Name: Sıçanlarda Tekrarlanabilir Yoğun Bakım Ünitesi Odaklı Bir Endotoksin Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 56 s
Description: Keşfedin, sıçanlarda tekrarlanabilir endotoksin modeliyle sepsis araştırmalarında fizyolojik ve moleküler parametreleri sürekli değerlendirin. Bu yöntem, yoğun bakım odaklı çalışmalarda hayvan kullanımını azaltarak etik araştırmaya katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Beatrice Beck-Schimmer (MD) ve Erik Schadde'ye (MD) eleştirel incelemeleri ve bu makale için değerli katkıları için teşekkür eder.

Bu protokolde sunulan tüm deneyler İsviçre'nin Zürih Kantonu Veterinerlik Otoriteleri tarafından onaylanmıştır (onay numaraları 134/2014 ve ZH088/19). Ayrıca, bu deneyde gerçekleştirilen tüm adımlar, İsviçre Tıp Bilimleri Akademisi (SAMS) tarafından Hayvanlarla Deneyler Kılavuzu ve Avrupa Laboratuvar Hayvanları Bilim Dernekleri Federasyonu (FELASA) Kılavuzlarına uygundur.
1. Anestezi indüksiyonu ve hayvan izleme
<ol><li>250-300 gram (g) ağırlığındaki erkek Wistar sıçanlarını patojensiz koşullar altında havalandırılan kafeslerde tutun. 22 ± 1 °C ortam sıcaklığında 12-12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsü ve yiyecek ve suya serbest erişim sağlayın.</li>
	<li>Genel anesteziyi, 30 saniye boyunca bir anestezi indüksiyon kutusunda izofluran (% 3-5 konsantrasyonu) ile uçucu indüksiyonla (Şekil 1A) veya alternatif olarak, tek atışlık ketamin / ksilazin (100 g vücut ağırlığı başına 10/1 miligram (mg) enjeksiyonu ile anesteziyi indükleyin.</li>
	<li>Hayvanı bir çalışma yerine aktarın ve tüm deney boyunca hayvanı bir ısıtma paspasına koyun. Vücut ısısını 36,5 ila 37 °C arasında tutun.</li>
	<li>Oksijen sağlamak için bir burun konisi kullanın (600 mL / dakika). Anestezi idamesi için uçucu anestezi seçilmişse %2-3 oranında izofluran ekleyin. Hayvanın kendiliğinden nefes aldığından emin olun.</li>
	<li>Trakeostomi ve arteriyel ve venöz kateterlerin yerleştirilmesinden önce ayak parmağı sıkışma refleksinin yokluğu ile anestezi seviyesini doğrulayın.</li>
	<li>Periferik oksijen doygunluğu izleme ile yeterli oksijenasyonu doğrulayın (normal oksijen doygunluğu% 98 - 100).</li>
	<li>Gözleri korumak için bir merhem (A vitamini merhemi) kullanın.</li>
	<li>Steril cerrahi aletleri ve kateterleri Şekil 1B'de gösterildiği gibi bir yan masada hazırlayın.</li>
	<li>Ek olarak, basınç ve oksijen doygunluğu izlemeyi Şekil 1C'de gösterildiği gibi hazırlayın.</li>
</ol>2. İntravenöz erişim
<ol><li>Venöz erişimi kolaylaştırmak için sıçanın proksimal kuyruğuna bir turnike uygulayın (Şekil 2A).</li>
	<li>Kuyruğu alkolle 3 kez dezenfekte edin.</li>
	<li>İki lateral kuyruk damarından birine bir G26 intravenöz kateteri indükleyin. NOT: Deneyimlerimize göre, intravenöz erişimi sıçanın kuyruğunun distal kısmına yerleştirmek daha kolaydır, çünkü buradaki damar cilde daha yakındır. Ek olarak, başarısız bir kanülasyon durumunda, yakından hareket etmek için yeterli alan vardır.</li>
	<li>Hava enjeksiyonundan kesinlikle kaçının.</li>
	<li>İntravenöz kateteri yerleştirdikten sonra turnikeyi çözün.</li>
	<li>İntravenöz kateteri yapışkan bantla yerine sabitleyin (Şekil 2B).</li>
	<li>Sürekli sıvı ve ilaç uygulaması için şırınga pompalarını intravenöz erişime bağlayın.</li>
	<li>Bolus sıvısı, ilaç uygulaması ve venöz kan örneklemesi için 3 yönlü stopcocklar kullanın.</li>
</ol>3. Trakeostomi
<ol><li>Hayvanın ön boyun bölgesini tıraş edin.</li>
	<li>Tıraş edilen cildi providon-iyot çözeltisi ile 3 kez dezenfekte edin.</li>
	<li>Bir neşter kullanarak yaklaşık 2 cm uzunlamasına bir kesi yapın (10 numaralı bir bıçakla).</li>
	<li>Cildi 2-0 ipek dikişle geri çekin.</li>
	<li>Gırtlak ve trakeayı cerrahi makasla açıkça hazırlayın (Şekil 3A).</li>
