Name: Deniz Örneklerinde Toplam Lipid ve Lipid Sınıflarının Belirlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 59 s
Description: Öğrenin deniz örneklerinde toplam lipid ve lipid sınıflarının belirlenmesi için TLC-FID kullanarak ekolojik ve biyojeokimyasal araştırmalarda deniz ekosistemlerinin sağlığını değerlendirme yöntemlerini.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, C.C. Parrish'e 105379 Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi (NSERC) hibe numarası tarafından finanse edildi. Memorial Üniversitesi'nin Temel Araştırma Ekipmanları ve Enstrüman Eğitimi (CREAIT) Ağı bu yayının finansesine yardımcı oldu.

NOT: Lipit analizleri için cam eşyaları, aletleri ve filtreleri temizlemek için metanol ile 3 kez yıkayın, ardından kloroform ile 3 yıkama veya en az 8 saat boyunca 450°C'ye ısıtın.
1. Deniz suyunun çözünmüş ve partikül lipitleri için filtrasyon prosedürü
NOT: Faizin belirli bir kısmı filtrasyon prosedürü tarafından operasyonel olarak tanımlanır. Bu durumda gözenek boyutu 1.2 μm'dir.
<ol><li>Filtrasyon manifoldunu filtresiz kurun ve kurulumu filtrelenmiş deniz suyu ile durulayın.</li>
	<li>Temiz tokmalar kullanarak, yıkanmış 47 mm cam elyaf (GF/C) filtresini temiz filtrasyon sistemine yerleştirin.</li>
	<li>Örneği alın ve toplama kabının altına yerleşmiş olabilecek herhangi bir malzemeyi yeniden depolamak için hafifçe döndürün. Bilinen bir birimi doğru bir şekilde ölçün, bu durumda 1 L ve bunu filtreden geçirin. NOT: Hacim, numunedeki partikül malzeme miktarına bağlı olacaktır: mevsime ve konuma bağlı olarak genellikle 250 mL ile 5 L arasındadır.</li>
	<li>Numune ölçüldüğünde, filtreyi filtrelenmiş deniz suyu ile hafifçe ıslatın. Numunenin tamamını filtrasyon sistemine yavaşça ekleyin ve tüm parçacıkların filtreye eklenmesini sağlamak için dereceli silindiri filtrelenmiş deniz suyu ile durulayın. Tüm parçacıkların filtreye durulanmasını sağlamak için kurulumu yanlarda filtrelenmiş deniz suyu ile durulayın.<ol>
<li>Tüm deniz suyunun filtreden geçmesine izin verin, ancak filtredeki hücreleri bozabileceğinden filtrenin tamamen kurumasına izin vermeyin; son su kayboldukça emmeyi kırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Temiz bir tokmak ve temiz bir pipet kullanarak, filtreyi bir tüpe yuvarlamak için önce ikiye, sonra üçte bire ve sonra yarı uzunlamasına katlayın. Temiz, etiketli 10 mL cam şişeye yerleştirin.</li>
	<li>Filtreyi 2 mL kloroformla örtün. Baş boşluğunu nitrojenle doldurun ve PTFE bandı ile kapatın. -20 °C dondurucuda bir rafa yerleştirin. Numuneler bu sıcaklıkta bir yıla kadar stabil olacak. NOT: Lipit konsantrasyonlarını toplam kütle konsantrasyonları ile ilişkilendirmek için kuru ağırlık ölçümüne de ihtiyaç vardır. Bu, 24 mm önceden tartılmış bir filtreyi kuru ağırlık filtrasyon kurulumuna koymayı, numuneyi karıştırmayı ve küçük filtreye filtrelenmiş küçük bir alt örneklemeyi içerir. Filtre neredeyse kurudığında, filtreye yaklaşık 10 mL% 3.5 amonyum formatında eklenir. Filtre ikiye katlanır, etiketli bir Petri kabına geri döndürülür ve bir dondurucuya yerleştirilir.</li>
</ol>2. Deniz suyu veya sıvı numunelerinin sıvı-sıvı ekstraksiyonu
<ol><li>
Örneği hazırlama
	<ol>
<li>Bilinen bir filtrat hacmini lipid temiz cam mezunu bir silindire ölçün. Bu örneği temiz bir 1 L ayırıcı huni içine yerleştirin. Daha sonra numuneye 20 mL kloroform ekleyin ve sık sık aylak alıkonarak 2 dakika çalkalayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
İlk ayırmadan sonra ilk özün çıkarılması ve asit eklenmesi
	<ol>
<li>Huniyi alüminyum folyoya sarın ve ayırmanın gerçekleşmesi için 5 ila 10 dakika bekleyin. İki katmanı görmek için folyonun altını soyun. Alt, organik tabakayı stopcock boyunca temiz yuvarlak bir dipli şişeye toplayın, üst tabakanın hiçbirini içermemeye dikkat edin. Yuvarlak tabanlı şişeyi azot altına yerleştirin ve dondurucuya yerleştirin.</li>
		<li>Her bir numune litresi için0,25mL konsantre H 2 SO4 ekleyin, ayırıcı hunideki örneğe ekleyin ve huniyi hafifçe sallayın.</li>
		<li>10 mL kloroform ekleyin ve sık sık havalandırma yaparken 2 dakika boyunca kuvvetlice çalkalayın. Ayrılığın gerçekleşmesine izin verin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
İkinci ve üçüncü ayrılıklar
	<ol>
<li>Ayrımı bekleyin ve alt katmanı yuvarlak dipli şişeye ekleyin.</li>
		<li>Üçüncü bir 10 mL kloroform ekleyin ve tekrar sık sık alıkonun, 2 dakika çalkalayın. Ayırmadan sonra, alt katmanı yuvarlak dipli şişeye ekleyin.</li>
		<li>Yuvarlak tabanlı şişedeki özü bir döner evaporatöre aktarın, buharlaştırın ve 2 mL'lik bir şişeye aktarın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Katı maddeler için ekstraksiyon protokolü (modifiye Folch ve ark.3 ekstraksiyon)
<ol><li>
Kurulum NOT: Ekstraksiyon kurulumu buzla dolu yalıtımlı bir kap gerektirir. Çözücüler metanol, kloroform çıkarılmış su ve 2:1 kloroform:metanol içerir. Tüm çözücüler, ekstraksiyonlar başladığında soğuk olacak şekilde buza yerleştirilmelidir. Örnekler de buza gider, böylece her şey soğuk kalır.<ol>
<li>Tüm tüpleri ve PTFE astarlı kapakları 3 kez metanol ve ardından 3 kez kloroform ile durulayın. Her ekstraksiyon için bir santrifüj tüpü ve kapaklı bir 15 mL şişe gereklidir.</li>
		<li>Numuneyi 2 mL kloroform içeren bir santrifüj tüpüne yerleştirin. Örneğin büyüklüğü, mevcut lipit miktarına bağlıdır, yaklaşık 5 ila 10 mg lipit tercih edilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Taşlama ve ekstraksiyon
	<ol>
<li>Yaklaşık 1 mL buz gibi metanol ekleyin ve numuneyi temiz bir homojenizatör veya PTFE/ metal uçlu çubukla hızlı bir şekilde bir hamur haline getirin.</li>
		<li>Çubuğu yaklaşık 1 mL buz gibi 2:1 kloroformla tüpe geri yıkayın: metanol ve ardından 1/2 mL buz gibi kloroform ekstraktlı su ile. Gerekirse, yıkamadan önce parçacıkları şişeye geri zorlamak için temiz bir küme toka kullanın. Tüpü kaplayın ve karışımı ultrasonik bir banyoda (35 - 42 kHz) 4 dakika boyunca sonicate yapın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Çift pipetleme:Numuneyi 1800 × g'da2 dakika santrifüj. Ampulü gevşek bir şekilde açık olan 5 3/4" pipetlerin iki katmandan hafifçe itilirken, ampulü sıkarak kabarcıkların çıkmasına neden olduğu çift pipetleme tekniğini kullanarak tüm organik tabakayı (alt katman) toplayın.<ol>
<li>İkinci katmanın altına ulaşıldığında, organik tabakayı pipete çekmeden ampulü çıkarmak için başparmağı kullanın. 5 3/4" birin içine 9" pipet yerleştirin ve alt katmanı 5 3/4" pipetten çıkarın.</li>
		<li>Özü temiz bir şişeye yerleştirin. Hepsi kaldırılana kadar alt katmanı çıkarmaya devam edin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Pipetlerin yıkanması: Pipetlerin dışını yıkamak için 1,5 mL buz gibi kloroform ve içini yıkamak için 1,5 mL kullanarak 9" pipetleri organik tabakayı içeren şişeye durulayın. Yıkarken pipeti hafifçe çevirin ve tüm kloroformun pipetten şişeye doğru akmasını sağlamak.<ol>
<li>5 3/4" pipetini sulu tabakayı içeren tüpe aynı şekilde durulayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Her seferinde yeni pipetler kullanarak, ayrıldığında numuneleri ve çift pipetleri sonicate ve santrifüj. En az üç kez tekrarlayın ve tüm organik katmanları birleyin. Organik tabakayı üçüncü kez çıkardıktan sonra, her iki pipet de organik tabakayı içeren şişeye yıkayın.</li>
	<li>Hafif bir azot akışı kullanarak, hacme kadar konsantre olun, ardından PTFE bandı ile kapatın ve bir dondurucuda saklayın.</li>
</ol>4. Deniz lipit sınıflarının çubuk TLC ayrımı için sistemler ve adımlar geliştirmek
<ol><li>
ÇUBUKLARIN TLC için hazırlatır
	<ol>
<li>Otomatik FID tarayıcıdaki çubukları üç kez boş tarama</li>
		<li>
Bir numuneyi tespit etme: Menşein altındaki veya hemen altındaki çubuklara şırınna ile numuneler ve standartlar uygulayın. 0,5 μL dağıtın ve damlayı çubuğa dokunun. Bir sonraki damlayı aynı noktaya yerleştirmeden önce kurumaya bırakın. Tüm örnekleri çubuklar üzerinde bir çizgide tespit edin.</li>
