Name: Fiberoptik Konfokal Lazer Mikroendoskopi Kullanılarak Oküler İlaç Dağıtım Sistemlerinin Spatio-Temporal In Vivo Görüntülemesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: Keşfedin, fiberoptik konfokal lazer mikroendoskopi kullanarak gözde lipozom dağılımını canlı görüntülemeyi. Bu invaziv olmayan yöntem, ilaç dağıtım sistemlerinin optimize edilmesine yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, NTU-Northwestern Nanomedicine Enstitüsü (NNIN) hibesi tarafından (SV'ye) ve kısmen Singapur Ulusal Araştırma Vakfı Grant AG/CIV/GC70-C/NRF/201 tarafından finanse edildi. 3/2 ve Singapur Sağlık ve Biyomedikal Bilimler (HBMS) Endüstri Uyum Fonu Ön Konumlandırma (IAF-PP) bilim ajansı tarafından yönetilen H18/01/a0/018 hibesi, Teknoloji ve Araştırma (A*STAR) (AMC'ye). Duke-NUS Çeviri ve Moleküler Görüntüleme Laboratuvarı (LTMI) üyelerine, çalışmaların ve ekipmanların lojistiğini ve yürütülmesini kolaylaştıran üyelere teşekkür ederiz. Bayan Wisna Novera'ya editöryal yardımı için özel teşekkürler.

