Name: Multipl Sklerozun Lysolecithin Rat Modelinde Miyelin İçeriğinin In Vivo Ölçümü için Pozitron Emisyon Tomografi Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-28T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: Keşfedin, multipl sklerozun lysolecithin sıçan modelinde miyelin içeriğinin in vivo ölçümü için PET görüntüleme yöntemini. Bu protokol demiyelinizasyon ve remiyelinizasyon süreçlerinin uzunlamasına değerlendirilmesine olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

β küpü ekipmanı (Molecubes NV, Belçika), São Paulo Araştırma Vakfı, FAPESP - Brezilya (#2018/15167-1) tarafından desteklendi. LES, FAPESP - Brezilya'dan (#2019/15654-2) doktora öğrencisi bursuna sahiptir.

Tüm prosedürler, Ulusal Hayvan Deneyleri Konseyi'nin (CONCEA, Brezilya) yönergelerine uygun olarak yürütüldü ve Sao Paulo Üniversitesi Tıp Fakültesi Hayvan Araştırmaları Etik Komitesi tarafından onaylandı (CEUA-FMUSP, Brezilya - protokol numarası: 25/15).
NOT: Bu protokolde, multipl sklerozun lysolecithin sıçan modelinin nasıl indüklendiğini ve miyelin PET görüntülerinin nasıl elde edilir ve analiz edilir.
1. Lysolecithin çözelti hazırlığı
<ol><li>Konik plastik bir tüp (1,5 mL) kullanarak analitik ölçekte lizolsitin (L-α-Yumurta sarısından L-α-Lizosfatidylcholine) tartın.</li>
	<li>% 1 çözelti yapmak için tüpe steril salin ekleyin (örneğin: 1 mg lysolecithin tartın ve 100 μL salin ile çözün) ve tüpü sallayarak (bir yandan diğer yana sallayarak ve yukarıdan aşağıya dönmeyerek) lysolecithin'i çözün.</li>
	<li>Hayvan modeli indüksiyonunu başlatmadan hemen önce çözeltiyi hazırlayın (nihai hazır çözeltiyi stoklayın).</li>
</ol>2. Lysolecithin sıçan modeli - Stereotaksik cerrahi
<ol><li>220 - 270 g ağırlığında erkek Wistar sıçanları kullanın. Tüm prosedürler sırasında eldiven ve maske kullanın.</li>
	<li>İndüksiyon kutusu kullanarak %100 O2 'de (1 L/dk) karıştırılan %5 izofluran ile anesteziye neden olur. Hareket yokluğunu gözlemleyerek hayvanın uyuşturulup uyuşturulmamış olup olmadığını kontrol edin (sadece solunum gözlenmelidir).</li>
	<li>Hayvanı bir ısıtma yastığına stereotaksik aparatlara yerleştirin. Hayvanın burnunu ve kulaklarını ekipmana sabitle. NOT: Stereotaksik cerrahinin nasıl yapılacağının ayrıntıları JoVE Science Education Database'de bulunabilir. Sinirbilim. Kemirgen Stereotaksik Cerrahisi. JoVE, Cambridge, MA, 2021.<ol>
<li>Anesteziyi tüm prosedür için izleyin (ameliyat ve görüntü alımı dahil). İzofluran konsantrasyonu ayarlamak için hayvan solunum hızını gözlemleyin. Hızlı nefes alma hızı daha yüksek konsantrasyon gerektirir ve yavaş nefes alma hızı daha düşük anestezik konsantrasyon gerektirir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Analjezik (ketoprofen - 5 mg / kg) deri altından enjekte edin (ilacı salin içinde 1 mL'ye seyreltin, bu hayvanı nemlendirmeye yardımcı olacaktır).</li>
	<li>Dehidrasyondan korunmak için hayvanın gözlerine göz kremi koyun.</li>
	<li>Kesi alanını temizlemek için% 0,5 klorheksidin çözeltisi kullanın.</li>
	<li>Kesi bölgesinde 100 μL lidokrin hidroklorür% 2 deri altından enjekte edin.</li>
	<li>Kafatası bölgesini tıraş et.</li>
	<li>Bu işlem için steril aletler kullanın.</li>
	<li>Neşter kullanarak, kafatası üzerinde deride yaklaşık 2 cm'lik bir kesi yapın.</li>
	<li>Kafatasını Bulldog kıskaçlarıyla ortaya çıkar.</li>
	<li>Kafatası bölgesini% 1 hidrojen peroksidaz ile temizlemek için bir çubuk kullanın.</li>
	<li>Bregma'yı bulun ve işaretleyin (stereotaksik sıçan beyin atlası Bregma'nın kimliğinin tespit edilmesine yardımcı olabilir).</li>
	<li>Hamilton şırıngını (μL nöros şırıng) bregma'ya yerleştirin.</li>
	<li>Bregma ve stereotaksik atlası referans olarak kullanarak Hamilton şırıngını aşağıdaki koordinatlara yerleştirin: Antero-posterior: -0.30 mm, latero-lateral: -3.0 mm ve kafatası kemiğine dokunana kadar ventral, kafatasını işaretleyin ve koordinatların yönünü kağıda not edin.</li>
	<li>Kafatasını işaretli koordinatta del. Dura mater'e dikkat et (dura mater'e zarar vermek çok fazla kanamaya neden olabilir).</li>
	<li>Hamilton şırındını 7 μL lysolecithin çözeltisi (%1 salin) ile doldurun. Şırıng içine daha büyük bir hacim yerleştirilecektir, ancak sadece 7 μL enjekte edilecektir (hacmi doğru ölçmek için kabarcıkları şırınnadan alın).</li>
	<li>Hamilton şırıngını ilaç enjeksiyonunu başlatmak için önceki koordinatlara yerleştirin (3 farklı ventral stereotaktik koordinata toplam 7 μL). Daha önce belirtilen koordinatları göz önünde bulundurarak, Hamilton şırındıcını ventral koordinat -5.0 mm'ye düşürün.</li>
	<li>Çok yavaşça 2 μL lysolecithin çözeltisi (1 μL / 10 dk) enjekte edin. 3 dakika bekleyin.</li>
	<li>İğneyi bir sonraki ventral stereotaksik koordinata (-4,2 mm) alın ve yavaşça 2μL lysolecithin çözeltisi (1 μL / 10 dk) enjekte edin. 3 dakika bekleyin.</li>
