Name: Yüz Gelişimini Değerlendirmek için Kuş Ön Beyin Kimeraları Oluşturmak (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 10 s
Description: Öğrenin, beyin tabanı ve yüz arasındaki doku etkileşimlerini değerlendirmek için kuş ön beyin kimerası oluşturma tekniğini. Bu yöntem, nöral kreta hücreleri kirliliğini önleyerek gelişim biyolojisi araştırmalarında hassas analiz sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu yayında bildirilen araştırmalar, Ulusal Sağlık Enstitüleri Ulusal Diş ve Kraniofasiyal Araştırma Enstitüsü tarafından R01DE019648, R01DE018234 ve R01DE019638 ödül numaraları altında desteklenmiştir.

Beyaz Pekin ördeği (Anas platyrhynchos), beyaz Leghorn tavuğu (Gallus gallus) ve Japon bıldırcını (Cortunix coturnix japonica), HH7/8 17'de aşama eşleşene kadar nemlendirilmiş bir odada37 ° C'de inkübe edilir.
1. Donör dokunun hazırlanması
NOT: Reaktiflerin ve aletlerin hazırlanması ve deneysel manipülasyon için yumurtaların nasıl açılacağı açıklanmıştır6.
<ol><li>DMEM ortamını nötr kırmızı, cam transfer pipeti ve keskinleştirilmiş tungsten iğneleri ile hazırlayın.</li>
	<li>Embriyoları açığa çıkarın (6'da gösterildiği gibi).</li>
	<li>Evre 7/8 embriyoların bazal ön beyninin sol tarafından doku greftleri toplayın. Ön beynin ~ 0.3 mm uzunluğunda ve 0.2 mm genişliğinde bir parçasını hafifçe kesmek için kavisli keskinleştirilmiş tungsten iğneleri6 kullanın, iğneyi ön beynin altına kaydırarak altta yatan endodermi içermediğinizden emin olun, böylece iğne nöral tüpün eksenine paralel olur.</li>
	<li>Cam transfer pipetini kullanarak, grefti donör embriyodan alın.</li>
	<li>Grefti boyamak için 2 dakika boyunca Nötr Kırmızı (PBS'de% 0.01, 23 °C) içeren DMEM'ye aktarın ve ardından boyanmış grefti engraftmana hazır olana kadar Nötr Kırmızı içermeyen DMEM'e yerleştirin.</li>
</ol>2. Ev sahibini hazırlama
<ol><li>Döllenmiş yumurtaları beyaz Leghorn tavuğundan (Gallus gallus) 37 ° C'de HH7/8 17'ye kadar nemlendirilmiş bir odada kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>Embriyoları açığa çıkarın (6'da gösterildiği gibi).</li>
	<li>Keskinleştirilmiş tungsten iğneleri kullanarak, greft bölgesini yavaşça keserek hazırlayın, ardından donör dokuyu izole etmek için yapıldığı gibi grefti yerleştirmek için sol taraftan 0.3 mm x 0.2 mm'lik bir bazal ön beyin parçasını çıkarın.</li>
	<li>Altta yatan endodermin aşırı bozulmasını önlemeye dikkat edin, bu da yumurta sarısı granülleri yapılan herhangi bir yırtılmadan sızmaya başlayacağı için belirgin olacaktır. Bu pratik gerektirir ve tüm girişimler başarılı olmaz.</li>
	<li>Konakçı6'ya transfer ettikten sonra, grefti konağın dökülmüş bazal ön beynini değiştirecek şekilde konumlandırın.</li>
	<li>Bandı deliğin üzerine sıkıca yerleştirin ve embriyoyu analiz için uygun süre boyunca 37 ° C inkübatöre geri gönderin.</li>
</ol>

