Name: Yeni Zelanda Beyaz Tavşanlarında Anne Bağışıklama Çalışmalarında İntranazal Bağışıklama ve Süt Toplama (Oryctolagus cuniculus) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 13 min
Description: Öğrenin anne bağışıklama çalışmalarında intranazal aşılama ve süt toplama yöntemlerini Oryctolagus cuniculus modelinde. Bu teknikler maternal antikor transferini değerlendirmek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Duke Üniversitesi Laboratuvar Hayvan Kaynakları Bölümü'nü ve hayvancılık ekibini hayvanlara sağladıkları yardım ve büyük bakım için kabul etmek istiyor. Ayrıca, yazarlar Makalenin ses ve video bölümleriyle ilgili yardımlarından dolayı Patoloji Bölümü bünyesindeki PhotoPath ekibini tanımak isterler. Bu çalışma Staats laboratuvarından isteğe bağlı araştırma fonları ile desteklendi.

Tüm prosedürler Duke Üniversitesi IACUC politikalarına uygun olarak onaylandı ve gerçekleştirildi.
NOT: İhtiyaç duyulan malzemeler Malzeme Tablosunda verilmiştir.
1. Tavşan Sedasyonu ve Anestezi
<ol><li>Asepromazin intramüsküler (IM) 1 mg / kg dozda uygulayarak dişi tavşanı (cinsel olarak olgun; yaklaşık 5-30 aylık) yatıştırın. Hayvanın büyüklüğüne bağlı olarak, 25 G iğneli 1 veya 3 mL şırınga kullanın. Apolikal kaslar kas içi enjeksiyonun tercih edilen bölgesidir. NOT: Asepromazin deri altı olarak da uygulanabilir, ancak daha hızlı hareket ettiği ve cilt lezyonlarının görülme sıklığını azalttığı için IM laboratuvar tarafından tercih edilir.</li>
	<li>Asepromazinin etkisini geçmesi için 10-15 dakika bekleyin.</li>
	<li>Bağlı burun konisini hayvanın burnunun üzerine yerleştirerek tavşanı izofluran ile uyuşturun. Buharlaştırıcıyı 4 litreye/dakika oksijene kadar birleştirilmiş %4 izoflurane kadar ayarlayın. Tavşanlar izoflurana karşı yüksek bir nefrete sahiptir, bu nedenle hayvanı maskelerken yeterli kısıtlama gereklidir.</li>
	<li>Pinna, pedal ve/veya palpebral refleks tarafından değerlendirildiği gibi tamamen uyuşturulduktan sonra, gözlerin kurumasını ve ardından kornea ülserasyonunu önlemek için her göze oftalmik yağlayıcı uygulayın.</li>
	<li>Anestezi sırasında refleksleri ve solunumları sürekli izleyin ve yeterli bir anestezi düzlemine ulaşıldıktan sonra izofluran oranını% 1-2'ye düşürün.</li>
</ol>2. İntranazal bağışıklama
<ol><li>Hayvan işlemeden önce bağışıklama çözeltisi hazırlayın.</li>
	<li>Tavşanı yukarıda açıklandığı gibi yatıştırın.</li>
	<li>Laboratuvar üyesi aşıyı vermeye hazır olduğunda ve tavşan yeterli bir anestezi düzlemine girdiğinde, izofluran ve oksijeni kapatın ve burun konisini çıkarın.</li>
	<li>Tavşanı dorsal reumbency'ye yerleştirin ve boynu ve başı, aşıyı uygulayan laboratuvar üyesi tarafından her iki narın kolay erişmesini ve görselleştirilmesini sağlayan yaklaşık 45 ° açıyla destekleyin.</li>
	<li>Pipetleri aşı çözeltisinin en fazla 100 μL'si ile yükleyin ve çözeltiyi her burun deliğinde hızlı bir şekilde uygulayın. Pipet, burun geçişinin medial yönüne doğru açılı yaklaşık 45 ° açıyla tutulmalıdır. NOT: Bağışıklamanın amacı, çözeltinin narların mukozal zarına temas etmesidir, bu nedenle uç narların içine yerlendirilmemelidir, çünkü bu mukozal dokuların aşınmasına veya tahrişine neden olabilir ve nazal olarak uygulanan aşının immünojenikliğini potansiyel olarak etkileyebilir. Aşı hızlı bir şekilde uygulanmalı ve diğer narede aynı şekilde yapılmalıdır.</li>
	<li>Her iki burun pasajında da uygulamadan sonra, aşı çözeltisinin sızıntısını en aza indirmek için tavşanı 30 saniye boyunca dorsal reumbency'de saklayın. NOT: Laboratuvar genellikle burun deliği başına aynı anda en fazla 100 μL uygular. Maksimum toplam 500 μL ile daha büyük bir hacim uygulanacaksa, aşı, bağışıklamalar arasında 30 saniyelik bir dinlenme süresi ile 100 μL aliquots olarak verilebilir ve aşının ek uygulamaları, toplam aşı hacmi teslim edilene kadar her uygulama arasında 30 saniye dinlenme ile tekrarlanabilir.</li>
	<li>Bağışıklamadan sonra, tavşanı iyileşme için ventrum üzerine yerleştirin ve sternal recumbency'yi koruyabilene kadar hayvanı yakından izleyin.</li>
</ol>3. Süt toplama
<ol><li>Emziren tavşanı yukarıda açıklandığı gibi yatıştırın.</li>
	<li>Alkol çubuğu/mendil ile cildi marjinal kulak damarı üzerinde temizleyin.</li>
	<li>1 mL şırınga ve 25 g iğne kullanarak, sütün hayal kırıklığına uğratılmasına neden olmak için marjinal kulak damarı aracılığıyla intravenöz olarak yaklaşık 1-2 IU oksitosin verin. NOT: Düz kas gevşemesi nedeniyle, tavşanın oksitosin yönetimini takiben idrar yapması veya dışkılaması yaygındır.</li>
	<li>Oksitosin uygulamasını takiben, gazlı bez parçası ile enjeksiyon bölgesine basınç uygulayın.</li>
	<li>Anestezi maskesini tavşanın burnu üzerinde tutarken, tavşanı arka ayaklarına destekleyin. NOT: Süt toplama, hayvanla yanal rekumbens olarak da yapılabilir, ancak laboratuvar, tavşanı anestezi maskesiyle dik tutan bir asistanla yumruğuna desteklendiğinde toplamanın daha kolay olduğunu bulur.</li>
	<li>Süt toplamaya hazırlanmak için steril tüpü açın ve meme dokusunu ve ilgili memeleri bulun. Meme uçları tipik olarak son hemşirelikten ıslak kürk ile çevrilidir ve meme dokusu sütle dolduğunda kolayca hissedilebilir.</li>
	<li>Başparmak ve işaret parmağı arasındaki meme ucu ile ilişkili meme dokusunu kavrayın ve meme ucu yönünde glandüler dokuya hafif, masaj basıncı uygulayın. İfade edilen sütü toplamak için toplama tüpünü meme ucunun üzerine yerleştirin. NOT: Oksitosinin etkili olması bazen birkaç dakika sürebilir ve süt üretiminin meme bezleri arasında değiştiği görülmektedir. Süt ifadesi başarılı olmazsa, birkaç dakika bekleyin veya ek meme bezlerine dönün. Tüm tiklerden elde edilen süt aynı şişede toplanabilir. Tipik olarak, emziren bir doe'dan birkaç mililitre süt kolayca toplanabilir.</li>
	<li>Süt toplamayı takiben, izofluran ve oksijeni kapatın ve hayvan sternal rekumbensi koruyabilene kadar yakından izlenirken tavşanın iyileşmesine izin verin.</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Yukarıdaki protokolde açıklanmasa da, tavşanların başarılı bir şekilde yetiştirimesi bu anne modeli ve süt toplanmasına izin vermek için gereklidir. Tavşanlar, bir araştırma ortamında canlı kapakla kolayca yetiştirilir. Buck ile kendi kafeslerinde tutulursa bölgesel ve agresif olabileceği gibi, üreme için buck'ın kafesine aktarılması önerilir. Dişiler 15 dakika sonra alıcı değilse (ısırma veya seslendirmeden kaçma ile belirtildiği gibi), doe kendi kafesine geri yerleştirilmelidir. Tavşan yetiştiriciliği hakkında çevrimiç...

