Name: Fare Hindlimb Lazer Doppler Perfüzyon Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 45 s
Description: Öğrenin fare arka bacak kan akışını Lazer Doppler Perfüzyon Görüntüleme ile ölçme yöntemini. Bu teknik, mikrosirkülasyon değerlendirmesi ve yara iyileşmesi araştırmalarında kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma VA Puget Ses Sağlık Merkezi'ndeki tesis ve kaynakların kullanımı ile gerçekleştirilmiştir. Çalışma yazarın eseridir ve Gazi İşleri Bakanlığı'nın veya Abd hükümetinin konumunu veya politikasını yansıtmak zorunda değildir. Dr Tang şu anda VA (Merit 5 I01 BX004975-02) aracılığıyla finanse ediliyor.

Hayvan deneyleri, Washington Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanan bir protokole göre gerçekleştirildi.
1. Tarayıcı hazırlığı
<ol><li>Taranan nesneye olan mesafe yaklaşık 30 cm olacak şekilde tarayıcı yüksekliğini ayarlayın.</li>
	<li>Görüntüleyiciyi açın ve ilişkili yazılımı başlatın.</li>
	<li>Ölçüm programını açın. Yazılım tarayıcıyla doğru iletişim kuruyorsa, kızılötesi lazer açma uyarısı görünecektir.</li>
	<li>Makineyi üretici tarafından sağlanan standartlarla kalibre edin (videoda gösterilmez ve kullanılan belirli makine modeline bağlı olacaktır).</li>
	<li>Tarayıcı ayarlarını, odadaki arka plan malzemesi ve aydınlatma kurulumuna uygun olacak şekilde ayarlayın.<ol>
<li>Kazanç düzeylerini ayarlayın DC FLUX ve CONC, üreticinin talimatlarına göre (videoda gösterilmez).</li>
		<li>Lazer ışınını siyah arka plan malzemesine doğrultarak Arka Plan Eşiğini ayarlayın ve Otomatik BK Kümesi 'nebasın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Fare ön tarama hazırlığı
<ol><li>Atık gazın uygun şekilde atılması ile izofluran indüksiyon odasını kurun. NOT: İndüksiyon odasını bir ısıtma yastığına yerleştirmek, anestezi indüksiyonu sırasında fare sıcaklık kaybını önlemeye yardımcı olacaktır.</li>
	<li>Tarama alanına nonreflektif bir yüzeyin altına yerleştirilen homeotermik battaniyeyi açın (bu durumda siyah bir neopren kumaş). Homeotermik battaniyeyi 37 °C vücut sıcaklığını koruyacak şekilde ayarlayın.</li>
	<li>Homeotermik battaniye ve yağlayıcı için sıcaklık probunu yerleştirmeye hazır olacak şekilde konumlandırın.</li>
	<li>Anestezi maskesini ve çöp atma sistemini tarama alanına yerleştirin.</li>
	<li>Fareyi bir izofluran buharlaştırıcı ile uyuşturun. Oksijen oranını 1 L/dk akışa ayarlayın ve anestezi indüksiyonu için izoflurane%4 olarak ayarlayın. Anestezi indüksiyon odasına akışı açın ve fare solunum hızı yavaşlar. Fare sağ refleksini kaybettiğinde yeterli anestezi elde edilir.</li>
	<li>Fareyi ekli atık gaz leş yiyici ile anestezik bir maskeye / burun konisine aktarın ve izofluranları% 1,5'e ayarlayın. NOT: Bu anestezi seviyesi genellikle tarama sırasında fareyi nispeten hareketsiz tutmak için yeterlidir, ancak cerrahi anestezi seviyeleri sağlamak için tasarlanmamıştır, bu nedenle anestezi derinliği kontrol edilir. İzofluran seviyesinin değiştirilmesi kalp atışı, solunum ve dermal perfüzyonda değişikliklere neden olur, bu nedenle herhangi bir zaman deneyi boyunca ve tüm deneysel denekler için tutarlı bir yüzde kullanılmalıdır. Ketamin ksilazinin IP enjeksiyonu gibi alternatif anestezi teknikleri de kullanılabilir, ancak farklı anestezikler dermal perfüzyonu farklı etkilediği için her zaman ders çalışması boyunca aynı anestezi tekniği kullanılmalıdır.</li>
	<li>(Tarama alanına bağlı olarak isteğe bağlıdır) Taranması planlanan ilgi alanı kürkle kaplıysa, saçı ilgi çekici bölgeden çıkarmak için küçük bir elektrikli düzeltici veya tüy döken krem kullanın. NOT: Depilatory krem tamamen çıkarılmalı ve fare derisi taramadan önce kurutulmalıdır.</li>
	<li>Fareyi homeotermik battaniyeyi kaplayan siyah nonreflektif yüzeye uygun tarama konumuna getirin ve her iki arka ucun da denge ve tarama boyunca ısı kaynağında kaldığını onaylayın (Şekil 1). NOT: Sıcaklıktaki bölgesel değişimi önlemek için her iki ayağın da homeotermik battaniye üzerinde tutulması önemlidir.</li>
	<li>Homeotermik battaniye ile ilişkili yağlanmış rektal sıcaklık probsunu yerleştirin.</li>
	<li>Fare sıcaklığını istenen tarama sıcaklığına (37 °C) dengelayın; yaklaşık 5-10 dakika.</li>
	<li>Üst menüden veya tarayıcı kurulum simgesinden erişilebilen Tarayıcı Kurulumu'nu seçin. X-Y koordinatlarını ilgi çekici bölgeye uyacak şekilde değiştirerek tarama alanını ayarlayın. Tarama hızı tarama çözünürlüğüne bağlı olacaktır. Daha yüksek çözünürlük, daha uzun tarama süreleri sağlar. Anatomik perfüzyona odaklanan daha yüksek çözünürlüğün aksine, küresel perfüzyona odaklanan tekrar tarama için 4 ms/ piksel tarama hızı yeterlidir. NOT: Araştırmacı gelişmekte olan kollateral dolaşımı doğrudan incelemeye çalışıyorsa (en iyi şekilde cilde daha yakın olduğu ventral uyluk ve baldırda en iyi şekilde görüntülenmiştir) daha yüksek çözünürlük ve tek tarama düşünülmelidir. Fare ayak takımının uç organına küresel perfüzyonu değerlendirirken daha düşük çözünürlükte/hızda (örneğin, 4 ms/piksel) tekrarlanan tarama yeterlidir. Videoda gösterilen yazılım, yeniden başlatıldığında tarama alanı, hız ve çözünürlük için daha önce kullanılan şablonu otomatik olarak yükler veya çeşitli denemeler için farklı ilgi alanları kullanılıyorsa depolanan bir dosyadan alınabilir.</li>
