ÇiftLeşme Bal Arısı Kraliçeleri için Tarımsal Kimyasal Riskin Değerlendirilmesi

Bu protokol, bal arısı kraliçelerini ve işçi bakıcılarını kontrollü, laboratuvar ortamında tarımsal kimyasallara maruz bırakmak ve ilgili yanıtlarını dikkatle izlemek için yöntemler belirleyerek tarımsal kimyasalların bal arısı (Apis mellifera) üremesini nasıl etkilediğinin anlaşılmasını geliştirmek için geliştirilmiştir.

Tarımsal kimyasal maruziyet, en önemli üye olan kraliçeler de dahil olmak üzere bir bal arısı kolonisinin tüm üyeleri üzerinde büyük etkilere sahip olabilir. Ancak yakın zamana kadar, bu etkileri incelemek için çok az araç mevcuttu. Bu teknik, araştırmacıların kraliçeleri sahada karşılaşabilecekleri koşulları simüle eden kontrollü koşullar altında tarımsal kimyasallara maruz bırakmalarını sağlar.

Bal arısı kraliçesi yumurtlama davranışlarını rahatsız etmek oldukça kolaydır, bu nedenle deneyden önce ve deney sırasında işçileri ve kraliçeleri idare ederken dikkatli olmak önemlidir. Bu prosedürleri gösterenler, Amy Floyd ve Eliza Litsey, invaziv Türler ve Tozlayıcı Sağlık Araştırma Birimi, Bal Arısı Araştırma Laboratuvarı'ndaki laboratuvar teknisyenleri olacak. Başlamak için, kapı panellerini yerleştirerek kraliçe izleme kafeslerini veya QMC'leri monte edin, ardından kraliçenin tedavi edilen diyete girmesini ve temas etmesini önlemek için kraliçe dışlayıcıyı besleme odasının üzerindeki besleme odası kapısına yerleştirin.

Tek bir ELP ekleyin. İşçiler kafese eklenene kadar besleyici tüpleri eklemeyin ve dört besleyici deliğini geçici olarak laboratuvar sınıfı bantla örtün. Bal arısı kolonilerinden kaplanmış işçi yavrularını içeren balmumu tarak çerçevelerini topladıktan ve kuluçkaya yatırdıktan sonra, arıların sürünerek çıkmasını önlemek için kapalı arıları böcek bariyeri boyası ile kaplı açık bir kaba fırçalayın.

Her QMC'nin yumurtlama odasına ağırlık olarak en az 50 arı ekleyin. Çeşitli bir genetik havuzun tanıtılmasını sağlamak için, en az üç koloniden benzer sayıda işçi arı elde edin ve QMC'lere arı eklemeden önce karıştırmalarına izin verin.

Alındıktan sonraki 48 saat içinde ticari bir yetiştiriciden satın alınan kraliçeleri kullanın. Kraliçe hala nakliye kafesinin içindeyken, temiz bir plastik torbaya yerleştirin. Daha sonra bir plastik tüpün bir ucunun bir kısmını torbanın içine bir karbondioksit gazı kutusuna yerleştirin ve karbondioksit gazının akmasını sağlamak için kutu vanasını hafifçe açın.

Torba gazla şişirildiğinde, aynı anda bidon vanasını kapatın ve gazı içeri hapsetmek için torbayı kapalı tutun. Çantayı 30 saniye kapalı tutun ya da kraliçe hareket etmeyi bırakana kadar. Kraliçenin bilincinin kapalı olduğu gözlemlendikten sonra sevkiyat kafesini açarak kraliçeyi çıkarın.

Yumurtlama odasının kapısını kısmen açın, bilinçsiz kraliçeyi yavaşça içine yerleştirin ve kapağı kapatın. Her QMC'ye ikinci ELP'yi ekleyin. QMC çerçevesinden ayrılmalarını önlemek ve işçilerin kafesten çıkmasını önlemek için iki ELP'nin üstüne bir laboratuvar bandı yerleştirin.

Kafesleri 34 ila 35 santigrat derecelik istikrarlı çevre koşullarına ve% 50-70 bağıl neme sahip karanlık bir inkübatöre yerleştirin. Tarım kimyasalları ile bağlanmış diyeti uygulamak için, tarım kimyasallarının stok çözeltilerini, ilgi alanlarının istenen son konsantrasyonunu elde etmek için diyete eklenebilecek bir konsantrasyonda aseton gibi uygun bir çözücüde hazırlayın. Tarımsal kimyasal tedavileri bir sakkaroz çözeltisi, ticari bir polen takviyesi veya her ikisinde de uygulayın.

Soğutulmuş veya oda sıcaklığına uygun miktarda stok çözeltisi ekleyerek deneysel diyeti aynı gün kullanıma hazırlayın, % 50 sakkaroz çözeltisi. Orta hızda girdap yaparak iyice karıştırın. Polen takviyeleri için, sakkaroz çözeltisine hesaplanmış miktarda tarımsal kimyasal madde stok çözeltisi ekleyin ve toz takviyesine eklemeden önce iyice girdap ekleyin.