	<li>Trakeayı 3-5. trakea tokasında cerrahi mikro makasla açtığınızdan emin olun.</li>
	<li>Trakeaya steril bir trakeal kanül yerleştirin. Dikkatli olun, tek taraflı havalandırmayı önlemek için kanülü çok derine sokmayın.</li>
	<li>Kanülü 2-0 ipek dikiş kullanarak yerine sabitleyin.</li>
	<li>Basınç veya hacim kontrollü ventilasyon için kanülü bir vantilatöre bağlayın (Şekil 3B).</li>
</ol>4. Arteriyel erişim
<ol><li>Sıçan kuyruğunu povidon-iyot çözeltisi ile 3 kez dezenfekte edin.</li>
	<li>Ventral tarafta yaklaşık 1 cm uzunlamasına bir neşter (10 numaralı bıçak ile) kullanarak cildi kesin.</li>
	<li>Dikkatli olun, kuyruk arterinin yaralanmasını önlemek için çok derin kesmeyin.</li>
	<li>Arteri dikkatlice ortaya çıkarmak için cerrahi bir mikroskop kullanın. Arteri çevreleyen fasyayı cerrahi mikro makasla kesin.</li>
	<li>Arterin distal kısmını 6-0 ipek sütür kullanarak bağlayın.</li>
	<li>Proksimal 6-0 ipek dikiş hazırlayın, ancak ipeği sıkmayın (Şekil 4A).</li>
	<li>Distal ve proksimal ipek sütür arasındaki artere bir G-26 kateteri sokuldu.</li>
	<li>Kateter artere girdikten sonra, proksimal ipek sütürü sıkın ve kateteri yerine sabitleyin (Şekil 4B).</li>
	<li>Sürekli arteriyel basınç ölçümü (normal ortalama arteriyel basınç: 60 - 100 mmHg) sağlamak için kateteri bir basınç dönüştürücüsüne bağlayın (Şekil 4C).</li>
	<li>Ek olarak, basınç dönüştürücüsüne bağlı kateter ile arteriyel kan örneklemesi için G-26 kateteri arasına 3 yönlü bir stopcock yerleştirin.</li>
</ol>5. Temel ölçüm, sepsis indüksiyonu ve takip ölçümleri
<ol><li>Hayvan sabit bir duruma ulaştıktan sonra, LPS'yi enjekte edin.</li>
	<li>Sabit bir duruma ulaşıldığında kan örnekleri toplayın (genellikle 15-30 dakika sonra).</li>
	<li>Kan örneklerinden sıvı kaybını 1:4 oranında Ringer çözeltisi ile değiştirin.</li>
	<li>Sepsisi indüklemek için, LPS'yi bir bolus veya sürekli bir LPS uygulaması olarak enjekte edin.</li>
	<li>Bolus uygulaması için, 1 mg / mL'lik bir konsantrasyonda fosfat tamponlu salin (PBS) içinde çözünmüş 1 mg LPS / kilogram vücut ağırlığı (kg) enjekte edin.</li>
	<li>Sürekli uygulama için, bir şırınga pompası kullanarak tüm deney boyunca 300 μg LPS / kg / saat enjekte edin (LPS'nin stok çözeltisi: PBS'de 1 mg / mL).</li>
	<li>Hava embolisini önlemek için her zaman hava enjeksiyonundan kaçının.</li>
	<li>Deneyi yapmadan önce sıvı replasman protokollerini, vazokonstriktör uygulama protokollerini ve kürtaj kriterlerini (örneğin, sıvı replasmanına rağmen 30 dakikadan fazla bir süre boyunca 50 mmHg'nin altındaki ortalama arteriyel kan basıncı olarak tanımlanan hipotansiyon) tanımlayın. NOT: Ringer çözeltisinin 10 mL / kg / saat hızında sürekli infüzyonunu öneriyoruz.</li>
	<li>Sıvıların herhangi bir sürekli uygulamasını (örneğin, sürekli LPS uygulaması için) infüze edilen miktardan çıkarın, böylece sonuçlar kontrol gruplarınınkilerle karşılaştırılabilir. NOT: Deneyin sonunda ve karaciğer, böbrek veya dalak gibi herhangi bir organın toplanmasından önce, histolojik veya biyokimyasal inceleme gibi daha ileri analizler için hayvanlar, inferior kava damarının bir kesisi ile ötenazi yapılabilir. Önerilen ötenazi yöntemi, özellikle organlardaki enflamatuar belirteçler değerlendirilecekse, inferior vena kavanın kesilmesinden ve sol kalbe buz gibi soğuk salin enjeksiyonundan önce hayvanları cerrahi bir anestezi düzlemine getirmektir. Yasal gerekliliklere ve yerel yönergelere uyduğunuzdan emin olun. Sepsis ile ilişkili organ yetmezliğini doğrulamak için, böbreklerdeki tübüler hasarı doğrulamak için kaspaz-3 gibi pro-apoptoz belirteçleri ve α1-mikroglobulin analiz edilebilir. CINC-1, MCP-1 ve IL-6 gibi belirteçlerin organa özgü analizi de organa özgü inflamatuar yanıt hakkında bilgi sağlayabilir.</li>
</ol>

