Sıçanlarda Nesne Konumu Görevi Kullanan Konu İçi Deneysel Tasarım

Nesne Konumu Görevi, kemirgenlerdeki spontan keşif davranışından yararlanarak mekansal hafızanın oluşumu veya tutulmasının çeşitli mekanizmalarını araştırmamızı sağlar. Bu protokol, istatistiksel gücü ve cerrahi prosedürleri içeren çalışmaların verimliliğini ve çıktısını artırmaya yardımcı olan bir Nesne Konumu Görevinin dört kata kadar tekrarlanmasına izin verir. En az 60 santimetre genişliğe ve 50 santimetre yüksekliğe sahip opak, gözeneksiz sert plastiktan yapılmış kare bir arena elde etmeye başlamak için.

Otomatik yazılım tarafından sıçan hareketlerinin başarılı bir şekilde kaydedilmesi için zemin renginin sıçanınkiyle tezat oluşturduğunu emin olun. Arenayı bir kutunun içine veya perdeyle çevrili bir platforma yerleştirin. Bağlam oluşturmak için, arenaya farklı renklerde veya desenlerde ikinci bir eklenebilir duvar katmanı ekleyin.

Sıçanların ulaşamayacağı kadar yüksek geometrik şekillere ve renklere sahip 3D uzamsal ipuçlarını asın. Gözeneksiz, çiğnenemeyen ve farklı geometrik şekiller ve dokularla temizlenmesi kolay farklı nesne çiftlerini arenanın zeminine takın. Kare şekilli olmayan bir kovayı yatak malzemesi ile doldurun.

Deneyde kullanılacak nesnelerden farklı olan farklı şekil ve boyutlardaki beş ila 10 nesneyi rastgele kovaya yerleştirin. Birinci seans için, tüm ev kafeslerini deney odasına getirin ve sıçanların odaya alışmasına izin verin ve en az 30 dakika yetinin. Aynı kafesten iki ila dört sıçanı yaklaşık 20 dakika boyunca kovaya koyun.

Her sıçan grubu arasındaki dışkı maddesini çıkararak kovayı temizleyin. Tüm sıçanları ev kafeslerine koyun ve barınma odasına geri koyun. İkinci seans için tüm kafesleri deney odasına getirin ve en az 30 dakika bekletin.

Her sıçanı ayrı ayrı 10 dakika boyunca kovaya koyun. Sıçanı ev kafesine geri yerleştirin ve her sıçandan sonra kovayı temizleyin. İşiniz bittiğinde, tüm kafesleri barınma odasına geri verin.

Dördüncü seans için, tüm kafesleri deney odasına getirin ve en az 30 dakika bekletin. Aynı kafesten iki ila dört sıçanı 20 dakika boyunca bağlam veya mekansal ipuçları olmadan boş arenaya yerleştirin. Tüm sıçanları ev kafesine geri yerleştirin ve her sıçan grubundan sonra arenayı% 70 etanol ile silin.

Nesneleri arenaya koymadan ilk bağlamı oluşturmak için boş arenayı değiştirin. Bağlam alışkanlığının birinci oturumu için tüm kafesleri deney odasına getirin ve en az 30 dakika bekletin. Kayıt cihazına başlayın, sonra ilk sıçanı arenanın ortasına yerleştirin ve sıçanın arenayı 10 dakika keşfetmesine izin verin.

Sonra kayıt cihazı durdurmak ve ev kafesine geri sıçan yerleştirmek için. Bittiğinde tüm kafesleri muhafaza odasına geri verin. Her sıçan için, bu işlemi iki ve üç ardışık gün boyunca seanslar için tekrarlayın, böylece sıçan başına toplamda üç bağlam alışkanlığı seansı vardır.

