Name: ApoEde Hind Limb iskemisinin Modifiye Cerrahi Modeli-/- Minyatür Kesi Kullanan Fareler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-13T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: Keşfedin ApoE-/- farelerde minimal invaziv kesi kullanarak arka ekstremite iskemisinin modifiye cerrahi modelini. Femoral arter ligasyonu ve histolojik analiz ile vasküler patoloji araştırmaları için erişilebilir bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Viktoria Skude, Alexander Schlund ve Felix Hörner'e mükemmel teknik destek için teşekkür ediyor.

NOT: Tüm deneysel prosedürler EC 2010/63/EU kılavuzuna göre gerçeklenmiş ve yerel Alman mevzuatı tarafından onaylanmıştır (35-9185.81/G[1]239/18). C57BL/6J arka planı 29.6-38.0 g ağırlığındaki on erkek ApoE-/- fare, 12 saat açık / karanlık bir döngüde barındırıldı ve 8 haftalıktan itibaren 12 hafta boyunca batı diyeti (% 1.25 kolesterol ve% 21 yağ) ve su reklam libitum ile beslendi. HLI, aşağıda açıklandığı gibi 20 haftalık fareler üzerinde gerçekleştirildi.
1. ApoE'de HLI İndüksiyonu-/- fareler
<ol><li>Ameliyat için gerekli ekipman ve aletleri hazırlayın (Bkz. Malzeme Tablosu ve Şekil 1). Kullanmadan önce cerrahi aletleri otoklavlama ile sterilize edin ve operasyon sırasında cam Boncuk Sterilizatörü kullanın.</li>
	<li>Fareyi tüm cerrahi işlemlerden önce midazolam (5 mg/kg), metetomidin (0,05 mg/ml/kg) ve fentanil (0,5 mg/kg) karışımından deri altı enjeksiyonu (S.C.) ile uyuşturun.<ol>
<li>Anestezinin başlangıcından sonra, kuruluğu önlemek için gözlerdeki veteriner merhemini kullanın ve ön ayak ve arka uzuvda pedal çekme refleksinin yokluğunu onaylayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Daha sonra, çekirdek vücut sıcaklığını yaklaşık 37 ° C'de tutmak için fareyi bir ısıtma yastığına yerleştirin. Pamuklu çubuklar ve epilasyon kremi kullanarak, sağ taraftaki arka uzuv derisinden saçları dikkatlice çıkarın. NOT: Epilasyon kremi, başta kesi yapılacak kasık bölgesi olmak üzere arka kırığı örtecek miktarda kullanılmalıdır. Epilasyon kremi 3 dakikadan kısa bir süre kullanılmalı ve daha sonra 2 ila 3 kez nemlendirilmiş pamuklu çubuklarla çıkarılmalıdır.</li>
	<li>Fareyi, bir diseksiyon mikroskobu altında ısıtma yastığı üzerindeki supine konumuna yerleştirin. Farenin cildini dezenfekte etmek için bir cilt antiseptiği kullanın (Malzeme Tablosunabakın). Daha sonra kasık bölgesinin ortasında yaklaşık 3-4 mm'lik bir kesi yapmak için sivri uçlu ve cerrahi makas kullanın. Yordamın şeması için Şekil 2'ye bakın.</li>
	<li>Proksimal femoral nörovasküler demetini ortaya çıkarmak için ince sivri tokmaklar yardımıyla deri altı yağ dokusunu dikkatlice çıkarın. Femoral kılıfın zarını delmek için ince sivri tokmakları dikkatlice kullanın. Femoral arteri (FA) femoral sinir (FN) ve femoral damardan (FV) dikkatlice uzaklaştırmak için salin ile nemlendirilmiş bir pamuklu çubuk kullanın.</li>
	<li>Proksimal SK'dan iki adet 7-0 emilebilir dikiş geçirin ve iki bağ arasında FA'yı transekte etmek için yay makası kullanarak çift düğüm yapın.</li>
	<li>Distal FA'yı ortaya çıkarmak için, kesiğin alt kenarından 7-0 emilebilir bir dikiş geçirin ve kesiği yavaşça arka uzvun dizininin sağ tarafının bölgesine sürükleyin.</li>
	<li>Nörovasküler demeti açığa çıkarmak için deri altı dokusunu dikkatlice bir kenara hareket ettinin. Femoral kılıfın zarını delmek için ince sivri kanatlar kullanın ve FA'yı FV ve FN'den parçalara alın.</li>