Burada açıklanan tüm yöntemler SingHealth'teki (Singapur) Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Dişi C57BL/6 J fareler (6- 8 haftalık; 18-20 g) InVivos, Singapur'dan elde edildi ve Singapur Duke-NUS Tıp Fakültesi'nin sıcaklık ve ışık kontrollü vivariumunda barındırıldı. Hayvanlar, oftalmik ve görme araştırmalarında hayvanların kullanımı için Görme ve Oftalmoloji Araştırma Derneği (ARVO) açıklamasından alınan kılavuza uygun olarak tedavi edildi.
NOT: Şekil 2'de ana yordamları vurgulayan bir akış şeması gösterilmiştir.
1. Kontrast ajanların hazırlanması: Evans Blue (EB) ve lipozomlar
<ol><li>% 2 EB boya çözeltisi için, 50 mL steril salin içinde 1 g EB çözün. Çözeltiyi 0,22 μm filtre kullanarak 1,5 mL steril tüplere filtreleyin ve daha sonra kullanmak üzere oda sıcaklığında saklayın.</li>
	<li>Yeşil floresan lipozomlar için 100 mL yuvarlak alt şişeye POPC/Fl-DHPE (95:5), kloroform/metanol (2:1) ekleyin. İnce bir lipit filmi oluşturmak için 0 mbar1'de vakumla 1 saat boyunca 40 °C'de 150 rpm'de bir döner evaporatör kullanın. NOT: Lipozomal özelliklerin (örneğin, boyut, yük, lipid doygunluğu, lipid zinciri uzunluğu) dağıtım üzerindeki etkilerini karşılaştırırken, gözlemlenen sonuçların büyük hidrofobik boyaların değişken yükünden değil, test edilen özelliklerin etkisinden kaynaklandığını doğrulamak için Fl-DHPE veya diğer floresan lipitlerin sabit bir yüzdesini koruyun.</li>
	<li>Lipid filmini fosfat tamponlu salinle (26,3 mM floresan lipozom elde etmek için) 40 °C'de çok lameller veziklin (MLV) oluşturmak için nemlendirin. İstenilen 100 nm boyutuna ulaşmak için MLV'leri manuel ekstrüzyon için bir cam şırınna (0,08 μm gözenek boyutu polikarbonat filtre kullanarak 30 kez) yükleyin. NOT: Hidrasyon sıcaklığı lipitlerin geçiş sıcaklığından daha yüksek olmalıdır.</li>
	<li>Lipozomları 0,22 μm steril şırıng filtresinden geçirerek filtreleyin. Dinamik bir ışık saçılma sistemi kullanarak lipozomların hidrodinamik çapını (DH) onaylayın.</li>
</ol>2. Canlı farelerde EB ve lipozomların yönetimi
<ol><li>Fareye kuyruk damarı (2,5 mg/kg), subkonjonktival enjeksiyondan önce 2 saat EB IV (intravenöz) enjekte edin.</li>
	<li>Subkonjonktival enjeksiyon için, ilk olarak, yeterli bir anestezi düzlemi elde etmek için bir indüksiyon odasında soluma yoluyla% 5 izofluran kullanarak fareyi yatıştırın. Fareyi bir burun konisine aktarın ve işlem boyunca bir ısıtma yastığındayken izofluranların% 2-2.5'inde sedasyon sağlayın.</li>
	<li>Enjekte edilecek gözün yakınındaki bıyıkları kırpın ve bir damla topikal anestezik% 0.5 proxymetacaine hidroklorür çözeltisini doğrudan göze aşılayın.</li>
	<li>Floresan lipozomlarla (Fl-DHPE: 0,78 mg/kg) 10 μL cam şırınga (32 G iğne ile) yükleyin ve enjeksiyondan önce şırıngadaki tüm hava kabarcıklarını dağıtın. NOT: Farelerin altjonktival alanında 20 μL'ye kadar enjekte edilebilir18,19.</li>
	<li>Cımbız kullanarak konjonktivayı hafifçe kaldırın ve altjonktival alana yavaşça enjekte edin (Şekil 1A). Geri akışı önlemek için iğneyi yavaşça çekin. Floresan lipozomlarla dolu görünür bir bleb oluştuğundan emin olun (Şekil 1C).</li>
	<li>Enjeksiyondan sonra göze bir damla antibiyotik% 1 fusidik asit sürün ve fareyi kendine gelene kadar izleyin.</li>
</ol>3. CLM kurulumu
<ol><li>CLM sistemini kapatın ve tarama probunun hem konektörünün hem de distal ucunun temiz olduğundan emin olun.</li>
	<li>Tarama probunun konektörünü, üreticinin yönergelerini izleyerek optik konektör temizleyicisi kullanarak temizleyin.<ol>
<li>Temizleme şeridini ortaya çıkarmak için optik konektör temizleyicisinin tırmıklarına (genellikle renkli) basın.</li>
		<li>Bağlayıcıyı temizleme şeridiyle temas halinde konumlandırın ve bağlantıyı korurken bağlayıcıyı şerit boyunca kaydırın.</li>
	</ol></li>
	<li>Probun distal ucunu (tarama ucu olarak da bilinir) temizleme çözeltisine ve ardından üretici tarafından sağlanan durulama çözeltisine batırarak temizleyin. Uç çok kirliyse daha kapsamlı temizlik için pamuklu uç aplikatörü de kullanılabilir.</li>
	<li>Sondayı CLM sistemine bağlayın. Bu noktada görüş alanını (FOV) ve edinme dosyalarının konumunu seçin. NOT: Fl-DHPE için floresan algılamanın doğrusal aralıkta olduğundan emin olmak için bu adımda lazer yoğunluğunu ayarlayın. Lazer yoğunluğu, farklı zaman noktalarında çekilen görüntüler arasında karşılaştırma için tutarlı tutulmalıdır.</li>
	<li>Sistemin söylendiği gibi 15 dakika ısınmasına izin verin ve kalibrasyon kitini kullanarak sistemi üreticinin talimatlarına göre kalibre edin. NOT: Kalibrasyon kitinde, her lazer için aşağıdaki çözümleri içeren üç şişe vardır: temizleme çözeltisi, durulama çözeltisi ve dahili kalibrasyon için florofor 488/660 nm çözeltisi. Kalibrasyon adımları sistem tarafından istenir ve buna göre takip edilmelidir.<ol>
<li>Ucu temizleme şişesinin içine daldır ve ardından durulama şişesini (her şişede 5 sn). Her iki kanal için arka plan kaydı için havada bırakın. NOT: Bu adım, probun farklı liflerinden arka plan değerlerini normalleştirdiği ve görüntü homojenliğini sağladığı için çok önemlidir.</li>
		<li>Ucu temizleme şişesinin içine daldır ve ardından durulama şişesini (her şişede 5 sn). Probdaki farklı liflerden gelen sinyal değerlerini normalleştirmek için ucu 5 saniye boyunca florofor 488 nm şişeye daldırın.</li>
		<li>Ucu temizleme şişesinin içine daldır ve ardından durulama şişesini (her şişede 5 sn). Ucu durulama şişesinin içine 3.5.2'de kaydedilen floresan sinyaline kadar daldırin. Kaybolur. Probdaki farklı liflerden gelen sinyal değerlerini normalleştirmek için ucu florofor 660 nm şişeye daldırın. NOT: Uygun kalibrasyon ve optimum görüntü kalitesi elde etmek için tüm kalibrasyon adımlarını izleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>Probu kalibre ettikten sonra, probların arka plan değerlerinin mümkün olduğunca düşük olduğundan emin olun. Kullanılan CLM sistemi için arka plan değerlerini 100'ün altında tutun. Değerler 100/tanımlı kullanıcı değerinin üzerindeyse veya prob kirli görünüyorsa, probun pamuk ucu aplikatörü ve kalibrasyon ile tekrarlanan temizliğini gerçekleştirin. Bu, arka plan gürültüsünün aynı değer etrafında tutulmasını sağlamaktır. NOT: Araştırma koşullarının benzer olduğundan emin olmak için maksimum arka plan değerini (örneğin, adım 3.6'da belirtildiği gibi 100) tanımlamak önemlidir. Bu, farklı zaman noktalarında çekilen görüntüler arasında uygun nicel karşılaştırmaya izin verecektir. Değer farklı sistemlerde ve prob koşullarında farklılık gösterebilir.</li>
	<li>Hayvan sıcaklığı kontrol cihazını (ATC) kapatın. ATC'yi 37 °C'ye ayarlayın. Isıtma yastığını cerrahi bir örtü ile örtün ve burun konisini ısıtma yastığına sabitleyin. NOT: Hayvanın görüntüleme süresi boyunca sıcak tutulmasını sağlamak için ekli bir ısıtma yastığına sahip ATC gereklidir.</li>
	<li>Parçalama mikroskopunun standını sabitlemek için masanın tepesine sıkıştırın. Kullanıcı oturduğunda fare gözünü göz merceğinden ergonomik olarak görüntülemek için mikroskobun göz merceğini döndürün ve ayarlayın (hayvanı yerleştirdikten sonra ayarlamaları yapın).</li>
	<li>Bir indüksiyon odasında% 5 izofluran kullanarak fareyi yatıştırın. Hayvan yanıt vermiyorsa fareyi burun konisine aktarın ve işlem boyunca bir ısıtma yastığındayken sedasyonu% 2-% 2.5 izofluranda tutun.</li>
	<li>Farenin bıyıklarını kırpın ve göze bir damla anestezik% 0.5 proxymetacaine hidroklorür çözeltisi aşılayın.</li>
	<li>Gözlerin temiz olduğundan emin olmak için, oküler yüzeyi yıkamak için birkaç damla salin bırakın.</li>
	<li>Mikroskobu, fare gözünün 0,67x büyütmede doğrudan odakta olacak şekilde ayarlayın. NOT: Gözleri tuzlu suyla yağlamayı unutmayın. Gözler görüntüleme seansı boyunca yağlanmazsa, kuruyarak lensin kristalleşmesine neden olabilirler. Sonuç olarak, CLM görüntüleme sırasında lens arka plan kırmızı floresan yayabilir.</li>
</ol>4. CLM ve edinim ile fare gözlerinin canlı görüntülenmesi
<ol><li>Lazeri açın, probu göze yerleştirin ve Şekil 3'te göz haritasında belirtilen bölgelerde gözdeki floresanları gözlemlemek için kazanımı kaydetmeye başlayın. NOT: Probu, probun distal ucuyla birlikte bir kalem gibi doğrudan görüntülenecek bölgeye tutun.</li>
	<li>Tüm bölgeler işaretlendiğinde ve etiketlendiğinde kaydı durdurun. Edinme dosyaları, adım 3.4'te seçilen dosya konumuna otomatik olarak kaydedilir. NOT: Dosya, tek tek görüntülere dışa aktarılabilen bir video dosyası olarak kaydedilecektir. Kaydın yapıldığı çerçevede sondanın tam olarak yerini bilmek için bayrağı göz haritasına göre etiketleyin.</li>
</ol>5. Görüntü analizi
<ol><li>Aynı CLM alma yazılımını kullanarak, daha fazla analiz için görüntü alma dosyalarını dışa aktarın. Dosya | tıklayın Dışa aktar ve dışa aktarılacak biçimi seçin. Mkt biçimli dosyalar, arama tablosunun (LUT) ayarlanmasında ve CLM görüntüleyici yazılımını kullanarak görüntü dosyası biçimlerine daha fazla dışa aktarmaya izin verecektir.</li>
	<li>Floresan yoğunluğunun doğru karşılaştırması için, tüm görüntü dosyalarını dışa aktarırken her kanal için ayarlanmış aynı LUT'i kullanın. NOT: Arka plan floresan okumalarını en aza indirmek için kontrol faresininkilerle ilgili minimum ve maksimum LUT eşiğini (lipozom enjekte etmeden) seçin.</li>
	<li>Görüntüyü uygun bir görüntü işleme yazılımında/ücretsiz programında açın (ör. ImageJ). İlgi alanı çizin (yatırım getirisi). NOT: Buradaki yatırım getirisi, işleme programına ilgi alanı anlamına gelir. Çoğu durumda, yatırım getirisi taranan görüntünün tamamı olacaktır. Bununla birlikte, limbüsün görüntülenmesi durumunda, prob sadece limbüsün görüntüsünü ayrı ayrı alamaz. Bu nedenle, Şekil 4'te çizildiği gibi limbus bölgesindeki floresan 'ölçmek' için bir yatırım getirisi çizilmelidir. Yatırım getirisini tutarlı tutmak için tüm görüntülerde aynı yatırım getirisini kullanın.</li>
	<li>Yeşil floresan için yatırım getirisi değerlerini ölçün ve kaydedin. Değerleri elektronik tabloya girin. Yatırım getirisinin ortalama ve floresan yoğunluğu (a.u.) değerlerini tablola.</li>
</ol>6. Histoloji değerlendirmesi
<ol><li>Yerel IACUC tarafından onaylanan bir yöntem kullanarak fareyi ötenazi.</li>
	<li>Gözü enükle edin ve gözü bir gecede% 4 formaldehit veya% 10 formalin çözeltisinin 1 mL'sinde sabitle.</li>
	<li>Fazla yağları kesin ve gözü Optimum Kesme Sıcaklığı (OCT) bileşiğine gömün ve en az bir gün boyunca -80 °C dondurucuda donmuş halde tutun.</li>
	<li>Kriyostattaki 5 μm kalınlığındaki kesme bölümleri ve kesme sıcaklığı 20 °C'de tutulur. Bölümü Poli-L-Lizin kaplı mikroskop kaydırağı ile aktarın. NOT: Histoloji, DDS dağıtımının ek doğrulaması olarak hizmet edebilir. Bununla birlikte, çalışmanın CLM kullanarak azaltmayı amaçladığı ek optimizasyon, teknik uzmanlık ve hayvanların kurban edilmesi gerekir.</li>
</ol>