		<li>
Asetonda odaklama: Numuneleri 70 mL asetonda iki kez (numuneler çok konsantreyse üç kez) odaklayın. Noktanın altı üst kısımla birleşene kadar çubukta tırmanırken çözücü ön tarafına dikkat edin. Çubukları çıkarın, yaklaşık 5 s kurutun, ardından çubuğun altına yakın dar bir lipit malzemesi bandı üretmek için prosedürü tekrarlayın.</li>
		<li>Çubukları kurutun ve 5 dakika boyunca sabit bir nem odasında koşullayın. Sabit bir nem odası, plakanın altında doymuş bir kalsiyum klorür çözeltisine sahip bir kurutucudur.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
İlk kromatograma giden dizi (ketona hidrokarbon)
	<ol>
<li>
İlk geliştirme sistemi: İlk geliştirme sistemi heksane:dietil eter:formik asit, 98.95:1:0.05'tir. Formik asidi eklemek için bir şırınna kullanın, ancak önce şırınd 3× formik asitle durulayın. Formik asidi hemen ardından şırınnadan kloroform ile durulayın. Kağıdı ıslatmak ve tankı durulamak için karışımın 30 mL'lik kısmını kullanın. Durulama çözeltisini atın ve kalan 70 mL'yi tanka ekleyin.<ol>
<li>Rafları alın ve yavaşça tanka diriltin. Çözücü ön örnek noktalara ulaşana kadar izleyin, ardından zamanlayıcıyı başlatın. 25 dakika sonra, çubukları geliştirme odasından çıkarın, sabit nem odasında 5 dakika kurutun ve aynı çözeltide 20 dakika daha yeniden geliştirin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Çubukları otomatik FID tarayıcıda 5 dakika kurutun ve ardından 25 PPS taraması kullanarak keton zirvesinin arkasındaki en düşük noktaya kadar tarayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
İkinci kromatograma giden sıra (triacylglycerol'den diacylglycerol'e):
	<ol>
<li>Çubukları sabit nem odasında 5 dakika koşullandırılmıştır.</li>
		<li>
İkinci geliştirme sistemi: İkinci geliştirme sistemi heksane:dietil eter:formik asit, 79:20:1'dir. Kağıdı ıslatmak ve tankı durulamak için geliştirme tankına ~30 mL ekleyin. Daha sonra çubukları kalan 70 mL'de 40 dakika boyunca atın ve geliştirin. TAG (doymuş) ve TAG (çoklu doymamış) tepeler arasındaki en iyi ayrım için 79.9:20:0.1 karışımını kullanın, ancak ST ve DAG tepelerinin ayrılması için 79:20:1 karışımını kullanın.</li>
		<li>PPS taraması 11 kullanarak ikinci bir kısmi taramada diacylglycerol zirvesinin arkasındaki en düşük noktaya kurutun ve tarayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Üçüncü kromatograma giden dizi (aseton-mobil polar lipid ve fosfolipid)
	<ol>
<li>Çubukları sabit nem odasında 5 dakika koşullayın.</li>
		<li>Çubukları 70 mL asetonda 15 dakika boyunca iki kez geliştirin. Gelişmeler arasında çubukları yaklaşık 30 saniye boyunca kurutun.</li>
		<li>Çubukları sabit nem odasında 5 dakika koşullayın.</li>
		<li>
Üçüncü geliştirme sistemi: Üçüncü geliştirme sistemi kloroform, metanol ve kloroform eklenmiş su karışımıdır, 50:40:10. Çubukları karışımın 70 mL'sinde 10 dakika boyunca iki kez geliştirin. Gelişmeler arasında, çubukları yaklaşık 30 saniye boyunca havayla kurutun.</li>
		<li>Çubukların tüm uzunluğunu kurulayın ve tarayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. MeOH'da H2SO4 ile ŞÖHRET türetme
<ol><li>
Hilditch reaktifini yapma
	<ol>
<li>
Metanol hazırlama: Temiz bir hacimsel şişeye 100 mL MeOH yerleştirin ve ardından şişenin altı kaplanana kadar susuz NaSO4'e hafifçe serpin. Kaplandıktan sonra, metanoldeki herhangi bir suyun NaSO4tarafından emilebilmesi için iki kez ters çevirin. Ters çevirip salladıktan sonra, en az 5 dakika bekletin.</li>
		<li>
Asit ekleme: Metanol yavaşça bir cam kavanoz içine dekonjeans (şimdiye kadar NaSO4 şişenin dibinde sert bir yumrudur) ve H2SO4 eklenir. Yavaşça bir pipet kullanarak metanol içine 1.5 mL sülfürik asit ekleyin. Bir seferde birkaç damla ekleyin ve tüm asit eklendikten sonra, kapak ve karıştırmak için hafifçe karıştırın. Çözüm artık türev ürünler için kullanılmaya hazırdır, ancak haftalık olarak yapılmalıdır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Türevleri yapmak
	<ol>
<li>Hacmi bilinen bir miktara kadar getirmiş bir özü şişesinden yaklaşık 200 μg lipitleri temiz, 15 mL şişeye aktarın ve azot altında kurumaya buharlaşın. Çıkarılan miktar, numunenin TLC/FID'den konsantrasyonuna göre belirlenecektir. Örneği çıkarmak için temiz bir pipet kullanın.</li>
		<li>Numune kuruduğunda, 1,5 mL diklorometan ve yeni yapılan Hilditch reaktifinin 3 mL'si ekleyin.</li>
		<li>Örneği vortex ve cam şişeye yapışmış lipitleri çıkarmak için 4 dakika boyunca ultrasonik bir banyoda sonicate. Şişeyi azot, kapakla doldurun ve 100 °C'de PTFE bant ve ısı ile 1 saat boyunca kapatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Reaksiyonu durdurma
	<ol>
<li>Numunelerin fırından çıkarıldıktan sonra 10 dakika boyunca oda sıcaklığına tamamen soğumasını bekleyin, ardından şişeleri dikkatlice açın.</li>
		<li>Yavaşça yaklaşık 0,5 mL doymuş sodyum bikarbonat çözeltisi (9 g/100 mL kloroform ekstraktlı su), ardından 1,5 mL heksam ekleyin. Şişeyi sallayın veya girdaplayın, ardından 2 katmana ayıracak şekilde bekletin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
FAME'leri toplamak
	<ol>
<li>
Üst tabakanın çıkarılması: Derivatizasyon durdurulduktan ve net bir ayırma olduğunda, üst, organik fazı çıkarın ve bir lipid temiz 2 mL şişeye yerleştirin.</li>
		<li>2 mL'lik şişedeki çözücüyü kurumaya buharlaştırın ve heksan ile yaklaşık 0,5 mL'ye doldurun.</li>
		<li>Şişenin baş boşluğunu azot, kapakla doldurun ve şişeyi PTFE bandı ile kapatın, yağ asitlerini yeniden askıya almak için 4 dakika daha sonicate yapın ve ardından GC'ye gitmeye hazırdır. NOT: Yağ asidi konsantrasyonları gerekiyorsa, sulu tabaka heksan ve tüm organik tabakalar 2 mL şişeye birikmiş olarak üç kez yıkanmalıdır. Bu, 2 mL hekzan eklemeyi, numuneyi girdaplamayı, santrifüjüjü ve organik tabakayı çıkarmayı içerir, hepsi 3 kez tekrarlanır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Couturier, L. I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State+of+art+and+best+practices+for+fatty+acid+analysis+in+aquatic+sciences%5BTitle%5D)+AND+%22ICES+Journal+of+Marine+Science%22%5BJournal%5D)">State of art and best practices for fatty acid analysis in aquatic sciences.</a> ICES Journal of Marine Science. , (2020).</li>
<li>Parrish, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipids+in+Marine+Ecosystems%5BTitle%5D)+AND+%22ISRN+Oceanography%22%5BJournal%5D)">Lipids in Marine Ecosystems.</a> ISRN Oceanography. , 604045(2013).</li>
<li>Folch, J., Lees, M., Stanley, G. H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+the+isolation+and+purification+of+total+lipides+from+animal+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues.</a> Journal of Biological Chemistry. 226, 497-509 (1957).</li>
<li>Vaz, F. M., Pras-Raves, M., Bootsma, A. H., van Kampen, A. H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+and+practice+of+lipidomics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Inherited+Metabolic+Disease%22%5BJournal%5D)">Principles and practice of lipidomics.</a> Journal of Inherited Metabolic Disease. , (2014).</li>
<li>Wolf, C., Quinn, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipidomics%3A+practical+aspects+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Lipidomics: practical aspects and applications.</a> Progress in Lipid Research. 47, 15-36 (2008).</li>
<li>Parrish, C. C. Determination of total lipid, lipid classes, and fatty acids in aquatic samples. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aParrish%2C+CC+%22Lipids+in+Freshwater+Ecosystems%22">Lipids in Freshwater Ecosystems</a>. Arts, M. T., ainman, B. C. , Springer-Verlag. New York. 4-20 (1999).</li>
