 2 , % 5O2atmosferinde 37 ° C'de kuluçkaya yatırın.</li>
		<li>Alınan oosit sayısına göre 7 ile 9 arasında olan adımları yineleyin. Laboratuvar sayfasını güncelleyin. NOT: Bir tanığın tüm tüp ısıtma bloklarının (ameliyathanedekiler dahil) boş olup olmadığını kontrol ettiğinden ve prosedürün laboratuvar sayfasındaki kapanışını imzaladığından emin olun.</li>
		<li>İşlem tamamlandıktan sonra çalışma aşamasını silin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Oosit denudasyonu
<ol><li>Prewarm 4-(2-hidroksyetil)-1-piperazineethaneslfonic asit (HEPES)-tamponlanmış orta ve hyaluronidaz (Malzeme Tablosunabakın) başlamadan önce en az 1 saat 37 °C'de.</li>
	<li>Embriyo kültürü için 0,3 mL mineral yağ ile kaplanmış 0,6 mL/önceden ısıtılmış HEPES tamponlu ortam (%5 insan serum albümini [HSA] ile desteklenmiş) ile 4 kuyulu bir IVF plakası hazırlayın (Malzeme Masasınabakın) ve en az 30 dakika boyunca 37 °C'de ısıtın.</li>
	<li>Oosit denudasyon plakasını hastanın kimliğinin ayrıntılarıyla etiketleyin.</li>
	<li>İşleme başlamadan hemen önce, yaklaşık 20 IU / mL'lik son bir konsantrasyon elde etmek için ilk kuyuya hyaluronidaz ekleyin.</li>
	<li>Kümülüs hücrelerini dağıtmak için enzimi içeren ilk kuyuya sınırlı sayıda COC (6'ya kadar) yerleştirin.</li>
	<li>Kümülüs ve korona hücrelerinin enzymatic olarak çıkarılmasını geliştirmek için, oositleri 30 s'ye kadar yaklaşık 250 μm iç çaplı bir Pasteur pipet aracılığıyla tekrar tekrar pipetleterek kümülüs hücrelerinin sıyırmasını gerçekleştirin. İlk hücre ayrışması gözlendikten sonra, oositleri sadece HEPES tamponlu ortam içeren ikinci kuyuya aktarın ve minimum miktarda enzim taşımaya dikkat edin.</li>
	<li>İç çapları azalan (170-145 μm) pipetleri kullanarak korona hücrelerini çıkarmak için daha fazla denudasyon gerçekleştirin. Sadece kesinlikle gerekliyse daha düşük çaplar (135μm) kullanın.</li>
	<li>Enzimi yıkamak için denuded oositleri dikkatlice yıkayın.</li>
	<li>Denudasyondan sonra, oositleri ters bir mikroskop altında inceleyerek bütünlüklerini ve olgunlaşma aşamalarını değerlendirin. MII oositlerini olgunlaşmamış olanlardan ayırın (germinal veziklin ve metafaz-I).</li>
	<li>Hemen kriyoprezervasyon yapmak için MII oositlerini vitrifikasyon bölgesine taşıyın. Laboratuvar sayfasını güncelleyin.</li>
</ol>6. Oosit vitrifikasyonu
NOT: Tercihen 38 saat içinde ve denudasyondan hemen sonra oosit vitrifikasyonu gerçekleştirin. Burada açıklanan vitrifikasyon prosedürü, manipülasyon sırasında oositlere zarar vermemek için oda sıcaklığında (RT) ve iç çapı 170 μm olan bir striptizci pipet kullanılarak yapılmalıdır.
<ol><li>İşlemden yaklaşık 30 dakika önce, denge çözeltisini (ES) ve vitrifikasyon çözeltisini (VS) RT'ye (25-27 °C) getirin.</li>
	<li>Kriyodevices hastanın adı ve kimliği, tedavi kimliği, donma tarihi, oosit sayısı ve kriyobarkod ile uygun şekilde etiketlenin.</li>
	<li>Tek kullanımlık bir soğutma rafını taze sıvı nitrojenle doldurun ve sterilizasyon işlemini başlatın.</li>
	<li>Vitrifikasyon plakasını (Malzeme Tablosunabakın) hastanın adı ve kimliği ile etiketleyin.</li>
	<li>Kullanmadan önce içeriğini karıştırmak için her şişeyi dikkatlice iki kez ters çevirin ve 6 mm Petri kabının kapağını bir damla 30 μL HEPES tamponlu ortam (%5 HSA ile) ve bir bitişik damla 30 μL ES ile hazırlayın. NOT: Orta buharlaşmayı sınırlamak için damlaları kullanımdan hemen önce yerleştirin.</li>
	<li>170 μm çapında bir striptizci pipeti kullanarak, oositleri (9'a kadar) mümkün olan en küçük ortam hacmiyle ilk damlaya yerleştirin. Striptizci pipetini kullanarak, EBM konsantrasyonunda kademeli bir artış elde etmek için n.1 ve n.2 damlası arasında bir orta köprü oluşturun (Şekil 1A).</li>
	<li>Oositleri ilk düşüşte 3 dakika kuluçkaya bırakın. 30 μL ES 'lik (n.3) üçüncü bir damla ekleyin. 3 dakika sonra, oositleri ES'nin ikinci damlasına aktarın ve n.3 ve n.2 damlaları arasında orta bir köprü oluşturun (Şekil 1B). 3 dakika boyunca n.3 damlasında oositleri kuluçkaya bırakın.</li>
