Name: Farelerden Endolenfatik Kesenin Diseksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 34 s
Description: Keşfedin, fare iç kulak endolenfatik kesesinin hassas mikrodiseksiyon protokolünü. Bu yöntem, SLC26A4 immünohistokimyası ve tek hücreli RNA dizileme için doku izolasyonunu sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Dror, A. A., Brownstein, Z., Avraham, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+human+and+mouse+genetics+reveals+pendrin+function+in+hearing+and+deafness%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Integration of human and mouse genetics reveals pendrin function in hearing and deafness.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 28 (3), 535-544 (2011).</li>
<li>Reardon, W., CF, O. M., Trembath, R., Jan, H., Phelps, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enlarged+vestibular+aqueduct%3A+a+radiological+marker+of+pendred+syndrome%2C+and+mutation+of+the+PDS+gene%5BTitle%5D)+AND+%22QJM%22%5BJournal%5D)">Enlarged vestibular aqueduct: a radiological marker of pendred syndrome, and mutation of the PDS gene.</a> QJM. 93 (2), 99-104 (2000).</li>
<li>Griffith, A. J., Wangemann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hearing+loss+associated+with+enlargement+of+the+vestibular+aqueduct%3A+mechanistic+insights+from+clinical+phenotypes%2C+genotypes%2C+and+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Hearing loss associated with enlargement of the vestibular aqueduct: mechanistic insights from clinical phenotypes, genotypes, and mouse models.</a> Hearing Research. 281 (1-2), 11-17 (2011).</li>
<li>Gurkov, R., Pyyko, I., Zou, J., Kentala, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+Meniere%27s+disease%3F+A+contemporary+re-evaluation+of+endolymphatic+hydrops%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">What is Meniere's disease? A contemporary re-evaluation of endolymphatic hydrops.</a> Journal of Neurology. 263, Suppl 1 71-81 (2016).</li>
<li>Eckhard, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water+channel+proteins+in+the+inner+ear+and+their+link+to+hearing+impairment+and+deafness%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Aspects+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Water channel proteins in the inner ear and their link to hearing impairment and deafness.</a> Molecular Aspects of Medicine. 33 (5-6), 612-637 (2012).</li>
<li>Choi, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+enlarged+vestibular+aqueducts+defines+temporal+requirement+of+Slc26a4+expression+for+hearing+acquisition%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mouse model of enlarged vestibular aqueducts defines temporal requirement of Slc26a4 expression for hearing acquisition.</a> Journal of Clinical Investigation. 121 (11), 4516-4525 (2011).</li>
<li>Miyashita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+FXYD6+in+the+endolymphatic+sac+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Presence of FXYD6 in the endolymphatic sac epithelia.</a> Neuroscience Letters. 513 (1), 47-50 (2012).</li>
<li>Royaux, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+and+functional+studies+of+pendrin+in+the+mouse+inner+ear+provide+insight+about+the+etiology+of+deafness+in+pendred+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Association+for+Research+in+Otolaryngology%22%5BJournal%5D)">Localization and functional studies of pendrin in the mouse inner ear provide insight about the etiology of deafness in pendred syndrome.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 4 (3), 394-404 (2003).</li>
<li>Kim, H. M., Wangemann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell+stretching+and+luminal+acidification+lead+to+a+retarded+development+of+stria+vascularis+and+deafness+in+mice+lacking+pendrin%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell stretching and luminal acidification lead to a retarded development of stria vascularis and deafness in mice lacking pendrin.</a> PLoS One. 6 (3), 17949(2011).</li>
<li>Dahlmann, A., von During, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endolymphatic+duct+and+sac+of+the+rat%3A+a+histological%2C+ultrastructural%2C+and+immunocytochemical+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">The endolymphatic duct and sac of the rat: a histological, ultrastructural, and immunocytochemical investigation.</a> Cell and Tissue Research. 282 (2), 277-289 (1995).</li>
<li>Everett, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+disruption+of+mouse+Pds+provides+insight+about+the+inner-ear+defects+encountered+in+Pendred+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Targeted disruption of mouse Pds provides insight about the inner-ear defects encountered in Pendred syndrome.</a> Human Molecular Genetics. 10 (2), 153-161 (2001).</li>
