Name: Safra Kanalı TNBS infüzyonu ile Kronik Pankreatit için Bir Fare Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-28T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Öğrenin safra kanalı TNBS infüzyonu ile kronik pankreatit fare modeli oluşturmayı. Bu yöntem nöropatik ağrı mekanizmalarını incelemek ve tedavi stratejileri geliştirmek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Gazi İşleri Bakanlığı (VA-ORD BLR&D Merit I01BX004536) ve Ulusal Sağlık Enstitüsü tarafından desteklenmiştir # 1R01DK105183, DK120394 ve DK118529'dan HW'ye. Dr. Hongju Wu'ya teknik deneyimlerini paylaştığı için teşekkür ederiz.

Tüm prosedürler, Güney Carolina Tıp Üniversitesi ve Ralph H. Johnson Tıp Merkezi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitelerinin onayıyla gerçekleştirildi. Bu çalışmada 8-10 haftalık C57BL/6J erkek fareler kullanılmıştır. Fareler, yiyecek ve suya reklam libitumaccess ile standart bir 12 ışık / 12 karanlık döngü altında barındırıldı.
1. Enjeksiyon için TNBS çözeltisinin hazırlanması
<ol><li>% 0.9 salin içinde% 10 etanol hazırlayın. %10 etanol 1 mL'ye 7,5 μL TNBS ekleyerek stok TNBS'yi (bkz. Malzeme Tablosu)%10 etanol içinde 7,5 mM'lik nihai konsantrasyonda çözün. DİkKAT: TNBS kimyasal bir tehlike oluşturur. Çözeltiyi bir duman kaputunun içine hazırlayın ve TNBS ile doğrudan teması önlemek için eldiven, gözlük ve laboratuvar önlüğü gibi kişisel koruyucu ekipmanlar kullanın.</li>
	<li>50 μL%0,75 TNBS çözeltisini 31 kalibrelik bir iğne ile bir insülin şırıngasına yükleyin. Salin içinde araç kontrolü ile aynı boyutta bir şırınna 50 μL%10 etanol yükleyin. Şırınnaları buza yerleştirin ve ihtiyaç duyulana kadar ışıktan koruyun.</li>
</ol>2. Fare hazırlama ve ameliyat
<ol><li>Karın cerrahi bölgesinden saçları tıraş edin.</li>
	<li>Ameliyattan önce analjezik dozda (örneğin, buprenorfin 0.1 mg/kg i.p.) bir adet önceden enjekte edin.</li>
	<li>Fareyi% 1.5-2 izofluran ve 1 L / dk oksijen ile genel anestezi altında indükle ve koruyun. Parmakları sıkıştırarak ve hayvanı refleks eksikliği nedeniyle gözlemleyerek anesteziyi onaylayın.</li>
	<li>Ameliyat sırasında fareyi ısıtılmış bir cerrahi ped üzerine yerleştirin. Fare anestezi altındayken her göze veteriner merhem uygulayın.</li>
	<li>Cerrahi bölgeyi %2 iyotla 3x silerek, ardından %70 alkol(Malzeme Masası)ile dezenfekte edin.</li>
	<li>0,5-1 cm'lik bir kesi oluşturmak için mikro makasla laparotomi gerçekleştirin.</li>
	<li>Duodenumu hafifçe maruz bırak ve pamuklu çubuklar ( Malzeme Masası ) kullanarak ortak safrakanalınıbulun.</li>
	<li>TNBS veya araççözeltilerininkaraciğere ve safra kesesine akışını önlemek için proksimal ortak kanalın üzerine düz bir mikro hemo klipsi ( Malzeme Tablosu ) yerleştirin (Şekil 1A, B).</li>
	<li>Duodenumu hafifçe maruz koyun ve iğneyi Vater'in papillası aracılığıyla pankreas kanalına yerleştirin.</li>