<ol><li>Hotchkiss, R. S., Karl, I. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+and+treatment+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology and treatment of sepsis.</a> New England Journal of Medicine. 348 (2), 138-150 (2003).</li>
<li>Singer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Third+International+Consensus+Definitions+for+Sepsis+and+Septic+Shock+%28Sepsis-3%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3).</a> Journal of the American Medical Association. 315 (8), 801-810 (2016).</li>
<li>Vincent, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+worldwide+burden+of+critical+illness%3A+the+intensive+care+over+nations+%28ICON%29+audit%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Respiratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Assessment of the worldwide burden of critical illness: the intensive care over nations (ICON) audit.</a> Lancet Respiratory Medicine. 2 (5), 380-386 (2014).</li>
<li>Fleischmann, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+Global+Incidence+and+Mortality+of+Hospital-treated+Sepsis.+Current+Estimates+and+Limitations%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Assessment of Global Incidence and Mortality of Hospital-treated Sepsis. Current Estimates and Limitations.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193 (3), 259-272 (2016).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Duration+of+hypotension+before+initiation+of+effective+antimicrobial+therapy+is+the+critical+determinant+of+survival+in+human+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Duration of hypotension before initiation of effective antimicrobial therapy is the critical determinant of survival in human septic shock.</a> Critical Care Medicine. 34 (6), 1589-1596 (2006).</li>
<li>Gotts, J. E., Matthay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sepsis%3A+pathophysiology+and+clinical+management%5BTitle%5D)+AND+%22British+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Sepsis: pathophysiology and clinical management.</a> British Medical Journal. 353, (2016).</li>
<li>Akira, S., Takeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor signalling.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (7), 499-511 (2004).</li>
<li>Urner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insight+into+the+beneficial+immunomodulatory+mechanism+of+the+sevoflurane+metabolite+hexafluoro-2-propanol+in+a+rat+model+of+endotoxaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Immunology%22%5BJournal%5D)">Insight into the beneficial immunomodulatory mechanism of the sevoflurane metabolite hexafluoro-2-propanol in a rat model of endotoxaemia.</a> Clinical and Experimental Immunology. 181 (3), 468-479 (2015).</li>
<li>Beck-Schimmer, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Which+Anesthesia+Regimen+Is+Best+to+Reduce+Morbidity+and+Mortality+in+Lung+Surgery%3F%3A+A+Multicenter+Randomized+Controlled+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Which Anesthesia Regimen Is Best to Reduce Morbidity and Mortality in Lung Surgery?: A Multicenter Randomized Controlled Trial.</a> Anesthesiology. 125 (2), 313-321 (2016).</li>
<li>Deitch, E. A. Animal models of sepsis and shock: a review and lessons learned. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDeitch%2C+EA+%22Shock%22">Shock</a>. 9 (1), 1-11 (1998).</li>
<li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis%3A+setting+the+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 4 (10), 854-865 (2005).</li>
<li>Perretti, M., Duncan, G. S., Flower, R. J., Peers, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+corticosterone%2C+interleukin-1+and+tumour+necrosis+factor+in+rat+experimental+endotoxaemia%3A+comparison+between+Lewis+and+Wistar+strains%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Serum corticosterone, interleukin-1 and tumour necrosis factor in rat experimental endotoxaemia: comparison between Lewis and Wistar strains.</a> British Journal of Pharmacology. 110 (2), 868-874 (1993).</li>
<li>Marechal, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+glycocalyx+damage+during+endotoxemia+coincides+with+microcirculatory+dysfunction+and+vascular+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Endothelial glycocalyx damage during endotoxemia coincides with microcirculatory dysfunction and vascular oxidative stress.</a> Shock. 29 (5), 572-576 (2008).</li>
<li>Thiemermann, C., Ruetten, H., Wu, C. C., Vane, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multiple+organ+dysfunction+syndrome+caused+by+endotoxin+in+the+rat%3A+attenuation+of+liver+dysfunction+by+inhibitors+of+nitric+oxide+synthase%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The multiple organ dysfunction syndrome caused by endotoxin in the rat: attenuation of liver dysfunction by inhibitors of nitric oxide synthase.</a> British Journal of Pharmacology. 116 (7), 2845-2851 (1995).</li>
<li>Osuchowski, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimum+quality+threshold+in+pre-clinical+sepsis+studies+%28MQTiPSS%29%3A+an+international+expert+consensus+initiative+for+improvement+of+animal+modeling+in+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Medicine+Experimental%22%5BJournal%5D)">Minimum quality threshold in pre-clinical sepsis studies (MQTiPSS): an international expert consensus initiative for improvement of animal modeling in sepsis.</a> Intensive Care Medicine Experimental. 6 (1), 26(2018).</li>
<li>Fink, M. P., Heard, S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+models+of+sepsis+and+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Laboratory models of sepsis and septic shock.</a> Journal of Surgical Research. 49 (2), 186-196 (1990).</li>
<li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis%3A+Setting+the+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis: Setting the stage.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 4 (10), 854-865 (2005).</li>
<li>Balls, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+principles+of+humane+experimental+technique%3A+timeless+insights+and+unheeded+warnings%5BTitle%5D)+AND+%22Altex-Alternatives+to+Animal+Experimentation%22%5BJournal%5D)">The principles of humane experimental technique: timeless insights and unheeded warnings.</a> Altex-Alternatives to Animal Experimentation. 27 (2), 144-148 (2010).</li>
</ol>