<li>Miller, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+V-ATPase+B1-subunit+promoter+drives+expression+of+Cre+recombinase+in+intercalated+cells+of+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">The V-ATPase B1-subunit promoter drives expression of Cre recombinase in intercalated cells of the kidney.</a> Kidney International. 75 (4), 435-439 (2009).</li>
<li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neuroscience. 13 (1), 133-140 (2010).</li>
<li>Wang, L., Jiang, H., Brigande, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+to+the+developing+mouse+inner+ear+by+in+vivo+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Gene transfer to the developing mouse inner ear by in vivo electroporation.</a> Journal of Visualized Experiments. (64), e3643(2012).</li>
<li>Currle, D. S., Hu, J. S., Kolski-Andreaco, A., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+mouse+neural+stem+cell+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Culture of mouse neural stem cell precursors.</a> Journal of Visualized Experiments. (2), 152(2007).</li>
<li>Honda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+architecture+underlying+fluid+absorption+by+the+developing+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Molecular architecture underlying fluid absorption by the developing inner ear.</a> Elife. 6, (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>EDTA 0.5 M</td><td>Crystalgen</td><td>221-057</td><td></td></tr><tr><td>27G x 13mm BD ile 1 mL TUBERCULIN şırınga</td><td></td><td>309623</td><td></td></tr><tr><td>9 kuyulu spot cam plaka</td><td>Pyrex</td><td>13-748B</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555-konjuge phalloidin</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A34055</td><td></td></tr><tr><td>Arter ve nbsp; Makas&nbsp;- Top Ucu</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14080-11</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A3059</td><td></td></tr><tr><td>Gelen ışıkta görüntü yakalamak için kamera</td><td>Leica</td><td>DFC 495</td><td></td></tr><tr><td>Floresan görüntüler yakalamak için kamera</td><td>Leica</td><td>DFC 7000 GT</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj tüpleri 15 mL</td><td>Corning</td><td>430053</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj tüpleri 50 mL</td><td>Corning</td><td>430829</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz / Dispase</td><td>Roche</td><td>10269638001</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>Kapak Camı</td><td>Corning</td><td>2940-223</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #4 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11241-30</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #55 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>Ekstra İnce Bonn Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>Alternatif: Ekstra İnce Mikro Diseksiyon Makasları; Düz; Keskin noktalar; 20 mm bıçak uzunluğu; 3 1/2" Toplam Uzunluk</td><td>Roboz</td><td>RS-5880</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-tavşan Alexa Fluor 488-konjuge ikincil antikor</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A11034</td><td></td></tr><tr><td>MicroSlides Superfrost</td><td>VWR</td><td>48311-702</td><td></td></tr><tr><td>Orbital çalkalayıcı, örneğin Mini Çalkalayıcı</td><td>Daigger</td><td>980275</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit (PFA) %16 Sulu Çözelti</td><td>Elektron Mikroskobu Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (10X) pH 7.4</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AM9624</td><td></td></tr><tr>DAPI <td>ThermoFisher Scientific</td><td>P36931</td><td></td>Tavşan anti-Pendrin antikorları ile<td>ProLong Altın Antifade Mountant</td></tr><tr><td></td><td>Kurum</td><td></td> İçi <td>RRID:AB_2713943, PB826 (Choi et al., 2011)</td></tr><tr><td>Halka Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11106-09</td><td></td></tr><tr><td>Sallanan çalkalayıcı, örneğin GyroMini</td><td>Labnet</td><td>S0500</td><td></td></tr><tr><td>PlanApo 1.0x objektif ile donatılmış stereomikroskop</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik Tek Kenar Bıçakları, .009"</td><td>GEM Personna</td><td>62-0176</td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü kabı 60 mm</td><td>Falcon</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Şeffaf oje</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>ACROS Organik</td><td>32737-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerden endolenfatik kesenin diseksiyonu