<ol><li>Waddington, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+Mechanics+of+Chicken+and+Duck+Embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Developmental Mechanics of Chicken and Duck Embryos.</a> Nature. 125, 924-925 (1930).</li>
<li>Noden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+neural+crest+in+patterning+of+avian+cranial+skeletal%2C+connective%2C+and+muscle+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The role of the neural crest in patterning of avian cranial skeletal, connective, and muscle tissues.</a> Developmental Biology. 96 (1), 144-165 (1983).</li>
<li>Borue, X., Noden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+and+aberrant+craniofacial+myogenesis+by+grafted+trunk+somitic+and+segmental+plate+mesoderm%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Normal and aberrant craniofacial myogenesis by grafted trunk somitic and segmental plate mesoderm.</a> Development. 131 (16), 3967-3980 (2004).</li>
<li>Teillet, M. A., Ziller, C., Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quail-chick+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Quail-chick chimeras.</a> Methods in Molecular Biology. 461, 337-350 (2008).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+zone+of+frontonasal+ectoderm+regulates+patterning+and+growth+in+the+face%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A zone of frontonasal ectoderm regulates patterning and growth in the face.</a> Development. 130 (9), 1749-1758 (2003).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+signaling+properties+of+ectodermal+epithelia+during+craniofacial+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessing signaling properties of ectodermal epithelia during craniofacial development.</a> Journal of Visualized Experiments. (49), (2011).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+organization+of+the+frontonasal+ectodermal+zone+in+birds+and+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Unique organization of the frontonasal ectodermal zone in birds and mammals.</a> Developmental Biology. 325 (1), 200-210 (2009).</li>
<li>Griffin, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf8+dosage+determines+midfacial+integration+and+polarity+within+the+nasal+and+optic+capsules%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Fgf8 dosage determines midfacial integration and polarity within the nasal and optic capsules.</a> Developmental Biology. 374 (1), 185-197 (2013).</li>
<li>Schneider, R. A., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+and+molecular+origins+of+beak+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The cellular and molecular origins of beak morphology.</a> Science. 299 (5606), 565-568 (2003).</li>
<li>Tucker, A. S., Lumsden, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+cells+provide+species-specific+patterning+information+in+the+developing+branchial+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Neural crest cells provide species-specific patterning information in the developing branchial skeleton.</a> Evolution & Development. 6 (1), 32-40 (2004).</li>
<li>Fish, J. L., Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+species-specific+contributions+to+craniofacial+development+using+quail-duck+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessing species-specific contributions to craniofacial development using quail-duck chimeras.</a> Journal of Visualized Experiments. (87), (2014).</li>
<li>Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+and+the+origin+of+species-specific+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Neural crest and the origin of species-specific pattern.</a> Genesis. 56 (6-7), 23219(2018).</li>
<li>Sohal, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+reciprocal+forebrain+transplantation+on+motility+and+hatching+in+chick+and+duck+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of reciprocal forebrain transplantation on motility and hatching in chick and duck embryos.</a> Brain Research. 113 (1), 35-43 (1976).</li>
<li>Chen, C. C., Balaban, E., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecies+avian+brain+chimeras+reveal+that+large+brain+size+differences+are+influenced+by+cell-interdependent+processes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Interspecies avian brain chimeras reveal that large brain size differences are influenced by cell-interdependent processes.</a> PLoS One. 7 (7), 42477(2012).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+cells+pattern+the+surface+cephalic+ectoderm+during+FEZ+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Neural crest cells pattern the surface cephalic ectoderm during FEZ formation.</a> Developmental Dynamics. 241 (4), 732-740 (2012).</li>
<li>Hu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signals+from+the+brain+induce+variation+in+avian+facial+shape%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Signals from the brain induce variation in avian facial shape.</a> Developmental Dynamics. 244 (9), 1133-1143 (2015).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Morphology%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li>
<li>Xu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlations+Between+the+Morphology+of+Sonic+Hedgehog+Expression+Domains+and+Embryonic+Craniofacial+Shape%5BTitle%5D)+AND+%22Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">Correlations Between the Morphology of Sonic Hedgehog Expression Domains and Embryonic Craniofacial Shape.</a> Evolutionary Biology. 42 (3), 379-386 (2015).</li>
<li>Eames, B. F., Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genesis+of+cartilage+size+and+shape+during+development+and+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The genesis of cartilage size and shape during development and evolution.</a> Development. 135 (23), 3947-3958 (2008).</li>
<li>Merrill, A. E., Eames, B. F., Weston, S. J., Heath, T., Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchyme-dependent+BMP+signaling+directs+the+timing+of+mandibular+osteogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mesenchyme-dependent BMP signaling directs the timing of mandibular osteogenesis.</a> Development. 135 (7), 1223-1234 (2008).</li>
</ol>