	<li>Distal FA'dan iki adet 7-0 emilebilir dikiş geçirin ve çift düğüm yapın. İki bağ arasındaki SK'yı geçirmek için yay makası kullanın. NOT: Sol uzuvda her farede kontrol görevi gören ligasyon yapılmadı.</li>
	<li>Daha sonra, kesiği dikmek için 6-0 emilebilir dikiş kullanın. Fareyi temiz bir kafeste bir ısıtma yastığına yerleştirin ve iyileşene kadar hayati parametrelerini izlemeye devam edin. Ameliyat sonrası analjezikler sağlayın: Buprenorfin s.c. (48 saat boyunca her 8 saatte bir 0,1 mg/kg vücut ağırlığı). Operasyondan 48 saat sonra, içme suyunda metamizol sürün (24 mg/5mL su günlük 4 kez 200 mg/kg'lık bir doza karşılık gelir).</li>
</ol>2. Manyetik rezonans görüntüleme
NOT: DLFA'dan bir gün sonra, fareler FA tıkanıklıkını değerlendirmek için MRI taramalarından geçmelidir.
<ol><li>Fareyi şeffaf bir indüksiyon odasına yerleştirin ve sağ refleks kaybına kadar fareyi ortam havasında% 1,5-2 izofluran ile uyuşturun.</li>
	<li>Fareyi bir ısırık tutucu ile donatılmış ve lazer kontrollü bir sistemle mıknatısa doğru yerleştirilmiş ısıtmalı bir hayvan yatağına yerleştirin. Vücut sıcaklığını 37±1 °C'de koruyun.</li>
	<li>Görüntü alımı sırasında, ortam havasında% 1,5-2 izofluran ile anesteziyi koruyun ve bir basınç probu kullanarak solunumu izleyin.</li>
	<li>Parametre yankı süresi (TE)/tekrarlama süresi (TR)/flip angle (FA) = 2 ms/12 ms/13° ile üç boyutlu (3D) uçuş süresi (TOF) anjiyografi dizisi kullanarak enine dilim oryantasyonunda görüntüler elde edin, dört ortalama, 178 x 144'lük bir alım matrisi 256 x 192 ve 121 dilime yeniden inşa edildi ve 0,15 mm3izotropik çözünürlük elde edildi. Damarlardan gelen sinyali bastırmak için, arka uzuvlara distal olarak bir doygunluk dilimi yerleştirin.</li>
</ol>3. Klinik değerlendirme ve takip
<ol><li>Fonksiyonel puanlama Tarlov ölçeği 18 ,19(Tablo1)kullanarak ameliyattan sonraki1 st, 3rd,5. ve7.</li>
</ol>4. Histolojik değerlendirme
<ol><li>Ameliyattan yedi gün sonra, fareleri ötenazi yapmak için pentobarbital enjeksiyon (115 mg / kg) uygulayın.</li>
	<li>Sol kardiyak ventrikülden (fare başına 100 mL) %1 paraformaldehit (PFA) içeren fosfat tamponlu salin (PBS) kullanın. Farelerin bilateral gastrocnemius'unu (Gm) 4 °C'de bir gecede% 4 PFA'da sabitle.</li>
	<li>Örneği daha önce açıklanan protokol20'yegöre parafin içine gömün.<ol>
<li>Parafin gömülü doku bloğunun 4-5 μm kalınlığındaki bölümlerini bir mikrotom üzerinde kesin. Yuvarlak bir boya fırçası yardımıyla, kesilen doku bölümlerini 42°C'de tutulan su banyosuna yerleştirin.</li>
		<li>Mikroskop kaydıramasını 45° açıyla suya yerleştirin ve toplanacak bölüm grubunun altına dikkatlice yerleştirin.</li>
		<li>Kaydırağı sudan dikkatlice kaldırın ve bölümlerin kaydırağa takılmasını ve tezgah üstü inkübatörde 37 °C'de bir gecede kurumasını bekleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>Parafin bölümlerinin hematoksilin/eozin (HE) lekesini gerçekleştirin.<ol>
<li>Bölümleri içeren slaytları slayt tutucularına yerleştirin. 3 kap taze ksilen hazırlayın ve bölümlerin ayrıştırıcısı için slaytları her kaba 5 dakika yerleştirin.</li>
		<li>Dilimleri art arda% 96,% 80,% 70, % 50, % 30 etanol ve her biri 5 dakika boyunca deiyonize suya batırarak bölümleri yeniden sulandırın.</li>
		<li>Hematoksilin çözeltisinde 10 dakika leke.</li>
		<li>Dilimleri bir deiyonize su kabına aktarın ve 5 dakika boyunca akan musluk suyunun altına yerleştirerek durulayın.</li>
