Name: Tüp bebek pankreas soylarına doğru İnsan Diş Pulpası Kök Hücrelerinin İndüksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Keşfedin, insülin üreten hücrelere dönüştürme için integratif ve non-integratif protokollerle insan diş pulpası kök hücrelerinin (hDPSCs) pankreas soylarına yönlendirilmesini. Bu yöntem, tip I diyabet tedavisinde kök hücre tabanlı terapiler için umut vadeden bir alternatif sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

SK, WR ve QDL, Chulalongkorn Üniversitesi Veteriner Kök Hücre ve Biyomühendislik Araştırma Birimi, Ratchadaphiseksomphot Bağış Fonu tarafından desteklendi. TO ve PP, Chulalongkorn Akademik İlerlemesi tarafından2. CS, VeterinerLik Fakültesi, Chulalongkorn Akademik İlerlemesi2.

Bu çalışma Helsinki Bildirgesi'ne uygun olarak gerçekleştirildi ve Chulalongkorn Üniversitesi Diş Hekimliği Fakültesi İnsan Araştırma Etik Kurulu tarafından onaylandı. İnsan DPSC'leri (hDC'ler), yirmilik diş sorunları nedeniyle hem premolarlardan hem de azı dişlerinden çıkarılan insan diş hamuru dokularından izole edildi. Onaylı bir protokol (HREC-DCU 2018/054) kapsamında hastalardan bilgilendirilmiş onam alınmıştır.
1. Bütünleştirici indüksiyon protokolü
<ol><li>PDX1 taşıyan lentiviral vektörün hazırlanması
	<ol>
<li>Viral paketleme için insan embriyonik böbrek (HEK) 293FT hücreleri kullanın. Dulbecco'nun Modifiye Kartal Orta (DMEM) hücrelerinde %10 fetal sığır serumu (FBS), %1 L-glutamin ve %1 Antibiyotik-Antimykotik ile desteklenmiş bu hücrelerin kültür ve bakımı.</li>
		<li>Kalsiyum fosfat transfeksiyon sistemi kullanarak HEK293FT hücrelerine ambalaj ve zarf plazmidlerinin her biri için 10 μg ve hedeflenen gen plazmidlerinin 20 μg'si eş-transfeksiyon ile PDX1-lentivirüs vektörleri oluşturun, örneğin psPAX2, pMD2. G ve insan pWPT-PDX111. Enfeksiyon sırasında hücrelerin% 80-% 90 birleştiğinden emin olun.</li>
		<li>Lentiviral parçacıklar içeren ortamı transfeksiyondan sonra 48 ve 72 saat arasında toplayın.</li>
		<li>Toplanan ortamı 0,45 μm filtreden geçirin; virüsleri 100 kDa nominal moleküler ağırlık kesme (NMWCO) santrifüj filtre ile konsantre eder.</li>
	</ol></li>
	<li>PDX1 aşırı ifade<ol>
<li>%70-80 birleştirilmiş 3-5 hDPSC pasajı kullanın. Hücre sayacı kullanarak hücreleri deneyin ve sayın. Tohum 1 x 106 hDPSC 60 mm doku kültürü ile işlenmiş bir çanak üzerine ve bir gecede kuluçkaya yaslayın.</li>
		<li>24 saat sonra, 1.1.4 adımından elde edilen taze virüs parçacıklarını, istenen enfeksiyon çokluğunda (MOI) polibrenin önceden işlenmiş hücrelerini (4 μg / mL polibren, 37 ° C'nin altında 30 dk ve% 5 CO2)transdüse etmek için ekleyin. Örneğin, bu durumda, kullanılan MOI 20'dir. Hücre kültürü inkübatöründeki hücreleri % 5 CO 2 ile 37 °C'de24saat boyunca koruyun.</li>
		<li>24 saat enfeksiyon süresinden sonra, viral parçacıklar içeren ortamı atın. Taze kültür medyası ekleyin ve hücreleri 48 saat büyütmeye devam edin. Tüm kültürler 37 °C ve% 5 CO2'detutulur.</li>
		<li>İndüksiyon adımına geçmeden önce transfected hücrelerin toplam morfolojisini kontrol edin. PDX1 transdüksiyon gen ekspresyon analizi ile doğrulanır (Ek Şekil 1). NOT: Sonraki adımlara geçmeden önce mikroskop altında hücre morfolojisini kontrol edin.</li>
		<li>Mikroçevrimsel indüksiyon yaklaşımı olarak üç adımlı bir indüksiyon protokolünü (adım 1.3) hasat edin ve devam edin.</li>
	</ol></li>
	<li>Üç adımlı indüksiyon protokolü NOT: Üç aşamalı indüksiyon protokolü, sırasıyla serumsuz ortam (SFM)-A, SFM-B ve SFM-C kullanarak hDC'lerin kesin endoderm, pankreas endoderm/endokrin ve pankreas beta hücreleri/IPC'lere pankreas farklılaşması serisi ile sonuçlandı.<ol>
<li>Kültür ortamını atın ve transdüklenmiş hDPSC'leri 1x fosfat tamponlu çözelti (PBS) ile yıkayın.</li>
		<li>Hücrelere% 0.25 tripsin-EDTA çözeltisi ekleyin ve 37 ° C' de 1 dakika kuluçkaya yaslanın, % 5 CO2.</li>
		<li>Trypsin etkinliğini durdurmak için kültür ortamını ekleyin ve tek hücre süspansiyonunu almak için hücreleri hafifçe yıkayın. Hücreleri ve aliquot 1 x 106 hücreleri her toplama tüpüne sayın.</li>
		<li>Hücre süspansiyonu 468 x g 'da (Göreli Santrifüj Kuvveti: RCF), 4 °C'de 5 dakika santrifüj edin. Üstnatant atın ve hücre pelet kaydedin.</li>
		<li>Peleti ilk pankreas indüksiyon ortamının 3 mL'sinde, yani serumsuz ortamda (SFM)-A. Hücreleri düşük bir bağlanma kültürü plakasına (60 mm) yeniden koyun. Hücreleri 3 gün boyunca 37 °C ve% 5 CO2'de sakla. NOT: Bir sonraki adıma geçmeden önce ters mikroskop altında hücre morfolojisini gözlemleyin.</li>
		<li>SFM-A'yı çıkarın ve ikinci indüksiyon ortamının 3 mL'si, yani SFM-B ekleyin. Hücreleri önümüzdeki 2 gün boyunca 37 °C,% 5 CO2'desakla. NOT: Bir sonraki adıma geçmeden önce ters mikroskop altında hücre morfolojisini gözlemleyin.</li>
		<li>SFM-B'yi çıkarın ve üçüncü indüksiyon ortamının 3 mL'si yani SFM-C ekleyin. %5 CO2ile 37 °C'de tutulan bir hücre kültürü inkübatöründe hücreleri önümüzdeki 5 gün boyunca koruyun. Ortamı her 48 saat değiştirin. 5 gün sonra morfolojilerini gözlemleyin. NOT: Her indüksiyon ortamı açıklandığı gibi farklı reaktiflerle desteklenmiştir; SFM-A: %1 sığır serum albümini (BSA), 1x insülin transferin-selenyum (ITS), 4 nM activin A, 1 nM sodyum bütirat ve 50 μM beta-mercaptoethanol; SFM-B: %1 BSA, 1x ITS ve 0,3 mM taurin; ve SFM C: %1,5 BSA, 1x ITS, 3 mM taurin, 100 nM glukagon benzeri peptit (GLP)-1, 1 mM nikotinamid ve 1x esansiyel olmayan amino asitler (NEAs).</li>