	<li>Kuluçka sırasında, kullanılacak her kriyodevice için bir 30 μL ES damlası ekleyin (9 oosit kriyoprezervasyon yapılacaksa, ES'nin her damlasına 3 oositli 3 damla ES yerleştirin). Oositleri saf ES çözeltisine taşıyın ve 6-9 dakika (büzüldükten sonra ilk boyutlarını kurtarana kadar) bırakın (Şekil 1C).</li>
	<li>1 mL VS ile merkezi bir kuyu kabı (60 x 15 mm) hazırlayın. İlk 6 dakikanın sonunda, kriyoprezokreserv edilecek oositleri VS çözeltisine aktarın ve mümkün olduğunca az ortam serbest bırakın. Oositleri VS'de 1 dakika bekletin ve ES fazlalığını gidermek için alttan kabın üstüne taşıyarak dikkatlice yıkayın.</li>
	<li>Kuluçka dakikasının bitiminden yaklaşık 10 s önce, kriyodevice'i mikroskop altına yerleştirin ve odağı siyah işarete (yani kriyodevice'in ucuna) ayarlayın. Oositleri kriyodevice üzerine minimum VS miktarı ile siyah işaretin yanına yerleştirin (Şekil 2A).</li>
	<li>Striptizci pipetini oositlerden uzaklaştırın ve VS ortamının fazlalığını çıkarın (Şekil 2B) böylece oositler ince bir orta tabaka ile kaplı kalır (Şekil 2C).</li>
	<li>Kriyodevice'i sıvı nitrojene hızla daldırarak, hava kabarcıklarını yüzeyinden çıkarmak için hızla sallayın. Kriyodevice'in koruyucu kapağını cımbızla tutun ve sıvı nitrojenle doldurun; daha sonra propilen şeritlerini sıvı nitrojende tutarken kriyodevice'i içine yerleştirin.</li>
	<li>Kriyodevice'i daha önce hastanın bilgileriyle etiketlenmiş bir visiotube'da saklayın. Laboratuvar sayfasını güncelleyin.</li>
</ol>7. Oosit ısınması
<ol><li>İşlemden yaklaşık 30 dakika önce, çözme çözeltisini (TS), seyreltme çözeltisini (DS) ve yıkama çözeltisini (WS) RT'ye (25-27 °C) ısıtın. İçeriğini karıştırmak için her şişeyi dikkatlice iki kez ters çevirin. Merkezi bir kuyu Petri kabına 1 mL TS yerleştirin ve prosedüre başlamadan önce en az 1 saat boyunca 37 °C'de ısıtın.</li>
	<li>Tüm plastik malzemeleri hastanın adı, kimliği ve çözüm türü ile etiketlenin. Bir tanıktan hastanın kriyodevice hakkındaki bilgilerini doğrulamasını isteyin.</li>
	<li>Isınacak her kriyodevice için, birinci kuyuda 200 μL DS ve ikinci ve üçüncülerde eşit miktarda WS (sırasıyla WS1 ve WS2 olarak adlandırılır) 6 kuyu plakası hazırlayın. Buharlaşmayı önlemek için kuyuların dışındaki alana fosfat tamponlu salin (PBS) veya steril su ekleyin.</li>
	<li>TS kabını inkübatörden çıkar ve mikroskop altına yerleştir. Mikroskobun odağını Petri kabının ortasına ayarlayın.</li>
	<li>Propilen şeritlerini sıvı nitrojende tutarken kriyodevice'in koruyucu kapağını dikkatlice bükün ve çıkarın. Kriyodevice sıvı nitrojenden TS'ye mümkün olduğunca çabuk aktarın ve sapma riskini önlayın ve geri sayımı başlatın (1 dk).</li>
	<li>Kriyodevice'in ucuna (yani kara lekeye) odaklanarak oositleri lokalize edin. Bir striptizci pipeti kullanarak, oositleri kriyodevice'den serbest bırakın. NOT: Oositleri kriyodevice'den aspire etmemeye çalışın; TS'ye geçene kadar üzerlerinde biraz medya bırakın.</li>
	<li>170 μm çapında bir striptizci pipeti kullanarak, oositleri az miktarda TS ile DS'ye aktarın (bir degrade oluşturmak için) ve 3 dakika boyunca DS'de bırakın. Oositleri aynı şekilde WS1'e taşıyın ve 5 dakika bekletin. Son olarak, oositleri 1 dakika boyunca WS2'ye aktarın.</li>
	<li>Oositleri uygun bir önkoşulu IVF kültür ortamına aktarın ve intrasitoplazmik sperm enjeksiyonuna (ICSI) devam etmeden önce 1 saat kuluçkaya yatırın. Laboratuvar sayfasını güncelleyin.</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Klinik hususlar 
Yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonu ve in vitro olgunlaşma gibi gelişmekte olan stratejiler araştırılmış olsa da, COS sonrası oosit vitrifikasyonu doğurganlığın korunması için altın standart tekniktir. Bu senaryoda, çoğu kanser hastası kanser tedavilerine başlamadan önce sadece bir yumurtalık döngüsünden yararlanabileceğinden, alınan ve kriyoprezerserve edilen oosit sayısı mümkün olan en kısa sürede en üst düzeye çıkarılmalıdır. Bu nedenle, uygun bir yumurtal...

