Name: Karaciğer Rejenerasyon Stratejisi Olarak Üç Boyutlu Kollajen Matris İskele İmplantasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-29T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: Keşfedin karaciğer rejenerasyonu için üç boyutlu kollajen matris iskele implantasyonunu. Bu yöntem, sıçan modelinde doku mühendisliği kullanarak karaciğer fonksiyonunu korur ve hepatosit göçünü destekler.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Deneysel Tıp Birimi Laboratuvar Hayvan Tesisi personeline, teknik ve cerrahi destek için Hemşire Carolina Baños G.'ye, mikrofotoğrafçılıktaki destek için Marco E. Gudiño Z.'ye ve karaciğer histolojislerindeki destek için Erick Apo'ya teşekkür etmek istiyor. Ulusal Konsey, BILIM ve Teknoloji(CONACyT),SALUD-2016-272579 ve PAPIIT-UNAM TA200515 hibe numarasını destekledi.

Bu araştırma, Universidad Nacional Autónoma de México'daki (UNAM) Tıp Fakültesi etik komitesi (DI/115/2015) ve General de Mexico Hastanesi etik komitesi (CI/314/15) tarafından onaylanmıştır. Kurum, laboratuvar hayvanlarının üretimi, bakımı ve kullanımı için tüm teknik şartnameleri yerine getirmektedir ve ulusal yasalar (NOM-062-ZOO-1999) tarafından yasal olarak onaylanmıştır. Bu çalışma için UNAM Tıp Fakültesi Laboratuvar Hayvan Tesisinden 150-250 g (6-8 haftalık) ağırlığında erkek Wistar sıçanları elde edilmiştir.
1. Sığır femurundan kollajen matris iskeleleri elde etmek
<ol><li>Kondyle'u sığır femurundan Meksika sağlık ve tarım otoriteleri tarafından onaylanmış bir mezbahadan alın.<ol>
<li>Kondyle yağı, kası ve kıkırdağı cerrahi bir aletle dikkatlice parçalara ayrıştırın. Testere kesici kullanarak kondyle parçalarını 3 cm x3 cm parçalar halinde kesin ve yağ ve kanı bir havlu ile temizleyin. Kondyle parçalarını suyla yıkayın.</li>
		<li>Parçaları (92 °C) 1 L anionik deterjanla (10 g/L) 30 dakika kaynatın. Aniyonik deterjan kalıntılarını çıkarmak için kondyle parçalarını iki kez yıkayın.</li>
		<li>Kondyle parçalarını filtre kağıdı (0,5 mm) kullanarak 3 saat kurutun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Adım 1.1'de belirtilen parçalardan 0,5 cm kalınlığında üçgen (1 cm x1 cm x1 cm) CMS hazırlayın (Şekil 1A).<ol>
<li>Parçaları 100 mL 0,5 M HCl'de 10 dakika boyunca sürekli ajitasyonla demineralize edin. HCl'yi çıkarın. NOT: HCl'yi sodyum hidroksit (10 M) ile nötralize edin.</li>
		<li>Parçaları her seferinde 15 dakika, sürekli ajitasyonla 100 mL damıtılmış su ile üç kez durulayın. CMS'i filtre kağıdıyla (0,5 mm) 1 saat kurulayın.</li>
		<li>CMS'nin yapısal özelliklerini (gözeneklerin büyüklüğü, gözenek oluşumu ve gözenekli ara bağlantı) analiz etmek için stereo mikroskop15 kullanın (Şekil 1B).</li>
		<li>CMS trabeculae'nin pürüzlü yüzeyini analiz etmek için taramalı elektron mikroskobu16 kullanın (Şekil 1C).</li>
		<li>CMS'nin mekanik değişikliklerini (plastisite ve esneklik) değerlendirmek için karıştırma ve germe için diseksiyon aletini kullanın (Şekil 1D).</li>
		<li>CMS'yi sterilizasyon torbasına paketleyin ve hidrojen peroksit plazma ile 38 dakika sterilize edin. Steril CMS'yi orijinal pakette kullanıma kadar 20-25 °C kuru bir alanda saklayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Cerrahi alanın hazırlanması ve hayvan modelinin taşınması ve hazırlanması
