Name: Farelerde Gardnerella vaginalis Mesane Maruziyeti Tarafından Tetiklenen Tekrarlayan Escherichia coli İdrar Yolu Enfeksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-12-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Öğrenin farelerde Gardnerella vaginalis maruziyetinin Escherichia coli kaynaklı tekrarlayan idrar yolu enfeksiyonlarını nasıl tetiklediğini. Bu model, mesane rezervuarlarından bakteri çıkışını ve enfeksiyon mekanizmalarını araştırmaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, enfeksiyon deneylerinde teknik yardım için Lynne Foster'a, SEM'e erişim için Washington Üniversitesi Selül Görüntüleme Merkezi'nden (WUCCI) James Fitzpatrick'e, UTI89kanR UPEC suşu için Scott Hultgren'e ve makalenin eleştirel okuması için David Hunstad'a teşekkür ediyor.
Bu çalışma Ulusal Bilim Vakfı (VPO#DGE - 1143954 Lisansüstü Araştırma Bursu), Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi Kadın Bulaşıcı Hastalıkları Araştırma Merkezi (NMG'ye Pilot Araştırma Ödülü), Amerikan Kalp Derneği: #12POST12050583 (NMG) ve #14POST20020011 (NMG) ve Ulusal Sağlık Enstitüleri, NIAID: R01 AI114635 (ALL) ve NIDDK tarafından desteklenmiştir: R21 DK092586 (ALL), P50 DK064540-11 (SJH, proje II PI:ALL) ve K01 DK110225-01A1 (NMG). Hayvan çalışmalarının bir kısmı NCRR hibesi C06 RR015502 tarafından desteklenen bir tesiste gerçekleştirilmiştir. Washington Üniversitesi Hücresel Görüntüleme Merkezi (WUCCI; SEM'in yapıldığı yer) ve MSJ, Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi, Washington Üniversitesi Çocuk Keşif Enstitüsü ve St. Louis Çocuk Hastanesi (CDI-CORE-2015-505), Barnes-Yahudi Hastanesi Vakfı (3770) ve Ulusal Nörolojik Bozukluklar ve İnme Enstitüsü (NS086741) tarafından desteklenmiştir. Fon verenlerin çalışma tasarımı, veri toplama ve analizi, yayınlama kararı veya makalenin hazırlanmasında hiçbir rolü yoktu.