İnsan oositleri için verimli bir kriyoprezervasyon programının geliştirilmesi ve uygulanması üreme tıbbında önemli bir atılım olmuştur. Son kanıtlara göre, vitrifikasyon, hasta popülasyonundan bağımsız olarak (infertil hastalar veya oosit bağış programı) 1 ,2,3' e kıyasla yavaş donmaya kıyasla istatistiksel olarakdaha yüksek sağkalım oranları ile sonuçladığı için, metafaz II (MII) oositlerini kriyoprezite etmek için en etkili stratejidir. Oosit vitrifikasyonunun dikkat çekici başarıları, Amerikan Üreme Tıbbı Derneği (ASRM) ve Yardımcı Üreme Teknolojisi Derneği (SART) Uygulama Komitelerinin bu tekniği postpubertal kadınlarda hem tıbbi hem de tıbbi olmayan endikasyonlar için elektif doğurganlığın korunmasında en etkili olacak şekilde telaffuz etmesine yol açmıştır4,5,6. Doğurganlığın korunması için tıbbi endikasyonlar şunlardır: (i) radyoterapi, sitotoksik kemoterapi ve endokrin tedavi gibi7 tedavi gerektiren kanser ve otoimmün hastalıklar (yumurtalık rezervi üzerindeki zararlı etkisi anne yaşı ve tedavinin türü ve dozu ile ilişkilidir); (ii) tekrarlanan veya radikal cerrahi gerektiren yumurtalık hastalıkları (endometriozis gibi)8; ve (iii) genetik durumlar (örneğin, X-kırılgan) veya erken yumurtalık yetmezliği. Ek olarak, doğurganlığın korunması, tıbbi olmayan nedenlerle (sosyal donma olarak da bilinir) ebeveyn hedefini gerçekleştiremeyen tüm kadınlar için değerli bir seçenek haline gelmiştir.
Doğurganlığın korunması için endikasyondan bağımsız olarak ve doğurganlığın korunmasına ilişkin başlıca uluslararası yönergelere göre, oositlerini vitrifiye etmek isteyen tüm hastalar, gerçekçi başarı şansları, maliyetleri, riskleri ve prosedürün sınırlamaları hakkında bilgi sahibi olmak için uygun danışmanlık almalıdır9, 10,11,12,13. En önemlisi, bir MII oosit kohortunun vitrifiye edilmesi hamileliği sağlamaz, ancak gerekirse gelecekteki in vitro fertilizasyon (IVF) tedavisi için daha yüksek bir başarı şansı sunduğu açık olmalıdır14. Bu bağlamda, kadının oosit vitrifikasyonu sırasındaki yaşı kesinlikle en önemli sınırlayıcı faktördür15 ileri anne yaşı (AMA; >35 yıl) kadın kısırlığının ana nedenidir16. Yumurtalık rezervinde ilerleyici bir azalmanın yanı sıra, AMA metabolizma, epigenetik düzenleme, hücre döngüsü kontrol noktaları ve meiotik ayrım gibi kusurlu fizyolojik yollar nedeniyle oosit yeterliliği bozukluğu ile ilişkilidir17. Bu nedenle, vitrifiye etmek için makul sayıda yumurta esas olarak anne yaşına bağlıdır. 36 yaşından küçük kadınlarda başarı şansını en üst düzeye çıkarmak için en az 8-10 MII oosit18 gereklidir. Genel olarak, vitrifiye oosit sayısı ne kadar yüksekse, başarı olasılığı da o kadar yüksektir. Bu nedenle, yumurtalık rezervinin anti-Müllerian hormon (AMH) seviyeleri veya antral folikül sayısı (AFC) gibi yumurtalık rezervi belirteçlerine göre uyarılması, yumurtalık rezervinin mümkün olan en kısa sürede tam olarak istismar etmesi için çok önemlidir.
Tüm prosedürün güvenliği, hastaları doğurganlık korumasına kaydederken diğer önemli konudur. Klinisyenler, riskleri en aza indirmek ve (i)yumurtalık hiperstimülasyon sendromunun (OHSS) gonadotropin salgılayan hormon (GnRH) antagonist protokolü ve ardından bir GnRH agonisttetikleyicisi 19 ve (ii) uzaktan kumanda gibi güvenli yaklaşımları kullanarak önlemek için en iyi stratejileri kullanmalıdır, ancak olası, periton kanaması riskleri, pelvik yapılarda yaralanma (üreter, bağırsak, apandisit, sinirler) veya oosit alımı sırasında pelvik enfeksiyon. Son olarak, (iii) stimülasyon için geleneksel rejimler suprafizyolojik serum estradiol ile ilişkilidir ve bu nedenle meme kanseri gibi östrojene duyarlı hastalıklarda önerilmez. Aromataz inhibitörlerini (letrozol veya tamoksifen gibi) içeren protokoller bu durumlarda daha uygundur20,21. Laboratuvar ortamında, oosit vitrifikasyonu için en yaygın protokol hala Kuwayama ve meslektaşları tarafından ilk açıklananprotokoldür 2,23 , kriyoprotekantların(CPAs)kademeli olarak eklenmesini içeren adım adım bir prosedürden oluşur. İlk fazda (denge/dehidratasyon) oositler %7,5 v/v etilen glikol ve %7,5 v/v dimetil sülfit (DMSO) içeren bir CPA çözeltisinde maruz kalırken, ikinci aşamada, oositler% 15 v / v etilen glikol ve% 15 v / v DMSO, artı 0.5 mol / L sakkaroz ile bir vitrifikasyon çözeltisine taşınır. Vitrifikasyon ortamında kısa bir inkübasyondan sonra, oositler özel olarak tasarlanmış, açık kriyodevices içine yerlenebilir ve son olarak kullanıma kadar saklanmak üzere -196 ° C'de sıvı nitrojene daldırılabilir.
Burada, bir doğurganlık koruma tedavisinin tüm klinik ve laboratuvar çalışmaları (i) objektif ve kanıta dayalı danışmanlık için önerilerin özetlenmesi, (ii) prosedürün maliyet etkinliğine odaklanılması ve (iii) yumurtalık rezervinden tam olarak yararlanmak ve mümkün olan en kısa sürede alınan oosit sayısını en üst düzeye çıkarmak için en uygun stratejileri tanımlamakla tanımlanmıştır. Yumurtalık rezervinin değerlendirilmesi, ideal bir stimülasyon protokolünün tanımı, ayrıca oosit alma, denudasyon ve vitrifikasyon prosedürleri, etkinliklerini, verimliliklerini ve güvenliklerini en üst düzeye çıkarmak için yaklaşımlarla birlikte ayrıntılı olarak açıklanacaktır. Literatürde bu protokolün diğer protokolleri veya uyarlamaları mevcut olduğu için, bu makalenin temsili sonuçları ve tartışma bölümleri sadece bu prosedür için geçerlidir.