		<li>Mikroskop kullanarak hematoksilin lekelemenin yoğunluğunu kontrol edin. Lekeleme hücre çekirdeğinin net bir şekilde tanımlanmasını sağlıyorsa, bir sonraki adıma geçin. Lekeleme yoğunluğu hücre çekirdeklerinin tanımlanmasını kolaylaştırmazsa veya lekeleme yoğunluğu zayıfsa, kaydırağı hematoksilin çözeltisine 1 dakika yerleştirin, yıkamayı suyla tekrarlayın (adım 4.4.4) ve sonra tekrar kontrol edin.</li>
		<li>5 dakika boyunca eosin-Y çözeltisinde karşı çekim.</li>
		<li>Dilimleri ardışık olarak deiyonize su ve% 30, % 50, % 70, % 80 ve% 96 etanol içeren kaplara her biri 10 s süre boyunca art arda daldırarak bölümleri susuzlaştırın. Ardından, bölümleri her biri 10 s için üç taze ksilen kabına sırayla yerleştirin.</li>
		<li>Slaytları yatay olarak mikroskobik slayt depolama haritalarına, bölümleri yukarı bakacak şekilde yerleştirin. Slayda yeterli montaj ortamı ekleyin ve slaytları kapak örtüleriyle monte edin.</li>
	</ol></li>
	<li>Parafin bölümlerinin immünohistokimyasal (IHC) lekelerini gerçekleştirin.<ol>
<li>Deparaffinizasyon ve rehidrasyon adımlarını 4.4.1-4.4.2 tekrarlayın. Ardından, bölümleri 10 mM sodyum sitrat tamponu, pH 6 olan bir kaba daldırın ve numuneyi mikrodalga fırında kaynatın. NOT: Numunelerin aşırı veya az ısıtılması tutarsız lekelere neden olabileceğinden, sıcaklığı kaynama noktasının hemen altında 10 dakika boyunca koruyun.</li>
		<li>Ardından, bir tezgah tepesindeki bölümleri 30 dakika soğutun. Daha sonra, bölümleri PBS'de 5 dakika boyunca üç kez yıkayın. Numunenin etrafındaki alanı dikkatlice kurulayın ve hidrofobik bir kalem kullanarak numunenin etrafına büyük bir daire çizin. . NOT: Örneğe asla dokunmayın. Hidrofobik bir kalemle işaretleme, daha küçük hacimli bir antikor çözeltisinin kullanımını kolaylaştıran hidrofobik bir sınır oluşturur.</li>
		<li>Bölümü PBS'de %0,3 H 2 O2'ye10 dk yerleştirerek endojen peroksidaz aktivitesini söndürün. Nemlendirilmiş bir odada oda sıcaklığında 1 saat boyunca 400 μL blok tamponlu blok bölümleri (PBS% 3 sığır serum albümini ve% 0.3 iyonik olmayan deterjan içerir).</li>
		<li>PBS'deki bölümleri 5 dakika yıkayın. Ardından, bölümü kapsayacak kadar 100-400 μL seyreltilmiş anti-CD31 antikor (1:250) ekleyin. Bunu takiben, bölümleri nemlendirilmiş bir odada 4 °C'de bir gecede kuluçkaya yatırın. NOT: Bölümün tamamen antikor çözeltisi ile kaplasağından emin olun.</li>
		<li>Birincil antikoru çıkarın ve bölümleri PBS'de her biri 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.</li>
		<li>DAB seyrelticinin 1 mL'sine 1 damla DAB konsantresi ekleyerek 3, 3'-diaminobenzidine (DAB) karışımını hazırlayın ve iyice karıştırın. Daha sonra, bölümlere 100-400 μL DAB karışımı ekleyin ve kabul edilebilir bir lekelenme yoğunluğu gözlenene kadar 2 dakika boyunca yakından izleyin. NOT: Bölümün tamamen DAB karışımı ile kaplı olduğundan emin olun.</li>
		<li>Daha sonra, akan musluk suyunun altında 5 dakika durulayın. 4.4.3-4.4.5 adımlarında açıklandığı gibi hematoksilin lekeleme gerçekleştirin.</li>
		<li>Adım 4.4.6'da açıklanan eosin-Y boyamayı gerçekleştirin. 4.4.7 adımında açıklanan dehidrasyon adımlarını gerçekleştirin.</li>
		<li>Montaj ortamı kullanılarak bölümleri kapak örtüleri ile monte etti. Daha önce açıklandığı gibi mikrovasküler yoğunluk olarak kabul edilebilen rastgele seçilmiş 5 alanda (40x) CD31 pozitif alanının yüzdesini (%) tahmin etmek için ImageJ'yikullanın.</li>
	</ol></li>
</ol>5. İstatistiksel analiz
<ol><li>Sonuçları standart sapmanın ortalaması olarak ifade etmek ± karşılaştırmalar üzerinde eşleşmemiş t-test gerçekleştirmek için istatistiksel analiz yazılımını kullanın. P < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı olduğunu düşünün.</li>
</ol>