Anne bağışıklama ve antikor transferi çalışmaları, bağışıklık transferinin ilk yolu ve daha sonra yenidoğanlarda ve bebeklerde patojenlerden ve hastalıklardan korunma olduğu için birçok nedenden dolayı paha biçilmezdir. Maternal bağışıklama, bu hassas dönemde belirli patojenlerle ilişkili morbidite ve mortaliteyi azaltarak küresel düzeyde hem anne hem de bebek/çocuk sağlığını olumlu yönde etkileme potansiyeline sahiptir1. Bu stratejinin temel amacı, gebelik boyunca spesifik maternal antikor seviyelerini artırmaktır. Bu antikorlar daha sonra yenidoğan ve bebeğe, bağışıklık sistemleri zorluklara yeterince yanıt verebilecek kadar olgunlaşana kadar enfeksiyonlara karşı koruyacak kadar yeterli seviyelerde aktarılabilir1,2,3. Önceki çalışmalar, doğumda daha yüksek antikor titrelerinin, tetanoz, boğmaç, solunum senksiyal virüsü (RSV), grip ve B grubu streptokok enfeksiyonları1,2,3dahil olmak üzere yenidoğanda çok sayıda farklı bulaşıcı hastalığın tam korunması veya gecikmeli başlangıcı ve azaltılmış şiddeti ile ilişkili olduğunu göstermiştir.
İnsanlarda, anne antikorları plasnta boyunca pasif olarak aktarılır ve ayrıca emzirme yoluyla anne sütü yoluyla aktarılır. Önceki çalışmalar, virüsle enfekte olmuş annelerden insan anne sütündeki HIV'e özgü IgA seviyelerinin virüsün doğum sonrası bulaşmasının azalmasıyla ilişkili olduğunu göstermiştir, bu da anne sütü anti-HIV IgA4için koruyucu bir rol önermektedir. İnsan olmayan primatlarda yapılan çalışmalar, HIV'e karşı bağışıklamanın anne sütünde önemli bir antikor yanıtına neden olabileceğini göstermiştir ve benzer serum IgG yanıtları sistemik ve mukozal bağışıklamadan sonra indüklenmiş olsa da, mukozal bağışıklama süt içinde önemli ölçüde daha yüksek bir IgA yanıtına neden oldu5,6.
Bu çalışmalar için çeviriye uygun bir hayvan modelinin belirlenmesi, pasif antikor transferinin plasentasyon türünü ve mekanizmalarını ve ayrıca antikorların anne sütü yoluyla transferini dikkate almalıdır. Memelilerde, hemochorial (primatlar, kemirgenler ve tavşanlar), endoteliochorial (etoburlar) ve epitelochorial (atlar, domuzlar ve ruminantlar) dahil olmak üzere, materno-fetal arayüzdeki doku tiplerine ve katmanlarına dayanan üç ana plasentasyon türü vardır. Hemokorial plasenta, anne kan kaynağı ve koroyon veya en dış fetal membran arasında doğrudan iletişime izin sağlayan en invaziv tiptir. Trophoblast katmanlarının sayısına bağlı olarak, primatlarda bulunan hemomonochorial plasenta, tavşanlarda hemodikhorial plasenta ve sıçanlarda ve farelerde gözlenen hemotrichorial plasenta dahil olmak üzere hemochorial plasentasyonun çeşitli varyasyonları vardır7. Anne kan akışı ve koroyon arasındaki bu doğrudan temas, gebelik sırasında antikorların plaseta boyunca pasif olarak aktarılmasını sağlar. IgG, insan plaseta8'iönemli ölçüde geçen tek antikor sınıfıdır, oysa IgA, insan anne sütünde bulunan baskın Ig sınıfıdır9. Bilimsel olarak ilgili modellerden sadece primatlar (insanlar dahil), tavşanlar ve kobaylar IgG'yi rahim ve IgA'yı sütte aktarır 10,11. Bu nedenle, tavşan modeli, IgG'nin transplacental transferini ve IgA'nın laktasyonsal transferini kontrol eden insanlardakilerle karşılaştırılabilir faktörleri içerir.
