Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Mantar fırsatçı patojenleri, yaşamı tehdit eden ve küçük enfeksiyonlara neden olabilir, ancak virülans incelenirken ölümcül olmayan fenotipler sıklıkla göz ardı edilir. Bu nedenle, mantar virülansını araştırmak için konakçının hem sağkalım hem de üreme yönlerini izleyen bir nematod modeli geliştirdik.
Patojenler insanlar için ölümcül olabilirken, birçoğu ölümcül olmayan fenotiplere sahip bir dizi enfeksiyon türüne neden olur. İnsanlarda fırsatçı bir mantar patojeni olan Candida albicans, ~%40 mortalite ile sonuçlanan hastane enfeksiyonlarının dördüncü en yaygın nedenidir. Bununla birlikte, diğer C. albicans enfeksiyonları daha az şiddetli ve nadiren ölümcüldür ve kadınların ~% 75'ini etkileyen vulvovajinal kandidiyazis ve ayrıca ağırlıklı olarak bebekleri, AIDS hastalarını ve kanser hastalarını etkileyen orofaringeal kandidiyazis içerir. Fare modelleri en sık C. albicans patogenezini incelemek için kullanılırken, bu modeller ağırlıklı olarak konak sağkalımını değerlendirir ve maliyetli, zaman alıcı ve replikasyonu sınırlıdır. Bu nedenle, C. albicans'ı incelemek için Drosophila melanogaster, Danio rerio, Galleria mellonella ve Caenorhabditis elegans dahil olmak üzere çeşitli mini model sistemler geliştirilmiştir. Bu mini modeller, mutant kütüphaneleri veya C. albicans'ın çeşitli genetik geçmişlerini taramak için çok uygundur. Burada, C. elegans kullanarak C. albicans enfeksiyonunu incelemek için iki yaklaşım tanımlanmıştır. Birincisi, konak üremesini ölçen ve bireysel konakçıların hayatta kalmasını izleyen bir doğurganlık testidir. İkincisi, C. albicans enfeksiyonunun birden fazla nesil boyunca konakçı popülasyon artışını nasıl etkilediğini ölçen bir soy genişleme testidir. Birlikte, bu testler C. albicans virülansını hızlı bir şekilde değerlendirmek için basit ve uygun maliyetli bir yol sağlar.
Candida albicans, ağız boşluğu, gastrointestinal ve ürogenital yollar dahil olmak üzere farklı nişlerde yaşayan insanların fırsatçı bir mantar patojenidir1. Tipik olarak kommensal olsa da, C. albicans hem mukozal hem de kan dolaşımı enfeksiyonlarına neden olur, ikincisi ölümcül olabilir. C. albicans enfeksiyonunun şiddeti, konak bağışıklık fonksiyonuna bağlıdır ve bağışıklığı baskılanmış bireyler sağlıklı bireylere göre enfeksiyona daha duyarlıdır1. Konakçı ile ilgili faktörlere ek olarak, C. albicans, hif, biyofilm oluşumu ve C. albicans'ın k....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
1. Deneyler için hazırlık aşamaları
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Burada, C. elegans'ı bir enfeksiyon modeli olarak kullanarak ölümcül olmayan bir fenotip olarak C . albicans virülansını ölçen iki test sunuyoruz. İlk tahlil olan doğurganlık, C. albicans enfeksiyonunun döl üretimi ve sağkalımı için tek konakçıları nasıl etkilediğini izler. İkinci tahlil olan soy genişlemesi, C. albicans enfeksiyonunun birden fazla nesil boyunca nüfus artışını nasıl etkilediğini ölçer.
Doğurganlık te.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Burada, mantar virülansını ölçen iki basit test sunuyoruz. Her iki test de C. elegans'ı hem ölümcül hem de ölümcül olmayan konak fenotiplerinin izlenmesini içeren bir konak sistemi olarak kullanır. Örneğin, doğurganlık tahlilleri, bireysel enfekte konakçıların üreme başarısını araştırırken aynı zamanda bireysel sağkalımı da ölçer. Günlük izleme sadece toplam kuluçka boyutunu değil, aynı zamanda üreme zamanlamasını ve ölüm zamanını da sağlar. Soy genişleme testi, daha az konak tr.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların ifşa etmek için rekabet eden çıkarları yoktur.
Tahlillerimizi ve veri toplamamızı geliştirmedeki yardımları için Dorian Feistel, Rema Elmostafa ve McKenna Penley'e teşekkür ederiz. Bu araştırma NSF DEB-1943415 (MAH) tarafından desteklenmektedir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1,5 mL eppendorf mikrotüpler 3810X | Milipore Sigma | Z606340 | |
| 100 mm x 15 mm petri plakaları | Sigma-Aldrich | P5856-500EA | |
| 15 mL Falcon Konik | Fisher Scientific | 14-959-70C | |
| 50 mL Falcon Konik Fisher | Scientific | 14-432-22 | |
| Adenin | Kırlangıç Sigma | A8626 | |
| Agar (granül, bakteriyolojik sınıf) | Apex BioResearch | 20-248 | |
| Alüminyum Tel Üretiyor (%95 Pt, 32 Gauge) | Genesee Scientific | 59-1M32P | |
| Amonyum Klorür | Milipore Sigma | 254134 | |
| Bakteriyel Hücre Yayıcı | SP Scienceware | 21TP50 | |
| BactoPeptone | Fisher BioReagants | BP1420-500 | |
| Tek Kullanımlık Kültür Tüpleri (20 x 150 mm) | FIsherBrand | 14-961-33 | |
| Diseksiyon Mikroskobu (NI-150 Yüksek Yoğunluklu Aydınlatıcı) | Nikon Instrument Inc. | ||
| E. coli | Caenorhabditis Genetik Merkezi | OP50 | |
| Glukoz | Millipore Sigma | 50-99-7 | |
| Orta Boy Petri Kapları (35 X 10 mm) | Falcon | 353001 | |
| Metal Spatula | SP Scienceware | 8TL24 | |
| Nematod Büyüme Ortamı (NGM) | Dot Scientific | DSN81800-500 | |
| Potasyum Fosfat monobazik | Sigma | P0662-500G | |
| Sodyum Klorür | Fisher Scientific | BP358-1 | |
| Sodyum Fosfat | Fisher Scientific | BP332-500 | |
| Streptomisin Sülfat | Thermo-Fisher Scientific | 11860038 | |
| Tripton | Millipore Sigma | 91079-40-2 | |
| Üridin | Milipor Sigma | U3750 | |
| Wildtype C. elegans | Caenorhabditis Genetik Merkezi | N2 | |
| Maya Özü | Millipore Sigma | 8013-01-2 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale yayımlandı
Video yakında