Yazarlar bu çalışma ile ilgili çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Birincil İYE fazı sırasında UPEC bakteriürisini temizlememiş fareleri tanımlamak için bu modeldeki ilk kritik adım. Bu fareler, G. vaginalis'e maruz kaldıktan sonra UPEC bakteriüri oranlarını karıştıracakları için deneyden çıkarılmalıdır. İlk UPEC aşılamasından sonra, bakteriyel klirensi izlemek için haftalık olarak idrar toplanmalıdır. C57BL / 6 farelerinin yaklaşık% 65-80'i 4 hafta içinde bir İYE89kanR enfeksiyonunu temizleyecektir. Diğer inbred fare suşları, UPEC klirensi42,43 ve rezervuar oluşumu için farklı eğilimlere sahiptir ve bu nedenle bu model için uygun olmayabilir. İkinci kritik nokta, ampirik çalışmaların, sadece PBS'ye maruz kalan kontrol farelerinde meydana gelen arka plan spontan ortaya çıkışının üzerinde önemli rezervuar ortaya çıkışını tetiklemek için iki ardışık G. vaginalis aşısının (12 saat veya 1 wk arayla) gerekli olduğunu belirlemesidir. İki ardışık maruziyet arasındaki diğer süreler test edilmemiştir, ancak benzer sonuçlar verebilir. UPEC mesane titrelerinde bir azalmanın sadece G. vajinalis maruziyetlerinin39 wk arayla 1 wk verildiği modelde gözlendiğini belirtmek önemlidir. İkiden fazla maruziyet uygulanabilirken, ampirik kanıtlar tek başına tekrarlanan kateterizasyonun ortaya çıkışı arttırdığını, bu da sonuçların yorumlanmasını karıştırabileceğini veya maruz kalma grupları ve kontroller arasındaki farklılıkları ayırt etmek için daha fazla sayıda hayvan gerektirebileceğini göstermektedir. Son olarak, in situ mesane fiksasyon yönteminin birkaç kritik adımı vardır. Fiksatifin kelepçeli mesanelerin içinde kalmasını sağlamak için bazı beceriler gereklidir. Sönük mesanelerin SEM tarafından görüntülenmesi daha zor olacaktır. Fiksatifin mesaneye aşılanması sırasında çok nazik olmak da önemlidir, çünkü ürotelyumun fiksatif içeren kateter ile kazınması, G. vaginalis tarafından tetiklenenlerden bağımsız olarak ürotelyal pul pul dökülmeye neden olabilir. Fiksatif kokteylde belirtilen tüm konsantrasyonlar nihai konsantrasyonlardır. Bunların yanlış oranları, hücrelerin yetersiz sabitlenmesine ve şişmesine veya büzülmesine neden olabilir. Fiksatörler, hücrelerde ve dokularda sıcaklık şokunu önlemek için fizyolojik sıcaklıklara ısıtılmalıdır. Isınma ayrıca fiksatiflerin plazma membranlarından difüzyon hızında hafif bir iyileşme sağlar. SEM analizi için hazırlanan numuneler için osmiyum boyama sıklıkla ihmal edilebilirken, bu protokolde lipitleri stabilize etmek ve kritik nokta kurutma sırasında hücresel membranların çatlamasını önlemek için önemli bir adımdır.
Bu protokol, diğer UPEC ve / veya G. vaginalis suşlarını sırasıyla rezervuar oluşturma ve ortaya çıkmalarını tetikleme yetenekleri açısından test etmek için değiştirilebilir. Diğer vajinal bakterilere (örneğin, Lactobacillus crispatus PVAS100) maruz kalma veya ısıda öldürülen G. vaginalis, hiçbiri bu modelde patoloji göstermeyen diğer deneysel faktörler de eklenebilir39. Test edilecek diğer bakteri suşlarını seçerken, tüm deneylerde standart bir inokülum konsantrasyonunun kullanılabileceği şekilde tutarlı bir büyüme göstermek önemlidir. JCP8151BSmR'nin büyümesi anaerobik bir odada optimize edilmiştir. Bu suş muhtemelen anaerobik bir GasPak sisteminde yetiştirilebilir, ancak bu, sağlam bakteri büyümesini sağlamak için optimizasyon gerektirir. Son olarak, modeldeki belirli adımların zamanlamasını değiştirmek mümkün olabilir. Örneğin, CFU veya konakçı yanıtlarını izlemek için idrar, UPEC rezervuar oluşum aşamasında daha erken zaman noktalarında toplanabilir. Bu modelde, erken zaman noktalarında (3, 6, 12 hpi) idrar örneklerinin toplanmasının enfeksiyonun ilerlemesi veya rezervuarların kurulması üzerinde olumsuz bir etkisi gözlenmemiştir. UPEC rezervuarlarının ortaya çıkışının, 12 saat veya 1 wk verilen iki JCP8151BSmR dozundan sonra meydana geldiği bildirilmiştir, ancak diğer zaman aralıkları henüz test edilmemiştir. Ayrıca, UPEC rezervuar oluşum aşamasını 2 haftaya (4 hafta yerine) düşürerek modelin toplam süresini azaltmak da mümkün olabilir, çünkü farelerin çoğu bu zamana kadar bakteriüriyi temizler. Mesanenin kimyasal eksfoliyantlara maruz kalmasını takiben UPEC ortaya çıkışını inceleyen önceki çalışmalarda 1 veya 2 wk UPEC rezervuar oluşum fazı17,18 kullanılmıştır. Bununla birlikte, UPEC bakteriüri temizliği için gereken süreyi azaltmak, deneyden daha fazla hayvanın itlaf edilmesini gerektirme pahasına olabilir. Son olarak, mesanenin SEM analizi, G. vajinalis'in ürotelyum üzerindeki etkisinin süresini gözlemlemek için ek zaman noktalarında yapılabilir.
Sorun giderme ile ilgili olarak, özellikle mesane SEM analizi ile ilgili bazı önemli hususlar vardır. Kullanılan fare arka planına ve mevcut inflamasyon miktarına bağlı olarak, bazı mesaneler çok ince duvarlarla ortaya çıkacaktır. Bu mesaneler kritik nokta kurutma sırasında daha fazla kıvrılma eğilimindedir ve kovan kabuğu benzeri bir şekle neden olabilir. Bu meydana gelirse, en iyi yöntem, kabuk şeklindeki mesaneyi kıvrılmış arayüz boyunca ikiye bölmek ve daha sonra çıkıntılı dokunun kütlesini çıkarmak için ikinci kez kesmektir. Kesim, PTFE kaplamalı çift kenarlı tıraş bıçağı ile en iyi şekilde çalışır. Aşırı yağ bazen osmiyum boyama adımları sırasında çözünebilir. Bu, durulama ve dehidrasyon adımları sırasında yıkanamayan ve sonraki kurutma sırasında mesane yüzeyine yerleşebilen istenmeyen çözünmez yağ damlacıklarına neden olabilir. Bu damlacıklar, numunenin üzerine dağılmış küçük küreler veya disk benzeri yapılar olarak görünebilir (Şekil 4D). Bu, mesanenin etrafından mümkün olduğunca fazla yağ dokusunun çıkarılmasını sağlayarak hafifletilebilir. Platinum, iridyum kaplama ile değiştirilebilir, ancak ince yapısal detayların maskelenmesini azaltmak için kalınlıklar minimumda tutulmalıdır. Kaplama sırasında dönen bir aşamanın kullanılması şiddetle tavsiye edilir.
Bu modelin bir sınırlaması, çok sayıda fare gerektirmesidir. C57BL/6 farelerinin sadece% 65-80'i UPEC bakteriürilerini temizleyecek ve sonraki G. vaginalis veya PBS aşılaması için uygun olacaktır (bkz. Şekil 2C). Grup başına 10-12 fare elde etmek için (G. vaginalis inoculation vs. PBS), ~ 30 fare başlangıçta UPEC ile enfekte edilmelidir. Ayrıca, istatistiksel anlamlılığı tespit etmek için gerekli biyolojik kopyaları elde etmek için muhtemelen birden fazla deney gereklidir. Maruziyetler 1 wk arayla verildiğinde, PBS'ye maruz kalan farelerin% 14'ünde UPEC ortaya çıkışı meydana geldi (Şekil 3B). Bu nedenle, G. vaginalis'e maruz kalan farelerde PBS kontrollerine göre (0.8'de güç; alfa = 0.05 [tek taraflı]) UPEC rUTI'sinde önemli bir artış tespit etmek, her maruz kalma grubu için kümülatif olarak en az 40 farenin test edilmesini gerektirir. Ek bir husus, bu deneylerin pahalı ve emek yoğun olmasıdır. Fareler UPEC klerensi için haftalık olarak izlenmelidir ve deneysel zaman seyri, G. vajinalis 12 saatlik bir zaman diliminde iki kez mi yoksa iki kez 1 wk aralıklarla mı verildiğine bağlı olarak 4-5 wk'dır. SEM emek yoğundur ve mikroskop kullanılabilirliğine ve servis ücretlerine bağlı olarak maliyetli olabilir. Tüm mesanenin SEM için hazırlanması, analiz için bol miktarda materyal sağlar, ancak dezavantajı, her mesanenin analiz edilmesinin zaman alıcı olabileceğidir. Bu nedenle, idrar ve doku titreleri için kullanılan daha yüksek hayvan sayılarına kıyasla SEM tarafından sadece sınırlı sayıda mesanenin analiz edilebilmesi muhtemeldir. Ek olarak, mesane "bardaklarının" kavisli yüzeylerinin yüksek kaliteli görüntülerini elde etmek, görünürlüğü engelleyebilecek gölgeler nedeniyle beceri gerektirir. Mesane SEM, ürotelyal peelingi görselleştirmek için yararlı bir araç olmasına rağmen, bu yöntem büyük ölçüde nitelikseldir. Numune yuvarlak bir şekilde sabitlendiğinden ve fiksatifte glutaraldehit kullanımı nedeniyle, ışık mikroskobu yoluyla floresan olarak eksprese eden bakterilerin taranması mümkün değildir. İmmün boyama ve kimyasal boyalar, çoğu antijeni ve ozmiyumu çapraz bağlayacak ve antijen bölgelerini maskeleyecek ve dokuyu koyulaştıracak glutaraldehit kullanımı nedeniyle bu işlemle uyumlu değildir. Bununla birlikte, SEM tekniği, hücre boyutu48,49 gibi ek problar kullanılmadan nicel olarak değerlendirilebilen parametreler için yararlıdır.
Bu model, daha önce açıklanan yöntemlerin ötesinde çeşitli avantajlar sunar. Mesanenin dış kaynaklı olarak yeniden sokulmasının aksine, mesane rezervuarlarından çıkmanın neden olduğu UPEC rUTI mekanizmalarının incelenmesine izin verir. Mesane rezervuarlarından ortaya çıkan diğer rUTI modelleri, ürotelyal pul pul dökülmeye neden olmak için kimyasal ajanlar (protamin sülfat veya kitosan) kullanır17,18, bu da kadınlarda rİYE'nin tetikleyicisi olmayacaktır. G. vaginalis, bazı kadınlarda kateterizasyon veya suprapubik aspirasyon yoluyla doğrudan mesaneden toplanan idrarda saptanan yaygın bir ürogenital bakteridir23,26. Bu gerçek, BV (G. vajinalis'in vajinada aşırı büyüdüğü yer) ve İYE arasındaki bilinen ilişki ile birleştiğinde, G. vajinalis'in rİYE'nin klinik olarak makul bir tetikleyicisi olduğunu göstermektedir. Son olarak, in situ mesane fiksasyon yöntemi, mesane ultrayapısını korur ve hasarı sınırlayarak mesane tabakalarının birbirinden ayrılmamasını sağlar. Ürotelyumu görselleştirmek için önceki yöntemler geleneksel olarak kullanıcının gerilmiş mesaneyi fiksatif48'e batırmadan önce mesaneyi aseptik olarak hasat etmesini, ikiye bölerek, germesini ve bir diseksiyon tepsisine sabitlemesini sağlar. Bu yöntem çok düz bir numune ile sonuçlanır, ancak dokunun eşit veya doğal gerilmesini sağlamaz ve gerilmiş ve gerilmiş (yüksek buruşuk doku ile sonuçlanan) alanlara neden olabilir ve mesane tabakasının ayrılmasına neden olabilir. Ek olarak, mesanenin dokuyu germek ve sabitlemek için bu fiziksel manipülasyonları, ürotelyal pul pul dökülme de dahil olmak üzere hasara neden olabilir. Başka bir yöntem, parafine gömülmeden ve bir mikrotom ile ince kesitler elde etmeden önce sağlam mesaneleri fiksatif olarak batırmaktır. İnce kesitler, bakterileri incelemek ve protein lokalizasyonunu barındırmak için immünohistokimya deneyleri için paha biçilmezdir, ancak ince bir kesit ürotelyal yüzeyin görselleştirilmesine izin vermez. Bu SEM yöntemi, tüm mesanenin yüzeyinin bir kerede incelenmesini sağlar.
Açıklandığı gibi, bu modelin gelecekteki uygulamaları, hücre içi rezervuarlar oluşturup oluşturmadıklarını belirlemek için diğer UPEC suşlarının test edilmesini ve pul pul dökülmeye neden olup olmadıklarını değerlendirmek için diğer G. vaginalis suşlarının test edilmesini ve rİYE'ye neden olmak için UPEC ortaya çıkışını içerir. C57BL / 6 farelerin ötesindeki diğer fare suşları da test edilebilir, ancak kronik sistit geliştirme eğilimi yüksek olan fareler (C3H arka planındaki fareler gibi) önerilmez, çünkü deneyden çok fazla farenin toplanması gerekir. C57BL / 6 farelerinin ek bir avantajı, birçok genetik nakavt suşunun ticari olarak temin edilebilmesidir. Bu tür suşlar, rezervuar oluşumunda ve / veya ortaya çıkmasında rol oynayan konakçı faktörleri sorgulamak için bir fırsat sağlar.