Yazarlar, makale içeriğinin potansiyel bir çıkar çatışması olarak yorumlanabilecek herhangi bir ticari veya finansal ilişkinin yokluğunda oluştuğunu beyan eder.

Bu çalışma, gerekli laboratuvar yükseltmeleri yapılmadan 3-4 mm'lik bir kesi yoluyla SK'nın proksimal ve distal bölgelerinde çift ligasyon kullanarak ApoE-/- farelerde HLI modeli oluşturmak için modifiye edilmiş, basitleştirilmiş ve cerrahi olarak verimli bir yaklaşım bildirmektedir. Bu yöntemin temel özelliği, fare HLI modellerini açıklayan daha önce bildirilen çalışmalara kıyasla kesiğin daha küçük boyutudur 8 ,9,10,<sup class="...

Periferik arter hastalığı (PAD) gibi damar hastalıklarında araştırma için klinik öncesi hayvan modellerinin karşılanmamış bir ihtiyacı vardır. Tanı ve tedavideki ileri gelişmelere rağmen, 2018'de 200 milyondan fazla PAD hastası vardı1ve sayıları sürekli artmaktadır. Çeşitli yeni terapötik yaklaşımlar2,3,4,5,6,7 tanımlanmış olsada,bu terapötik yöntemlerin klinik uygulamaya başarılı bir şekilde çevrilmeleri göz korkutucu bir görev olmaya devam etmektedir. Bu nedenle, pad6,7tedavi etmek için bu yeni terapötik yaklaşımların potansiyel mekanizmasını ve verimliliğini araştırmak için insan hastalığı durumunu simüle eden güvenilir ve ilgili in vivo deneysel modeller gereklidir.
Hiperlipidemi ve ateroskleroz (AS) PAD gelişimi için başlıca risk faktörleridir. ApoE-/- fareler (yüksek yağlı bir diyette) anormal yağ metabolizması ve hiperlipidemi gösterir ve daha sonra klinik olarak ilgili PAD'i simüle etmek için en iyi seçim olarak ApoE-/- fareleri işleyen aterosklerotik plaklar geliştirir. Preklinik HLI hayvan modelleri, tüm dünyadaki laboratuvarlarda en yaygın kullanılan yaklaşım olan femoral arterin (DLFA) çift ligasyonu yoluyla üretilir8, 9,10,11,12,13,14,15 akut-kronik iskemiyi simüle etmek için. Bununla birlikte, bu yaklaşım genellikle nispeten büyük ve invaziv bir kesi gerektirir. Ayrıca, kaçınılmaz olarak hayvanlara (özellikle farelere) artan ağrı yaralanması ve iltihaplanmadan muzdariptir, bu da sonraki deneysel sonuçları etkiler 5,6,16,17. Bu makalede, APOE-/- farelerde akut-kronik HLI modeli çok küçük bir kesi kullanılarak açıklanmaktadır.

