Name: Murine Pulmoner Kapakçığın Korelatif Görüntülemesi için Cerrahi ve Örnek İşleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Öğrenin, fare pulmoner kapakçığının çok ölçekli yapısal analizi için hidrostatik fiksasyon ve korelatif görüntüleme yöntemlerini. μCT ve SBF-SEM ile hücresel ve ekstraselüler matris organizasyonunu detaylı inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma kısmen R01HL139796 ve R01HL128847 tarafından CKB ve RO1DE028297 ve DWM için CBET1608058 hibeleri tarafından desteklenmektedir.

Bu çalışmada hayvanların kullanımı AR13-00030 protokolü kapsamında Nationwide Çocuk Hastanesi kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitesine uygun olarak yapıldı.
1. Pulmoner kapak eksizyonu
<ol><li>Fare diseksiyonu için gereken gerekli araçları otoklavlav. Buna ince makas, mikro tokalar, mikro vasküler kelepçeler, toka uygulanan kelepçe, mikroneedle tutucular, yay makası ve retraktörler dahildir.</li>
	<li>Operasyondan önce tüm fareleri en az 2 hafta boyunca alıştırın. Yaklaşık 1 yaşında olan C57BL/6 fareleri kafeslerinden çıkarın ve tartın, ardından bir ketamin/ ksilazin kokteyli (3:1 ketamin:ksilazin, g başına 0.01 mL) aşırı doz ile ötenazi.</li>
	<li>Fareyi bir tepsiye dorsal recumbence pozisyonuna getirin ve uzuvlarını bantla sabitleyin. Güvenli hale getirildikten sonra torakotomiyi gerçekleştirin.<ol>
<li>Fazla yağ dokusunu ve fasyayı çıkararak kalbi açığa çıkarın.</li>
		<li>Sağ kulakçık çıkarın ve oda sıcaklığında salin çözeltisi (%0,9 NaCl) ile sol ventrikülden perfüzyon. Perfüzyon 30 sn üzerinde yaklaşık 20 mL almalıdır. Bu, farenin exsanguination ile sonuçlanır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Üstün vena kava, alt vena kava, pulmoner arter ve aort keserek tüm kalbi çıkarın. Pulmoner arter için özel dikkat edilmelidir. Ventrikülo-arteryal kavşaktan yaklaşık 2 mm yukarıda kesin, çünkü bu basınçlandırma kanalı görevi görecektir.</li>
	<li>Odaları atmosferik basınca maruz bırakmak için sol ve sağ ventrikülleri çıkarın. Pulmoner gövdenin yapısının ventriküllerin çıkarılmasından etkilenmemesi gerektiğinden emin olun.</li>
</ol>2. Pulmoner valf basıncı sabitlenerek
<ol><li>Pulmoner arterli anastomoz basınçlandırma tüpü, broşürlerin ve pulmoner gövdenin büyük hareketlerini karşılamak için çin-tübüler kavşak ile borunun ucu arasında yaklaşık 1 mm mesafe bırakır.</li>
	<li>Rezervuarı benzer bir fizyolojik basınca yükseltin ve tuzlu su çözeltisi ile doldurun. Tıkanıklık veya hava kabarcığı olmadığından emin olmak için akış sistemini test edin.</li>
	<li>Anastomosed pulmoner valf içine bir stopcock takın ve çıkış yolunu değiştirerek borudan yeterli akış sağlayın (yani hava kabarcıkları yok). Akış yeterli olduğunda, çıkışı anastomosed pulmoner valfe geçirin ve pulmoner gövdenin basınçlandırılmasını sağlayın. Bu pulmoner gövde distensiyonu ile tanımlanır.</li>
	<li>Pulmoner gövdenin basınçlandırılması onaylandıktan sonra, tuzlu çözelti temizlenene kadar birincil fiksatif çözeltiyi (%1,25 glutaraldehit, 0,15 M kaodilatta%1,0 paraformaldehit) yavaş yavaş bir araya getir. Bu, tuzlu su çözeltisinin rezervuar kapasitesinin yaklaşık% 25'i olan bir kısmının çıkarılması ve birincil fiksatif ile değiştirilmesiyle yapılır. DİkKAT: Kullanılan fiksatifler (paraformaldehit ve glutaraldehit) oldukça zehirlidir ve güvenliği sağlamak için uygun kişisel koruyucu ekipman (KKD) giyilmelidir.</li>
	<li>Kurumasını önlemek için doku örneğinin üzerine fiksatif ıslatılmış bir gazlı bez yerleştirin.</li>
	<li>Sabitleyiciyi 3 saat boyunca perfuse edin, sabit bir basınç sağlamak için rezervuarı gerektiği gibi yeniden doldurun. Fiksasyon boyunca, pulmoner valf kimyasal fiksasyon nedeniyle küçülmesi nadir değildir. Bu durumda, fizyolojik basıncı korumak için rezervuarı sürekli olarak birincil fiksatif ile yeniler.</li>
	<li>Kalp kapakçığını kullanıma kadar 4 °C'de sabitleyici çözeltide saklayın. Numuneler ayırt edilebilir bir fark olmadan 1 haftaya kadar saklandı.</li>
</ol>3. En blok örnek boyama ve gömme15,16
DİkKAT: Bu bölümde kullanılan lekelenme reaktifleri (potasyum ferrosiyanid, osmiyum tetroksid, tiyokarbohidrazid, kurşun aspartat ve uranil asetat) oldukça toksiktir ve aşırı dikkatli bir şekilde ele alınmalıdır. Duman kaputu ve uygun KKD kullanılması tavsiye edilir.
<ol><li>Boy -ama<ol>
<li>Sabit kalp kapakçığı örneğini soğuk 0,15 M kakadodylate tampon ile 5 dakika yıkayın. Yıkamayı iki kez daha tekrarlayın.</li>
		<li>Kalp kapakçığını% 1.5 potasyum ferrosiyanür, 0.15 M kakadodylat, 2 mM kalsiyum klorür ve% 2 osmiyum tetroksit çözeltisine tamamen batırın, 1 saat boyunca buz üzerinde.</li>
		<li>Numune inkübasyon yaparken, 0,1 g TCH'yi 10 mL ddH 2 O'da çözerek tiyokarbohidrazid(TCH)çözeltisi hazırlayın. TCH'nin tamamen çözüldüğüne emin olmak için periyodik olarak hafifçe ajite edin. Çözeltiyi kullanımdan hemen önce 0,22 μm şırınna filtresinden geçirin.</li>
		<li>Numuneleri oda sıcaklığında ddH 2 O ile5dakika boyunca ddH2O'lik bir tüpe yerleştirerek yıkayın ve kabı sallayarak hafifçe çalkalayın. Bu işlemi üç kez tekrarlayın.</li>
		<li>Oda sıcaklığında 20 dakika boyunca filtrelenmiş TCH çözeltisine yerleştirin. 3.1.4 adımında açıklandığı gibi oda sıcaklığı ddH2O ile yıkama adımını üç kez (her biri 5 dakika) gerçekleştirin.</li>
		<li>Tamamlandığında, numuneyi oda sıcaklığında 30 dakika boyunca% 2 osmiyum tetroksit içine yerleştirin. Daha sonra oda sıcaklığı ddH2O ile her biri 5 dakika boyunca toplam üç kez tekrar yıkayın.</li>
		<li>Numuneyi 4 °C'de bir gecede %1 uranil asetat içinde kuluçkaya yatırın.</li>
		<li>Bu süre zarfında, 10 mL aspartik asit stok çözeltisinde 0.066 g kurşun nitrat çözeltisi yapın. 1 N KOH ile pH'ı 5,5'e ayarlayın. Kurşun nitrat çözmek için çözeltiyi 60 °C fırına yerleştirin.</li>
		<li>Gece kuluçkadan sonra, 3.1.4 adımında açıklandığı gibi yıkama adımını gerçekleştirin. Üç kez tekrarlayın. Ardından, kalp kapak dokusunu 60 °C fırında 30 ° C fırında 3.1.8 adımdan kurşun aspartat çözeltisinde 30 dakika boyunca kuluçkaya yatırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dehidratasyon<ol>
<li>Dokuları oda sıcaklığında 5 dakika ddH2O ile yıkayın.</li>
		<li>DDH 2 O'da %20, %50, %70, %90 ve%100etanol taze çözümler yapın.</li>
		<li>Kalp kapak dokusunu susuzmak için. Her biri 5 dakika boyunca buz üzerinde% 20, % 50, % 70 ve% 90 etanol sonraki tedavileri gerçekleştirin. Daha sonra 5 dakika boyunca buz üzerinde% 100 etanol iki sonraki tedavileri gerçekleştirin.</li>
		<li>Dokuyu 10 dakika boyunca buz gibi asetona taşıyın. Daha sonra 10 dakika boyunca oda sıcaklığında taze aseton yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Katıştırma<ol>