İdrar yolu enfeksiyonları (İYE) dünya çapında önemli bir sağlık yükü getirmekte ve her yıl milyonlarca insanın, özellikle de kadınların yaşam kalitesini etkilemektedir1. Üropatojenik Escherichia coli (UPEC) İYE1'in en sık nedenidir. İYE gelişen birçok hasta (yaklaşık% 20-30), ilk enfeksiyonun antibiyotik aracılı temizlenmesine rağmen 6 ay içinde tekrarlayan bir İYE (rİYE) yaşayacaktır2. Ne yazık ki, menopoz öncesi kadınların% 5'iher yıl 3,4 veya daha fazla rİYE'den muzdariptir. Sıralı rUE atakları, indeks vakası 5,6,7,8'den aynı UPEC suşunun kalıcılığından kaynaklanabilir. İnsan örneklerinden ve fare modellerinden elde edilen veriler, aynı suş rİTI'sinin mesanedeki sessiz rezervuarlarda bulunan UPEC'den kaynaklanabileceğini düşündürmektedir. İnsanlarda, UTEC epitel hücrelerinde ve İYE 9,10,11,12,13 hastalarının mesane biyopsilerinde tespit edildi. C57BL / 6 farelerde yapılan çalışmalar, bazı UPEC suşlarının, floresan mikroskobu ve mesane dokusunun homojenizasyonu ve kültürü ile tespit edildiği gibi, mesanede sessiz hücre içi rezervuarlar oluşturabileceğini göstermiştir ve bakteriüri 14,15,16'nın çözülmesini takiben aylarca korunur. Mesanenin, mesane epitelinin (ürotelyum) pul pul dökülmesine neden olan ajanlarla tedavisi, örneğin protamin sülfat17 veya kitosan18, rİYE'ye neden olmak için rezervuarlardan UPEC'in ortaya çıkmasını tetikler. Bu veriler, önceki bir enfeksiyondan mesane UPEC rezervuarlarını barındıran kadınlarda, ürotelyal pul pul dökülmeye yol açan mesane maruziyetlerinin rİYE'yi tetikleyebileceğini düşündürmektedir.
Vajinal mikrobiyotanın idrar yolu enfeksiyonuna katkıda bulunduğuna dair kanıtlar artmaktadır19,20. Gardnerella vaginalis, hem vajinal hem de üriner mikrobiyota 21,22,23,24,25,26,27,28,29'un sık görülen bir üyesidir. Vajinada, yüksek düzeyde G. vajinalis varlığı, bakteriyel vajinozis (BV) olarak bilinen ve kadınların ~% 30'unu etkileyen mikrobiyoz disbiyozu ile ilişkilidir30,31,32. BV'li kadınlar, Lactobacillus33,34,35,36,37'nin hakim olduğu vajinal topluluğa sahip kadınlara kıyasla İYE yaşama riski daha yüksektir. Fare modellerinde, G. vaginalis, hem vajina38'de hem de mesane39'da epitel pul pul dökülmesine neden olur. UPEC mesane rezervuarlarını barındıran C57BL / 6 farelerde, G. vaginalis'e iki ardışık mesane maruziyeti - ancak PBS'ye değil - UPEC'in rezervuarlardan yeniden ortaya çıkmasına neden olur ve UPEC rUTI'ye neden olur. Ortaya çıkış, daha önce UPEC bakteriürisini çözmüş farelerden idrarda UPEC titrelerinin ortaya çıkması ve PBS'ye maruz kalan kontrol hayvanlarına kıyasla kurban sırasında UPEC mesane homojenat titrelerinde daha sonra bir azalma ile kanıtlanmıştır39. İlginçtir ki, mesanede G. vaginalis tarafından kalıcı bir kolonizasyon yoktur. Vakaların büyük çoğunluğunda, her biri idrarda 12 (h)'den az canlı G. vaginalis'e sahip iki kısa maruziyet, ürotelyal peelingi ortaya çıkarmak ve rİYE'yi teşvik etmek için yeterlidir.
Bu protokol, hücre içi mesane rezervuarlarında bulunan UPEC'in neden olduğu bir fare rUE modelini tanımlar ve nüksetmeyi tetiklemek için G. vaginalis mesane aşılamasını kullanır. Bu modelle elde edilen ilerleme, G. vajinalis'in daha önce kullanılan kimyasal ajanlara kıyasla rİYE'nin klinik olarak ilgili bir biyolojik tetikleyicisi olmasıdır. Ayrıca, fare idrar yollarında G. vaginalis'in nispeten kısa ömürlü sağkalımı, cinsel aktiviteden sonra ortaya çıkabileceği gibi, geçici mikrobiyal maruziyetlerin ürotelyum üzerindeki etkisinin incelenmesine izin verir. rUTI modelini özetlemenin yanı sıra, bu protokol ayrıca idrar sitolojisi ve in situ mesane fiksasyonu ve taramalı elektron mikroskobu (SEM) ile ürotelyumun görüntülenmesi için yöntemleri de açıklamaktadır.
G. vajinalis kaynaklı tekrarlayan UPEC UTI'nin bu protokolü, bir kanamisin direnç kaseti (UTI89kanR)40 taşıyan UPEC suşu UTI89'u kullanır. Test edilen tüm UPEC suşları, farelerde akut enfeksiyon aşamasında hücre içi bakteri toplulukları oluşturamamıştır41 ve UPEC'in tüm suşlarının gizli hücre içi rezervuarlar oluşturma yeteneğine sahip olup olmadığı henüz bilinmemektedir. Modeldeki diğer UPEC suşları kullanılmadan önce rezervuar oluşumu doğrulanmalıdır. Bu protokol spontan streptomisin'e dirençli G. vaginalis izolatı JCP8151BSmR38 kullanır. JCP8151BSmR ile rUTI'nin indüklenmesi,39 saat arayla 12 saat veya 7 gün (d) verilen iki ardışık G. vajinalis aşılaması gerektirir. Diğer G. vaginalis suşlarının peeling ve / veya UPEC rİTI'ye neden olup olmadığı bu modelle belirlenmeye devam etmektedir. Bilinen antibiyotik direncine sahip UPEC ve G. vaginalis suşlarının (UPEC için kanamisin veya spektinomisin ve G. vaginalis için streptomisin gibi) kullanılması esastır, çünkü antibiyotikler, enfeksiyonu izlemek için koloni oluşturan birimlerin (CFU) numaralandırılmasına müdahale edebilecek endojen fare mikrobiyotasının büyümesini önlemek için agar plakalarına eklenebilir. Bu özellikle idrar örneklerinin kültürlenmesi için önemlidir, çünkü fare idrarı sıklıkla antibiyotiksiz kültür plakalarında aşırı büyüyebilen diğer bakterileri içerir. Bu endojen bakterilerin fare idrarındaki kökeni bilinmemektedir, ancak muhtemelen idrar toplama sırasında toplanan periüretral ve ürogenital bakterileri yansıtmaktadır.
G. vaginalis, fakültatif bir anaerobik bakteridir ve bu nedenle, bu protokol anaerobik bir odada büyüyen G. vaginalis JCP8151BSmR'yi tanımlar. Bir anaerobik hazne mevcut değilse, anaerobik büyüme koşullarını korumak için diğer yöntemler (hava geçirmez bir kaptaki GasPak torbası gibi) kullanılabilir. Alternatif olarak, bazı G. vaginalis suşları (JCP8151BSmR dahil) standart bir doku kültürü inkübatöründe (% 5 CO2) büyüyecektir. JCP8151BSmR dışındaki G. vaginalis suşlarının kullanılması, bakterilerin bu modelde benzer şekilde davrandığından emin olmak için test yapılmasını gerektirdiği gibi, değişen büyüme koşulları, istenen canlı inokülum konsantrasyonlarını elde etmek için kültür (plakalar ve sıvı içinde) ve optik yoğunluk (OD) 600 eşdeğerleri için ideal sürelerin ampirik olarak belirlenmesini gerektirir. Ayrıca, büyüme koşullarının G. vaginalis'in patobiyolojisini etkileyip etkilemediği bilinmemektedir.
Son olarak, bu modelin kullanılıp kullanılmayacağını düşünürken, araştırmacılar grup başına tipik İYE fare modellerinden daha fazla sayıda hayvan gerektirebileceğinin farkında olmalıdır. Bu kısmen, rUTI'nin indüklenmesinin, farelerin mesanenin ilk enfeksiyonunun neden olduğu UPEC bakteriürisini çözmesini gerektirmesidir. Bu nedenle, bakteriüriyi temizleyemeyen herhangi bir fare (genellikle devam eden böbrek enfeksiyonunun göstergesi olan bir fenotip), protokolün rUTI fazına dahil edilmez. Bu çalışmalara güç vermek için gereken farelerin sayısı, idrara "kendiliğinden" UPEC ortaya çıkma oranından da etkilenir (ortalama %12-14). Son olarak, farklı fare suşları, hücre içi rezervuar oluşumuna karşı kronik bakteriüri geliştirme eğilimine sahiptir42,43. Bu modelde C57BL/6 dışındaki fare suşları kullanılıyorsa, hayvanların sessiz UPEC hücre içi rezervuarlar geliştirdiği doğrulanmalıdır.