Yazarların sunulan çalışma ile ilgili çıkar çatışması yoktur. Martin Schläpfer, tıbbi gazlar, özellikle oksijen (O2) ve karbondioksit (CO 2) kullanan hastalar için cerrahi ve / veya anestezinin olumsuz etkilerini hafifletmek için bir patent sunmuştur. İsveç'teki Sedana Medical'den ve Roche, İsviçre'den bu çalışmayla ilgili olmayan sınırsız araştırma hibeleri aldı.

Burada açıklanan protokol, araştırma sorusuna göre uyarlanabilen, yüksek oranda tekrarlanabilir, ancak öğrenmesi basit bir sepsis modeline izin verir. Kalp atış hızı, kan basıncı ve periferik arteriyel oksijen satürasyonu gibi organ fonksiyonlarına atıfta bulunan temel in vivo veriler sürekli olarak toplanabilir ve deney boyunca kan örneklemesi tekrar tekrar yapılabilir. Ek olarak, sıvı replasman protokolleri ve vazopressör desteği ile ilgili değişiklikler yapılabilir. Hayvanların hemodinamik stabilitesi göz önüne alındı...

Sepsis ve daha şiddetli formu olan septik şok, bir enfeksiyonun zeminindeki sendromlardır, sitokinlerin salınımı ile aşırı inflamatuar reaksiyonla sonuçlanır, baskılanmış bir bağışıklık savunması ve ölümcül sonuçlarla fizyolojik ve biyokimyasal değişikliklere yol açar 1,2. Bu dengesiz inflamatuar reaksiyon, akciğer, böbrek ve karaciğer gibi çeşitli hayati organlarda organ disfonksiyonu ve organ yetmezliği ile sonuçlanır. Sepsis, %373 ile bir hastanın yoğun bakım ünitesine (YBÜ) kabul edilmesinin en yaygın nedenlerinden biridir. Sepsisin mortalitesi günümüzde %20-30 civarında değişmektedir4. Erken ve etkili antibiyotik tedavisi son derece önemlidir5. Sıvı ve vazopressör resüsitasyonunun erken kurulması gerekir, bunun dışında tedavi tamamen destekleyicidir6.
Sepsis, organ disfonksiyonunun eşlik ettiği bakteri, mantar, virüs veya parazitlerle kanıtlanmış veya şüphelenilen bir enfeksiyon olarak tanımlanır. Septik şok kriterleri, tek başına sıvı tedavisine yanıt vermeyen başka bir kardiyovasküler kollaps olduğunda ve 2 milimol / litreden fazla laktat seviyesi mevcut olduğunda karşılanır2. Sepsise bağlı organ yetmezliği herhangi bir organda ortaya çıkabilir, ancak kardiyovasküler sistemde, beyinde, böbrekte, karaciğerde ve akciğerde çok yaygındır. Sepsis hastalarının çoğu, hastanın hava yolunu güvence altına almak, aspirasyondan korumak ve hipoksiyi önlemek veya üstesinden gelmek için yüksek oranda ilham verici oksijen ile pozitif son ekspiratuar ventilasyon uygulamak için endotrakeal entübasyona ihtiyaç duyar. Bir trakea tüpünü ve mekanik ventilasyonu tolere etmek için, hastalar genellikle sedasyona ihtiyaç duyarlar.
Gram negatif bakterilerin zarının bir bileşeni olarak lipopolisakkaritler (LPS) gibi endotoksinler, toll benzeri reseptör (TLR) 47 yoluyla güçlü bir enflamatuar reaksiyona neden olur. Tanımlanmış bir yolun aktivasyonu stabil bir inflamatuar reaksiyon sağlar. Sitokine bağlı nötrofil kemoattractant protein 1 (CINC-1), monosit kemoattractant protein 1 (MCP-1) ve interlökin 6 (IL-6) gibi sitokinler, bu model8'de şiddet ve sonuç için prognostik faktörler olarak bilinir. İntravenöz LPS uygulaması, sıçanlarda sepsisin çeşitli yönlerini incelemek için başarıyla kullanılmıştır 8,9.
Sepsisin tedavisi, özellikle öngörücü hayvan modellerinin eksikliği nedeniyle hala bir zorluktur. Sistemik inflamasyonun aktivasyonu ile endotokseminin farmakolojik tedavilerin geliştirilmesi için yeterli bir model olup olmadığı tartışmalıdır. Bununla birlikte, iyi bilinen LPS kaynaklı TLR 4 yolu ile önemli bilgiler edinilebilir.