<li>Jüttner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liberation+of+5%2C8%2C11%2C14%2C17-eicosapentaenoic+acid+and+other+polyunsaturated+fatty+acids+from+lipids+as+a+grazer+defense+reaction+in+epilithic+diatom+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Phycology%22%5BJournal%5D)">Liberation of 5,8,11,14,17-eicosapentaenoic acid and other polyunsaturated fatty acids from lipids as a grazer defense reaction in epilithic diatom biofilms.</a> Journal of Phycology. 37, 744-755 (2001).</li>
<li>Carreón-Palau, L., Parrish, C. C., Pérez-España, H., Aguiñiga-Garcia, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elemental+ratios+and+lipid+classes+in+a+coral+reef+food+web+under+river+influence%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Oceanography%22%5BJournal%5D)">Elemental ratios and lipid classes in a coral reef food web under river influence.</a> Progress in Oceanography. 164, 1-11 (2018).</li>
<li>Maciel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioprospecting+of+marine+macrophytes+using+MS-based+lipidomics+as+a+new+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Drugs%22%5BJournal%5D)">Bioprospecting of marine macrophytes using MS-based lipidomics as a new approach.</a> Marine Drugs. 14, 49(2016).</li>
<li>Pernet, F., Tremblay, R., Comeau, L., Guderley, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+adaptation+in+two+bivalve+species+from+different+thermal+habitats%3A+energetics+and+remodelling+of+membrane+lipids%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Temperature adaptation in two bivalve species from different thermal habitats: energetics and remodelling of membrane lipids.</a> Journal of Experimental Biology. 210, 2999-3014 (2007).</li>
<li>Bergen, B. J., Quinn, J. G., Parrish, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality-assurance+study+of+marine+lipid-class+determination+using+Chromarod%2FIatroscan+thin-layer+chromatography-flame+ionization+detector%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology+and+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Quality-assurance study of marine lipid-class determination using Chromarod/Iatroscan thin-layer chromatography-flame ionization detector.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 19, 2189-2197 (2000).</li>
<li>Foroutani, B. M., Parrish, C. C., Wells, J., Taylor, R. G., Rise, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimizing+marine+ingredients+in+diets+of+farmed+Atlantic+salmon+%28Salmo+salar%29%3A+effects+on+liver+and+head+kidney+lipid+class%2C+fatty+acid+and+elemental+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Fish+Physiology+%26+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Minimizing marine ingredients in diets of farmed Atlantic salmon (Salmo salar): effects on liver and head kidney lipid class, fatty acid and elemental composition.</a> Fish Physiology & Biochemistry. 46, 2331-2353 (2020).</li>
<li>Parrish, C. C., Deibel, D., Thompson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+sinking+spring+phytoplankton+blooms+on+lipid+content+and+composition+in+suprabenthic+and+benthic+invertebrates+in+a+cold+ocean+coastal+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Effect of sinking spring phytoplankton blooms on lipid content and composition in suprabenthic and benthic invertebrates in a cold ocean coastal environment.</a> Marine Ecology Progress Series. 391, 33-51 (2009).</li>
<li>Sinanoglou, V. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+combined+application+of+Iatroscan+TLC-FID+and+GC-FID+to+identify+total%2C+neutral%2C+and+polar+lipids+and+their+fatty+acids+extracted+from+foods%5BTitle%5D)+AND+%22ISRN+Chromatography%22%5BJournal%5D)">On the combined application of Iatroscan TLC-FID and GC-FID to identify total, neutral, and polar lipids and their fatty acids extracted from foods.</a> ISRN Chromatography. , 59024(2013).</li>
<li>Peters-Didier, J., Sewell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+investment+and+nutrient+utilization+during+early+larval+development+of+the+sea+cucumber+Australostichopus+mollis%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Biology%22%5BJournal%5D)">Maternal investment and nutrient utilization during early larval development of the sea cucumber Australostichopus mollis.</a> Marine Biology. 164, 178(2017).</li>
<li>Triesch, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concerted+measurements+of+lipids+in+seawater+and+on+submicron+aerosol+particles+at+the+Cape+Verde+Islands%3A+biogenic+sources%2C+selective+transfer+and+high+enrichments%5BTitle%5D)+AND+%22Atmospheric+Chemistry+and+Physics%22%5BJournal%5D)">Concerted measurements of lipids in seawater and on submicron aerosol particles at the Cape Verde Islands: biogenic sources, selective transfer and high enrichments.</a> Atmospheric Chemistry and Physics. 21, 4267-4283 (2021).</li>
<li>Parrish, C. C., Bodennec, G., Gentien, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+glycoglycerolipids+by+Chromarod+thin-layer+chromatography+with+Iatroscan+flame+ionization+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+A%22%5BJournal%5D)">Determination of glycoglycerolipids by Chromarod thin-layer chromatography with Iatroscan flame ionization detection.</a> Journal of Chromatography A. 741, 91-97 (1996).</li>
<li>Mejri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bonefish+%28Albula+vulpes%29+oocyte+lipid+class+and+fatty+acid+composition+related+to+their+development%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Biology+of+Fishes%22%5BJournal%5D)">Bonefish (Albula vulpes) oocyte lipid class and fatty acid composition related to their development.</a> Environmental Biology of Fishes. 102, 221-232 (2019).</li>
<li>Sewell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utilization+of+lipids+during+early+development+of+the+sea+urchin+Evechinus+chloroticus%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Utilization of lipids during early development of the sea urchin Evechinus chloroticus.</a> Marine Ecology Progress Series. 304, 133-142 (2005).</li>
<li>Parrish, C. C., Bodennec, G., Gentien, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+of+polyunsaturated+and+saturated+lipids+from+marine+phytoplankton+on+silica+gel+coated+Chromarods%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+A%22%5BJournal%5D)">Separation of polyunsaturated and saturated lipids from marine phytoplankton on silica gel coated Chromarods.</a> Journal of Chromatography A. 607, 97-104 (1992).</li>
<li>Stevens, C. J., Deibel, D., Parrish, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+bacterial+fatty+acids+and+changes+in+a+wax+ester-based+omnivory+index+during+a+long-term+incubation+experiment+with+Calanus+glacialis+Jaschnov%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Marine+Biology+and+Ecology%22%5BJournal%5D)">Incorporation of bacterial fatty acids and changes in a wax ester-based omnivory index during a long-term incubation experiment with Calanus glacialis Jaschnov.</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 303, 135-156 (2004).</li>
<li>Goutx, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+term+summer+to+autumn+variability+of+dissolved+lipid+classes+in+the+Ligurian+Sea+%28NW+Mediterranean%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biogeosciences%22%5BJournal%5D)">Short term summer to autumn variability of dissolved lipid classes in the Ligurian Sea (NW Mediterranean).</a> Biogeosciences. 6, 1229-1246 (2009).</li>
<li>Conlan, J. A., Rocker, M. M., Francis, D. S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((comparison+of+two+common+sample+preparation+techniques+for+lipid+and+fatty+acid+analysis+in+three+different+coral+morphotypes+reveals+quantitative+and+qualitative+differences%5BTitle%5D)+AND+%22PeerJ%22%5BJournal%5D)">comparison of two common sample preparation techniques for lipid and fatty acid analysis in three different coral morphotypes reveals quantitative and qualitative differences.</a> PeerJ. 5, 3645(2017).</li>
</ol>