<ol><li>Cerrahi bölgeyi, çalışma masasını, mikrocerrahi mikroskobu ve koltuğu% 2 klorheksidin çözeltisi ile sterilize edin. Isı sterilizasyonu yoluyla tüm cerrahi aletleri, cerrahi süngeri, sürüntü örneklerini ve tek kullanımlık cerrahi örtüleri sterilize edin (121 °C/30 dk/100 kPa)</li>
	<li>Sıçanları (n=5) grup başına beş sıçandan oluşan üç gruba atayın: 1. sham, 2. hepatektomi ve 3. hepatektomi artı CMS ve tüm grupları 3, 14 ve 21 gün boyunca takip edin.<ol>
<li>Ketamin (35 mg/kg) ve ksilazin (2,5 mg/kg) intramüsküler olarak arka ekstuzda uygulanır. NOT: Yatıştırıcı süresi genellikle 30-40 dakika sürer.</li>
		<li>Cerrahi sabun ve çift kenarlı bir bıçak kullanarak karın derisini (5 cm x 2 cm) tıraş edin ve üç turda topikal% 10 povidon-iyot çözeltisi kullanarak cildi dezenfekte edin17.</li>
		<li>Hayvanı, geçirgen bir hava yolunu korumak için boynu aşırı uzamış olan decubitus dorsal pozisyonunda ılık bir tabağayerleştirin (Şekil 2).</li>
		<li>Anestezinin derinliğini solunum düzeni ve uzuvlardaki çekilme refleksinin kaybı ile değerlendirin.</li>
		<li>Tıraş edilen cildin etrafına tek kullanımlık bir cerrahi örtü yerleştirin ve xiphoid işlemini referans noktası olarak kullanarak neşterle albous hattına bir kesi (2,5 cm) yapın. Kanamayı önlemek için karın duvarı kan damarı kaçının.</li>
		<li>Karın retraktörini yerine koyun ve karın boşluğunu gözlemleyin. Diseksiyon apsesini kullanarak, sol karaciğer lobu çıkarın ve metal plakaya yerleştirin (Şekil 3A). NOT: Sham grubunda, sadece sol karaciğer lobını çıkarın ve ardından karaciğeri karın boşluğuna geri döndürün. Karın duvarını ve cildi 3-0 naylon dikiş ile dikin.</li>
		<li>CMS'li ve CMS'siz deney gruplarında, iki kesikle hepatektomi (yaklaşık% 40) yapmak için neşter bıçağı ve steril neşter bıçağı (#15) kullanın. Hepatektomiyi(Şekil 3B)gerçekleştirmek için üçgen metalik bir şablon (1 cm x 1 cm x 1 cm) kullanın.</li>
		<li>Karaciğerin kanamasını önlemek için, karaciğerin kenarında bir bezle cerrahi kompresyonun 5 dakika boyunca sürdürülmesini sağlayın.</li>
		<li>Cerrahi işlemden önce CMS'yi steril salin çözeltisinde 20 dakika nemlendirin. Biyomalzemenin yer değiştirmesini önlemek için karaciğer dokusu ile CMS arasında dört dikiş dikişi ile CMS'yi hepatektomi bölgesine takın. 7-0 emilemez polipropilen dikiş kullanın (Şekil 3C). NOT: İkinci bir ameliyatta dikişleri çıkarmayın; dikişler CMS implantasyon bölgesini tanımlamak için referans olarak kullanılabilir.</li>
		<li>Karaciğeri karın boşluğuna geri koyun ve karın duvarını ve cildi 3-0 naylon dikiş ile dikin. Cerrahi kesiği cerrahi iyotla ıslatılmış bir süngerle iki tur halinde temizleyin. Hayvanların yaşamsal belirtilerini gözlemleyin ve izleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Ameliyat sonrası bakım
<ol><li>Arka uzuvda meglumine flunixin (2.5 mg/kg) intramüsküler olarak verin. Analjezikleri kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitesi tarafından onaylandığı şekilde yönetin.</li>
	<li>Anestezi geri kazanımı için, hayvanları sıcaklık kontrolü (23 °C) ile gürültüsüz bir alana laboratuvar hayvan yatakları ile bireysel polikarbonat kutularına yerleştirin.</li>
