Name: Kendi Kendine Monte Edilmiş Vaskülerleştirilmiş İnsan Derisi Eşdeğerlerinin Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-12T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Öğrenin, damarlandırılmış insan derisi eşdeğerlerini üretme ve hacimsel analiz yapma yöntemini. Bu protokol, uzun süreli kültür ve kişiselleştirilmiş tıp araştırmaları için özelleştirilebilir adımlar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Dr. Jim Rheinwald59 ve Dr. Ellen H. van den Bogaard20'ye N/TERT hücre hatları cömert hediyeleri için teşekkür ediyor. Bu çalışma Amerikan Kalp Derneği (19IPLOI34760636) tarafından desteklendi.

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Bu protokol, VHSE'lerin üretimi ve üç boyutlu analizleri için basit ve tekrarlanabilir bir yöntem göstermiştir. Daha da önemlisi, bu yöntem birkaç özel teknik veya ekipman parçasına dayanır ve bu da onu çeşitli laboratuvarlar için erişilebilir hale getirir. Ayrıca, hücre tipleri protokoldeki sınırlı değişikliklerle değiştirilebilir ve araştırmacıların bu protokolü özel ihtiyaçlarına uyarlamalarına izin verebilir.
Uygun kollajen jelasyonu cilt kültürünün oluşturulmasında zorlu bir adımdır. Özellikle saflaştırma olmadan ham preparatlar kullanırken, eser kirleticiler jelleşme sürecini etkileyebilir. Tutarlılığı sağlamaya yardımcı olmak için, deney grupları VHSE üretimi için kullanılacak aynı kollajen stoğu ile yapılmalıdır. Ayrıca, jelleşme ideal olarak 7-7.4 pH'da gerçekleşmelidir ve eser kirleticiler pH'ı değiştirebilir. Herhangi bir kollajen stoğu kullanmadan önce, istenen konsantrasyonda bir uygulama asellüler jel yapılmalı ve jelleşmeden önce pH ölçülmelidir. Dermal bileşen tohumlama başlamadan önce bu kollajen kalite kontrolünü tamamlamak, tam bir deney kurmadan önce uygun jelleşme ve kollajen homojenliği ile ilgili sorunları belirleyecektir. Hücresel kollajeni doğrudan bir kültür kesici ucuna tohumlemek yerine, tüm pH ölçeğini değerlendiren ve 7-7.4 pH'ını doğrulayan bir pH şeridine biraz kolajen tohumlayın. Jelleşme, kollajen jel çözeltisinin bir damlacığı bir kapak ucuna veya doku kültürü plastik kuyu plakasına uygulanarak değerlendirilebilir (bir kültür kesici ucun sınırlı taraflarını simüle etmek için bir kuyu plakası önerilir). Jelleşme süresinden sonra kollajen katı olmalı, yani plaka eğildiğinde akmamalıdır. Faz kontrastı mikroskopisi altında kollajen homojen ve net görünmelidir. Kollajen tohumlamadan kaynaklanan kabarcıklar normaldir, ancak berrak jel içindeki büyük amorf opak kollajen lekeleri, yetersiz karıştırma, yanlış pH ve / veya karıştırma sırasında kollajenin soğutulmaması nedeniyle bir sorun olduğunu gösterir.
Hücre tohumlama miktarları ve ortam ayarlanabilir. Yukarıdaki protokolde, kapsüllenmiş hücre miktarları, dermal yapının üzerine tohumlanmış 1,7 x 10 5 keratinosit ile kollajen mL başına 7,5 x10 4 fibroblast ve 7,5 x10 5 endotel hücresinde 12 kuyulu bir kesici uç için optimize edilmiştir. Hücre yoğunlukları, çeşitli kollajen konsantrasyonlarında 3D vasküler ağ neslini araştıran ön çalışmalara ve önceki araştırmaya dayanarak bu VHSE protokolü için optimize edilmiştir48 ve HSE nesil22,80,81. Benzer sistemlerde, yayınlanan endotel hücre yoğunlukları 1.0 x 106 hücre / mL kollajen48'dir; fibroblast konsantrasyonları genellikle kollajen22, 28,82 ila1 x 105hücre / mL kollajen 8 ,58 ,83,84,850.4 x 105hücre / mL arasında değişir; ve keratinosit konsantrasyonları 0,5 x 105 [hücreler/cm2]80 ila 1 x 105 [hücreler/cm2]8arasında değişmektedir. Hücre yoğunlukları belirli hücreler ve araştırma sorusu için optimize edilebilir. Fibroblastlar gibi kontrtil hücreli üç boyutlu kültürler, canlılık azalmasına ve kültür kaybına yol açabilir86,87. Dermal bölmenin daralmasını (daha fazla dermal hücre, daha fazla kontrantil dermal hücre, daha uzun dalgıçlık kültürleri veya daha yumuşak matrislerle ortaya çıkabilir) test etmek ve epidermal yüzey kapsamını test etmek için ön deneyler tamamlanmalıdır. Ayrıca, aşırı dermal kasılma meydana gelirse veya farklı bir keratinosit kapsama oranı gerekiyorsa, dalgıçlıktaki gün sayısı ve serum içeriğinin koniklik oranı da özelleştirilebilir. Örneğin, dermal submersion döneminde veya keratinositler bir yüzey monolayer kurarken kasılma fark edilirse, serum konikleme işleminde daha hızlı hareket etmek ve VHSE'leri ALI'ye yükseltmek ek kasılmaların önlenmesine yardımcı olabilir. Benzer şekilde, keratinosit kapsamı ideal değilse, VHSE'nin serum olmadan batırıldığı gün sayısını değiştirmek epidermal monolayer kapsamını artırmaya ve serum dışarıda bırakıldığından kasılma azaltabilir. Hücre yoğunluklarındaki değişiklikler veya yukarıdaki diğer öneriler, belirli kültürler ve araştırma hedefleri için optimize edilmelidir.
