Name: Zebra Balıklarının Erken Yaşam Aşamalarında Floresan Mikroplastiklerin Birikmesi ve Dağılımı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: Keşfedin, Danio rerio embriyolarında floresan mikroplastiklerin birikimini ve dağılımını görselleştirmek için bu güvenilir protokolü. Yüksek konsantrasyonlarda yumurta kesesi ve sindirim sisteminde birikim gözlemlenir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (21777145, 22076170) ve Üniversite Changjiang Akademisyenleri ve Yenilikçi Araştırma Ekibi Programı (IRT_17R97) tarafından finanse edildi.

Yetişkin zebra balıkları Çin Zebra Balığı Kaynak Merkezi'nden (Wuhan, Çin) kaynaklanmaktadır. Deneyler, "Hayvan Refahının Etik İncelemesi için Laboratuvar Hayvan Kılavuzu (GB/T35892-2018) ulusal kılavuzuna uygun olarak gerçekleştirildi.
1. Embriyo koleksiyonu
<ol><li>Balıkları, 14:10 saat açık bir fotoperiyod üzerinde sabit bir sıcaklıkta (28 ± 0,5 °C) devridaim kömür filtreli musluk suyu sistemine (pH 7,0 ± 0,2) sahip 20 L cam tanklarda saklayın: karanlık.</li>
	<li>Artemia naupliiile günde iki kez balık besleyin. Yiyeceklerin günde en fazla% 3 balık ağırlığında verilmesi ve her seferinde 5 dakika içinde yenmesi önerilir14.</li>
	<li>İyi gelişmiş yetişkin zebra balıklarını (vücut uzunluğu 3-4 cm olan) üremeden bir gece önce bir erkek ila iki dişi oranında yumurtlama tankına aktarın. NOT: Ertesi sabah, balık ışık döngüsünün başlangıcından sonra yumurtlamaya başlar.</li>
	<li>Pasteur pipet kullanarak yumurta toplayın. Birkaç kez% 10 Hank çözeltisi ile durulayın ve ardından mikroskop kullanarak döllenme olup olmadığını kontrol edin. Döllenmiş yumurtalar yaklaşık 2 saat sonra bölünme süresi geçirir döllenme (hpf) ve açıkça tanımlanabilir15.</li>
	<li>Döllenmiş embriyoları% 10 Hank çözeltisinin 200 mL'sini içeren 500 mL'lik bir beherde, 28 ° C'de dezenfeksiyon için% 1 metilen mavisi ile kuluçkaya yatırın. 1 embriyo/2 mL çözelti yükleme oranını aşmayın. NOT: %10 Hank'in çözümü 137 mM NaCl, 5,4 mM KCl, 0,25 mM Na2HPO4,0,44 mM KH2PO4, 1,3 mM CaCl2, 1,0 mM MgSO4 ve 4,2 mM NaHCO3'denoluşur.</li>
</ol>2. Mikroplastik süspansiyonların hazırlanması
<ol><li>10 dakika boyunca 500 nm nominal çapa (eksitasyon / emisyon: 460/500 nm) sahip yeşil floresan etiketli polistiren boncukların (10 mg / mL) stok çözeltisini sonicate edin.</li>
	<li>İstenilen maruz kalma çözümlerini (0,1, 1 ve 10 mg/L) üretmek için stok çözeltisini %10 Hank'in çözeltisiyle seyreltin.</li>
	<li>Maruz kalmadan önce her zaman mikroplastiklerin maruz kalma çözümlerini hazırlayın. NOT: Mikroplastiklerin toksik etkilerini değerlendirirken dikkatli olunmalıdır, çünkü ticari parçacık formülasyonlarında sodyum azit gibi koruyucuların varlığı farklı organizmalar için toksik olabilir 16. Bu nedenle, bu katkı maddeleri toksisite deneyi yapmadan önce kontrollerde çıkarılmalıdır veya dikkate alınmalıdır.</li>
</ol>3. Mikroplastik maruziyeti
<ol><li>Rastgele 6 yeni döllenmiş embriyo (4 hpf) seçin ve ardından farklı konsantrasyonlarda 5 mL mikroplastik çözeltiler içeren 6 kuyulu plakanın her kuyusuna aktarın. %10 Hank'in çözümünü içeren kontrol gruplarını dahil edin.<ol>
<li>Her tedavi için triplikat kuyuları (toplam 18 embriyo ile) kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Embriyoları aynı ışık altında kuluçkaya yatırın: yetişkinlerle karanlık döngü ve sıcaklık (bkz. 1.2) ve her 12 saatte bir gözlemleyin. Ölüleri hemen çıkarın.</li>
	<li>Mikroplastik çözeltileri her 24 saniyede bir %90 yenileyin. Maruz kalma süresi boyunca balıklar beslenmez. NOT: Genellikle embriyonun kuluçkası 48 bgf'den başlar ve yaklaşık 72 bgf'de tamamlanır.</li>
</ol>4. Mikroplastik dağılımının değerlendirilmesi
<ol><li>Döllenme sonrası 24, 48, 72, 96 ve 120 saat sonra embriyoları/larvaları rastgele seçin (üç kopyanın her birinden biri) ve % 10 Hank'in çözeltisi ile durulayın.</li>
	<li>Larvaları bir Petri kabına aktarın ve anestezi için% 0.016 trikaine maruz koyun.<ol>
<li>Trikainin stok çözeltisini hazırlayın: 4 mg trikain tozu 100 mL çift damıtılmış suda çözülür ve pH'ı Tris-HCl (pH 9.0) ile 7.0'a ayarlayın. Stok çözeltisini dondurucuda saklayın.</li>
		<li>Çalışma çözümünü hazırlayın. Stok çözeltisini istenen konsantrasyona seyreltin (%0,016) oda sıcaklığında % 10 Hank çözümü ile14.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Embriyoları / larvaları düzenleyin ve gözleme hazırlanın.</li>
	<li>Floresan mikroskop ve görüntüleme yazılımı ile görüntü ile balıkları gözlemleyin.</li>
	<li>ImageJ ile balıklardaki floresan yoğunluğunu ölçün.</li>
</ol>