<table><tbody><tr><td>10x Fosfat tampon salin</td><td>Roth</td><td>9143.1</td><td>Hematoksilen ve eozin boyası ve immünohistokimya boyası için kullanılır</td></tr><tr><td>%30 H2O2</td><td>Roth</td><td>9681.2</td><td>İmmünohistokimya boyası için kullanılır</td></tr><tr><td>6-0 emilebilir sütürler</td><td>PROLENE</td><td>8776H</td><td>Cildi dikmek için kullanılır</td></tr><tr><td>6-0 absroable sütür</td><td>PROLENE</td><td>EP8706</td><td>Cerrahide kullanılır</td></tr><tr><td>7-0 emilebilir sütürler</td><td>PROLENE</td><td>EH8021E</td><td>Arteri bağlamak için kullanılır</td></tr><tr><td>7-0 absroable sütür</td><td>PROLENE</td><td>EP8755</td><td>Cerrahide kullanılır</td></tr><tr><td>Asetik asit</td><td>Roth</td><td>6755.1</td><td>Hematoksilen ve eozin boyası için kullanılır</td></tr><tr><td>Albumin Fraktion V</td><td>Roth</td><td>8076.2</td><td>İmmünohistokimya boyası için kullanılır</td></tr><tr><td>Otoklav</td><td>Systec GmbH</td><td>Systec VX-150</td><td>Cerrahi aletlerin sterilizasyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>Axio vert A1 mikroskobu</td><td>Carl Zeiss</td><td>ZEISS Axio Vert.A1</td><td>Hematoksilen ve eozin lekesi ve immünohistokimya lekesi</td></tr><tr><td>Bruker BioSpec 94/20 AVIII</td><td>Bruker Biospin MRI GmbH</td><td>N/A</td><td>Femoral arter tıkanıklığını tarayın</td></tr><tr><td>Buprenovet Sinüs 0,3mg/ml</td><td>Bayer AG</td><td>2542 (WDT)</td><td>Ameliyat sonrası ağrı tedavisinde kullanılır. Doz - Operasyondan sonra 48 saat boyunca her 8 saatte bir 0.1 mg / kg vücut ağırlığı</td></tr><tr><td>CD31 antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab28364</td><td>İmmünohistokimya boyası için kullanılır</td></tr><tr><td>Eozin Y çözeltisi suda% 0.5</td><td>Roth</td><td>X883.1</td><td>Hematoksilen ve eozin lekesi için kullanılır</td></tr><tr><td>Epitop Alma Çözeltisi pH 6</td><td>Leica Biosystems</td><td>6046945</td><td>İmmünohistokimya boyası için kullanılır</td></tr><tr><td>Etanol > %99,5</td> <td>Roth</td><td>5054.1</td><td>Hematoksilen ve eozin boyası ve immünohistokimya boyası için kullanılır</td></tr><tr><td>Fentanil</td><td>Cayman Kimyasal</td><td>437-38-7</td><td>Anestezi için kullanılır</td></tr><tr><td>İnce nokta forseps</td><td>Medixplus</td><td>93-4505S</td><td>Arteri sinir ve damardan ayırmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Cam boncuk sterilizatörü</td><td>Simon Keller</td><td>Tip 250</td><td>Cerrahi aletlerin sterilizasyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>Graefe iris forseps kavisli</td><td></td><td>VUBU VUBU-02-72207</td><td>Deri ve deri altı dokusunun künt ayrılması için kullanılır</td></tr><tr><td>Tüy dökücü krem, Veet (aloe vera ile)</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>108972</td><td>Farelerin arka bacaklarından tüyleri alın</td></tr><tr><td>Isıtma plakası</td><td>ST&Ouml; RK-TRONIC</td><td>7042092</td><td>Farelerin doyabilir sıcaklığını koruyun</td></tr><tr><td>Hematoksilen</td><td>Roth</td><td>T865.2</td><td>Hematoksilen ve eozin boyası ve immünohistokimya boyası için kullanılır</td></tr><tr><td>Leica cerrahi mikroskobu</td><td>Leica</td><td>M651</td><td>İşlemi kolaylaştırmak için görüş alanını genişletin</td></tr><tr><td>Sıvı DAB+Substrat Kromojen Sistemi</td><td>Dako</td><td>K3468</td><td>İmmünohistokimya boyası</td></tr> <tr><td>için kullanılırErkek ApoE-/- fareler</td><td>Charles River Laboratories</td><td>N/A</td><td>Periferik arter hastalığı fareleri modelini oluşturmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Medetomidine</td><td>Cayman Chemical</td><td>128366-50-7</td><td>Anestezi için kullanılır</td></tr><tr><td>Mikro İğne Tutucu</td><td>Siyah & Siyah Cerrahi</td><td>B3B-18-8</td><td>İğneyi tutma</td></tr><tr><td>Mikro sütür bağlama forseps</td><td>Hayat Kurtarıcı Cerrahi Endüstriler</td><td>PS-MSF-145</td><td>Ameliyat sırasında düğümlemeye yardımcı olmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td>Biobase</td><td>Bk-Mt268m</td><td>Doku kesiti için kullanılır</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Ratiopharm</td><td>44856.01.00</td><td>Anestezi için kullanılır</td></tr><tr><td>MR uyumlu Küçük Hayvan İzleme ve Geçit Sistemi Model 1025</td><td>SA Instruments</td><td>N/a,</td><td>MRI taraması sırasında hayvanın yaşamsal belirtilerini izleme</td></tr><tr><td>, Octeniderm farblos</td><td>, Sch&uuml; lke & Mayr GmbH</td><td>180212</td><td>cildin dezenfeksiyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>Gözler ve burun için merhem</td><td>Bayer AG</td><td>1578675</td><td>Anestezi altında gözleri ıslak tutun</td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Roth</td><td>0335.1</td><td>Dokunun fiksasyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td>Nembutal</td><td>76-74-4</td><td>Anestezi için kullanılır</td></tr><tr><td>Salin</td><td>DeltaSelect</td><td>1299.99.99</td><td>için kullanılır anestezi</td></tr><tr><td>İnce, keskin uçlu yaylı makas</td><td>Siyah & Siyah Cerrahi</td><td>B66167</td><td>Arteri kesmek için kullanılır</td></tr><tr><td>SuperCut Makas</td><td>Siyah & Siyah Cerrahi</td><td>B55992</td><td>Cildi kesmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Roth</td><td>9002-93-1</td><td>İmmünohistokimya boyası için kullanılır</td></tr><tr><td>Batı diyeti, %1.25 Kolesterol</td><td>ssniff Spezialdi&auml; ten GmbH</td><td>E15723-34</td><td>Fareler için diyet</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Roth</td><td>4436.3</td><td>Hematoksilen ve eozin boyası ve immünohistokimya boyası için kullanılır</td></tr></tbody></table>

apoe'de hind limb iskemisinin modifiye cerrahi modeli-/- minyatür kesi kullanan fareler