Hava sıvı arayüzü (ALI) döneminde epidermisin uygun bir tabakalaşmasını sağlamak için, her bir kuyuda sıvı seviyelerini düzenli olarak kontrol etmek ve korumak önemlidir, böylece ALI ve her yapının uygun hidrasyon kültür uzunluğu boyunca tutulur. Tutarlı ALI düzeyleri belirlenene kadar medya düzeyleri günlük olarak denetlenmeli ve izlenmelidir. Epidermal tabaka kuru değil, nemli görünmelidir, ancak yapıda ortam havuzları olmamalıdır. ALI sırasında, yapı normal olan opak beyaz/sarı bir renk geliştirecektir. Epidermal tabaka muhtemelen düzensiz bir şekilde gelişecektir. Yaygın olarak, VHSE'ler kollajen tohumlama veya dermal kasılma nedeniyle eğilir. Yapının ortasında daha küçük yapılarda (24 kuyu boyutunda) daha yüksek bir epidermal kısım ve VHSE çevresi çevresinde 12 kuyu boyutunda bir sırt oluşumu gözlemlemek de normaldir. Yapıların daralması13 bu topoğrafik oluşumları değiştirebilir ve/veya hiç gözlemlenmeyebilir.
VHSE'lerin boyanması ve görüntülenmesi VHSE'lere mekanik manipülasyonu tanıtır. Her kültürün manipülasyonunun planlandırılması ve sınırlandırılması çok önemlidir. Manipülasyon gerektiğinde, VHSE'leri kesici uç zarlarından çıkarırken, yapı yüzeyine boyama veya yıkama çözümleri eklerken ve görüntüleme hazırlığı sırasında depolama/görüntüleme kuyularındaki VHSE'leri çıkarırken ve değiştirirken nazik hareketleri koruyun. Özellikle, epidermal bileşenin apikal katmanları kırılgan olabilir ve bazal epidermal tabakaları kesme riski altındadır. Epidermisin apikal katmanları kırılgandır ve doğal dokuda bile desquamasyondan geçer4, ancak epidermal yapının doğru analizi için hasarı veya kaybı en aza indirmek önemlidir. Epidermal katmanlar yapıyı kaldırırsa, ayrı ayrı görüntülenebilirler. Epidermisin bazal katmanları büyük olasılıkla hala dermis'e bağlıyken, apikal katmanların bölümleri ayrılabilir. Epidermisin görselleştirilmesi için, yoğun çekirdek epidermisin alt ve orta katmanlarının bir özelliği olduğundan, nükleer bir leke bunu gözlemlemede yardımcı olur.
VHSE post-fiksasyonunun konfokal görüntülemesi protokolde tartışılmıştır, ancak VHSE'leri kültür boyunca dik tabanlı optik tutarlılık tomografisi (OCT)88 , 89,90,91,92,93ile görüntülemek de mümkündür. VHSE, gözle görülür etkileri olmadan en az iki saat boyunca inkübasyon veya nemlendirme olmadan görüntülemeye dayanacak kadar kararlıdır. OCT etiketsiz ve noninvaziv olduğundan, olgunlaşma sırasında epidermal kalınlığı izlemek mümkündür. Diğer noninvaziv görüntüleme yöntemleri de kullanılabilir.
VHSE'nin daha derinlerinde lazer zayıflaması nedeniyle kombine dermal ve epidermal yapıların hacimsel görüntülemesi zor olabilir. Bu, yapının epidermal taraftan (Şekil 1) ve dermal taraftan ( Şekil2) olmak üzere iki yönde görüntülenmesi ile azaltılabilir ve dermal vasküler yapıların ve epidermisin iyi çözülmesini sağlar. Ek olarak, numune temizlenebilir ve tüm yapının hacimsel görüntülerinin minimum zayıflama ile olmasını sağlar. Çeşitli temizleme yöntemleri denendi, ancak açıklanan methanol / metil salisilat yöntemi en iyi sonuçları verdi. Diğer takas yöntemlerini optimize etmek isteyen araştırmacılar bu incelemelere yönlendirilir49,61,62. Temizleme ise, yöntem floroforlara ve/veya yapıya zarar verebileceği için, temizlemeden önce numunenin tam olarak görüntülenebilmesi önerilir. Ayrıca, floresan birkaç gün içinde solabileceğinden, görüntüleme temizlendikten sonra mümkün olan en kısa sürede tamamlanmalıdır.
Basitlik ve erişilebilirlik için, bu protokol önceki literatürde bulunan en basit ortam karışımlarını kullandı11,80. Basit medya karışımlarını kullanmanın birçok avantajı olsa da, bu seçimin sınırlamaları da kabul edilmektedir. Diğer gruplar, belirli medya bileşenlerinin epidermal ve dermal sağlık üzerindeki etkilerini incelediler ve dış serbest yağ asitleri / lipitler gibi diğer medya katkı maddeleri94'ünepidermisin stratum korneumunu artırdığını ve cilt bariyeri işlevini iyileştirdiğini buldular. İmmünofluoresan belirteçlerimiz epidermisin içinde uygun farklılaşma ve tabakalaşma gösterse de, yapılan çalışmalara bağlı olarak ek medya optimizasyonu gerekebilir. Ayrıca, burada sunulan VHSE'ler değerlendirilirken epidermal BM'nin kapsamlı bir analizi yapılmamıştır. BM'nin bütünlüğü cilt eşdeğerlerinin önemli bir göstergesidir; çeşitli gruplar, kültür süresi ve BM işaretleri95 üzerindeki etkisinin yanı sıra fibroblast varlığının analizi ve BM ekspresyörü üzerinde büyüme faktörü etkileri hakkında araştırmalar yapmıştır14. Bu protokol kullanırken BM bileşeninin analizinin değerlendirilmesi ve optimize edilmesi gerektiğini belirtmek önemlidir.
Bu protokolde, ALI'de 8 hafta sonra sonuçları gösteren VHSE oluşturma prosedürü açıklanmaktadır. VHSE kültürleri ALI'de gözle görülür bir değişiklik veya canlılık kaybı olmadan 12 haftaya kadar kültürlenmiştir ve daha uzun süre yaşayabilir olmaları mümkündür. Daha da önemlisi, bu protokol dermal fibroblastların IMR90 akciğer fibroblastları ile değiştirilmesinde gösterildiği gibi, yaygın olarak bulunan hücre tiplerine kolayca uyarlanabilir. Araştırmacının ihtiyacına ve kullanılabilir kaynaklara bağlı olarak, daha farklı hücre türleri medya optimizasyonu gerektirebileceğinden, kültür üzerindeki hücre türleri ve ortam karışımları ayarlanabilir. Özetle, bu prosedürler cilt biyolojisi ve hastalıklarının incelenmesi için VHSE'lerin kültürü hakkında netlik sağlamak içindir. Erişilebilirliği en üst düzeye çıkarmak için protokol, araştırma çalışmalarının özel ihtiyaçlarına göre daha da özelleştirilebilen minimal etkili bir yaklaşım olarak ortak ekipman, hücre hatları ve reaktifler kullanılarak bu basit ve sağlam şekilde geliştirilmiştir.

