Name: Memeli Sperm Hücrelerinin Plazma Zarı Boyunca Elektrik Akımlarının Kaydedilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Öğrenin, memeli sperm hücrelerinde iyon kanalı aktivitesini kaydetmek için patch-clamp tekniğini. Bu yöntem, CatSper kalsiyum kanalı ve erkek infertilitesi üzerine araştırmalarda kritik bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>IX71 DIC optikli</td><td>Olympus Inc</td><td>IX71</td><td>Nikon TiU mikroskobu da kullanılabilir</td></tr><tr><td>UplanSApo 60x</td><td>Olympus Inc</td><td></td><td>suya daldırma hedefi</td></tr><tr><td>Titreşim sönümleyici hava tablası</td><td>Newport Inc</td><td></td><td>TMC hava tablaları veya benzeri </td></tr><tr><td>Axopatch&trade; 200B amplifikatör</td><td>Axon&trade; &nbsp; /Moleküler Cihazlar</td><td></td><td>Sutter IPA&reg;/Double IPA&reg; Entegre patch kelepçe sistemi de mükemmel bir amplifikatörü</emdir></td></tr><tr><td>Axon Digidata analogdan dijitale dönüştürücü</td><td>Axon&trade; &nbsp; /Moleküler Cihazlar</td><td>1440 veya 1550</td><td> de kullanılabilir</td></tr><tr><td>Buhar basıncı osmometresi</td><td>Wescor</td><td>Model 5600</td><td></td></tr><tr><td>MPC 385 mikromanipülatörü</td><td>Sutter Instruments, Novato CA</td><td>MPC 385</td><td>Eppendorf mikromanipülatörü TransferMan serisi de kullanılabilir</td></tr><tr><td>Mikropipet çekici</td><td>Sutter Instruments, Novato CA</td><td>P1000</td><td>P97 kullanılabilir</td></tr><tr><td>MicroForge</td><td>Narishige</td><td>MF-830</td><td>Nikon MPlan 100/0.80 ELWD 210/0 objective</td></tr><tr><td>Faraday kafesi</td><td>Ev yapımı</td><td></td><td> ortam elektriksel müdahalesinden korumak için</td></tr><tr><td>&nbsp; 5 mm cam Kapak Kaytları</td><td>WPI</td><td>&nbsp;#502040</td><td></td></tr><tr><td>Perfüzyon odası</td><td>Warner Instruments, Inc.</td><td>&nbsp; RC-24E</td><td></td></tr><tr><td>Borosilikat cam kapiler</td><td>Sutter Instruments, Novato CA</td><td>BF 150-85-7.5</td><td>dış çapı 1,5 mm, iç çapı 0,86 mm ve iç filament</td></tr><tr><td>Teflon manifold MP-8</td><td>Warner Instruments, Inc.</td><td>64-0211</td><td>Teflon 8-pozisyonlu perfüzyon manifold</td></tr><tr><td>Nunc 4-kuyu levhası</td><td>Nunc</td><td>#179820</td><td></td></tr><tr><td>1 X HTF tamponu</td><td>EmbryoMax</td><td>MR-070-D</td><td>kapasitasyon çözümü</td></tr><tr><td>SA-Oly/2 aşamalı adaptör</td><td>Warner Instruments, Inc.</td><td>20. seri platformları için</td><td>sadece Olympus mikroskobu için</td></tr><tr><td>Manyetik ısıtmalı platform</td><td>Warner Instruments, Inc.</td><td>PM-1 veya benzeri seriler</td><td>RC-24E haznesini tutacak</td></tr><tr><td>MAG-1 manyetik kelepçe</td><td>Warner Instruments, Inc.</td><td>#64-0358</td><td></td></tr><tr><td>2mm Ag/AgCl pelletli mikroelektrot tutucu</td><td>WPI</td><td>MEH3F4515</td><td></td></tr><tr><td>Luer bağlantılı Stopcock; 4 taraflı; Erkek Kilit</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-30600&ndash; 09</td><td></td></tr><tr><td>Dişi luer hortumu barb adaptörü, 1/16"</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-45508&ndash; 00</td><td></td></tr><tr><td>Politetrafloroetilen (PTFE) perfüzyon boru</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-06417&ndash; 21</td><td>(Mikrobore PTFE Boru, 0.022" ID & Time; 0.042" OD)</td></tr><tr><td>Silikon konnektör boru (platin kürlenmiş silikon boru, 1/32" ID & Time; 3/32" OD)</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-95802&ndash; 01</td><td></td></tr><tr><td>Manifold konnektör borusu (PTFE Tubing, 1/32" ID & Time; 1/16" OD)</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-06407&ndash; 41</td><td></td></tr><tr><td>Erkek Luer serisi dikenli adaptörü, 1/16"</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>45518&ndash; 00</td><td></td></tr><tr><td>Erkek Luer integral kilit adaptörü 1/8"</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>45-503-04</td><td></td></tr><tr><td>Silikon konnektör borusu</td><td>Dow Silikon Şirketi; &nbsp; MI</td><td>#508-008</td><td></td></tr><tr><td>Şırıngalar</td><td>Fisher Scientific veya VWR</td><td>Air-Tite, Norm-Ject Luer</td><td>1 mL, 3mL ve 20 mL</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60216</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4 x 7.H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>63140</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 x 2.H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>21097</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7523-250G</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum laktat (%60 w/w/w)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L7900</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BCBG2421V</td><td></td></tr><tr><td>CsMeSO3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1426</td><td>Sezyum metansülfonat</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BCBF5871V</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HÇL</td><td>Kaliteli Biyolojik</td><td>315-006-721</td><td>1 M benzer</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465</td><td></td></tr><tr><td>CsOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>232041</td><td></td></tr><tr><td>Embryomax İnsan Tüp Sıvısı ortamı:</td><td>Millipore</td><td>MR-070-D</td><td>kapasitasyon ortamı</td></tr><tr><td>(Embriyomax-HTF)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Hayvanlar</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Erkek Wistar fareleri</td><td>Wistar</td><td>Harlan Laboratuvarları (Livermore, CA)</td><td>yetişkin fareler</td></tr><tr><td>Erkek C57BL/6 fareleri</td><td>C57BL/6 fareleri</td><td>Harlan Laboratuvarları (Livermore, CA)</td><td>< 3>6 aylık </td></tr></tbody></table>

memeli sperm hücrelerinin plazma zarı boyunca elektrik akımlarının kaydedilmesi

Recording Electrical Currents across the Plasma Membrane of Mammalian Sperm Cells