<table><tbody><tr><td>2-0 ipek sütürler</td><td>Ethicon, Sommerville, NJ</td><td>K833</td><td>Standart cerrahi</td></tr><tr><td>26 intravenöz kateter</td><td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ</td><td>391349</td><td>Standart anestezi ekipmanı</td></tr><tr><td>6-0 LOOK siyah örgülü ipek</td><td>Cerrahi Özellikler Şirketi, Wyomissing, PA</td><td>SP114</td><td>Standart cerrahi</td></tr><tr><td>Alaris Şırınga Pompası</td><td>Bencton Dickinson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Mundipharma, Basel, İsviçre</td><td>7.68034E+12</td><td>GTIN numarası</td></tr><tr><td>Kavisli ince uçlar microforceps</td><td>Dünya hassas aletleri (WPI), Sarasota, FL</td><td>504513</td><td>Vasküler hazırlığı kolaylaştırır</td></tr><tr><td>İnce uçlar microforceps</td><td>Dünya hassas aletleri (WPI), Sarasota, FL</td><td>501976</td><td>Uçların düzenli olarak parlatılması gerekir</td></tr><tr><td>Infinity Delta XL Anestezi monitörizasyonu</td><td>Draeger, L&uuml; beck, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane, 250 mL şişeler</td><td>Attane, Piramal, Mumbai, Hindistan</td><td>LDNI 22098</td><td>Standart veteriner ekipmanları</td></tr><tr><td>Ketamin (Ketalar)</td><td>Pfitzer, New York, NY</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli'den lipopolisakkarit (LPS), serotip 055:B5</td><td>Sigma, Buchs, İsviçre</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Q-ipuçları küçük</td><td>Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Almanya</td><td>EH11.1</td><td>Standart cerrahi</td></tr><tr><td>Ringerfundin</td><td>Bbraun, Melsungen, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tec-3 İzofloran Buharlaştırıcı</td><td>Ohmeda, GE-Healthcare, Chicago, IL</td><td>artık mevcut değil</td><td>Standart veteriner ekipmanları</td></tr><tr><td>Ksilazin (Xylazin Streuli)</td><td>Streuli AG, Uznach, İsviçre</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sıçanlarda tekrarlanabilir yoğun bakım Ünitesi odaklı bir endotoksin modeli