<ol><li>SAPEA (Science Advice for Policy by European Academies). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22A+Scientific+Perspective+on+Microplastics+in+Nature+and+Society%22">A Scientific Perspective on Microplastics in Nature and Society</a>. , SAPEA. Berlin. (2019).</li>
<li>Plastics Europe. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Plastics-the+facts+2019%22">Plastics-the facts 2019</a>. , Plastics Europe. Brussels. (2019).</li>
<li>Andrady, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+the+marine+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Pollution+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Microplastics in the marine environment.</a> Marine Pollution Bulletin. 62, 1596-1605 (2011).</li>
<li>Arthur, C., Baker, J., Bamford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proceedings+of+the+International+Research+Workshop+on+the+Occurrence%2C+Effects+and+Fate+of+Microplastic+Marine+Debris%5BTitle%5D)+AND+%22National+Oceanic+and+Atmospheric+Administration+Technical+Memorandum%22%5BJournal%5D)">Proceedings of the International Research Workshop on the Occurrence, Effects and Fate of Microplastic Marine Debris.</a> National Oceanic and Atmospheric Administration Technical Memorandum. , (2009).</li>
<li>Ivleva, N. P., Wiesheu, A. C., Niessner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastic+in+aquatic+ecosystems%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Microplastic in aquatic ecosystems.</a> Angewandte Chemie International Edition. 56, 1720-1739 (2017).</li>
<li>Lu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pollutant+toxicology+with+respect+to+microalgae+and+cyanobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Environmental+Sciences%22%5BJournal%5D)">Pollutant toxicology with respect to microalgae and cyanobacteria.</a> Journal of Environmental Sciences. 99, 175-186 (2021).</li>
<li>Huang, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+microplastics+impairs+digestive+performance%2C+stimulates+immune+response+and+induces+microbiota+dysbiosis+in+the+gut+of+juvenile+guppy+%28Poecilia+reticulata%29%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Exposure to microplastics impairs digestive performance, stimulates immune response and induces microbiota dysbiosis in the gut of juvenile guppy (Poecilia reticulata).</a> Science of the Total Environment. 733, 138929(2020).</li>
<li>Prüst, M., Meijer, J., Westerink, R. H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plastic+brain%3A+neurotoxicity+of+micro-+and+nanoplastics%5BTitle%5D)+AND+%22Particle+and+Fibre+Toxicology%22%5BJournal%5D)">The plastic brain: neurotoxicity of micro- and nanoplastics.</a> Particle and Fibre Toxicology. 17, 24(2020).</li>
<li>Jakubowska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+chronic+exposure+to+microplastics+of+different+polymer+types+on+early+life+stages+of+sea+trout+Salmo+trutta%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Effects of chronic exposure to microplastics of different polymer types on early life stages of sea trout Salmo trutta.</a> Science of the Total Environment. 740, 139922(2020).</li>
<li>Qiang, L., Cheng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+polystyrene+microplastics+impairs+gonads+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Exposure to polystyrene microplastics impairs gonads of zebrafish (Danio rerio).</a> Chemosphere. 263, 128161(2021).</li>
<li>Hamed, M., Soliman, H. A. M., Osman, A. G. M., Sayed, A. E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidants+and+molecular+damage+in+Nile+Tilapia+%28Oreochromis+niloticus%29+after+exposure+to+microplastics%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+and+Pollution+Research%22%5BJournal%5D)">Antioxidants and molecular damage in Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) after exposure to microplastics.</a> Environmental Science and Pollution Research. 27, 14581-14588 (2020).</li>
<li>Burns, E. E., Boxall, A. B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+the+aquatic+environment%3A+Evidence+for+or+against+adverse+impacts+and+major+knowledge+gaps%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology+and+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Microplastics in the aquatic environment: Evidence for or against adverse impacts and major knowledge gaps.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37, 2776-2796 (2018).</li>
<li>Ma, H., Pu, S., Liu, S., Bai, Y., Mandal, S., Xing, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+aquatic+environments%3A+Toxicity+to+trigger+ecological+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">Microplastics in aquatic environments: Toxicity to trigger ecological consequences.</a> Environmental Pollution. 261, 114089(2020).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%3A+A+Guide+for+the+Laboratory+Use+of+Zebrafish+%28Danio+reio%29.+4th+ed%22">The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio reio). 4th ed</a>. , University of Oregon Press. Eugene. (2000).</li>
<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 203, 253-310 (1995).</li>
<li>Pikuda, O., Xu, E. G., Berk, D., Tufenkji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+assessments+of+micro-+and+nanoplastics+can+be+confounded+by+preservatives+in+commercial+formulations%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology+Letters%22%5BJournal%5D)">Toxicity assessments of micro- and nanoplastics can be confounded by preservatives in commercial formulations.</a> Environmental Science & Technology Letters. 6, 21-25 (2019).</li>
<li>Lidster, K., Readman, G. D., Prescott, M. J., Owen, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+survey+on+the+use+and+welfare+of+zebrafish+Danio+rerio+in+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Fish+Biology%22%5BJournal%5D)">International survey on the use and welfare of zebrafish Danio rerio in research.</a> Journal of Fish Biology. 90, 1891-1905 (2017).</li>
<li>Pitt, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake%2C+tissue+distribution%2C+and+toxicity+of+polystyrene+nanoparticles+in+developing+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aquatic+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Uptake, tissue distribution, and toxicity of polystyrene nanoparticles in developing zebrafish (Danio rerio).</a> Aquatic Toxicology. 194, 185-194 (2018).</li>
<li>Lin, S. J., Zhao, Y., Nel, A. E., Lin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+An+in+vivo+model+for+nano+EHS+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: An in vivo model for nano EHS studies.</a> Small. 9, 1608-1618 (2013).</li>
</ol>