Dissection of the Endolymphatic Sac from Mice

Doğum sonrası 5. gün (P5) faresinden alınan vahşi tip bir endolenfatik kesenin bu mikrodiseksiyonunun her adımı, ilgili videoda ayrıntılı olarak açıklanmıştır ve bu diseksiyonun ve endolenfatik kesenin açılmasının temel adımlarının anlık görüntüleri Şekil 1 ve Şekil 2'de sunulmuştur. 
Bu protokolü takiben embriyonik gün 16.5 (E16.5), P5 ve P30'da tdTomato floresan ile endolenfatik kesenin diseksiyonlarının temsili sonuçları Şekil 3'te ve Ek Şekil 1 ve Ek Şekil 2'de sunulmuştur. Floresanslı bir diseksiyon mikroskobu kullanılarak, Cre ekspresyonu raporlayıcısının varlığında transgen Tg (ATP6V1B1-Cre) taşıyan farelerde beynin çıkarılmasından sonra endolenfatik kese kafatasında kolayca görüntülenebilir: Ai9 (LSL-RCL-tdT) (bkz. Şekil 3A-B ve diseksiyonun farklı aşamalarında endolenfatik kesenin olay ışığında ve tdTomato floresansında yakalanan görüntüler için Ek Şekil 1). Bu farelerde Cre, endolenfatik kese ve kanal boyunca hücrelerde bir mozaik olarak ifade edilir (Şekil 3, ayrıca floresan raportör olmadan endolenfatik kesenin görselleştirilmesi için Ek Şekil 2'ye bakınız). Bu raportörün ekspresyonu, bu epitelin iki hücre tipinden biri olan endolenfatik kese16'nın mitokondri açısından zengin hücreleriyle sınırlı olan Atp6v1b1'in endojen ekspresyonu için spesifik olmasa da (Şekil 5E), endolenfatik kesenin tanımlanması ve diseksiyonu için yardımcı bir yardımcıdır.
Vestibüler su kemerinin genişletilmesi için bir fare modelinden diseke edilen iç kulaklar Şekil 4'te sunulmuştur. Kontrol çöpleriyle karşılaştırıldığında, SLC26A4 eksikliği olan farelerin endolenfatik keseleri ve kanalları (pendrin) genişler.
Konjonktifli dokulu ve konjonktürel dokusuz intakt endolenfatik kesenin immünohistokimyasının temsili görüntüleri Şekil 5'te gösterilmiştir. P5 yabani tip bir farenin açılmış endolenfatik kesesinin immünohistokimya sonuçları da sunulmuştur (Şekil 5F-G). Endolenfatik kese, lümen endolenfini içeren, kese şeklinde bir yapıda katlanmış tek bir epitel tabakasından oluşur. Bu epitel, mitokondriden zengin hücreler ve ribozomdan zengin hücreler olmak üzere iki hücre tipinden oluşur (Şekil 5E). Tüm montajlı bir endolenfatik kese, endolenf artık mevcut olmadığı için düzleşecektir. Kese, iç içe geçmiş iki epitel tabakası olarak görünecek ve bu epitelde eksprese edilen proteinlerin hücre altı lokalizasyonunu belirlemeyi zorlaştıracaktır. Endolenfatik kesenin açılmasıyla, tek katmanlı epitel kolayca görüntülenebilir ve ilgilenilen proteinlerin endolenfatik kese lümenine göre nispi dağılımı daha kesin olarak belirlenebilir. Bu proteinlerin potansiyel bir apikal (endolenfin olacağı luminal) ve bazal zenginleşmesi daha doğru bir şekilde belirlenebilir. Örnek olarak, SLC26A4 mitokondri açısından zengin hücrelerin apikal tarafında zenginleştirilmiştir (Şekil 5F).
<img alt="İç kulak diseksiyon diyagramları, koklea ve sinir detaylı haritalama, anatomik çalışma kurgusu." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62375/62375fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Şekil 1. Doğum sonrası 5. günde vahşi tip bir farenin endolenfatik kesesinin tam montajlı diseksiyonu (P5). (A) Gelişmiş bir fare iç kulağının zarlı labirentinin şeması (sağda). Endolenfatik kesenin yeri ve koklea ve vestibüler yapılar belirtilir. Bu rakam Honda ve ark.16'dan değiştirilmiştir. (B) Sol hemi-kafatasını gösteren orta sagital bölüm. Endolenfatik kesenin yeri belirtilir (ok). (O, oksipital; F, önden) (C) Temporal kemiğin skuamöz kısmı ile birlikte otik kapsül. (D) Panel C'deki noktalı kutunun üzerine yerleştirilmiş önemli yer işaretleri (ES, endolenfatik kese; ED, endolenfatik kanal; VA, vestibüler su kemeri; ASC, ön yarım