<table><tbody><tr><td>Collection</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hot plate</td><td>IVF TECH Lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İşaretleyicileri</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminer Akış Başlığı</td><td>IVF TECH</td><td></td><td>Grade A hava akışı</td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Leica</td><td>Leica M80</td><td></td></tr><tr><td>Termometre</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Test tüpü Isıtıcı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Üçlü gaz inkübatörü</td><td>Panasonic</td><td>MCO-5M-PE</td><td>02/CO2</td></tr><tr><td>Vakum Pompası Aşçı</td><td></td><td>K-MAR-5200</td><td></td></tr><tr><td>Sarf malzemeleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CSCM (Continuos tek kültür tamamlandı) orta</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90165</td> Embriyo kültürü için <td>HSA Mineral Yağ ile desteklenmiş IVF kültür ortamı</td></tr><tr><td></td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>9305</td><td></td></tr><tr><td>Yumurta Aspirasyon İğnesi (Tek lümen)</td><td>Cook</td><td>K-OSN-1730-B-60</td><td></td></tr><tr><td>Primaria Tabağı</td><td>Corning</td><td>353803</td><td>Corning Primaria Tabağı 100x20 mm stil standart hücre kültürü kabı</td></tr><tr><td>Yuvarlak tabanlı tüpler</td><td>Falcon</td><td>352001</td><td>Falcon 14ml Yuvarlak Alt Polistiren Geçmeli kapaklı test tüpü</td></tr><tr><td>Yuvarlak tabanlı tüpler</td><td>Falcon</td><td>352003</td><td>Oosit toplama tüpleri/ Falcon 5ml 12x75 Yuvarlak Alt Polipropilen Geçmeli kapaklı test tüpü</td></tr><tr><td>Kauçuk Ampul</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z111589-12EA</td><td></td></tr><tr><td>Steril cam Pastör pipetleri</td><td>Hunter Scientific</td><td>PPB150-100PL</td><td>Pipet Pastör Kotonat, 150mm, MEA e CE</td></tr><tr><td>Denudation</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 inkübatörü</td><td>Eppendorf</td><td>Galaxy 14S</td><td></td></tr><tr><td>Flexipet ayarlanabilir tutamak seti</td><td>Cook</td><td>G18674</td><td>Striptizci&nbsp; tutucu</td></tr><tr><td>Gilson Pipetman</td><td>Gilson</td><td>66003</td><td>p20</td></tr><tr><td>k-Sistem İnkübatör</td><td>Coopersurgical</td><td>G210Invicell</td><td></td></tr><tr><td>Lab İşaretleyicileri</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminer Akış Başlığı</td><td>IVF TECH</td><td></td><td>Grade A hava akışı</td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Leica</td><td>Leica M80</td><td></td></tr><tr><td>Sarf malzemeleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biopur epTIPS Raf</td><td>Eppendorf</td><td>30075331</td><td>Mikropipetler epTIPS Biopur 2-200 & mikro; l</td></tr><tr><td>İnsan Serumu Albümin</td><td>thermoFisher Scietific</td><td>9988</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidaz</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90101</td><td>HEPES tamponlu HTF IVF kültür kabında (60 x 15mm) 80 IU / mL hyaluronidaz enzimi</td></tr> <tr><td></td><td>Corning</td><td></td><td>353802 Primaria Şahin Tabağı 60X15mm TC Primaria standart hücre kültürü kabı</td></tr><tr><td>IVF çanağı Kayar kapaklı 4 oyuklu plaka</td><td>ThermoFisher Scietific</td><td>176740</td><td>Çoklu yemekler 4 kuyu (Nunc)</td></tr><tr><td>IVF Bir kuyu çanak</td><td>Falcon</td><td>353653</td><td>Falcon 60 x 15 mm TC tedavi edilmiş merkez kuyu IVF</td></tr><tr><td>Embriyo kültürü için Mineral Yağ</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>9305</td><td></td></tr><tr><td>Modifiye HTF Ortamı</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90126</td><td>HEPES Tamponlu orta</td></tr><tr><td>Kauçuk Ampul</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z111589-12EA</td><td>1 mL için pastör pipetleri</td></tr><tr><td>Steril cam Pasteur pipetleri</td><td>Hunter Scientific</td><td>PPB150-100PL</td><td>Pipet Pastör Kotonat, 150 mm, MEA ve CE</td></tr><tr><td>sıyırma pipeti ve nbsp; uçlar (140 & mikro; m)</td> <td>Cook</td><td>K-FPIP-1140-10BS-6</td><td>PIPET FLEXIPETS PER DENUDING</td></tr><tr><td>sıyırma pipet uçları (130 & mikro; m )</td><td>Cook</td><td>K-FPIP-1130-10BS-7</td><td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td></tr><tr><td>sıyırma