<li>Reçine karışımını (bkz. Malzeme Tablosu) üreticininözelliklerine göre yapın: 11,4 g bileşen A, 10 g bileşen B, 0,3 g C bileşeni ve 0,05-0,1 g bileşen D. Başlangıçta C ve D bileşenlerini eklemeden önce bileşenlerin her birini 60 °C'ye ısıtarak A ve B bileşenlerini karıştırın. Karışım, C ve D bileşenlerinin eklenmesiyle kehribar rengine dönüşecektir. Düzgün bir şekilde karıştırıldığında düzgün olacaktır.</li>
		<li>Hacim oranları 25:75, 50:50 ve 75:25 reçine:aseton olan karışımlar yapın. İyice karıştırın.</li>
		<li>Dokuları 25:75, 50:50 ve 75:25 reçine:aseton karışımının sonraki tedavilerine oda sıcaklığında 2 saat yerleştirin.</li>
		<li>Dokuları oda sıcaklığında gece boyunca% 100 reçineye yerleştirin.</li>
		<li>Ertesi gün, dokuları oda sıcaklığında 2 saat boyunca taze% 100 reçineye yerleştirin.</li>
		<li>Kalp kapak dokularını gömme bir kapsüle aktarın, taze% 100 reçine ile değiştirin ve tedavi etmek için 48 saat boyunca 60 ° C fırına yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Aşağıda gösterildiği gibi korelatif görüntüleme gerçekleştirin.</li>
</ol>4. Mikro bilgisayarlı tomografi görüntüleme
<ol><li>Reçine numune bloğunu yapıştırıcılı bir μCT numune tutucusuna monte haline (tutkal veya çift taraflı bant iyi çalışır).</li>
	<li>Tutucuyu μCT haznesine yerleştirin ve rekolteyi tutucunun hareketi olmayacak şekilde vidalayarak sahneye sabitlayın. Tarama sırasındaki örnek hareketi görüntü kalitesini düşürecektir.</li>
	<li>Simgeye çift tıklayarak μCT kullanıcı arabirimini açın. Projeler'in yanındaki + işaretini seçerek proje ekleyin ve gerekli alanları doldurun.</li>
	<li>Bu oluşturulduktan sonra, oluşturulan projeyi bulun ve üzerine tıklayarak seçin. Bu ikinci bir sütun açılır Edinmeler. Edinmeler'in yanındaki + işaretini seçin ve gerekli alanları doldurun.</li>
	<li>Ön paneldeki veya μCT'deki arming düğmesine basarak oda kapılarını kapatın ve sistemi silahlandırma. NOT: Sistem, başarılı bir ısınma prosedürünün ardından x ışınlarını otomatik olarak kapatacaktır. Düğmeyi seçerek x ışınlarını açın.</li>
	<li>Sahne dönüşünü, numunenin dönüşünün merkezi monitörün merkezinden sapmayacak şekilde ayarlayın (yani, örnek tüm tarama için görüş alanı içindedir). Bu deneme için kullanılan sistem için bu, aşağıda ayrıntılı olarak belirtildiği gibi açılan sekmenin altındaki ilgi alanı (ROI) aşamasının ayarlanmasını içerir.<ol>
<li>Dönüş açısını 0° olarak ayarlayarak ve numunenin kenarını işaretleyerek yatırım getirisi aşaması ayarını ayarlayın. Numune daha sonra 180° döndürülür ve numunenin kenarı tekrar işaretlenir.</li>
		<li>Yatırım getirisi aşaması x ekseni konumunu, örneğin kenarı bu iki uç nokta arasında olacak şekilde ayarlayın. Y konumu için 90° ve 270° dönüş açıları için bu işlemi tekrarlayın.</li>
		<li>Numunenin dönmesinin kenarların görüş alanının dışına çıkmasına neden olması durumunda, numunenin kenarları yukarıdaki ayarlanan açılarda görünene ve kaba bir ROI aşaması ayarı yapılıp yapılına kadar μCT ihtiyacının büyütmesini azaltın.</li>
		<li>Alt büyütmede ayarlandıktan sonra, büyütmeyi artırmak için numuneyi veya dedektörü hareket ettirın ve yatırım getirisi konumları iyi ayarlanabilir. NOT: Hizalamayı sağlamak için bu işlemin tekrarlanması gerekebilir. Uygun hizalama, tüm numune dönüş açılarında çok az veya hiç yatay hareket gösteren bir örnekle sonuçlanır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Üreticinin yazılımını kullanarak μCT'yi istenen tarama parametrelerine ayarlayın. Bu parametreler tüp potansiyeli, tüp akımı, dedektör mesafesi, numune mesafesi, pozlama süresi, yörünge ve projeksiyon sayısını içerir (bu çalışmada kullanılan μCT alma parametreleri için Tablo S1'e bakın). NOT: Açık alan ve karanlık alan taramaları gibi kalibrasyon parametreleri, aksi belirtilmedikçe üreticinin teknik özelliklerinde tutulmalıdır. Örneğin, bir örnek çok büyükse ve sistem örneği alan görünümünün dışına taşıyamıyorsa, temiz alan kalibrasyon taramaları gerçekleştirmek için numunenin kaldırılması gerekir.</li>
	<li>Parametreler ayarlandıktan sonra, Zaman Tahmini düğmesine basarak tarama süresinin yaklaşık bir tahmini görülebilir. Taramaya başlamak için Başlat düğmesini seçin.</li>
	<li>Tarama tamamlandıktan sonra, x ışınlarının kapalı olduğundan emin olun, rekolteyi sökün ve numuneyi μCT odasından dikkatlice çıkarın.</li>
</ol>5. Örnek işleme ve görüntü korelasyonu
<ol><li>μCT projeksiyonlarını, üretici tarafından sağlanan yazılımla filtrelenmiş bir geri projeksiyon algoritması kullanarak yeniden oluşturun (bkz. Malzeme Tablosu).<ol>
<li>Ekranın üst kısmındaki Keşif sekmesini seçin. Proje ve Edinme sekmesini seçin.</li>
		<li>Filtre uygulanmış geri projeksiyonla ilgili keşif şablonu ilişkilendirmesini seçin. Keşif Başlat düğmesine basın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Görüntü işleme yazılımını kullanarak pulmoner vanayı tanımlayın ve segmentlere ayırın. Bu, pulmoner kapakçığın anatomisi hakkında önceden bilgi gerektirir17. Yüksek arteriyel basınçlarda, broşürler pulmoner kapakçığın lümenini kodlar ve bloke eder.</li>
	<li>Tarama yönüne ve örneğe göre dilimleme yönünü tanımlayın. Örneği, dilimleme yönünün istenen eksenle hizalanarak yeniden yönlendirin.</li>
	<li>Yüksek çözünürlüklü görüntüleme için ilgi çekici bölgeleri belirleyin. Bu deneyde broşür ve arterio-valvüler kavşağın göbeği (ortası) seçilmiştir.</li>
	<li>Fazla reçineyi çıkarın ve büyük malzeme parçaları için jilet veya zımparalama veya daha ince parçalar için mikrotom ile numune alın.</li>
	<li>İlgi çekici bir yere geldikten sonra, konumu onaylamak için fiziksel numuneyi sanal μCT dilimleriyle karşılaştırın. Bu, kesitteki anatomik özellikler karşılaştırılarak yapıldı.</li>
</ol>6. Seri blok yüz taramalı elektron mikroskopisi18
<ol><li>Numunenin kesitini SBF-SEM'e uyum sağlayacak şekilde yaklaşık 2,0 x 1,5 x 1,8 mm azaltacak şekilde azaltın.</li>
	<li>Kırpılmış numuneyi epoksi kullanarak SBF-SEM alüminyum saplama üzerine monte edin.</li>
	<li>Numune bloğunu 35 nm altınla kapla. Eşit bir kaplama katmanı uygulamak için numuneyi platformda döndürün.</li>
	<li>SBF-SEM haznesini havalandır ve bıçak bıçağının yüksekliğini mikroskop ösantrik yüksekliğine ayarlayın.</li>
	<li>Örneği yerleştirin ve örnek saplamayı seviyelendirmeyin.</li>
	<li>Şarjı önlemek için düşük vakum koşullarında ve geri tetektör dedektörüyle görüntü (SBF-SEM alma parametreleri için Tablo S2'ye bakın).</li>
	<li>Otomatik yazılım kullanarak farklı büyütmelerde birden fazla ilgi çekici bölgeyi görüntüleyin ve dikin (bkz. Malzeme Tablosu).</li>
</ol>