	<li>Yineleme taramaları yapıyorsanız, Yineleme ve Satır Taraması sekmesini seçin. Tarama sayısı (bu durumda 3 tarama) ve yineleme aralığı değiştirilebilir. Yineleme aralığı için en az süre, tarama alanı ve tarama çözünürlüğü ile belirlenen kutunun sağındaki gri alan içinde gösterilen tahmini tarama süresi olacaktır. Birkaç saniye eklemek, kullanıcının taramalar arasında gerekirse fareyi duraklatmasını ve yeniden konumlandırmasını sağlar.</li>
</ol>3. Tarama
<ol><li>Görüntü Taraması sekmesini seçin ve İşaretle düğmesini seçin. Lazer tarama alanının ana hatlarını belirlemek için hareket edecek. Taranacak hedef işaretli alan içinde olacak şekilde fare konumunu ayarlayın. NOT: Ayak takımı veya ayak takımı ve baldır taraması için, uzatılmış arkalıklarla eğilimli konumlandırma, supine konumlandırmaya göre daha tutarlı bir ilgi alanı sağlar. Uyluk atardamarı ve saphenöz arter ve kollateraller uyluk ve baldırın ventral yüzeyine çok yakındır, bu nedenle bu ilgi alanları kullanılarak supine konumlandırma tercih edilir.</li>
	<li>Taramayı Yinele simgesini seçerek tekrarlanan ölçümü başlatın ve taramayı başlatmak için Oynat Düğmesine basın.</li>
	<li>Açılır pencerede tarama mesafesini onaylayın ve taramaya başlamak için Tamam'ı tıklatın.</li>
	<li>Fare hareketini tarama sırasında fareyi izleyin; fare, arka ayakların artık taramanın ortasındaki tarama bölgesinde olmayacak kadar hareket ederse, taramayı yeniden başlatın. Fare engel teşkil eden konumdaki küçük varyasyonlar analiz yazılımında bulunabilir.</li>
	<li>Homeotermik battaniyenin kullanımıyla bile dalgalaşabileceğinden, tarama işlemi sırasında fare sıcaklığını izleyin. Fare sıcaklığında çok fazla değişiklik varsa, bu taramalar arasında önemli bir değişime neden olabilir. Genellikle, 36.8-37.2 ° C sıcaklık aralığı kabul edilebilir verilerle sonuçlanacaktır.</li>
	<li>Yakalanan taramayı, daha kolay veri çözümlemesi için fare tanımlayıcısı ve zaman noktası içeren bir dosya adıyla Farklı Kaydet penceresinin altına kaydedin. Konu ayrıntıları penceresinde istenirse fare ve zaman noktası ayrıntılarını girin.</li>
	<li>Izoflurane'yi kapatın ve rektal sıcaklık probunu çıkarın.</li>
	<li>Rektal sıcaklık probını% 70 etanol ile dezenfekte edin, böylece bir sonraki farede kullanıma hazırdır.</li>
	<li>Farenin anesteziden kafese dönmeden önce supine konumundan eğilimli konuma dönerek sağa doğru refleks gösterdiği noktaya kadar iyileşmesine izin verin. NOT: İyileşme çok hızlı olduğundan, iyileşme izofluran için bir ısıtma battaniyesi üzerinde veya ketamin / kslazin için ısıtılmış bir iyileşme kafesinde gerçekleştirilebilir.</li>
</ol>4. LDPI verilerinin yakalanması (Şekil 3)
<ol><li>Görüntüleme gözden geçirme yazılım programını açın.</li>
	<li>Dosya menüsüne gidin, dosyayı açın ve kaydedilen dosyayı bulun.</li>
	<li>Araç çubuğundan yatırım getirisi simgesini seçin.</li>
	<li>Çokgen Ekle düğmesini seçin.</li>
	<li>Fareyi kullanarak denetim arka ayakları için ilgi çekici bölgeyi (ROI) izleme. Gri arka plan hesaplanan ortalamalara dahil edilmeyeceğinden çokgen izlemenin tam olması gerekmez.</li>
	<li>Cerrahi hindlimb için 4.3-4.5 adımlarını tekrarlayın.</li>
	<li>Görüntü ROIs İstatistik Sonuçları (PU) penceresini açmak için İstatistikler simgesini seçin.</li>
	<li>Polygon 1 (control hindlimb) ve Polygon 2 (cerrahi hindlimb) sonuçlarını kopyala/yapıştır yoluyla veri toplama çalışma sayfasına dışa aktar.</li>
</ol>5. Analiz
<ol><li>Her tarama için verileri Cerrahi/Kontrol oranı olarak yakalayın.</li>
	<li>Bu zaman noktasında belirli bir farenin veri noktası için üç tarama için de ortalama cerrahi/kontrol kullanın. Hindlimb iskemisine yanıtta biyolojik değişkenlik nedeniyle, genel olarak ~ % 10 standart hata ile tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için zaman noktası başına 8-10 fare gereklidir. NOT: Farenin anesteziden iyileşmesine izin vermeden önce, verilerin çok değişken olup olmadığını kontrol etmek için tekrarlanan taramaların hızlı bir analizini yapmak faydalı olacaktır (örneğin, taramalar 1-3 arasında farklı 100-150'den fazla perfüzyon ünitesi). Tekrarlanan taramalar arasındaki yüksek değişim, farenin tarama sırasında tamamen dengelenmediğini göstermektedir (Şekil 2) ve görüntüler daha sonraki bir tarihe kadar analiz edilmezse ortaya çıkabilecek bir veri noktasını kaybetmeden tekrarlanan bir tarama yapılabilir. Görüntülenen akı değerlerinin dinamik aralığını en iyi duruma getirmek için renk paletini değiştirmek, tarama varyasyonlarını daha iyi görüntülemek için gerekli olabilir (Şekil 2).</li>
</ol>