	<li>İğne kanalın içine girdikten sonra, iğneyi yerine sabitlemek ve enjekte edilençözeltininduodenuma girmesini önlemek için iğneyi çevreleyen duodenumun üzerine kavisli bir mikro hemo klipsi(Malzeme Tablosu ) yerleştirin .</li>
	<li>Çözeltiyi (TNBS veya araç) bir dakika boyunca pankreas kanalına yavaş yavaş aşılayın. NOT: TNBS'nin bir dakika içinde yavaşça aşılanması gerekir ve pankreas 5/16 inç ve 31G iğneli bir insülin şırıngası ile perfüzyon edildiğinde infüzyon hızını kontrol etmek kolaydır. Safra kanalına batmamak için eli mümkün olduğunca sabit tutun. TNBS başarıyla enjekte edilirse, pankreasın içinde sarı renk görülebilir.</li>
	<li>İnfüzyondan sonra, karaciğerin yakınındaki mikro kelepçeyi dikkatlice çıkarın ve ardından iğneyi ve duodenumu tutan mikro kelepçeyi çıkarın.</li>
	<li>Duodenumu dikkatlice orijinal konumuna getirin.</li>
	<li>Duodenumun orijinal konumuna dönmesine yardımcı olmak ve peristalsin iyileşmesine yardımcı olmak için kapanmadan önce karın boşluğunda 0,5 mL sıcak steril salin (36-37 °C) bırakın.</li>
	<li>5-0 dikiş ile sürekli dikiş kullanarak kas tabakasındaki kesiği kapatın. 4-0 dikiş ile yarıda kalan dikiş kullanarak cildi kapatın.</li>
	<li>Anesteziden iyileşmeyi sağlamak için fareleri içeren kafesi bir ısıtma yastığına yerleştirin.</li>
	<li>Farelerin sıcak olduğunu ve bekleme odasına geri dönmeden önce spontan hareket edebildiğini onaylayın.</li>
	<li>Her 12 saatte bir analjezik (örneğin, buprenorfin 0.1 mg/kg i.p.) ve ameliyat sonrası 48 saat için ek ısı sağlamaya devam edin.</li>
</ol>3. Fare davranışını izleme
<ol><li>Ameliyat sonrası 7. günde dikişleri çıkarın.</li>
	<li>Ameliyat sonrası ilk hafta boyunca fare sağlığını ve davranışını günlük olarak izleyin. Seslendirme, kambur sırt duruşu veya daha az hareket etme gibi sıkıntı belirtilerine dikkat edin. Vücut ağırlığını her gün ölçün.</li>
	<li>Von Frey monofilamentlerini (VFF' ler) karın mekanik aşırı duyarlılığını ölçmek için kullanın ve ameliyat sonrası9,14olarak tanımlandığı gibi2,3 hafta.<ol>
<li>Her 1-2 sn'de 10x olan üst karın bölgesine artan sırada farklı uygulanan kuvvetlerin VFF'lerini uygulayın. Karnın yükseltilmesini, geri çekilmesini veya yalamasını (çekilme yanıtı) olumlu bir yanıt olarak düşünün.</li>
		<li>Olumlu bir yanıt gözlenmezse daha güçlü bir uyaran, olumlu bir yanıt gözlenirse daha zayıf bir uyaran uygulayın. Çekilme eşiği, farenin zamanın% 50'sini yanıtladığı kuvvettir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Pankreas dokusunun toplanması ve histolojik analizi
<ol><li>Servikal çıkık ile anestezi altındaki fareleri kurban edin ve pankreası bağırsaktan ve diğer organlardan dikkatlice parçalara ayırmayın.</li>
	<li>Pankreası 24 saat boyunca% 10 paraformaldehitte sabitleyin, parafin içine gömün, 5 μm kalınlığında doku bölümlerini kesin ve boyama için cam slaytlara yerleştirin.</li>
	<li>Hematoksilin-eosin ve Masson'un üç renkli boyamasını daha önce bildirildiği gibi standart yöntemler kullanarak gerçekleştirin4.</li>
</ol>