İnsan derisi, bağışıklık/ mekanik bariyer görevi, vücut sıcaklığını düzenleme, su tutma ve duyusalrollerekatılma dahil olmak üzere birçok temel biyolojik işlevi yerine getirir 1,2,3,4. Anatomik olarak, cilt insan vücudundaki en büyük organdır ve üç ana katmandan (epidermis, dermis ve hipodermis) oluşur ve epidermal hücrelere ek olarak stromal, vasküler, glandüler ve bağışıklık / sinir sistemi bileşenlerinden oluşan karmaşık bir sisteme sahiptir. Epidermisin kendisi, bariyer fonksiyonunu ve doğal cildin diğer yapılarını (yani ter ve yağ bezleri, tırnaklar) korumak için sürekli yenilenen dört hücre katmanından oluşur3. Cilt fizyolojisi bağışıklık fonksiyonu, yara iyileşmesi, kanser biyolojisi ve diğer alanlarda önemlidir ve araştırmacıların in vitro monokültürlerden in vivo hayvan modellerine kadar çok çeşitli modeller kullanmasına yol açmaktadır. Hayvan modelleri cilt fizyolojisinin tüm karmaşıklığını inceleme yeteneği sunar, ancak fareler gibi yaygın olarak kullanılan hayvan modelleri insanlara kıyasla önemli fizyolojik farklılıklara sahiptir5. Bu sınırlamalar ve hayvan modellerinin artan maliyeti, birçok araştırmacının insan derisinin fizyolojisini daha yakından yansıtan in vitro modeller geliştirmeye odaklanmasına neden oldu1,6. Bunlardan daha basit model türlerinden biri, hücresel dermal matris üzerinde sadece epidermal keratinositlerden oluşan, ancak in vivo olarak görülen epidermal farklılaşma ve tabakalaşmayı yakalayan insan epidermal eşdeğeridir (HEE; yarı kalınlıkta cilt modelleri olarak da adlandırılır). Bunun üzerine inşa edilen dermal ve epidermal bileşenler (keratinositler ve fibroblastlar) içeren modeller genellikle insan derisi eşdeğerleri (HSE), tam kalınlıkta cilt modelleri veya organotipik cilt yapıları (OSC) olarak adlandırılır. Kısaca, bu modeller jel matrisler içindeki dermal hücrelerin kapsüllenerek ve üstte epidermal hücrelerin tohumlanarak oluşturulur. Epidermal farklılaşma ve tabakalaşma daha sonra özel ortam ve hava maruziyeti ile elde edilebilir7. Cilt eşdeğerleri en sık kollajen tip I (fare kuyruğu veya sığır derisi kökenli)1,8,ancak benzer modeller fibrin 9,10, fibroblast gibi diğer matris bileşenlerini içeren dermal jeller kullanılarak kendi kendine montaj teknikleri ile üretilmiştir. türetilmiş11,12, kadavra epidermizlenmiş membranlar13,14,15,16, ticari olarak mevcut jeller ve diğerleri 1,12,13,17,18,19. Şu anda, ticari olarak mevcut cilt eşdeğerleri vardır (daha önce incelenmiş olduğu gibi1,2). Bununla birlikte, bunlar öncelikle terapötik amaçlar için geliştirilmiştir ve belirli araştırma sorularına kolayca özelleştirilemez.
HSE'ler yara iyileşmesi, greftleme, toksikoloji ve cilt hastalığı/gelişimi 11,12,13,16,8 ,20,21,22,23çalışmalarında uygulanmıştır. 3D kültürü, 2D kültürlere kıyasla insan dokusunun işlevlerini daha kapsamlı bir şekilde modellese de24, in vivo popülasyonu daha doğru yansıtan çeşitli hücre türlerinin dahil edilmesi, karmaşık dokularda hücre-hücre koordinasyonu çalışmalarına olanak sağlar24,25,26. Çoğu HSE sadece dermal fibroblastlar ve epidermal keratinositleriçerir 27In vivo cilt ortamı diğer birçok hücre tipini içermelerine rağmen. Son çalışmalar daha fazla hücre popülasyonu dahil başladı; Bunlar arasında10,28 , 29,30,31 ,32,33,34,alt deri dokusundaki adipositler35,36,sinir bileşenleri19,2'dekiendotel hücreleribulunur.1 , kök hücreler27,37,38, bağışıklık hücreleri10,39,40,41,42ve diğer hastalık/kansere özgü modeller16, 40,43,44,45,46,47. Bunlar arasında özellikle önemli olan vaskülattır; Bazı HSE'ler vasküler hücreler içerirken, genel olarak hala tüm dermis10, 29,genişletilmiş in vitro stabilite28 ve uygun damar yoğunluğu boyunca bağlantıya sahip kapsamlı kılcal elementlerden yoksunlar. Ayrıca, İsG modelleri tipik olarak HSE'lerin üç boyutlu yapısının analizini sınırlayan kültür sonrası histolojik bölümleme yoluyla değerlendirilir. Üç boyutlu analiz, vasküler yoğunluğun hacimsel olarak değerlendirilmesinisağlar 48,49 ve epidermal kalınlık ve farklılaşmanın bölgesel varyasyonunu sağlar.
HSE'ler en yaygın organotipik modellerden biri olmasına rağmen, uygun hücre dışı matris ve hücre yoğunluklarının tanımlanması, medya tarifleri, uygun hava sıvısı arayüz prosedürleri ve kültür sonrası analiz dahil olmak üzere bu yapıların oluşturulmasında birçok teknik zorluk vardır. Ayrıca, HEE ve HSE modelleri protokoller yayınlamış olsa da, histolojik analizden ziyade dermal vaskülat ve hacimsel görüntülemeyi içeren ayrıntılı bir protokol yoktur. Bu çalışma, esas olarak ticari hücre hatlarından damarlı insan derisi eşdeğerleri (VHSE) kültürü için erişilebilir bir protokol sunun. Bu protokol, farklı hücre türlerine ve araştırma ihtiyaçlarına doğrudan adaptasyon sağlayan kolayca özelleştirilebilir olacak şekilde yazılmıştır. Erişilebilirlik, kullanılabilirlik ve maliyet açısından, basit ürünlerin kullanımı ve üretim teknikleri, piyasada bulunan ürünlerin kullanımına göre önceliklendirilmiştir. Ayrıca, VHSE'nin üç boyutlu yapısının değerlendirilmesine izin veren basit hacimsel görüntüleme ve nicelleştirme yöntemleri açıklanmıştır. Bu prosedürün sağlam ve erişilebilir bir protokole çevrilmesi, uzman olmayan araştırmacıların bu önemli modelleri kişiselleştirilmiş tıp, damarlı doku mühendisliği, greft geliştirme ve ilaç değerlendirmesinde uygulamalarını sağlar.