		<li>Her adımdan sonra hücre morfolojisini ters mikroskop altında kontrol ettiğinizi unutmayın. Hücreler daha fazla bir araya gelecek ve koloniler olarak yüzecek.</li>
		<li>Daha fazla analiz için hücre kolonilerini toplayın. Koloni morfolojisi ve büyüklüğü olup olmadığını kontrol edin. Pankreas gen belirteci ekspresyon analizi ve fonksiyonel analiz yapın (Glikoz uyarılmış C-peptit salgı tahlil).</li>
	</ol></li>
</ol>2. Bütünleştirici olmayan indüksiyon protokolü
NOT: Bütünleştirici olmayan protokol, IPC'leri mikroçevrimsel indüksiyon yaklaşımı8,9olarak üç adımlı indüksiyon işlemiyle teslim etmek için omurga protokolüdür.
<ol><li>Pasaj 3-5 hDC'leri %70-%80 izdiahta kullanın.</li>
	<li>Kültür ortamını atın ve hDC'leri 1x PBS ile yıkayın.</li>
	<li>Hücrelere% 0.25 tripsin-EDTA çözeltisi ekleyin ve 37 ° C, 5% CO2'de1 dakika kuluçkaya yaslayın.</li>
	<li>Tripsin aktivitesini durdurmak için kültür ortamını ekleyin ve tek hücre süspansiyonu elde etmek için hücreleri hafifçe pipetleyin. Her toplama tüpüne hücreleri ve aliquot 1 x10 6 hücreleri sayın.<ol>
<li>Hücre süspansiyonu 468 x g (RCF), 4 °C, 5 dk'da santrifüj. Üstnatant atın.</li>
		<li>Peletin SFM-A'da yeniden depolanarak düşük ataşman kültür plakasına (60 mm) tohumlayın. Hücreleri 3 gün boyunca 37 °C ve% 5 CO2'de kültüre edin. Hücre morfolojisini ters mikroskop altında kontrol edin.</li>
		<li>SFM-A'yı çıkarın, SFM-B (Gün 3) ekleyin ve sonraki 2 gün boyunca hücreleri 37 °C, % 5 CO2altında sakleyin.</li>
		<li>SFM-B'yi çıkarın, SFM-C (Gün 5) ekleyin ve ardından hücreleri 37 °C, % 5 CO2altında önümüzdeki 5 gün boyunca koruyun. SFM-C her 48 saat değiştirilir. NOT: Her indüksiyon ortamı açıklandığı gibi farklı reaktiflerle desteklenmiştir; SFM-A: %1 BSA, 1x ITS, 4 nM activin A, 1 nM sodyum bütirat ve 50 μM beta-mercaptoethanol; SFM-B: %1 BSA, 1x ITS ve 0,3 mM taurin; ve SFM C: %1,5 BSA, 1x ITS, 3 mM taurin, 100 nM GLP-1, 1 mM nikotinamid ve 1x NEAS.</li>
		<li>Her adımdan sonra ve 10. NOT: Hücreler daha toplu hale gelecek ve koloniler olarak yüzecektir.</li>
		<li>Daha fazla analiz için hücre kolonilerini toplayın. Koloni morfolojisi ve büyüklüğü olup olmadığını kontrol edin. Pankreas gen belirteci ekspresyon analizi ve fonksiyonel analiz yapın (Glikoz uyarılmış C-peptit salgı tahlil).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Cho, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IDF+diabetes+atlas%3A+Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2017+and+projections+for+2045%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Research+and+Clinical+Practice%22%5BJournal%5D)">IDF diabetes atlas: Global estimates of diabetes prevalence for 2017 and projections for 2045.</a> Diabetes Research and Clinical Practice. 138, 271-281 (2018).</li>
<li>Danaei, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((National%2C+regional%2C+and+global+trends+in+fasting+plasma+glucose+and+diabetes+prevalence+since+1980%3A+systematic+analysis+of+health+examination+surveys+and+epidemiological+studies+with+370+country-years+and+2.7+million+participants%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">National, regional, and global trends in fasting plasma glucose and diabetes prevalence since 1980: systematic analysis of health examination surveys and epidemiological studies with 370 country-years and 2.7 million participants.</a> Lancet. 378 (9785), 31-40 (2011).</li>
<li>Diabetes Care. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimizing+hypoglycemia+in+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Minimizing hypoglycemia in diabetes.</a> Diabetes Care. 38 (8), 1583(2015).</li>
<li>Health Quality Ontario. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+transplantation%3A+an+evidence-based+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Ontario+Health+Technology+Assessment+Series%22%5BJournal%5D)">Islet transplantation: an evidence-based analysis.</a> Ontario Health Technology Assessment Series. 3 (4), 1-45 (2003).</li>
<li>Brennan, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+follow-up+of+the+Edmonton+protocol+of+islet+transplantation+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Long-term follow-up of the Edmonton protocol of islet transplantation in the United States.</a> American Journal of Transplantation. 16 (2), 509-517 (2016).</li>
<li>Korsgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+encapsulation%3A+Physiological+possibilities+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Islet encapsulation: Physiological possibilities and limitations.</a> Diabetes. 66 (7), 1748-1754 (2017).</li>
<li>Kuncorojakti, S., Srisuwatanasagul, S., Kradangnga, K., Sawangmake, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-Producing+Cell+Transplantation+Platform+for+Veterinary+Practice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Insulin-Producing Cell Transplantation Platform for Veterinary Practice.</a> Frontiers in Veterinary Science. 7, 4(2020).</li>