<ol><li>Varma, P., Stineman, M. G., Dillingham, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+limb+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Medicine+and+Rehabilitation+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of limb loss.</a> Physical Medicine and Rehabilitation Clinics of North America. 25 (1), 1-8 (2014).</li>
<li>Farber, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+Limb-Threatening+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chronic Limb-Threatening Ischemia.</a> New England Journal of Medicine. 379 (2), 171-180 (2018).</li>
<li>Abularrage, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+microcirculation+in+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the microcirculation in vascular disease.</a> Journal of Vascular Surgery. 42 (3), 574-581 (2005).</li>
<li>Houben, A., Martens, R. J. H., Stehouwer, C. D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+Microvascular+Function+in+Humans+from+a+Chronic+Disease+Perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Assessing Microvascular Function in Humans from a Chronic Disease Perspective.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (12), 3461-3472 (2017).</li>
<li>Mahe, G., Humeau-Heurtier, A., Durand, S., Leftheriotis, G., Abraham, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+skin+microvascular+function+and+dysfunction+with+laser+speckle+contrast+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%3A+Cardiovascular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Assessment of skin microvascular function and dysfunction with laser speckle contrast imaging.</a> Circulation: Cardiovascular Imaging. 5 (1), 155-163 (2012).</li>
<li>Murray, A. K., Herrick, A. L., King, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+Doppler+imaging%3A+a+developing+technique+for+application+in+the+rheumatic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology+%28Oxford%29%22%5BJournal%5D)">Laser Doppler imaging: a developing technique for application in the rheumatic diseases.</a> Rheumatology (Oxford). 43 (10), 1210-1218 (2004).</li>
<li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeatability%2C+reproducibility+and+standardisation+of+a+laser+Doppler+imaging+technique+for+the+evaluation+of+normal+mouse+hindlimb+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Repeatability, reproducibility and standardisation of a laser Doppler imaging technique for the evaluation of normal mouse hindlimb perfusion.</a> Sensors (Basel). 13 (1), 500-515 (2012).</li>
<li>Sonmez, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+laser-Doppler+flowmetry+assisted+murine+model+of+acute+hindlimb+ischemia-reperfusion+for+free+flap+research%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A novel laser-Doppler flowmetry assisted murine model of acute hindlimb ischemia-reperfusion for free flap research.</a> PLoS One. 8 (6), 66498(2013).</li>
<li>Gargiulo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+some+anesthetic+agents+on+skin+microcirculation+evaluated+by+laser+Doppler+perfusion+imaging+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of some anesthetic agents on skin microcirculation evaluated by laser Doppler perfusion imaging in mice.</a> BMC Veterinary Research. 9, 255(2013).</li>
<li>Ankri-Eliahoo, G., Weitz, K., Cox, T. C., Tang, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p27%28kip1%29+Knockout+enhances+collateralization+in+response+to+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">p27(kip1) Knockout enhances collateralization in response to hindlimb ischemia.</a> Journal of Vascular Surgery. 63 (5), 1351-1359 (2016).</li>
<li>McEnaney, R. M., Shukla, A., Madigan, M. C., Sachdev, U., Tzeng, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P2Y2+nucleotide+receptor+mediates+arteriogenesis+in+a+murine+model+of+hind+limb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">P2Y2 nucleotide receptor mediates arteriogenesis in a murine model of hind limb ischemia.</a> Journal of Vascular Surgery. 63 (1), 216-225 (2016).</li>
<li>Padgett, M. E., McCord, T. J., McClung, J. M., Kontos, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+Acute+and+Subacute+Murine+Hindlimb+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia.</a> Journal of Visualized Experiments. (112), e54166(2016).</li>
<li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M. D., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine model of hindlimb ischemia.</a> Journal of Visualized Experiments. (23), e1035(2009).</li>
<li>Chalothorn, D., Faber, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-dependent+variation+in+collateral+circulatory+function+in+mouse+hindlimb%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Genomics%22%5BJournal%5D)">Strain-dependent variation in collateral circulatory function in mouse hindlimb.</a> Physiological Genomics. 42 (3), 469-479 (2010).</li>
<li>Helisch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+mouse+strain+differences+in+innate+hindlimb+collateral+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Impact of mouse strain differences in innate hindlimb collateral vasculature.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 26 (3), 520-526 (2006).</li>
<li>Faber, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+causes+collateral+rarefaction+and+increased+severity+of+ischemic+injury+in+multiple+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Aging causes collateral rarefaction and increased severity of ischemic injury in multiple tissues.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 31 (8), 1748-1756 (2011).</li>
<li>Forrester, K. R., Stewart, C., Tulip, J., Leonard, C., Bray, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+laser+speckle+and+laser+Doppler+perfusion+imaging%3A+measurement+in+human+skin+and+rabbit+articular+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+%26+Biological+Engineering+%26+Computing%22%5BJournal%5D)">Comparison of laser speckle and laser Doppler perfusion imaging: measurement in human skin and rabbit articular tissue.</a> Medical & Biological Engineering & Computing. 40 (6), 687-697 (2002).</li>
<li>Briers, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+Doppler%2C+speckle+and+related+techniques+for+blood+perfusion+mapping+and+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Measurement%22%5BJournal%5D)">Laser Doppler, speckle and related techniques for blood perfusion mapping and imaging.</a> Physiological Measurement. 22 (4), 35-66 (2001).</li>
<li>Heeman, W., Steenbergen, W., van Dam, G., Boerma, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+applications+of+laser+speckle+contrast+imaging%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Clinical applications of laser speckle contrast imaging: a review.</a> Journal of Biomedical Optics. 24 (8), 1-11 (2019).</li>
<li>Nguyen, T., Davidson, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrast+Enhanced+Ultrasound+Perfusion+Imaging+in+Skeletal+Muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Contrast Enhanced Ultrasound Perfusion Imaging in Skeletal Muscle.</a> Journal of Cardiovascular Imaging. 27 (3), 163-177 (2019).</li>
<li>Zaccagnini, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+Resonance+Imaging+Allows+the+Evaluation+of+Tissue+Damage+and+Regeneration+in+a+Mouse+Model+of+Critical+Limb+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Magnetic Resonance Imaging Allows the Evaluation of Tissue Damage and Regeneration in a Mouse Model of Critical Limb Ischemia.</a> PLoS One. 10 (11), 0142111(2015).</li>
<li>Penuelas, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+as+a+measurement+of+hindlimb+perfusion+in+a+mouse+model+of+peripheral+artery+occlusive+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">PET as a measurement of hindlimb perfusion in a mouse model of peripheral artery occlusive disease.</a> Journal of Nuclear Medicine. 48 (13), 1216-1223 (2007).</li>
<li>Jia, Y., Qin, J., Zhi, Z., Wang, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrahigh+sensitive+optical+microangiography+reveals+depth-resolved+microcirculation+and+its+longitudinal+response+to+prolonged+ischemic+event+within+skeletal+muscles+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Ultrahigh sensitive optical microangiography reveals depth-resolved microcirculation and its longitudinal response to prolonged ischemic event within skeletal muscles in mice.</a> Journal of Biomedical Optics. 16 (8), 086004(2011).</li>
<li>Turaihi, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+Intravital+Microscopy+and+Contrast-enhanced+Ultrasonography+of+the+Mouse+Hindlimb+to+Study+Insulin-induced+Vasodilation+and+Muscle+Perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e54912(2017).</li>
<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+autophagy+alleviates+injury+during+hindlimb+ischemia%2Freperfusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic+Medicine%22%5BJournal%5D)">Enhanced autophagy alleviates injury during hindlimb ischemia/reperfusion in mice.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 18 (3), 1669-1676 (2019).</li>
<li>Liu, D. L., Svanberg, K., Wang, I., Andersson-Engels, S., Svanberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+Doppler+perfusion+imaging%3A+new+technique+for+determination+of+perfusion+and+reperfusion+of+splanchnic+organs+and+tumor+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+Surgery+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Laser Doppler perfusion imaging: new technique for determination of perfusion and reperfusion of splanchnic organs and tumor tissue.</a> Lasers in Surgery and Medicine. 20 (4), 473-479 (1997).</li>
<li>Jing, Y., Bai, F., Chen, H., Dong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Laser+Doppler+Imaging+and+Monitoring+to+Analyze+Spinal+Cord+Microcirculation+in+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Using Laser Doppler Imaging and Monitoring to Analyze Spinal Cord Microcirculation in Rat.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e56243(2018).</li>
<li>Zhang, D., Li, S., Wang, S., Ma, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+evaluation+of+the+effect+of+a+gastric+ischemia-reperfusion+model+with+laser+Doppler+blood+perfusion+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+Medical+Science%22%5BJournal%5D)">An evaluation of the effect of a gastric ischemia-reperfusion model with laser Doppler blood perfusion imaging.</a> Lasers in Medical Science. 21 (4), 224-228 (2006).</li>
<li>Fitzal, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulatory+changes+after+prolonged+ischemia+in+the+epigastric+flap%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Reconstructive+Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Circulatory changes after prolonged ischemia in the epigastric flap.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 17 (7), 535-543 (2001).</li>
</ol>