<table><tbody><tr><td>1 N NaOH</td><td>Fisher Chemical</td><td>S318-100</td> <td>(Laboratuvar stokundan seyreltin)</td></tr><tr><td>% 4 Paraformaldehit</td><td>ACROS Organics</td> <td># 41678-5000, Lot # B0143461</td><td>PBS'de katı Paraformaldehit kullanılarak yapılmıştır, pH 6.9'a ayarlanmıştır</td></tr><tr><td>Otoklavlanmış forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td> <td># 11295-00</td><td>Dumont # 5 forseps</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Fisher biyoreaktifleri</td><td>Cat # BP510-250, Lot # 190231</td><td>Rnase, Dnase, Proteaz İçermeyen</td></tr><tr><td>Hücre hattı, Endotelyal: Mikrovasküler Endotel Hücresi (HMEC1)</td><td>ATCC</td><td>CRL-3243</td><td>SV40 Ölümsüzleştirilmiş mikrovasküler endotel hücresi. 750.000 hücre/mL kollajen kullanıldığını unutmayın.</td></tr><tr><td>Hücre hattı, Fibroblastlar: dermal İnsan fibroblastı, yetişkin</td><td>ATCC</td><td>PCS-201-012</td><td>Birincil dermal hücreler. 75.000 hücre/mL kollajen kullanıldığını unutmayın.</td></tr><tr><td>Hücre hattı, Fibroblastlar: insan akciğer firbroblastı (IMR90)</td><td>ATCC</td><td>CCL-186</td><td>Birincil embriyonik hücreler. 75.000 hücre/mL kollajen kullanıldığını unutmayın.</td></tr><tr><td>Hücre hattı, Keratinosit: N/TERT-1</td><td></td><td></td><td>hTERT ekspresyonu ile ölümsüzleştirildi. N/TERT-1, higromisin direnci sağlayan retroviral bir vektör kullanılarak yapıldı. Dickson ve ark. 2000 tarafından kurulan hücre hattı. ATCC PCS-200-010 veya PCS-200-011 ile değiştirilebilir. Yapı başına 170.000 hücre kullanıldığını unutmayın; N/TERT1 hücreleri, %30 birleşik olan plakalardan kullanılmalıdır - iki adet %30 birleşik 90 mm doku kültürü kabı gereğinden fazla hücre verir. Yazarlar, Dr. Jim Rheinwald ve Dr. Ellen H. van den Bogaard'a cömert N/TERT hücre hatları armağanları için teşekkür eder.</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Termo Bilimsel; Sorvall Legend X1R</td><td></td> <td>(standart laboratuvar ekipmanı)</td></tr> <tr><td>Hesaplama Yazılımı</td><td>MATLAB</td><td>MATLAB 2020a</td><td>MathWorks, Natick, MA.</td></tr><tr><td>Konfokal Mikroskop</td><td>Leica TCS SPEII konfokal</td><td></td><td>Lazer tarama. Diğer konfokaller veya dekonvolüsyon mikroskobu ile değiştirilebilir.</td></tr><tr><td>Kapak Camı (22 x 22)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545F</td><td>0,13-0,17 mm No.1 Kalınlık</td></tr><tr><td>Siyanoakrilat süper yapıştırıcı veya silikon gres</td><td>Tutkal Ustaları</td><td>#THI0102</td><td>Tutkal Ustaları, KALIN, Anında Tutkal, Siyanoakrilat; süper yapıştırıcı tercih edilir</td></tr><tr><td>DMEM medya tabanı</td><td>Corning; Mediatech, Inc</td><td>REF # 10-013-CM; Lot # 26119007 DMEM</td><td>, 1X (Dulbecco'nun Eagle's Medium'un Modifikasyonu) 4.5 g / L glikoz, L-glutamin ve sodyum piruvat</td></tr><tr><td>DMEM / F-12 50/50</td><td>Corning ile; Mediatech, Inc</td><td>REF # 10-090-CV; Lot # 21119006</td><td>DMEM / F-12 50/50, 1X (Dulbecco'nun Modu. Eagle's Medium/Ham's F12 50/50 Karışımı) L-glutamin</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon Labs</td> <td>#V1101</td> <td>(standart laboratuvar reaktifi)</td></tr> <tr><td>ile Fetal Sığır Serumu</td><td>Fisher Scientific</td><td>Cat # FB12999102, Lot # AE29451050</td><td>Araştırma Sınıfı Fetal Sığır Serumu, Üçlü 0.1 um steril filtreli</td></tr><tr><td>İnce uçlu forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td> <td># 11295-00</td><td>Dumont # 5 forseps</td></tr><tr><td>İnsan Epidermal Büyüme Faktörü (EGF)</td><td>Peprotech</td><td>Cat # AF-100-15-1MG, Lot # 0318AFC05 D0218</td><td>PBS Hidrokortizon Alfa Easar'da %0.1 BSA'dan</td></tr><tr><td></td><td></td> oluşur <td>Lot # 5002F2A</td><td>DMSO</td></tr><tr><td>İnsülinden (insan)</td> <td>oluşur Peprotech</td><td>Lot # 9352621</td><td></td></tr><tr><td>Ters Işık / Faz Kontrast Mikroskobu</td><td>VWR</td><td>76317-470</td> <td>(standart laboratuvar ekipmanı)</td></tr> <tr><td>Isoproterenol</td><td>Alfa Aesar</td><td>#AAJ6178806</td><td>DL-İzoproterenol hidroklorür, %98</td></tr> <tr><td>Keratinosit-SFM (1x) ortam tabanı</td><td>Gibco; Yaşam Teknolojileri Şirketi</td><td>REF #: 10724-011; Lot # 2085518</td><td>Keratinosit-SFM (1X); serum içermeyen orta</td></tr><tr><td>L-Askorbik Asit Fisher</td><td>Kimyasal Kedi</td><td># A61-100, Lot # 181977, CAS # 50-81-7</td><td>Kristal. L-Askorbik asit ayrıca bir tuz</td></tr><tr><td>L-glutamin (katı)</td> olarak da satın alınabilir <td>Fisher Bioreagents</td><td>CAT # BP379-100, LOT # 172183, CAS # 56-85-9</td><td>L-Glutamin, beyaz kristaller veya Kristal toz</td></tr><tr><td>MCDB 131 medya tabanı</td><td>Gen Deposu</td><td>CM034-050, Lot # 03062021</td><td>MCDB 131 Orta Taban, L-Glutamin Yok, steril filtreli</td></tr><tr><td>Metal zımbalar</td><td>Sona Enterprises (SE)</td><td>791LP, 12PC</td><td>İçi Boş Deri Punch Seti, Yüksek Karbonlu Çelik, Sertlik: 48HRC; (dahil olmak üzere çeşitli boyutlar): 1/8", 5/32", 3/16", 7/32", 1/4", 9/32", 5/16", 3/4", 7/16", 1/2", 5/8:, 3/4". Bu zımba seti faydalıdır, ancak x-acto bıçağı da işe yarayabilir. 