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

Bu çalışmanın amacı, çoğu hayvan laboratuvarında uygulanabilen farelerde akut iskemiyi teşvik etmek için modifiye edilmiş bir cerrahi yaklaşım tanıtmak ve değerlendirmektir. Femoral arterin (DLFA) çift ligasyonu için konvansiyonel yaklaşımın aksine, DLFA yapmak için proksimal femoral arteri (FA) ortaya çıkarmak için sağ kasık bölgesinde daha küçük bir kesi yapıldı. Daha sonra 7-0'lık bir dikiş kullanılarak kesi diz bölgesine sürüklenerek distal FA'yı ortaya çıkardı. Ameliyattan 0, 1, 3, 5 ve 7 gün sonra, arka uzuvların fonksiyonel iyileşmesi tarlov ölçeği kullanılarak görsel olarak değerlendirildi ve derecelendirildi. Histolojik değerlendirme, DLFA'dan 7 gün sonra hayvanlara ötenazi yapıldıktan sonra yapıldı. İşlemler on ApoE-/- farede sağ bacakta başarıyla gerçekleştirildi ve sonraki gözlem sırasında hiçbir fare ölmedi. 10 farenin tamamında kesi boyutları 5 mm'den (4,2 ± 0,63 mm) azdı. MR sonuçları iskemik taraftaki SK kan akışının açıkça tıkandığını gösterdi. Tarlov ölçeği sonuçları, işlemden sonra arka eks uzuv fonksiyonlarının önemli ölçüde azaldığını ve takip eden 7 gün boyunca yavaşça iyileştiğini göstermiştir. Histolojik değerlendirmede iskemik tarafta anlamlı bir inflamatuar yanıt ve iskemik arka ektremitede mikrovasküler yoğunlukta azalma saptadı. Sonuç olarak, bu çalışma DLFA kullanarak arka ekstrepsiyon iskemisini (HLI) gerçekleştirmek için minyatür bir kesi kullanarak değiştirilmiş bir teknik tanıtmaktadır.

ApoE-/- farelerin özellikleri DLFA ameliyatları HLI modelini oluşturmak için 10 fare üzerinde başarıyla yapıldı ve işlemden sonra farelerin hiçbiri ölmedi. Vücut ağırlığındaki değişiklikleri takip etmek için, fareler DLFA prosedüründen önce (Pre-DLFA) ve DLFA ameliyatından 7 gün sonra (Post-DLFA) tartıldı. DLFA öncesi ağırlıklar 29,6 ila 38,0 g (ortalama 34,74 ± 2,47 g) ve DLFA sonrası ağırlıklar 26 g arasında değişmektedir. DLFA öncesi ağırlıklardan öneml...

Bu makale, küçük bir kesi ile farelerde akut iskemi kurmak için etkili bir cerrahi yaklaşım göstermektedir. Bu yaklaşım, laboratuvar yükseltmesi yapılmadan çoğu araştırma grubu tarafından uygulanabilir.

ApoE'de Hind Limb iskemisinin Modifiye Cerrahi Modeli-/- Minyatür Kesi Kullanan Fareler

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most ...