A Reproducible Intensive Care Unit-Oriented Endotoxin Model in Rats

Sepsis ve septik şok, yoğun bakım ünitelerinde önde gelen ölüm nedeni olmaya devam etmektedir. Sepsis yönetiminde önemli iyileşmelere rağmen, mortalite hala %20-30 arasında değişmektedir. Sepsise bağlı çoklu organ yetmezliğini ve ölümünü azaltmak için yeni tedavi yaklaşımlarına acilen ihtiyaç vardır. Sağlam hayvan modelleri, bir veya daha fazla tedavi yaklaşımının yanı sıra fizyolojik ve moleküler parametreler üzerindeki etkilerini test etmeye izin verir. Bu yazıda basit bir hayvan modeli sunulmuştur.
İlk olarak, hayvanlarda uçucu madde kullanımı ile veya intraperitoneal anestezi ile genel anestezi indüklenir. İntravenöz kateter (kuyruk veni), trakeostomi yerleştirildikten ve intraarteriyel kateter (kuyruk arteri) yerleştirildikten sonra mekanik ventilasyona başlanır. Ortalama arteriyel kan basıncı, arteriyel kan oksijen doygunluğu ve kalp atış hızının temel değerleri kaydedilir.
Fosfat tamponlu salin içinde çözünmüş lipopolisakkaritlerin (1 miligram / kilogram vücut ağırlığı) enjeksiyonu, toll benzeri reseptör 4 aracılığıyla güçlü ve tekrarlanabilir bir enflamatuar yanıtı indükler. Sıvı düzeltmeleri ve norepinefrin uygulaması iyi kurulmuş protokollere dayanarak gerçekleştirilir.
Bu makalede sunulan hayvan modelinin öğrenilmesi kolaydır ve sedasyon, mekanik ventilasyon, sürekli kan basıncı monitörizasyonu ve tekrarlayan kan örneklemesi ile yoğun bakım ünitesinde klinik sepsis tedavisine yöneliktir. Ayrıca, model güvenilirdir ve hayvan araştırmalarının 3R (azaltma, değiştirme, rafine etme) ilkelerine uygun olarak sınırlı sayıda hayvanla tekrarlanabilir verilere izin verir. Sepsis araştırmalarındaki hayvan deneyleri kolayca değiştirilemezken, tekrarlayan ölçümler hayvanların azaltılmasına izin verir ve septik hayvanların anestezi altında tutulması acıyı azaltır.

Sunulan sistem, daha önce bildirildiği gibi hemodinamik olarak stabil hayvanlarla endotoksemiye izin verir9. LPS stimülasyonu olan ve LPS stimülasyonu olmayan hayvanlarda ortalama arteriyel basınç sabit kalırken, LPS ile tedavi edilen hayvan, negatif baz fazlalığı ve CINC-1 (867 ng / mL), MCP-1 (5027 ng / mL) ve IL-6 (867 ng / mL)8 gibi plazma sitokinleri (uygulamadan 6 saat sonra) ile ölçülen güçlü bir enflamatuar reaksiyon gibi sepsis özellikleri geliştirirken, <strong c...

Burada, sıçanlarda tekrarlanabilir bir yoğun bakım ünitesi odaklı endotoksin modeli sunuyoruz.

Sıçanlarda Tekrarlanabilir Yoğun Bakım Ünitesi Odaklı Bir Endotoksin Modeli

Sepsis and septic shock remain the leading cause of death in intensive care units. Despite significant improvements in sepsis management, mortality still ...