Dr. Tang'ın açıklayacak bir çıkar çatışması yok.

LDPI ile güvenilir sonuçlar elde etmek için tutarlı teknik kritik öneme sahiptir. Tüm zaman dilimi boyunca aynı anestezi, sıcaklık ayarları, fare konumu ve ilgi alanı kullanılmalıdır. Farklı anestezik ajanlar daha yüksek veya daha düşük perfüzyon değerlerine neden olur9. Isofluran anestezisi, hızlı başlaması ve ortaya çıkmasının yanı sıra genel güvenliği nedeniyle uygundur. Bu vazodilatör ajan ile anestezi derinliği olarak tutarlı bir izofluran yüzdesi deri perfüzyonunu değiştirebilir. İlgi çekici...

Yetersiz yara iyileşmesi ile cilt ülserasyon, insan hastalarda amputasyonların önde gelen bir nedenidir1. Yeterli yara iyileşmesi, periferik arteriyel hastalığı olan hastalarda tehlikeye giren sağlam cildi korumak için gerekenden daha yüksek arteriyel perfüzyon gerektirir2,3,4. Diğer birkaç romatolojik durum ve diyabet de yaraları iyileştirmek için rahatsız ve yetersiz cilt mikroserkülasyonuna yol açabilir5,6. Birçok diyabetik hastada eşlik eden periferik arteriyel hastalık vardır ve bu da onları özellikle amputasyon riskiyle karşı karşıya bırakarak. Lazer Doppler perfüzyon görüntüleme (LDPI), klinik durumlarda cilt mikrosirkülasyonunu değerlendirmek için ve deneysel hindlimb iskemi, iskemi-reperfüzyon ve mikrocerrahi kapaklar7'densonra kan akışını ve kan akışı iyileşmesini değerlendirmek için araştırma durumlarında kullanılır.
LDPI sistemi, ilgi çekici bir bölge üzerinde hareket etmek için bir tarama aynası tarafından saptırılan düşük güçlü bir lazer ışını yansıtır. Bu, akış dektiyometrisiprobu 8ile doğrudan temas halinde olan küçük doku alanı için perfüzyon ölçümü sağlayan Lazer Doppler akış debimetrisinden farklıdır. Lazer ışını mikrovaskültürdeki hareketli kanla etkileşime girdiğinde, tarayıcı tarafından foto algılanan ve rastgele perfüzyon ünitelerine dönüştürülen bir Doppler frekans değişimine uğrar. LDPI ışık tabanlı bir teknik olduğundan, penetrasyon derinliği açısından 0,3-1 mm ile sınırlıdır, yani çoğunlukla dermal perfüzyon7. Dermal akış cilt sıcaklığı ve çeşitli anestezik ajanlardan etkilenebilecek sempatik sinir sistemi ile değiştirilebilir9. Optik lazerden yapılan ölçümler de ortam aydınlatma koşullarından, cilt pigmentasyonundan etkilenir ve aşırı kürk veya saç7ile engellenebilir.
LDPI, iskemi sonrası perfüzyon iyileşmesini izlemek için en sık kullanılan araştırma tekniğidir, çünkü invaziv değildir, kontrast yönetimi gerektirmez ve birden fazla hayvanda veri toplanmasına izin vermek için hızlı tarama sürelerine sahiptir. Bu, terapötik arteriogenez veya anjiogenez amaçlayan tedavilerin küçük hayvan modellerinde etkili olup olmadığını belirlemeye yardımcı olmak için idealdir. LDPI ile ölçülen hindlimb iskemi sonrası kan akışıiyileşmesi,Microfil döküm veya mikro-CT10, 11gibi diğer yollarla değerlendirildiğinde kollateral arter gelişimi ile iyiilişkilidir. Bu protokolün amacı, LDPI kullanılarak hindlimb perfüzyonunun değerlendirilmesini göstermektir.