<ol><li>Azari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+review+of+the+cost-effectiveness+of+heart+valve+replacement+with+a+mechanical+versus+biological+prosthesis+in+patients+with+heart+valvular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Failure+Reviews%22%5BJournal%5D)">A systematic review of the cost-effectiveness of heart valve replacement with a mechanical versus biological prosthesis in patients with heart valvular disease.</a> Heart Failure Reviews. 25 (3), 495-503 (2020).</li>
<li>Ng, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2-dependent+pathogenesis+of+mitral+valve+prolapse+in+a+mouse+model+of+Marfan+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">TGF-β-dependent pathogenesis of mitral valve prolapse in a mouse model of Marfan syndrome.</a> Journal of Clinical Investigation. 114 (11), 1586-1592 (2004).</li>
<li>Cheek, J. D., Wirrig, E. E., Alfieri, C. M., James, J. F., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+activation+of+valvulogenic%2C+chondrogenic%2C+and+osteogenic+pathways+in+mouse+models+of+myxomatous+and+calcific+aortic+valve+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Differential activation of valvulogenic, chondrogenic, and osteogenic pathways in mouse models of myxomatous and calcific aortic valve disease.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 52 (3), 689-700 (2012).</li>
<li>Jiménez-Altayó, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stenosis+coexists+with+compromised+%CE%B11-adrenergic+contractions+in+the+ascending+aorta+of+a+mouse+model+of+Williams-Beuren+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Stenosis coexists with compromised α1-adrenergic contractions in the ascending aorta of a mouse model of Williams-Beuren syndrome.</a> Scientific Reports. 10 (1), 889(2020).</li>
<li>Thacoor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitral+valve+prolapse+and+Marfan+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Congenital+Heart+Disease%22%5BJournal%5D)">Mitral valve prolapse and Marfan syndrome.</a> Congenital Heart Disease. 12 (4), 430-434 (2017).</li>
<li>McAnulty, P., Dayan, A., Ganderup, N. -C., Hastings, K., Dawson, H. A Comparative Assessment of the Pig, Mouse and Human Genomes. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcAnulty%2C+P+%22The+Minipig+in+Biomedical+Research%22">The Minipig in Biomedical Research</a>. , CRC Press. (2011).</li>
<li>Hinton, R. B., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+valve+structure+and+function+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Heart valve structure and function in development and disease.</a> Annual Review of Physiology. 73, 29-46 (2011).</li>
<li>Hinton, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+remodeling+and+organization+in+developing+and+diseased+aortic+valves%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix remodeling and organization in developing and diseased aortic valves.</a> Circulation Research. 98 (11), 1431-1438 (2006).</li>
<li>Sacks, M. S., Merryman, W. D., Schmidt, D. E., David Merryman, D. W., Schmidt, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+biomechanics+of+heart+valve+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">On the biomechanics of heart valve function.</a> Journal of Biomechanics. 42 (12), 1804-1824 (2009).</li>
<li>Sacks, M. S., Yoganathan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+valve+function%3A+a+biomechanical+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+B-Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Heart valve function: a biomechanical perspective.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B-Biological Sciences. 362 (1484), 1369-1391 (2007).</li>
<li>Morales, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-CT+scouting+for+transmission+electron+microscopy+of+human+tissue+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Micro-CT scouting for transmission electron microscopy of human tissue specimens.</a> Journal of Microscopy. 263 (1), 113-117 (2016).</li>
<li>Sacks, M. S., Smith, D. B., Hiester, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aortic+valve+microstructure%3A+Effects+of+transvalvular+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research%22%5BJournal%5D)">The aortic valve microstructure: Effects of transvalvular pressure.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 41 (1), 131-141 (1998).</li>
<li>Ayoub, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+valve+biomechanics+and+underlying+mechanobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Physiology%22%5BJournal%5D)">Heart valve biomechanics and underlying mechanobiology.</a> Comprehensive Physiology. 6 (4), 1743-1780 (2016).</li>
<li>Stella, J. A., Liao, J., Sacks, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-dependent+biaxial+mechanical+behavior+of+the+aortic+heart+valve+leaflet%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Time-dependent biaxial mechanical behavior of the aortic heart valve leaflet.</a> Journal of Biomechanics. 40 (14), 3169-3177 (2007).</li>
<li>Korn, E. D., Weisman, R. A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((loss+of+lipids+during+preparation+of+amoebae+for+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+%28BBA%29%2FLipids+and+Lipid+Metabolism%22%5BJournal%5D)">loss of lipids during preparation of amoebae for electron microscopy.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA)/Lipids and Lipid Metabolism. 116 (2), 309-316 (1966).</li>
<li>Tapia, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-contrast+en+bloc+staining+of+neuronal+tissue+for+field+emission+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">High-contrast en bloc staining of neuronal tissue for field emission scanning electron microscopy.</a> Nature Protocols. 7 (2), 193-206 (2012).</li>
<li>Hinton, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+heart+valve+structure+and+function%3A+Echocardiographic+and+morphometric+analyses+from+the+fetus+through+the+aged+adult%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mouse heart valve structure and function: Echocardiographic and morphometric analyses from the fetus through the aged adult.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 294 (6), 2480-2488 (2008).</li>
<li>Denk, W., Horstmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+block-face+scanning+electron+microscopy+to+reconstruct+three-dimensional+tissue+nanostructure%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+Biology%22%5BJournal%5D)">Serial block-face scanning electron microscopy to reconstruct three-dimensional tissue nanostructure.</a> Plos Biology. 2 (11), 1900-1909 (2004).</li>
<li>Lincoln, J., Florer, J. B., Deutsch, G. H., Wenstrup, R. J., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ColVa1+and+ColXIa1+are+required+for+myocardial+morphogenesis+and+heart+valve+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">ColVa1 and ColXIa1 are required for myocardial morphogenesis and heart valve development.</a> Developmental Dynamics. 235 (12), 3295-3305 (2006).</li>
<li>Hamatani, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+investigation+of+congenital+bicuspid+aortic+valve+stenosis%2C+compared+with+atherosclerotic+tricuspid+aortic+valve+stenosis+and+congenital+bicuspid+aortic+valve+regurgitation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Pathological investigation of congenital bicuspid aortic valve stenosis, compared with atherosclerotic tricuspid aortic valve stenosis and congenital bicuspid aortic valve regurgitation.</a> PLoS One. 11 (8), (2016).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Ventriküllerin çıkarılması iki amaca hizmet eder. Birincisi, ventrikül tarafını atmosferik basınca maruz bırakmak, böylece sadece akciğer kapakçığının arteryal tarafından kapanmak için bir transvalvüler basınç uygulamak gerekir ve ikincisi, pulmoner gövdenin bükülmesini önlemek için kararlı bir taban sağlar. Basınçlandırma sırasında, pulmoner gövde radyal ve alt yönden dağılır, bükülmeye eğilimli hale getirir ve pulmoner gövdenin çökmesine neden olur. Pulmoner vananın tuzlu su çözeltisi ile önceden yüklenmesi, basınçland...