<ol><li>Chaw, S. Y., Novera, W., Chacko, A. -M., Wong, T. T. L., Venkatraman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+fate+of+liposomes+after+subconjunctival+ocular+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">In vivo fate of liposomes after subconjunctival ocular delivery.</a> Journal of Controlled Release. 329, 162-174 (2021).</li>
<li>Kuo, J. C. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+colorectal+dysplasia+using+fluorescently+labelled+lectins%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Detection of colorectal dysplasia using fluorescently labelled lectins.</a> Scientific Reports. 6 (1), 24231(2016).</li>
<li>Wu, Y. -F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+custom+multiphoton+microscopy+platform+for+live+imaging+of+mouse+cornea+and+conjunctiva%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">A custom multiphoton microscopy platform for live imaging of mouse cornea and conjunctiva.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e60944(2020).</li>
<li>Zhivov, A., Stachs, O., Kraak, R., Stave, J., Guthoff, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+confocal+microscopy+of+the+ocular+surface%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">In vivo confocal microscopy of the ocular surface.</a> The Ocular Surface. 4 (2), 81-93 (2006).</li>
<li>Bassyouni, F., ElHalwany, N., Ab del Rehim, M., Neyfeh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+and+new+technologies+applied+in+controlled+drug+delivery+system%5BTitle%5D)+AND+%22Research+on+Chemical+Intermediates%22%5BJournal%5D)">Advances and new technologies applied in controlled drug delivery system.</a> Research on Chemical Intermediates. 41 (4), 2165-2200 (2015).</li>
<li>Sercombe, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+and+challenges+of+liposome+assisted+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Advances and challenges of liposome assisted drug delivery.</a> Frontiers in Pharmacology. 6, (2015).</li>
<li>Koning, G. A., Storm, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+drug+delivery+systems+for+the+intracellular+delivery+of+macromolecular+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discovery+Today%22%5BJournal%5D)">Targeted drug delivery systems for the intracellular delivery of macromolecular drugs.</a> Drug Discovery Today. 8 (11), 482-483 (2003).</li>
<li>Metselaar, J. M., Storm, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposomes+in+the+treatment+of+inflammatory+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Liposomes in the treatment of inflammatory disorders.</a> Expert Opinion on Drug Delivery. 2 (3), 465-476 (2005).</li>
<li>Ding, B. S., Dziubla, T., Shuvaev, V. V., Muro, S., Muzykantov, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+drug+delivery+systems+that+target+the+vascular+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Interventions%22%5BJournal%5D)">Advanced drug delivery systems that target the vascular endothelium.</a> Molecular Interventions. 6 (2), 98-112 (2006).</li>
<li>Hua, S., Wu, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+lipid-based+nanocarriers+for+targeted+pain+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The use of lipid-based nanocarriers for targeted pain therapies.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 143(2013).</li>
<li>Sharma, A., Sharma, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposomes+in+drug+delivery%3A+Progress+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Liposomes in drug delivery: Progress and limitations.</a> International Journal of Pharmaceutics. 154 (2), 123-140 (1997).</li>
<li>Abrishami, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation%2C+characterization%2C+and+in+vivo+evaluation+of+nanoliposomes-encapsulated+Bevacizumab+%28Avastin%29+for+intravitreal+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Preparation, characterization, and in vivo evaluation of nanoliposomes-encapsulated Bevacizumab (Avastin) for intravitreal administration.</a> Retina. 29 (5), 699-703 (2009).</li>
<li>Pleyer, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+absorption+of+cyclosporine+A+from+liposomes+incorporated+into+collagen+shields%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Ocular absorption of cyclosporine A from liposomes incorporated into collagen shields.</a> Current Eye Research. 13 (3), 177-181 (1994).</li>
<li>Shen, Y., Tu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+ocular+pharmacokinetics+of+ganciclovir+liposomes%5BTitle%5D)+AND+%22The+AAPS+Journal%22%5BJournal%5D)">Preparation and ocular pharmacokinetics of ganciclovir liposomes.</a> The AAPS Journal. 9 (3), 371-377 (2007).</li>
<li>Weijtens, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+concentration+of+dexamethasone+in+aqueous+and+vitreous+after+subconjunctival+injection%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">High concentration of dexamethasone in aqueous and vitreous after subconjunctival injection.</a> American Journal of Ophthalmology. 128 (2), 192-197 (1999).</li>
<li>Voss, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+injectable+drug+delivery+system+for+subconjunctival+glaucoma+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Development of a novel injectable drug delivery system for subconjunctival glaucoma treatment.</a> Journal of Controlled Release. 214, 1-11 (2015).</li>
<li>Giarmoukakis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodegradable+nanoparticles+for+controlled+subconjunctival+delivery+of+latanoprost+acid%3A+In+vitro+and+in+vivo+evaluation.+Preliminary+results%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Biodegradable nanoparticles for controlled subconjunctival delivery of latanoprost acid: In vitro and in vivo evaluation. Preliminary results.</a> Experimental Eye Research. 112, 29-36 (2013).</li>
<li>Shah, N. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravitreal+and+subconjunctival+melphalan+for+retinoblastoma+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Intravitreal and subconjunctival melphalan for retinoblastoma in transgenic mice.</a> Journal of Ophthalmology. 2014, 829879(2014).</li>
<li>Dastjerdi, M. H., Sadrai, Z., Saban, D. R., Zhang, Q., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+Penetration+of+Topical+and+Subconjunctival+Bevacizumab%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Corneal Penetration of Topical and Subconjunctival Bevacizumab.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 52 (12), 8718-8723 (2011).</li>
<li>Ezra-Elia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+an+in+vivo+imaging+system+be+used+to+determine+localization+and+biodistribution+of+AAV5-mediated+gene+expression+following+subretinal+and+intravitreal+delivery+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Can an in vivo imaging system be used to determine localization and biodistribution of AAV5-mediated gene expression following subretinal and intravitreal delivery in mice.</a> Experimental Eye Research. 176, 227-234 (2018).</li>
<li>Movila, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+endoscopic+technology+for+real-time+monitoring+of+inflammation+caused+in+experimental+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Intravital endoscopic technology for real-time monitoring of inflammation caused in experimental periodontitis.</a> Journal of Immunological Methods. 457, 26-29 (2018).</li>
<li>Vanherp, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoscopic+fibered+confocal+fluorescence+microscopy+for+longitudinal+in+vivo+assessment+of+pulmonary+fungal+infections+in+free-breathing+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Bronchoscopic fibered confocal fluorescence microscopy for longitudinal in vivo assessment of pulmonary fungal infections in free-breathing mice.</a> Scientific Reports. 8 (1), 3009(2018).</li>
<li>Chagnon, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+intravital+endoscopic+confocal+fluorescence+microscopy+of+normal+and+acutely+injured+rat+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Investigation%22%5BJournal%5D)">In vivo intravital endoscopic confocal fluorescence microscopy of normal and acutely injured rat lungs.</a> Laboratory Investigation. 90 (6), 824-834 (2010).</li>
<li>Yun, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+near-infrared+fluorescence+conjugation+on+the+anti-cancer+potential+of+cetuximab%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Research%22%5BJournal%5D)">The effect of near-infrared fluorescence conjugation on the anti-cancer potential of cetuximab.</a> Laboratory Animal Research. 34 (1), 30-36 (2018).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Sonuçlardan da anlaşılır gibi CLM, gözdeki lipozomların oküler dağılımını görüntüleyen basit ve uygulanabilir bir yöntem sağlar. Daha önce clm'nin fare gözü içindeki çeşitli lipozomal formülasyonların zaman içinde lokalizasyonunu karakterize etmek için kullanıldığını göstermiştik1. İstilacı olmayan uygulamalar için CLM, lipozomların aynı hayvandan göze nasıl dağıtıldığı hakkında bilgi için ön oküler yüzeyin gerçek zamanlı görüntülenmesini izin eder. Bu, CLM'yi daha kapsamlı nicelemeden önce nanoka...