Yazar hiçbir rekabet veya finansal çıkar beyan etmemektedir.

AB Direktifi 2010/63/EU gibi bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunmasına ilişkin kılavuza göre, zebra balıklarının erken yaşam aşamalarını içeren bir deney için, bağımsız beslenme aşamasına kadar hayvan etiği izni zorunlu değildir (döllenmeden 5 gün sonra)17. Bununla birlikte, en iyi refah uygulaması zebra balığı kullanımını optimize etmek için önemlidir ve örneğin, insancıl anestezi ve ötenazi yöntemleri endişe verici olmalıdır. En çok laboratuvarda rutin olarak kullanılan ajan olan eti...

İlk kez 1900'lerde sentezlenen plastikler, çeşitli alanlarda yaygın olarak kullanılmaktadır ve bu da küresel üretimin hızlı büyümesine neden1. 2018 yılında dünya çapında yaklaşık 360 milyon ton plastik üretildi2. Doğal ortamdaki plastikler kimyasal, fiziksel veya biyolojik işlemler nedeniyle ince parçacıklara kadar bozulur3. Genellikle, boyutu 5 mm < ince plastik parçacıklar mikroplastikler olarak tanımlanır4. Mikroplastikler ayrıca kozmetik ürünlerden mikrobeadlar gibi belirli uygulamalar için tasarlanmıştır5. Neredeyse kalıcı kirleticiler olarak, mikroplastikler çevrede birikir ve bilim adamları, politika yapıcılar ve halktan giderek daha fazla ilgi çekmiştir1,6. Önceki çalışmalar, mikroplastiklerin balıklarda gastrointestinal hasar7, nörotoksikite 8 , endokrin bozulma9, oksidatif stres10ve DNA hasarı11 gibi olumsuz etkilere neden olabileceğini belgeledi. Bununla birlikte, mikroplastiklerin toksisitesi şimdiye kadar tam olarak ortaya çıkarılmamıştır12,13.
Zebra balığı embriyoları, küçük boyut, dış gübreleme, optik şeffaflık ve büyük kavramalar dahil olmak üzere birçok deneysel avantaj sunar ve erken yaşam aşamalarında kirleticilerin balıklar üzerindeki etkilerini incelemek için in vivo için ideal bir model organizma olarak kabul edilir. Ek olarak, biyolojik yanıtların değerlendirilmesi için sadece sınırlı miktarda test maddesine ihtiyaç vardır. Burada zebra balığı embriyoları 5 gün boyunca farklı mikroplastik konsantrasyonlarına (0.1, 1, 10 mg/L) maruz kalmakta ve zebra balığı embriyolarında/larvalarında mikroplastiklerin biyoakümülasyonu ve dağılımı değerlendirilmektedir. Bu sonuç, mikroplastiklerin balıklara toksisitesi hakkındaki anlayışımızı ilerletecektir ve burada açıklanan yöntem, zebra balıklarının erken yaşam aşamalarında diğer floresan madde türlerinin birikmesini ve dağılımını belirlemek için potansiyel olarak genellenebilir.

<table><tbody><tr><td>Floresan mikroskop</td><td>Nikon, Japonya</td><td>Eclipse Ti-S</td><td></td></tr><tr><td>Yeşil floresan etiketli polistiren boncuklar</td><td>Phosphorex, ABD</td><td>2103A</td><td></td></tr><tr><td>Trikain</td><td>Sigma-Aldrich, ABD</td><td>A5040</td><td></td></tr></tbody></table>

zebra balıklarının erken yaşam aşamalarında floresan mikroplastiklerin birikmesi ve dağılımı

Accumulation and Distribution of Fluorescent Microplastics in the Early Life Stages of Zebrafish

Yeni bir çevresel kirletici türü olarak, mikroplastik su ortamında yaygın olarak bulunmuştur ve sucul organizmalar için yüksek bir tehdit oluşturmaktadır. Mikroplastiklerin biyoakümülasyonu toksik etkilerinde önemli bir rol oynar; bununla birlikte, bir partikül olarak, biyoakümülasyonları diğer birçok kirleticiden farklıdır. Burada açıklanan, floresan mikroplastikler kullanarak zebra balığı embriyolarında veya larvalarında mikroplastiklerin birikmesini ve dağılımını görsel olarak belirlemek için uygulanabilir bir yöntemdir. Embriyolar, 120 saat boyunca 500 nm çapında floresan mikroplastiklerin farklı konsantrasyonlarına (0.1, 1 ve 10 mg/L) maruz kalır. Sonuçlarda mikroplastiklerin zebra balığı embriyolarında/larvalarında konsantrasyona bağlı bir şekilde biyoakümülate haline gelebilir. Kuluçkadan önce, embriyonik koronun etrafında güçlü floresan bulunur; zebra balığı larvalarında, yumurta sarısı kesesi, perikard ve gastrointestinal sistem mikroplastiklerin ana birikmiş bölgeleridir. Sonuçlar, zebra balıklarındaki mikroplastiklerin erken yaşam aşamalarında alınmasını ve içselleştirilmesini göstermektedir, bu da mikroplastiklerin su hayvanları üzerindeki etkisini daha iyi anlamak için temel sağlayacaktır.