pipet uçları (170 & mikro; m)</td><td></td> <td>K-FPIP-1170-10BS-5</td><td>PIPET FLEXIPETS'İ DENUDING BAŞINA PIŞIRIN</td></tr><<tr><td>güçlü>Vitrifikasyon</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Ekipman<></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elektronik Zamanlayıcı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexipet ayarlanabilir tutamak seti</td><td>Cook</td><td>G18674</td><td>Striptizci ve nbsp tutucu</td></tr><tr><td>Gilson Pipetman</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td>p200</td></tr><tr><td>Laboratuvar İşaretleyicileri</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminer Akış Başlığı</td><td>IVF TECH</td><td></td> Soğutma <td></td></tr><tr><td>Rafı için A Sınıfı Hava Akışı Paslanmaz Konteyner</td><td>Kitazato</td><td></td><td>Vitrifikasyon için sıvı nitrojen kabı</td></tr><tr><td></td><td>Stereomikroskop Leica</td><td>Leica M80</td><td></td></tr><tr><td>Sarf Malzemeleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biopur epTIPS Raf</td><td>Eppendorf</td><td>30075331</td><td>Mikropipetler epTIPS Biopur 2-200 & L</td></tr><tr><td>İnsan Serumu Albümini</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>9988</td><td></td></tr><tr><td>IVF kültür kabı (60 x 15 mm)</td><td>Corning</td><td>353802</td><td>Corning Primaria Şahin Tabağı 60 x 15 mm TC Primaria standart hücre kültürü kabı</td></tr><tr><td>Tüp bebek kabı 6 kuyulu</td><td>Oosafe</td><td>OOPW-SW02</td><td>OOSAFE&nbsp; SAMAN TUTUCULU KUYULU ÇANAK</td></tr><tr><td>Modifiye HTF Orta Fujifilm</td><td>Irvine Scientific</td><td>90126</td><td>HEPES Tamponlu orta</td></tr><tr><td>sıyırma pipet uçları (170 & mikro; m)</td><td>Pişirme</td><td>K-FPIP-1170-10BS-5</td><td>PIPET FLEXIPETS BAŞINA DENUDING</td></tr><tr><td>Vitrifikasyon Dondurma kiti</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90133-so</td><td>2 Flakon ES (Dengeleme Solüsyonu, 2 x 1 mL) ve 2 Flakon VS (Vitrifikasyon Solüsyonu, 2 x 1 mL)</td></tr><tr><td>Vitrifit</td><td>Coopersurgical Origio</td><td>42782001A</td><td>VitriFit&nbsp; Box</td></tr><tr><td>Warming</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elektronik Zamanlayıcı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexipet ayarlanabilir tutamak seti</td><td>Cook</td><td>G18674</td><td>Striptizci&nbsp; tutucu</td></tr><tr><td>Gilson Pipetman</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td>p200</td></tr><tr><td>k-Sistem İnkübatör</td><td>Coopersurgical</td><td>G210Invicell</td><td></td></tr><tr><td>Lab İşaretleyicileri</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminer Akış Başlığı</td><td>IVF TECH</td><td></td><td>Grade A hava akışı</td></tr><tr><td>Soğutma Rafı için Paslanmaz Konteyner</td><td>Kitazato</td><td></td><td>Vitrifikasyon için sıvı nitrojen kabı</td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Leica Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>Sarf Malzemeleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biopur epTIPS Raf</td><td>Eppendorf</td><td>30075331</td><td>Mikropipetler epTIPS Biopur 2-200 & L</td></tr><tr><td>CSCM (Continuos tek kültür tamamlandı) ortamı</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90165</td><td>HSA ile desteklenmiş IVF kültür ortamı</td></tr><tr><td>IVF kültür kabı (60 x 15 mm)</td><td>Corning</td><td>353802</td><td>Corning Primaria Şahin Tabağı 60X15mm TC Primaria standart hücre kültürü kabı</td></tr><tr><td>Tüp bebek kabı Kayar kapaklı 4 oyuklu plaka</td><td>ThermoFisher Scietific</td><td>176740</td><td>Çoklu Yemekler 4 kuyulu (Nunc)</td></tr><tr><td>Tüp bebek tabağı 6 kuyulu</td><td>Oosafe</td><td>OOPW-SW02</td><td>OOSAFE&reg; &nbsp; SAMAN TUTUCULU KUYU ÇANAK</td></tr><tr><td>Embriyo kültürü için Mineral Yağ</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>9305</td><td></td></tr><tr><td>SAtripping pipet uçları (300&mikro; m)</td> <td>K-FPIP-1300-10BS-5</td><td>PIPET FLEXIPETS'I DENUDING BAŞINA</td> <td>pişirin</td></tr><tr><td>Vitrifikasyon Çözdürme kiti</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90137-so</td><td>4 Flakon TS (Çözdürme Solüsyonu, 4 x 2 mL) + 1 Flakon DS (Seyreltme Solüsyonu, 1 x 2 mL) +1 Flakon WS (Yıkama Solüsyonu, 1 x 2 mL)</td></tr></tbody></table>