<table><tbody><tr><td>Kateterler için</td> <td>30G x 1/2 iğne</td><td>BD</td><td>305106</td></tr><tr><td>5 1/2 "düz forsep hemostat</td><td>McKesson</td><td>487377</td><td>in yerinde mesane fiksasyonu</td></tr><tr><td>ACE 600 Sputter kaplayıcı</td><td>Leica</td><td></td><td>SEM numune işleme</td></tr><tr><td>alüminyum SEM saplaması</td><td>Ted Pella</td><td>16111</td><td>SEM numune işleme</td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür</td><td>EMS</td><td>12340</td><td>in yerinde Mesane Fiksasyonu</td></tr><tr><td>İletken Karbon Yapıştırıcı Tab&nbsp;</td><td>Ted Pella</td><td>16084-1</td><td>SEM numune işleme</td></tr><tr><td>İletken gümüş boya</td><td>Ted Pella</td><td>16034</td><td>SEM numune işleme</td></tr><tr><td>CPD 300 Kritik Nokta Kurutucu</td><td>Leica</td><td></td><td>SEM numune işleme</td></tr><tr><td>Cytofunnel metal klips</td><td>Simport</td><td>M964B</td><td>sitospuslu idrar tahlili</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>EMS</td><td>15050</td><td>SEM numune işleme</td></tr><tr><td>Glikoz ve nbsp;</td><td>NYCIII G. vaginalis büyüme ortamı</td>için <td>Sigma</td><td>G7528</td></tr><tr><td></td><td>EMS</td><td>16320</td><td>in situ mesane fiksasyonu</td></tr><tr><td>Hema 3 boyama kiti</td><td>Fisher</td><td>23123869</td><td>sitospuslu idrar tahlili</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Cellgro&nbsp;</td><td>NYCIII G. vaginalis büyüme ortamı</td>iridyum için <td>25-060-Cl</td></tr><tr><td></td><td>Ted Pella</td><td>91120</td><td>SEM numune işleme</td></tr><tr><td>izofloran</td><td></td><td></td><td>fare anestezisi</td></tr><tr><td>kanamisin</td><td>Gibco</td><td>11815024</td><td>UPEC LB seçici plakalarına (50 ug / mL)</td></tr> <tr><td>eklenir Luria-Bertani agar</td><td>BD</td><td>DF0445174</td><td>UPEC büyüme plakaları</td></tr><tr><td>Luria-Bertani et suyu</td><td>BD</td><td>DF0446173</td><td>UPEC büyüme ortamı</td></tr><tr><td>Merlin FE-SEM</td><td>Zeiss</td><td></td><td>taramalı elektron mikroskobu</td></tr><tr><td>Milli-Q Su Arıtma</td><td>Cihazı Millipore</td><td>IQ-7000</td><td>SEM numune işleme</td></tr><tr><td>NaCl&nbsp;</td><td>NYCIII G. vaginalis büyüme ortamı için</td> <td>Sigma</td><td>S3014</td></tr><tr><td>Olympus Vanox AHBT3 mikroskobu</td><td>Olympus</td><td></td><td>sitospuslu idrar tahlili</td></tr><tr><td>osmiyum tetroksit</td><td>EMS</td><td>19170</td><td>SEM numune işleme</td></tr><tr><td>paraformaldehit</td><td>EMS</td><td>15710</td><td>in situ mesane fiksasyonu</td></tr><tr><td>polietilen boru</td><td>Intramedic 427401</td><td></td><td>kateterler için</td></tr><tr><td>Proteoz Pepton #3&nbsp;</td><td>Balıkçı&nbsp;</td><td>NYCIII G. vaginalis büyüme ortamı için</td> <td>DF-122-17-4</td></tr><tr><td>PTFE kaplı çift kenarlı tıraş bıçağı</td><td>SEM için EMS</td><td>72000</td><td>kesme keseleri</td></tr><tr><td>Shandon Sitosantrifüj</td><td>Termo Bilimsel</td><td>A78300002</td><td>sitospuslu idrar tahlili</td></tr><tr><td>Shandon sitohuni filtresi</td><td>Simport</td><td>M965FWDV</td><td>sitospuslu idrar tahlili</td></tr><tr><td>Shandon Çift sitohuni</td><td>Simport</td><td>M964-1D</td><td>sitospuslu idrar tahlili</td></tr><tr><td>Shandon çift sitoslidelar (kaplamalı)</td><td>Thermo Scientific</td><td>5991055</td><td>sitospuslu idrar tahlili</td></tr><tr><td>sodyum kakodilat trihidrat</td><td>EMS</td><td>12310</td><td>in situ mesane fiksasyon</td></tr><tr><td>spektrofotometresi</td><td>BioChrom</td><td>80-3000-45</td><td>ölçümü bakteriyel OD600</td></tr><tr><td>streptomisin</td><td>Gibco</td><td>11860038</td><td>G. vaginalis</em'e ekleyin> NYCIII seçici plakalar (1 mg / mL)</td></tr> <tr><td>tüberkülin kayma uçlu şırınga</td><td>BD</td><td>309659</td><td>kateterler için</td></tr><tr><td>Maya Özü&nbsp;</td><td>NYCIII G. vaginalis büyüme ortamı için</td> <td>Fisher</td><td>DF0127-17-9</td></tr></tbody></table>