Anne bağışıklığı ve aşı gelişimi için olağanüstü bir model olarak hizmet lanmasının yanı sıra, tavşan ve insan burun boşlukları arasındaki benzerlikler onları intranazal bağışıklama için uygun bir model haline getirir. Tavşan burun boşluğunun hacmi, göreceli vücut kütlesine dayanan kemirgen modellerinden daha insanlara daha benzer12. Ek olarak, Casteleyn ve ark. 12, burun ilişkili lenfoid dokunun (NALT) tavşanda kemirgenlere kıyasla daha hacimli olduğunu göstermiştir. NALT öncelikle ventral burun meatusunun ventral ve ventromedial yönünde ve tavşanlarda nazofarengeal meatus'un lateral ve dorsolateral yönünde bulunurken, kemirgenlerde lenfoid doku sadece nazofarengeal meatus12'ninventral yönü boyunca bulunur. Tavşanlarda, intraepithelial ve lamina propria lenfositlerin ve izole lenfoid foliküllerin yapısı ve konumu insanlara benzer12.
Tavşanı anne ve mukozal bağışıklık için bir model olarak kullanmanın ek avantajları arasında yüksek doğurganlıkları ve nispeten kısa gebelik süreleri bulunur. Büyük auriküler kan damarları, seri koleksiyonlar için büyük hacimli kanlara nispeten kolay erişim sağlar. Antijene özgü antikor yanıt tahlilleri için çeşitli mukozal örnekler toplanabilir, anne sütü13 (emzirirken), mukozal salgılar veya yıkamalar (örneğin, oral14 , 15,16, bronkoalveolar lavaj13,17,18,19, vajinal20,21,22) ve dışkı 20,23,24,25. Süt örnekleri, antijene özgü antikor yanıtlarının varlığını değerlendirmek için emzirme döneminde kolayca toplanabilir. İnsanlar ve fareler için olduğu kadar bol olmasa da, tavşana özgü çalışmalar ve tahliller için çok çeşitli deneysel reaktifler mevcuttur. Bu yazıda, Yeni Zelanda Beyaz tavşanlarında(Oryctolagus cuniculus)intranazal bağışıklama ve süt toplamayı açıklayacağız ve göstereceğiz.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Burun İçi Bağışıklama< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Anestezi Makinesi / Buharlaştırıcı</td><td>Veteriner Ekipman</td><td>901807</td><td></td></tr><tr><td>Hipodermik İğne (25 g)</td><td>Terumo</td><td>07-806-7584</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran (250 mL Şişe)</td><td>Patterson Veteriner</td><td>07-893-1389</td><td>%2-4</td></tr> <tr><td>Luer Kilit Şırıngası (1 mL)</td><td>Air-Tite</td><td>07-892-7410</td><td></td></tr><tr><td>Mukozal Aşı</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Deneysel Aşı</td></tr><tr><td>Burun Konisi</td><td>McCulloch Medical</td><td>07891-1097</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Uçları</td><td>VWR</td><td>53503-290</td><td></td></tr><tr><td>Pipetleyici</td><td>VWR</td><td>89079-962</td><td></td></tr><tr><td>PromAce (Asepromazin maleat)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td>07-893-5734</td><td>1mg/kg IM</td></tr><tr><td>Puralube Steril Oftalmik Merhem</td><td>Dechra</td><td>07-888-2572</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Süt Toplama</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alkol Hazırlama 2 katlı</td><td>Covidien</td><td>07-839-8871</td><td></td></tr><tr><td>Anestezi Makinesi/Buharlaştırıcı</td><td>Veteriner Ekipmanları</td><td>901807</td><td></td></tr><tr><td>Hipodermik İğneler (25 g)</td><td>Terumo</td><td>07-806-7584</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran (250 mL Şişe)</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-893-1389</td><td>2-4%</td></tr><tr><td>Luer Kilit Şırınga (1 mL)</td><td>Air-Tite</td><td>07-892-7410</td><td></td></tr><tr><td>Dokumasız Sünger (4x4)</td><td>Covidien</td><td>07-891-5815</td><td></td></tr><tr><td>Burun Konisi</td><td>McCulloch Medical</td><td>07891-1097</td><td></td></tr><tr><td>PromAce (Asepromazin Maleat)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td>07-893-5734</td><td>1mg/kg IM</td></tr><tr><td>Puralube Steril Oftalmik Merhem</td><td>Dechra</td><td>07-888-2572</td><td></td></tr><tr><td>Steril Konik Flakon (15 mL)</td><td>Falcon</td><td>14-959-49B</td><td></td></tr></tbody></table>