Bu protokol, fizyolojik ve moleküler parametrelerin tekrar tekrar değerlendirilebildiği sağlam ve tekrarlanabilir bir endotoksemi modelidir. Bu yaklaşım, sepsis araştırmalarındaki soruları cevaplamaya yardımcı olabilir. Modelimiz hayvan deneylerinin yerini almamakla birlikte, sürekli sedasyon yoluyla sepsis modellerini rafine eder ve tekrarlanan örnekleme yoluyla hayvan sayısını azaltır.Yeni başlayanlar arteriyel ve venöz kateterlerin yerleştirilmesiyle mücadele edebilir, ancak bu tekniklerde ustalaşmak için sadece sınırlı eğitim gereklidir. Tüm deney düzeneğinin görselleştirilmesi, araştırmacıların YBÜ'deki bir durumu daha yakından taklit etmek için modellerini kurmalarını veya uyarlamalarını kolaylaştırır. Anestezi uygulanan hayvanı bir ısıtma matına aktararak başlayın.Vücut ısısını 36.5 ila 37 santigrat derece arasında tutmak. Bir burun konisi ile oksijen sağlayarak hayvanın kendiliğinden nefes aldığından emin olun. Trakeostomi ve arteriyel ve venöz kateterlerin yerleştirilmesinden önce ayak parmağı sıkışma refleksinin yokluğu ile anestezi seviyesini doğrulayın.Gözleri korumak için bir merhem kullanın. Yeterli oksijenasyon için basınç ve oksijen doygunluğu izleme ile birlikte steril cerrahi aletler ve kateterler hazırlayın. Venöz erişimi kolaylaştırmak ve kuyruğu alkolle üç kez dezenfekte etmek için sıçanın proksimal kuyruğuna bir turnike uygulayın.Hava enjeksiyonundan kaçınarak iki lateral kuyruk damarından birine 26 gauge intravenöz kateter sürün. İntravenöz kateteri yerleştirdikten sonra turnikeyi çözün ve intravenöz kateteri yapışkan bantla yerine sabitleyin. Sürekli sıvı ve ilaç uygulaması için üç tıkayıcı pompaları intravenöz erişime bağlayın.Trakeostomiye hayvanın ön boyun bölgesini tıraş ederek başlayın ve ardından traş edilen cildi povidon iyot çözeltisi ile üç kez dezenfekte edin. 10 numaralı neşter bıçağı kullanarak iki santimetre boyuna bir kesi gerçekleştirin. Cildi 2-0 ipek dikişle geri çekin.Daha sonra cerrahi makasla açılacak gırtlak ve trakeayı açıkça hazırladı. Tek taraflı ventilasyonu önlemek için çok derine nüfuz etmemeye dikkat ederek trakeaya steril bir trakea kanülü yerleştirin. 2-O ipek sütür kullanarak kanülü yerine sabitleyin ve ardından basınç veya hacim kontrollü havalandırma için kanülü bir vantilatöre bağlayın.Deneyi kurmadan önce sıvı replasman protokollerini, vazokonstriktör uygulama protokollerini ve kürtaj kriterlerini tanımlayın. Sıçan kuyruğunu povidon iyot çözeltisi ile üç kez dezenfekte edin ve daha sonra kuyruk arterinin yaralanmasını önlemek için çok derin kesmemeye dikkat ederek cilt çemberini ventral tarafta bir santimetre uzunlamasına bir neşter kullanarak kesin. Arteri dikkatlice ortaya çıkarmak için cerrahi bir mikroskop kullanın.Arteri çevreleyen fasyayı cerrahi mikro makasla kesin. Daha sonra proksimal 6-0 ipek dikiş yaparak arterin distal kısmını yağlayın, ancak ipeği sıkmayın. Distal ve proksimal ipek sütür arasındaki artere 26 gauge'lik bir kateter yerleştirin ve ardından kateteri yerine sabitlemek için proksimal ipek sütürü sıkın.Sürekli arteriyel basınç ölçümü sağlamak için kateteri bir basınç dönüştürücüsüne bağlayın. Ek olarak, basınç dönüştürücüsüne bağlı kateter ile arteriyel kan örneklemesi için 26 gauge kateter arasına üç yönlü bir stopcock yerleştirin. Hayvan sabit bir duruma ulaştıktan sonra, LPS enjekte ederek sepsis indüklenir ve kan örnekleri toplanır.Kan örneklerinden sıvı kaybını Ringer'ın çözeltisi ile bir ila dört oranında değiştirin, hava embolisini önlemek için her zaman hava enjeksiyonundan kaçının. Ortalama arteriyel basınç, LPS stimülasyonu olan ve olmayan hayvanlarda sabit kalır. LPS ile tedavi edilen hayvanlar, negatif baz fazlalığı gibi sepsis özellikleri geliştirir.LPS ile tedavi edilen hayvanlar ayrıca, kemoattractant protein-1, monosit kemoattractant protein-1 ve interlökin-6 gibi plazma sitokinleri ile ölçülen güçlü bir enflamatuar reaksiyon geliştirdi. Bu protokolü denerken, sıvı ve vazopresör rejimlerini önceden tanımlamayı ve katı ve tekrarlanabilir araştırma verileri elde etmek için sonlandırma kriterlerini tanımlamayı unutmayın. Bu protokol diğer sepsis modellerine uyarlanabilir.Böylece bir araştırma sorusu en uygun yaklaşımla ve hayvan refahının azaltılması, rafine edilmesi, değiştirilmesi ilkelerine uygun olarak cevaplanır.

a-reproducible-intensive-care-unit-oriented-endotoxin-model-in-rats

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Metisiline dirençli nedeniyle deneysel rat endokardit...

Metisiline Dirençli Deneysel Endokardit Modeli<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; (MRSA) Sıçan

Burada bir prosedür, Escherichia coli K1 kültürleri ile neonatal sıçanda sistemik enfeksiyon kurulması için tarif edilmiştir. Bu non-invazif prosedür da koroid pleksusa de mide-bağırsak yolunun kolonizasyonu, sistemik dolaşıma patojenin translokasyonu ve merkezi sinir sisteminin istilası izin verir.

Neuropathogenic olmayan İnvaziv Modeli Escherichia coli Yenidoğan Sıçan Enfeksiyon

Prematüre ensefalopatisi, erken doğumdan kaynaklanan yaralanma ile ilişkili merkezi sinir sistemi anormalliklerini kapsar. Bu rapor, koryoamniyoniti taklit eden in utero geçici sistemik hipoksi-iskemi ve intra-amniyotik lipopolisakkarit uygulamasının (LPS) klinik olarak anlamlı bir sıçan modelini ve enfeksiyöz uyaranların ve plasental underperfüzyonun CNS gelişimi üzerindeki ilişkili etkisini açıklamaktadır.