Floresan mikroplastiklerin dağılımı ve birikimi Şekil 1 ve Tablo 1'degösterilmiştir. Pozlanmamış grupta (kontrol) gözle görülür bir floresan görülmez. Bununla birlikte, farklı mikroplastik konsantrasyonlarına maruz kalındıktan sonra koroni çevreleyen bir floresan birikimi bulunur (24 hpf). Larvalarda yeşil floresan da tespit edilir ve floresan seviyelerinin konsantrasyona ve zamana bağlı bir şekilde arttığı görülmektedir. Yumurta sarısı kesesi, perikard ve gastrointestinal s...

Zebra balığı embriyoları/larvaları dışarıdan gelişir ve optik olarak şeffaftır. Erken yaşam aşamalarında balıklarda mikroplastiklerin biyoakümülasyonu floresan etiketli mikrobeadlarla kolayca değerlendirilir.

Zebra Balıklarının Erken Yaşam Aşamalarında Floresan Mikroplastiklerin Birikmesi ve Dağılımı

As a new type of environmental pollutant, microplastic has been widely found in the aquatic environment and poses a high threat to aquatic organisms. The ...

Zebra balıklarının erken yaşam aşamalarında floresan mikroplastiklerin birikmesi ve dağılımı. Giriş. Mikroplastiklerin biyoakümülasyonu toksik etkilerinde önemli bir rol oynar. Bununla birlikte, partikül olarak, biyoakümülasyonları diğer birçok kirleticiden farklıdır.Burada açıklanan, floresan mikroplastikler kullanarak zebra balığı embriyolarında veya larvalarında mikroplastiklerin birikmesini ve dağılımını görsel olarak belirlemek için uygulanabilir bir yöntemdir. Deneyler, hayvan refahının etik olarak gözden geçirilmesi için ulusal rehber Laboratuvar hayvan Kılavuzu'na uygun olarak gerçekleştirildi. Bir, embriyo toplama.Yetişkin zebra balıkları Çin Zebra Balığı Kaynak Merkezi'nden kaynaklanmaktadır. Balıklar, 14 ve 10 saatlik bir fotoperiyod üzerinde sabit bir sıcaklıkta, yani 28 santigrat derece, ışık:karanlık, devridaim kömür filtreli musluk suyu sistemine sahip 20 litrelik cam tanklarda tutulur. Balıklar Artemia nauplii ile günde iki kez beslenir.Yiyeceklerin günde maksimum% 3 balık ağırlığında verilmesi ve her seferinde beş dakika içinde yenmesi önerilir. İyi gelişmiş yetişkin zebra balıkları, üremeden bir gece önce bir erkek ila iki dişi oranında yumurtlama tankına aktarılır. Ertesi sabah, balık ışık döngüsünün başlangıcından sonra yumurtlamaya başlar.Yumurtalar pasteur pipet kullanılarak toplanır, birkaç kez% 10 Hank çözeltisi ile durulanır ve daha sonra mikroskop kullanılarak döllenme haline gelir. Döllenmiş yumurtalar, döllenmeden yaklaşık iki saat sonra bölünme süresinden geçer ve açıkça tanımlanabilir. Döllenmiş embriyolar, 28 santigrat derecede dezenfeksiyon için% 10 Hank çözeltisinin% 1'i metilen mavisi ile 200 mililitrelik bir beherde inkübe edilir.Yükleme oranı her 2 mililitrelik çözeltide bir embriyoyu geçmiyor. İki, mikroplastik süspansiyonların