Tüm yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Tarif edilen yöntem, bazal ön beyin ile komşu ektoderm arasındaki doku etkileşimlerinin incelenmesine izin verir. Bu yaklaşım önceki ön beyin nakli yöntemlerinden farklıdır, çünkü donör dokusu ventral ön beyinle sınırlıydı. Bu, yüz morfolojisinin modellenmesine katıldığı gösterilen nöral krest hücrelerinin transplantasyonunu ortadan kaldırır 9,10. Bu nedenle, greftin bazal ön beyinle sınırlandırılması, planlanan deneysel sonuçların değerlendirilmesi için çok önem...

Gelişim biyolojisindeki birçok çağdaş araştırma, embriyoların şekillendirilmesinde genlerin rolüne odaklanmaktadır. Gelişimsel mekanizmaları genetik bir perspektiften incelemek için iyi araçlar vardır. Bununla birlikte, embriyolar bir araya getirilir ve doku etkileşimlerine yanıt olarak morfogeneze tabi tutulur. Kuş sistemi, aşağıdaki nedenlerden dolayı gelişimi düzenleyen doku etkileşimlerinin çeşitliliğini değerlendirmek için kullanılan klasik bir araçtır: embriyoloji iyi anlaşılmıştır, embriyolara kolayca erişilebilir, kuş sistemlerinin analizi için araçlar iyi gelişmiştir ve embriyolar ucuzdur.
Kuş nakli sistemi, soy takibi ve gelişim sırasındaki doku etkileşimlerini değerlendirmek için neredeyse bir yüzyıl boyunca yaygın olarak kullanılmaktadır 1,2,3,4. Bu sistem, üst çene5'in morfogenezini düzenleyen bir sinyal merkezi olan Frontonazal Ektodermal Zon'u (FEZ) araştırmak için kullanıldı ve daha önce bu tekniği tanımlayan bir video yayınlandı6. Bıldırcın-civcivlere ek olarak, doku etkileşimlerinin analizi için kimera üretmek için başka türler de kullanılmıştır. Örneğin, fare FEZ'si vahşi tip7 ve mutant fareler8'den nakledildi ve diğerleri, yüz iskeleti 9,10,11,12'nin modellenmesinde nöral tepenin rolünü değerlendirmek için bir ördek, bıldırcın ve civciv sistemleri kullandılar.
Bu çalışmada, bıldırcın, ördek ve civciv embriyoları arasında ventral ön beyni karşılıklı olarak naklederek FEZ'deki gen ekspresyonunun paternini düzenlemede ön beynin rolü değerlendirilmiştir, çünkü FEZ'de Sonic kirpi ekspresyonunu indüklemek için ön beyinden bir sinyal gereklidir. Ön beyin nakilleri bu alanda benzersiz değildir. Bu nakiller, bıldırcın ve ördek embriyolarında motilitenin gelişimini değerlendirmek için kullanıldı13, ancak bu deneylerde nöral olmayan türevlere katkıda bulunan dokular da nakledildi. Diğer çalışmalarda, kuşlardaki işitsel devreler ön beyin nakli14 ile değerlendirilmiştir, ancak bu nakiller, yüz şekli 9,10'a katkıda bulunan ve FEZ15'te SHH ekspresyonunun düzenlenmesine katılan varsayımsal nöral krest hücreleri içeriyordu. Bu nedenle, beynin yüz şeklindeki rolünü değerlendirmek için nöral tüpün kapanmasından önce sadece ventral ön beyni bir kuş türünden diğerine nakletmek için bir sistem geliştirilmiştir16 (Şekil 1A, B). Bu yöntemde greftin nöral krest kontaminasyonu yoktu. Bu makalede yöntem gösterilerek beklenen sonuçlar açıklanmış ve karşılaşılan zorluklar tartışılmıştır.