12 kuyulu transwell VHSE için iyi çalışan metal zımba boyutu 3/8 "veya 1/2" dir.</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Chemical</td><td>CAS # 67-56-1</td> <td>(isteğe bağlı). Dehidrasyon adımını temizlemek için.</td></tr><tr><td>Metil Salisilat</td><td>Fisher Kimyasal</td><td>O3695-500; Çok # 164535; CAS # 119-36-8</td> <td>(isteğe bağlı). Temizlemek için.</td></tr><tr><td>mikrotüpler, 1.7 mL</td><td>Genesee Scientific Corporation; Olympus Plastik Kedi</td><td># 24-282; Lot # 19467</td><td>1.7 ml Mikrotüpler, Şeffaf; Kaynamaya Dayanıklı, Polipropulen, Sertifikalı Rnaz, Dnase, DNA, PCR inhibitörü ve endotoksin içermeyen</td></tr><tr><td>PBS, 10x Kültür dereceli veya otoklavlanmış</td><td>APEX Biyoaraştırma Ürünleri</td><td>Cat # 20-134, Lot # 202237</td><td>PBS Tamponu, 10x Kuru Paket; Paketin içeriğini kabın içine ekleyin ve 10x konsantre üretmek için 1 litreye su ekleyin.</td></tr><tr><td>PBS, 1x Kültür derecesi, (-) Kalsiyum, (-) magnezyum</td><td>Genesee Scientific Corporation</td><td>Ref # 25-508; Lot # 07171015</td><td></td></tr><tr><td>PBS, 1x Kültür dışı sınıf</td><td>APEX Biyoaraştırma Ürünleri</td><td>Kedi # 20-134, Lot # 202237</td><td>PBS Tamponu, 10x Kuru Paket; Paketin içeriğini kabın içine ekleyin ve 10x konsantre üretmek için 1 litreye su ekleyin. Su ile 1x'e kadar seyreltin.</td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin</td><td>Gibco; Life Technologies Corporation</td><td>Ref # 15140-122, Lot # 2199839</td><td>Pen Strep (10.000 Birim / mL Penisilin; 10.000 ug / mL Streptomisin)</td></tr> <tr><td>Petri Kabı, cam, küçük</td><td>Corning</td><td>PYREX 316060</td> <td>(isteğe bağlı). Temizleme kabı olarak kullanılmak üzere</td></tr><tr><td>Petri Kapları, 100 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713</td><td>PDMS oluşturmak için kullanın.</td></tr><tr><td>Polidimetilsiloksan (PDMS)</td> <td>Dow Corning</td><td>GMID 02065622, Parti # H04719H035</td><td>Sylgard 184 Silikon Elastomer Taban, Dow Corning, Midland, MI)</td></tr><tr><td></td><td>Dow Corning</td><td>GMID 02065622, Parti # H047JC4003</td><td>DOWSIL 184, Silikon Elastomer Kürleme Maddesi</td></tr><tr><td colspan="4">not: PDMS genellikle hem baz hem de sertleştirici bileşen içeren bir kit olarak satılır.</td></tr><tr><td>Pozitif Yer Değiştirmeli Pipetler (1000 ve 250 uL)</td><td>Gilson</td><td>1000 uL: HM05136, M1000. 250 uL: T12269L</td><td>M1000 pipet kapasitesi (100-1000 uL); 250 uL'ye kadar M250 pipet kapasitesi</td></tr><tr><td>Pozitif Deplasmanlı Uçlar/Pistonlar (1000 ve 250 uL)</td><td>Gilson</td><td>1000 uL: CAT # F148180, BATCH # B01292902S; 250 uL: CAT # F148114, BATCH # B05549718S</td><td>Sterilize kılcal damarlar ve pistonlar</td></tr><tr><td>Yuvarlak uçlu kepçe</td><td></td><td></td> <td>(isteğe bağlı; standart laboratuvar ekipmanı) Görüntülemeden önce VHSE'lerin manipülasyonu için</td></tr><tr><td>Keratinosit-SFM ortamı</td> <td>için takviyelerGibco; Life Technologies Corporation</td><td>Ref # 37000-015, Lot # 2154180</td><td>EGF İnsan Rekombinant (Cat # 10450-013), Sığır Hipofiz Özü (Cat # 13028-014)</td></tr> <tr><td>Doku Kültürü Plakası Ekleri, 12 kuyu boyutu, 3 ve mikro; m gözenek boyutu</td><td>Corning; Costar</td><td>REF # 3462 - Açık; Lot # 14919057</td><td>Transwell; 12 mm Çaplı Uçlar, 3.0 um gözenek boyutu, doku kültürü işlenmiş, polyester membran, polistiren plakalar, &nbsp;</td></tr><tr><td>Doku Kültürü Plakaları, 12 kuyucuklu Greiner</td><td>Bio-one; Hücre Yıldızı Kedi</td><td># 665 180; Parti # E18103QT</td><td>12 kuyulu hücre kültürü plakası; steril, kapaklı; ürünler sterildir, tespit edilebilir Dnase, Rnase, insan DNA'sı ve pirojen içermez. İçindekiler sitotoksik olmayan</td></tr><tr><td>Doku Kültürü Plakaları, 60.8cm^2 büyüme alanı</td><td>Genesee Scientific Corporation Cat</td><td># 25-202; Parti No: 191218-177B</td><td>Doku kültürü kapları; tedavi edilmiş, büyüme alanı 60.8 cm^2; steril, Dnase, Rnase, Pirojen içermez; bakire polistiren</td></tr><tr><td>Triton x 100</td><td>Ricca Chemical Company</td><td>Cat # 8698.5-16, Lot # 4708R34</td><td>Islatıcı ajan</td></tr><tr><td>Tripsin% 0.25</td> <td>Corning; Mediatech, Inc</td><td>Ref # 25-053-CI</td><td>0.25% Tripsin, 2.21 mM EDTA, 1x [-] sodyum bikarbonat</td></tr><tr><td>Tip 1 Sıçan kuyruğundan izole edilen Kollajen</td><td>Pel-Freez Biologicals</td><td>56054-1</td><td>Sprauge-Dawley sıçan kuyrukları Pel-Freez veya diğer tedarikçilerden dondurulmuş olarak satın alınabilir. Kolajen kuyruk tendonlarından izole edilebilir. İzolasyon Protokolü referansları [Cross et al.,2010; Rajan ve ark.,2007; Bornstein, 1958] . Alternatif olarak, yüksek konsantrasyonlu sıçan kuyruğu kollajeni, Corning (Katalog Numarası: 354249) dahil olmak üzere tedarikçilerden satın alınabilir</td></tr>. <tr><td>Vakum odası, tezgah üstü</td><td>Bel-Art</td><td>F42010-0000</td> <td>(standart laboratuvar ekipmanı)</td></tr> <tr><td>El Tipi Hassas bıçak</td><td>X-Acto</td><td>X3311</td> <td>(X-Acto bıçak satın alınırsa isteğe bağlıdır çelik zımbalar)</td></tr></tbody></table>

