Biyomembran Kuvvet Probu Spektroskopisi ile Moleküler Yay Sabit Analizi

Bu videoda, moleküler yay sabitini ölçmek için Biyomembran Kuvvet Sondası veya BFP kullanmayla ilgili adım adım prosedürler açıklanmaktadır. Kuvvet probunda, BFP son zamanlarda doğal hücre yüzeyinde veya SITU Dinamik Kuvvet Spektroskopisi analizinde ortaya çıkmıştır. Bu tekniğin temel amacı tek molekül bağlayıcı genetiği ölçmektir.

Bu veri analizi prosedürü basit ama güçlü bir mesajdır ve mekanik bilgiler, özellikle hücre zarını ifade eden moleküllerin dinamik kuvveti ve iltihabı sağlar. BFP deney döngüsü sırasında, kırmızı kan hücresi ve veraset ile prob mikrobiyom bahsi, hedef hücre ve prob ile hedef arasındaki ligand reseptör moleküler bağlanması bir dizi bağlı beyin sistemi olarak düşünülebilir. Hooke yasasına dayanarak, bir dizi bağlı yay sisteminin toplam yay sabitinin karşılığı, denklemin gösterdiği gibi, her bir bileşenin ters yay sabitinin toplamına eşittir.

Kırmızı kan hücresinin yay sabiti, delikteki prob mikropipette radyaline bağlı olan olay hareketine göre hesaplanır. Kırmızı kan hücresi, kırmızı kan hücresi ile vasiyetname arasındaki dairesel temas alanı ve mikro pipet aspirasyon presi. BFP yol verileri, hedef mikro pipet hareketini bir PAs Translator tarafından kontrol eden ev yapımı bir sol görünüm sanal cihazı tarafından elde edilir.

Tam bir PFP dokunma döngüsü beş aşamadan oluşur. Approach.Impinge.Contact. Geri çek ve ayrış. Başlangıçta, Robusto APICS konumunun X siyah deshine'de 0'a eşittir olarak belirtildiğini vurgular.

Hedef daha sonra negatif veraset hareketine neden olmak için robusto'yu engellemek ve sıkıştırmak için bir parça veya çevirmen tarafından yönlendirilir. Kırmızı çizgi çizgisinde sıfırdan küçük X olarak not edersiniz. Geri çekme aşamasında, kırmızı busto apeksi X'ten sıfırdan küçük konuma geri döner ve X'e eşit olarak basınç fazı olarak adlandırılır.

Ligand reseptör molekül kompleksi arasında bir bağ oluşursa, kırmızı kan hücresi diğer pozitif yönden daha farklı olacaktır. Sıfırdan büyük bu X dönemi, geri çekme aşamasının geri çekme aşaması olarak adlandırılır. Geri çekme aşaması, bağlanma molekülünün yay sabitini belirlemek için en kritik kısımdır.

BSP veri toplama platformunu kullanarak zamana karşı zaman yol verilerini toplayın. Her deney genellikle 50 ila 200 dokunma döngüsü kaydeder, PFP veri analizi yazılımını açın. Sarı klasör simgesine tıklayın ve çift tıklayarak ilgili satır veri dosyasını seçin.

Programa geldik. Ardından olaylar arasında geçiş yapmak için yukarı ve aşağı ok düğmelerine tıklayın. Geçersiz olayları taramak için aykırı dışlama ölçütlerini kullanma.

Zaman biçimine zorlanan dışa aktarma veri türünü seçin ve uygun zaman aralığını seçin. Çizim verilerini dışa aktar düğmesine tıklayın. Verilen veriler varsayılan olarak metin dosyası olarak kaydedilir.

Bu metin dosyası iki veri sütunu içeriyor. Zaman babalarını temsil eden ilk sütun ve her zaman noktasında karşılık gelen gücü temsil eden ikinci sütun. Zorla yer değiştirme eğrisini elde etmek için elektronik tablolar yazılımını kullanarak kuvvete karşı zaman eğrisini çizin.

Her veri noktasının zaman değerini Willow Steel PSO hareketiyle çarpın. Her veri noktasından en küçük öteleme değerini çıkararak ilk veri noktasını sıfırla. Bu yatay dönüşüm sonraki bahar sabit hesaplamasını etkilemez.

Kuvvet ve yer değiştirme eğrisinde, yeni kuvvet eğimi tanımlanabilirse iki farklı aktör grubu farklıydı. Her biri basınç fazını ve 10 stil fazını temsil eder. Her veri grubuna bir regresyon satırı sığdır.

Daha dik eğimli hat, K1 olarak belirtilen bir kompresör fazındaki toplam yay sabitini temsil eder. Ve en küçük üst olan çizgi, bahsettiğim K2.As olarak belirtilen bu 10 stil aşamasındaki çizgiyi temsil eder, toplam yay sabiti, her bileşenin seri bahar sabitinin oğlunun karşılığıdır. Ritmin hücre moduna kompresif fazı sırasında moleküler yapıştırma gerilmez, bu nedenle moleküler bağlanma yay sabiti dikkate alınmaz. Hedef hücrenin yay sabiti, K1'in kompresör fazı sırasında toplam yay sabitini temsil ettiği görüntülenen denklem olarak tanımlanır.

Satmak için ritmin 10 stil aşamasında, toplam yay sabiti kırmızı kan hücresi moleküler bağının ters yay sabitinin güneşidir. Ve hedef hücre, K2'nin toplam yay sabitini temsil ettiği molekül yapıştırma yay sabitini hesaplamak için görüntülenen denklemi kullanın. 10 durak aşamasını okudun.

Beat to beat modunda, B deformasyonu ihmal edilebilir olduğundan, hedef hücre yay sabit yaklaşımının tersini tanımlayan terim sıfırdır, bu nedenle kompresör fazındaki toplam yay sabiti aşağıdaki denklem olarak gösterilen kırmızı kan hücresi yay sabitine eşdeğerdir. Gerilme fazında, moleküler bağlanmanın yay sabiti, aşağıdaki denklem olarak gösterilen kırmızı kan hücresinin etkisi çıkarılarak hesaplanabilir. Yan rüzgar bütünleştirici tutum B, Beta 3 kompleksi, K562 hücresi ve Febrifugine bütünleştirici tutum B Beta üç kompleksinin yay sabitlerini toplayın, newton veya nanometre ölçeğinde türetilmiş yay sabitlerinin ortalama ve standart sapması hesaplayın.

Artık VFD verilerinden ölçüm ve yay sabiti gereksinimlerinin neler olduğunu daha iyi anlamanız gerekir. Beat to cell modu ile beat to beat modu arasındaki farklar fark edilmelidir. Farklı molekül sunum hizmeti, yay sabiti ölçüsünde farklı savunmalara sahip olacaktır.

Sonuç olarak, bu adım adım prosedür, BFP kullanılarak moleküler yay sabit analizinin nasıl gerçekleştirildiğini açıklar. BFP veri toplama ve DFS analizini tek bir bilgisayar dinlenme programına otomatikleştirmek ve entegre etmek için gelecekteki çabaların yapılacağını öngörüyoruz. Tüm BFP işlem veri analizini daha kullanıcı dostu ve yüksek hale getirir.