Canlı sistemlerde ilaçların kan klirensi, doku dağılımı ve hedef doluluğu in vivo ilaç eğilimini anlamanın temel direğidir. Preklinik hayvan modellerinde, bu parametreler tipik olarak ilaç uygulama sonrası belirli zaman noktalarında sık kan ve doku örneklemesi ile değerlendirilir. Bununla birlikte, bu prosedürler genellikle istilacıdır, genellikle hayatta kalma dışı ölçümleri içerir ve istatistiksel güçlenme için büyük hayvan kohortları gerektirir. Hayvanların aşırı kullanımı için etik kaygıların yanı sıra ekstra maliyet ve zaman olabilir. Sonuç olarak, non-invaziv görüntüleme hızla biyodistributions çalışmalarında ayrılmaz bir adım haline gelmektedir. Konfokal lazer miksoskopi (CLM1,2), yüksek hassasiyetli ve yüksek çözünürlüklü canlı hayvanların gözünde terapötiklerin mekansal-zamansal dağılımını invaziv olmayan bir şekilde görüntüleyen oküler uygulamalar için çok uygundur1,3,4.
CLM, DDS'nin kapsamlı ölçülmesi ve ilaç biyoyararlanımdan önce lipozomlar gibi oküler ilaç dağıtım sistemlerinin (DDS) sağlam taramasını kolaylaştırma potansiyeline sahiptir. Lipozomlar, çok çeşitli terapötik kargoları kapsüllemek ve ilaç salınımının doku bölgesini ve etki süresini kontrol etmek için fizikokimyasal ve biyofiziksel özelliklerini ayarlamadaki esneklikleri için çekicidir. Lipozomlar, monoklonal antikor bevacizumab12 gibi büyük moleküllerin ve siklosporin13 ve ganciclovir14 gibi küçük moleküllerin teslimi için oküler uygulamalarda kullanılmıştır. İlaç yüklü lipozomlar, lipozomal olmayan "serbest ilaç" formülasyonlarına kıyasla daha uzun biyolojik yarı ömürlere ve uzun süreli terapötik etkilere sahiptir. Bununla birlikte, oküler dokudaki ilaç dağılımı tipik olarak gözün sıvı bileşenlerindeki ilaç konsantrasyonlarından (yani kan, sulu mizah ve vitreus mizahı15,16,17) tahmin edilir. Yüklü ilaç kargosunun ilk in vivo kaderi nanokarrierin özellikleri ile tanımlandığı için, floresan lipozomların CLM görüntülemesi, ilacın doku hedeflemesini ve yerinde doku ikamet sürelerini ortaya çıkarmak için bir taşıyıcı görevi görebilirsiniz. Ayrıca, CLM ile doğumun görsel kanıtları DDS'nin yeniden tasarlanmasını yönlendirebilir, ilacın terapötik faydalarını değerlendirebilir ve hatta belki de olumsuz biyolojik olayları tahmin edebilir (örneğin, DDS'nin uzun süre istenmeyen lokalizasyonuna bağlı doku toksisitesi).
Burada, çift bantlı CLM sistemine sahip canlı farelerde lipozomların oküler biyodistribasyonunun nasıl incelenerek incelenerek adım adım bir prosedür detaylandırılır. Bu özel CLM sistemi, iki renkli floresanları (488 nm ve 660 nm'de yeşil ve kırmızı heyecan lazerleri ile) gerçek zamanlı olarak, 8 kare /s frekansta algılayabilir. Algılama probunun göze fiziksel olarak yerleştirilmesiyle protokol, %2 Evans Blue (EB) boyası ile intravenöz (IV) önceden enjekte edilen farelerde subkonjonktival uygulama üzerine yeşil floresan lipozomların görüntü alımını ve analizini göstermektedir. EB boyası kırmızı floresan kanalındaki damarlı yapıların görselleştirilmesine yardımcı olur. Fosfolipid POPC'den (yani, 1-palmitoyl-2-oleoyl-glisero-3-fosfokolin) oluşan ve floresan etiketli fosfolipid Fl-DHPE (örneğin, N-(floresan-5-tiyokarbamoyl)-1,2-dihexa-decanoylsn-glisero-3-fosfotianolamin) % 95 POPC: % 5 Fl-DHPE (Şekil 1B) ). CLM, EB lekeli oküler doku sınırlarının tanımlaması ile yeşil floresan etiketli lipozomları 15 μm eksenel ve 3,30 μm yanal çözünürlükte yakalayabilir.