hazırlanması. Nominal çapı 500 nanometre olan yeşil floresan etiketli polistiren boncukların stok çözeltisi 10 dakika boyunca sonicated edilir.Litre başına 0,1, 1 ve 10 miligram olmak üzere istenen maruz kalma çözümlerini üretmek için stok çözeltisini %10 Hank'in çözeltisiyle seyreltin. Mikroplastiklerin maruz kalma çözeltileri maruz kalmadan önce her zaman taze olarak hazırlanır. Üç, mikroplastik maruziyet.Altı yeni döllenmiş embriyo rastgele seçilir ve daha sonra farklı konsantrasyonlarda beş mililitre mikroplastik çözelti içeren altı kuyu plakasının her kuyusuna aktarılır. %10 Hank'in çözümünü içeren kontrol grupları dahildir. Her tedavi için toplam 18 embriyoya sahip triplikat kuyuları kullanılır.Embriyolar yetişkinlerle aynı açık-karanlık döngü ve sıcaklık altında inkübe edilir ve her 12 saatte bir gözlenir. Ölüler hemen çıkarılır. Mikroplastik çözeltiler her 24 saatte bir %90 yenilenir.Maruz kalma süresi boyunca balıklar beslenmez. Genellikle, embriyonun kuluçkalanması döllenme sonrası 48 saatte başlar ve döllenme sonrası yaklaşık 72 saatte tamamlanır. Dört, mikroplastik dağılımının değerlendirilmesi.Döllenme sonrası 24-48-72-96 ve 120 saatlik bir zamanda, üç kopyanın her birinden biri olan embriyolar ve larvalar rastgele seçilir ve% 10 Hank'in çözeltisi ile durulanır. Embriyolar ve larvalar düzenlenir ve gözleme hazırlanır. Önceden, larvalar bir Petri kabına aktarılır ve anestezi için% 0.016 trikaine maruz kalır.Balıklar floresan mikroskop ile gözlemlenir ve görüntüleme yazılımı ile görüntülenir. Balıklardaki floresan yoğunluğu ImageJ NIH ile daha da ölçülür. Temsili sonuçlar.Sonuçlarda mikroplastiklerin zebra balığı embriyolarında ve larvalarında konsantrasyona bağlı bir şekilde biyoakümülate edebildiği gösterilmiştir. Kuluçkadan önce, embriyonik koronun etrafında güçlü floresan bulunur;zebra balık larvalarında ise yumurta sarısı kesesi, perikard ve gastrointestinal sistem mikroplastiklerin ana birikmiş bölgeleridir. tartışma. Bu sonuç, mikroplastiklerin balıklara toksisitesi hakkındaki anlayışımızı ilerletecektir ve burada açıklanan yöntem, zebra balıklarının erken yaşam aşamalarında diğer floresan madde türlerinin birikmesini ve dağılımını belirlemek için potansiyel olarak genellenebilir.Koroyon, büyük boyutlu parçacıklara karşı etkili bir bariyer görevi görebileceğinden, maruz kalmadan önce azil işlemi gerekebilir. Bununla birlikte, korozyon bozulmamış embriyo, gerçek dünyadaki maruz kalma durumu göz önüne alındığında kirleticilerin ekotoksikliğini değerlendirmek için daha fazla tavsiye edilir. Mikroplastiklerin çözeltideki davranışı biyoyararlanm için de kritik öneme sahiptir.Mikroplastiklerin fizikokimyasal özellikleri maruz kalma süresi boyunca takip edilmelidir.