<table><tbody><tr><td>1x PBS</td><td>TEK</td><td>TEKZR114</td><td></td></tr><tr><td>35x10 mm Petri kabı</td><td>Falcon</td><td>1008</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Thermofisher</td><td>11965084</td><td></td></tr><tr><td>İğne tutucu</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>26016-12</td><td></td></tr><tr><td>Nötr Kırmızı</td><td>Sigma</td><td>553-24-2</td><td></td></tr><tr><td>No. 5 Dumont forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur Pipetleri</td><td>Thermofisher</td><td>13-678-6B</td><td></td></tr><tr><td>QCPN antikoru</td><td>Gelişimsel Çalışmalar Hibridoma bankası, Iowa Üniversitesi, Iowa, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Tungsten İğne</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>26000</td><td></td></tr></tbody></table>

yüz gelişimini değerlendirmek için kuş Ön beyin kimeraları oluşturmak

Creating Avian Forebrain Chimeras to Assess Facial Development

Kuş embriyosu, bir yüzyıldan fazla bir süredir model bir sistem olarak kullanılmış ve omurgalı gelişiminin temel olarak anlaşılmasına yol açmıştır. Bu model sisteminin güçlü yönlerinden biri, kimerik embriyolarda dokuların etkisinin ve dokular arasındaki etkileşimin doğrudan değerlendirilebilmesidir. Daha önce ön beyinden gelen sinyallerin, Frontonazal Ektodermal Bölgede (FEZ) Sonik kirpi (SHH) ekspresyon alanının şeklini düzenleyerek yüz morfogenezine katkıda bulunduğunu göstermiştik. Bu makalede, ön beyin kimeralarını üretme yöntemi ve bu deneylerin sonuçlarının illüstrasyonları açıklanmaktadır.

Kimerizm ve Transplantasyon Kontaminasyonunun Değerlendirilmesi Kimeraları değerlendirmek için, kimerizmin derecesi ve greftin diğer hücre tipleriyle kontaminasyonu ele alınmalıdır. Bıldırcın dokularını civciv embriyolarına naklederek kimera oluşturmak bu tür analizlere izin verir. QCPN antikoru kullanılarak bıldırcın hücreleri görselleştirilebilir ve konakçı dokulardan ayırt edilebilir (Şekil 1 C,D). Bu durumda, sadece ventral ön beyinden türetilen dokul...

Bu makalede, kraniyofasiyal gelişim sırasında bazal ön beynin sinyal ve paternleme özelliklerini test etmek için tasarlanmış bir doku nakli tekniği anlatılmaktadır.

Yüz Gelişimini Değerlendirmek için Kuş Ön Beyin Kimeraları Oluşturmak

The avian embryo has been used as a model system for more than a century and has led to fundamental understanding of vertebrate development. One of the ...