<li>Sawangmake, C., Nowwarote, N., Pavasant, P., Chansiripornchai, P., Osathanon, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+feasibility+study+of+an+in+vitro+differentiation+potential+toward+insulin-producing+cells+by+dental+tissue-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">A feasibility study of an in vitro differentiation potential toward insulin-producing cells by dental tissue-derived mesenchymal stem cells.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 452 (3), 581-587 (2014).</li>
<li>Sawangmake, C., Rodprasert, W., Osathanon, T., Pavasant, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+protocols+for+an+in+vitro+generation+of+pancreatic+progenitors+from+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Integrative protocols for an in vitro generation of pancreatic progenitors from human dental pulp stem cells.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 530 (1), 222-229 (2020).</li>
<li>Kuncorojakti, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alginate%2FPluronic+F127-based+encapsulation+supports+viability+and+functionality+of+human+dental+pulp+stem+cell-derived+insulin-producing+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Engineering%22%5BJournal%5D)">Alginate/Pluronic F127-based encapsulation supports viability and functionality of human dental pulp stem cell-derived insulin-producing cells.</a> Journal of Biological Engineering. 14, 23(2020).</li>
<li>Ritz-Laser, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectopic+expression+of+the+beta-cell+specific+transcription+factor+Pdx1+inhibits+glucagon+gene+transcription%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Ectopic expression of the beta-cell specific transcription factor Pdx1 inhibits glucagon gene transcription.</a> Diabetologia. 46 (6), 810-821 (2003).</li>
<li>Pampusch, M. S., Skinner, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transduction+and+expansion+of+primary+T+cells+in+nine+days+with+maintenance+of+central+memory+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Transduction and expansion of primary T cells in nine days with maintenance of central memory phenotype.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (157), (2020).</li>
<li>Fraga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+influencing+transfection+efficiency+of+pIDUA%2Fnanoemulsion+complexes+in+a+mucopolysaccharidosis+type+I+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Factors influencing transfection efficiency of pIDUA/nanoemulsion complexes in a mucopolysaccharidosis type I murine model.</a> International Journal of Nanomedicine. 12, 2061-2067 (2017).</li>
<li>Balak, J. R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+ex+vivo+lentiviral+transduction+of+primary+human+pancreatic+exocrine+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Highly efficient ex vivo lentiviral transduction of primary human pancreatic exocrine cells.</a> Scientific Reports. 9 (1), 15870(2019).</li>
<li>Balaji, S., Zhou, Y., Opara, E. C., Soker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combinations+of+Activin+A+or+nicotinamide+with+the+pancreatic+transcription+factor+PDX1+support+differentiation+of+human+amnion+epithelial+cells+toward+a+pancreatic+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Reprogramming%22%5BJournal%5D)">Combinations of Activin A or nicotinamide with the pancreatic transcription factor PDX1 support differentiation of human amnion epithelial cells toward a pancreatic lineage.</a> Cellular Reprogramming. 19 (4), 255-262 (2017).</li>
<li>Spaeth, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+a+novel+role+for+the+Pdx1+transcription+factor+in+islet+%CE%B2-Cell+maturation+and+proliferation+during+weaning%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Defining a novel role for the Pdx1 transcription factor in islet β-Cell maturation and proliferation during weaning.</a> Diabetes. 66 (11), 2830-2839 (2017).</li>
<li>Bastidas-Ponce, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxa2+and+Pdx1+cooperatively+regulate+postnatal+maturation+of+pancreatic+%CE%B2-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Foxa2 and Pdx1 cooperatively regulate postnatal maturation of pancreatic β-cells.</a> Molecular Metabolism. 6 (6), 524-534 (2017).</li>
<li>Zhu, Y., Liu, Q., Zhou, Z., Ikeda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDX1%2C+Neurogenin-3%2C+and+MAFA%3A+critical+transcription+regulators+for+beta+cell+development+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">PDX1, Neurogenin-3, and MAFA: critical transcription regulators for beta cell development and regeneration.</a> Stem Cell Research & Therapy. 8 (1), 240(2017).</li>
<li>Ma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+and+transcriptome+profiling+of+progenitor-like+colonies+derived+from+adult+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Culturing and transcriptome profiling of progenitor-like colonies derived from adult mouse pancreas.</a> Stem Cell Research & Therapy. 8 (1), 172(2017).</li>