daire kanalı; PSC, posterior yarım daire kanalı; CC, ortak crus; SS, sigmoid sinüs) (E) Endolenfatik kese boyunca panel D üzerindeki sürekli beyaz çizgi ile birlikte enine kesitin şematik gösterimi. Endolenfatik kesenin proksimal tarafı, endolenfatik kanal ile birlikte vestibüler su kemeri adı verilen kemikli bir kanal ile kaplıdır. Distal tarafta, konjonktif, doku (BT) ile çevrili endolenfatik kese, kemikli labirentin dışına doğru uzanır ve çıkıntı yapar ve temporal kemiğin (TB) skuamöz kısmı ile dura mater (DM) ve sigmoid sinüs arasına sıkışır. (F) Endolenfatik kesenin etrafını kesmek için ince bir iğne kullanılır (panel D'deki noktalı sarı çizgileri takip ederek). (G) Preparat, dokuyu yıldız işaretiyle gösterilen konumda tutarak (*, panel E'de de gösterilmiştir) ve soyularak temporal kemikten dikkatlice çıkarılır. (H) Çevreleyen dokularla birlikte izole edilmiş bir bütün endolenfatik kese. (I) Bu izole endolenfatik kesenin çevre dokularla birlikte şematik versiyonu. (J) Çevreleyen dokular olmadan izole edilmiş endolenfatik kese. Ölçek çubukları: 2 mm (B), 1 mm (J). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/62375fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Diseksiyon serileri, özofagus maruziyeti, anatomik diyagramlar, doku örnekleri, kullanılan cerrahi aletler." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62375/62375fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> Şekil 2. P5 vahşi tip bir farenin açılmış endolenfatik kesesinin diseksiyonu. (A) Adım 2.4'te, vestibüler su kemeri üzerindeki insizyon hattı, endolenfatik kese lümenine bir insizyon yapmak için hafifçe öne (kırmızı noktalı çizgi) yerleştirilir. (B) Preparatın gövde kısmını tutun, lümene 27 gauge bir iğne sokun ve endolenfatik kesesi iki tabaka halinde kesmek için hareket ettirin. (C) Panel B'nin şematik gösterimi. (D) Her yaprağın kenarını forseps ile tutun ve birbirinden ayırın. (E) Panel D'nin şematik gösterimi. (F) Endolenfatik kese, epitel ve çevresindeki dokular dahil olmak üzere iki tabakaya ayrılır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/62375fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Fare beyin gelişimi, floresan mikroskobu, E16.5 ila P30 aşamaları, nöral doku görüntüleme." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62375/62375fig3v3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> Şekil 3. R26LSL-RCL-tdT/+'nın diseksiyonu; Tg (ATP6V1B1-Cre) 1Rnel / Mn fare endolenfatik kesesi E16.5, P5 ve P30'da. Sunulan tüm görüntüler, tdTomato floresansının tespiti için donatılmış 1 x objektifli bir stereomikroskop kullanılarak elde edilen tdTomato floresansını göstermektedir. (A, B) E16.5 R26LSL-RCL-tdT/+'nın kafatasının orta sagital bölümü; Tg(ATP6V1B1-Cre)1Rnel/Mn fare, (A) öncesi ve (B) yarım beyin çıkarılmasından sonra. tdTomato floresansı, iç kulağın konumunu ana hatlarıyla belirtir. Endolenfatik kese, diseksiyon (ok ucu) olmadan bile kolayca görülebilir. (C, E, G) Sırasıyla E16.5, P5 ve P30 farelerinden izole edilmiş iç kulaklar. (D, F ve H) Karşılık gelen mikrodiseke endolenfatik kese ve kanalların daha yüksek büyütme görüntüleri. P30'da, endolenfatik kanal kemikte kapsüllenir ve bu da izole edilmesini özellikle zorlaştırır. Ölçek çubukları: 2 mm (A, B, C, E, G), 500 μm (D, F, H). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/62375fig3v2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="İki iç kulak bölümü, Slc26a4+/- ve Slc26a4−/−, genetik çalışma için mikroskop görüntüsünde gösterilmiştir." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62375/62375fig04.