Bu yöntem, araştırmacıların bazal ön beyin ve yüz arasındaki doku etkileşimlerini değerlendirmelerini sağlar. Bu tekniğin temel avantajı, değerlendirme için bazal ön beyni izole etmesi ve analizi karıştıracak nöral krest hücreleri ile kontaminasyonu önlemesidir. Bu tekniğin zor kısmı, ön beynin konakçıdan çıkarılması ve donör doku ile değiştirilmesidir.Prosedürü gösteren, Dr. Ralph Marcucio'nun laboratuvarından bir araştırma bilimcisi olan Diane Hu olacak. Başlamak için, DMEM ortamını nötr kırmızı, cam transfer pipeti ve keskinleştirilmiş tungsten ile hazırlayın. 10 mililitrelik bir şırınga ve 18 gauge iğne kullanarak, yumurta kabuğunun sivri ucundan 0.5 mililitre albümin çıkarın.Makas noktasını kullanarak kabuğun üstüne küçük bir delik açın. Daha sonra deliğin üzerine bir bant parçası yerleştirin ve embriyoyu ortaya çıkarmak için dairesel bir açıklık kesin. Embriyoyu nötr kırmızı ile lekeleyin.Evre yedi veya sekiz embriyonun bazal ön beyninin sol tarafından doku greftleri toplayın. Ön beynin bir parçasını hafifçe kesmek için kavisli keskinleştirilmiş tungsten iğneleri kullanın. Altta yatan endodermi dahil etmemek için, iğneyi ön beynin altına ve nöral tüpün eksenine paralel olarak kaydırın.Cam transfer pipetini kullanarak grefti donör embriyodan alın ve boyamak için iki dakika boyunca nötr kırmızı içeren DDEM'ye aktarın. Daha sonra lekeli grefti engraftmana hazır olana kadar nötr kırmızı içermeyen DMEM'ye yerleştirin. Döllenmiş yumurtaları beyaz Leghorn tavuğundan 37 santigrat derecede Hamburger-Hamilton etap yedi ila sekizinci aşamaya kadar nemlendirilmiş bir odada kuluçkaya yatırın.Daha önce gösterildiği gibi embriyoları açığa çıkarın. Keskinleştirilmiş tungsten iğneleri kullanarak, grefti yerleştirmek için 0.3 x 0.2 milimetrelik bir bazal ön beyin parçasını kesip çıkararak greft bölgesini hazırlayın. Altta yatan endodermin aşırı bozulmasından kaçının, bu da yumurta sarısı granülleri yapılan herhangi bir yırtılmadan sızmaya başlayacağı için belirgin olacaktır.Grefti konakçıya aktardıktan sonra, konağın dökülmüş bazal ön beyninin yerini alacak şekilde grefti konumlandırın. Bandı deliğin üzerine sıkıca yerleştirin ve embriyoları analize hazır olana kadar 37 santigrat derece inkübatöre geri döndürün. Başlangıçta, bıldırcın dokularının civciv embriyolarına nakledilmesiyle kimeralar oluşturuldu.QCPN antikoru kullanılarak bıldırcın hücreleri görselleştirildi ve konakçı dokulardan ayırt edildi. Bıldırcın-civciv sistemi, greftin tamamının sadece sinir dokusundan oluştuğunu ve diğer hücre tipleriyle kontamine olmadığını doğruladı. Bıldırcın dokusunun ördek embriyolarına nakli, daha hızlı gelişen bıldırcın beyni nedeniyle ciddi şekilde deforme olmuş kimeralara yol açtı.Bu nedenle, ördek dokularının tavuk embriyolarına nakli yapıldı. Ortaya çıkan ördek-civciv kimeraları, beynin morfolojinin düzenlenmesine katıldığını göstermektedir. Kimeralarda Sonic kirpi ekspresyonunu değerlendirmek için tüm dağ C2 hibridizasyonu kullanıldı.Morfolojiye benzer şekilde, kimeranın ördek tarafındaki Sonic kirpi ifadesi daha ördek benzeri görünüyordu. Ev sahibi siteyi hazırlamak pratik gerektirir. Çok sayıda embriyo hayatta kalamaz, bu nedenle çok sayıda kimera oluşturmak, analiz için uygun örneklerin sağlanmasına yardımcı olabilir.Bu yöntem, beyinden gelen sinyallerin frontonazal ektodermal bölgedeki Sonic hedgehog ekspresyon alanını nasıl şekillendirdiğini değerlendirmeyi mümkün kılmıştır.

creating-avian-forebrain-chimeras-to-assess-facial-development

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu makale, kraniyofasiyal gelişimi sırasında sinyalizasyon ve yüzey sefalik ektoderm desenlendirme özellikleri test etmek için tasarlanmış bir doku nakli tekniği açıklar.

Kraniofasial Geliştirme sırasında Ektodermal Epiteli Sinyal Özellikleri değerlendirilmesi

Bıldırcın-chick kimerik embriyo kuş nöral krest hücrelerinin göç ve nihai kaderi analiz etmek için bir yaklaşım tarif edilmiştir. Bu yöntem, aksi ayarlanmamış bir civciv embriyo içinde ayırt etmek zor göç ve farklılaşma sırasında nöral krest hücrelerinden izlemek için basit ve kolay bir tekniktir.

Çapraz türler Nakli Sinir Crest Göç ve Farklılaşma Analiz

Embriyo yüz ektoderm ve mezenşimi ayrılması için bir protokol tanımlanmıştır. Biz, ilk bütün embriyolar tedavisinde tüm yüz çıkıntıları üzerinden incelemek dispase II kullanın ve sonra yüz ektoderm ve mezenşimi ayırın.