<li>Tiedemann, H. B., Schneltzer, E., Beckers, J., Przemeck, G. K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hrabe+de+Angelis%2C+M.+Modeling+coexistence+of+oscillation+and+Delta%2FNotch-mediated+lateral+inhibition+in+pancreas+development+and+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Theoretical+Biology%22%5BJournal%5D)">Hrabe de Angelis, M. Modeling coexistence of oscillation and Delta/Notch-mediated lateral inhibition in pancreas development and neurogenesis.</a> Journal of Theoretical Biology. 430, 32-44 (2017).</li>
<li>Xu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+culture+promotes+the+differentiation+of+human+dental+pulp+mesenchymal+stem+cells+into+insulin-producing+cells+for+improving+the+diabetes+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional culture promotes the differentiation of human dental pulp mesenchymal stem cells into insulin-producing cells for improving the diabetes therapy.</a> Frontiers in Pharmacology. 10, 1576(2019).</li>
<li>Grimm, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+under+microgravity+conditions-use+of+stem+cells+and+specialized+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Development%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering under microgravity conditions-use of stem cells and specialized cells.</a> Stem Cells and Development. 27 (12), 787-804 (2018).</li>
<li>Tran, R., Moraes, C., Hoesli, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+clustering+enhances+PDX1+and+NKX6.1+expression+in+pancreatic+endoderm+cells+derived+from+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Controlled clustering enhances PDX1 and NKX6.1 expression in pancreatic endoderm cells derived from pluripotent stem cells.</a> Scientific Reports. 10 (1), 1190(2020).</li>
<li>Li, X. Y., Zhai, W. J., Teng, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signaling+in+pancreatic+development%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Notch signaling in pancreatic development.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17 (1), 48(2015).</li>
<li>Motoyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+with+specific+soluble+factors+promotes+the+functional+maturation+of+transcription+factor-mediated%2C+pancreatic+transdifferentiated+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Treatment with specific soluble factors promotes the functional maturation of transcription factor-mediated, pancreatic transdifferentiated cells.</a> PLoS One. 13 (5), 0197175(2018).</li>
<li>Baldan, J., Houbracken, I., Rooman, I., Bouwens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+pancreatic+acinar+cells+dedifferentiate+into+an+embryonic+progenitor-like+state+in+3D+suspension+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Adult human pancreatic acinar cells dedifferentiate into an embryonic progenitor-like state in 3D suspension culture.</a> Scientific Reports. 9 (1), 4040(2019).</li>
<li>Wedeken, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+murine+pancreatic+progenitors+require+epidermal+growth+factor+and+nicotinamide+for+self-renewal+and+differentiation+in+a+serum-+and+conditioned+medium-free+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Development%22%5BJournal%5D)">Adult murine pancreatic progenitors require epidermal growth factor and nicotinamide for self-renewal and differentiation in a serum- and conditioned medium-free culture.</a> Stem Cells and Development. 26 (8), 599-607 (2017).</li>
<li>Trott, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+culture+of+self-renewing+pancreatic+progenitors+derived+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Long-term culture of self-renewing pancreatic progenitors derived from human pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Reports. 8 (6), 1675-1688 (2017).</li>
<li>Kim, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+of+EMSC-islet+co-localizing+composites+for+xenogeneic+porcine+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Construction of EMSC-islet co-localizing composites for xenogeneic porcine islet transplantation.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 497 (2), 506-512 (2018).</li>
<li>Gauthaman, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extra-embryonic+human+Wharton%27s+jelly+stem+cells+do+not+induce+tumorigenesis%2C+unlike+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+BioMedicine+Online%22%5BJournal%5D)">Extra-embryonic human Wharton's jelly stem cells do not induce tumorigenesis, unlike human embryonic stem cells.</a> Reproductive BioMedicine Online. 24 (2), 235-246 (2012).</li>
<li>Schiesser, J. V., Wells, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+beta+cells+from+human+pluripotent+stem+cells%3A+are+we+there+yet%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Generation of beta cells from human pluripotent stem cells: are we there yet.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1311, 124-137 (2014).</li>
<li>Chmielowiec, J., Borowiak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+differentiation+and+expansion+of+human+pluripotent+stem+cell-derived+pancreatic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22The+Review+of+Diabetic+Studies%22%5BJournal%5D)">In vitro differentiation and expansion of human pluripotent stem cell-derived pancreatic progenitors.</a> The Review of Diabetic Studies. 11 (1), 19-34 (2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