Pulmoner kapak (PV), sağ ventrikül ile pulmoner arter arasında tek yönlü kan akışını sağlamaya yarar. Pulmoner kapak malformasyonları doğumsal kalp hastalığının çeşitli formları ile ilişkilidir. Konjenital kalp kapak hastalığının (HVD) mevcut tedavisi, bir hastanın ömrü boyunca birden fazla invaziv ameliyat gerektirebilen valvüler onarım veya kapak değişimidir1. Kalp kapakçığının işlevinin, genellikle yapı-fonksiyon korelasyon olarak adlandırılan yapısından türetildiği yaygın olarak kabul edilmiştir. Daha spesifik olarak, kalbin geometrik ve biyomekanik özellikleri işlevini belirler. Mekanik özellikler, sırayla, ECM'nin bileşimi ve organizasyonu tarafından belirlenir. Murine kalp kapakçıklarının biyomekanik özelliklerini belirlemek için bir yöntem geliştirerek, transgenik hayvan modelleri ECM'nin kalp kapak fonksiyonu ve disfonksiyonu üzerindeki rolünü sorgulamak için kullanılabilir2,3,4,5.
Murine hayvan modeli uzun zamandır moleküler çalışmalar için standart olarak kabul edilmektedir, çünkü transgenik modeller farelerde diğer türlere kıyasla daha hazırdır. Murine transgenik modeller kalp kapakçığı ile ilgili hastalıkları araştırmak için çok yönlü bir platform sağlar6. Bununla birlikte, hem geometriyi hem de ECM organizasyonunu karakterize etmek için cerrahi uzmanlık ve enstrümantasyon gereksinimleri, HVD araştırmalarının ilerlemesinde önemli bir engel olmuştur. Literatürdeki Hstolojik veriler, murine kalp kapakçığı hücre dışı matris içeriğine bir resim sağlar, ancak yalnızca 2B görüntüler şeklindedir ve 3D mimarisini tarif edemez7,8. Ek olarak, kalp kapakçığı hem mekansal hem de zamansal heterojendir, bu da örnekleme ve uygunluk düzeltilmezse ECM organizasyonu ile ilgili deneylerde sonuç çıkarmayı zorlaştırır. MRI veya 3D ekokardiyografi gibi geleneksel 3D karakterizasyon yöntemleri, ECM bileşenleri9,10'unçözümlenmesi için gerekli çözünürlüğü sağlamaz.
Bu çalışma, murine PV'nin hidrostatik transvalvüler basınçla uyumluluğunun sabitlenmesiyle kardiyak döngüye bağlı zamansal heterojenliğin ele alındığı tamamen korelatif bir iş akışını detaylandırmaktadır. Mekansal heterojenlik, ilgi çekici bölgeleri örneklemek ve farklı görüntüleme yöntemlerinden, özellikle μCT ve seri blok yüz tarama elektron mikroskopisinden farklı uzunluk ölçeklerinde veri setlerinin kaydedilmesiyle tam olarak kontrol edildi. Aşağı akış örneklemesine rehberlik etmek için μCT ile bu keşif yöntemi daha önce önerilmiştir, ancak pulmoner kapak zamansal varyasyon sergilediğinden, cerrahi seviye11'deek bir kontrol seviyesine ihtiyaç duyulmuştu.
Murine kalp kapak biyomekaniği tanımlayan in vivo çalışmalar seyrektir ve bunun yerine deformasyon davranışını tanımlarken hesaplamalı modellere dayanır. Nanometre uzunluğu ölçeğindeki yerel hücre dışı verilerin kalp kapakçığının geometrisi ve konumu ile ilgili olması kritik öneme sahiptir. Bu da, mevcut biyomekanik kalp kapak modellerini12, 13,14güçlendirmek için kullanılabilecek mekanik olarak katkıda bulunan ECM proteinlerinin ölçülebilir, mekansal olarak eşlenmiş dağılımlarını sağlar.