yeni zelanda beyaz tavşanlarında anne bağışıklama Çalışmalarında İntranazal bağışıklama ve süt toplama (oryctolagus cuniculus)

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits (Oryctolagus cuniculus)

Plasentasyon ve insanlarla antikor transferinde benzerlikler nedeniyle, tavşanlar mükemmel bir anne bağışıklama modelidir. Bu araştırma modelinin ek avantajları üreme ve numune toplama kolaylığı, nispeten kısa gebelik süresi ve büyük çöp boyutlarıdır. Yaygın olarak değerlendirilen bağışıklama yolları deri altı, intramüsküler, intranazal ve intradermaldir. Bu bağışıklamalara verilen immünolojik yanıtların kronolojik olarak tespiti için nonterminal örnek toplama, hem barajlardan hem de kitlerden kan toplanması ve emzirmeden elde edilen sütü içerir. Bu yazıda, laboratuvarımızın Yeni Zelanda'da anne bağışıklama çalışmalarında kullandığı teknikleri göstereceğiz Beyaz tavşanlar (Oryctolagus cuniculus), intranazal bağışıklama ve süt toplama dahil.

Tipik bir anne intranazal bağışıklama çalışması tasarımına genel bir bakış Şekil 1'de, bağışıklamalar, üreme, kindling, emzirme ve antikor transferini içeren bir şekilde tasvir edilir. Resimli olmasa da, temel ölçümler için ilk bağışıklamadan önce ve çalışmanın geri kalanı boyunca düzenli aralıklarla kan toplanmalıdır. Kan, hafif sedasyon ve topikal analjezik bir ajan (örneğin, lidokrin% 2.5 ve prilocaine% 2.5 krem) ile merkezi kulak atardamarı yoluyla kolayca elde edilir. Bu örneklerde anti...