Yazarların rakip finansal çıkarları yoktur.

TLC-FID sisteminin küçük örneklerden sinoptik lipid sınıfı bilgileri sağlama hızı, TLC-FID'yi daha ilgili analitik prosedürler üstlenmeden önce deniz örneklerini taramak için mümkün bir araç haline getirir. Bu tür analizler genellikle lipid özlerinden bileşen bileşiklerinin salınmasını ve gaz kromatografisi durumunda volatiliteyi artırmak için derivatizasyon gerektirir. GC-FID ile birlikte TLC-FID'nin deniz ürünleri ve diğer gıda maddelerinin özleri için güçlü bir kombinasyon olduğu bulunmuştur14....

Burada açıklanan yöntemler, operasyonel olarak deniz lipitleri olarak tanımlanan maddelerle ilgilidir. Bu tanım, polar olmayan organik çözücülerde sıvı-sıvı ekstraksiyonuna uygun olmalarına dayanır ve su matrislerindeki diğer maddelerden ayrılmaları için uygun bir yöntem sağlar. Hidrofobik doğaları, deniz suyundan veya biyolojik örneklerden izole edilmelerini, zenginleşmelerini ve tuz ve proteinlerin uzaklaştırılmasını kolaylaştırır.
Lipit içeriğinin ve deniz organizmalarındaki bileşiminin ölçülmesi, on yıllardır gıda ağı ekolojisi, su ürünleri beslenmesi ve gıda biliminde büyük ilgi çekmektedir. Lipitler, canlı organizmalarda evrensel bileşenlerdir, hücre zarlarında temel moleküller olarak hareket eder, biyoyararlanımlı enerjinin ana kaynakları olarak, ısı yalıtımı ve yüzdürme sağlar ve sinyal molekülleri olarak hizmet eder. Diğer alanlarda lipit belirleme prosedürleri iyi tanımlanmış olsa da, deniz örnekleriyle kullanımları genellikle alan koşullarına ve örnek tip1'euyum sağlamak için değişiklik gerektirir.
Deniz suyu numuneleri için, ilk adım genellikle normalde filtrasyon yoluyla operasyonel olarak tanımlanmış 'çözünmüş' ve 'partikül' fraksiyonlara ayrılmayı gerektirir (Protokol adım 1). Partikül fraksiyonu filtre tarafından tutulan şeydir ve gözeneklerin boyutu kesme2'yitanımlamada önemlidir. Genellikle partikül madde örneklemesi yaparken, lipit konsantrasyonlarını toplam kütle konsantrasyonlarıyla ilişkilendirmek isteriz, bu durumda bu amaç için ayrı, daha küçük, örnek (örneğin, 10 mL) alınmalıdır (Protokol adım 1, not). Doğru bir kütle tayini elde etmek için filtrasyonun sonuna amonyum format (35 g/L) eklemek önemlidir.
Daha büyük numuneden elde edilen deniz suyu filtratı, numune tipine bağlı olarak 250 mL ile 1 L arasında olmalıdır ve ayrık bir hunide sıvı-sıvı ekstraksiyona tabi tutulur (Protokol adım 2). Lipitlerin hidrofobik doğası, kloroform gibi kutupsal olmayan bir çözücüde ekstraksiyon ile diğer bileşiklerden ayrılabilecekleri anlamına gelir. Suda çözünür bileşenler sulu tabakada kalırken lipitlerin organik tabakaya bölündüğü iki katmanlı bir sistem oluşturulur.
Bir filtre üzerindeki partikül numuneler veya biyolojik numuneler, kloroform içeren değiştirilmiş bir Folch ve ark. ekstraksiyonu3ile çıkarılır (Protokol adım 3). Yine, lipitlerin organik faza bölündüğü, suda çözünür moleküllerin sulu fazda kaldığı ve proteinlerin çöktüğü organik/sulu bir sistem oluşturulur. Aslında, katılar için, çoğu laboratuvar kloroform ve metanol içeren Folch ve ark. ekstraksiyon3 prosedürünün bazı varyasyonlarını kullanır. Filtreler için ilk adım 2 mL kloroform ve 1 mL metanol homojenize etmektir.
Ekstraksiyon sırasında, ester bağı hidrolizini veya karbon-karbon çift bağ oksidasyonunu azaltmak için numuneleri ve çözücüleri buz üzerinde tutarak lipitleri kimyasal veya enzimatik modifikasyondan korumaya özen edilmelidir. Dokular ve hücre lipitleri doğal antioksidanlar ve bölümlere ayırma ile oldukça iyi korunur4; bununla birlikte, örneklerin homojenizasyonunu takiben, hücre içeriği, lipitleri kimyasal veya enzimatik olarak değişime daha fazla atılır. Çoğu sterol gibi bazı lipitler çok kararlıdır, çoklu doymamış yağ asitleri içerenler gibi diğerleri ise kimyasal oksidasyona daha duyarlıdır. Konjuge çift bağlı steroller gibi diğerleri, ışık5ile katalİze edilen oksidasyona eğilimlidir. Ekstraksiyonlardan sonra, lipitler kimyasal oksidasyona karşı çok daha hassastır ve numuneler azot gibi inert bir gaz altında saklanmalıdır. Özleri konsantre etmek için yumuşak bir azot akışı da kullanılır.
Konsantrasyondan sonra, lipitler normalde karbonhidrat ve proteinlerin kJ / g'sinden daha fazla, yüksek konsantrasyonda enerji sağlayan deniz ekosistemlerinin önemli bir bileşeni oldukları için toplu olarak ölçülür. Her zaman bireysel bileşenler olarak ölçülecektir: lipitlerin kapsamlı analizi genellikle kimyasal doğalarına göre daha basit kategorilere ayrılmayı içerir. Bu nedenle, tam bir analiz toplam lipitlerin, lipit sınıflarının ve bireysel bileşiklerin ölçülmesini içerir.
Total lipit, kromatografi ile ayrılmış bireysel ölçülen lipit sınıflarının toplamı alınarak belirlenebilir6. Bir deniz lipit özü biyojenik ve antropojenik kaynaklardan bir düzineden fazla sınıf içerebilir. Lipid yapılarının çok çeşitliliği, yapıların bireysel gruplandırmalarının belirlenmesiyle çok fazla bilgi kazanılması anlamına gelir. Lipid sınıfları bireysel olarak veya belirli gruplarda, belirli organizma türlerinin varlığının yanı sıra fizyolojik durumlarını ve aktivitelerini belirtmek için kullanılmıştır2. Ayrıca, çözünmüş organik madde (DOM) ve hidrofobik kirleticiler de dahil olmak üzere organik malzemenin kökenlerinin bir göstergesi olarak kullanılmıştır.
Triyasikalseroller, fosfolipidler ve steroller daha önemli biyojenik lipit sınıfları arasındadır. İlk ikisi biyokimyasal olarak ilişkilidir, çünkü iki veya üç yağ asidinin estere olduğu gliserol omurgasına sahiptirler (Şekil 1). Triacylglycerols, balmumu esterleri ile birlikte çok önemli depolama maddeleridir, diyalsikalseroller, serbest yağ asitleri ve monoacylglycerols gibi diğer yağ asidi içeren lipit sınıfları genellikle küçük bileşenlerdir. Doymamış olanlar toksik olabileceği için, canlı organizmalarda daha düşük konsantrasyonlarda serbest yağ asitleri bulunur7. Steroller (hem özgür hem de esterleşmiş formlarında) ve yağlı alkoller de daha az polar lipitler arasında yer alırken, glikolipidler ve fosfolipidler polar lipitlerdir. Polar lipitler, hücre zarlarında bulunan lipid bilayerlerinin oluşumunu sağlayan hidrofilik bir gruba sahiptir. Serbest steroller aynı zamanda membran yapısal bileşenleridir ve triyasiller oranında alındığında, yaygın olarak kullanılan bir durum veya beslenme indeksi (TAG : ST) sağlarlar8. Fosfolipidlere (ST : PL) oranla alındığında, tuza karşı bitki hassasiyetini belirtmek için kullanılabilirler: daha yüksek değerler yapısal bütünlüğü korur ve membran geçirgenliğini azaltır9. Bu oranın tersi (PL : ST) sıcaklık adaptasyonu sırasında bivalve dokularda çalışılmıştır10.
Deniz lipid sınıfları silika jel kaplı çubuklar üzerinde ince katmanlı kromatografi (TLC) ile ayrılabilir (Protokol adım 4) ve daha sonra otomatik bir FID tarayıcıda alev iyonizasyon tespiti (FID) ile tespit edilebilir ve ölçülebilir. TLC/FID, küçük örneklerden sinoptik lipit sınıfı verilerini hızla sağladığı için ve tüm sınıfların toplamını alarak, toplam lipitler için bir değer olan deniz numuneleri için rutin olarak kullanılır hale gelmiştir. TLC/FID kalite güvence (QA) değerlendirmesine tabi tutulmuştur ve tutarlı harici kalibrasyon, düşük boşluklar ve hassas çoğaltma analizi11için gerekli standartları karşılar. Değişim katsayıları (CV) veya göreli standart sapmalar% 10 civarındadır ve FID tarayıcı toplam lipid verileri normalde gravimetrik ve diğer yöntemlerle elde edilenlerin yaklaşık%90'ıdır 2. Gravimetri, FID tarayıcısının yalnızca uçucu olmayan bileşikleri ölçmesi ve ayrıca lipid olmayan malzemenin gravimetrik ölçümlere dahil edilmesinin olası bir sonucu olarak daha yüksek toplam lipitler verir.
Lipid sınıf analizi tarafından sağlanan bilgiler, özellikle yağ asitlerinin birey veya sterol veya ikisi olarak belirlenmesiyle birleştirildiğinde yararlıdır. Bu analizlere yönelik ilk adım, lipit özlerindeki sterollerle birlikte tüm bileşen yağ asitlerinin salınır (Protokol adım 5). Çok çeşitli lipit yapıları ve işlevleri, ekosistem sağlığını ve antropojenik ve karasal girdilerden ne ölçüde etkilendiklerini değerlendiren ekolojik ve biyojeokimyasal çalışmalarda geniş kullanım gördükleri anlamına gelir. Diyet değeri olan maddelerin deniz faunasına biyosentezini ölçmek ve su örneklerinin kalitesini belirtmek için kullanılmıştır. Tortu çekirdek örneklerinde lipitlerin ölçülmesi, tortuların kara-deniz marjına yakın insan arazisi kullanımındaki değişikliklere duyarlılığını göstermeye yardımcı olur.
Bireysel lipit bileşiklerini tanımlamak ve ölçmek için birincil araç geleneksel olarak FID ile gaz kromatografisi (GC) olmuştur. Ancak analizden önce, bu bileşikler türetme ile daha uçucu hale getirilir. Yağ asitleri, akil lipit sınıflarından asidik bir katalizör (H2SO4)varlığında salınır (Şekil 1). Organik kimyada, akil grubu (R-C=O) genellikle karboksilik asitten (R-COOH) türetilir. Daha sonra GC sütunlarında daha iyi ayrımlar sağlayan yağ asidi metil esterlerine (FAME) yeniden esterlenirler (Protokol adım 5).