Besleyici tüplerine diyet ekleyin ve besleyici ağırlıklarını QMC'ye yerleştirmeden önce kaydedin. Yumurtlamayı ölçmek için, QMC'leri inkübatörden çıkararak başlayın. Açık ELP'lerin arkalarını inceleyin, yumurta varsa, ilgi tabağının önündeki kapı panelini çıkarın.

Bandı ELP'lerin karşısından çıkarın ve kapı panelini ELP ile QMC içindeki arılar arasında kaydırın. Kapı paneli yerindeyken, ELP'yi çıkarın ve ELP hücrelerinin içindeki yumurta sayısını sayın ve kaydedin. ELP açık hücre tarafının kenarına sert bir yüzeye dokunarak yumurtaları çıkarın.

Yumurtalar dökülürse, QMC'deki boş ELP'yi değiştirin. QMC'nin dışındaki ELP'nin arkasındaki kapı panelini yavaşça çıkarın ve değiştirin. İkinci ELP ile gerektiği gibi tekrarlayın ve bittiğinde teybi QMC boyunca değiştirin.

Gıda tüketimini izlemek için, yiyecekleri her iki günde bir taze hazırlanmış bir diyetle değiştirin. Yumurta üretim izleme faaliyetlerine başlamadan önce yeni besleyici tüpleri hazırlayın ve tartın. Eski tüpleri yenileriyle değiştirin ve eski tüpleri elden çıkarmadan önce tartın.

Diyet tüketimini tahmin etmek için besleyici tüpün ve unconsumed diyetin son ağırlığını aynı tüpün ağırlığıyla karşılaştırın. Besleyicilerin asla boş kalmadığından emin olmak için günde bir kez kontrol edin. Bir besleyici tüpü boşsa veya neredeyse boşsa, çıkarın, yeniden doldurun, tüpün ağırlığını önce ve sonra kaydedin ve farkı QMC için iki günlük diyet tüketim toplamına ekleyin.

QMC deneyi sırasında seçilen bir noktada, daha önce açıklandığı gibi QMC'den taze yumurtlanmış yumurta içeren ELP'leri çıkarın, ancak yumurtaları ELP'den çıkarmayın. ELP'yi önce bir PCR plaka contası ve ardından evrensel bir mikro plaka kapağı ile örtün ve doymuş bir potasyum sülfat çözeltisi ile bir kurutucunun içine yerleştirin. ELP'leri QMC'den çıkardıktan yaklaşık 78 saat sonra tarama oranlarını değerlendirin.

Hücrenin dibindeki C şeklindeki bir larva, başarılı bir kuluçka olayının göstergesidir. QMC'ler fazla işçilerle doldurulmuşsa, fizyolojilerindeki tedavi kaynaklı değişiklikleri değerlendirmek için deney sırasında işçi arıları seçilen bir zaman noktasında örneklendirin. Örneklemeden önce, bir ELP ile QMC'nin iç kısmı arasına bir kapı paneli yerleştirin ve ELP'yi çıkarın.

Dikkatlice, kapı panelini kafesin tabanından yaklaşık 0,5 santimetre kaldırın ve tüy sıklet cımbız kullanarak QMC'nin içinden bir işçi arı çıkarın. Gen ekspresyon analizi için, arıları sıvı nitrojende dondurun ve 80 santigrat derecede saklayın. Toplanan arıyı takip analizi için koruyun ve istenen sayıda numune toplanana kadar bu işlemi tekrarlayın.

Günlük yumurta sayılarındaki diyet imidacloprid tedavi ile ilgili değişiklikler, otomatik regresif korelasyon matrisi ile poisson log lineer genelleştirilmiş tahmin denklemi uygulanarak değerlendirildi. Polen takviyesi ve milyarda imidacloprid içeren sakkaroz göz önüne alındığında QMCs'de günlük yumurta üretimi önemli ölçüde daha düşüktü. Hem sakkaroz hem de polen takviyesinde uygulanan imidacloprid tedavileri için her QMC'de üretilen toplam yumurta sayısı üzerinde doza bağımlı bir etki gözlenmiştir.

QMC'lerde gözlenen en büyük azalma ile milyarda 50 parça imidacloprid beslendi, ardından polen takviyesi artı sakkarozda milyarda 10 parça geldi. Üretilen toplam yumurtalarda kontrol arasında bir fark gözlenmedi ve QPC'ler sadece milyarda imidakloprid ve polen takviyesi başına 10 parça besledi. Polen takviyesi, su ve sakkaroz tüketimi 10 veya 12 gün boyunca her 48 saatte bir kaydedildi.

Deney ilerledikçe günlük sakkaroz tüketimi oranları önemli ölçüde artmıştır, ancak polen takviyesi tüketim oranları azalmıştır. Sadece polen takviyesinde milyarda imidakloprid başına 10 parça uygulandığında daha yüksek polen tüketimi oranları gözlenmiştir. Ve polen takviyesi ve sakkaroz çözeltisinde milyarda 10 veya 50 parça birlikte uygulandığında bu oran azaldı.

Günlük arıların kullanılması, kraliçenin kabulünün sağlanması ve işçinin aşırı yeniden etkinleştirilmesini azaltmak için kritik öneme sahiptir. Ayrıca kritik, kraliçenin dikkatli bir şekilde ele alınması ve kafeslerin istikrarlı bir ortamda tutulmasıdır.