farelerde gardnerella vaginalis mesane maruziyeti tarafından tetiklenen tekrarlayan escherichia coli İdrar yolu enfeksiyonu

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

Üropatojenik Escherichia coli'nin (UPEC) neden olduğu tekrarlayan üriner sistem enfeksiyonları (rİYE) yaygın ve maliyetlidir. Erkek ve dişi farelerde İYE modellerini açıklayan önceki makaleler, idrar ve dokularda bakteriyel aşılama ve numaralandırma prosedürlerini göstermiştir. C57BL / 6 farelerde ilk mesane enfeksiyonu sırasında, UPEC, mesane epitel hücrelerinin içinde, UPEC bakteriürisinin temizlenmesini takiben devam eden gizli rezervuarlar oluşturur. Bu model, UPEC'in gizli mesane rezervuarlarının içinden ortaya çıkmasının neden olduğu rİYE'yi incelemek için bu çalışmalara dayanmaktadır. Ürogenital bakteri Gardnerella vaginalis, bu modelde rİYE'nin tetikleyicisi olarak kullanılır, çünkü kadınların ürogenital yollarında, özellikle İYE ile ilişkili vajinal dysbiosis bağlamında sıklıkla bulunur. Ek olarak, mesane dokusunun taramalı elektron mikroskobu (SEM) analizini takiben in situ mesane fiksasyonu için bir yöntem de tanımlanmıştır ve mesaneyi içeren diğer çalışmalara potansiyel olarak uygulanmaktadır.

Aşılamayı takiben, idrarda UPEC titreleri saptanabilir (Şekil 2B). İdrar örneklerinin kanamisin içeren seçici ortamlar üzerinde plakalanmaması, muhtemelen idrarı kirleten endojen fare mikrobiyotasının aşırı büyümesine neden olacaktır. UPEC bakteriüri seviyesi muhtemelen 1. günde yüksek olacaktır ve daha sonraki zaman noktalarında azalmadan önce ilk hafta boyunca artabilir (Şekil 2C). Farelerin yaklaşık% 65-80'inde idrarda 28 dpi ile saptanabilir UPEC olmayacaktır (Şekil 2C, yeşil daire). Bu fareler modelin sonraki adımlarında kullanılabilir. Bakteriyik kalan fareler (Şekil 2C, kırmızı elips) deneyden çıkarılmalıdır.
12 saat (Şekil 3A) veya 1 wk aralıkla verilen iki ardışık G. vaginalis maruziyeti (Şekil 3B), tekrarlayan bakteriüriye neden olmak için hücre içi rezervuarlardan UPEC'in ortaya çıkmasına neden olur. Hem UPEC bakteriüri seviyesi (Mann-Whitney testi) hem de UPEC rUTI (Fisher'ın kesin testi) gösteren farelerin fraksiyonu, PBS kontrol grubuna kıyasla G. vajinalise maruz kalan farelerde anlamlı derecede yüksektir. İdrar sitolojisi analizi, UPEC ortaya çıkışını gösteren G. vaginalis'e maruz kalan farelerden idrardaki PMN'leri tespit eder (Şekil 3C). 1 wk arayla verilen iki maruziyetli modelde, mesane dokusundaki UPEC titreleri, muhtemelen UPEC'in rezervuarlardan ortaya çıkması ve daha sonra temizlenmesi nedeniyle, PBS'ye kıyasla G. vajinalise maruz kalan farelerde daha düşüktür (Şekil 3D).
In situ sabit mesane dokusunun SEM ile görselleştirilmesi, sadece PBS'ye maruz kalan kontrol farelerinde mesane yüzeyini kaplayan büyük yüzeysel şemsiye ürotelyal hücreleri ortaya koymaktadır (Şekil 4A). Ürotelyal peeling, yüzeysel şemsiye hücrelerinin kaybı ile kanıtlanmıştır ve G. vaginalis'e maruz kalan farelerde daha küçük altta yatan transizyonel epitel hücrelerini ortaya çıkarmaktadır (Şekil 4B). Hücre içi rezervuarların kurulması sırasında UPEC aşılamasından erken sonra, UPEC ürotelyum üzerinde görülür ve peeling hücrelerinden filamentlenir (Şekil 4C).