<table><tbody><tr><td>%25 glutaraldehit (aq)</td><td>EMS</td><td>16210</td><td>Birincil fiksatif bileşen</td></tr><tr><td>%0.9 sodyum klorür enjeksiyonu</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-4888-10</td><td></td></tr><tr><td>1 mL şırınga</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>10 mL şırınga</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>200 geçirmez etanol</td><td>EMS</td><td>15055</td><td></td></tr><tr><td>22G iğne</td><td>BD</td><td>305156</td><td></td></tr><tr><td>3 mL şırınga</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>3 musluk</td><td>Smiths Medical ASD, Inc.</td><td></td><td></td>MX5311L</tr><tr><td>%4 osmiyum tetroksit</td><td>EMS</td><td>19150</td><td>Boyama bileşeni</td></tr><tr><td>%4 paraformaldehit (aq)</td><td>EMS</td><td>157-4-100</td><td>Birincil fiksatif bileşen</td></tr><tr><td>Emilebilir hemostat</td><td>Ethicon</td><td>1961</td><td></td></tr><tr><td>Aseton</td><td>EMS</td><td>10012</td><td></td></tr><tr><td>Siyah poliamid monofilament sütür, 10-0</td><td>AROSurjik aletler Corporation</td><td></td><td></td>TI38402</tr><tr><td>Siyah poliamid monofilament sütür, 6-0</td><td>AROSurjik aletler Corporation</td><td>SN-1956</td><td></td></tr><tr><td>C57BL / 6 fareler</td><td>Jackson Laboratories</td><td>664</td><td>Yaklaşık 1 yo</td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10043-52-4</td><td></td></tr><tr><td>Forsep uygulayan kelepçe</td><td>FST</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>Pamuk uçlu aplikatörler</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>23-400-118</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 forsep</td><td>FST</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5/45 forseps</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 ince forsep</td><td>FST</td><td>11274-20</td><td></td></tr><tr><td>Durcupan ACM reçine</td><td>EMS</td><td>14040</td><td></td></tr><tr><td>İnce makas</td><td>FST</td> <td>gömmek için14028-10</td><td></td></tr><tr><td>Heliscan microCT</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Micro-CT</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin hidroklorür enjeksiyonu</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-2053</td><td></td></tr><tr><td>L-aspartik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>56-84-8</td><td>Boyama bileşeni</td></tr><tr><td>Kurşun nitrat</td><td>EMS</td><td>17900</td><td>Boyama bileşeni</td></tr><tr><td>düşük vakumlu geri saçılma dedektörü</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>VSDBS</td><td>SEM geri saçılma dedektörü</td></tr><tr><td>Mikro adson forsep</td><td>FST</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GP filtre, 0.22 um, PES 33mm, steril olmayan</td><td>EMD Millipore SLGP033NS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dokumasız şarkılar</td><td>McKesson Corp.</td><td>94442000</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum hekzasiyanoferrat(II) trihidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>14459-95-1</td><td>Boyama bileşeni</td></tr><tr><td>Potasyum hidroksit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1310-58-3</td><td></td></tr><tr><td>Basınç izleme hattı</td><td>Smiths Medical ASD, Inc.</td><td>MX562</td><td></td></tr><tr><td>Tuzlu su çözeltisi (steril% 0.9 sodyum klorür)</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-0138-22</td><td></td></tr><tr><td>Boyut 3 BEEM kapsül</td><td>EMS</td><td>69910-01</td><td>Gömme kabı</td></tr><tr><td>Sodyum kakodilat trihidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>6131-99-3</td><td>Tampon</td></tr><tr><td>Solibri ekartörler</td><td>FST</td><td>17000-04</td><td></td></tr><tr><td>Püskürtme, karbon ve e-kiriş kaplayıcı</td><td>Leica</td><td>EM ACE600</td><td>Altın kaplayıcı</td></tr><tr><td>Cerrahi mikroskop</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>Tiyokarbohidrazid (TCH)</td><td>EMS</td><td>21900</td><td>Boyama bileşeni</td></tr><tr><td>Tish iğne tutucu/forsep</td><td>Micrins</td><td>MI1540</td><td></td></tr><tr><td>Düzeltici</td><td>Wahl</td><td>9854-500</td><td></td></tr><tr><td>Uranil asetat</td><td>EMS</td><td>22400</td><td>Boyama bileşeni</td></tr><tr><td>Volumescope taramalı elektron mikroskobu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>VOLUMESCOPESEM</td><td>Seri Blok Yüz Taramalı Elektron Mikroskobu</td></tr><tr><td>Ksilazin steril çözeltisi</td><td>Akorn Inc.</td><td>NADA# 139-236</td><td></td></tr></tbody></table>