<table><tbody><tr><td>Siyah yansıtıcı olmayan malzeme</td><td></td><td></td><td>Kumaş mağazası, siyah neopren şirket tarafından önerilen</td></tr><tr><td>F / hava tenekesi</td><td>A.M. Bickford Inc</td><td>80120</td><td></td></tr><tr><td>Sert metal problu homeotermik battaniye</td><td>Harvard Aparatı</td><td></td><td>Ayrıca esnek prob ile birlikte gelir, ancak bu daha az dayanıklıdır</td></tr><tr><td>İzofluran Anestezi makinesi</td><td>Dräger</td><td></td><td>Birden fazla üretici</td></tr><tr><td>İzofluran indüksiyon odası</td><td>VetEquip</td><td>941444</td><td>2 L hazneli</td></tr><tr><td>Moor lazer Doppler perfüzyon görüntüleyici</td><td>Moor Instruments</td><td>MoorLDI2-IR</td><td>Daha yüksek çözünürlüklü görüntüleyici (MoorLDI2-HIR)</td></tr><tr><td>Fare Anestezi burun konisi</td><td></td><td></td><td>Birden fazla üretici</td></tr><tr><td>Nair</td><td>Nair</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oksijen tankı</td><td></td><td></td><td>Birden fazla üretici</td></tr><tr><td>Surgilube</td><td>Çoklu distribütörler</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fare hindlimb lazer doppler perfüzyon görüntüleme

Laser Doppler Perfusion Imaging in the Mouse Hindlimb

Kan akışı iyileşmesi deneysel hindlimb iskemi veya iskemi-reperfüzyondan sonra kritik bir sonuç ölçüsüdür. Lazer Doppler perfüzyon görüntüleme (LDPI), kan akışı iyileşmesini değerlendirmek için yaygın, noninvaziv, tekrarlanabilir bir yöntemdir. Teknik, örneklenen dokudaki genel kan akışını, bir lazerin hareketli kırmızı kan hücrelerine çarpması sonucu ortaya çıkan frekanstaki Doppler kaymasından hesaplar. Ölçümler rastgele perfüzyon üniteleri ile ifade edilir, bu nedenle bacak üzerinde müdahale edilmeyen kontrallateral genellikle ölçümleri kontrol etmeye yardımcı olmak için kullanılır. Ölçüm derinliği 0,3-1 mm aralığındadır; hindlimb iskemi için bu, dermal perfüzyonin değerlendirildiği anlamına gelir. Dermal perfüzyon çeşitli faktörlere bağlıdır - en önemlisi cilt sıcaklığı ve anestezik ajan, güvenilir okumalarla sonuçlanacak şekilde dikkatlice kontrol edilmelidir. Ayrıca, saç ve cilt pigmentasyonu lazerin dermis'e ulaşma veya nüfuz etme yeteneğini değiştirebilir. Bu makalede, fare arkalığındaki LDPI tekniği göstermektedir.

Başarılı LDPI, üç tarama arasında en fazla 100-150 perfüzyon ünitesi varyasyonu (fare ayak takımı için normal ortalama perfüzyonun yaklaşık% 10'una karşılık gelir) ile tutarlı tekrarlanan önlem taramalarına neden olmalıdır (Şekil 2). Şekil 2'degösterildiği gibi, tekrarlanan taramalar farenin uygun şekilde dengelendiğini belirlemeye yardımcı olur, böylece iskemik/kontrol oranı, sıcaklık değişiminin neden olduğu dermal perfüzyondaki varyasyonun aksine alttaki kan ...

Burada, fare arkalığındaki kan akışını ölçmek için Lazer Doppler perfüzyon görüntüleme tekniğini ve gerekli kontrolleri gösteren bir protokol sunuyoruz.

Fare Hindlimb Lazer Doppler Perfüzyon Görüntüleme

Blood flow recovery is a critical outcome measure after experimental hindlimb ischemia or ischemia-reperfusion. Laser Doppler perfusion imaging (LDPI) is ...