<table><tbody><tr><td>15 ml şişeler</td><td>VWR</td><td>66009-560</td><td></td></tr><tr><td>1-hekzadekanol</td><td>Sigma</td><td>258741-1G</td><td></td></tr><tr><td>1-Monopalmitoil-rak-gliserol</td><td>Sigma</td><td>M1640-1g</td><td></td></tr><tr><td>2 ml şişeler</td><td>VWR</td><td>46610-722</td><td></td></tr><tr><td>25 mm cam elyaf filtreler</td><td>Fisher</td><td>09 874 32A</td><td></td></tr><tr><td>2ml pipet ampulleri</td><td>VWR</td><td>82024-554</td><td></td></tr><tr><td>47 mm cam elyaf filtreler</td><td>Fisher</td><td>09 874 32</td><td></td></tr><tr><td>5 3/4" pipetler</td><td>Fisher</td><td>1367820A</td><td></td></tr><tr><td>9" pipetler</td><td>Fisher</td><td>1367820C</td><td></td></tr><tr><td>Aseton</td><td>VWR</td><td>CAAX0116-1</td><td></td></tr><tr><td>Agilent GC-FID 6890</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum Klorür ANHS 500gm</td><td>VWR</td><td>CACX0160-1</td><td></td></tr><tr><td>2 ml'lik şişeler için kapaklar</td><td>VWR</td><td>46610-712</td><td></td></tr><tr><td>kloroform</td><td>VWR</td><td>CACX1054-1</td><td></td></tr><tr><td>Kolesteril palmitat</td><td>Sigma</td><td>C6072-1G</td><td></td></tr><tr><td>Chromarod S5</td><td>Shell USA</td><td>3252</td><td></td></tr><tr><td>Diklorometan</td><td>VWR</td><td>CADX0831-1</td><td></td></tr><tr><td>DL-a-fosfatidilkolin, dipalmotoyl</td><td>Sigma</td><td>P5911-1g</td><td></td></tr><tr><td>Etil Eter, ACS sınıfı anhidr 4L</td><td>VWR</td><td>CAEX0190-4</td><td></td></tr><tr><td>Gliseril tripalmitat</td><td>Sigma</td><td>T5888-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton Şırınga 702SNR 25 & mikro; l</td><td>Sigma</td><td>58381</td><td></td></tr><tr><td>Helyum</td><td>Hava Sıvısı</td><td>A0492781</td><td></td></tr><tr><td>Hekzan</td><td>VWR</td><td>CAHX0296-1</td><td></td></tr><tr><td>Hidrojen regülatörü</td><td>VWR</td><td>55850-484</td><td></td></tr><tr><td>Iatroscan MK6</td><td>Shell USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Fisher</td><td>066662</td><td></td></tr><tr><td>Tıbbi Hava</td><td>Hava Sıvı</td><td>A0464563</td><td></td></tr><tr><td>Orta nitril eldiven</td><td>Fisher</td><td>191301597C</td><td></td></tr><tr><td>Nitril eldiven L</td><td>VWR</td><td>CA82013-782</td><td></td></tr><tr><td>Azot</td><td>Hava Sıvı</td><td>A0464775</td><td></td></tr><tr><td>Azot Regülatörü</td><td>VWR</td><td>55850-474</td><td></td></tr><tr><td>Adekan</td><td>Olmayan Sigma</td><td>74158-1G</td><td></td></tr><tr><td>Palmitik asit</td><td>Sigma</td><td>P0500-10G</td><td></td></tr><tr><td>Tekrarlayan dağıtıcı</td><td>Sigma</td><td>20943</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Bikarbonat 1kg</td><td>VWR</td><td>CA97062-460</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Sülfat Anhy ACS 500gr</td><td>VWR</td><td>CA71008-804</td><td></td></tr><tr><td>Sülfürik asit</td><td>VWR</td><td>CASX1244-5</td><td></td></tr><tr><td>Teflon bant</td><td>Fisher</td><td>14610120</td><td></td></tr><tr><td>doku ustası 125 115V w/7mm homojenatör</td><td>OMNI International</td><td>TM125-115</td><td></td></tr><tr><td>TLC geliştirme tankı</td><td>Shell USA</td><td>3201</td><td></td></tr><tr><td>UHP hidrojen</td><td>Hava Sıvısı</td><td>A0492788</td><td></td></tr><tr><td>VWR solvent repippetter</td><td>VWR</td><td>82017-766</td><td></td></tr><tr><td>VWR zamanlayıcı Yanıp sönen LED 2 kanal</td><td>VWR</td><td>89140-196</td><td></td></tr><tr><td>Zebron ZB-Wax GC sütunu</td><td>Phenomenex</td><td>7HM-G013-11</td><td></td></tr></tbody></table>

deniz Örneklerinde toplam lipid ve lipid sınıflarının belirlenmesi

Determination of Total Lipid and Lipid Classes in Marine Samples

Lipitler büyük ölçüde karbon ve hidrojenden oluşur ve bu nedenle dendeki diğer organik makromoleküllerden daha fazla spesifik enerji sağlar. Karbon ve hidrojen bakımından zengin olmaları aynı zamanda hidrofobiktir ve organik kirleticiler için bir çözücü ve emilim taşıyıcısı olarak işlev görür ve böylece deniz ekosistemlerinde kirletici biyoakümülasyonun sürücüleri olabilir. Hidrofobik doğaları deniz suyundan veya biyolojik örneklerden izolasyonlarını kolaylaştırır: deniz lipit analizi, kutupsal olmayan organik çözücülerde örnekleme ve daha sonra ekstraksiyon ile başlar ve su matrislerindeki diğer maddelerden ayrılmaları için uygun bir yöntem sağlar.
Deniz suyu örneklenmişse, ilk adım genellikle filtrasyon yoluyla operasyonel olarak tanımlanmış 'çözünmüş' ve 'partikül' fraksiyonlara ayrılmayı içerir. Numuneler toplanır ve lipitler tipik olarak gerçekten çözünmüş madde ve kolloidler için kloroform ve katı maddeler ve biyolojik örnekler için kloroform ve metanol karışımları ile numune matrisinden izole edilir. Bu tür özler biyojenik ve antropojenik kaynaklardan birkaç sınıf içerebilir. Şu anda total lipitler ve lipit sınıfları belirlenebilir. Total lipid, geleneksel olarak kromatografik olarak ayrılmış olan ayrı ayrı belirlenmiş lipit sınıflarının toplanabilir. Deniz örneklerinden elde edilen lipitlerin nicel analizi için alev iyonizasyon algılamalı (FID) ince katmanlı kromatografi (TLC) düzenli olarak kullanılmaktadır. TLC-FID, sinoptik lipid sınıfı bilgilerini ve sınıfları özetleyerek toplam lipid ölçümünü sunmaktadır.
Lipid sınıfı bilgileri, lipid özlerinden salındıktan sonra, yağ asitleri ve / veya steroller gibi bireysel bileşenlerin ölçümleriyle birleştirildiğinde özellikle yararlıdır. Çok çeşitli lipit yapıları ve işlevleri, ekosistem sağlığını ve antropojenik etkilerin etki derecesini değerlendiren ekolojik ve biyojeokimyasal araştırmalarda yaygın olarak kullanıldığı anlamına gelir. Deniz faunasına (örneğin, aquafeeds ve/veya av) diyet değerine sahip maddeleri ölçmek ve su kalitesinin bir göstergesi olarak (örneğin, hidrokarbonlar) istihdam edilmiştir.