<ol><li>Klauss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+induced+vs.+classical+animal+models+of+chronic+pancreatitis%3A+a+critical+comparison%5BTitle%5D)+AND+%22The+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology+Journal%22%5BJournal%5D)">Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison.</a> The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).</li>
<li>Liao, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+2+is+involved+in+%C2%B5-opioid+receptor+suppression+in+the+spinal+dorsal+horn+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase 2 is involved in µ-opioid receptor suppression in the spinal dorsal horn in a rat model of chronic pancreatitis pain.</a> Molecular Medicine Reports. 17 (2), 2803-2810 (2018).</li>
<li>Gui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypsin+activity+governs+increased+susceptibility+to+pancreatitis+in+mice+expressing+human+PRSS1R122H%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Trypsin activity governs increased susceptibility to pancreatitis in mice expressing human PRSS1R122H.</a> The Journal of Clinical Investigation. 130 (1), 189-202 (2020).</li>
<li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Stem+Cell+Therapy+Mitigates+Chronic+Pancreatitis+via+Differentiation+into+Acinar-like+Cells+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Adipose Stem Cell Therapy Mitigates Chronic Pancreatitis via Differentiation into Acinar-like Cells in Mice.</a> Molecular Therapy. 25 (11), 2490-2501 (2017).</li>
<li>Aghdassi, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+investigating+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Fibrogenesis+and+Tissue+Repair%22%5BJournal%5D)">Animal models for investigating chronic pancreatitis.</a> Fibrogenesis and Tissue Repair. 4 (1), 26(2011).</li>
<li>Scoggins, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53-dependent+acinar+cell+apoptosis+triggers+epithelial+proliferation+in+duct-ligated+murine+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">p53-dependent acinar cell apoptosis triggers epithelial proliferation in duct-ligated murine pancreas.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 279 (4), 827-836 (2000).</li>
<li>Bradley, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+duct+pressure+in+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Pancreatic duct pressure in chronic pancreatitis.</a> The American Journal of Surgery. 144 (3), 313-316 (1982).</li>
<li>Zhao, J. B., Liao, D. H., Nissen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+pancreatitis%3A+can+it+be+translated+to+human+pain+study%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Animal models of pancreatitis: can it be translated to human pain study.</a> World Journal of Gastroenterology. 19 (42), 7222-7230 (2013).</li>
<li>Winston, J. H., He, Z. J., Shenoy, M., Xiao, S. Y., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+behavioral+changes+in+nociception+in+a+novel+rat+model+of+chronic+pancreatitis+for+the+study+of+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Molecular and behavioral changes in nociception in a novel rat model of chronic pancreatitis for the study of pain.</a> Pain. 117 (1-2), 214-222 (2005).</li>
<li>Cattaruzza, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+receptor+potential+ankyrin+1+mediates+chronic+pancreatitis+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Transient receptor potential ankyrin 1 mediates chronic pancreatitis pain in mice.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 304 (11), 1002-1012 (2013).</li>
<li>Bai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+insular+cortex+mediates+hyperalgesia+induced+by+chronic+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Anterior insular cortex mediates hyperalgesia induced by chronic pancreatitis in rats.</a> Molecular Brain. 12 (1), 76(2019).</li>
<li>Puig-Diví, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PAX4+Gene+Transfer+Induces+alpha-to-beta+Cell+Phenotypic+Conversion+and+Confers+Therapeutic+Benefits+for+Diabetes+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">PAX4 Gene Transfer Induces alpha-to-beta Cell Phenotypic Conversion and Confers Therapeutic Benefits for Diabetes Treatment.</a> Molecular Therapy. 24 (2), 251-260 (2016).</li>
<li>Ceppa, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+proteases+mediate+inflammatory+pain+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Serine proteases mediate inflammatory pain in acute pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (6), 1033-1042 (2011).</li>
<li>Puig-Divi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Xu, G. Y., Winston, J. H., Shenoy, M., Yin, H., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+excitability+and+suppression+of+A-type+K%2B+current+of+pancreas-specific+afferent+neurons+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Enhanced excitability and suppression of A-type K+ current of pancreas-specific afferent neurons in a rat model of chronic pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 291 (3), 424-431 (2006).</li>
<li>Drewes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+in+chronic+pancreatitis%3A+the+role+of+neuropathic+pain+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Pain in chronic pancreatitis: the role of neuropathic pain mechanisms.</a> Gut. 57 (11), 1616-1627 (2008).</li>
</ol>