Fare Embriyonik Yüz Ektoderm ve mesenchyme ayrılması

Xenopus arasında yüz doku "Extreme Anterior Etki" nakli için bir tekniktir embriyolar geliştirilmiştir laevis'den. Doku kraniofasial gelişimi için ve yüz bölgeleri arasındaki etkileşimleri sinyalizasyon için yerel gereksinimleri çalışma izin, başka içine bir gen ekspresyon kökenli taşınmış olabilir.

Yüz Nakli<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embriyolar

Zaman atlamalı konfokal görüntüleme embriyo gelişimini karakterize etmek için yararlı olan bir güçlü bir tekniktir. Burada, yöntemini açıklar ve iskeletsel vahşi tür morfolojilerinden yanı sıra, PDGFRA, smad5 ve smo mutant embriyolar karakterize eder.

4D konfokal mikroskopi kullanılarak Zebra balığı Kranyofasiyel morfogenez Analizi

Bu makalede, kraniofasiyal gelişimine nöral ve / veya diğer dokuların türe özgü katkılar test etmek için tasarlanmıştır kimerik embriyolar oluşturmak için bir yöntemi tarif etmektedir.

Bıldırcın-ördek Chimeras kullanma Kraniyofasiyal Kalkınma için Türlere özgü Katılımlar değerlendirilmesi

Burada damar içi DiI enjeksiyonu ile birlikte civcivGFP nöral tüp intraspsi greftleme kullanılarak nöral kret hücrelerinin ve kan damarlarının çift etiketlendiğini bildiriyoruz. Bu deneysel teknik, organogenez sırasında NCC türevi (enterik) sinir sisteminin ve vasküler sistemin gelişimini aynı anda görselleştirmemizi ve incelememizi sağlar.

ChickGFP Nöral Tüp Greftleme ve Karbosiyanine Boya DiI Enjeksiyonu Kullanılarak Tavuk Embriyoları İçinde Nöral Kret Hücrelerinin ve Kan Damarlarının Çift Etiketlenimi

Kraniyofasiyal kemiklerin Hücre organizasyonu uzun öne sürülmüştür ancak doğrudan görüntülenmiştir olmamıştı. Çok spektral hücre etiketleme ve in vivo canlı olarak   Görüntüleme Zebra balığı alt çene dinamik hücre davranışı görselleştirme sağlar. Burada, biz detay protokolü Zebrabow transgenik balık işlemek için doğrudan hücre ardalanması ve Meckel kıkırdak kondrosit morfolojik değişiklikleri gözlemek.

Embriyonik Meckel Kıkırdak içinde Zebrabow klonal Hücre Analizi aracılığıyla Kondrosit interkalasyonu ve Yön Yayılması Görselleştirme

Bu makalede embriyonik dokulardan saf formu ex vivo chimeric organları için bir araya getirilebilen bıldırcın ve tavuk embriyolar izole etmek için bir yöntem sağlar.

Yalıtım embriyonik doku ve timus örnek kullanarak bıldırcın-tavuk Chimeric organ oluşumu

Burada, doku etkileşimlerini, 4D görüntüleme timelapse filmini (3D artı zaman), moleküler fonksiyonun küresel veya yerel bozulmasını ve sistem biyolojisi karakterizasyonunu incelemek için kullanılabilecek üç tip kuş embriyonik deri eksplant kültürü için protokolleri açıklıyoruz.

Doku Desenini ve Organogenezi İncelemek için Kuş Derisi Eksplantlarının Kullanılması

Öğrenin, beyin tabanı ve yüz arasındaki doku etkileşimlerini değerlendirmek için kuş ön beyin kimerası oluşturma tekniğini. Bu yöntem, nöral kreta hücreleri kirliliğini önleyerek gelişim biyolojisi araştırmalarında hassas analiz sağlar.

Yüz Gelişimini Değerlendirmek için Kuş Ön Beyin Kimeraları Oluşturmak

Daha fazla video keşfet