En hızlı büyüyen gıda üretim sektörü olan su ürünleri, değişen gereksinimleri karşılayacak teknolojik yenilikler ve adaptasyonlar açısından gelişmektedir. Bunlardan biri, birçok su ürünleri türü için yem bileşenleri sağlayan yabani kaynaklı balık unu ve balık yağına bağımlılığı azaltmaktır. Karasal bitki yağları, su beslemelerinde balık yağının sürdürülebilir ve ekonomik yedekleri olarak araştırılmaktadır ve karaciğer, lipid metabolizmasının birincil bölgesi olduğu için analiz için bir hedef dokudur12</...

Bu protokol deniz suyu ve biyolojik örneklerde lipitlerin belirlenmesi içindir. Filtratlardaki lipitler, katı madde durumunda kloroform veya kloroform ve metanol karışımları ile çıkarılır. Lipid sınıfları, alev iyonizasyon tespiti ile çubuk ince katmanlı kromatografi ile ölçülür ve toplam lipit içeriği verir.

Deniz Örneklerinde Toplam Lipid ve Lipid Sınıflarının Belirlenmesi

Lipids are largely composed of carbon and hydrogen and, therefore, provide a greater specific energy than other organic macromolecules in the sea. Being ...

Burada açıklanan yöntemler, operasyonel olarak deniz lipitleri olarak tanımlanabilen bileşiklerle ilgilidir. Bu tanımın temeli, kutupsal olmayan organik çözücülerde sıvı-sıvı ekstraksiyonuna uygun olmalarıdır, bu da onları sulu bir matristeki diğer bileşiklerden ayırmak için uygun bir araç sağlar. Hidrofobik doğaları, deniz suyundan veya biyolojik örneklerden izole edilmelerini, zenginleşmelerini ve tuz ve proteinlerin uzaklaştırılmasını kolaylaştırır.Deniz suyu numuneleri için, ilk adım normalde genellikle filtrasyon yoluyla operasyonel olarak tanımlanmış çözünmüş ve partikül fraksiyonlarına ayrılmayı içerir. Partikül fraksiyonu filtreler tarafından tutulandır ve pore boyutu kesmeyi tanımlamada önemlidir. Lipid temizli tokalar kullanarak, lipid temiz filtrasyon sistemi üzerine küllenmiş 47 milimetrelik bir cam elyaf filtresi yerleştirin.Örneği alın ve yerleşmiş olabilecek parçacıkları yeniden canlı hale getirmek için hafifçe döndürün. Bilinen bir birimi ölçün. Hacim, numunedeki partikül malzeme miktarına bağlı olacaktır.Hacim ölçüldüğünde, filtrasyon sistemine emme ekleyin ve filtreyi filtrelenmiş deniz suyu ile hafifçe ıslatın. Numunenin tamamını filtrasyon hunisine yavaşça ekleyin ve tüm parçacıkların filtreye eklenmesini sağlamak için dereceli silindiri deniz suyuyla durulayın. Tüm parçacıkların filtreye durulanmasını sağlamak için cihazın hunisini durulayın.Tüm sıvıyı filtreden çekin, ancak filtredeki hücreleri yırtabileceğinden filtrenin kurumasına izin vermeyin. Lipid temizlemiş toksları alın, filtreyi ikiye katlayın, sonra bir kez daha üçte bir ve sonra yarı uzunlamasına katlayın. Filtre daha sonra lipid temiz bir şişeye yerleştirilir.Filtreyi iki ml kloroformla örtün, azot altında kapak ve Teflon bantla kapatın. Bu noktada, numune bir yıla kadar eksi 20 Santigrat derece depolama alanında kararlı olacaktır. Numune hazırlanıyor.Filtratların bilinen bir hacmini lipid temiz cam mezunu bir silindire ölçün. Numuneyi lipid temizliğinde bir ayırıcı huninin içine yerleştirin ve yaklaşık 20 ml kloroform ekleyin. Bu karışımı sık sık havalandırmak için en az iki dakika sallayın.İlk ayırmadan sonra, ilk özün çıkarılması ve asit eklenmesi. Çözeltiyi iki dakika salladıktan sonra, huniyi alüminyum folyoya sarın ve yaklaşık beş dakika ayırma gerçekleşene kadar bekleyin. Ayırmayı bekledikten sonra, iki katmanı görmek için alüminyum folyonun altını soyun.Alt katmanı lipid temizlenerek yuvarlak alt şişeye toplayın, üst tabakanın hiçbirini içermemeye dikkat edin. Yuvarlak alt şişeyi azot altına kapla ve bir dondurucuya yerleştirin. Ayırıcı huniyi geri kazan ve sıvıya sülfürik asit ekleyin.Mevcut her litre deniz suyu için 0,25 mls ekleyin. Sülfürik asit eklendikten sonra, deniz suyunu hafifçe çalkalayın, ardından 10 ml daha kloroform ekleyin ve iki dakika daha havalandırma yaparken kuvvetlice çalkalayın. O zaman ayrılığa izin ver.İkinci ve üçüncü ayrılıklar. Alt tabakayı su dahil etmeden tekrar yuvarlak alt şişeye ekleyin. Üçüncü bir miktar 10 ml kloroform ekleyin ve havalandırma ile iki dakika daha çalkalayın.Ayırmadan sonra, kloroformun son kısmını aynı şişeye yerleştirin ve kombine özler döner evaporatör tarafından buharlaştırılabilir ve iki ml'lik bir şişeye aktarılabilir. Kurulum. Ekstraksiyon kurulumu için buzla dolu yalıtımlı bir kaba ihtiyacınız olacak. Çözücüler kloroform, kloroform eklenmiş su ve 2:1 kloroform-metanol içerir.Bu çözeltiden, örnek başına yaklaşık bir ml'ye ihtiyacınız vardır, bu yüzden buna göre yapın. Tüm bu çözücüler, ekstraksiyonlar başladığında üşümeleri için buza yerleştirilmelidir. Numuneler de buzun üzerine çıkıyor, böylece her şey soğuk kalıyor.Taşlama ve çıkarma. Numuneler iki ml kloroformda dondurulmuş olarak depolanmıştır, bu nedenle bir ml buz gibi metanol veya yarım pipetful ekleyin. Kaval ile şişeye dokunmamak için metanol eklerken dikkatli olun.Metanol ile üç kez ve kloroform ile üç kez temizleyin ve homojenize edin. Taşlama yaparken, şişeyi kırmanız durumunda elinizdeki ekstraksiyon şişesini kesmemeye ve numunenin ısınmasını önlemeye dikkat edin. Çabuk öğütün.Numune tamamen öğütüldükten sonra, buzda bekletin ve öğütücüden kalan parçacıkları 2:1 kloroform-metanol ml kullanarak şişeye geri yıkayın. Gerekirse, yıkamadan önce parçacıkları şişeye geri zorlamak için lipid temizlemeli bir tokmak seti kullanın. Pipet öğütücüye veya öğütücüye şişeye dokunmamaya dikkat edin.Daha sonra öğütücüye veya öğütücüye dokunmadan 0,5 mls veya çeyrek pipet kloroform çıkarılmış su ekleyin. Öğütücü yıkandığında, öğütücüden şişeye asılı damlaya dokunun. Şapkayı tak ve sonicate hazır olana kadar buzda tut.Çift pipetleme. Santrifüjlemeden sonra, şişede iki katman olacaktır: organik ve sulu katmanlar. Organik tabakayı elde etmek için çift pipetleme tekniği kullanılır.Bunu yapmak için, ampul gevşek bir şekilde konmuş beş santimetrelik kısa bir pipet işaret parmağı ile orta parmak arasında kavranır. Ampulü sıkarken pipeti iki katmandan hafifçe aşağı itin ve kabarcıkların sonuna kadar çıkmasına neden olur. İkinci katmanın altına ulaşıldığında, organik tabakayı pipete çekmeden ampulü çıkarmak için başparmağınızı kullanın.Dokuz santimetrelik bir pipetle ampulü tamamen sıkın. Pipet uzun ucunun beş santimetrelik pipete koyun ve alt tabakayı beş santimetrelik pipetten çıkarın. Bu ekstrakt daha sonra lipid temiz bir şişeye yerleştirilir.Hepsi kaldırılana kadar alt katmanı çıkarmaya devam edin. Lipid temiz şişesinde birikmiş tüm katmanlar. Pipetleri yıkamak.Ampulü dokuz santimetrelik pipetten çıkarın. Özü içinde olan şişeye yerleştirin. Bir pipet dolusu temiz kloroform alın ve pipet yıkanan tırnağı dokunmadan, kloroformu pipet içinin etrafına fışkırtın.Yıkarken boruyu yavaşça çevirin. İkinci bir pipet dolusu kloroform alın ve aynı şeyi pipet dışına yapın. Tüm kloroformun pipetten aşağı ve ekstraksiyon şişesine akmasını sağlamak için.Uzun pipetle bitirdiğinizde, kısa olanı alın ve tekrarlayın, ancak bunu numuneyle şişeye yıkayın. Bir örnek tespit etmek. Bir şırındını kloroformla temizleyin.Bilinen hacmin bir örneğini alın ve şırınnayı numunede durulayın. Örneği tespit etmek istediğiniz miktarın ötesine çekin. Ardından pistonu hava kabarcığı olmamasını sağlamak istediğiniz miktara getirin.0,5 mikrolitre dağıtmak ve damlayı çubuğa dokunmak için düğmeyi kullanın. Bir sonraki damlayı aynı noktaya yerleştirmeden önce kurumaya bırakın. Tüm örnekleri sıcak bir sıcak plakanın ucunda tutulan çubuklar üzerinde bir çizgide tespit edin.Asetona odaklanmak. Numunenin odaklama%100 asetonunda yapılır. Geliştirme tankının altına yaklaşık 70 ml aseton ekleyin.