Tüm yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Kronik pankreatit indükle etmek için TNBS'nin safra kanalı infüzyonu, farelerde teknik olarak zordur, çünkü farelerin% 22,5'i ilaç infüzyonunun 3-4 gün içinde ölebilir10. Burada, bu rapor önceki çalışmalara dayanarak prosedürü iyileştirdi ve erken fare ölüm oranını% <10'a düşürdü. Örneğin, artan ilaç hacmi (35 μL'den 50μL'ye kadar) ilaçların tüm pankreasa ulaşmasını sağlayabilir. Bir insülin şırıngası ve daha küçük bir iğne boyutu (31G) kullanmak, pankreas kanalına potansiyel hasarı ve safra keses...

Kronik pankreatit (CP), pankreas atrofisi, fibrozis, karın ağrısı ve hem ekzokrin hem de endokrin fonksiyonların nihai kaybı ile karakterize kronik bir enflamatuar hastalıktır1. Mevcut tıbbi ve cerrahi tedaviler iyileştirici değildir, ancak hastalığın sonucu olan semptomları hafifletmek için üstlenilir: refrakter karın ağrısı, endokrin ve ekzokrin disfonksiyon. Bu nedenle, acilen daha etkili tedavilere ihtiyaç vardır2. Hayvan modelleri, hastalığın daha iyi anlaşılması ve potansiyel terapötiklerin araştırılması için gerekli bir araç sağlar3. CP için cerulein ve/veya alkol modellerinin yaygın olarak kullanıldığı birden fazla fare modeli geliştirilmiştir. Bir oligopeptid uyarıcı pankreas salgısı olan Cerulein'in, pankreas atrofisi, fibrozis içeren bir CP modelini tekrar tekrar teşvik ettiği gösterilmiştir4. Başka bir yaygın model, insan hastalarda gözlemlenene benzer ekzokrin yetmezlik üreten L-arginin seri enjeksiyonlarını kullanır5. CP ayrıca komple veya kısmi pankreas kanalı ligasyonu ve pankreas kanalıhipertansiyonu 6,7ile de indüklenebilir. CP için mevcut hayvan modellerinin çeşitliliğine rağmen, bu modellerin hiçbiri CP hastalarının yaşadığı karın ağrısını etkili bir şekilde yeniden üretmez8.
Önceki çalışmalar, 2,4,6 -trinitrobenzen sülfikonik asit (TNBS) lokal pankreas enjeksiyonunun CP hastalarının yaşadığı kalıcı ağrıyı9, 10,11çoğaldığını göstermiştir. TNBS ile tedavi edilen fareler, karın aşırı duyarlılığı ve ağrıya bağlı davranışların artmasının yanı sıra, CP hastalarında gözlenen bir fenomen olan ağrılı uyaranlara "genelleştirilmiş aşırı duyarlılık" göstermiştir10. CP ağrısını doğru bir şekilde taklit etmenin yanı sıra, TNBS modeli ayrıca fibrozis, mononükleer hücre infiltrasyon ve acınar hücrelerin yağ dokusu ile değiştirilmesi gibi insan durumunun diğer patolojik özelliklerini de çoğaltır10,12. Bununla birlikte, safra kanalı ile TNBS infüzyonu, farelerde ölüme neden olabilecek teknik olarak zorlu bir prosedürdür. Bilgimize göre, safra kanalı infüzyonunun nasıl yapıldığını gösteren görsel bir protokol yoktur. Bu yazıda, bir CP fare modeli oluşturmak için TNBS safra kanalı infüzyonunun prosedürünü gösteriyoruz. Bu prosedür CP ve diğer pankreas hastalıklarının incelenmesi için değerli hayvan modelleri üretmeye yardımcı olacak ve pankreas13'ediğer malzemeleri (örneğin virüs, hücreler) aşılamak için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>% 10 Nötr tamponlu formalin v / v</td><td>Fisher Scientific</td><td>23426796</td><td></td></tr><tr><td>Alkol hazırlama pedleri, steril</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>Hayvan Anestezi sistemi</td><td>VetEquip, Inc.</td><td></td><td></td>901806</tr><tr><td>Buprenorfin hidroklorür, enjeksiyon</td><td>Par Steril Ürünler, LLC</td><td>NDC 42023-179-05</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj tüpleri, 15 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>0553859A</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, mutlak (200 kanıt), moleküler biyoloji sınıfı</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>Ekstra ince Mikro Diseksiyon makası 4" düz keskin</td><td>Roboz Cerrahi Enstrüman A.Ş.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Graefe forseps 4" ekstra hassas uç</td><td>Roboz Cerrahi Alet A.Ş.</td><td>RS-5136</td><td></td></tr><tr><td>Isıtmalı ped</td><td>Amazon</td><td>B07HMKMBKM</td><td></td></tr><tr><td>Hegar-Baumgartner İğne Tutucu 5.25"</td><td>Roboz Cerrahi Alet A.Ş.</td><td>RS-7850</td><td></td></tr><tr><td>31 gauge iğneli insülin şırıngası</td><td>BD</td><td>324909</td><td></td></tr><tr><td>İyot hazırlama pedleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027048</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Piramal Yoğun Bakım</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>Forseps uygulayan mikro klips 5.5"</td><td>Roboz Cerrahi Alet A.Ş.</td><td>RS-5410</td><td></td></tr><tr><td>Mikro klip, düz güçlü kavisli 1x6mm</td><td>Roboz Cerrahi Alet A.Ş.</td><td>RS-5433</td><td></td></tr><tr><td>Mikro klips, düz, 0.75mm klips genişliği</td><td>Roboz Cerrahi Alet A.Ş.</td><td>RS-5420</td><td></td></tr><tr><td>Pikrilsülfonik asit çözeltisi, TNBS, H2O</td><td>Millipore Sigma</td><td>92822-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Polipropilen Sütür 4-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8683</td><td></td></tr><tr><td>Polipropilen Sütür 5-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8661</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür, %0.9 intravenöz solüsyon</td><td>VWR</td><td>2B1322Q</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi örtü, steril</td><td>Med-Vet International</td><td>DR1826</td><td></td></tr><tr><td>Doku Kaseti</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-272416</td><td></td></tr><tr><td>Von Frey filamentleri</td><td>Bioseb</td><td>EB2-VFF</td><td></td></tr></tbody></table>