	<li>Üçüncü ventral koordinatı -3,0 mm (3 μL lysolecithin çözeltisi - 1 μL / 10 dk) enjekte edin.</li>
	<li>5 dakika bekleyin ve hamilton şırındıcını beyinden çıkarın.</li>
	<li>Cildi dikin.</li>
	<li>Hayvanı stereotaktik aparattan çıkarın ve hayvanın uyanmasına izin verin.</li>
	<li>Hayvanı ev kafesine geri koyun, rahatsızlık belirtilerini kontrol etmek için hayvanı yalnız ve gözetim altında tutun.</li>
	<li>Ameliyattan sonra 24 saat ve 48 saat salin seyreltilmiş deri altı analjezik (ketoprofen - 5 mg / kg) enjekte edin.</li>
</ol>3. PET satın alma
<ol><li>Bir şırında 7 ila 20 MBq 11C-PIB radyoaktivite alın (1 mL sıçanlarda intravenöz enjeksiyon için izin verilen maksimum hacimdir).</li>
	<li>İndüksiyon kutusunu kullanarak% 100 O 2 'de (1 L / dk) karıştırılan%5 izofluran ile hayvanı uyuşturun.</li>
	<li>Penis damarına veya sıçanın kuyruk damarına 11C-PIB (yukarıdaki madde 4.1'de tanımlanan radyoaktivite) enjekte edin (her iki yönetim bölgesi de iyidir, karar kişisel bir seçimdir). Sadece retro-orbital enjeksiyon kullanmamanızı tavsiye ediyoruz, çünkü konum ilgi alanına (beyin) çok yakın ve görüntü kalitesini bozabilir. NOT: Stereotaksik enjeksiyondan önce taban çizgisi zaman noktasının görüntü alımı, diğer 2 zaman noktası ise ameliyattan 1 hafta 4 hafta sonra gerçekleştirilir.</li>
	<li>Hayvanın uyanmasını sağlamak için hayvanı anesteziden çıkarın (hayvanı tamamen uyanana kadar ılık bir ped üzerinde bırakın).</li>
	<li>Hayvanı ev kafesine geri verin.</li>
	<li>Bir sonraki adım için 30 dakika bekleyin.</li>
	<li>Bir indüksiyon kutusu kullanarak% 100 O 2 'de (1 L / dk) karıştırılan%5 izofluran ile sıçanları uyuşturun.</li>
	<li>PET tarayıcı yazılımını açın.</li>
	<li>Tarama > Evcil Hayvan Hazır 'ıseçin.</li>
	<li>Tam baş araştırmacı ayrıntıları, Çalışma Kimliği, Seri Kimliği, Hayvan Kimliği, Hayvan ağırlığı (g) ve Ek notlar. İleri 'yiseçin. NOT: Hayvan ağırlığındaki ondalık sayı için nokta (.) kullanın.</li>
	<li>Yatırım getirisi alanını tarama için düzenleyin (genellikle 3 ile 8 arasında). Bu, görüntüye dahil edilecek alandır (yatak örtüsünün 3 ve 8 numaraları arasındaki alanlar son görüntüde görünecektir).</li>
	<li>Anestezi yapılan sıçanı PET tarayıcısının standart bir sıçan yatağına yerleştirin ve anesteziyi açın (%100 O2'de % 3 izofluran iyi bir başlangıçtır ve daha sonra anestezi oranı gerektiği gibi ayarlanmalıdır). Anesteziyi ayarlamak için, hayvanın sabit ve yavaş bir ritimde nefes aldığını doğrulamak için tarayıcı yazılımının izleme verilerini kontrol edin. NOT: Isoflurane gazı fazlalığını toplamak için (pompa varsa) aktif karbon filtresine bağlı vakum pompasını açın.</li>
	<li>Hayvanın gözlerini korumak için göz kremi uygulayın.</li>
	<li>Hayvan yatağını PET tarayıcının içine itin.</li>
	<li>Tam Etkinlik ayrıntıları, Etkinlik Kalibrasyon Süresi, İzotop (C-11) ve Tarama süresi (20 dakika). Taramayı Başlat 'ıseçin. NOT: Evcil Hayvan Hareketli Yatak mesajı görünecek ve hayvan yatağı ekipmana taşınacak ve daha önce seçilen yatırım getirisi konumunda duracaktır. Edinme zamanı geri sayıma başlar ve saniye başına sayım sayısı (CPS) görünür.</li>
	<li>Tarayıcı yazılımında, ekranın solundaki Monitör sekmesine gidin, Eşiği Solunum parametreleri değişikliğine (BPM) değiştir'i kontrol edin. NOT: Eşik parametresi (500) ile tamamlanan bir pencere açılır. Tamam 'ıseçin.</li>
	<li>Tarama sırasında hayvanı ısıtmak için sıcaklık parametrelerini değiştirmek için % 0 GÜÇ'e gidin. Bir pencere açılır; parametreyi tamamlayın (80 - 100). Tamam 'ıseçin. NOT: Oda sıcaklığı koşullarına göre %80 ila %100 güç seçin (ne kadar fazla güç, o kadar ısınır).</li>
	<li>SCAN sekmesine geri dönün.</li>
	<li>Yapılandırma aracına (dişli simgesi) gidin ve Enjeksiyon Süresi, Kalan Etkinlik, Kalan Etkinlik Kalibrasyon Süresi 'nitamamlayın. Kaydet 'iseçin. NOT: "Protokol meta verilerini değiştirmek istediğinizden emin misiniz?" > EVET</li>
	<li>Monitör sekmesine geri dönün (hayvanın solunum parametrelerini kontrol edin ve gerekirse izofluran konsantrasyonu artırın veya azaltın - genellikle% 100 O2'de% 3 yeterlidir).</li>
	<li>PET alımı tamamlandığında, Pet Ready mesajı Tarama sekmesinde görünecektir, hayvan yatağını taşımak için Ok Dışarı Simgesi'ni (yapılandırma aracının solunda) işaretleyin.</li>
	<li>Hayvanı anesteziden çıkarın ve ılık bir ped üzerinde uyanmaya bırakın.</li>
	<li>Görüntüyü yeniden oluşturmak için Yeniden Yapılandır sekmesine gidin.</li>
	<li>Ekranın sol alt kısmındaki artı simgesini kontrol edin ve yeniden inşa edilecek çalışma dosyasını seçin. İleri 'yiseçin.</li>
	<li>Enerji Çözünürlüğü aracına gidin. Bir pencere açılacak. Enerji zirvesini (keV) ekipman parametresine göre yapılandırın (aylık kalite kontrolüne göre). Kapat 'ıseçin. NOT: Aylık ekipman kalibrasyonu yapılırken enerji zirvesi her ay değişebilir.</li>