Tüm kafesleri deney odasına getirin ve en az 30 dakika bekletin. Önceden hazırlanan zamanlamayı kullanarak, yapışkan paspaslar veya çift taraflı bant kullanarak ilk özdeş nesne çiftini belirlenen konumlara yerleştirin. Kaydediciyi başlatın ve arenadaki ilk sıçanı, herhangi bir nesne tarafından işgal olmayan bir duvara veya köşeye bakan her nesneden eşit bir mesafeye yerleştirmek için.

Zayıf kodlama için sıçanın tek bir deneme için arenayı ve nesneleri 20 dakika keşfetmesine izin verin. Güçlü kodlama için sıçanın aynı sıçan için üç deneme ile beş dakika boyunca keşfetmesine izin verin. Kayıt cihazı durdurun.

Sıçanı ev kafesine geri yerleştirin, nesneleri çıkarın ve her kayıttan sonra arenayı etanol ile silin. Tüm kafesleri deney odasına getirin, sıçanların en az 30 dakika bırakılabilmesi için ilk testten önce yeterli zaman bırakın. Nesneleri belirlenen konumlara yerleştirin.

Kaydediciyi başlatın ve ilk sıçanı arenaya herhangi bir nesne tarafından işgal olmayan bir duvara veya köşeye bakacak şekilde yerleştirin. Sıçanın arenayı ve nesneleri beş dakika boyunca keşfetmesine izin verin. Fareyi ev kafesine geri yerleştirin.

Nesneleri çıkarın ve hem nesneleri hem de arenayı% 70 etanol ile iyice silin. Her sıçan için kaydı tekrarlayın ve kafesleri konut odasına geri döndürün. Her sıçan için, hem kodlama hem de test denemelerinde her nesne için keşif süresini puanla.

En iyi ayrımcılık performansı için tüm süre boyunca kodlama denemelerini ve iki dakika boyunca test denemelerini puanlayın. Her nesne için keşif yüzdesini veya her sıçan için ayrımcılık dizinini hesaplayın ve gruplar için ortalama değerleri hesaplayın. Şans seviyesinin üzerinde önemli bir tercihi tespit etmek için tek bir örnek T testi kullanın.

Güçlü kodlama protokolü, hem bir saat hem de 24 saatlik gecikmelerle testlerdeki% 50 şans seviyesinden önemli ölçüde daha yüksek bir ortalama yüzde keşfi ile nesnenin yeni konumda tercihine yol açtı. Zayıf kodlama protokolü, bir saatlik gecikmeli testlerde şans seviyesine kıyasla, ancak 24 saatlik bir gecikmeye kıyasla, yeni konumdaki nesnenin tercihinde önemli bir artış üretti. Bu protokolün önemli bir avantajı, aynı sıçan kohortları ile dört ayrı bağlam kullanılarak dört kez gerçekleştirilebilmesidir.

Bir saatlik bellek ve 24 saatlik bellek iki deneysel grupla karşı dengeleme kullanmanın olası bir yolunun sonuçları burada gösterilmiştir. İki grup, üç ve dört olmak üzere iki ek bağlamda tekrarlanan bir ve iki bağlam üzerinde dengelendi. Bu dört bağlamdan elde edilen sonuçlar, her bir bağlamda tercih ile şans düzeyi karşılaştırılarak her deney grubu için belleğin değerlendirildiği ayrı ayrı sunulur.

Dört bağlam arasında anlamlı bir fark saptı. Verilerin daha iyi bir gösterimi ve konu karşılaştırması için, iki dengelenmiş bağlamdan elde edilen sonuçlar birleştirildi ve denek karşılaştırması, yani eşleştirilmiş T testi kullanılarak karşılaştırıldı. Bu görev, hayvanın test sırasında ezilmemesi veya korkmaması için elleçlemenin ve alışkanlığın çok önemli olduğu merakına dayandığından.

Bu protokolde farmakolojik ve optogenetik müdahale gibi daha fazla manipülasyonların yanı sıra kısa ve uzun süreli anıları incelemek ve bu anıları geliştirmek veya bozmak için in vivo görüntüleme uygulanabilir.