oosit vitrifikasyonu ile doğurganlığın korunması: klinik ve laboratuvar perspektifleri

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Kadın doğurganlığının korunması, hastaların gelecekteki yaşam kalitesiyle ilgilenen çok işlevli bir sağlık sisteminde çok önemlidir. Oosit kriyoprezervasyonu, birçok uluslararası bilim topluluğu tarafından postpubertal kadınlarda doğurganlığın korunması için altın standart olarak kabul edilir, hem tıbbi hem de tıbbi olmayan endikasyonlar için. Başlıca tıbbi endikasyonlar onkolojik hastalıklar, ağır endometriozis gibi jinekolojik hastalıklar, yumurtalık rezervini tehlikeye atarak sistemik hastalıklar ve erken menopoz içeren genetik durumlardır. Bu makalede, objektif ve kanıta dayalı danışmanlık önerileri sıralanarak doğurganlık koruma tedavisinin tüm klinik ve laboratuvar çalışmaları açıklanmaktadır. Ayrıca, prosedürün etkinliğine odaklanır ve yumurtalık rezervinden tam olarak yararlanmak ve mümkün olan en kısa sürede alınan oosit sayısını en üst düzeye çıkarmak için en uygun stratejileri açıklar. Yumurtalık rezervinin değerlendirilmesi, ideal bir stimülasyon protokolünün tanımı, ayrıca oosit alma, denudasyon ve vitrifikasyon prosedürleri, etkinliklerini, verimliliklerini ve güvenliklerini en üst düzeye çıkarmak için yaklaşımlarla birlikte ayrıntılı olarak verilmiştir.