Bu makale, intranazal aşıların ve emziren tavşanlardan(Oryctolagus cuniculus)süt toplanmasının, dil bağışıklığını çeviriye uygun bir anne bağışıklama modelinde değerlendirmenin bir yolu olarak tanımlanmaktadır ve göstermektedir.

Yeni Zelanda Beyaz Tavşanlarında Anne Bağışıklama Çalışmalarında İntranazal Bağışıklama ve Süt Toplama (Oryctolagus cuniculus)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of ...

Yenidoğanlarda ve bebeklerde bağışıklık transferinin ve daha sonra patojenlerden ve hastalıklardan korunmanın ilk yolu olduğu için anne bağışıklama ve antikor transferi çalışmaları birçok nedenden dolayı paha biçilmezdir. Plasentasyon ve insanlarla antikor transferinde benzerlikler nedeniyle, tavşanlar mükemmel bir anne bağışıklama modelidir. Bu video makalesinde laboratuvarımızın Yeni Zelanda Beyaz Tavşanlarında anne bağışıklama çalışmalarında kullandığı teknikleri gösteriyoruz, intranazal bağışıklama ve süt toplama dahil.İlk olarak Yeni Zelanda Beyaz Tavşanları'nda bir mukozal maternal bağışıklama çalışması için örnek bir zaman çizelgesi ve olaylar serisini açıklayacağız. Dişi tavşanlar, bu videoda gösterildiği gibi intranazal rota ile bağışıklanır. Çalışmaya bağlı olarak, aşı bir takviye gerektirebilir veya kas içi bağışıklama gibi ek bir yoldan verilmesi gerekebilir.Tasvir olmamakla birlikte, temel ölçümler için ilk bağışıklamadan önce ve çalışmanın geri kalanı boyunca düzenli aralıklarla kan toplanmalıdır. Kan, hafif sedasyon ve topikal analjezik bir ajan ile merkezi kulak atardamarı tarafından kolayca elde edilir. Bu örneklerde antijene özgü IgG seviyelerinin varlığı ölçülebilir.Tavşanlar daha sonra yetiştirilir. Bu çalışmalar için daha yüksek bir gebelik oranı sağlamak için satıcılardan kanıtlanmış yetiştiriciler satın almayı tercih ediyoruz. Bağışıklama zaman çizelgesine bağlı olarak, tavşanlar hamilelik boyunca ek bağışıklamalar alabilir.Antijene özgü IgG, kitlere transentsel olarak aktarılır. Yaklaşık 30 ila 32 gün sonra üreme sonrası hamileler kindle olacaktır. İlk birkaç gün boyunca kitlerin kullanımını sınırlandırmanızı öneririz.Transenktif olarak aktarılan antijene özgü IgG seviyelerini değerlendirmek için kitlerden kan örnekleri toplanabilir. Erken antijene özgü antikor seviyelerini değerlendirmek için doğum anında veya doğum zamanına yakın az sayıda kitten kan toplanabilir. Çok çeşitli besinlere ek olarak, kitler emzirirken emziren doe'dan antijene özgü IgA alır.Kitler tipik olarak dört ila sekiz haftalıkken tozlanır. Sütten sütten önce, bu videoda gösterildiği gibi emzirmeden kolayca toplanabilir. Toplanan süt numuneleri daha sonra antijene özgü IgA'nın tespiti için işlenir.Çalışmaya bağlı olarak, kitlere aşılar ve bir takviye uygulanabilir ve çok erken yaşlarda kitlerden lateral saphenöz damar kullanılarak seri kan örnekleri toplanabilir. Şimdi Yeni Zelanda Beyaz Tavşanlar Protokolü'nde intranazal bağışıklama ve süt toplamayı göstereceğiz. Tüm prosedürler Duke Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi politikalarına uygun olarak onaylanmış ve gerçek gerçekleştirildi.