	<li>Diğer tüm parametreleri varsayılan olarak saklayın (İzometrik voksel boyutu: 400 mm; yineleme sayısı: 30; Enerji çözünürlüğü: %30; Yalnızca son yinelemeyi kaydet; ikili verileri koru) seçeneğinin işaretini kaldırın.</li>
	<li>Ekle 'yi denetleyin. NOT: "Yeniden yapılandırma kuyruğa eklendi ve diğerleri bittikten sonra başlayacak" penceresi açılır. Tamam 'ıseçin. Yeniden yapılandırma sekmesindeki yeniden yapılandırma listesinde bir dosya görüntülenir ve durum bekleme veya % (ilerleme) veya tamamlandı olarak görünür.</li>
</ol>4. Görüntü Analizi
NOT: Özel görüntü analizi yazılımı kullanarak görüntü analizi yapın. Geçerli protokolde gösterim belirli bir yazılım programı kullanır, ancak kullanılamıyorsa, başka seçenekler de kullanılabilir.
<ol><li>PMOD > Fuse it 'iaçın.</li>
	<li>Ekranın üst kısmındaki Eşleşen sekmesine gidin.</li>
	<li>Ekranın sağ ortasındaKi Yükleme Girişi menüsünü açın ve Dosyaları Otomatik Algıla'yı seçin, PET dosyasını (DICOM, Interfile veya NifTI) seçin, seçilene ekleyin, İşlemlerle tıklatın, Standart Yönlendirmeye Yeniden Yönlendir,Yükle ve Kapat'ı tıklatın. </li>
	<li>Hayvan Türlerinin ekranın(RAT)altında doğru olup olmadığını doğrulayın.</li>
	<li>Ekranın sağ alt kısmındaki Kırp kutusunu işaretleyin.</li>
	<li>Tüm beyni almak için PET görüntüsündeki sarı kutu boyutunu ayarlayın.</li>
	<li>Ekranın sağındaki Sert düğmeye tıklayın. Onay penceresinde Evet'i tıklatın.</li>
	<li>Referans Atlası'nı açmak için ekranın sağ ortasındaki beyin aracına tıklayın. Px Rat (W.Schiffer) - T2'yi seçin.</li>
	<li>Sağ üst sekmeden Sonuçları Eşleştir'i seçin (İşlem aşaması sekmesini seçin).</li>
	<li>Veri yeniden dilimleme 'ye tıklayın (sağ üst menüdeki4.sekme).</li>
	<li>Döndürme aracını (PET görüntüsünün ortasındaki beyaz simge) kullanarak PET görüntüsünü referans şablonuyla hizalayın. 3 anatomik düzlem için hizalamayı kontrol edin.</li>
	<li>Ortak kayıt dosyasını kaydedin (ekranın sağ yan menüsü).</li>
	<li>Çıktı biçimi (DICOMor NifTI), dizin ve dosya önekini seçin. Kaydet 'itıklatın. NOT: Birlikte kaydedilen çıktı NifTi olarak kaydedilirse, üstbilgi görüntüsü bilgileri kaybolur.</li>
	<li>Ekranın altındaki VOIs menüsünü tıklatın.</li>
	<li>Ekranın altındaki Şablon > Atlas'a gidin (VOI penceresinin altında).</li>
	<li>Açılan menüden Px Rat(W.Schiffer) öğesini seçin. NOT: Yalnızca belirli VOI'leri analiz etmeniz gerekiyorsa, yalnızca ilgi çekici beyin alanlarını seçebilirsiniz. Beyin atlasının tüm beyin bölgelerini istiyorsanız, harekete gerek yoktur.</li>
	<li>Ekranın altındaki Anahat'ı tıklatın. NOT: Beyin bölgelerinin VOI'leri VOI penceresinde görünecektir.</li>
	<li>VOI'yi lezyon bölgesinde ve kontralateyal beyin yarımküre bölgesinde (sırasıyla11C-PIB düşük alım alanı ve kontralateteral beyin yarımküresi) manuel olarak çizin.</li>
	<li>11C-PIB düşük alım ile PET görüntü alanına tıklayın.</li>
	<li>Yeni VOI > Tamam 'ıseçin. NOT: Bir elektronik tablo görünecektir</li>
	<li>Ekranın orta kısmındaki SPHERE simgesine gidin (VOI penceresinin solunda) NOT: Bir elektronik tablo görünecektir.</li>
	<li>VOI adını seçin: lezyon ve Uygula 'yıseçin. NOT: Ortak kayıtlı görüntüde bir küre görünecektir.</li>
	<li>Lezyon bölgesindeki küreyi hizalayın ve VOI'yi tüm anatomik düzlemler için ayarlayın.</li>
	<li>Kapat'ı tıklatın (elektronik tablonun alt kısmında).</li>
	<li>Lezyon VOI'yi seçin (VOI listesinden).</li>
	<li>VOI yansıtma işlemleri simgesine gidin (VOI penceresinin sağ üst kısmında) ve Klonla'yı seçin ve sola/sağa yansıtın.</li>
	<li>VOI listesi penceresinin en üstünde seçili VOI İstatistiklerini Hesapla'ya gidin. Çıktı verilerini seçmek için Hesaplanacak istatistikleri seç simgesine gidin (VOI istatistikleri simgesinin sağ tarafında). Genellikle miyelin içeriği için VOI grubu istatistiklerini kontrol edin, Ortalama, SD, Min, Max). NOT: Bir elektronik tablo görünecektir. Veri Birimi varsayılan ayarı kBq/cc'dir. Elektronik tablonun (VOI İstatistikleri) sol üst kısmında Veri Birimini SUV (Standartlaştırılmış Alım Değeri) olarak kontrol edebilirsiniz. Tarayıcı yazılımında radyotracer yönetimini ve görüntü alma ayrıntılarını doğru bir şekilde tamamladıysanız, daha önce açıklandığı gibi, SUV verileri PMOD yazılımı tarafından otomatik olarak hesaplanır, değilse, ayrıntıları düzenleyebilirsiniz.</li>
	<li>Sistem yerel konumu numarası biçimini kullanarak kopyala 'yagidin. NOT: Çıktı olarak kopyalamak için tüm istatistiklerin seçili olup olmadığını doğrulayın (Ekranın sağ üst kısmındaki Kontrol simgesi). Kopyalanacak veriler seçilen Veri Birimi'ne bağlıdır.</li>
	<li>Çıktı verilerini not defterine veya elektronik tabloya yapıştırın. NOT: Sayılar arasındaki nokta ve virgül sembolleri için yazılım ayarlarına dikkat edin. Bu, dil yapılandırmaları arasında farklı olabilir.</li>
	<li>Dosyayı çalışma adı ve ayrıntılarıyla kaydedin.</li>
</ol>