Memeli Sperm Hücrelerinin Plazma Zarı Boyunca Elektrik Akımlarının Kaydedilmesi

Recording of the electrical activity from one of the smallest cells of a mammalian organism- a sperm cell- has been a challenging task for ...

recording-electrical-currents-across-plasma-membrane-mammalian-sperm

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Görüntüleme Ca Teknikleri 2 + İnsan Sperm sinyal

Hücre içi Ca Ölçme<sup&gt; 2 +</supDört Teknikleri ile İnsan rm&gt; Değişiklikler: Konvansiyonel Florometre, Akış Florometre, Sitometrisi ve Tek Hücre Görüntüleme Durduruldu

Zebra balığı embriyolarının Mauthner nöronlar ve diğer reticulospinal hücrelerden yama kelepçe kayıt yoluyla elektriksel aktivitesini kaydetmek ve izlemek için sağlam bir beyin-omurilik hazırlık geliştirdik. Böylece, gelişmekte olan embriyo anahtar nöronlardan eksitatör ve inhibitör sinaptik akımları, voltaj-kapılı kanal aktivitesini ve aksiyon potansiyelleri kayıt edebiliyoruz.

Embriyonik Zebra balığı Mauthner Hücreler Patch Kelepçe Kayıtlar

Sıçan kauda epididimidlerinden primer dissosiye epitel hücrelerinin elektriksel özelliklerini ölçmek için hücre izolasyonunu ve tam hücreli yama klemp kayıtlarını birleştiren bir protokol sunuyoruz. Bu protokol, primer epididimal epitel hücrelerinin işlevsel özelliklerinin araştırılmasına ve epididimin fizyolojik rolünün aydınlatılmasına izin verir.

Epididimden İzole Edilmiş Primer Epitelyal Hücrelerin Tüm Hücreli Yama-Kelepçesi Kayıtları

Burada, metodolojileri spermatozoan membran bütünlüğü, sperm fertilizasyon yetki ile ilişkili bir hücresel özellik değerlendirmek için mevcut. Biz sperm membran fluorimetric değerlendirilmesi için üç teknikler tarif: eşzamanlı belirli floresan problar, floresans mikroskobu ve gelişmiş sperm adanmış akış sitometresi ile boyama. Örnek yöntemleri birleştirerek da sunulmaktadır.

Fluorimetric teknikleri Sperm membran değerlendirilmesi için

Burada, iki orta-den geçerek deneyleri Ca2 +etkileri değerlendirilmesi için-sinyalizasyon ve acrosome tepki insan sperm olarak açıklanmıştır. Bu deneyleri bileşikler üzerinde Ca2 +etkileri için büyük miktarda hızlı ve kolay bir ekran için kullanılabilir-insan sperm sinyal ve acrosome reaksiyon.

Orta-den geçerek deneyleri Ca2 +etkileri değerlendirilmesi için eleme-sinyal ve insan Sperm Acrosome reaksiyon

Fare sperm kapamanı sırasında glikoliz ve oksidatif fosforilasyondaki gerçek zamanlı değişiklikleri izlemek için hücre dışı akı analizörü uygulamasını tanımladık.

Fare Sperm Kapasasyonu Sırasında Glikoliz ve Oksidatif Fosforilasyondaki Değişiklikleri Ölçmek için Hücre Dışı Akı Analizörü Kullanma

Burada açıklanan AcroSensE fare modeli ve canlı hücre görüntüleme yöntemleri, sperm akrozomunun hücre altı bölmesindeki kalsiyum dinamiklerini ve bunların membran füzyonu ve akrozom ekzositozuna yol açan ara adımları nasıl düzenlediğini incelemek için yeni bir yaklaşım sağlar.

Canlı fare sperminde akrozomal kalsiyum dinamiği ve ekzositozun gerçek zamanlı görüntülenmesi

Dış elektrik alan bir hücre zarı üzerinde bir gerilim indükler kaynaklı membran gerilimi (ΔΦ) olarak adlandırılır. Potansiyometrik boya di-8-ANEPPS kullanarak, noninvaziv ΔΦ ölçmek mümkündür. Bu video ölçmek için protokol gösterir ΔΦ di-8-ANEPPS kullanarak.

Di-8-ANEPPS ile İndüklenmiş Membran Gerilim Ölçme

Bu protokol, flow sitometri ile hücre plazma membranı, sitoplazma GLUT4 translokasyon ölçmek hızlı bir teknik anlatılmaktadır.

Akış Sitometri Plazma Membran GLUT4 Translokasyon Kantitatif Ölçüm

Öğrenin, memeli sperm hücrelerinde iyon kanalı aktivitesini kaydetmek için patch-clamp tekniğini. Bu yöntem, CatSper kalsiyum kanalı ve erkek infertilitesi üzerine araştırmalarda kritik bilgiler sunar.

Memeli Sperm Hücrelerinin Plazma Zarı Boyunca Elektrik Akımlarının Kaydedilmesi

Daha fazla video keşfet