Bugün tanıttığımız şey, ApoE farelerinde arka ekstre iskemi kurmak için basitleştirilmiş modifiye edilmiş ve cerrahi olarak verimli bir yöntemdir. Bu yöntem herhangi bir hayvan tesisinde uygulanabilir. Sinovyal yöntemin ana avantajı, beş milimetreden daha az bir kesi kullanarak düşük bir invazivliktir.Yöntemin bir öğrenme hof'una sahiptir. Bu nedenle, son analize dahil edilecek hayvanlar üzerinde çalışmadan önce mikrocerrahi modeller üzerinde pratik yapmanızı tavsiye ediyoruz. Yöntem kaixuan Yan tarafından gösterilecek, bir tıp doktoru ve laboratuvarımdan öğrenci.Ameliyat için gerekli ekipman ve aletleri hazırlayarak başlayın. Anesteziyi fareye uyguladıktan sonra, kuruluğu önlemek için bu merhemi gözlere uygulayın. Ardından, çekirdek vücut sıcaklığını yaklaşık 37 santigrat derecede tutmak için fareyi bir ısıtma yastığına yerleştirin.Pamuklu çubuk ve epilasyon kremi kullanarak, sağ taraftaki arka uzuv derisinden saçları dikkatlice çıkarın. Fareyi, bir diseksiyon mikroskobu altında ısıtma yastığı üzerindeki supine konumuna yerleştirin. Cildi dezenfekte etmek için alkol kullanın ve pamukla kesiğin bitki tarafından silin.Sivri uçlu ve cerrahi makas kullanarak kasık bölgesinin ortasında yaklaşık üç ila dört milimetrelik bir kesi yapar. Proksimal femoral nörovasküler demetini ortaya çıkarmak için ince sivri tokmaklar yardımıyla deri altı yağ dokusunu dikkatlice çıkarın. Salin ile nemlendirilmiş bir pamuklu çubuk kullanarak, femoral arteri femoral sinir ve femoral damardan dikkatlice uzaklaştırın.Daha sonra 7.0 dikişinin ucunu kullanarak, femoral kılıfın zarını dikkatlice delin. Daha sonra proksimal femoral arterden 7-0 emilebilir dikişe geçin ve yay makasını kullanarak çift düğüm yapın. Daha sonra iki bağ arasındaki femoral arteri transekte edin.6-0 emilebilir dikişi kesiğin alt kenarından geçirin ve distal femoral arteri ortaya çıkarmak için kesiği arka uzvun dizininin sağ tarafının bölgesine hafifçe sürükleyin. Nörovasküler demeti açığa çıkarmak için deri altı dokusunu dikkatlice bir kenara hareket ettirin. Femoral arteri femoral damar ve femoral sinirden parçalara ayrıştırın ve siniri korumak için pamuk kullanın.Daha sonra 7.0 dikişinin ucunu kullanarak, femoral kılıfın zarını delin. Distal femoral arterden iki adet 7-0 emilebilir dikiş geçirin ve iki bağ arasındaki uyluk atardamarını transkripsiyon için yay makasını kullanarak çift düğüm yapın. Daha sonra, 6-0 emilebilir dikişleri kullanarak kesiği dikin.Fareyi temiz bir kafeste bir ısıtma yastığına yerleştirin ve iyileşene kadar hayati parametrelerini izlemeye devam edin. Ertesi gün MRI ile femoral arter veya DLFA'nın çift ligasyon başarısını belirleyin. DLFA prosedüründen önce, farelerin ağırlıkları 29.6 ila 38.0 gram arasında değişmektedir.DLFA ameliyatından yedi gün sonra, ağırlıklar 26,5 ila 34,1 gram arasında değişmekte dır, DLFA öncesi ağırlıklardan önemli ölçüde daha düşüktür. Sağ SK'nın proksimal ve distal bölgelerinde perfüzyon saptanmamıştır. Tarlov ölçeği sonuçları ameliyattan bir gün sonra önemli ölçüde azaldı.İlerleyen günlerde yavaş yavaş artsalar da, yedinci güne kadar taban çizgisine göre hala daha düşüktüler. Yedi faredeki iskemik arka bacakların pençeleri, kontralteral tarafa kıyasla doğal olarak esneyemedi. Ek olarak, farelerden dördü, karşıt tarafa kıyasla pençelerin hafif renk değişikliği gösterdi.Sağ GM kasının H&E lekesi, çoğalan uydu hücrelerinin nekrotik miyoberlerin yerini aldığı ve bir kütle içinde veya düzenli bir dağılımla dağıtıldığı düzensiz iskemik nekroz sergileyen miyoberleri ortaya çıkardı. Çok sayıda makrofajla enflamatuar infiltrasyon sergileyen miyofiberler normal morfolojik özelliklerini kaybetmiş, çok az sayıda yenilenmiş miyofiber mevcuttu. Bu yenilenmiş miyofiberlerin enine bölümleri yuvarlaktı.Sitoplazm kırmızıya boyanmış ve merkezde küçük bir çekirdek veya birden fazla çekirdek bulunuyordu. Ancak sol GM'de bu tür inflamatuar örüntü gözlenmedi. Mikrovasküler yoğunluğu gözlemlemek için yapılan CD31 antikor lekeleme, iskemik arka uzuvların iskemik olmayan tarafa göre önemli ölçüde daha fazla mikrovasküler yoğunluk gösterdiğini gösterdi. En önemli şey femoral arterin diseksiyonudur.Operatörün mikrocerrahi tekniklerde deneyimli olması ve fare arka plan anatomisine aşina olması gerekir. Prensip olarak, bu yöntem bacaktaki iskemi-reperfüzyon yaralanmasını incelemek için de kullanılabilir. Bu nedenle, arter reperfüzyona izin vermeden önce yumuşak bir damar kelepçesi ile tıkanabilir.

a-modified-surgical-model-hind-limb-ischemia-apoe-mice-using

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Lazer Doppler perfüzyon sintigrafisi ile iskemi onayı ile tek taraflı hindlimb iskemi indüksiyonu için cerrahi işlem olduğunu göstermiştir.