<ol><li>Oh, J., Vidal-Jordana, A., Montalban, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+sclerosis%3A+clinical+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Neurology%22%5BJournal%5D)">Multiple sclerosis: clinical aspects.</a> Current Opinion in Neurology. 31 (6), 752-759 (2018).</li>
<li>Sand, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification%2C+diagnosis%2C+and+differential+diagnosis+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Neurology%22%5BJournal%5D)">Classification, diagnosis, and differential diagnosis of multiple sclerosis.</a> Current Opinion in Neurology. 28 (3), 193-205 (2015).</li>
<li>Thompson, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+multiple+sclerosis%3A+2017+revisions+of+the+McDonald+criteria%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of multiple sclerosis: 2017 revisions of the McDonald criteria.</a> Lancet Neurology. 17 (2), 162-173 (2018).</li>
<li>Veronese, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+C-11+PIB+PET+for+imaging+myelin+in+the+human+brain%3A+a+test-retest+reproducibility+study+in+high-resolution+research+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Quantification of C-11 PIB PET for imaging myelin in the human brain: a test-retest reproducibility study in high-resolution research tomography.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 35 (11), 1771-1782 (2015).</li>
<li>Carvalho, R. H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C-11+PIB+PET+imaging+can+detect+white+and+grey+matter+demyelination+in+a+non-human+primate+model+of+progressive+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+and+Related+Disorders%22%5BJournal%5D)">C-11 PIB PET imaging can detect white and grey matter demyelination in a non-human primate model of progressive multiple sclerosis.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 35, 108-115 (2019).</li>
<li>Stankoff, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+central+nervous+system+myelin+by+positron+emission+tomography+in+multiple+sclerosis+using+%5Bmethyl-%281%29%281%29C%5D-2-%284%27-methylaminophenyl%29-+6-hydroxybenzothiazole%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Imaging central nervous system myelin by positron emission tomography in multiple sclerosis using [methyl-(1)(1)C]-2-(4'-methylaminophenyl)- 6-hydroxybenzothiazole.</a> Annals of Neurology. 69 (4), 673-680 (2011).</li>
<li>Faria, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+positron+emission+tomography+%28PET%29+imaging+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Myelin positron emission tomography (PET) imaging in multiple sclerosis.</a> Neural Regeneration Research. 15 (10), 1842-1843 (2020).</li>
<li>Pietroboni, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+PET+as+a+marker+of+normal-appearing+white+matter+early+damage+in+multiple+sclerosis%3A+correlation+with+CSF+-amyloid+levels+and+brain+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Amyloid PET as a marker of normal-appearing white matter early damage in multiple sclerosis: correlation with CSF -amyloid levels and brain volumes.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 46 (2), 280-287 (2019).</li>
<li>Pytel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+PET+findings+in+multiple+sclerosis+are+associated+with+cognitive+decline+at+18+months%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+and+Related+Disorders%22%5BJournal%5D)">Amyloid PET findings in multiple sclerosis are associated with cognitive decline at 18 months.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 39, (2020).</li>
<li>Faria, D. dP., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+imaging+of+glucose+metabolism%2C+neuroinflammation+and+demyelination+in+the+lysolecithin+rat+model+for+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+Journal%22%5BJournal%5D)">PET imaging of glucose metabolism, neuroinflammation and demyelination in the lysolecithin rat model for multiple sclerosis.</a> Multiple Sclerosis Journal. 20 (11), 1443-1452 (2014).</li>
<li>Rinaldi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galectin-1+circumvents+lysolecithin-induced+demyelination+through+the+modulation+of+microglial+polarization%2Fphagocytosis+and+oligodendroglial+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Galectin-1 circumvents lysolecithin-induced demyelination through the modulation of microglial polarization/phagocytosis and oligodendroglial differentiation.</a> Neurobiology of Disease. 96, 127-143 (2016).</li>
<li>Faria, D. dP., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+imaging+of+focal+demyelination+and+remyelination+in+a+rat+model+of+multiple+sclerosis+comparison+of+%5BC-11%5DMeDAS%2C+%5BC-11%5DCIC+and+%5BC-11%5DPIB%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">PET imaging of focal demyelination and remyelination in a rat model of multiple sclerosis comparison of [C-11]MeDAS, [C-11]CIC and [C-11]PIB.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 41 (5), 995-1003 (2014).</li>
<li>Faria, D. dP., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+imaging+of+focal+demyelination+and+remyelination+in+a+rat+model+of+multiple+sclerosis%3A+comparison+of+%5B11C%5DMeDAS%2C+%5B11C%5DCIC+and+%5B11C%5DPIB%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">PET imaging of focal demyelination and remyelination in a rat model of multiple sclerosis: comparison of [11C]MeDAS, [11C]CIC and [11C]PIB.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 41 (5), 995-1003 (2014).</li>
<li>vander Star, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+and+In+Vivo+Models+of+Multiple+Sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+%26+Neurological+Disorders-Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">In Vitro and In Vivo Models of Multiple Sclerosis.</a> CNS & Neurological Disorders-Drug Targets. 11 (5), 570-588 (2012).</li>
<li>Najm, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-based+modulation+of+endogenous+stem+cells+promotes+functional+remyelination+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Drug-based modulation of endogenous stem cells promotes functional remyelination in vivo.</a> Nature. 522 (7555), 216(2015).</li>
</ol>