safra kanalı tnbs infüzyonu ile kronik pankreatit için bir fare modeli

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Kronik pankreatit (CP), pankreas iltihabı ve fibrozis, glandüler atrofi, karın ağrısı ve diğer semptomları içeren karmaşık bir hastalıktır. Safra kanalı 2,4,6 -trinitrobenzen sülfikonik asit (TNBS) infüzyon modelinin CP'de görülen nöropatik ağrının özelliklerini çoğalttığı CP'yi incelemek için çeşitli kemirgen modelleri geliştirilmiştir. Bununla birlikte, farelerde safra yolu ilaç infüzyonu teknik olarak zordur. Bu protokol, cp fare modeli üretimi için safra kanalı TNBS infüzyon prosedürünü gösterir. TNBS, duodenumdaki Vater ampullası aracılığıyla pankreasa aşılandı. Bu protokol, işlem sırasında ilaç hacmini, cerrahi teknikleri ve ilaç kullanımını optimize etti. TNBS ile tedavi edilen fareler, vücut ağırlığı ve pankreas kilo azalmaları, ağrıya bağlı davranışlardaki değişiklikler ve anormal pankreas morfolojisi ile yansıtıldığı gibi CP özellikleri gösterdi. Bu gelişmelerle TNBS enjeksiyonu ile ilişkili mortalite en az düzeydeydi. Bu prosedür sadece pankreas hastalığı modellerinin oluşturulmasında kritik değildir, aynı zamanda lokal pankreas ilacı dağıtımında da yararlıdır.