MSC'lerden daha yüksek IPC üretimi elde etmek diyabet tedavisinde önemli bir rol oynar. Bütünleştirici protokolün kritik adımları, transdüksiyon için kullanılacak hücrelerin kalitesine ve transdüklenmiş hücrelerin kalitesine dayanır. Başarılı transdüksiyon için kontrol edilmesi gereken bazı hücre gereksinimleri, hücre sağlığını, hücre bankacılığı yönetimini ve hücrelerin mitotik olarak aktif bir durumda olmasını sağlamaktır. Ayrıca, transdüklenmiş hücrelerin canlılığını izlemek de önemli bir rol oynar. Daha az başarılı t...

Diabetes mellitus devam eden küresel bir endişe kaynağıdır. Uluslararası Diyabet Federasyonu (IDF) raporunda, diyabetin küresel prevalansının 2000 yılında 151 milyondan 2015 yılında 415 milyona yükseleceği tahmin edilmektedir1,2. Epidemiyoloji temelli en son çalışma, dünya çapında tahmini diyabet prevalansının 2017'de 451 milyondan 2045'te 693 milyona yükseleceğini öngörtü1. Edmonton protokolü kullanılarak pankreas adacık naklinin başarısı ilk olarak 2000 yılında, tip I diyabetik hastalarda endojen insülin üretiminin sürdürülmesi ve normoglisemik durumun stabilize edildiği gösterildiğinde gösterilmiştir3. Ancak, Edmonton protokolünün uygulanması hala bir darboğaz sorunuyla karşı karşıyadır. Tip I diyabetli her hasta en az 2-4 adacık bağışçısı gerektirdiğinden, kadavra pankreas donörlerinin sınırlı sayıda olması ana konudur. Ayrıca, immünsüpresif ajanların uzun süreli kullanımı hayatı tehdit eden yan etkilere neden olabilir4,5. Bunu ele almak için, son on yılda diyabet için potansiyel bir tedavinin geliştirilmesi, esas olarak çeşitli kök hücre kaynaklarından etkili insülin üreten hücrelerin (IPC' ler) üretimine odaklanmıştır6.
Kök hücreler, beta hücrelerinin kaybından kaynaklanan diyabet tipi I de dahil olmak üzere birçok hastalıkta alternatif bir tedavi haline geldi. İP'lerin nakli, bu hastalarda kan şekerinin kontrol altına için yeni umut verici yöntemdir7. BU makalede, IPC'ler oluşturmak için bütünleştirici ve bütünleştirici olmayan indüksiyon protokolleri olmak üzere iki yaklaşım sunulmuştur. İndüksiyon protokolü, olgunlaşmış ve işlevsel IPC'leri elde etmek için doğal pankreas gelişim sürecini taklit etti8,9.
Bu çalışma için hDCPCs, MSC yüzey belirteci tespiti için akış sitometrisi, çok satırlı farklılaşma potansiyeli ve rt-qPCR ile karakterize edildi ve sap özelliği ve proliferatif gen belirteçlerinin (veri gösterilmedi) ekspresyonunu belirlemek için8,9,10. hDC'ler kesin endoderm, pankreas endoderm, pankreas endokrin ve pankreas beta hücreleri veya IPC'lere indüklenmiştir (Şekil 1), sırasıyla7. Hücreleri indüklamak için omurga protokolü olarak üç aşamalı indüksiyon yaklaşımı kullanılmıştır. Bu protokole bütünleştirici olmayan protokol denirdi. Bütünleştirici protokol durumunda, temel pankreas transkripsiyon faktörü PDX1,hDC'lerde aşırı ifade edildi ve ardından üç adımlı bir farklılaşma protokolü kullanılarak hDC'lerde aşırı ifade edilen PDX1 indüksiyonu yapıldı. Bütünleştirici olmayan ve bütünleştirici protokol arasındaki fark, PDX1'in bütünleştirici olmayan protokolde değil, bütünleştirici protokolde aşırı ifade olmasıdır. Pankreas farklılaşması bu çalışmada bütünleştirici ve bütünleştirici olmayan protokoller arasında karşılaştırıldı.