Multipl skleroz çalışması için lysolecithin modelini kullanmanın en büyük avantajı, demyelinasyon (yaklaşık 1 hafta) ve remyelinasyon (yaklaşık 4 hafta) için hızlı zaman çizelgesi14. Bu model farelerde de indüklenebilir15, ancak, sıçanlarda indüksiyon, fare beyninin farelere kıyasla daha büyük boyutu nedeniyle in vivo PET görüntüleme için daha avantajlıdır.
İndüksiyon modelinin ilk adımı son derece dikkatli olmaktır. Bu model,<sup class=...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62094">Positron Emission Tomography Imaging for In Vivo Measuring of Myelin Content in the Lysolecithin Rat Model of Multiple Sclerosis</a>. The citation&#160;was updated.
The citation was updated from:
de Paula Faria, D., Cristiano Real, C., Estessi de Souza, L., Teles Garcez, A., Navarro Marques, F. L., Buchpiguel, C. A. Positron Emission Tomography Imaging for In Vivo Measuring of Myelin Content in the Lysolecithin Rat Model of Multiple Sclerosis. J. Vis. Exp. (168), e62094, doi:10.3791/62094 (2021).
to:
de Paula Faria, D., Real, C.C., Estessi de Souza, L., Teles Garcez, A., Navarro Marques, F. L., Buchpiguel, C. A. Positron Emission Tomography Imaging for In Vivo Measuring of Myelin Content in the Lysolecithin Rat Model of Multiple Sclerosis. J. Vis. Exp. (168), e62094, doi:10.3791/62094 (2021).