<table><tbody><tr><td>0.08 ve mikro; m polikarbonat filtre</td><td>Whatman, ABD</td><td>110604</td><td></td></tr><tr><td>0.22 & mikro; m şırınga filtresi</td><td>Fisherbrand, İrlanda</td><td>09-720-3</td><td></td></tr><tr><td>%0,5 Proxymetakain hidroklorür steril oftalmik çözelti</td><td>Alcon, Singapur</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 & L Cam Şırınga</td><td>Hamilton, ABD</td><td>65460-06</td><td></td></tr><tr><td>1-Palmitoil-2-oleoil-sn-glisero-3-fosfokolin (POPC)</td><td>Avanti, ABD</td><td>850457</td><td></td></tr><tr><td>32 G iğne (Hamilton, 0.5" PT4)</td><td>Hamilton, ABD</td><td>7803-04</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma plakalı Hayvan Sıcaklık Kontrol Cihazı (15 cm x 20 cm)</td><td>WPI, ABD</td><td>ATC 2000 & 61800</td><td></td></tr><tr><td>Cellvizio Dual Band, S1500 Prob ve Quantikit (Adım 3.5'te kalibrasyon kiti)</td><td>Mauna Kea Technologies, Fransa</td><td></td><td>Uç çapı: 1,5 mm, görüş alanı: 600 &mikro; m x 500 ve mikro; m, eksenel çözünürlük: 15 & m, yanal çözünürlük: 3.3 ve mikro; m</td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Sigma Aldrich, ABD</td><td>472476</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Cımbız #5, Dumostar</td><td>WPI, ABD</td><td>500233</td><td>11 cm, Düz, 0,1 mm x 0,06 mm İpuçları</td></tr><tr><td>Evans Mavi</td><td>Sigma Aldrich, ABD</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Fusidik asit göz damlası</td><td>LEO Pharma, Danimarka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Ulusal Sağlık Enstitüleri, ABD</td><td></td><td>https://imagej.nih.gov/ij/</td></tr> <tr><td>Isofluran</td><td>Piramal, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Malvern Zetasizer Nano ZS</td><td>Malvern Panalytical, İngiltere</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Sigma Aldrich, ABD</td><td>179337</td><td></td></tr><tr><td>Mini Ekstruder</td><td>Avanti, ABD</td><td>610020</td><td></td></tr><tr><td>N- (floresein-5-tiyokarbamoil) -1,2-dihekzadekanoilsn-glisero-3-fosfoetanolamin (trietilamonyum tuzu) (FL-DHPE)</td><td>Invitrogen, ABD</td><td>F362</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin</td><td>Gibco, ABD</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Masa kelepçesi standlı stereomikroskop sistemi</td><td>Olympus, Tokyo, Japonya</td><td>SZ51 & SZ2-STU3</td><td></td></tr></tbody></table>