murine pulmoner kapakçığın korelatif görüntülemesi için cerrahi ve Örnek İşleme

Surgery and Sample Processing for Correlative Imaging of the Murine Pulmonary Valve

Kalp kapakçığı ile ilgili hastalığın (HVD) altında kalan nedenler zor bulunur. Murine hayvan modelleri HVD'yi incelemek için mükemmel bir araç sağlar, ancak yapıyı ve organizasyonu birden fazla uzunluk ölçeğinde doğru bir şekilde ölçmek için gereken cerrahi ve enstrümantal uzmanlık ilerlemesini engellemıştır. Bu çalışma, kalp kapakçığını farklı uzunluk ölçeklerinde tasvir etmek için murine diseksiyonu, en blok boyama, örnek işleme ve korelatif görüntüleme prosedürlerinin ayrıntılı bir açıklamasını sunmaktadır. Hidrostatik transvalvüler basınç, kalp kapak konformasyonunu kimyasal olarak sabitlenerek zamansal heterojenliği kontrol etmek için kullanıldı. Kalp kapakçığının geometrisini doğrulamak ve seri blok yüz taramalı elektron mikroskopisi (SBF-SEM) için gereken aşağı akış numune işleme için referans sağlamak için mikro bilgisayarlı tomografi (μCT) kullanılmıştır. Hücre dışı matrisin (ECM) yüksek çözünürlüklü seri SEM görüntüleri alındı ve kuruluşunun yerel bir 3D gösterimini sağlamak için yeniden inşa edildi. Daha sonra pulmoner kapak boyunca mekansal varyasyonun üstesinden gelmek için μCT ve SBF-SEM görüntüleme yöntemleri korelasyona uğramıştır. Sunulan çalışma sadece pulmoner kapak üzerinde olmasına rağmen, bu metodoloji biyolojik sistemlerdeki hiyerarşik organizasyonu tanımlamak için benimsenebilir ve birden fazla uzunluk ölçeğinde yapısal karakterizasyon için çok önemlidir.

Pulmoner arterin basınç tüpüne anastomozu Şekil 1A'dagösterilmiştir. Hidrostatik basınç uygulamasını takiben, pulmoner gövde, pulmoner valf broşürlerinin kapalı bir konfigürasyonda olduğunu gösteren radyal olarak(Şekil 1B)dağılır. Pulmoner kapak uyumu μCT ile doğrulandı. Bu durumda, broşürler coapt (kapalı) ve annulus dairesel (Şekil 2A). Şekil 2B,C, fiksasyon ( Şekil 2B ) veya arteriye...

Burada, brüt uygunluğu ve lokal hücre dışı matris yapılarını belirlemek için murine pulmoner valfin eksizyon, basınçlandırma, fiksasyon ve görüntüleme için korelatif bir iş akışı açıklıyoruz.

Murine Pulmoner Kapakçığın Korelatif Görüntülemesi için Cerrahi ve Örnek İşleme

The underlying causes of heart valve related-disease (HVD) are elusive. Murine animal models provide an excellent tool for studying HVD, however, the ...