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62094">Positron Emission Tomography Imaging for In Vivo Measuring of Myelin Content in the Lysolecithin Rat Model of Multiple Sclerosis</a>. The citation&#160;was updated.

Erratum: Positron Emission Tomography Imaging for In Vivo Measuring of Myelin Content in the Lysolecithin Rat Model of Multiple Sclerosis

Multipl skleroz (MS), merkezi sinir sistemini etkileyen, iltihaplanma, demyelinasyon ve aksonal kayıp1ile karakterize nöroinflamatuar bir hastalıktır. Bu hastalığın prognozu, tedavideki gelişmelerle bile değişkendir ve gençlerde nörolojik açıkların en yaygın nedenlerinden biridir1. MS tanısı manyetik rezonans görüntüleme (MRG) ile karakteristik lezyonların klinik bulguları ve görselleştirilmesi kriterlerine dayanmaktadır2,3.
Pozitron emisyon tomografisi (PET), MS ilerlemesinin ve terapötik etkilerin in vivo izlenmesi için yararlı bir araç olabilir. Karbon-11 (11C-PIB) ile etiketlenmiş Pittsburgh bileşik B radyotracer (PIB), β-amiloid plaklarını ölçmek için yaygın olarak kullanılır; ancak, son on yılda, miyelin içeriğini ölçmek ve dinamik demiyelinasyon ve remiyelinasyon göstermek için çalışılmıştır4,5,6.
Farklı amiloid PET izleyiciler (11C-PIB, 18F-florbetaben,18F-florbetapir, 18F-flütemetamol) miyelin ölçmek ve hastalık ilerlemesi ve terapötik yanıt hakkında önemli bilgiler sağlamak için kullanılabilir, demiyelinasyon ve remiyelinasyon süreçlerinin tanımlanmasına izin verir, nöroinflamasyonun müdahalesi olmadan, geleneksel manyetik rezonans görüntüleri (MRG)7ile ortaya çıkabilir. Amiloid PET görüntüleme, aktif hastalarda erken beyaz madde hasarı ile açıklanabilen aktif olmayan hastalara kıyasla aktif MS hastalarında izleyici alımında azalma olduğunu göstermiştir8. Alt amiloid izleyici alımı, bir takip çalışmasında bilişsel düşüşle de ilişkilendirildi ve bu tekniğin hastalığın patofizyolojisini ve klinik sonuçlarını incelemek için değerli bir araç olduğunu gösterdi9.
Lysolecithin (LPC) sıçan modeli, enjekte edilen toksin LPC'nin, iltihaplanmanın artmasına ve sonuç olarak demyelinasyon10,11ile sonuçlanan makrofajların yüksek bir tepkisine neden olduğu multipl sklerozun kimyasal kaynaklı bir modelidir. Demyelinasyon, yaklaşık 4 hafta içinde hızla tersine çevrilir, bu da bunu kemirgenlerdeki demyelinasyon ve remyelinasyon süreçlerini değerlendirmek için iyi bir model haline getirir. Bu model zaten PET görüntüleme kullanılarak değerlendirildi, iyi sonuçlar ve ölüm sonrası denemelerle korelasyon12.
Burada, lesolesithin sıçan modelinde 11C-PIB ile miyelin PET görüntüleme protokolünü sunuyoruz ve bu görüntüleme tekniğinin miyelin içeriğinin in vivo ölçümü için yararlı bir araç olduğunu gösteriyoruz.

<table><tbody><tr><td>Analitik Terazi</td><td>Marte</td><td>AUWZZOD</td><td>maks: 220 g- dk: 1 mg</td></tr><tr><td>Anestesia buharlaştırıcı</td><td>Nanitech</td><td>15800</td><td></td></tr><tr><td>Beta-küp</td><td>Molecubes</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bulldog kelepçesi</td><td>Çalma</td><td>5212043P</td><td></td></tr><tr><td>clorexidin</td><td>Rioquimica</td><td></td><td>0.5%/100 mL</td></tr><tr><td>Pamuklu çubuklar</td><td>johnson e johnson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Doz kalibratörü</td><td>Capintech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Matkap</td><td>Kinzo elektrikli el aletleri</td><td>352901</td><td>Model Q0M-DC3C</td></tr><tr><td>Eppendorf tüp</td><td>Eppendorf</td><td>30125150</td><td>1,5 mL</td></tr><tr><td>Göz yağlayıcı</td><td>ADVFARMA</td><td>30049099</td><td>&nbsp; vazelin 15 g (farmasötik saflık)</td></tr><tr><td>İnce forseps</td><td>Stoelting</td><td>52102-38P</td><td></td></tr><tr><td>Eldiven</td><td>Descarpack</td><td>212101</td><td>&nbsp; 6.5 boyut</td></tr><tr><td>Isıtma yastığı</td><td>Softhear</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Enjeksiyon Şırınga</td><td>Hamilton</td><td>80314</td><td>10 mikro;, 32ga, model 701</td></tr><tr><td>İnsuline şırınga</td><td>BD</td><td>328328</td><td>1 mL insülin şırıngaları iğneli</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Crist&aacute; lia</td><td>410525</td><td>100 mL , konsantrasyon 1 mL / 1 mL</td></tr><tr><td>Ketoprofen veya diğer analjezik</td><td>Sanofi</td><td></td><td>100 mg / 2 mL</td></tr><tr><td>lidokain</td><td>Hipolabor</td><td>1.1343.0102.001-5</td><td>%2/20 mL</td></tr><tr><td>L-&alfa;-Yumurta sarısından lizofosfatidilkolin</td><td>Sigma-aldrich</td><td>L-4129</td><td>25 mg -&&ge; %99, Tip I, toz</td></tr><tr><td>İğne tutucu</td><td>Çalmak</td><td>5212290P</td><td></td></tr><tr><td>Oksijen</td><td>Beyazı Martins</td><td>7782-44-7</td><td>Sıkıştırılmış gaz</td></tr><tr><td>PMOD yazılımı</td><td>PMOD teknolojileri</td><td>Sürüm 4.1</td><td>modülü bunu birleştir</td></tr><tr><td>Sıçan anestezi maskesi</td><td>KOPF</td><td>Model 906</td><td></td></tr><tr><td>Saline</td><td>Farmace</td><td>0543325/ 14-8</td><td>Enjeksiyon için% 0.9 sodyum klorür, 10 mL</td></tr><tr><td>Scapel bıçakları</td><td>Çalma</td><td>52173-10</td><td></td></tr><tr><td>Scapel kulpları</td><td>Çalma</td><td>52171P</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Çalma</td><td>52136-50P</td><td></td></tr><tr><td>Yarı analitik terazi</td><td>Quimis</td><td>BK-3000</td><td>maks:3.100 g; min:0,2 g</td></tr><tr><td>tıraş makinesi</td><td>Mega profesyonel</td><td></td><td>AT200 model</td></tr><tr><td>Stereotaktik Aparat</td><td>KOPF</td><td>Nodel 900</td><td></td></tr><tr><td>İğne destekli üniversal tutucu</td><td>KOPF</td><td>Model 1772-F1</td><td>Hamilton 5 ve 10 & için destek; L</td></tr></tbody></table>

multipl sklerozun lysolecithin rat modelinde miyelin İçeriğinin in vivo Ölçümü için pozitron emisyon tomografi görüntüleme

Positron Emission Tomography Imaging for In Vivo Measuring of Myelin Content in the Lysolecithin Rat Model of Multiple Sclerosis