İntranazal Bağışıklama. Gerekli Malzemeler: Asepromazin, şırınga ve iğne, oftalmik yağlayıcı, Isoflurane, burun konisi, pipet ve pipet uçları, mukozal aşı. Hayvan elleçlemeden önce bağışıklama çözeltisini hazırlayın.Tavşanlar intramüsküler olarak kilogram başına bir miligram Aseterin ile yatıştırılır ve burun konisi kullanılarak Isoflurane ile uyuşturulur. Göz kapağı refleksi ile değerlendirildiği gibi tamamen uyuşturulduktan sonra, gözlerin kurumasını ve ardından kornea ülserasyonunu önlemek için her göze bir oftalmik yağlayıcı eklenir. Laboratuvar üyesi aşıyı vermeye hazır olduğunda ve tavşan yeterli bir anestezi düzlemine girdiğinde, izofluran ve oksijeni kapatın ve burun konisini çıkarın.Tavşanı dorsal reumbency'ye yerleştirin ve boynu ve başı, aşıyı uygulayan laboratuvar üyesi tarafından her iki alar'ın kolay erişmesini ve görselleştirilmesini sağlayan yaklaşık 45 derecelik bir açıyla destekleyin. Pipetleri aşı çözeltisinin 100 mikrolitresinden fazla olmadan yükleyin ve çözeltiyi hızlı bir şekilde bir burun deliğine uygulayın ve ikinci burun deliği prosedürünü tekrarlayın. Pipet yaklaşık 45 derecelik bir açıyla tutulmalıdır.Burun pasajının medial yönüne doğru açı. Bağışıklamanın amacı, çözeltinin narların mukozal zarlarına temas etmesidir. Bu nedenle, mukozal dokuların aşınmasına veya tahrişine neden olabileceğinden ve nazal olarak uygulanan aşının immünojenikliğini potansiyel olarak etkileyebileceğinden, uç narların içine yerlendirilmemelidir.Aşı hızlı bir şekilde uygulanmalı ve diğer burun deliğinde aynı şekilde yapılmalıdır. Her iki burun pasajında da uygulamadan sonra, tavşan aşı çözeltisinin sızıntısını en aza indirmek için 30 saniye boyunca dorsal rekumbency tutulur. Laboratuvar genellikle burun deliği başına aynı anda en fazla 100 mikrolitre uygular.Maksimum toplam hacim 500 mikrolitre ile daha büyük bir hacim uygulanacaksa, aşı bağışıklamalar arasında 30 saniye dinlenme süresi ile 100 mikrolitre aliquots olarak verilebilir. Ve aşının ek uygulamaları, toplam aşı hacmi teslim edilene kadar her uygulama arasında 30 saniye dinlenme ile tekrarlanır. Bağışıklamadan sonra, tavşanı iyileşme için ventrum üzerine yerleştirin ve sternal recumbency'yi koruyabilene kadar hayvanı yakından izleyin.Bazı durumlarda, aşı formülasyonu burun boşluğuna tamamen teslim edilmeyebilir ve aşı formülasyonunun bir kısmı narların dış kısmında kalabilir. Bu durumda, burun boşluğuna düzgün bir şekilde teslim edilen aşının tam hacmi açık olmadığından, deneye tanımlanmamış bir değişken ekleyeceğinden ek aşı materyalinin yeniden kullanılmasını önermeyin. Aşı formülasyonunun nares'e eksiksiz ve tutarlı bir şekilde ulaştırılmasını sağlayan bir aşı dağıtım tekniği kullanmak önemlidir.Süt toplama. Gerekli malzemeler: Asepromazin, şırıngalar ve iğneler, alkol çubuğu, gazlı bez, oftalmik yağlayıcı, Isoflurane, burun konisi, oksitosin ve bir koleksiyon şişesi. Tavşanlar intramüsküler olarak kilogram başına bir miligram Aseterin ile yatıştırılır ve burun konisi kullanılarak Isoflurane ile uyuşturulur.Göz kapağı refleksi ile değerlendirildiği gibi tamamen uyuşturulduktan sonra, gözlerin kurumasını ve ardından kornea ülserasyonunu önlemek için her göze bir oftalmik yağlayıcı uygulanır. Alkol çubuğu ile marjinal kulak damarı üzerindeki cildi temizleyin. Bir mil şırınga ve 25 kalibre iğne kullanarak, sütün hayal kırıklığına uğratılmasını sağlamak için marjinal kulak damarı tarafından intravenöz olarak yaklaşık bir ila iki uluslararası oksitosin ünitesi verin.Düz kas gevşemesi nedeniyle, tavşanın oksitosin yönetimini takiben idrar yapması veya dışkılaması yaygındır. Oksitosin uygulamasını takiben, hemostaz sağlamak için enjeksiyon bölgesine bir parça gazlı bezle basınç uygulayın. Anestezi maskesini veya burun konisini tavşanın burnu üzerinde tutarken, tavşanı arka mahallelerine destekleyin.Yan not olarak, süt toplama hayvanla yanal rekumbens olarak