<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61967/61967fig02.jpg"> Şekil 2. Faz 1 sırasında idrardaki UPEC titrelerinin izlenmesi (rezervuar oluşumu). (A) Koloni oluşturan birimlerin (CFU) kaplamasının şeması. (B) UPEC titrelerinin idrarda LB + kanamisin üzerindeki temsili görüntüsü. Siyah daireler, CFU / mL'yi hesaplamak için sayılması gereken idrar örneği lekelerini gösterir. (C) C57BL/6 farelerde UPEC bakteriürisinin zaman seyri. Her çizgi, zaman içinde UPEC idrar titrelerini izleyen ayrı bir fareyi temsil eder. Noktalı çizgi, algılama sınırını gösterir (1000 CFU/mL). Kırmızı elips, UPEC bakteriürisini çözemeyen ve bu nedenle G. vaginalis'in neden olduğu rUTI modeli için kullanılmayacak dört fareyi (20 üzerinden) gösterir. Tersine, yeşil daire UPEC bakteriürisini çözen ve sonraki aşamalara ilerleyen fareleri gösterir. (D) C. panelinde grafik oluşturmak için kullanılan veri tablosu Sarı, algılanabilir CFU; yeşil, CFU yok. (E) UPEC CFU'nun artık idrarda tespit edilmediği zaman noktasına göre farelerin maruz kalma gruplarına randomizasyonu ("Gün çözüldü"). Panel D'nin sol sütunundaki fare numaraları, panel E'de verilen fare <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61967/61967fig02large.jpg" target="_blank">numaralarıyla aynıdır.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61967/61967fig03.jpg"> Şekil 3. G. vajinalis UPEC rİYE'yi tetikler. PBS (daireler) veya G. vaginalis'e (Gvag; kareler) iki ardışık idrar yolu maruziyetini takiben idrarda UPEC titreleri, 12 saat (A) veya 1 wk (B) aralıklarla verilir. Her sembol ayrı bir fareyi temsil eder. İkinci pozlamayı takiben her fareden 1-3 d arasında tespit edilen en yüksek CFU / mL UPEC çizilir. Saptanabilir bakteriürisi olmayan fareler, tespit sınırında (noktalı çizgi) çizilir. (C) UPEC (ok uçları) ve polimorfonükleer (PMN) hücreleri (oklar) gösteren idrar sitolojisi analizi. Ölçek çubuğu = 20 μm. (D) Mesane dokularındaki UPEC titreleri, 1 wk arayla verilen iki ardışık idrar yolu maruziyetini takiben 3 d topladı. Her sembol farklı bir fareyi temsil eder ve sıfırlar algılama sınırında (noktalı çizgi) çizilir. A, B ve D'de, kutular medyan işaretli ve bıyıkları min'den maksimuma kadar bıyıklarla birinci ve üçüncü çeyrektedir&lt;. ** P &lt; 0,01; P &lt; 0.0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61967/61967fig03large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61967/61967fig04.jpg"> Şekil 4. Mesanelerin SEM analizi in situ olarak sabitlenmiştir. Mesaneler, PBS (A) veya G. vaginalis'e (C) iki maruziyetten (12 saat arayla) 3 saat sonra farelerden toplandı. Noktalı çizgiler, G. vajinalise maruz kalan mesanelerde daha küçük olan tek bir idrar epitel hücresini göstermektedir, çünkü büyük yüzeysel hücreler pul pul dökülerek altta yatan transizyonel epiteli ortaya çıkarmıştır. (B) Mesane, UPEC ile ilk aşılamadan 6 saat sonra, modelin 1. Aşaması sırasında, ürotelyal peeling ve hücre dışı UPEC gösterdi. (D) Mesane yüzeyinde bulunan çözünmez yağ damlacıkları örneği. Ölçek çubukları ana görüntülerde 20 μm ve girişte 2 μm'dir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61967/61967fig04large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Gizli hücre içi mesane rezervuarları oluşturmak için üropatojenik E. coli (UPEC) transüretral aşılamasının bir fare modeli ve tekrarlayan UPEC İYE'yi indüklemek için G. vajinalis'e mesane maruziyeti gösterilmiştir. Ayrıca bakterilerin sayımı, idrar sitolojisi ve in situ mesane fiksasyonu ve taramalı elektron mikroskobu için işlenmesi de gösterilmiştir.

Farelerde Gardnerella vaginalis Mesane Maruziyeti Tarafından Tetiklenen Tekrarlayan Escherichia coli İdrar Yolu Enfeksiyonu

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of ...