Merkezdeki doğurganlık koruma programına genel bakış
12 yıllık bir süre boyunca (2008-2020), 285 kadın, toplanan olgun yumurtaların tüm kohortunun vitrifikasyonu gerektiren en az bir oosit alımı geçirdi. Bu kadınların çoğu (n=250) tek bir geri alma işleminden, 35'inden ise birden fazla geri alma işlemi yapıldı. Yumurta vitrifikasyonu için oosit alımının nedenleri 4 kategoride özetlenmiştir: tıbbi (kanser hariç), kanser, tıbbi olmayan ve diğerleri. Yumurta vitrifikasyonu için t...

Oosit kriyoprezervasyonu, postpubertal kadınlarda doğurganlığın korunması için altın standart olarak çeşitli uluslararası bilim toplumları tarafından kabul edilmektedir. Uygun klinik ve laboratuvar stratejileri, doğurganlık koruma tedavilerinin maksimum etkinliğini, verimliliğini ve güvenliğini sağlar.

Oosit Vitrifikasyonu ile Doğurganlığın Korunması: Klinik ve Laboratuvar Perspektifleri

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Oosit vitrifikasyonu ve ısınma prosedürleri doğurganlığın korunması için gereklidir. Bu protokolü gösterildiği gibi izleyerek, kullanıcının bu yordamların etkinliğini en üst düzeye çıkarmasını sağlar. Oosit vitrifikasyonu için doğurganlık koruması günümüzde yerleşik ve etik olarak kabul edilebilir bir yaklaşımdır.Etkili ve tutarlı klinik sonuçlar elde etmeyi ve embriyo kriyoprezervasyonu ile ilişkili ahlaki ve yasal sınırlamanın üstesinden gelmeyi sağlar. Vitrifikasyon sürecinde yeterliliğe ulaşmak için, örneklerin kriyoprotektantlara maruz kalma süresine özellikle dikkat etmenin protokolün tüm kritik noktalarına aşina olmak önemlidir. Alındıktan sonraki 38 saat içinde ve denudasyondan hemen sonra, tüm plastik malzemeleri hastanın adı, kimliği ve çözüm türü ile etiketleyin ve bir tanıktan hastanın kriyo cihazındaki bilgilerini onaylamasını isteyin.Tüm malzemeler etiketlendiğinde, insan serum albümin ile desteklenmiş 30 mikroliter hepes tampon ortamını karıştırmak ve yerleştirmek için her bir şişe oositleri birkaç kez dikkatlice ters çevirin ve bir petri kabına 30 mikroliter bitişik bir denge çözeltisi damlası yerleştirin. Oositleri ilk damlaya yerleştirmek için striptizci pipetini kullanın ve kriyoprotektantların konsantrasyonunda kademeli bir artış elde etmek için orta ila 30 mikroliner bir denge çözeltisi damlası arasında bir köprü oluşturun. Üç dakika sonra, plakaya ikinci bir 30 mikroliter equilibrasyon çözeltisi damlası ekleyin ve çözelti damlaları arasında orta bir köprü oluşturmak için pipeti kullanın.Oositler dengelenirken, plakaya kullanılacak her kriyo cihazı için bir adet 30 mikroliner equilibrasyon çözeltisi ekleyin. Üç dakika sonra, oositlerin başlangıç boyutlarına geri dönmesini sağlamak için oositleri altı ila dokuz dakika boyunca saf denge çözeltisine taşıyın. Oositler iyileştiğinde, bir mililitre vitrifikasyon çözeltisi içeren merkezi bir kuyu IVF yemeği hazırlayın.Oositleri mümkün olduğunca az ortamda yemeğe aktarın ve fazla denge çözeltisini çıkarmak için dikkatlice hareket ettirin. Kuluçkanın bitiminden yaklaşık 10 saniye önce, hastanın bilgilerinin etiketli bir kriyo cihazını mikroskop altına yerleştirin ve kriyo cihazının ucuna odaklanmayı ayarlayın. Oositleri ucun yanındaki kriyo cihazına minimum miktarda vitrifikasyon çözeltisi halinde yerleştirin ve fazla vitrifikasyon çözeltisini çıkarmak için striptizci pipeti oositlerden uzaklaştırın ve oositleri ince bir ortam tabakası ile kaplı bırakın.Kriyo cihazını hızlı bir şekilde sıvı nitrojene daldırın ve yüzeyindeki hava kabarcıklarını gidermek için cihazı hızla sallayın. Kriyo cihazının koruyucu kapağını cımbızla tutarak, propilen şeritlerini sıvı nitrojende tutarken cihazı kapağa yerleştirmeden önce kapağı sıvı nitrojenle doldurun. Ardından kriyo cihazını hastanın bilgileriyle etiketlenmiş bir visotubeda saklayın ve laboratuvar sayfasını güncelleyin.Oosit ısınması için, oda sıcaklığına ısıtılmış her bir çözdürme, seyreltme ve yıkama çözeltisi şişesini dikkatlice ters çevirin ve bir petri kabının merkezi kuyusuna 37 santigrat derecede en az bir saatlik kuluçka için bir mililitre çözünme çözeltisi ekleyin. Tüm plastik malzemeleri hastanın adı, kimliği ve çözüm türü ile etiketleyin ve bir tanıktan hastanın kriyo cihazındaki bilgilerini onaylamasını isteyin. Isınacak her cihaz için, altı kuyu plakasının ilk kuyusuna 200 mikrolitre seyreltme çözeltisi ekleyin ve plakanın ikinci ve üçüncü kuyularına eşit miktarda yıkama çözeltisi ekleyin.Çözelti buharlaşmasını önlemek için kuyuların dışındaki alana PBS ekleyin. Çözdürme çözeltisi kabını stereo mikroskobun altına yerleştirin ve odağı yemeğin ortasına ayarlayın. Propilen şeritlerini sıvı nitrojende tutarken bir kriyo cihazının koruyucu kapağını çıkarmak için dikkatlice bükün ve sapma riskini önlemek için kriyo cihazını sıvı nitrojenden çözme çözeltisine mümkün olan en kısa sürede aktarın.Bir dakika sonra, oositleri bulmak için kriyo cihazının ucuna odaklanın ve sonunda oositleri cihazdan hafifçe serbest bırakmak için bir striptizci pipeti kullanın. Oositleri ve küçük hacimli bir çözme çözeltisini altı kuyu plakasının ilk kuyusundaki seyreltme çözeltisine aktarmak için 170 mikron çapında bir striptizci pipet kullanın. Üç dakika sonra, oositleri beş dakika boyunca yıkama çözeltisinin ilk kuyusuna taşıyın.Kuluçkanın sonunda, oositleri ikinci yıkama çözeltisi kuyusuna aktarın ve oositleri bir saat boyunca uygun bir ön dengelenmiş IVF kültür ortamı hacmine aktarmadan ve laboratuvar sayfasını güncellemeden önce bir dakika boyunca 37 santigrat derecede kuluçkalayın. 12 yıllık bir süre boyunca, 285 kadın, toplanan olgun yumurtaların tüm kohortunun vitrifikasyonu gerektiren en az bir oosit alımı geçirdi. Bu kadınların çoğu tek bir geri alma işlemine tabi t başlandı.35'i birden fazla geri alma işlemi geçirdi. Yumurta vitrifikasyonu için oosit alımının nedenleri genellikle kanser, kanser, tıbbi olmayan ve diğer tıbbi olarak karakterize edildi. Yumurta vitrifikasyonu için tıbbi bir nedeni olan hastalar ve kanser nedeniyle doğurganlık koruması uygulanan hastalar daha gençti ve tıbbi olmayan veya başka nedenleri olan hastalara göre daha yüksek antral foliküler sayı gösterdi.Ancak hastaların tıbbi nedenlerinde ortalama olgunlaşma oranları biraz daha düşük olduğu için ortalama vitrifiye edilen oosit sayısı gruplar arasında benzerdi. Kanser dışında tıbbi nedeni olan hastaların yaklaşık yarısı ve yumurta vitrifikasyonu için başka nedenleri olan hastaların çoğunluğu aslında ısınmak için geri döndü. Tersine, kanser veya tıbbi olmayan nedenlerle doğurganlık koruması uygulanan çok az hasta vitrifiye oositlerini IVF için kullandı.Vitrifikasyon ve ısınma arasında geçen süredeki farklılıklara rağmen, oositlerin sağkalım oranı hasta grupları arasında benzerdi ve oosit vitrifikasyon ve ısınma protokollerinin etkinliğini ve güvenliğini doğruladı. Ayrıca, sağkalım oranı vitrifikasyon ve ısınma operatörünün deneyiminden bağımsızdı. Sonuçların tutarlılığını etkileyebilecek en önemli adımlar ısınma ile ilgili adımlardır.Bu nedenle, çözülme çözeltilerinin hacmini ve sıcaklığını dikkatlice kontrol etmek gerçekten önemlidir. Yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonu, pubertal öncesi hastalar için bir seçenek olarak şu anda incelenme aşamasında olan tek stratejidir. Umut verici olmasına rağmen, bu yaklaşımın uygulamasını sınırlayan önemli bir sınırlaması vardır.