fiberoptik konfokal lazer mikroendoskopi kullanılarak oküler İlaç dağıtım sistemlerinin spatio-temporal in vivo görüntülemesi

Spatio-Temporal In Vivo Imaging of Ocular Drug Delivery Systems using Fiberoptic Confocal Laser Microendoscopy

Subkonjonktival enjeksiyon, kornea ve konjonktiva gibi ön oküler bariyerleri atlayan kolay trans-skleral erişim nedeniyle oküler ilaçları uygulamak için çekici bir yoldur. Subkonjonktival enjeksiyon üzerine ilaçların terapötik etkileri ve farmakokinetiği bazı çalışmalarda tanımlanmış olmakla birlikte, çok azı ilaçların veya ilaç dağıtım sistemlerinin (DDS) oküler dağılımını değerlendirmemektedir. İkincisi, istenen oküler lokalizasyonu ve etki süresini (örneğin, akut ve uzun süreli) elde etmek için göz içi DDS tasarımının ve ilaç biyoyararlanımının optimizasyonu için kritik öneme sahiptir. Bu çalışma, floresan lipozomların konjonktival enjeksiyondan sonra canlı farelerde gerçek zamanlı olarak oküler dağılımını niteliksel olarak incelemek için fiberoptik konfokal lazer mikroendoskopi (CLM) kullanımını ortaya çıkarmaktadır. Mikroskobik düzeyde dokuların in vivo görsel muayenesi için tasarlanan bu, aynı zamanda subkonjonktival enjeksiyondan sonra gözdeki enjekte edilebilirlerin mekano-zamansal dağılımını incelemek için CLM görüntüleme yönteminin ilk tam açıklamasıdır.

Protokol, subkonjonktival enjeksiyon yoluyla uygulanan yeşil floresan lipozomların mekano-zamansal oküler dağılımını değerlendirmek için CLM'nin yararını göstermektedir. CLM sisteminin çift renkli yeteneğinden (488 nm ve 660 nm ekscitasyon dalga boyları) yararlanmak için, enjekte edilecek 100 nm nötr POPC lipozomlarına% 5 Fl-DHPE (kompozisyon ve karakterizasyon verileri Şekil 1B'de gösterilmiştir) ve EB'ye gözdeki yer işaretlerini tanımlamak için IV enjekte edildi. Her ikisi de yüksek oranda...

Subkonjonktival enjeksiyondan sonra gözdeki lipozomların mekansal-zamansal dağılımını invaziv olmayan bir şekilde incelemek için fiberoptik konfokal lazer miksanoskopi (CLM) kullanımı için bir protokol sunuyoruz.

Fiberoptik Konfokal Lazer Mikroendoskopi Kullanılarak Oküler İlaç Dağıtım Sistemlerinin Spatio-Temporal In Vivo Görüntülemesi

Subconjunctival injection is an attractive route to administer ocular drugs due to easy trans-scleral access that bypasses anterior ocular barriers, such ...