kendi kendine monte edilmiş vaskülerleştirilmiş İnsan derisi eşdeğerlerinin Üretimi

Generation of Self-assembled Vascularized Human Skin Equivalents

İnsan derisi eşdeğerleri (HSE'ler), insan derisinin epidermal ve dermal bileşenlerini modelleyen doku mühendisliği yapılardır. Bu modeller cilt gelişimi, yara iyileşmesi ve aşılama tekniklerini incelemek için kullanılmıştır. Birçok HSE vaskülürden yoksun olmaya devam eder ve ayrıca yapının hacimsel değerlendirmesini sınırlayan kültür sonrası histolojik bölümleme yoluyla analiz edilir. Burada sunulan, damarlı insan derisi eşdeğerleri (VHSE) oluşturmak için erişilebilir malzemeler kullanan basit bir protokoldür; ayrıca bu yapıların hacimsel görüntüleme ve nicelleştirme teknikleri tanımlanmıştır. Kısaca, VHSE'ler dermal ve epidermal hücrelerin sıçan kuyruk kollajen tipi I jel içine tohum edildiği 12 kuyu kültürü kesici uçta inşa edilir. Dermal bölme, kollajen jel boyunca dağılmış fibroblast ve endotel hücrelerinden oluşur. Epidermal bölme, hava-sıvı arayüzünde farklılık gösteren keratinositlerden (cilt epitel hücreleri) oluşur. Daha da önemlisi, bu yöntemler araştırmacının ihtiyaçlarına göre özelleştirilebilir ve sonuçlar VHSE neslini iki farklı fibroblast hücre tipiyle gösterir: insan dermal fibroblastları (hDF) ve insan akciğer fibroblastları (IMR90'lar). VHSE'ler geliştirildi, konfokal mikroskopi ile görüntülendi ve 4 ve 8 haftalık zaman noktalarında hesaplama yazılımı kullanılarak hacimsel olarak analiz edildi. Hacimsel muayene için VHSE'leri düzeltmek, lekelemek, görüntülemek ve temizlemek için optimize edilmiş bir süreç açıklanmıştır. Bu kapsamlı model, görüntüleme ve analiz teknikleri, önceden HSE deneyimi olan veya olmayan bireysel laboratuvarların özel araştırma ihtiyaçlarına göre kolayca özelleştirilebilir.

Bu protokolün amacı, uzun vadeli kültür için erişilebilir ve basit teknikler kullanarak damarlı insan derisi eşdeğerlerinin neslini ve hacimsel analizini tanımlamaktır. Mümkün olduğu ölçüde, adımların gerekçesi, araştırmacılara araştırma ihtiyaçlarına göre özelleştirme olanağı sağlamak için açıklanmıştır.

Kendi Kendine Monte Edilmiş Vaskülerleştirilmiş İnsan Derisi Eşdeğerlerinin Üretimi

Human skin equivalents (HSEs) are tissue engineered constructs that model epidermal and dermal components of human skin. These models have been used to ...