Yara iyileşmesi yetersiz olan cilt ülserasyon, insan hastalarda amputasyonun önde gelen nedenlerinden biridir. Yeterli yara iyileşmesi, periferik arteriyel hastalığı olan hastalarda tehlikeye giren sağlam cildi korumak için gereken daha yüksek arteriyel bolluk seviyeleri gerektirir. Diğer birçok romatolojik durum ve diyabet de yaraları iyileştirmek için rahatsız ve yetersiz cilt mikroskrkülasyonuna yol açabilir.Birçok diyabetik hastada eşlik eden periferik arteriyel hastalık vardır ve bu da onları özellikle amputasyon riskiyle karşı karşıya bırakarak. Lazer Doppler perfüzyon görüntüleme veya LDPI, klinik durumlarda cilt mikrosirkülasyonunu değerlendirmek için olduğu gibi deneysel hindlimb iskemi, iskemi reperfüzyonu ve mikrocerrahi kapaklardan sonra kan akışını ve kan akışı iyileşmesini değerlendirmek için araştırma durumlarında kullanılır. LDPI sistemi, ilgi çekici bir bölge üzerinde hareket etmek için bir tarama aynası tarafından saptırılan düşük güçlü bir lazer ışını yansıtır.Bu, akış dektiyometrisi probu ile doğrudan temas halinde küçük doku alanı için perfüzyon ölçümü sağlayan lazer Doppler akış debisinden farklıdır. Lazer ışını mikrovaskülürdeki hareketli kanla etkileşime girdiğinde, tarayıcı tarafından foto algılanan ve rastgele perfüzyon ünitelerine dönüştürülen bir Doppler frekans değişimine uğrar. LDPI ışık tabanlı bir teknik olduğundan, penetrasyon derinliği açısından 0,3 ila 1 milimetre ile sınırlıdır, yani çoğunlukla dermal perfüzyon değerlendirilir.Dermal akış, cilt sıcaklığı ve çeşitli anestezik ajanlardan etkilenebilecek sempatik sinir sistemi ile değiştirilebilir. Optik lazerden yapılan ölçümler de ortam aydınlatma koşullarından, cilt pigmentasyonundan etkilenir ve aşırı kürk veya saç ile engellenebilir. LDPI, iskemi sonrası bol miktarda iyileşmeyi izlemek için en sık kullanılan araştırma tekniğidir, çünkü invaziv değildir, kontrast yönetimi gerektirmez ve birden fazla hayvanda veri toplanmasına izin vermek için hızlı tarama sürelerine sahiptir.Bu, terapötik arteriogenez veya anjiogenez amaçlayan tedavilerin küçük hayvan modellerinde etkili olup olmadığını belirlemeye yardımcı olmak için idealdir. LDPI ile ölçülen hindlimb iskemi sonrası kan akışı iyileşmesi, mikro dolgu dökümü veya mikro BT gibi diğer yollarla değerlendirildiğinde kollateral arter gelişimi ile iyi ilişkilidir. Bu protokolün amacı, LDPI kullanılarak hindlimb perfüzyonunun değerlendirilmesini göstermektir. Tarayıcı yüksekliğini, tarama konusuna olan mesafe yaklaşık 30 santimetre olacak şekilde ayarlayın.Görüntüleyiciyi açın ve ilişkili yazılımı başlatın. Ölçüm programını açın. Yazılım tarayıcı ile doğru iletişim kuruyorsa kızılötesi lazer açma uyarısı görünecektir.Tarayıcı ayarlarını, odadaki arka plan malzemesi ve aydınlatma kurulumuna uygun olacak şekilde ayarlayın. Lazer ışınını siyah arka plan malzemesine doğrultarak arka plan eşiğini ayarlayın ve Otomatik BK Seti'ne basın. Atık gazın uygun şekilde atılması ile izofluran indüksiyon odasını kurun.İndüksiyon odasını bir ısıtma pedi üzerine yerleştirmek, anestezi indüksiyonu sırasında fare sıcaklık kaybını önlemeye yardımcı olacaktır. Yansıtıcı olmayan bir yüzeyin altındaki tarama alanına yerleştirilen homeotermik battaniyeyi açın. Bu durumda, siyah bir neopilen kumaş.Homeotermik battaniye, vücut sıcaklığını 37 santigrat derece koruyacak şekilde ayarlanmıştır. Sıcaklık probunu ve yağlayıcıları yerleştirmeye hazır olacak şekilde konumlandırın. Anestezi yüz maskesini ve atma sistemini de tarama alanına yerleştirin.Fareyi bir izofluran buharlaştırıcı ile uyuşturun. Oksijen hızı dakikada bir litre akışa ayarlanır. Ve izofluran anestezi indüksiyonu için% 4'e ayarlanır.Akış anestezi indüksiyon odasına açılır ve fare solunum hızı yavaşlar. Fare sağ refleksini kaybettiğinde yeterli anestezi elde edilir. Fareyi ekli atık gaz leş yiyici ile anestezik maske burun konisine aktarın ve izofluranları% 1.5'e ayarlayın Bu anestezi seviyesi genellikle tarama sırasında fareyi nispeten hareketsiz tutmak için yeterlidir, ancak cerrahi anestezi seviyeleri sağlamak için tasarlanmamıştır.Yani anestezinin derinliği kontrol edilir. İzofluran seviyesini değiştirmek kalp atış hızında, solunumda ve dermal profusionda değişikliklere neden olur. Bu nedenle, herhangi bir zaman kursu deneyi boyunca ve tüm deneysel denekler için tutarlı bir yüzde kullanılmalıdır.Ketamin ksilazinin IP enjeksiyonu gibi alternatif anestezi teknikleri de kullanılabilir, ancak farklı anestezikler dermal profusion'u farklı şekilde etkilediği için herhangi bir ders çalışması boyunca aynı anestezi tekniği kullanılmalıdır. Taranacak plan bölgesi kürkle kaplıysa, saçı ilgi çekici bölgeden çıkarmak için küçük bir elektrikli düzeltici ve/veya depilatör krem kullanın. Islak cilt lazerden yansımalara neden olabileceğinden, depilatör kremler tamamen çıkarılmalı ve taramadan önce fare derisi kurutulmalıdır Homeotermik battaniye ile ilişkili yağlanmış rektal sıcaklık probunu fare rektumuna yerleştirin.Tarama sıcaklığını arzulamak için fare sıcaklığını dengele, 37 santigrat derece. Bu beş ila 10 dakika kadar sürebilir. Üst menüden veya Tarayıcı Kurulumu simgesinden erişilebilen Tarayıcı Kurulumu'nu seçin.Tarama alanı, ilgi alanına uyum sağlamak için X, Y koordinatları değiştirilerek ayarlanmalıdır. Tarama hızı tarama çözünürlüğüne bağlı olacaktır. Daha yüksek çözünürlük, daha uzun tarama süreleri sağlar.Anatomik perfüzyona odaklanan daha yüksek çözünürlüğün aksine, küresel profusion'a odaklanan tekrar tarama için, piksel başına dört milisaniyelik en yüksek tarama hızı yeterlidir. Yineleme taramaları yapıyorsanız, Yineleme ve Satır Taraması sekmesini seçin. Tarama sayısı değiştirilebilir.Bu durumda, üç taramanın yanı sıra yineleme aralığı. Yineleme aralığı için en az süre, kutunun sağındaki gri renkteki alanda gösterilen, tarama alanı ve tarama çözünürlüğü ile belirlenen tahmini tarama süreleri olacaktır. Birkaç saniye eklemek, kullanıcının taramalar arasında gerekirse fareyi duraklatmasını ve yeniden konumlandırmasını sağlar.Bu durumda toplam tarama süresi üç dakika 21 saniyedir. Görüntü Taraması sekmesini seçin ve İşaretle düğmesini seçin. Bu, lazerin tarama alanını ana hatlarıyla belirlemesine neden olur.Taranacak hedef işaretli alan içinde olacak şekilde fare konumunu ayarlayın. Taramayı Yinele simgesini seçip taramayı başlatmak için Oynat düğmesine basarak tekrarlanan ölçümü başlatın. Tarama mesafesini onaylayan bir açılır pencere görünecektir.Taramaya başlamak için Tamam'ı tıklatın. Hindlimb iskemi indüksiyonu öncesi bir farenin