<table><tbody><tr><td><güçlü>Hücre Kültürü</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik-Antimikotik</td><td>Thermo Fisher Scientific Corporation, ABD</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Corning&reg; 60 mm TC ile işlenmiş Kültür Kabı</td><td>Corning&reg;</td><td></td><td></td>430166</tr><tr><td>Dulbecco' s Modifiye Eagle Medium (DMEM)</td> <td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td><td>12800017</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)</td> <td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX & trade;</td><td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) tozu, pH 7.4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3813-10PAK</td> Steril DDI Tripsin-EDTA (% 0.25) <td>ile 1 L PBS çözeltisi hazırlamak için bir paket kullanılır</td></tr>. <tr><td></td><td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Lentiviral Vektör Taşıyan PDX1 Hazırlama< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amicon&reg; Ultra-15 Santrifüj Filtre</td><td>Merck Millipore, ABD</td><td>UFC910024</td><td></td></tr><tr><td>İnsan pWPT-PDX1 plazmid</td><td>Addgene</td><td>12256</td><td>Didier Trono'dan Hediye; http://n2t.net/addgene:12256; RRID: Addgene_12256</td></tr><tr><td>Millex-HV Şırınga Filtre Ünitesi, 0.45&nbsp; &mikro; m</td><td>Merck Millipore</td><td>SLHV033RB</td><td></td></tr><tr><td>pMD2.G plazmid</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td>Didier Trono'dan Hediye; http://n2t.net/addgene:12259; RRID: Addgene_12259</td></tr><tr><td>Polibren Enfeksiyonu / Transfeksiyon Reaktifi</td><td>Merck Millipore</td><td>TR-1003-G</td><td></td></tr><tr><td>psPAX2 plazmid</td><td>Addgene</td><td>12260</td><td>Didier Trono'dan Hediye; http://n2t.net/addgene:12260; RRID:</td></tr> <tr><td>Addgene_12260<güçlü>Üç aşamalı İndüksiyon Protokolü</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Activin A Rekombinant İnsan Proteini</td><td>Merck Millipore</td><td>GF300</td><td></td></tr><tr><td>Beta-merkaptoetanol</td><td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini (BSA, Cohn fraksiyonu V, yağ asidi içermez)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>A6003</td><td></td></tr><tr><td>Glukagon benzeri peptit (GLP)-1</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G3265</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin-Transferrin-Selenyum (ITS)</td><td>İnvitrojen</td><td>41400-045</td><td></td></tr><tr><td>Nikotinamid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>Esansiyel Olmayan Amino Asitler (NEAA'lar)</td><td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>İşlenmemiş hücre kültürü kabı, 60mm</td><td>Eppendorf</td><td>30701011</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bütirat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B5887</td><td></td></tr><tr><td>Taurin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T0625</td><td></td></tr></tbody></table>