Bu protokolde sağlanan ayrıntı, genellikle teknik olarak zorlayıcı olan insan derisi eşdeğeri üretimi ele alıyor. Vaskülat ve hacimsel görüntüleme gibi yeni insan derisi eşdeğeri protokol elemanları dahildir. Teknik, hastalıkların, yaşlanmanın ve kişiselleştirilmiş tıbbın incelenmesi için in-vivo doku ile daha yakından eşleşen bir cilt modelinin basit bir şekilde inşasını sağlar.Bu protokolün en zorlu kısmı, dalgıçlık ve hava sıvısı arayüzü arasındaki bir geçiştir. Tutarlı sonuçlar için zamanlama ve medya seviyelerini optimize etmek için muhtemelen birkaç deneme yapılacaktır. Başlamak için, soğuk kaplı bir tüpe 516 mikrolitre ortam ekleyin ve hemen 1000 mikrolitre pozitif deplasman pipetini kullanarak 375 mikrolitre soğuk kollajen ekleyin.Boş pipet ucunu çıkarın ve karıştırmak için hazırlanan 250 mikroliter pozitif deplasmanlı pipete geçin. Aşırı kabarcık oluşumunu önlemek için hızlı, ancak hafifçe karıştırın. Ucu çözeltide tutarak, çözelti tipik olarak yaklaşık beş pipet döngüsü veya 10 saniye süren homojen renkte olana kadar tüpün farklı konumlarından düzgün bir şekilde karıştırın.12 kuyulu kültür kesici ucunun zarına hemen 125 mikrolitre hücresel kollajen dağıtın. Düzgün kapsama alanı sağlamak için plakayı eğin ve kollajeni hafifçe etrafa yayarak zarı boyamak için pipet ucunu kullanın. 12 kuyu plakasını hemen 37 derecelik bir santigrat hücre kültürü inkübatörüne taşıyarak en az 20 dakika jel hale getirmek için hareket ettirin.Jelleşme döneminden sonra, 12 kuyulu kollajen plakasını inkübatörden alın. 1,7 mililitrelik kapaklı tüpü ıslak buzdan çıkarın, ardından stok kolajenini soğutmadan çıkarın ve kapağı açık ıslak buza yerleştirin. Soğuk kapaklı tüpe 516 mikrolitre soğutulmuş hücre süspansiyonu ekleyin.1000 mikrolitre pipet kullanarak 375 mikrolitre soğuk kollajen çözeltisini doğrudan kapaklı tüpün içindeki çözeltiye hemen pipetledi. Tüm kollajenleri pipetten tüpe atın ve pozitif deplasman pipet ucunu atın. Hemen 250 mikrolitre pipete geçin ve kollajen çözeltisini karıştırın Karıştırılınca, 250 mikrolitre hücresel kollajen çözeltisini 12 kuyulu kültür kesici uçtaki hücresel kollajen desteklerine aktarın, ardından 12 kuyu plakasını 37 santigrat derece hücre kültürü inkübatörüne taşıyın.30 dakikalık jel süresinden sonra, jeli değerlendirmek ve kolajenin katılaşmış olduğundan emin olmak için plakayı hafifçe eğin. Kesici ucun üst odasına ve alt odasına sırasıyla 500 mikrolitre ve 1000 mikrolitre karışım ortamı ekleyin. Gerekirse daha fazla ortam ekleyerek kollajen jelinin suya batırıldığından emin olun.Kuyu plakasını gece kuluçka için hücre kültürü inkübatörüne yerleştirin. Yedinci submersion gününde, her yapının alt ve üst odasındaki medyayı toplamak ve atmak için manuel bir pipet kullanın. Geçirgen membranın doğrudan altına sıkışmış medyayı toplamak için pipet ucunu zarın altına yerleştirin ve kesici ucu geçici olarak yerinden atın.Her kuyunun alt odasına bir mililitre insan derisi eşdeğeri veya %5 FPS ile desteklenmiş İsG ortamı ve her kuyunun üst odasına 200 mikrolitre hücre süspansiyonu ekleyin. Keratinositleri doğrudan dermal yapı yüzeyine tohumlayın ve inkübatörde iki saat yerleşmelerini sağlar. Keratinositlerin tohumlanlarından iki saat sonra, her yapının üst odasına% 5 FPS ile desteklenmiş 300 mikrolitre HSE ortamı dikkatlice ekleyin.Ortamı yükledikten sonra, yapıyı inkübatöre geri yerleştirin. Manuel pipet kullanarak, her yapıyı yalnızca üst bölmeden medya atıklarını kaldırarak hava sıvısı arayüzüne veya ALI'ye kaldırın. Epidermal tabakaya dokunmadan veya zarar vermeden mümkün olduğunca yaklaşmaya çalışın.Ortamı toplamak için plakaları farklı açılarda hafifçe eğin, ardından tutarlı nemi korumak için plakadaki çevredeki kuyulara yaklaşık iki mililitre steril su ekleyin. Keratinositlerin hala ALI'de olduğundan emin olmak için birkaç saat sonra plakayı kontrol edin. Her kuyudan ne kadar ortam çıkarıldığını takip ederek üst bölmedeki herhangi bir ortamı kaldırın.Epidermal katmanlar kuru değil, nemli görünmelidir, ancak yapının üstünde birikmiş ortam olmamalıdır. Yapıyı immünoresan lekelenmeye hazırlamak için, bir kesici ucu ters çevirin ve kuyu plakasının üzerine yerleştirin. Membran çevresinin yaklaşık yarısını kesmek için ince uçlu önps veya hassas bir bıçak kullanırken kesici ucu tek elle sabitleyin.Plastik muhafazaya mümkün olduğunca yakın kesin. İnce uçlu asaları kullanarak, kesilmiş membran kapağının kenarını tutun ve gözenekli zarı kesici ucun yanı sıra VHSE yapısından hafifçe soyun. Yapı odanın kenarına sıkışırsa, kuyuya taşımak için ince uçlu uzun uçluları veya küçük bir kepçeyi kullanın.VHSE kuyuya girdikten sonra, kesici uç zarının kalan parçalarını atın ve boyama sırasında VHSE'leri batık bir konumda tutmak için kültürün her kuyuda muhafazasını tutun. Görüntülemeden iki gün önce polidimetilsiloksina veya PDMS hazırlayın. Herhangi bir temiz karıştırma kabını tartım terazisine yerleştirin ve tartıyı daralayın.Tabanı ekleyin, sonra çapraz bağlantıyı ekleyin. Çözeltiyi en az dört dakika boyunca kuvvetlice karıştırın ve küçük kabarcıklar oluşturun. Yeterli karıştırmadan sonra, PDMS'yi 90 veya 100 milimetrelik bir Petri kabına dökün.Tüm kabarcıklar kaybolana ve PDMS temizlenine kadar PDMS'yi vakum odasında gazdan arındırın. Vakumun yavaşça serbest bırakılması ve PDMS'nin çıkarılması. Yemeği, PDMS'nin eşit şekilde tedavi etmesi için düz oturduğundan emin olarak, 50 ila 60 santigrat derecede bir gecede kürleme için bir fırına yerleştirin.Görüntülemeden bir gün önce, VHSE yapısıyla aynı boyutta, PDMS sayfasından dairesel bir kuyuyu delmek veya kesmek için çelik bir zımba veya el tipi hassas bıçak kullanın. Tek bir PDMS kuyusu oluşturmak için dairesel kuyunun etrafına kare bir yama kesin. PDMS ile benzer boyutta bir cam kapak kayması kullanarak PDMS'nin alt yüzeyine siyanoakrilat tutkal ekleyin ve tek kullanımlık pipet ucuyla eşit şekilde sürün.Camı ortalayın ve delikli daire içinde açık bir cam pencere bırakırken PDMS'ye iyi bastırın. Kullanmadan önce tutkalın gece boyunca kurumasına izin verin. Epidermisin ve dermisin karakterizasyonu VHSE yapılarında insan cildi için uygun immünofluoresan belirteçleri gösterir.Sitokeratin 10, genellikle cilt eşdeğerlerindeki tüm suprabasal katmanları işaretleyen erken farklılaşma keratinosit belirtecidir. involucrin ve filaggrin keratinositlerde geç farklılaşma belirteçleridir ve cilt eşdeğerlerinde en üst en suprabasal tabakaları işaretler. VHSE'nin temizlenmesi, tek bir ayarda basit görüntülemeye izin verdi ve dermis ve epidermisi ayrı ayrı görüntülemek için yapıyı yeniden yönlendirme ihtiyacını ortadan kaldırdı.Hacimsel görüntüler, her yapı boyunca vaskülat haritalamak için 3D renderlar oluşturmayı mümkün klar. Görüntü yığınları hesaplama yazılımına yüklendi ve 3D işleme ve niceleme için özel bir algoritma kullanıldı. İskeletleşme, kollajen IV işaretli her damarın kesin merkezini belirledi ve elde edilen veriler damar çapının yanı sıra vasküler fraksiyonu hesaplamak için kullanıldı.Bu işlemi takiben, vaskülatürün özellikle epidermal olgunlaşma ve stabiliteyi nasıl etkilediğini anlamak için bariyer analizi, tarama elektron mikroskopisi, lipit profilleri ve diğerleri gibi karakterizasyon yöntemleri yapılabilir. Bu protokol, damarlı bir cilt modelinde doku ile ilgili ve hücre tipine özgü çalışmalara olanak sağlar. Özellikle yaşlanma ve kişiselleştirilmiş tıp araştırmaları için uygundur.