İki rafı alın ve yavaşça geliştirme tankına haline haline alın. Noktanın altı noktanın üst kısmıyla birleşene kadar çözücünün ön kısmının çubuğa tırmanmasını izleyin. Çubukları çıkarın.Yaklaşık beş saniye kurulayın, sonra prosedürü tekrarlayın. Numuneler çok konsantre ise, bu odaklama üçüncü kez yapılabilir. İlk geliştirme sistemi.İlk geliştirme sistemi 98,5 ila 0,5 arasında heksin, etil eter ve formik asitten oluşur. Mezun bir silindiri heksan ile üç kez durulayarak ve atarak başlayın. Mezun silindiri 85 mls'in biraz ötesinde heksan ile doldurun.Daha sonra mezun silindiri 90 mls'e doldurmak için bir pipet ve heksan şişesi kullanın. Daha sonra menisküs tabanını bir ml etil eter verecek olan etil eter kullanarak 91 ml'lik hatta getirin. Hamilton şırındını kullanarak 0,5 ml formik asit ekleyin.Ama önce Hamilton şırındını formik asitle üç kez durulayın, böyle bir kloroformun şırınnadan numuneyi durulamak için kullanılmamasını sağlayın. Toplam 50 mikrolitre için aynı anda iki tam şırınga veya 25 mikrolitre ekleyin. Şırınnadaki metalin aşındırılmasını önlemek için formik asidin şırın otu hemen kloroformla durulaması önemlidir.Hamilton şırınd temiz olduğunda, heksin ve pipet kullanarak çözeltiyi tam olarak 100 mls'ye kadar yapın. Sonra üç veya dört kez kaplayın ve ters çevirin. Geliştirme tankına yaklaşık 30 ml dökün.Kağıdı ıslatmak ve tankı durulamak için bu 30 mls'yi kullanın. Durulama çözeltisini atın. Kalan 70 mls'i geliştirme tankına ekleyin.Geliştirme sistemine raflar ekleniyor. Geliştirme sistemine çubuk eklemek her gelişme için aynıdır. Zamanlayıcının çubukların geliştirileceği süre için ayarlı olduğundan emin olun.Ve sonra rafları alın ve yavaşça tanka diriltin. Çözücü ön örnek noktalara ulaşana kadar izleyin, ardından zamanlayıcıyı başlatın. İkinci geliştirme sistemi.İkinci geliştirme sistemi heksin, etilen ve formik asittir, 79 ila 20 ila bir. Bu yüzden daha önce olduğu gibi, mezun silindiri heksan ile üç kez durulayın. Tam olarak 20 ml eter ve ardından hacmi 21 mls'e getiren bir ml formik asit ekleyin.Daha sonra hacmi heksam ile 100 mls'ye getirin. Şişe pompalarını kullanarak yaklaşık 75 ml hekzan ekleyin. Ve porsiyon için bir pipet kullanın.Birkaç kez kaplayın ve ters çevirin. Kağıdı ıslatmak ve tankı durulamak için geliştirme tankına yaklaşık 30 ml ekleyin. 30 ml'yi atın.Kalan 70'i ekleyin ve çubuklar için hazır olsun. Üçüncü geliştirme sistemi. Üçüncü geliştirme sistemi kloroform, metanol ve kloroform eklenmiş su karışımıdır, 50, 40 ila 10.Mezun silindiri kloroformla üç kez durulayın. Yaklaşık 45 ml kloroform ekleyin. Bir pipet kullanarak, menisküs tabanını 50 ml işaretine getirin.Yaklaşık 38 ml metanol ekleyin. Menisküs tabanını 90 ml çizgisine getirin. Daha sonra son 10 ml'lik suyu kloroform eklenmiş su ile doldurun.Diğer geliştirme sistemlerinde olduğu gibi, bunu üç veya dört kez ters çevirin ve ardından kağıdı ıslatmak için tanka 30 ml dökün. Bu 30 ml'yi atın ve son 70 ml'yi tanka ekleyin. Metanol hazırlanıyor.Derivatizasyon için kullanılan Hilditch çözeltisini yapmak için, herhangi bir kloroformu çıkarmak için metanol ile fazladan üç kez kurutulmuş veya durulanmış lipid temiz temiz hacimsel şişeyi doldurun. Menisküs tabanı hizaya gelene kadar metanol ekleyin. Metanol ölçümünden sonra, 60 santigrat derecede en az 24 saat kurutulan sodyum sülfat ekleyin.Hacim ölçüm şişesinin altını kapleyecek kadar sodyum sülfat ekleyin. Kaplandıktan sonra, iki kez ters çevirin, böylece metanoldeki herhangi bir su sodyum sülfat tarafından emilir. Ters çevirip salladıktan sonra en az beş dakika bekletin.Asit ekleniyor. Metanol beş dakika yerleştikten sonra, tüm sodyum sülfatın hacimsel şişenin dibinde kalmasını sağlamak için yavaşça son cam şişeye deklare edin. Sodyum sülfat genellikle altta kalır, bu nedenle tüm metanol dökülmelidir.Duman kaputunun arkasında sodyum sülfat bulunan hacimselliği kurumaya bırakın. Pipetman kullanarak metanol içine yavaşça sülfürik asit ekleyin. Metanol tükürmesin diye bir seferde birkaç damla ekleyin.Tüm asit eklendikten sonra, kapak ve karıştırmak için hafifçe karıştırın. Çözüm artık türev ürünler için kullanılmaya hazırdır, ancak haftalık olarak yapılmalıdır. Türevleri yapmak.Hacmi bilinen bir miktara getirmiş bir özü şişesinden, döndürün, ardından özün bir kısmını lipid temiz, işaretli 15 ml'lik şişeye çıkarın. Çıkardığınız miktar, Iatroscan'dan alınan numunenin konsantrasyonuna göre belirlenecektir. Örneği çıkarmak için lipid temiz drummond pipet kullanın.Numune çıkarıldıktan sonra, kloroformu tamamen buharlaşmak için 15 ml'lik şişeyi azot altına yerleştirin. Orijinal numune saklanabilir ve dondurucuya iade edilebilir. Numune kurutulduğunda, 1,5 ml dikloromethane veya o günün erken saatlerinde veya iki pipetle yapılan bir pipetli ve üç mlS Hilditch çözeltisi ekleyin.Bu çözelti daha sonra azot altında tutulur, girdaplanır ve bir saat boyunca 100 santigrat derecede bir fırına yerlenmeden önce dört dakika boyunca sonicator'a yerleştirilir. Reaksiyonu durduruyor. 100 Santigrat'ta bir saat ısıtılıp soğuduktan sonra, yavaşça 0,5 ml doymuş sodyum bikarbonat çözeltisi ekleyin.Asit nötralize edildikçe kabarcıklar üretilecektir. Daha sonra 1,5 ml hekzan ekleyin. Özetleyin ve kuvvetlice çalkalayın.İki katmana ayıracak şekilde bekletin. Tüm örnekleri işleyin. Hepsi bittiğinde, ilki bir sonraki adıma hazır olacak.Üst katman kaldırılıyor. Derivatizasyon durdurulduktan ve 15 ml'lik şişede net bir ayırma olduğunda, üst tabakayı çıkarın ve lipid temiz iki ml'lik bir şişeye yerleştirin. Üst tabakanın bir kısmını bırakıp alt tabakadan herhangi birini iki ml'lik şişeye almaktan daha iyidir.Üst katmanın çoğu kaldırıldıktan sonra, çözümün geri kalanı atılabilir. İki ml'deki ekstrakt, yumuşak bir azot akışı altında tamamen buharlaştırılmalıdır. Şişe tamamen kuruduktan sonra, heksin okunabilir ve daha sonra numune sonicated, azot altında tutulmalıdır ve daha sonra GC'ye gitmeye hazırdır. Temsili sonuçlar.Bu rakam, standartımıza ait ham TLC-FIC kromatogramlarını, bu diyeti besleyen bir somon balığından kolza yağı ve karaciğer dokusu ile yapılan bir diyeti göstermektedir. En hızlı büyüyen gıda üretim sektörü olan su ürünleri, yabani kaynaklı balık unu ve balık yağına olan bağımlılığını azaltmak zorundadır. Bitki yağları, su beslemelerindeki balık yağının yerini alacak şekilde araştırılmaktadır.Ve lipid metabolizmasının birincil bölgesi olan karaciğer, analiz için hedeflenmiştir. Triacylglycerollerin karaciğerdeki diyetteki yaygınlığını ve ayrıca membran fosfolipidlerin karaciğerdeki önemini görebiliriz. Bu şekil bir standardın kromatogramlarını göstermektedir.Lipitler ve yerleşim parçacıkları kıyıdan burada toplanmış ve misiddeki lipitler aynı derinliğe yakın toplanmış. Burada kromatogramlar çizim yazılımı ile işlenmiştir. Çok yüksek enerji değerine sahip karbon bakımından zengin olan lipitler, özellikle karbon döngüsü için önemli olan raf alanlarının verimliliğinin önemli bir bileşenidir.Daha fazla yüzey birincil üretimi daha sığ sularda deniz yatağına ulaşır. Küçük mysid'in örneklerimizde en yüksek lipit konsantrasyonuna sahip olduğunu gördük. Balmumu ve steril esterler burada birleştirilir.Ve yüksek düzeyde çoklu doymamış yağ asitlerinin varlığı nedeniyle pik bölünmesi vardır. Chromarod Iatroscan TLC-FID sisteminin küçük örneklerden sinoptik lipid sınıfı veriler sağlamadaki hızlılığı, daha ayrıntılı kromatografik analizler yapmadan önce deniz örneklerini taramak için güçlü bir araç haline getirir. Bu tür analizler genellikle lipid özlerinden bileşen bileşiklerinin salınmasını ve volatiliteyi artırmak için derivatizasyon gerektirir.