Bu protokol önemlidir, çünkü murin pulmoner valfin yapı fonksiyonu ile ilgili soruları yanıtlamak için tasarlanmıştır, bu da doğasında bulunan heterojenliği nedeniyle genellikle zordur. Yapıyı birden fazla uzunluk ölçeğinde yakalamak için kontrollü fiksasyon ve korelatif görüntüleme kullanılmıştır. Yerel yüksek çözünürlüklü görüntüler daha sonra pulmoner kapakçık üzerindeki hassas anatomik konuma geri eşlenebilir.Prosedürü gösteren, Nationwide Çocuk Hastanesi Rejeneratif Tıp Merkezi Mikrocerrahi Direktörü Dr.Tai Yi olacak. İnce makas, mikrokaplar, mikrovasküler kelepçeler, forseps uygulayan kelepçe, mikroneedle tutucular, yay makası ve retraktörler dahil olmak üzere fare diseksiyonu için gerekli aletleri otomatik olarak kapatarak başlayın. Yetişkin bir C57BL/6 fareyi ötenazi yaptıktan sonra, bir tepsiye dorsal bir recumbent pozisyonuna yerleştirin, uzuvlarını bantla sabitleyin ve torakotomiyi gerçekleştirin.Fazla yağ dokusunu ve fasyayı çıkararak kalbi açığa çıkarın, ardından sağ kulakçık çıkarın ve sol ventrikülü oda sıcaklığında salin çözeltisi ile perfuse edin. Üstün vena kava, alt vena kava, pulmoner arter ve aort keserek tüm kalbi çıkarın ve basınçlandırma kanalı görevi görecek ventriküloatriyal kavşaktan yaklaşık iki milimetre yukarıda kesin. Odaları atmosferik basınca maruz bırakmak için sol ve sağ ventrikülleri çıkarın, ventrikülleri çıkararak pulmoner gövde yapısının etkilenmemesini sağlayın.Pulmoner arter ile anastomoz basınçlandırma tüpü, broşürlerin ve pulmoner gövdenin büyük hareketlerini karşılamak için sinotubular kavşak ile borunun ucu arasında yaklaşık bir milimetre mesafe bırakır. Rezervuarı benzer bir fizyolojik basınca yükseltin ve tuzlu su çözeltisi ile doldurun. Tıkanıklık veya hava kabarcığı olmadığından emin olmak için akış sistemini test edin.Anastomosed pulmoner valf içine bir stopcock takın ve çıkış yolunu değiştirerek borudan yeterli akışı sağlayın. Akış yeterli olduğunda, çıkışı anastomosed pulmoner valfe geçirin ve gövde distansiyonu ile tanımlanan pulmoner gövdenin basınçlandırılmasını sağlayın. Pulmoner gövdenin basınçlandırılmasını onayladıktan sonra, tuzlu çözeltinin rezervuar kapasitesinin% 25'i temizlenene kadar birincil fiksatif çözeltiyi kademeli olarak dahil edin.Kurumasını önlemek için doku örneğinin üzerine fiksatif ıslatılmış bir gazlı bez yerleştirin. Sabitleyiciyi üç saat boyunca perfuse, sabit bir basınç sağlamak için rezervuarı yeniden doldurun. Perfüzyondan sonra, kalp kapakçığını bir haftaya kadar kullanıma kadar dört santigrat derecede sabitleyici çözeltide saklayın.Boyama için, sabit kalp kapak örneğini üç kez soğuk 0.15 molar kakadot tamponu ile beş dakika yıkayın ve kalp kapakçığını 1.5 potasyum ferrosiyanür, 0.15 molar kakadot, iki milimoler kalsiyum klorür ve% 2 osmiyum tetroksit çözeltisine bir saat boyunca tamamen batırın. Numuneleri oda sıcaklığında çift damıtılmış su ile hafif ajitasyon ile beş dakika boyunca bir tüpe yerleştirerek yıkayın. Üç yıkamadan sonra, numuneyi oda sıcaklığında filtrelenmiş tiyokarbohidrazid çözeltisine yerleştirin.20 dakika sonra, numuneyi daha önce gösterildiği gibi suyla üç kez yıkayın. Daha sonra, numuneyi oda sıcaklığında% 2 osmiyum tetroksit içine yerleştirin. 30 dakika sonra, her biri beş dakika boyunca üç kez suyla yıkayın ve numuneyi dört santigrat derecede gece boyunca% 1 uranil asetat halinde kuluçkaya bırakın.Bu arada, kurşun nitrat çözeltisi hazırlayın. Ertesi gün, daha önce gösterildiği gibi yıkama adımını üç kez gerçekleştirin, ardından kalp kapak dokusunu 30 dakika boyunca 60 santigrat derecede kurşun aspartat çözeltisinde kuluçkaya yatırın. Örnekleri üç kez daha yıkayın, ardından kalp kapak dokularında her biri beş dakika boyunca buz üzerinde taze hazırlanmış 20, 50, 70 ve% 90 etanol ile seri bir dehidrasyon tedavisi yapın ve ardından% 100 etanol ile iki sonraki tedavi.Dehidrasyondan sonra, dokuları buz gibi asetona taşıyın, ardından 10 dakika boyunca oda sıcaklığında taze aseton içine yerleştirin. Gömme için reçine karışımını üreticinin özelliklerine göre yapın. Dokuları sonraki tedavilerde 25 ila 75, 50 ila 50 ve 75 ila 25 reçineyi aseton karışımına iki saat boyunca yerleştirin.Son olarak, dokuları bir gecede% 100 reçineye yerleştirin. Ertesi gün, dokuları taze% 100 reçineye yerleştirin. İki saat sonra, dokuları gömme bir kapsüle aktarın, taze% 100 reçine ekleyin ve tedavi etmek için 48 saat boyunca 60 santigrat derecelik bir fırına yerleştirin.Hidrostatik basıncın uygulanmasından önce ve sonra eksize edilmiş anastomozlu pulmoner arter burada gösterilmiştir. Pulmoner gövde, pulmoner valf broşürlerinin kapalı bir konfigürasyonda olduğunu gösteren radyal olarak distends. Mikro bilgisayarlı tomografi pulmoner kapak onayını doğruladı.Broşürler kapatıldı ve annulus dairesel iken, fiksasyon veya arteriyel çökme ile çeşitli derecelerde yetersiz pulmoner kapak basınçlandırması gözlendi. Mikro CT ses işleme sanal kesitleri, dilimleme yönünü ve konumunu doğrulamak için optik görüntülerle ilişkilendirildi. Numune bloğu istenen yerde ve yöndeyken bir broşür içinde yerel bir bölgede yüksek çözünürlüklü SBF SEM görüntüleri çekildi.Mikro CT ses düzeyi işleme sanal dilimi, düşük çözünürlüklü ve yüksek çözünürlüklü SBF SEM görüntüleri arasındaki ilişkili görüntüler burada gösterilmiştir. Pulmoner kapakçığın parçalı bir bölgesinin 3D gösteriminde endotel hücreleri, valvüler interstisyel hücreler ve hücre dışı lifler gibi hücre dışı bileşenler tanımlanabilir. Bu protokolü denerken, lütfen basınçlandırmanın gerçekleştirilmesinin kritik olduğunu ve verimin mümkün olduğunca yüksek olmasını sağlayacağını unutmayın.

surgery-sample-processing-for-correlative-imaging-murine-pulmonary

Research

JoVE Journal

Engineering

Mühendislik

Yüksek frekans Doppler ultrason bölgesel miyokard fonksiyonunu değerlendirmek için yeni bir teknoloji. Bu çalışma, miyokard gerilme, iskemi-Reperfüze (IR) fare kalp dp / dt ve mitral yetersizliği tekrarlanan ölçümler için bu çok yönlü bir görüntüleme platformu uygulanabilirliği gösteren ilk kanıt sunmaktadır.