Multipl skleroz (MS), merkezi sinir sisteminde genişleyen aksonal ve nöronal dejenerasyon ve demyelinasyon ile MS ilerlemesi sırasında motor işlev bozukluklarına, psişik engellilik ve bilişsel bozulmaya yol açan nöroinflamatuar bir hastalıktır. Pozitron emisyon tomografisi (PET), in vivo hücresel ve moleküler değişiklikleri ölçebilen bir görüntüleme tekniğidir.
Miyelin sağlamlığına yakınlığa sahip radyotracers, zaman içinde miyelin içerik değişikliklerinin in vivo görüntülenmesi için kullanılabilir. Miyelin içeriğinde bir artış veya azalma tespit etmek mümkündür, bu görüntüleme tekniğinin merkezi sinir sisteminin demiyelinasyon ve remiyelinasyon süreçlerini tespit edebileceği anlamına gelir. Bu protokolde, fokal demiyelinasyon lezyonunun (stereotaktik enjeksiyonla indüklenen) (yani multipl skleroz hastalığının bir modeli) bir modeli olan lesolesitilin sıçan modelinde miyelin değişikliklerini tespit etmek için PET görüntülemenin nasıl kullanılacağını gösteriyoruz. 11 C-PIB PET görüntüleme taban çizgisine ve sıçan beyninin sağ striatumunda (4 μL) ve korpus callosumunda (3 μL) %1 oranında stereotaksik enjeksiyondan 1 hafta ve 4 hafta sonra yapıldı ve fokal demiyelinasyon (1 hafta sonra enjeksiyon bölgesi) ve remiyelinasyon sürecinin (4 haftada enjeksiyon bölgesi) ölçülmesini sağladı.
Myelin PET görüntüleme, miyelin içeriğindeki in vivo değişiklikleri izlemek için ilginç bir araçtır ve bu da demiyelinasyon hastalığının ilerlemesini ve terapötik yanıtı izlemek için yararlı olabilir.

Şekil 1' de zaman içinde miyelin değişiklikleri olan açıklayıcı 11C-PIB PET görüntüsü gösterilmektedir. Taban çizgisi taramasında miyelin içeriğinde herhangi bir fark görülemez (yani demyelinasyon yoktur). 1 haftalık zaman noktası görüntüsünde, beyaz okla belirtildiği gibi fokal demiyelinlenmiş lezyonu (sağ yarımkürede) görmek mümkündür. Görüntüler 3 anatomik düzlemde (koronal, eksenel ve sagittal) sunulur ve hepsinde demiyelinlenmiş lezyonu tanımlamak mümkündür. 1 haftalık görünt...

Bu protokol, multipl sklerozun bir hayvan modelinde pozitron emisyon tomografisi (PET) görüntüleme ile in vivo miyelin değişikliklerini (demiyelinasyon ve remiyelinasyon) izlemeyi amaçlamaktadır.

Multipl Sklerozun Lysolecithin Rat Modelinde Miyelin İçeriğinin In Vivo Ölçümü için Pozitron Emisyon Tomografi Görüntüleme

Multiple sclerosis (MS) is a neuroinflammatory disease with expanding axonal and neuronal degeneration and demyelination in the central nervous system, ...

Bu protokol, multipl sklerozun lysolecithin sıçan modelinde karbonil ile etiketlenmiş PIB ile PET görüntüleme ile in-vivo miyelin zincirlerinin izlenmesi adıdır. Bu görüntüleme tekniği, farklı noktalardaki pozisyonların in-vivo görüntülerine izin verme yeteneğine sahiptir. Zaman içinde madencilik zincirlerinin verilerine nokta dokunuşu elde edin.Bu videoda, hayvan modelinin stereotaktik enjeksiyonla nasıl indüklenerek nasıl elde edeceğimizi ve analiz edeceğimizi gösteriyoruz. Madencilik PIP görüntüleri. Lysolecithin çözeltisi hazırlığı için gerekli malzemeyi çıkar cam bir tüp kullanarak elektronik bir dengede lysolecithin çözelti ağırlığını alın cam boruyu elektrik dengesinden çıkararak hücre hattını açın ve% 1'liklysolecithin çözeltisini hazırlamak için doğru hacmi alın.Hücre hattını plastik tüpe koyun plastik tüpü kapatın ve parmaklarınızı kullanarak sallayın. Doğru konumdaki hayvanla ameliyata hazırlanın enjekte Edin Hayvan gözlerinin hidrasyona karşı koruduğu göz kremini koyun. kesi bölgesinin temizlenmesi için %5 kodokser çözeltisi kullanın, kesi yapılacak olan yere lidoksin enjekte edin.Kafalarındaki kılları tıraş edin yaklaşık iki santimetrelik bir kesi yapın udak kelepçeler

positron-emission-tomography-imaging-for-vivo-measuring-myelin

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu videoda, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) kullanılarak multipl sklerozun bir fare modeli oluşturulmuştur. Fareye, otoreaktif T hücrelerini aktive eden bir bağışıklık tepkisini tetikleyen bir nöronal peptit ve bir adjuvan içeren bir emülsiyon enjekte edilir. Bunu, otoreaktif T hücrelerinin beyne sızmasına izin vererek kan-beyin bariyeri geçirgenliğini artırmak için bir boğmaca toksini (PTX) enjeksiyonu takip eder. Bu infiltrasyon, multipl sklerozun demiyelinizan durumunu taklit ederek...