Prematüre Modelleme Ensefalopati Sıçanlarda İçi amniyotik Lipopolisakkarid ile Prenatal Hipoksi-iskemi kullanma

İntravenöz endotoksin uygulaması, çeşitli patolojik durumlarla tutarlı doza bağlı fizyolojik ve immünolojik değişiklikleri güvenilir bir şekilde ortaya çıkarır. Bu indirgemeci yaklaşım, sistemik inflamasyonun ve insandaki aşağı yönlü etkilerinin araştırılmasına, modellenmesine ve deneysel olarak değiştirilmesine izin verir.

Sağlıklı İnsanlarda İntravenöz Endotoksin Mücadelesi: Deneysel Bir Platform Araştırma ve Sistemik Enflamasyon Değiştirmeye Yönelik

İmmün yetmezliği olan kemirgenlerde akciğer enfeksiyonları oluşturmak için bir yöntem tarif edilmiştir. Yeterlilikle, bu yöntem S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae ve A. baumannii birçok izolatı ile stabil enfeksiyonu indüklemek için hızlı ve kolay bir şekilde gerçekleştirilebilir.

Immünkompetan Kemirgenler bir Sağlam Pnömoni Modeli karşı antibakteriyel etkinliğini değerlendirmektir<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;<i&gt; H. influenza</i&gt;<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; ya da<em&gt; A. baumannii</em

Bu protokol, uzun süreli kritik hastalığın merkezi olarak kateterize edilmiş bir fare modelini tanımlar. Sepsisi indüklemek için çekal ligasyon ve ponksiyon yöntemini, insan klinik ortamını taklit etmek için sıvılar, ilaçlar ve besin uygulaması için merkezi bir venöz hat kullanımı ile birleştiriyoruz.

Kritik Hastalık Fare Modeli Sıvılar, Uyuşturucu ve Besin İdaresi için Santral Venöz Hattı Kullanımı

Neonatal farelerin biyolüminesans E. coli O1:K1:H7 ile enfeksiyonu, önemli pulmoner inflamasyon ve akciğer patolojisi ile septik enfeksiyona neden olur. Burada, sistemik bakteriyel yüklerin numaralandırılmasına paralel olarak uzunlamasına intravital görüntüleme, inflamatuar profilleme ve akciğer histopatolojisi ile birlikte neonatal sepsisin modellenmesi ve incelenmesi için yapılan prosedürleri açıklıyoruz.

Gram-Negatif Bakteriyel Sepsisin Yenidoğan Görüntüleme Modeli

Lipopolisakkarit infüzyonu ile domuzlarda deneysel bir endotoksemik şok modeli için bir protokol sunuyoruz.

Domuz Endotoksemik Şok Modeli Olarak Lipopolisakkarit İnfüzyonu

Bu protokol, bronkopulmoner displazinin moleküler tetikleyicilerinin anlaşılmasını kolaylaştırmak ve terapötik translasyonu geliştirmek için yetersiz yüzey aktif madde miktarı, hiperoksi, yüksek basınçlı ventilasyon ve inflamasyon dahil olmak üzere erken akciğerde meydana gelen erken patojenik olayları modelleyen akut akciğer hasarının yenidoğan domuz yavrusu modelinin geliştirilmesini açıklar.

Prematüre Bebek Akciğerlerinin Erken Ortamını Yeniden Yaratan Yenidoğan Domuz Yavrusu Akut Akciğer Hasarı Modelinin Geliştirilmesi

Bu çalışmada, invaziv olmayan endotrakeal instillasyon tekniğinin, akciğerlere hassas LPS iletimi sağlamak için temel bir laringoskop kullanılarak sıçanlarda ALI geliştirdiği gösterilmiştir. LPS, laringoskop kullanılarak endotrakeal tüp aracılığıyla yerleştirilir. Akciğer yaralanmasının büyüklüğü birden fazla zaman noktasında değerlendirilir.

Kemirgenlerde akut akciğer hasarını indüklemek için lipopolisakkaridin invaziv olmayan endotrakeal uygulaması

Keşfedin, sıçanlarda tekrarlanabilir endotoksin modeliyle sepsis araştırmalarında fizyolojik ve moleküler parametreleri sürekli değerlendirin. Bu yöntem, yoğun bakım odaklı çalışmalarda hayvan kullanımını azaltarak etik araştırmaya katkı sağlar.

Sıçanlarda Tekrarlanabilir Yoğun Bakım Ünitesi Odaklı Bir Endotoksin Modeli

Daha fazla video keşfet