accumulation-distribution-fluorescent-microplastics-early-life-stages

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Standart embriyo mikroenjeksiyonu ve stereomikroskopi ekipmanları kullanılarak, zebrafish larvalarının mikrogavage işlemi için yeni bir yöntem sunuyoruz. Mikrogavage işleminin, çeşitli materyallerin kontrollü miktarlarda özellikle zebrafish larvalarının intestinal lümenine iletilmesi için kullanışlı, güvenli ve etkili bir teknik olduğunu gösteriyoruz.

Zebra balığı larvalarının Microgavage

Kaynak: Zhang, X., ve diğerleri. Biyomateryalle İlişkili Staphylococcus aureus Enfeksiyonunun İn Vivo Görselleştirmesi ve İntravital Analizi için Zebra Balığı Embriyo Modeli. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, Staphylococcus aureus enjekte edilen zebra balığı embriyolarının floresan görüntülemesini göstererek, biyomateryal mikrokürelerin in vivo konakçı-patojen etkileşimleri üzerindeki etkisini değerlendirmek için enfeksiyon ilerlemesinin ve bakteri dağılımının ölçülmesini sağlar.

 Zebra Balığı Embriyolarında Biyomateryalle İlişkili Bakteriyel Enfeksiyonun Floresan Görüntülemesi

Zebra balığı embriyolarının dokuya özel floresans yarı otomatik görüntüleme için bir protokol aşağıda tarif edilmiştir.