Bir Fare Modelinde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit İndüksiyonu

style='line-height:1.2;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;' dir='ltr'&gt;Source: Schmitz, K., et al., Farelerde Multipl Skleroz EAE Modelinde Optik Nörit ve Beyin İltihabının Biyolüminesansı ve Yakın Kızılötesi Görüntülemesi. J. Vis. Exp. (2017).Bu video, optik sinirde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit veya EAE'nin neden olduğu iltihabı görselleştirme ve izleme yöntemini göstermektedir. biyolüminesans görüntüleme. Fareyi konumlandırmayı, reaktif enjeksiyonunu ve zaman içinde biyolüminesanstaki...

EAE Fare Modelinde Biyolüminesans Görüntüleme

Fare omuriliği görüntülenmesi için yeni bir ex vivo hazırlık. Bu protokol, omurilik boyunca canlı hücresel etkileşimlerin iki foton görüntüleme için izin verir.

Fare Omurilik Hücresel Dynamics İki foton Görüntüleme

Demiyelinizan hastalıklar, lizolesitinin CNS'ye fokal olarak uygulanmasıyla hayvanlarda modellenebilir. Fare omuriliğine tek bir lizolesitin enjeksiyonu, zamanla kendiliğinden onarılan bir lezyon oluşturur. Amaç, de- ve remiyelinizasyon ile ilgili faktörleri incelemek ve onarımı geliştirmek için ajanları test etmektir.

Lisolesitin Odak Enjeksiyon Deneysel Demyelizasyon ve Kemirgen Omurilik remiyelinizasyon

Optik sinirde lisolesitin mikroenjeksiyonu kullanılarak fokal demiyelinizasyon indüklenir. Görsel uyarılmış potansiyeller, in vivo olarak görsel yol boyunca sinyal iletimini incelemek için görsel korteks üzerine implante edilen kafatası elektrotları aracılığıyla kaydedilir. Bu protokolde elektrot implantasyonu ve optik sinir mikroenjeksiyonunun altında yatan cerrahi prosedürler detaylandırılır.

Deneysel Optik Sinir demyelinizasyon bir Rat Modelinde Görsel Uyarılmış Potansiyel Kayıt

Biz, in vivo canlı biyolüminesans ve yakın kızılötesi SJL / J farelerinde multipl skleroz için deneysel otoimmün ensefalomyelit (EAE) modelinde optik nevrit ve ensefalit görüntüleme tekniğini göstermektedir.

Farelerde Multipl Skleroz EAE Modeli Optik Nörit ve Beyin Enflamasyon Biyoparlaklık ve Yakın-Kızılötesi Görüntüleme

Burada kollarındaki kullandığımız, x-ışını nasıl inhibe mTOR etkinlik çalışmaya ve pozitron emisyon tomografi/bilgisayarlı tomografi Imaging etkileri myeloma kemik iliği engrafted tümörler bir xenograft modeli. Bu myeloma kemik iliği engrafted tümör vivo içindehedefleme terapiler Anti-miyelom etkisini fizyolojik ilgili, non-invaziv ve multimodal analizleri için sağlar.

Multipl Miyelom kemik iliği Xenografts NOG farelerde Multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi görüntüleme

Uyarılmış Raman saçılması (SRS) mikroskopisi, biyomoleküllerin spesifik kimyasal bağların içsel titreşimine dayanarak etiketsiz görüntülenmesini sağlar. Bu protokolde, canlı farelerin omuriliğindeki hücresel yapıları görselleştirmek için entegre bir SRS ve iki fotonlu floresan mikroskobun enstrümantal kurulumu açıklanmaktadır.

İn vivo Kombine İki Foton Floresan ve Stimüle Raman Saçılma Mikroskobu ile Biyolojik Dokuların Görüntülenmesi

Bu çalışmada, in vivo FDG-PET ile akut derin beyin stimülasyonunun neden olduğu metabolik nöromodülasyonu değerlendirmek için klinik öncesi deneysel bir yöntem tanımlanmıştır. Bu makale, stereotaksik cerrahiden stimülasyon tedavisinin uygulanmasına ve PET görüntülerinin elde edilmesi, işlenmesi ve analizine kadar tüm deneysel adımları içermektedir.

İn vivo Sıçanlarda Derin Beyin Stimülasyonunun İndüklediği Aktivite Kalıplarını Ortaya Çıkarmak için Pozitron Emisyon Tomografisi

Bu protokol, miyelin oligodendrosit glikoprotein kullanılarak bir fare modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyelitin indüklenmesini ve klinik bir skorlama sistemi kullanılarak hastalık sürecinin izlenmesini açıklamaktadır. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit ile ilişkili semptomlar, hastalık sürecini kapsamlı bir şekilde değerlendirmek için fare femur mikro-bilgisayarlı tomografi analizi ve açık alan testi kullanılarak analiz edilir.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitin İndüksiyonu ve Çeşitli Değerlendirme Göstergeleri

Bu makale, insana özgü bir anti-CD19 monoklonal antikorun radyo-etiketlenmesi için metodolojiyi ve bunun in vivo PET görüntüleme, ex vivo gama sayımı ve otoradyografi yaklaşımlarını kullanarak bir fare multipl skleroz modelinin periferik dokularındaki B hücrelerini ölçmek için nasıl kullanılacağını detaylandırmaktadır.

Pozitron Emisyon Tomografisi Kullanılarak Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Fare Modelinde CD19+ B Hücrelerinin Görüntülenmesi

Keşfedin, multipl sklerozun lysolecithin sıçan modelinde miyelin içeriğinin in vivo ölçümü için PET görüntüleme yöntemini. Bu protokol demiyelinizasyon ve remiyelinizasyon süreçlerinin uzunlamasına değerlendirilmesine olanak tanır.

Multipl Sklerozun Lysolecithin Rat Modelinde Miyelin İçeriğinin In Vivo Ölçümü için Pozitron Emisyon Tomografi Görüntüleme

Daha fazla video keşfet