Safra kanalı infüzyon prosedürleri, bu prosedürle ilişkili fare mortalitesini azaltmak için optimize edilmiştir10. TNBS ilk olarak toplam 35 μL veya 50 μL hacimde verildi. TNBS'nin 50 μL'lik bir hacimde enjeksiyonu tüm pankreasa ulaşabilir ve daha homojen bir hastalık fenotipine neden olabilir (Şekil 1B). Ek olarak, 31G iğne ile insülin şırıngası kullanılarak TNBS enjeksiyonu, düzenli şırıngalara ve iğne boyutlarına göre infüzyon hızını daha iyi kontrol edebilir. Buz ...

Kronik pankreatit (CP), genellikle inatçı karın ağrısı ile ilişkili olan pankreasın iltihabı ve fibrozisi ile karakterize bir hastalıktır. Bu makalede, 2,4,6 -trinitrobenzen sülfiyonik asit (TNBS) ile safra kanalı infüzyonu yoluyla CP'nin fare modelini oluşturma tekniğinin iyileştirilmesine odaklanmaktadır.

Safra Kanalı TNBS infüzyonu ile Kronik Pankreatit için Bir Fare Modeli

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

Kronik pankreatit, pankreas iltihabı, fibrozis, karın ağrısı ve diğer semptomları içeren karmaşık bir hastalıktır. Safra kanalı TNBS infüzyon modeli kronik pankreatit hastalarında gözlenen nöropatik ağrıyı çoğaltır. Bu safra kanalı TNBS infüzyon protokolü, farelerde kronik pankreatit modelinin üretilmesini sağlamak için optimize edilmiştir.Farelerde safra kanalı ilaç füzyonu teknik olarak zor olduğundan, görselleştirilmesi yönteme yeni yeni araştırmacılara yardımcı olacaktır. Ameliyattan önce ve ameliyattan iki ve üç hafta sonra, von Frey monofilamentlerini kullanarak sekiz ila 10 haftalık bir C57 siyah altı farenin üst karın bölgesine, uygulama başına bir ila iki saniye boyunca 10 kez artan bir şekilde farklı kuvvet seviyeleri uygulayın. Olumlu bir yanıt olarak karın geri çekilmesini veya yalamasını yükseltmeyi düşünün.Daha sonra, taze hazırlanmış yüzde 0,75 TNBS çözeltisinin 50 mikrolitresi ile 31 kalibrelik bir iğne ile donatılmış bir insülin şırıngası yükleyin. İkinci bir şırıngayı salin içinde yüzde 10 etanolden oluşan 50 mikrolitre ile araç kontrolü olarak yükleyin ve her iki şırıngayı da ışıktan korunan buza yerleştirin. Pedal refleksine yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, epilasyon kremini tıraş ederek veya uygulayarak anestezi yapılan farenin karın bölgesinden saçı çıkarın ve fareyi bir diseksiyon mikroskobu altında ısıtılmış bir cerrahi ped üzerine yerleştirin.Her göze veteriner merhem uygulayın ve cerrahi bölgeyi üç sıralı iki yüzde iyot ve üç yüzde 70 etanol mendili ile dezenfekte edin, tek bir sürekli harekette 0,5 ila bir santimetrelik bir kesi yapmak için mikro makas kullanın ve duodenumu hafifçe ortaya çıkarmak ve ortak safra kanalını bulmak için pamuklu çubuklar kullanın. Tedavinin karaciğer ve safra kesesine akışını önlemek için mikroskobu kullanarak proksimal ortak kanalın üzerine düz bir mikro hemoklip yerleştirin