da yapılabilir, ancak laboratuvar, tavşanın üzerine, tavşanı anestezi maskesiyle dik tutan bir asistanla desteklendiğinde toplamanın daha kolay olduğunu bulur. Süt toplamaya hazırlanmak için steril tüpü açın ve meme dokusunu ve ilgili memeleri bulun. Tavşanlar genellikle dört ila beş çift meme bezine sahiptir.Meme uçları tipik olarak son hemşirelikten kaynaklanan ıslak kürklerle çevrilidir ve meme dokusu sütle dolduğunda kolayca hissedilebilir. Başparmak ve işaret parmağı arasındaki meme ucu ile ilişkili meme dokusunu kavrayın ve meme ucu yönünde glandüler dokuya hafif bir masaj basıncı uygulayın. İfade edilen sütü toplamak için toplama tüpünü meme ucunun üzerine yerleştirin.Oksitosinin etkili olması bazen birkaç dakika sürebilir ve süt üretiminin meme bezleri arasında değiştiği görülmektedir. Süt ifadesi başarılı olmazsa, birkaç dakika bekleyin veya ek bir meme bezine dönün. Tüm tüttürüllerden süt aynı aşağılıkta toplanabilir.Tipik olarak birkaç mililitre süt emziren bir doe'dan kolayca toplanabilir. İstenilen süt hacmi toplandıktan sonra, Isoflurane ve oksijeni kapatın ve burun konisini tavşandan çıkarın ve hayvan sternal rekumbensi koruyabilene kadar yakından izlenirken tavşanın iyileşmesine izin verin. Temsili Sonuçlar.Şekil bir. Anne çalışmaları için, hamileliğin mümkün olduğunca erken belirlenmesi, doe'nun yeniden yetiştirilmesine gerek olmadığını doğrulamak için yararlıdır. Gebelik tespiti için seçenekler arasında palpasyon, ultrason, radyografi, kilo alımı ve insülin büyüme faktörlerinin ve progesteron ölçümleri gibi moleküler teknikler bulunur.Tavşanlarda hamileliğin sürdürülmesi için yeterli progesteron seviyeleri gereklidir. Bu nedenle, çeşitli çalışmalar hamile tavşanlarda progesteron seviyelerini de değerlendirmiş ve özellikle orta gebelik çevresindeki organogenez sırasında hamile olmayan tavşanlara göre yüksek seviyeler göstermiştir. Şekil 1'de gösterildiği gibi, hamile tavşanlarda, bir dolar ile çiftleşmeler doğrulandıktan sonra bile hamile olmayan tavşanlara kıyasla yüksek progesteron seviyeleri tespit edilebilir.Serum progesteron düzeyleri otomatik bir chemiluminescent tahlili kullanılarak ölçüldü. Şekil 2. Gebelik sırasında transentasyonel olarak transfer edilen antijene özgü IgG, Elisa tarafından kitlerin serumunda ölçülebilir.Erken antijene özgü antikor seviyelerini değerlendirmek için doğum anında veya doğum zamanına yakın az sayıda kitten kan toplanabilir. Kitler yaşlandıkça ve boyut arttıkça seri kan toplama teknik olarak çok daha kolaydır. Şekil 2'de gösterildiği gibi, kitlerdeki antijene özgü IgG'nin serum seviyeleri ölçülebilir ve anne seviyeleriyle karşılaştırılabilir.Doğumla transfer edilen IgG seviyeleri doğumda daha yüksektir ve zamanla azalır. Şekil Üç. Tavşan sütü bu videoda gösterildiği gibi toplanabilir ve Elisa tarafından toplam ve antijene özgü antikor seviyelerini ölçmek için işlenebilir.Bu şekilde gösterildiği gibi, IgA, anne sütü içindeki kitlere pasif transfer için mevcut olan toplam antikorların önemli bir kısmını oluşturur. Hem IgA hem de IgG seviyeleri IgM.Summary'den oldukça yüksektir. Bu video makalesi, intranazal aşıların ve emziren tavşanlardan süt toplanmasının, dil içi olarak uygun bir anne bağışıklama modelinde mukozal bağışıklığı değerlendirmenin bir yolu olarak tanımlanmaktadır ve göstermektedir.Tasvir edilen, bağışıklamalar, üreme, kindling, emzirme ve antikor transferini içeren tipik bir anne intranazal bağışıklama çalışma tasarımı için özet bir görüntüdür.