Murin Model Hindlimb İskemi

Çok sayıda genetik manipülasyonlar ve / veya genler, proteinler, hücre ve / veya biyomalzemeler intramiyokardiyal enjeksiyonu, akut iskemi / reperfüzyon hasarı ve farelerde kronik remodeling çalışmaları zaman boyutu üzerine bindirilmiş. Bu video iskemi / reperfüzyon için mikrocerrahi prosedürleri, kalıcı koroner arter ligasyonu ve intramiyokardiyal enjeksiyon çalışmaları göstermektedir.

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Minimal invaziv manipülasyonlara sahip farelerde miyokard enfarktüsü için yüksek oranda tekrarlanabilir bir model tanımlanmıştır. Model kolayca gerçekleştirilebilir, bu da yüksek tekrarlanabilirlik ve hayatta kalma oranı ile sonuçlanır. Bu nedenle, açıklanan model, 3R ilkesinin (Değiştirme, İyileştirme ve İndirgeme) talep ettiği gibi gerekli hayvan sayısını azaltacaktır.

Farelerde Miyokard İnfarktüsü Oluşturan Minimal İnvaziv Cerrahi Prosedür

Farede arka bacak iskemisinin cerrahi indüksiyonu, anjiyogenezi incelemek için yararlıdır, ancak bu, belirgin iskemiye bağlı doku nekrozu gösteren bazı akraba fare suşlarında tehlikeye girer. Kademeli arteriyel oklüzyonun indüksiyonu yoluyla bu sorunu aşmak için ameroid büzücüler kullanarak subakut ekstremite iskemisini indüklemek için yöntemler açıklanmaktadır.

Akut ve Subakut Fare Arka ayağın İskemi Yöntemleri

Silikon kaplı bir sütür kullanılarak orta serebral arterin tıkanmasıyla inen bir fare inme modelini tarif ediyoruz. Protokol, kalıcı oklüzyon veya geçici bir iskemiyi indüklemek için uygulanabilir ve ardından reperfüzyon uygulanabilir.

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Serebral iskemi-reperfüzyon bir fare modeli kontur Patofizyoloji araştırmak için kuruldu. Klemple sağ orta serebral arter ve şu ortak Karotid arter ligate ve kan akımı iskemi 10-40 dakika sonra geri yükleme.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

Burada, anjiogenik tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için fonksiyonel, histolojik ve moleküler testlerin bir pil tarafından izlenen kritik bir hindekstremite iskemi deneysel modeli sunulmuştur.

Hindekstremite Iskemi bir Murine modelinde terapötik anjiyogenezi değerlendirilmesi

Burada farelerde sol anterior inen koroner arterin kalıcı ligasyonunun nasıl elde edilebildiğini gösteren bir cerrahi prosedürü açıklıyoruz. Bu model miyokard enfarktüsü ve eşlik eden biyolojik süreçlerin patofizyolojisini araştırmak için yüksek öneme hemşilir.

Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Bu protokol, FVB farelerde arka bacak kangrenini indüklemek için femoral arter ve ven elektrokoagülasyonunu nitrik oksit sentaz inhibitörü uygulamasıyla birleştiren benzersiz, klinik olarak ilgili bir periferik arter hastalığı modelini tanımlamaktadır. İntrakardiyak DiI perfüzyonu daha sonra ayak yastığı vaskülatürünün yüksek çözünürlüklü, üç boyutlu görüntülenmesi için kullanılır.

Murin Arka Ekstremite Kangren Modelinde Footpad Vaskülatürünün Yüksek Çözünürlüklü Üç Boyutlu Görüntülenmesi

Bu protokol, sıçanlarda, femur damarlarının sıkıştırılması ve bağlanması yoluyla yüzeysel inferior epigastrik damarlardan kan akışının iyi bir şekilde görselleştirilmesine ve manipüle edilmesine izin veren fasyokutanöz fleplerin toplanmasını, dikilmesini ve izlenmesini açıklar. Bu, iskemik ön koşullandırmayı içeren çalışmalar için kritik öneme sahiptir.

Bir sıçan modelinde iskemik ön koşullandırma etkilerini incelemek için yüzeysel inferior epigastrik arter aksiyel flep

Keşfedin ApoE-/- farelerde minimal invaziv kesi kullanarak arka ekstremite iskemisinin modifiye cerrahi modelini. Femoral arter ligasyonu ve histolojik analiz ile vasküler patoloji araştırmaları için erişilebilir bir platform sunar.

ApoE'de Hind Limb iskemisinin Modifiye Cerrahi Modeli^-/- Minyatür Kesi Kullanan Fareler

Daha fazla video keşfet