ve TNBS yüklü şırınganın iğnesini vater papillası aracılığıyla pankreas kanalına yerleştirin. İğneyi sabitlemek için kavisli bir mikro hemoklip kullanın ve çözeltiyi bir dakika boyunca pankreas kanalına aşılayın.Tüm çözelti teslim edildiğinde, mikro kelepçeleri dikkatlice çıkarın ve duodenumun orijinal konumuna geri döndüğünü onaylayın. Karın boşluğunu kapatmadan önce, duodenumun orijinal konumuna dönmesine yardımcı olmak ve peristalsis'in iyileşmesine yardımcı olmak için 36 ila 37 santigrat derecelik 500 mikrolitre steril salin ekleyin. Kas tabakasındaki kesiği kapatmak için beş-O dikişli sürekli bir dikiş kullanın ve dört-O dikişli kesik bir dikiş kullanarak cildi kapatın.Daha sonra fareyi tam görev süresine kadar izleme ile bir ısıtma yastığı üzerinde bir kurtarma kafesine yerleştirin. Seslendirme, kambur sırt duruşu gibi sıkıntı belirtileri için ameliyat sonrası ilk hafta boyunca günlük fare sağlığını ve davranışını izleyin veya hareket hızını azaltın ve vücut ağırlığını her gün ölçün. Gözlemlendiği gibi, 50 mikrolitre mürekkebin gösterdiği gibi enjeksiyonu, tüm pankreasın sızmasına neden olur ve daha homojen bir hastalık fenotipinin indüksiyonuna izin verir.Bu temsili analizde, ameliyattan sonraki ilk üç gün içinde, kontrol grubundaki fareler yavaş yavaş iyileşmeden ve 21. Buna karşılık, TNBS alan fareler ameliyattan sonraki ilk beş gün boyunca orijinal vücut ağırlıklarının yaklaşık yüzde 15'ini kaybettiler ve 21. Kontrol fareleri ile karşılaştırıldığında, TNBS enjekte edilen hayvanlar ameliyattan sonraki ikinci ve üçüncü haftalarda karın mekanik aşırı duyarlılığının arttığını göstermiştir.Pankreasların vücut ağırlığı başına büyüklüğü ve ağırlığı, kontrol hayvanlarından hasat edilen pankreaslara kıyasla TNBS farelerinde önemli ölçüde azaltılmış, bu da TNBS ile tedavi edilen hayvanlarda şiddetli ve uzun süreli kronik pankreatitli insanlardaki bulgularla tutarlı belirgin bir pankreas atrofisi olduğunu düşündürmektedir. Kontrol etanol işlem görmüş farelerden pankreas dokusu bölümlerinin histolojik analizi normal bir morfoloji gösterirken, TNBS ile tedavi edilen farelerden alınan doku bölümleri, yağ hücresi infiltrasyon ve fibrozis ile değiştirilen büyük bir acınar hücre kaybı ile boş bir farkındalık sergiledi. Enjekte edilen TNBS'nin gal mesanesi ve bağırsağa girmesini önlemek, TNBS'nin dokuya zarar veren etkileri olduğu için önemlidir.infüzyon sırasında, safra kanalını delinme etkili önlemek için eli mümkün olduğunca sabit tutun. Kronik pankreatit gelişimini teşvik etmenin yanı sıra, bu safra kanalı infüzyon fareleri sanatı diğer pankreas hastalığı modellerinin gelişimi için kullanılabilir. Bu TNBS kronik pankreatit fare modeli, kronik pankreatit ve diğer pankreas hastalıklarının hem patogenezi hem de tedavisini incelemek için kullanılabilir.