Yüksek frekanslı Yüksek çözünürlüklü Ekokardiyografi: İskemi-Reperfüze murin Kalp Miyokard Strain, kontraktilite ve Mitral Yetmezliğinde Non-invaziv Tekrarlanan Ölçüm İlk Kanıt

Bu videoda, perfüzyon basınçlandırma yoluyla kapalı konformasyonda fare pulmoner değerini izole etme ve kimyasal olarak sabitleme prosedürünü açıklıyoruz.

İzole Murin Pulmoner Kapağın Basınç Fiksasyonu: Fare Pulmoner Kapağını Kapalı Konformasyonda İzole Etmek ve Kimyasal Olarak Sabitlemek İçin Bir Prosedür

Sağ ventrikül (RV) işlev bozukluğu, kardiyovasküler hastalığın patojenezine önemli olan, ancak sınırlı yöntemler ile değerlendirilmesi için kullanılabilir. Ultrason görüntülemede son gelişmeler boyuna RV çalışmada non-invaziv bir ve doğru bir seçenek sunar. Bu yazıda, detay RV basıncı aşırı bir fare modeli kullanılarak bir adım-adım ekokardiyografi yöntemi.

Transtorasik Ekokardiyografi ile Pulmoner Arter Konstrüksiyon Fare Modeli sağ ventrikül yapı ve fonksiyonlarının değerlendirilmesi

Doku mühendisliği kalp kapakçıklarında neotissue oluşumu ve darlık gelişimi altında yatan hücresel ve moleküler mekanizmaları anlamak için, heterotopik kalp kapakçığı nakli bir fare modeli geliştirilmiştir. Bir pulmoner kalp kapak heterotopik kalp nakli tekniği kullanılarak alıcıya nakil oldu.

Heterotopik Kalp Nakli bir Fare Modeli Kullanarak Pulmoner Vana Nakli

Bu protokol, farelerde kalp ve kalp kapakçığı fonksiyonunun kapsamlı fenotiplemesi için ekokardiyografik yaklaşımın ayrıntılı bir tanımını sağlar.

Farelerde Kalp Kapak Hastalıkları Kapsamlı Fenotipik Karakterizasyonu için ekokardiyografik Yaklaşımlar ve Protokoller

Burada, sağ ventrikül yetmezliği mekanizmasını incelemek için yararlı bir yaklaşım sağlıyoruz. Pulmoner arter daralması için daha uygun ve verimli bir yaklaşım, inhouse yapılan cerrahi aletler kullanılarak kurulmuştur. Buna ek olarak, ekokardiyografi ve kateterizasyon ile bu yaklaşımın kalitesini değerlendirmek için yöntemler sağlanmaktadır.

Pulmoner arter daralması ve farelerde sağ ventrikül fonksiyonunun değerlendirilmesi ile sağ ventrikül yetmezliği indüksiyonu

Mitral regurgitation sol kalp hacmi aşırı bir kemirgen modeli bildirilmiştir. Kontrollü şiddetin Mitral regurgitation mitral kapak ön broşüriçine tanımlanmış boyutlarda bir iğne ilerleyen tarafından indüklenir, bir atan kalp, ultrason rehberlik ile.

Sıçanda Mitral Regurgitation Kontrollü Hacim Aşırı Bir Görüntü Güdümlü Transapical Mitral Kapak BroşürÜ Delinme Modeli

Burada sunulan PCLS murine akciğer dokusunun damar kontrititesini korumak için bir protokoldür, bu da pulmoner vaskülat ve hava yolunun sofistike bir üç boyutlu görüntüsü ile sonuçlanır, bu da çok sayıda prosedüre duyarlı 10 güne kadar korunabilir.

Ex vivo Pulmoner Damar Yapısı ve Kontritite Çalışmaları İçin Verimli Bir Araç Olarak Hassas Kesim Akciğer Dilimleri

Bu protokol, murin pulmoner venlerinin mikroskopi kılavuzluğunda izolasyonunu ve immünofloresan boyamasını gösterir. Sol atriyum, pulmoner venler ve ilgili akciğerleri içeren doku örnekleri hazırlıyoruz ve bunları kardiyak Troponin T ve Connexin 43 için boyuyoruz.

Murin Pulmoner Venlerde Miyokard Kılıflarının Mikrodiseksiyonu ve İmmünofloresan Boyanması

Pulmoner gövde bandının neden olduğu sağ ventrikül basıncının aşırı yüklenmesinin bir murin modelini tanımladık. Entübasyon, cerrahi ve ekokardiyografi ile fenotipleme için ayrıntılı protokoller makaleye dahil edilmiştir. Entübasyon ve cerrahi için özel yapım aletler kullanılır ve modelin hızlı ve ucuz bir şekilde çoğaltılmasına olanak tanır.

Aşırı Basınca Bağlı Sağ Ventrikül Hipertrofisi ve Pulmoner Gövde Bantlaması Başarısızlığının Murin Modeli

Öğrenin, fare pulmoner kapakçığının çok ölçekli yapısal analizi için hidrostatik fiksasyon ve korelatif görüntüleme yöntemlerini. μCT ve SBF-SEM ile hücresel ve ekstraselüler matris organizasyonunu detaylı inceleyin.

Murine Pulmoner Kapakçığın Korelatif Görüntülemesi için Cerrahi ve Örnek İşleme

Daha fazla video keşfet