ilk taraması gerçek zamanlı olarak gösterilir. İkinci ve üçüncü tekrar taramaları 16x hıza hızlandırılmıştır.Ana pencere, yazılım tarafından oluşturulan taramanın sonuçlarını gösterir. Sağ alttaki içe, lazerin fare ayaklıklarını tarayıp taramasını gösterir. Ayak takımı veya ayak takımı ve dorsal baldır taraması için, kuyruğa doğru uzatılmış arkalıklarla eğilimli konumlandırma, sırtüstü konumlandırmaya daha tutarlı bir ilgi alanı sağlar.Femoral arter, saphenöz arter ve kollateraller uyluk ve baldırın ventral yüzeyine çok yakındır. Bu nedenle, bu ilgi alanlarını kullanıyorsanız supine konumlandırma tercih edilir. Fare hareketini tarama sırasında fareyi izleyin.Fare, ayak altlıklarının artık taramanın ortasındaki tarama bölgesinde olmayacak kadar hareket ederse, taramayı yeniden başlatın. Fare ayak takımı konumundaki küçük varyasyonlar analiz yazılımında bulunabilir. Ayrıca, tarama işlemi sırasında fare sıcaklığını izleyin, çünkü homeotermik battaniyenin kullanımıyla bile dalgalanabilir.Fare sıcaklığında çok fazla değişiklik varsa, bu taramalar arasında önemli bir değişime neden olabilir. Genellikle, 36,8 ila 37,2 sıcaklık aralığı kabul edilebilir verilerle sonuçlanacaktır. Yakalanan taramayı Farklı Kaydet penceresinin altına, daha kolay veri çözümlemesi için fare tanımlayıcısı ve zaman noktası içeren bir dosya adıyla kaydedin.Konu Ayrıntıları penceresinde istenirse fare ve zaman noktası ayrıntılarını girin. Arkadaki fare ile ventral hindlimb taraması, tarama alanı ayarlandıktan sonra burada gösterilir. Fare supine ile önermenin, ayağın yan tarafının değişken bir kısmının taranmasıyla sonuçlandığını unutmayın.Rektal sıcaklık probını çıkarın ve bir sonraki fare için hazır olacak şekilde% 70 etanol ile dezenfekte edin. İsoflurane'yi% 0'a düşürün Fare oksijen almaya devam ederse daha hızlı iyileşir, ancak ek oksijen olmadan da kurtarılabilir. Farenin anesteziden kafese dönmeden önce supine konumundan eğilimli konuma dönerek sağa doğru refleks gösterdiği noktaya kadar iyileşmesine izin verin.İyileşme izofluran için bir ısıtma battaniyesi üzerinde gerçekleştirilebilir, çünkü iyileşme çok hızlıdır veya ketamin ksilazin için sıcak bir iyileşme kafesindedir. Görüntüleme gözden geçirme yazılım programını açın. Taramaları gözden geçirmek için yeni bir pencere açılacaktır.Dosya menüsüne gidin, Kaydedilen dosyayı açın ve bulun. Araç çubuğundan yatırım getirisi simgesini seçin. Çokgen Ekle simgesini seçin.Fareyi kullanarak ilgi çekici bölgenin etrafındaki bir alanı izleme. İşiniz bittiğinde, araç çubuğuna geri dönün ve İstatistikler simgesini seçin. Bu, ilgi çekici bölgeden istatistikleri gösteren bir pencere açacaktır.Veri incelemesinde, ortalama bolluk birimi veya PU değerleri, her ayak takımı için tekrarlanan taramalar üzerinde 100 ila 150 PU'dan fazla değişmez. Bu kabul edilebilir bir taramadır ve tarama sırasında farenin iyi dengelenmiş olduğunu gösterir. Tekrarlanan taramalar üzerinde çalışmayan bir fare ayak takımı için ortalama perfüzyonun% 10'undan fazlasına karşılık gelen 100 ila 150 PU'dan daha büyük varyasyona sahip ortalama PU değerleri, farenin iyi dengelenmemiş olduğunu gösterir ve tekrar tarama şiddetle önerilir.Tarama tamamlandıktan hemen sonra hızlı bir analiz yapmak, fare hala uyuşturulurken tekrar tarama yapılmasına izin verir ve taramalar daha sonraki bir tarihte analiz edilirse ve tekrarlanan taramalar arasındaki önemli değişiklik nedeniyle bir tarama kabul edilemez kabul edilirse oluşabilecek bir veri noktasını kaybetmekten kaçının. Sonuçlar, fareler başlangıçta vasodilat ve daha sonra içsel teminatlarını geliştirirken kontrol hindlimb perfüzyonu üzerinde cerrahi hindlimb bolluğu oranı olarak ifade edilir, LDPI ile kan akışı iyileşmesi ameliyat sonrası bir zaman seyrinde görülmelidir. İyileşme derecesi, fare zorlanmasına ve hindlimb iskemi modelinin şiddetine bağlıdır.Bu rakam, LDPI'nın femoral arter ligasyonu ve P27 nakavt ve vahşi tip C57Bl / 6 fareler sonrasında zaman içinde ayaküstü kan akışı iyileşmesini ölçmek için kullanıldığı 28 gün boyunca tamamlanmış bir zaman kursu deneyini göstermektedir. Vahşi tip farelerde her iki P27 nakavt da, genelleştirilmiş bir matris metalloproteinaz inhibitörü olan oral doksiksin ile tedavi edildiğinde kan akışı iyileşmesini bozmuştu ve MMP aktivitesinin arteriogenezi kolaylaştırdığını düşündürmektedir. Kazanç kurulumu ve arka plan eşiği, tüm zaman kursu denemesi için sabit tutulmalıdır.Arka plan eşiği çok düşük ayarlanmışsa, arka plan malzemesini taramak düşük bolluk değerlerine neden olur. Bu, arka plan bol miktarda değerin çokgen seçimi sırasında ilgi alanına ortalamasına neden olur. Bu sorunu ortadan kaldırmak için, arka plan eşiği Genel sekmesinin altındaki Tarayıcı Kurulumu penceresinde ayarlanabilir.Bu durumda, arka plan eşiğinin 118 bolluk birimine çıkarılması, herhangi bir analize dahil edilmeyecek gri arka planla sonuçlanır. Akı görüntüsünün paleti veya renk ölçeği hem ölçüm yazılımında hem de görüntü inceleme yazılımında ayarlanabilir. Ölçekteki maksimum değerden büyük tüm bolluk değerleri en yüksek bolluk rengi olarak görüntülenir.Bu durumda, kırmızı. Dinamik aralığın artırılması, örneğin ölçeğin sıfırdan 1500'e değiştirilmesi, 1000 ila 1500 bolusion birimi arasındaki alanlar artık kırmızı olarak gösterilmek yerine renk gradyanı kullanılarak görüntüleneceğinden, tekrar tarama varyasyonunu gözle daha belirgin hale getirecektir. Burada gösterilen tarama, tekrarlanan taramanın başlangıcında çekirdek vücut sıcaklığı başlangıçta 36,8'in altında olan ve daha sonra tekrarlanan taramalar üzerinde artan bir farede elde edildi.Kontrol ayak takımı ortalama bollaşmasının, iskemik ayak altlığa göre daha soğuk çekirdek vücut sıcaklığından daha fazla etkilendiğini unutmayın. Daha soğuk vücut sıcaklığının tek bir taraması, bu veri noktası için daha yüksek bir bol miktarda kaydedilmesine neden olurdu. C57Bl/6 farelerde görülebileceği gibi fare derisi pigmentasyonundaki varyasyon, tarama alanının arka plan eşik değerinin altında olmasına neden olabilir ve bu da pigmentli alanlar içeren ilgi alanlarının analizini zorlaştırır.Genel olarak fare ayak altlıkları hiperpigmentasyona sahip değildir, bu da bu fare zorlanması için taramak için en uygun alandır. Araştırmacı ventral hindlimb'i incelemek istiyorsa, beyaz bir fare suşu seçilmelidir. LDPI, genel arteriyel perfüzyonun bir yansıması olarak hindlimb dermal profusion ölçümü için etkili, kolay gerçekleştirilen ve tekrarlanabilir bir yöntemdir.Güvenilir veri elde etmek için LDPI kullanırken tutarlı teknik gereklidir.