a-mouse-model-for-chronic-pancreatitis-via-bile-duct-tnbs-infusion

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, sodyum taurokolatın pankreas infüzyonu yoluyla akut biliyer pankreatitli bir fare modelinin oluşturulması prosedürü açıklanmaktadır. Bu model, pankreasta sodyum taurokolatın neden olduğu patofizyolojik değişikliklerin incelenmesine yardımcı olur.

Akut Biliyer Pankreatit Modeli: Pankreas Kanalı İnfüzyonu Yoluyla Akut Biliyer Pankreatit Fare Modeli Oluşturmak İçin Bir Yöntem

Şiddetli akut pankreatit için hayvan modelleri, ilk aşamada patofizyolojik değişikliklerin incelenmesini sağlayarak enflamatuar olayların evriminin gözlemini kolaylaştırır. Burada, anestezi edilmiş C57BL/6 farelerin pankreas kanalına sodyum taurokolatın retrograd infüzyonu ile şiddetli akut safra pankreatit indüksiyonu için bir protokol sunuyoruz.

C57BL/6 Farelerde Sodyum Taurokolat İndüklenen Şiddetli Akut Pankreatit

Burada şiddetli akut pankreatit fare modeli açıklanmıştır. Burada sunulan prosedür çok hızlı, basit ve erişilebilirdir, böylece akut pankreatitteki moleküler mekanizmaların ve farklı terapötik müdahalelerin uygun bir şekilde incelenmesine izin verir.

Biliopankreatik Kanala Sodyum Taurocholate Retrograd Enjeksiyonu Kullanılarak Fare Şiddetli Akut Pankreatit Modelinin Kurulması

Biliyer atrezinin (BA) virüs kaynaklı karaciğer fibrozis mekanik çalışması için uygun bir hayvan modeli ve gelecekteki BA tedavileri için bir platform sağlayan kronik karaciğer fibrozisinin fare modelini oluşturduk.

Biliyer atrezi çalışması için kronik karaciğer fibrozisinin bir fare modeli

İntraperitoneal ilaç uygulaması, pankreas hasarını indüklemek için güvenli ve etkili bir non-invaziv yaklaşımdır. Bu çalışma, değişen derecelerde pankreas hasarını indüklemek için fareler üzerinde beş farklı intraperitoneal enjeksiyon protokolünü karşılaştırdı ve şiddetli akut pankreatit (SAP) için patolojik değişiklikleri ve tedavi stratejilerini araştırmak için bir ciddi pankreas hasarı modeli oluşturdu.

Semoreuin ve lipopolisakkarit intraperitoneal enjeksiyonunun bir kombinasyonu ile şiddetli akut pankreatitin bir fare modelinin hazırlanması

Bu protokol, pankreas kanalının görselleştirilmesini ve pankreas kanalı tıkanıklığına neden olmak için pankreas kanalının elektrokoagülasyonunu içeren kronik obstrüktif pankreatitin modellenmesine yönelik yeni bir yaklaşımı açıklamaktadır.

Elektrokoagülasyon Yoluyla Oluşturulan Obstrüktif Kronik Pankreatit Modeli

Wharton kanalı üzerinden fare submandibular tükürük bezi kanülasyonu için bir protokol açıklanmıştır. Bu deneme için, tripan mavi çözümü, bu tekniği etkin bir şekilde hedeflenen bezine infüzyonları dağıtımını nasıl göstermek için, bu yeni yaklaşımın güvenilirliğini ve tükürük bezlerinin rejenerasyonu için potansiyel bir klinik ilaç / hücre tedavisi olarak önermek için bir boyacı olarak kullanılır.

Wharton Kanalı üzerinden Fare Submandibular Tükürük Bezi kanülasyonu

Görselleştirilmesi ve fare hepatik ven veya intrahepatik safra kanalı 3-boyutlu yapısının nicel bir yöntem tarif edilmektedir. Bu reçine döküm yöntemiyle aynı zamanda diğer duktal ya da damar sistemlerine uygulanabilir ve olanak...

3-Boyutlu Reçine Döküm ve Fare Portal Ven veya intrahepatik safra Sisteminin Görüntüleme

Farelerde glukoz ve Intralipid kronik infüzyon için bir protokol açıklanmıştır. Bu model, organ fonksiyonu ve fizyolojik parametreler üzerindeki besin aşırı etkisini incelemek için kullanılabilir.

Sıçan Kronik Besin İnfüzyon Bir Model

Kronik oküler hipertansiyon fare gözünde Trabeküler ağın laser kullanılarak meydana gelir. Göz içi basıncı (GİB) lazer tedavi sonrası birkaç ay boyunca yükselir. Görme keskinliği ve Deney hayvanlarının kontrast duyarlılık azalması optomotor testi kullanılarak izlenir.

Görme Kusurları karakterize Kronik Oküler Hipertansiyon bir Lazer-kaynaklı Fare Modeli

Öğrenin safra kanalı TNBS infüzyonu ile kronik pankreatit fare modeli oluşturmayı. Bu yöntem nöropatik ağrı mekanizmalarını incelemek ve tedavi stratejileri geliştirmek için kullanılır.

Safra Kanalı TNBS infüzyonu ile Kronik Pankreatit için Bir Fare Modeli

Daha fazla video keşfet