determination-of-total-lipid-and-lipid-classes-in-marine-samples

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Biz maya kullanarak anket-tarama elektrosprey iyonizasyon kütle spektrometresi (ESI / MS) gibi çok sayıda lipid türlerinin belirlenmesi için yeni bir nicel lipidomics yöntemi açıklanmaktadır. Bu yöntem, şu anda, lipidler, hassasiyet ve hız çeşitli moleküler formları çözmek için yeteneği lipid tanımlanması ve ölçülmesi için kullanılabilir yöntemleri aşıyor.

Nicel Değerlendirme Elektrosprey İyonizasyon Kütle Spektrometresi kullanarak Maya Lipidome

Biz eğitim için sağlam biyokimyasal ve mikroskobik yöntemler...

Fat Kütle Biyokimyasal ve Yüksek Verimli Mikroskobik Değerlendirme<em&gt; Caenorhabditis Elegans</em

Mekanik hücre bozulması, solvent esaslı lipid ekstraksiyonu, transesterifikasyon ve miktar tayini ve gaz kromatografisi kullanılarak yağ asitlerinin tanımlanması göre mikroalg yağlı asit içeriği ve bileşimin belirlenmesi için bir yöntem tarif edilmektedir. Bir tripentadecanoin iç standart ekstraksiyon ve eksik transesterifikasyon esnasında muhtemel kayıpları telafi etmek için kullanılır.

Mikroalglerden yağlı asit içeriği ve bileşimi analizi

Makale, birçok numuneyle yapılan çalışmalarda toprak mikrobik topluluk yapısını belirlemek için hem toplam lipidlerin hem de gösterge lipidlerinin göreceli olarak bolluğunun karakterize edilmesinde kullanılmak üzere, mikroorganizmaların hücre membranlarından lipidlerin ekstraksiyonu için çaba ve doğruluğu denkleştirirken, verimliliği arttıran bir yöntemi açıklıyor.

Çok Örnekli Deneylerde Toprak Mikroplarını Karakterize Etmek İçin Bir Lipid Ekstraksiyon ve Analiz Metodu

Yani, yağ asitleri asimilasyon tüm molekül ve transfer tüketici doku içine yağ asidi trofik marker yaklaşım değişiklik, engel olmayan ya da küçük küçük toprak omurgasızlar yağ asidi metabolizması bilgi boşlukları tarafından. Isotopologue profil oluşturma trofik etkileşimleri disentangle için değerli bir araç olarak sağlanır.

Yağ asidi 13C profil oluşturma Isotopologue trofik karbon Transfer ve Lipid metabolizması, omurgasız tüketicilerin sağlar

Saccharomyces cerevisiae'dekimajör hücresel lipitleri tanımlamak ve ölçmek için tandem kütle spektrometresi ile birleşen sıvı kromatografi kullanılarak bir protokol sayılmaktadır. Bir maya hücresi içindeki majör lipid sınıflarının nicel bir değerlendirme için açıklanan yöntem çok yönlü, sağlam ve duyarlıdır.

Tandem Kütle Spektrometresi Ile Birleşen Sıvı Kromatografi kullanarak Saccharomyces Cerevisiae'nin Hücresel Lipidomukan Analizi

Av tüfeği kütle spektrometrisine dayalı lipidomikler, çeşitli kemirgen dokularından tek bir ölçümde aynı anda geniş bir lipit sınıfları spektrumunun hassas bir kantitatif görüntüsünü sunar.

Kemirgen Dokularının Av Tüfeği Lipidomikleri

Burada, in vivo kahverengi yağ dokusunda toplam yağ asidi de novo lipogenezinin analizi için döteryum oksit ve gaz kromatografisi kütle spektrometrisi (GCMS) kullanan ucuz bir kantitatif yöntem sunuyoruz.

Kahverengi Yağ Dokusunda De Novo Yağ Asidi Sentezinin Döteryum Oksit Kullanılarak Kantitatif Tayini

Bu protokol, fenol kırmızı iplikler ve sıvı kromatografi-tandem kütle spektrometrisi (LC-MS/MS) tabanlı iş akışı kullanılarak insan gözyaşı sıvısı örnekleri toplamak için benzersiz bir klinik protokolü açıklar; böylece gözyaşı lipidomik profili keşfedilir. Basit metil tert-bütil eter (MTBE)/metanol bifazlı ayırma yöntemi, gözyaşı biyobelirteç keşfi için yüksek geri kazanımla hızlı gözyaşı lipid çıkarımı sağlar.

Biyomarker Keşfinde Hedeflenmemiş Gözyaşı Sıvısı Lipidomikleri için Fenol Kırmızı İplik Tabanlı Örnekleme Prosedürü

Böyle Amerikan ıstakoz balıkçılık gibi sömürülen kabuklu balıkçılık için balıkçılık kaynaklı değişimler, potansiyel çiftleşme başarısında düşüşe neden üreme dinamiklerini etkileyebilir. Bu çalışmanın amacı, fizyolojik veya işlevsel olgun olabilir dişi ıstakoz çiftleşme başarısını tespit etmek için non-invaziv bir yöntem geliştirmek için oldu.

A Noninvaziv Yöntemi<em&gt; In situ</em&gt; Kadın American Istakoz&#39;ların çiftleşme Başarı (Belirlenmesi<em&gt; Homarus americanus</em&gt;)

Öğrenin deniz örneklerinde toplam lipid ve lipid sınıflarının belirlenmesi için TLC-FID kullanarak ekolojik ve biyojeokimyasal araştırmalarda deniz ekosistemlerinin sağlığını değerlendirme yöntemlerini.

Deniz Örneklerinde Toplam Lipid ve Lipid Sınıflarının Belirlenmesi

Daha fazla video keşfet