tüp bebek pankreas soylarına doğru İnsan diş pulpası kök hücrelerinin İndüksiyonu

In vitro Induction of Human Dental Pulp Stem Cells Toward Pancreatic Lineages

2000 yılı itibariyle, tip I diabetes mellitus tedavisinde Edmonton protokolünü kullanarak pankreas adacık naklinin başarısı hala bazı engellerle karşı karşıya kaldı. Bunlar arasında sınırlı sayıda kadavra pankreas bağışçısı ve immünsüpresanların uzun süreli kullanımı saydır. Mezenkimal kök hücreler (MSC' ler) adacık benzeri hücre neslinin alternatif bir kaynağı olarak potansiyel bir aday olarak kabul edilmiştir. Önceki raporlarımız, insan diş hamuru kök hücrelerini (hDC'ler) insülin üreten hücrelere (IPC' ler) ayırt etmek için indüksiyon protokollerinin oluşturulmasını başarıyla ortaya koymuştur. Bununla birlikte, indüksiyon verimliliği büyük ölçüde değişti. Bu yazıda, hDPSC türevli IPC'ler (hDPSC-IPC'ler) sunmak için bütünleştirici (mikroçevresel ve genetik manipülasyon) ve bütünleştirici olmayan (mikroçevronmental manipülasyon) indüksiyon protokolleri yoluyla hDPSC'lerin pankreas indüksiyon verimliliğinin karşılaştırılması gösterilmiştir. Sonuçlar, 3 boyutlu koloni yapısı, verim, pankreas mRNA belirteçleri ve çok dozajlı glikoz zorluğu üzerine fonksiyonel özellik açısından hem indüksiyon yaklaşımları için belirgin indüksiyon verimliliği göstermektedir. Bu bulgular, klinik olarak uygulanabilir bir IPC'lerin ve pankreas soy üretim platformunun gelecekteki kurulmasını destekleyecektir.

Bu makalede, her iki indüksiyon protokolünün sonuçları karşılaştırılmıştır. Her iki indüksiyon protokolünün diyagramları Şekil 2A,C'de gösterilmiştir. Her iki protokolde de değerlendirme ışık mikroskobu altında yapıldı ve görüntüler ImageJ ile analiz edildi. hDC'ler her iki indüksiyon protokolünde de indüksiyonun ilk gününden itibaren koloni benzeri yapılar oluşturabildiler. Koloninin morfolojisi yuvarlak ve yoğundu ve tüm koloniler indüksiyon dönemi boyunca kültür damarları...

Bu protokol, insan diş pulpası kök hücrelerini (hDC'ler) pankreas soylarına in vitroolarak ayırt etmek için iki farklı indüksiyon protokolü arasında bir karşılaştırma sunar: bütünleştirici protokol ve bütünleştirici olmayan protokol. Bütünleştirici protokol daha fazla insülin üreten hücre (IPC) üretir.

Tüp bebek pankreas soylarına doğru İnsan Diş Pulpası Kök Hücrelerinin İndüksiyonu

As of 2000, the success of pancreatic islet transplantation using the Edmonton protocol to treat type I diabetes mellitus still faced some obstacles. ...

Bu video, insan diş hamuru kök hücrelerinin pankreas soylarına doğru in vitro indüksiyonunu gösteriyor. Kök hücreler, beta hücrelerinin biyolagingine neden olan diyabet tipi I de dahil olmak üzere birçok hastalıkta alternatif bir tedavi verir. İnsülin üreten hücrelerin nakli, yaşam boyu neden olmak için yeni umut verici yöntem olacaktır.Bu videoda, bütünleştirici ve bütünleştirici olmayan indüksiyon protokolü de dahil olmak üzere insülin üreten hücre üretmek için iki yaklaşım açıklanmıştır. Ve bu bölümde, insülin üreten hücrelerin insan diş hamuru kök hücresinden indüklenerek entegrasyon protokolü açıklanmıştır. İndüksiyon protokolü için doğal pankreas gelişim sürecini karıştırmak içindir.Doğal ve fonksiyonel insülin üreten hücreleri elde etmek. Diş pulpası kök hücreleri gibi mezenkimal kök hücrelerden insülin üreten hücreler üretmek için çok adımlı indüksiyon protokolü kullanılır. Mezenkimal kök hücreler sırasıyla kesin endoderm, pankreas endodermi, pankreas endokrin ve daha sonra pankreas beta hücre veya insülin üreten hücreler kelimelerinde kullanılır.Hücreleri indüklamak için omurga protokolü olarak üç adımlı indüksiyon yaklaşımı kullanılır. Bütünleştirici protokol, temel pankr

in-vitro-induction-human-dental-pulp-stem-cells-toward-pancreatic

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Çalışmada insan embriyonik kök hücreleri pankreas farklılaşma uyarması yönlendirilmiş bir farklılaşma yaklaşım anlatılmaktadır. Büyük önem insülin salgılayan hücrelerin içine pankreas ataları edilen insan embriyonik kök hücre bulma olduğu endotel hücre ko-kültür aracılık olgunlasmasi.