Bu protokol, değişikliklerin doku ikamet sürelerini nasıl etkilediğini daha iyi anlamak için yeni formülasyonların taranmasını kolaylaştırır, bu da en uygun ilaç dağıtım sisteminin tasarlanmasında kritik öneme sahiptir. Bu teknik noninvazivdir ve hayvanların örnekleme için aşırı kullanımını azaltan gerçek zamanlı görüntülemeye izin verir. İlaç dağıtım sistemleri, sadece terapötik ilaç ve görüntüleme moiety'si bir nano taşıyıcıya dahil edilerek görüntüleme ve terapötik uygulamalar için yeniden tasarlanabilir.Bu hem kanser tedavisinde hem de bulaşıcı hastalık tedavisinde yararlı uygulamalara sahiptir. Prosedürü gösteren rasha Msallam olacak, laboratuvarımdan kıdemli bir araştırma görevlisi. Başlangıç olarak, subkonjonktival enjeksiyondan iki saat önce, fareyi kuyruk yoluyla, evans mavisi veya EB kilogramı başına 2,5 miligram ile intravenöz olarak enjekte edin. Fareyi% 5 izofluran ile sakinleştirdikten sonra, fareyi bir burun konisine aktarın ve bir ısıtma yastığı üzerinde sakinleştirilmiş fareyi koruyun.Daha sonra, enjekte edilecek gözün yanındaki bıyıkları kesin. % 0.5 proxymetacaine hidroklorür çözeltisini doğrudan göze aşılayın. Daha sonra, floresan lipozomlu 32 kalibrelik bir iğne ile donatılmış 10 mikrolitre cam şırınga yükleyin ve hava kabarcıklarının şırıngada bulunmadığından emin olun.Bir cımbız kullanarak konjonktivayı kaldırın ve lipozomları yavaşça subkonjonktival alana enjekte edin, ardından iğneyi yavaşça geri çekerek geri akışı önleyin. Floresan lipozomlarla dolu bleb oluşumunu sağlayın. Göze% 1 fusitik asit damlası uygulayın ve fareyi kendine gelene kadar izleyin.CLM sistemini aç. Sondayı CLM sistemine bağlayın. Bu noktada, edinme dosyalarının görüş alanını ve konumunu seçin.Floresan DHPE için floresan algılamasının doğrusal aralıkta olduğundan emin olmak için lazer yoğunluğunu ayarlayın ve farklı zaman noktalarında çekilen görüntüler arasında karşılaştırma için yoğunluğu tutarlı tutun. Sistem 15 dakika ısındıktan sonra, her lazer için temizleme, durulama ve floro-4 çözeltilerini içeren kalibrasyon kitini kullanarak sistemi üreticinin talimatlarına göre kalibre edin. Kısaca, ucu temizleme şişesinde ve ardından durulama şişesinde beş saniye boyunca batırarak kalibre etmeye başlayın.Arka plan kaydının problardaki arka plan değerlerini farklı liflerden normalleştirmesi için ucu havada bırakın ve görüntü homojenliği sağlayın. Yine, ucu temizleme şişesinde beş saniye ve ardından durulama şişesinde daldırin. Ardından, sinyal değerlerini normalleştirmek için ucu floro-4 488 nanometre içeren şişeye beş saniye daldırın.Uç daldırma işlemi beş saniye boyunca temizleme şişesinde ve ardından durulama şişesinde tekrarlayın. Bir önceki adımda kaydedilen floresan sinyali kaybolana kadar ucu durulama şişesinde tutun. Ardından, probdaki farklı liflerden gelen sinyal değerlerini normalleştirmek için ucu floro-4 660 nanometre içeren şişeye aktarın.Kalibrasyondan sonra, probun arka planı için değerin 100'den az olduğundan emin olun. Aksi takdirde, probun pamuk ucu aplikatörü ile tekrar tekrar temizlenmesini gerçekleştirin. Hayvan sıcaklığı kontrol cihazını bağlı bir ısıtma yastığı ile kapatın ve sıcaklığı 37 santigrat dereceye ayarlayın.Isıtma yastığını cerrahi bir örtü ile kaplattıktan sonra, burun konisini ısıtma yastığına sabitleyin. Bir indüksiyon odasında% 5 izofluran kullanarak fareyi sakinleştirdikten sonra, fareyi burun konisine aktarın ve sakinleştirilmiş fareyi bir ısıtma yastığı üzerinde saklayın. Daha sonra, göze bir damla anestezik% 0.5 proxymetacaine hidroklorür çözeltisi aşılayın.Oküler yüzeyi yıkamak ve lensin kristalleşmesini önlemek için, birkaç tuzlu su damlası bırakarak gözleri yağlayın. Ardından, fare gözünü 0,67 kat büyütmede doğrudan odakta ergonomik olarak görüntülemek için mikroskobun göz merceği döndürün ve ayarlayın. Lazeri açın ve probu görüntülenecek göz bölgesine bir kalem gibi yerleştirin.Ardından, ilgi çekici bölgedeki gözdeki floresanları gözlemlemek için kayıt edinimine başlayın. Tüm bölgeler işaretlendiğinde ve tam çerçevedeki prob konumunu tam olarak bilmek için göz haritasına göre etiketlendiğinde kaydı durdurun. Edinme dosyaları, daha önce seçilen konumda video dosyaları olarak otomatik olarak kaydedilir.Floresan görüntüleme sklera ve kornea bölgeleri arasında belirgin bir farklılaşma olduğunu ortaya koydu. Episklera ve konjonktivanın yüksek vaskülerizasyonu sklera bölgesinin EB ile kırmızıya boyanmasını neden oldu. Vaskülat eksikliği olan kornea siyah görünüyordu. Yedi günlük çalışmada limbus ve skleranın kontrast floresanları gözlendi.Floresan boya enjekte kontrol fareleri lipozom türevli floresan özgüllüğünü doğruladı. Floresan yoğunlukları birinci ve üçüncü günlerde yüksekti. Yeşil floresan zamanla limbus ve sklera bölgelerindeki lipozom azalmasını proxied.Temporal limbus ve üstün limbus bölgelerinde enjeksiyon sonrası birinci günden üçüncü güne kadar floresan sinyallerindeki farklılıklar önemli değildi, bu da nötr lipozomların limbus bölgesine, özellikle kornea çevresine tercih edildiğini gösteriyordu. Enjeksiyon sonrası ilk gün zamansal ve üstün bölgeler için, skleradaki floresan limbüsten altı kat daha yüksekti. Üçüncü ve yedinci gün, lipozomlar zamansal ve üstün bölgelerdeki sklerada önemli ölçüde azaldı, oküler boşluk mekanizmalarına atfedildi.Enjeksiyon bölgesinden uzaklık nedeniyle en düşük floresan miktarı burun ve alt bölgelerde tespit edildi. Kayıt durdurulmadan önce fleck çerçevelerini göz haritasına göre etiketlemek önemlidir. Lazer yoğunluğunu tutarlı tutun ve farklı denemelerde uygun karşılaştırma için maksimum arka plan değerini tanımlayın.Kurşun formülasyonlarının tanımlanmasından sonra, ilacın biyoyararlanimini incelemek ve formülasyonlarının terapötik etkinliğini doğrulamak için hayvanlarda kapsamlı farmakokinetik ve biyodistribasyon çalışmaları yapılabilir.

spatio-temporal-vivo-imaging-ocular-drug-delivery-systems-using

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Onlar kendi ana mikroçevresinin geliştikçe birçok biyolojik ve klinik durumlarda hücresel süreçleri incelemek için avantajlıdır. Burada montaj ve hücre kültürü, hayvan çalışmaları ve klinik hasta çalışmaları, gerçek zamanlı görüntüleme sağlayacak bir düşük maliyetli, fiber-optik mikroskop kullanımını tanımlamak.