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> Şekil 4. Genişlemiş bir endolenfatik kese ile otik kapsülün brüt anatomisi. P105'te Slc26a4+/- (solda) ve Slc26a4-/- (sağda) fare littermatlarından iç kulaklar. Vestibüler su kemeri ve endolenfatik kese ve kanal (siyah noktalı çizgiler) Slc26a4-/- farede Slc26a4+/- faredekilere kıyasla genişler. Ölçek çubuğu: 2 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/62375fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="İmmünofloresan testi, SLC26A4 ve ACTB proteinleri, epitel hücre diyagramı, mikroskopi sonuçları." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62375/62375fig5v2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> Şekil 5. SLC26A4 E16.5 ve P5'te endolenfatik kese epitelinde mitokondri açısından zengin hücrelerin ekspresyonu. (A, B) Anti-SLC26A4 antikoru (yeşil) ve β-aktini (ACTB, kırmızı) etiketleyen falloidin ile etiketlenmiş E16.5 faresinden izole edilmiş endolenfatik kese. (C) Bir anti-SLC26A4 antikoru (yeşil) ile etiketlenmiş P5 faresinden açılan endolenfatik kesenin düşük büyütmeli görüntüsü. Phalloidin (ACTB, kırmızı), endolenfatik kesenin yanı sıra etrafındaki konjonktiv dokunun varlığını vurgulamak için kullanılabilir. (D) Bir anti-SLC26A4 antikoru (yeşil) ile etiketlenmiş izole endolenfatik kese. (E) İki hücre tipinin varlığını vurgulayan endolenfatik kese epitelinin şematik gösterimi: apikal yüzeyi mikrovilluslarla kaplı mitokondri açısından zengin hücreler ve ribozom açısından zengin hücreler. (F-G) Endolenfatik kese açıldıktan ve bir anti-SLC26A4 antikoru (yeşil) ve falloidin (ACTB, kırmızı) ile işaretlendikten sonra P5'te endolenfatik kese epitelinin yüksek büyütmeli görüntüleri. Apikal membran seviyesinde temsili bir görüntü G'de gösterilir ve noktasal beyaz çizgi seviyesinde z-yığınından yeniden yapılandırılmış bir kesit F'de gösterilir. Hücrelerin çekirdeği DAPI (mavi) ile etiketlenmiştir. Ölçek çubukları: 100 μm (A, B); 200 μm (C, D) ; 20 μm (F, G). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/62375fig5v2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Şekil 1. Bir P5 R26LSL-RCL-tdT/+'nın gelen ışığı ve karşılık gelen tdTomato floresan görüntüleri; Tg (ATP6V1B1-Cre) 1Rnel / Mn fare iç kulağı diseksiyonun üç adımında. Endolenfatik kese ve kanal, tdTomato floresansı kullanılarak kolayca görüntülenebilir. (A-B) Bir P5 R26LSL-RCL-tdT/+'nın sağlam bir yarım kafatasının arka kısmındaki iç kulak bölgesi; Tg(ATP6V1B1-Cre)1Rnel/Mn fare. (C-D) Derinin ve kafatasının bir kısmının çıkarılması, endolenfatik kese bölgesinin daha iyi görselleştirilmesini sağlar. (E, F) Endolenfatik kese hala konjonktif, doku ile ilişkili izole iç kulak. (A, C, E) Olay ışığında yakalanan görüntüler. (B, D, F) tdKarşılık gelen dokunun domates floresansı. Ölçek çubukları: 2 mm (A-B), 1 mm (C-F). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/JoVE_HondaLee_SupplementaryFigure1.pdf" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Şekil 2. R26LSL-RCL-tdT/+ izole endolenfatik keselerinin floresansının karşılaştırılması; Tg (ATP6V1B1-Cre) 1Rnel / Mnve R26LSL-RCL-tdT / + E16.5 ve P5'te littermat fareler. tdTomato floresansı, endolenfatik kese ve kanalın tanınmasını büyük ölçüde kolaylaştırır.  (A-C) E16.5 R26LSL-RCL-tdT/+'nın mikrodiseke endolenfatik keseleri; Tg (ATP6V1B1-Cre) 1Rnel / Mn (A) ve R26LSL-RCL-tdT / + littermat fareler (B, C). (D-F) P5 R26LSL-RCL-tdT/+'nın mikrodiseke endolenfatik keseleri; Tg (ATP6V1B1-Cre) 1Rnel / Mn (D) ve R26LSL-RCL-tdT / + littermat fareler (E, F). (A, B, D, E) tdDomates floresansı. (C, F) B ve E'ye karşılık gelen gelen gelen ışık görüntüleri. Ölçek çubukları: 500 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/JoVE_HondaLee_SupplementaryFigure2.pdf" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Farelerden Endolenfatik Kesenin Diseksiyonu