generation-of-self-assembled-vascularized-human-skin-equivalents

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu videoda, melanom ilerlemesini incelemek için in vitro 3D organotipik cilt rekonstrüksiyonları oluşturmak için ayrıntılı protokol açıklanmaktadır. Bu cilt modeli, in vivo organların hem mimarisini hem de çok hücreli karmaşıklığını taklit eder.

Organotipik Tam Cilt Rekonstrüksiyonlarının Oluşturulması: İnsan Derisi Örneklerini Kullanarak 3D Cilt Modeli Oluşturma Prosedürü

Vaskülarizasyon başarılı doku mühendisliği yaklaşımları anahtarıdır. Bu nedenle, güvenilir teknolojileri doku yapıları vasküler ağların gelişimini değerlendirmek için gereklidir. Burada görselleştirmek ve in vivo damarlanmayı ölçmek için basit ve maliyet-etkin bir yöntem mevcut.

A Tam Cilt Hata Modeli Biyomateryallerin vaskülarizasyonunu değerlendirin<em&gt; In Vivo</em

Burada, biz çift tohumlama kısmen uyarılmış pluripotent kök hücre ile farelere aşılama için fonksiyonel doku mühendisliği gemi greft oluşturmak için bir protokol mevcut (PiPSC) - Bir decellularized damar iskele biyoreaktör üzerinde elde edilen endotel hücreleri - düz kas hücreleri ve PiPSC türetilmiş.

Bir Fare Modeli Doku mühendisliği Kapların Üretimi ve Tırnak

Bu protokolün amacı, doğal cilde benzeyen üç boyutlu tam kalınlıkta bir cilt eşdeğeri oluşturmaktır. Özel olarak yapılmış bir otomatik yaralama cihazı ile, sterilitenin korunması altında hassas ve tekrarlanabilir yaralar oluşturulabilir.

Üç-boyutlu Tam Kalınlığı Deri Üretimi Eşdeğer ve Otomatik Yaralama

Bu makalenin amacı, epidermal keratinositlerden ve devitalize insan dermisinden genetik olarak değiştirilmiş insan organotipik derisinin nasıl oluşturulacağına dair kapsamlı ve ayrıntılı bir protokol sağlamaktır.

Güçsüz İnsan dermis kullanma Genetiği Değiştirilmiş Organotipik Cilt Kültürlerin Üretimi

Biz İndüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı lenfositi ve fibroblastlar ayırt etmek ve bir 3B cilt organoid oluşturmak gösterilmiştir bir protokol bu lenfositi ve fibroblastlar kullanarak öneriyoruz. Bu iletişim kuralı insanlaşmış fareler model oluşturma ek bir adım içerir. Burada sunulan teknik dermatolojik araştırma artıracaktır.

3B cilt Organoid kablosu kan kaynaklı nesil Pluripotent kök hücreler indüklenen

Bu protokol, üç boyutlu yeniden oluşturulmuş insan epidermisini tekrarlanabilir ve sağlam bir şekilde yetiştirmek için basit bir yöntemi açıklar. Ek olarak, epidermal bariyer modelinin yapı-işlev ilişkisini karakterize eder. Yeniden inşa edilen insan epidermisinin proinflamatuar uyaranlar üzerine biyolojik tepkileri de sunulmaktadır.

Büyük Ölçekte Üç Boyutlu Yeniden Yapılandırılmış İnsan Epidermisi Yetiştirmek

Burada, mikromakine mikroakışkan bir platform kullanarak üç boyutlu basitleştirilmiş ve farklılaşmamış bir cilt modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz. Paralel akış yaklaşımı, hepsi şırınna pompaları tarafından kontrol edilen, üstteki epitel hücrelerinin tohumlaması için bir dermal bölmenin yerinde birikmesini sağlar.

Mikromakine Mikroakışkan Platformda Basitleştirilmiş Üç Boyutlu Çip Üzerinde Cilt Modeli Üretimi

Bu protokol, insan pluripotent ve indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden kendi kendini organize eden kan damarlarının oluşumunu tanımlar. Bu kan damarı ağları, perisitler, düz kas aktini ve sürekli bir bazal membran ile çevrili geniş ve bağlı bir endotel ağı sergiler.

Pluripotent Kök Hücrelerden İnsan Kan Damarı Organoidlerinin Üretimi

Burada, bir hücre kültürü laboratuvarında rutin araştırmalar için çeşitli 3D cilt modellerini tanıtmak için ucuz ve basit prosedürler sunuyoruz. Araştırmacılar, ticari olarak mevcut modellere güvenmeden ihtiyaçlarına göre uyarlanmış modeller oluşturabilirler.

Çok Sayıda Uygulama için Cilt Modelleri Oluşturma - İki Boyutlu (2D) Monokültürden Üç Boyutlu (3D) Çoklu Kültüre

Bu protokol, cilt mimarisini ve işlevini çoğaltmak için düzlemsel, fizyolojik olarak ilgili bir hava-sıvı arayüz kültür sistemi kullanarak insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden saç folikülleri içeren cilt organoidleri üretmek için bir yöntemin ana hatlarını çizmektedir.

Hava-Sıvı Arayüz Kültür Sistemi Kullanılarak İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Düzlemsel Saç Taşıyan Cilt Organoidlerinin Üretimi

Öğrenin, damarlandırılmış insan derisi eşdeğerlerini üretme ve hacimsel analiz yapma yöntemini. Bu protokol, uzun süreli kültür ve kişiselleştirilmiş tıp araştırmaları için özelleştirilebilir adımlar sunar.

Kendi Kendine Monte Edilmiş Vaskülerleştirilmiş İnsan Derisi Eşdeğerlerinin Üretimi

Daha fazla video keşfet