İnsan Embriyonik endotel hücre Co-kültür aracılık Olgunlaşma Bir Yönetmen Farklılaşma Yaklaşım Pankreas insülin üreten hücreler için Kök Hücre

Yöntemi kullanarak insan dental pulpa kök hücrelerinin (hDPSCs) izolasyonu ve karakterizasyonu...

İnsan Diş Pulp Kök Hücre İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Karşılaştırmalı Farklılaşma İki Farklı Yöntemler Kullanılarak Daimi Dişler türetilen

Burada, alt uygulamalar ve diğer farklılıklar iyileştirilmesi için kesin endoderm doğru kararlı farklılaştırılmış insan embriyonik kök hücrelerinin saflaştırılması için bir yöntem açıklanmaktadır.

İnsan Embriyonik Kök Hücreleri Yaratılan Endoderm Hücrelerinin Saflaştırılması Hızlı ve Etkin Yöntem

Burada in vitro NKX6-1 + pankreas atalarıdır insan embriyonik kök hücreleri ayırt etmek için 4 aşamalı bir protokol açıklar. Bu protokol, insan pluripotent kök hücre hatları çeşitli uygulanabilir.

Pluripotent Verimli Farklılaşma NKX6-1 için Kök Hücreler<sup&gt; +</sup&gt; Pankreas Progenitörler

Burada, pankreas/oniki parmak bağırsağı homeobox protein 1+ insan pluripotent kök hücreler (hPSCs) ayırt etmek için ayrıntılı bir iletişim kuralı mevcut (PDX1+) hücreleri pankreas soy nesil için alan koloni sigara türü monolayer büyüme üzerinde tek hücre ayrışmış. Bu yöntem homojen hPSC elde edilen hücreleri, genetik manipülasyon üreten ve eleme için uygundur.

Verimli üretimi, pankreas/oniki parmak bağırsağı Homeobox Protein 1+ Posterior Foregut/pankreas ataları hPSCs yapışma kültürlerde üzerinden

Burada insan diş Pulp kök hücre izolasyon ve yayılması için bir protokol Nöronal Farklılaşma süreci sırasında prion protein ifade değerlendirmek için mevcut.

Yalıtım, yayma ve insan diş Pulp kök hücrelerin Nöronal Farklılaşma sırasında Prion Protein ifade

Mevcut protokol, düzlemsel tek katmanlı insan pluripotent kök hücrelerinden (hPSC'ler) türetilen pankreas progenitörlerinde PDX1 ve NKX6.1 transkripsiyon faktörlerinin birlikte ekspresyonunu arttırmak için geliştirilmiş bir yöntemi açıklamaktadır. Bu, taze matrisin yenilenmesi, hücre yoğunluğunun manipüle edilmesi ve endodermal hücrelerin ayrışmasıyla elde edilir.

İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinin 2D Kültür Sisteminde Pankreatik Beta Hücre Öncüllerine Farklılaşması

Bu makale, eksplant kültür yöntemini kullanarak dental pulpa kök hücrelerinin birincil kültürünü oluşturmak ve bu hücrelerin ICSCRT yönergelerine dayalı olarak karakterizasyonunu yapmak için adım adım bir kılavuz sağlar. Bu protokol ile izole edilen hücreler, daha sonraki uygulamalar için mezenkimal kök hücreler olarak kabul edilebilir.

Dental pulpa kök hücrelerinin birincil kültürü

Bu makale, β hücreli benzeri hücrelerin yönlendirilmiş farklılaşması ve fonksiyonel analizi için bir protokol sunmaktadır. İnsülin üreten pankreas hücreleri oluşturmadan önce insan pluripotent kök hücreleri için optimal kültür koşullarını ve pasajlarını tanımladık. Altı aşamalı farklılaşma, kesin endoderm oluşumundan, glikoza yanıt olarak insülin salgılayan fonksiyonel β hücreli hücrelere doğru ilerler.

İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden Fonksiyonel Pankreas İnsülin Salgılayan Hücreler Üretmek için Optimize Edilmiş Protokol

Bu protokol, multipotent kök hücrelerin enzimatik sindirim yoluyla diş pulpasından ekstraksiyonunu, kültürünü ve korunmasını vurgular. Ek olarak, osteoblastlara, adipositlere ve kondrositlere farklılaşma potansiyellerini göstererek süreçte hassasiyet ve tutarlılığın önemini vurgular.

İnsan Süt ve Daimi Dişlerinden Dental Pulpa Kök Hücrelerinin İzolasyonu, Kültürü ve Karakterizasyonu

Keşfedin, insülin üreten hücrelere dönüştürme için integratif ve non-integratif protokollerle insan diş pulpası kök hücrelerinin (hDPSCs) pankreas soylarına yönlendirilmesini. Bu yöntem, tip I diyabet tedavisinde kök hücre tabanlı terapiler için umut vadeden bir alternatif sunar.

Tüp bebek pankreas soylarına doğru İnsan Diş Pulpası Kök Hücrelerinin İndüksiyonu

Daha fazla video keşfet