fertility-preservation-through-oocyte-vitrification-clinical

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

MicroSecure Vitrifikasyon, FDA iyi üretim ve doku işleme uygulamalarıyla uyumlu, ticari olmayan, aseptik kapalı bir vitrifikasyon cihazı sistemi olarak geliştirilmiştir. Hidrofobik tıkalı embriyo pipetlerinin endüstriden çekilmesi nedeniyle, vitrifikasyon prosedürü, standart iç pamuk tapadan önce bir iç conta içerecek şekilde değiştirildi.

Modifiye MicroSecure Vitrifikasyon: İnsan Blastosistlerinin A, Güvenli Basit ve Etkili Kryoprezervasyon Prosedürü

Bu el yazması, olgunlaşmamış kedi yumurtalarının ticari destekler de laboratuvar yapımı ortamla minimum hacimli vitrifikasyonuna ilişkin bir protokolü açıklamaktadır. Oosit izolasyonundan ex vivo gonadlardan vitrifikasyon ve ısınmaya kadar her adımı kapsar.

Olgunlaşmamış Kedi Yumurtalarının Minimum HacimVitrifikasyonu

Ağır yumurtalık disfonksiyonu olan hastalar için yumurtalık foliküllerinin ilaçsız in vitro aktivasyonu (IVA) için laboratuvar prosedürlerinin ayrıntılarını sunuyoruz. Bu yöntem yumurtalık hiperstimülasyonu başına alınabilir oosit sayısını artırabilir ve bu hastalar için doğurganlık korumasına fayda sağlayabilir.

Şiddetli Yumurtalık Disfonksiyonu Olan Hastalarda Doğurganlığın Korunması

Protokol, yetişkin ve yavru koyun oositlerinin vitrifikasyonu için standart bir yöntem sağlamayı amaçlamaktadır. Tüp bebek medyasının hazırlanmasından ısınma sonrası kültüre kadar tüm adımları içerir. Oositler, minimum temel hacmi sağlamak için Cryotop kullanılarak MII aşamasında vitrifiye edilir.

Koyunlarda Erişkin ve Prepubertal Yumurtalıklardan Toplanan In Vitro Olgunlaşmış Oositlerin Vitrifikasyonu

Yaygın olarak kullanılan yavaş dondurma protokolüne alternatif bir kriyoprezervasyon yöntemi olarak yumurtalık dokusunun vitrifikasyonu için bir protokol sunulmaktadır.

Camsı bir agregasyon durumu elde etmek için yumurtalık korteks dokusunun vitrifikasyonu

Bu protokol, foliküler sıvıyı, somatik hücreleri ve olgunlaşmamış oositleri IVF prosedürlerinden izole etmek ve işlemek için standartlaştırılmış yöntemleri özetlemekte ve yüksek kaliteli moleküler ve hücresel analizlere olanak sağlamaktadır. Bu yaklaşımlar, tipik olarak klinik bakımda atılan materyalleri kullanarak doğurganlık, üreme yaşlanması ve yumurtalık disfonksiyonuna ilişkin translasyonel araştırmaları destekler.

İn Vitro Fertilizasyon Uygulanan Bireylerden İnsan Foliküler Sıvısı, Folikül Somatik Hücreleri ve Olgunlaşmamış Oositlerin Toplanması

Bu protokol, nörolojik/ortopedik hastaların ve yaşlı kişilerin mekansal ve zamansal yürüyüş değişkenlerini yeni kullanılmaya başlanan zemin tabanlı fotosel sistemi ile değerlendirmek için kullanılır.

Hastalar ve Yaşlı Bireylerde Spatiotemporal Yürüme Parametrelerinin Klinik Değerlendirilmesi

Bu subnormothermic sıcaklığında (21 ° C), insan karaciğer greft ex vivo makine perfüzyon için bir yöntem tarif eder.

Subnormothermic Makine Perfüzyon Yoluyla Fonksiyonel İnsan Karaciğer Koruma ve Kurtarma

Burada biz balgam indüksiyon tekniğini tanımlamak. Bu iletişim kuralı bir fark hücre sayısı gerçekleştirmek ve balgam süpernatant toplamak için işleme balgam ve hücreleri daha fazla çözümleme için da açıklanmaktadır.

Metodoloji balgam indüksiyon ve laboratuvar için

Burada, bir juatify döner kesme yordamı (IRCP), doğurganlık koruma teşvik değiştirilmiş bir laparoskopik juatify myomektomi gerçekleştirmek için bir protokol mevcut.

Giriş juatify Rotary kesim işlemleri (IRCP): A değiştiren Hysteromyomectomy yordamlar doğurganlık koruma kolaylaştırılması

Öğrenin oosit vitrifikasyonu ve ısıtma prosedürleri ile üreme biyolojisinde doğurganlık koruma yöntemlerini. Bu protokol, etik ve klinik açıdan güvenilir sonuçlar elde etmeyi sağlar.

Oosit Vitrifikasyonu ile Doğurganlığın Korunması: Klinik ve Laboratuvar Perspektifleri

Daha fazla video keşfet