Tekrarlayan idrar yolu enfeksiyonları ciddi bir sağlık sorunudur. Bu protokol, ürogenital bakterilere kısa süreli maruz kalmanın mesaneye nasıl zarar verdiğini ve E.Coli tekrarlayan İYE'yi nasıl tetiklediğini anlamamıza yardımcı olacaktır. Bu modelin bir avantajı, mesane pul pul dökülme ve tekrarlayan İYE'nin, tekrarlayan İYE yaşayan kadınlarda sıklıkla bol miktarda bulunan ürogenital bakteri Gardnerella vaginalis tarafından tetiklenmesidir.G.vaginalis türünü eksi 80 santigrat derece dondurucu stoğundan anaerobik bir odaya çevirerek başlayın. Bakterileri antibiyotik kullanmadan bir NYCIII plakasına sürün. Plakayı anaerobik olarak 37 santigrat derecede 24 saat inkübe edin.Anaerobik odada, beş mililitre anaerobik NYCIII ortamını NYCIII plakasından hücrelerle dolu bir mikrolitrelik bir döngü ile aşılayın ve kültürü anaerobik koşullar altında 18 saat boyunca 37 Santigrat derecede statik olarak inkübe edin. Büyüme ortamına antibiyotik dahil etmeyin. Bir spektrofotometre kullanarak kültürün OD600'ünü belirleyin.Ardından, bir dakika boyunca 9.600 kez G'de santrifüjleyin ve ortamı aspire edin. PBS'deki bakteri peletini istenen konsantrasyona yeniden süspanse edin ve aşıyı seri olarak seyreltin ve plakalayın. Ekli bir filtreye sahip bir sitohuni kasetindeki 90 mikrolitre PBS'ye 10 mikrolitre idrar ekleyin.Kasetleri bir slaytla sitosantrifüje yerleştirin ve yüksek ivme ile altı dakika boyunca 600 ila 800 kez G'de döndürün. Slaytları çıkardıktan ve gece boyunca kurumaya bıraktıktan sonra, slaytları bir hematoloji boyama kiti ile boyayın ve PMN'lerin ve epitel hücrelerinin varlığı için ışık mikroskobu ile analiz edin. Fiksatif ile tüberkülin kayar uçlu şırınga bir kez, şırınga işaretlerinin karşısına bakacak şekilde ucuna bir kateter yapıştırın.İğne ucunu açığa çıkarmamaya dikkat ederek fazla boruyu iğnenin ucundan bir ila iki milimetre koparın. Kabarcıkları çıkarmak için şırıngayı hafifçe vurun ve pistonu havayı boşaltmak için itin. Daha sonra kateteri bir mikrosantrifüj tüpü üzerinden fiksatif ile doldurun Fareyi uyuşturduktan ve kurban ettikten sonra, bacaklar sabitlendikten sonra, mesaneyi ortaya çıkarmak için farenin pelvik bölgesini forseps ve bir çift cerrahi makasla açın.Bitişik yağı dikkatlice bir kenara itin, ancak mesaneyi yerinde bırakın. Şırıngayı, iğne aşağı bakacak şekilde baskın elinizle tutun. Kateter ucunu steril kayganlaştırıcıya batırın ve şırınga namlusunu fare gövdesi üzerinde 30 ila 45 derecelik bir açıyla tutarak kateter ucunu üretral açıklığa yerleştirin.Saat yönünde hafif bir hareketle aşağı doğru basınç uygulayın ve kateteri yavaşça üretraya yerleştirin Kateter ucu girerken, şırınga namlusu çalışma yüzeyine paralel olana kadar kateteri üretraya daha fazla kaydırmaya devam ederken şırıngayı farenin kuyruğuna doğru çevirin. Kateter iğne milinin tamamı fareye girmeli ve kateter ucunu mesane lümeni içinde konumlandırmalıdır. Yavaşça 50 ila 80 mikrolitre sabitleyici verin ve mesanenin bir balon gibi şişmesine neden olun.Kateteri yerinde tutun ve şırıngayı hafifçe kaldırın, ucunu yukarı doğru eğin. Diğer elinizle bir hemostat açın ve üretranın kesişme noktasında kateter iğnesinin altına bir uç kaydırın. Kanama durdurucuyu sadece iğne ile temas edene kadar kısmen kapatın.Fiksatif kaybını önlemek için kanama durdurucuyu tamamen sıkıştırıp kilitlerken aynı anda kateter iğnesini mesaneden dışarı kaydırın. Kanama durdurucuyu, mesane üstte dururken çalışma yüzeyine paralel olacak şekilde kavrayın. Hemostat hala takılıyken mesaneyi çıkarmak için hemostatın altından nazikçe ve dikkatlice kesin ve kaldırın.Mesaneyi ve bağlı hemostatı ısıtılmış fiksatif içeren bir Falcon tüpüne yerleştirin. Mesanenin sıvıya tamamen batırıldığından ve tüpün duvarlarına bastırılmadığından emin olun. Elektron mikroskobu ile mesaneyi görüntülemek için, temiz, çift taraflı bir tıraş bıçağı veya neşter ile sagittal olarak ikiye bölün ve mesaneyi serbest bırakmak için kanama durdurucuya teğet ikinci bir kesi yapın.Bu, iki yarım mesane kabı ile sonuçlanır. Mesanenin dışında kalan yağ yastıkçıkları varsa, bunları nazikçe çıkarın. Mesane yarısını sodyum kakodilat tamponunda üç kez durulayın.Dokuyu oda sıcaklığında bir saat boyunca 0.15 molar kakodilat tamponunda% 1 osmiyum tetroksit ile boyayın. Karanlık bir ortamı korumak için bu adımı folyoya sarılmış boyama kabı ile gerçekleştirin. Boyamadan sonra, mesane yarısını ultra saf suda üç kez durulayın.Suyun yüzeyinde osmikasyonlu yağ görülürse, kurutma adımları sırasında kirlenmeyi önlemek için aspire edin veya fitilleyin. Dokuyu kuruttuktan sonra, toplam dört parça oluşturmak için mesane yarısını temiz, çift taraflı bir tıraş bıçağıyla karıştırın. Aşılamayı takiben, idrarda UPEC titreleri tespit edilebilir.UPEC bakteriüri seviyesi birinci gün yüksektir ve daha sonraki zaman noktalarında azalmadan önce ilk hafta boyunca artabilir. Farelerin yaklaşık% 65 ila 80'inde aşılamadan 28 gün sonra idrarda saptanabilir bir UPEC olmayacaktır. Bu fareler, modelin sonraki adımlarında kullanılabilir.Bakteriürik kalan fareler deneyden çıkarılmalıdır. 12 saat veya bir hafta arayla verilen iki ardışık G. vaginalis maruziyeti, tekrarlayan bakteriüriye neden olmak için hücre içi rezervuarlardan UPEC'in ortaya çıkmasına neden olur. İdrar sitolojisi analizi, UPEC ortaya çıkışı gösteren G. Vaginalis'e maruz kalan farelerden alınan idrardaki polimorfonükleer hücreleri tespit etmek için kullanılabilir.Bir hafta arayla iki maruziyetin verildiği modelde, mesane dokusundaki UPEC titreleri, muhtemelen UPEC'in rezervuarlardan çıkması ve müteakip klerens nedeniyle G. vaginalis'e maruz kalan farelerde PBS'ye kıyasla daha düşüktür. SEM ile in situ sabit mesane dokusunun görselleştirilmesi, sadece PBS'ye maruz kalan kontrol farelerinde mesane yüzeyini kaplayan büyük, yüzeysel şemsiye ürotelyal hücreleri ortaya çıkarır. Ürotelyal pul pul dökülme, yüzeysel şemsiye hücrelerinin kaybı ile kanıtlanır ve G.vaginalis'e maruz kalan farelerde altta yatan daha küçük geçiş epitelini ortaya çıkarır.UPEC aşılamasından hemen sonra, hücre içi rezervuarların kurulması sırasında, ürotelyum üzerinde bakteri hücreleri görülebilir ve pul pul dökülen hücrelerden filamentlenir. Burada açıklanan yöntemler, ek Gardnerella suşlarının veya diğer ürogenital türlerin E.coli rUTI üzerindeki etkisini araştırmak için gelecekteki çalışmaların önünü açmaktadır.

recurrent-escherichia-coli-urinary-tract-infection-triggered

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video transüretral fare idrar yolu enfeksiyonlarına neden ve enfeksiyonların sonucunda dereceye ölçmek için yöntemler gösterecektir.