Yüksek çözünürlüklü Fiber-optik Mikroendoskopi In situ Hücresel Görüntüleme

Mikroglia aktivasyonu ve mikroglioz kronik nörodejenerasyona önemli tepkilerdir. Burada, in vivo, konfokal oftalmoskopi retinal CX3CR1-GFP + mikroglial hücreleri uzun süreli görselleştirme için yöntemler sunmak ve eşik ve morfometrik için belirlemek ve aktivasyonunu ölçmek için analiz eder. Biz yaşa bağlı glokomun erken evrelerinde mikrogliyal değişiklikleri takip.

Fare Glokomda Konfokal Oftalmoskopik Görüntüleme ve Hücre morfometrisi: Nörodejenerasyonda sırasında Retina Mikroglial Aktivasyonu Vivo Dynamics

Burada biz kendi alansal kapsama değerlendirmek ve photoreceptor canlılık karakterize subretinal boşluğa gen terapisi ajanların teslim yardımcı olmak üzere yüksek çözünürlüklü spektral alanlı optik koherens tomografi (HR-SD-Ekim) kullanarak yeni bir yaklaşım göstermek.

Ultrahigh çözünürlük fare optik koherens tomografi göz içi enjeksiyon Retina gen terapisi araştırma yardımcı olmak için

Bu protokolü nasıl yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi gibi görüntüleme teknikleri açıklar ve lazer ophthalmoscopy tarama bir oftalmik görüntüleme platformu üzerinde bilgi edinme sistemiyle küçük Rodents yararlı olabilir dağıtım, hücre sırasıyla retina kalınlığı ve mikroglial.

Vivo Tayf alanlı optik Koherens tomografi ve lazer Ophthalmoscopy tarama Cx3cr1gfp/gfp muhabir farelerin görüntüleme

Burada, bir roman görüntüleme multimodal platformu kullanarak bir geniş görüş alanı (FOV) üç boyutlu (3D) floresan ve OCT Retina görüntü almak için bir iletişim kuralı mevcut. Sistem Kurulumu, hizalama yöntemi ve operasyonel iletişim kurallarını tanıtacak. Vivo görüntüleme gösterilecektir ve temsilcisi sonuçları sağlanacaktır.

Eğik tarama Lazer Ophthalmoscopy (oSLO) ve optik koherens tomografi (OCT) tarafından Multimodal hacimsel Retina Görüntüleme

Burada, retinal dejenerasyon, glokom, diyabetik retinopati ve miyopi modellerinde retinal ve oküler yapıları in vivo olarak görselleştirmek için spektral-alan optik koherens tomografinin (SD-OCT) kullanımını açıklamaktayız.

Optik Koherens Tomografi Kullanılarak Kemirgen Modellerinde Oküler Hastalığın İn vivo Yapısal Değerlendirmeleri

Mevcut protokol, in vivo görüntülerde gözlenen retinal ganglion hücre akson demeti morfolojisini doğrulamak amacıyla in vivo görünür ışık optik koherens tomografi fibergrafi (vis-OCTF) görüntülerini aynı fare retinasının ex vivo konfokal görüntüleriyle hizalama adımlarını özetlemektedir.

Görünür Işık Optik Koherens Tomografi Fibergramlarının Aynı Fare Retinasının Konfokal Görüntüleri ile Hizalanması

Bu protokol, 3D lazer baskı kullanılarak implante edilebilir bir entegre görüntüleme penceresinin imalatını açıklar. Pencere, mikro iskelelerle birleştirilmiş bir mikro mercek sisteminden oluşur. Yöntem, biyouyumlu fotorezist SZ2080'in sürekli bir sırayla iki fotonlu polimerizasyonunu (2PP) içerir ve üretim verimliliğini ve farklı bileşenler arasındaki hizalamayı optimize eder.

Gelişmiş In Vivo Görüntüleme için Mikroyapılı Görüntüleme Penceresine Entegre Edilmiş İmplante Edilebilir Optiklerin Mikrofabrikasyonu

Bu makale, kuru göz tanı ve tedavisinde in vivo konfokal mikroskopinin işleyişini ve etkisini göstermekte ve gelecekteki araştırmalara temel oluşturmak için in vivo konfokal mikroskopinin uygulama ve sonuçlarını araştırmaktadır.

İn vivo Kuru Göz Tanı ve Tedavisinde Konfokal Mikroskopi: Görüntüleme Protokolleri ve Yorumlamaya Odaklanma

Özel, gerçek zamanlı bir konfokal tarama görüntüleme sistemi komple inşaat açıklanmıştır. Video hızı mikroskopi ve mikroendoskopi için kolayca kullanılabilen bu sistem, maliyetinin bir kısmını, standart ticari konfokal sistemlerini kullanarak erişilebilir değil görüntüleme geometrileri ve uygulamaları bir dizi sağlar.

Video-rate Tarama Konfokal Mikroskop ve Mikroendoskopi

Keşfedin, fiberoptik konfokal lazer mikroendoskopi kullanarak gözde lipozom dağılımını canlı görüntülemeyi. Bu invaziv olmayan yöntem, ilaç dağıtım sistemlerinin optimize edilmesine yardımcı olur.

Fiberoptik Konfokal Lazer Mikroendoskopi Kullanılarak Oküler İlaç Dağıtım Sistemlerinin Spatio-Temporal In Vivo Görüntülemesi

Daha fazla video keşfet