intranasal-immunization-milk-collection-studies-maternal-immunization

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu videoda, bir tavşanın meme kanalına ilgilenilen bir solüsyonun uygulanması tekniğini açıklıyoruz ve kontrast maddelerin yüksek çözünürlüklü ultrason görüntülemesi ile verildiğini doğruluyoruz.

Tavşan İntraduktal Enjeksiyonu: İlgilenilen Çözeltinin Tavşan Meme Bezine Lokalize Verilmesi

Bu videoda, bir lenfosit mitojeni olan Concanavalin A'nın kuru göz hastalığını indüklemek için bir tavşanın gözünün inferior lakrimal bezine aşılanmasını gösteriyoruz. Ultrason veya sonogram görüntüleri, enjeksiyon bölgesinin kesin konumunu yönlendirmek ve ayrıca aşılamanın başarısını doğrulamak için kullanılır.

Ultrason Kılavuzluğunda Concanavalin İnferior Lakrimal Beze Bir Enjeksiyon: Tavşan Modelinde Kuru Göz Hastalığını İndüklemek İçin İnferior Lakrimal Bezi Concanavalin A ile Aşılama Tekniği

Bu video, farelerde intranazal BCG bağışıklamasını gösterir, hem doğuştan gelen hem de adaptif bağışıklık tepkilerini aktive eder, akciğerde yerleşik bellek T hücrelerinin ve efektör B hücrelerinin gelişmesine yol açar ve böylece Mycobacterium enfeksiyonlarına karşı korumayı artırır.

Bir Fare Modelinde BCG ile İntranazal Bağışıklama

Gen hedefleme araçları son gelişme nakavtla üretimi (KO) tavşan mümkün kılar. Bu çalışmada, biz Çinko Parmak nükleazlardır (ZFN) kullanarak beş Apolipoprotein (Apo) C-III KO tavşan oluşturulur. Bu çalışma ZFN KO tavşan üretmek için son derece verimli bir yöntem olduğunu göstermiştir.

Çinko Finger nükleazlar kullanılması Apolipoprotein C-III Knockout Tavşanlar Üretimi

Hayvan modellerinden süt toplanması çeşitli araştırma yollarını kolaylaştırır: pasif bağışıklığı anlamak, dikey bulaşmadan sorumlu patojenleri tanımlamak ve hatta transgenik farelerin kullanımı yoluyla insan anne sütünde bulunan proteinlerin ticari üretimi. Burada farelerde ve Reeves'in munçak geyiğinde süt toplama için basit bir yöntem gösteriyoruz.

Fareler ve Reeves &#39;munçağı Deer için Süt Toplama Yöntemleri

Aşıların nasıl çalıştığı hakkında genel bir bilgi eksikliği var. Burada, dendritik hücrelere ve T hücresi bağışıklığına özel olarak odaklanarak, aşılara karşı erken konak bağışıklık tepkileri hakkında fikir edinmek için ters genetik ve kemik iliği kimerik farelerin birlikte kullanılmasını öneriyoruz.

Kimerik fare modellerinde Rekombinant Grip aşıların burun içinde yoluyla mukozal bağışıklık Okumak

Burada, reaktiflerin intraduktal enjeksiyon yoluyla tavşan meme bezine lokalize olarak verilmesi için bir teknik açıklıyoruz. Ek olarak, kontrast maddelerin yüksek çözünürlüklü ultrason görüntülemesi ile görselleştirme ve teslimatın onaylanması için bir protokol açıklıyoruz.

Rabbit Meme Bezi için İntraduktal Teslimat

Avrupa tavşan sosyal bir tür olmasına rağmen sosyal konut onları zor olabilir. Bu nedenle, davranışları kapsamlı bir anlayış ve sosyal yapıları çifti yer alan laboratuvar tavşan olmalı. Burada eşleştirme yöntemleri, türlerin tipik hiyerarşi kuruluş davranışları ve uygun müdahale emri davranışları tanımlamak için bir iletişim kuralı mevcut.

Eşleştirme yöntemleri ve tavşan beyaz çift bakım Yeni Zelanda (dikkatli European) üzerinden izleme, davranış Ethogram ve müdahaleler

Alpaka üzerinden tek etki alanı antikor üretimi için bir yöntem, aşılama, kan toplanması, B-hücre izolasyon ve seçimi de dahil olmak üzere tanımlanır.

Alpaka (Lama Paços) Protein antijenleri ve antijen spesifik tek etki alanı antikor üretimi ile bağışıklama

Burada etkinliği ve ana bilgisayar bağışıklık yanıtı aşı vivo içinde değerlendirilmesi için zarif bir iletişim kuralı mevcut. Bu iletişim kuralı eğitim viral, bakteriyel aşı modelleri veya paraziter patojenler için adapte edilebilir.

Ana bilgisayar-patojen yanıt ve aşı etkinliği farelerde değerlendirilmesi

Bu protokol, embriyo transferli ve genetiği değiştirilmiş tavşanlar için yenidoğan tavşan ölümlerini azaltmayı ve gen düzenlemeli tavşanların hazırlama verimliliğini artırmayı amaçlayan bir hamilelik ve besleme yönetimi tekniğini tanımlar.

Embriyo Transferi Yapılan ve Genetiği Değiştirilmiş Tavşanlarda Gebelik ve Hemşirelik Yönetimi

Öğrenin anne bağışıklama çalışmalarında intranazal aşılama ve süt toplama yöntemlerini Oryctolagus cuniculus modelinde. Bu teknikler maternal antikor transferini değerlendirmek için kullanılır.

Yeni Zelanda Beyaz Tavşanlarında Anne Bağışıklama Çalışmalarında İntranazal Bağışıklama ve Süt Toplama (Oryctolagus cuniculus)

Daha fazla video keşfet