laser-doppler-perfusion-imaging-in-the-mouse-hindlimb

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Lazer Doppler perfüzyon sintigrafisi ile iskemi onayı ile tek taraflı hindlimb iskemi indüksiyonu için cerrahi işlem olduğunu göstermiştir.

Murin Model Hindlimb İskemi

Bu biyolojik olarak parçalanabilir bir polimerik nano-tanecikleri kullanılarak anjiyojenez için tedavi edici faktörler aşırı ifade programlama kök hücrelerin bir yöntem tarif eder. Tarif edilen işlemler in vitro yağ elde edilen kök hücreleri transfekte etmek ve bir murin arka bacak anjiyojenezi, iskemi modelinde desteklemek için programlanmış kök hücrelerin etkinliğini doğrulamak, polimer sentezi içerir.

Biyobozunur polimerik nano partiküllerin kullanılması Tedavi Angiogenezis Programlama Kök Hücreler

Farede arka bacak iskemisinin cerrahi indüksiyonu, anjiyogenezi incelemek için yararlıdır, ancak bu, belirgin iskemiye bağlı doku nekrozu gösteren bazı akraba fare suşlarında tehlikeye girer. Kademeli arteriyel oklüzyonun indüksiyonu yoluyla bu sorunu aşmak için ameroid büzücüler kullanarak subakut ekstremite iskemisini indüklemek için yöntemler açıklanmaktadır.

Akut ve Subakut Fare Arka ayağın İskemi Yöntemleri

İnsülin kaynaklı vazodilatasyon kas perfüzyon düzenleyen ve mikrovasküler artırır kan ve doku interstitium arasında yüzey alanı (mikrovasküler işe alım) çözünen değişimi için kullanılabilir. Kombine intravital mikroskobu ve kontrast-artırılmış Ultrasonografi sunulan aynı anda insülin'ın eylem daha büyük gemiler ve mikro değerlendirmek için içinde vivo.

Intravital mikroskobu ve kontrast-artırılmış Ultrasonografi fare Hindlimb, insülin kaynaklı vazodilatasyon ve kas perfüzyon çalışmaya kombine

Pankreas adacık mikrovasküler vasomotion adacık kan dağıtım düzenleyen ve adacık β hücrelerinin fizyolojik fonksiyon korur. Bu iletişim kuralı bir lazer Doppler monitör pankreas adacık mikrovasküler vasomotion vivo içinde fonksiyonel durumunu belirlemek ve pankreas kaynaklı hastalıklara pankreas adacık mikro katkıları değerlendirmek için kullanmayı açıklar.

Lazer Doppler: pankreas adacık mikrovasküler Vasomotion Vivo içinde ölçüm için bir araç

Burada lazer Doppler perfüzyon görüntüleme (LDPI) bir arada sunmak ve lazer Doppler perfüzyon (LDPM) spinal ölçmek için izleme kordon yerel kan akışı ve oksijen doygunluğu (SO2), omurilik tanıtmak için standart bir prosedür yanı sıra sıçan travmada.

Lazer Doppler görüntüleme ve izleme sıçan Spinal kord mikro analiz etmek için kullanma

Lökosit ve trombositlerin işe alınması, arteriyogenez sırasında kollateral arterlerin etkili büyümesi için gerekli olan önemli bir bileşeni oluşturur. Multifoton mikroskopisi, arteriyogenez sırasında lökosit alımını ve ekstravazasyonunu incelemek için in vivo yüksek uzay-zamansal çözünürlüğe ve daha az foto-toksisiteye sahip hücre dinamiklerini izlemek için etkili bir araçtır.

Bir Murin Arka Bacak Modelinde Arteriyogenez Sırasında Lökosit Alımını İzlemek için Multifoton İntravital Görüntüleme

Bu protokol, FVB farelerde arka bacak kangrenini indüklemek için femoral arter ve ven elektrokoagülasyonunu nitrik oksit sentaz inhibitörü uygulamasıyla birleştiren benzersiz, klinik olarak ilgili bir periferik arter hastalığı modelini tanımlamaktadır. İntrakardiyak DiI perfüzyonu daha sonra ayak yastığı vaskülatürünün yüksek çözünürlüklü, üç boyutlu görüntülenmesi için kullanılır.

Murin Arka Ekstremite Kangren Modelinde Footpad Vaskülatürünün Yüksek Çözünürlüklü Üç Boyutlu Görüntülenmesi

Yüksek uzamsal çözünürlüğe (100 μm) ve duyarlılığa sahip ultra hızlı Doppler ultrason (UFUS), hepatik vaskülatür hakkında kapsamlı bir kalitatif genel bakış elde etmek için uygun bir noninvaziv görüntüleme modalitesini temsil eder. UFUS ayrıca vasküler hastalık mekanizmaları hakkındaki anlayışımızı geliştirmeyi amaçlayan mikrovasküler sistemin kantitatif ölçümlerini de kolaylaştırır.

Ultrafast Doppler Ultrason Kullanılarak Farelerin Hepatik Vaskülatürünün Görüntülenmesi ve Miktarının Belirlenmesi

Burada, geçici MCA oklüzyonu sırasında kan akışını değerlendirmek için lazer Doppler probunun, sıçanlar ve fareler için uygun bir periorbital konum olan orta serebral arterin (MCA) distal bölgesi üzerine kafatasına yerleştirilmesini içeren minimal invaziv bir cerrahi prosedür gösterilmektedir.

Kemirgen Modellerinde Orta Serebral Arter Oklüzyonu Öncesi Serebral Kan Akışının İzlenmesi için Bir Lazer Doppler Probunun Periorbital Yerleştirilmesi

Farelerde sağ böbreğin rezeksiyonundan sonra tek taraflı böbrek iskemi-reperfüzyon sırasında böbrek mikrovasküler kan akışındaki değişiklikleri izlemek için lazer lek kontrast görüntüleme sistemi kullanıldı.

Farelerde Renal Iskemi-Reperfüzyon Yaralanması sırasında Lazer Lek Kontrast Görüntüleme ile Mikrovasküler Perfüzyon İzlenen

Öğrenin fare arka bacak kan akışını Lazer Doppler Perfüzyon Görüntüleme ile ölçme yöntemini. Bu teknik, mikrosirkülasyon değerlendirmesi ve yara iyileşmesi araştırmalarında kullanılır.

Fare Hindlimb Lazer Doppler Perfüzyon Görüntüleme

Daha fazla video keşfet