Manyetik Levitasyon Kullanılarak Hücresel Yoğunlukların ve Antijenik Özelliklerin Nicelleştirilmesi

Bu teknik, kısa bir süre içinde çok az veya hiç manipülasyon yapılmadan sadece yoğunluğa dayalı olarak çeşitli işlemlerden geçen çeşitli hücre tiplerinin ve hücrelerin ayrılmasına izin verir. Bu yöntemin ana avantajları, minimal invaziv olması, küçük hacimler gerektirmesi, hızlı sonuçlar sağlaması, klasik okumalara bağlı olmaması ve uzman personelin gerekli olmamasıdır. Bu teknik, anemi ve sepsis gibi birden fazla hastalığın tespiti için uygulanabilir.

Başlamak için rhesus faktörü pozitif kan donörün parmağını delmek için tek tıklamayla lancing cihazını kullanın ve bir mililitre DPBS'de 10 mikrolitre kan toplayın. Plazma zarını floresan olarak lekelemek ve 15 dakika boyunca 37 santigrat derecede kuluçkaya yatmak için rhesus faktör pozitif hücrelerinin bir mililitre süspansiyonunda bir mikrolitre floresan boya ekleyin. Hücreleri 15 saniye boyunca 5.600 kez G'de döndürerek peletlayın ve bir mililitre DPBS kullanarak pelezi üç kez yıkayın.

Peletin bir mililitre HBSS'de kalsiyum ve magnezyum ile yeniden biriktirin. Rhesus faktörü negatif kan donörün parmağını delmek ve iki mikrolitre kan toplamak için tek tıklamayla geğme cihazını kullanın. Sadece boncuk içeren deneysel tüpü hazırlamak için, kalsiyum ve magnezyumlu 174 mikrolitre HBSS, bir mikrolitre IgG kontrol boncukları, mililitre başına 1,2 gram yoğunluğa sahip bir mikrolitre ağır boncuk ve 500 milimoler gadolinyumun 24 mikrolitresini ekleyin.

IgG içeren deneysel kontrol tüpünü hazırlamak için, kalsiyum ve magnezyum içeren 172 mikrolitre HBSS, bir mikrolitre IgG kontrol boncukları, bir mikrolitre ağır boncuk, bir mikrolitre rhesus faktörü negatif kan, bir mikrolitre lekeli rhesus faktörü pozitif kan süspansiyonu ve 500 milimolar gadolinyum 24 mikrolitre ekleyin. Örnek deneysel tüpü hazırlamak için, kalsiyum ve magnezyumlu 172 mikrolitre HBSS, bir mikrolitre anti-RhD kaplı boncuk, bir mikrolitre ağır boncuk, bir mikrolitre rhesus faktörü negatif kan, bir mikrolitre lekeli rhesus faktörü pozitif kan süspansiyonu ve 500 milimolar gadolinyum 24 mikrolitre ekleyin. Manyetik kaldırma cihazını kurun.

Ve numunenin 50 mikrolitresini tüp dolana kadar kılcal bir tüpe yükleyin. Kılcal borunun uçlarını, kabarcık olmamasını sağlayan bir kılcal dolgu macunu ile kapatın. Kılcal boruyu üst ve alt mıknatıslar arasındaki kılcal kapağa yerleştirin, sahneyi ayarlayın ve optimum görüntüleme için odaklanın.

Hücrelerin ve boncukların manyetik denge konumlarına yerleşmeleri için yaklaşık beş ila 20 dakika bekleyin. Bu protokol kullanılarak, kan hücreleri manyetik levitasyon cihazı kullanılarak yükselme yüksekliğine bağlı olarak ayrıldı. Yoğunluk yükselme yükseklikleri ve boyut referansları sağlamak için düşük ve yüksek yoğunluklu boncuklar kullanılmıştır.

Polimorfonuklear hücreler kırmızı kan hücrelerinin üzerinde 21 milimolar gadolinyum iyon konsantrasyonuyla dalgalanıyordu. Eski kan hücreleri 60 milimoler gadolinyum iyon konsantrasyonuyla havaya uçuyordu. Kırmızı kan hücreleri, polimorfonukleer hücreler ve lenfositler, iç yoğunluklarına göre 40 milimoler gadolinyum iyon konsantrasyonunda ayrıldı.

Kırmızı kan hücrelerinde IgG ve anti-RhD antikor kaplı boncuklar kullanılarak rhesus faktör antijeni saptandı. Boncuk kırmızı hücre kompleksleri IgG kontrol örneğinde üretilmedi, ancak rhesus faktörü pozitif boncuklar tarafından yakalanan floresan lekeli kırmızı kan hücreleri tespit edildi. Anti-RhB'nin rhesus faktör pozitif hücrelere bağlanması, merkezde ilişkisiz boncukların ve negatif kırmızı kan hücrelerinin aralıklı yoğunluğunda bir boncuk hücresi kompleksi oluşturdu.

Ayrıca, yayılan floresan gözlemlenerek karmaşık oluşum doğrulandı. CR1 ve CD47 antikorları ile kaplanmış yüksek ve düşük yoğunluklu boncuklar arasında oluşan B boncuk kompleksleri, hücre dışı veziklinlerden elde edilen kırmızı kan hücresinin varlığını gösterir. Kabarcıkları tanıtmadan kılcal damarları kapatmak en zorlu adımdır ve pratik gerektirir.

Bu yöntem, özellikle kırmızı kan hücresi hastalıklarına odaklanan hematoloji için içgörü sağlayabilir.