Zebra balığı Embriyolar Doku spesifik Floresans yarı otomatik Görüntüleme

Zebra balığı, kronik böbrek hastalığı (KBH) modellemek için popüler bir araçtır. Ancak, kendi küçük boyutu imkansız geleneksel yöntemlerle böbrek fonksiyonlarını değerlendirmek için yapar. Biz CKD zebrafish böbrek fonksiyonunun kantitatif analiz sağlayan bir floresan boya böbrek boşluk tahlil 1 açıklar.

Bir Floresan Gümrükleme Testi kullanarak Zebra balığı Böbrek Fonksiyon Değerlendirilmesi

Zebra balığı, genetik ve gelişimsel çalışmalar için mükemmel bir model sistemdir. Boncuk implantasyonu, lokal hücresel ortamlarda değişiklikler yaparak gelişimsel mekanizmaları sorgulamak için kullanılabilecek değerli bir doku manipülasyon tekniğidir. Bu protokol, zebra balığı embriyosunda mikroboncuk implantasyonunun nasıl gerçekleştirileceğini açıklar.

Zebra balığı Embriyo microbead İmplantasyonu

Zebra balığı, diyetle alınan lipid işleme ve metabolik hastalıkların değerli bir modeli olarak ortaya çıkmaktadır. Lipid açısından zengin larva yemlerinin protokolleri, diyet floresan lipid analoglarının canlı görüntülenmesi ve gıda alımının miktarının belirlenmesi açıklanmıştır. Bu teknikler çeşitli tarama, görüntüleme ve hipoteze dayalı sorgulama tekniklerine uygulanabilir.

Larva Zebra balığı için Paradigma Besleme Yüksek yağlı: Besleme, Canlı Görüntüleme ve Gıda Alımı miktarının belirlenmesi

Bu iletişim kuralı fluorescently etiketli gıda yüksek üretilen iş moda larva zebra balığı bağırsak yoluyla transit süresini ölçmek için hedeftir.

Yüksek işlem hacmi ölçüm larva zebra balığı kullanarak Gut Transit süre

Burada zebra balığı embriyoları Tg (vtg1: mCherry) östrojenik etkilerinin tespiti için kullanımı için ayrıntılı bir protokol dür. Protokol, balığın yayılmasını ve embriyoların tedavisini kapsar ve endokrin bozucu bileşiklerin (EDC) neden olduğu floresan sinyallerin saptanması, belgelenmesi ve değerlendirilmesini vurgular.

Endokrin Bozan Bileşiklerin Östrojenik Etkilerini Test Etmek Için Tg(Vtg1:mcherry) Zebrabalığı Embriyolarının Kullanılması

Bu makalede zebrabalığı larvaları modeli kullanılarak çevresel kirleticilerin nörodavranışsal toksisitesinin değerlendirilmesi için ayrıntılı bir deneysel protokol sunulmuştur, buna maruz kalma süreci ve nörodavranışsal göstergeler için testler de dahildir.

Çevresel Kirleticilerin Zebrabalığı Larvaları Üzerindeki Nörodavranışsal Etkilerinin İncelenmi

Gelişmekte olan zebra balığı optik tektumunda mikroglia hücrelerinin canlı görüntülemesini gerçekleştirmek için hızlı taramalı konfokal mikroskopiden yararlanan ve bu hücrelerin dinamiklerinin in vivo analizine olanak tanıyan bir yöntem gösteriyoruz.

Zebra Balığı Embriyosunda Mikroglia Dinamiğinin Canlı Görüntülenmesi ve Karakterizasyonu

Bu protokol, zebra balığı larvalarında döllenmeden 3-7 gün sonra bir ilaç tarama prosedürünü ve ardından morfolojik değerlendirmeyi tanımlar.

Erken Evre Zebra Balığı Larvalarında Küçük Molekül Taraması ve Toksisite Testi

Keşfedin, Danio rerio embriyolarında floresan mikroplastiklerin birikimini ve dağılımını görselleştirmek için bu güvenilir protokolü. Yüksek konsantrasyonlarda yumurta kesesi ve sindirim sisteminde birikim gözlemlenir.

Zebra Balıklarının Erken Yaşam Aşamalarında Floresan Mikroplastiklerin Birikmesi ve Dağılımı

Daha fazla video keşfet