The study of mutant mouse models of human hearing and balance disorders has unraveled many structural and functional changes which may contribute to the ...

dissection-of-the-endolymphatic-sac-from-mice

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video cerrahi endolenfatik hidrops üretmek için kobay endolenfatik kanal nasıl engel gösterir.

Endolenfatik Kanal obliterasyonu endolenfatik hidrops Cerrahi İndüksiyon

Vestibüler saç hücre fonksiyonu analizi kafatası, petröz temporal kemiğin en zor kısmı içinde derin konumlarına göre karmaşıktır. En işlevsel saç hücre çalışmaları akut izole saç hücrelerinin kullandık. Burada elektrofizyolojik ve iki-fotonlu mikroskop çalışmaları için fare vestibüler epitelyum bir yarı sağlam hazırlanması açıklanmaktadır.

Elektrofizyoloji ve yüksek çözünürlüklü İki foton Mikroskopi için Fare Vestibüler Duyu epiteli bir İzole Yarı sağlam Hazırlık

Birincil kirpikler çeşitli sinyal yollarını etkiler. Memeli kokleası, düzlemsel hücre polaritesi (PCP) sinyalini incelemek için idealdir. Kirpikler disfonksiyonu koklear büyümeyi, hücresel paternlenmeyi ve saç hücresi oryantasyonunu, PCP okumalarını etkiler. Amacımız, fare kokleasında PCP sinyalizasyonunu fenotipik analiz, immünohistokimya ve taramalı elektron mikroskobu ile analiz etmektir.

Ciliopathy Fare Mutant Kohlea Planar-Hücre-Polarite fenotipleri Değerlendirilmesi

Burada biz yerel ilaç dağıtım iç kulaklarına semisirküler kanal hasarı ile yetişkin ve neonatal farelerin duyma ve vestibüler işlevine izin veren canalostomy açıklayınız. Bu yöntem viral vektörler, eczacılık ve küçük moleküller fare iç kulak aşılamak için kullanılabilir.

Canalostomy yerel ilaç dağıtım yetişkin ve Neonatal farelerin iç kulaklarına bir cerrahi yaklaşım olarak

Bu makalede, kobay endolenfatik kesesini yok etmek ve deneysel endolenfatik hidrops indüklemek için ince bir pick ile endolenfatik kanal zarar ekstradural bir yaklaşım göstermektedir.

Kobayda Endolenfatik Hidrops İndüklemek için Gözden Geçirilmiş Cerrahi Yaklaşım

Endolenfatik kanal tıkanıklığı, Ménière hastalığından muzdarip hastalar için nispeten yeni bir cerrahi yöntemdir. Düzenli bir mastoidektomiyi takiben, endolenfatik kanal tanımlanır ve normal bir titanyum hemoklips kullanılarak bağlanır. Bu prosedürün etkinliği şu anda randomize bir çalışmada değerlendirilmektedir.

Ménière Hastalığı için Cerrahi Tedavi Seçeneği Olarak Endolenfatik Kanal Tıkanıklığı

Burada, endolenfatik kese tümörlerinin klinik ve radyolojik özellikleri tartışılıyor ve otolojik sevk merkezimizde tedavi gören bir vakada cerrahi olarak çıkarılmasının metodolojisi ve sonuçları bildiriliyor.

Endolenfatik Kese Tümörünün Cerrahi Tedavisi

Stria vascularis, endokoklear potansiyelin oluşumu için hayati öneme sahiptir. Burada, yetişkin fare stria vascularis'in tek çekirdekli dizileme veya immün boyama için diseksiyonu sunulmuştur.

Tek çekirdekli dizileme veya immün boyama için yetişkin fare stria vascularis'in diseksiyonu

Burada, labirentektomi sırasında fizyolojik koşullar altında insan vestibüler uç organlarının toplanması ve bunların immün boyama kullanılarak analizi için bir teknik tanımlanmıştır.

Labirentektomi Sırasında Fizyolojik Koşullar Altında Vestibüler Uç Organların Çıkarılması

Burada, birden fazla nörolojik hastalıkta önemli rol oynayan fare meningeal lenfatik damarlarının (MLV) değerlendirilmesi için bir protokol sunulmaktadır. Bu protokolün amacı, hem izleyici drenajının işlevsel değerlendirmesini hem de dorsal MLV ağının ayrıntılı morfolojik karakterizasyonunu mümkün kılan entegre bir yöntem sağlamaktır.

Meningeal Lenfatiklerin Değerlendirilmesi İçin Entegre Protokol: Cisterna Magna enjeksiyonu, Lenf Düğümleri Görüntüleme, Meningeal Diseksiyon ve Bütün-Montaj Boyama

Keşfedin, fare iç kulak endolenfatik kesesinin hassas mikrodiseksiyon protokolünü. Bu yöntem, SLC26A4 immünohistokimyası ve tek hücreli RNA dizileme için doku izolasyonunu sağlar.

Farelerden Endolenfatik Kesenin Diseksiyonu

Daha fazla video keşfet