Transüretral İndüksiyon Fare İdrar Yolu Enfeksiyonu

Kaynak: O'Brien, V. P. ve diğerleri, Tekrarlayan Escherichia coli Idrar Yolu Enfeksiyonu Gardnerella vaginalis mesane maruziyeti tarafından fare içinde tetikleniyor. J. Vis. Exp. (2020)Bu video, önceden enfekte edilmiş bir fare modelinin mesane epitelinde bakteri kolonizasyonu ve konak-patojen etkileşimlerini görselleştirmek için taramalı elektron mikroskopisi kullanımını göstermektedir.

Bakteriyel Enfeksiyonun Görselleştirilmesi İçin Fare Mesanesi Dokusu Hazırlanması

Kaynak: O'Brien, Başkan Yardımcısı ve diğerleri. Gardnerella vaginalis mesane maruziyeti ile tetiklenen tekrarlayan Escherichia coli idrar yolu enfeksiyonu, farelerde ortaya çıkmıştır. J. Vis. Exp. (2020)Bu video, tekrarlayan idrar yolu enfeksiyonu için fare modeli oluşturmak için Gardnerella vaginalis inokulumunun hazırlanmasını göstermektedir.

Farelerde Tekrarlayan İdrar Yolu Enfeksiyonlarını Modellemek İçin Gardnerella vaginalis Inoculumun Hazırlanması

Kaynak: Conover, M. S. ve diğerleri, J. Fare Modelinde İYİS ve KAUTI'nin Kuruluşu ve Karakterizasyonu. J. Vis. Exp. (2015)Bu video, dişi bir farede transüretral kateter montajı ve implantasyonunu, ardından kateterle ilişkili idrar yolu enfeksiyonunu belirlemek ve biyofilm aracılı konak-patojen etkileşimlerini araştırmak için bakteriyel aşılama prosedürünü göstermektedir.

Fare modelinde kateterle ilişkili idrar yolu enfeksiyonu

Kaynak: Conover, M. S. ve ark., Fare Modelinde İYİS ve CAUTI'nin Kuruluşu ve Karakterizasyonu. J. Vis. Exp. (2015)Bu video, β-galaktosidaz eksprese eden Escherichia coli ile enfekte olan fare mesane dokusunda hücre içi bakteri topluluklarının (IBC) tespit edilmesini göstermektedir. Doku fiksasyonu, permeabilizasyon ve X-gal ile boyama sonrası, IBC'ler diseksiyon mikroskopu altında mavi nokta olarak görülür ve idrar yolu enfeksiyonu sırasında bakteriyel invaziyanı doğrular.

Enfekte Bir Fare Mesanesindeki Hücre İçi Bakteri Topluluklarının Görselleştirilmesi

Bu videoda, farelerde idrar yolu enfeksiyonu modeli oluşturmak için üropatojenik bakterilerin intravezikal uygulama tekniğini açıklıyoruz. Bu model, üropatojenik bakteriyel enfeksiyonun üriner sistem içindeki yayılımını ve İYE duyarlılığını belirleyen mekanizmaları anlamak için kullanılabilir.

İdrar Yolu Enfeksiyonu Modelinin Oluşturulması: İdrar Yolu Enfeksiyonu Modeli Geliştirmek İçin Farede Üropatojenik Bakterilerin Uygulanması İçin Bir Teknik

Bu video, transüretral kateter damlatma yoluyla bir dişi fare mesanesinde üropatojenik Escherichia coli enfeksiyonunun oluşumunu göstermektedir. Enjekte edilen bakteriler, mesane içinde başarılı bir idrar yolu enfeksiyonu oluşturur ve idrar yolu ile ilgili sağlıkla ilişkili hastalıkları incelemek için değerli bir platform sağlar.

Erkek Farelerde İdrar Yolu Enfeksiyonu Modeli Oluşturmak için Transüretral Kateterizasyon ve Bakteriyel Aşılama

Dişi Farelerde İdrar Yolu Enfeksiyonu Modelinin Oluşturulması

Üriner sistem enfeksiyonlarını (İYE) modelleme yeteneği, bakteriyel patogenezi anlayabilmek ve yeni terapötiklerin geliştirilmesini sağlayabilmek için çok önemlidir. Bu çalışmanın amacı, insanlarda görülen bulguları özetleyen ve tahmin eden deneysel İYE ve kateterle ilişkili İYE'nin fare modellerini göstermektir.

Fare Modelinde Kuruluş ve İYE ve CAUTI Karakterizasyonu

Farelerin transüretral Kateterizasyon kurulan modeli mesane patolojiler, idrar yolu enfeksiyonu, dahil olmak üzere çalışma sağlar ancak yalnızca dişi içinde gerçekleştirilebilir. Burada anlatılan erkek transüretral korumak yeni bir model araştırma cinsiyetler arasında güçlü klinik ve epidemiyolojik farklarına iaretlenmi bir alanı sağlayacaktır.

İdrar yolu enfeksiyonu küçük bir hayvan modeli: erkek ve dişi farelerin transüretral Kateterizasyon

Erken doğum (37 haftadan &lt; doğum), optimal olmayan önleme ve tedavi seçenekleriyle acil bir küresel sağlık sorunudur. Artan vajinal bakteriyel enfeksiyon kaynaklı erken doğumun bir fare modelini sunuyoruz ve ortaya çıkan yenidoğan morbidite ve mortalitesinin nasıl analiz edileceğini özetliyoruz.

Farelerde Yükselen Vajinal Enfeksiyon, Erken Doğum ve Yenidoğan Morbiditesinin Modellenmesi

Öğrenin farelerde Gardnerella vaginalis maruziyetinin Escherichia coli kaynaklı tekrarlayan idrar yolu enfeksiyonlarını nasıl tetiklediğini. Bu model, mesane rezervuarlarından bakteri çıkışını ve enfeksiyon mekanizmalarını araştırmaya yardımcı olur.

Farelerde Gardnerella vaginalis Mesane Maruziyeti Tarafından Tetiklenen Tekrarlayan Escherichia coli İdrar Yolu Enfeksiyonu

Daha fazla video keşfet