	<li>Hayvanların geri kazanımını gözlemleyin ve su ve yiyecek tüketimini 2 saat boyunca izleyin. Kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitesi tarafından onaylandığı şekilde hayvanları ameliyat sonrası izleyin.</li>
</ol>4. Serumda karaciğer fonksiyonlarının değerlendirilmesi
<ol><li>Cerrahi işlemden önce anestezi yapılan hayvanların lateral kuyruk damarlarından (500 μL) ve değerlendirme günleri 3, 14 ve 21'de kan örnekleri toplayın.</li>
	<li>Kan örneklerini oda sıcaklığında (23 °C) 850 × g/10 dk'da santrifüjlayın; serumu ayırın ve kullanıma kadar -80°C'de saklayın.</li>
	<li>Karaciğer fonksiyon testlerinden oluşan bir panel gerçekleştirin: serum albümin (ALB), alkalin fosfataz (ALP), alanin aminotransferaz (ALT), aspartat aminotransferaz (AST), total bilirubin (TB) ve doğrudan bilirubin (DB) (Tablo 1).</li>
</ol>5. Ötenazi ve doku yönetimi
<ol><li>Yukarıda açıklanan protokole uyarak hayvanları her değerlendirme için (3, 14 ve 21. günler) uyuşturun.</li>
	<li>Kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitesi tarafından onaylayan yöntemlerle ötenazi.</li>
	<li>Karın boşluğunun organlarını gözlemlemek ve CMS ile ve CMS olmadan, sham ve deneysel grupların hepatektomi alanının fotoğraflarını çekmek için neşterle albous hattında bir kesi (5-6 cm) yapın.</li>
	<li>Tüm çalışma grubu hayvanlardan karaciğer örnekleri (2 cm x 2 cm; 0,40-0,45 g) alın ve sonraki histolojik değerlendirme için 24 saat boyunca% 4 formaldehit çözeltisine yerleştirin.</li>
</ol>6. Histolojik analiz
<ol><li>Karaciğer dokularını% 4 formaldehitte koruyun ve bir dizi alkol konsantrasyonu kullanarak dokuyu susuz bırakır (%60, %70, %80, %90, %100); onları ksilen (1h) içine yerleştirin ve parafin16içine gömülü .</li>
	<li>Parafin bloklarını bir mikrotom ile sekiz slaytın hazırlanması için 4 μm kalınlığında bölümlere kesin.</li>
	<li>H&E ve Masson'un üç renkli boyama16'sınıgerçekleştirin.</li>
	<li>CMS'li ve CMS'siz karaciğerin temsili bölgelerini seçmek için lekeli bölümleri hafif bir mikroskop altında gözlemleyin. Fotomikrografları 4x, 10x ve 40x büyütme ile elde edin ve görüntüleri uygun yazılım18 kullanarak işleyin (bkz. Malzeme Tablosu).</li>
</ol>

<ol><li>Li, N., Hua, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+cells+in+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Immune cells in liver regeneration.</a> Oncotarget. 8 (2), 3628-3639 (2017).</li>
<li>Langer, R., Vacanti, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tissue Engineering.</a> Science. 260 (5110), 920-926 (1993).</li>
<li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+liver+decellularized+extracellular+matrix+bioink+for+three-dimensional+cell+printing-based+liver+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Development of liver decellularized extracellular matrix bioink for three-dimensional cell printing-based liver tissue engineering.</a> Biomacromolecules. 18 (4), 1229-1237 (2017).</li>
<li>Shafiee, A., Atla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering%3A+Toward+a+new+era+of+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering: Toward a new era of medicine.</a> Annual Review of Medicine. 68, 29-40 (2017).</li>
<li>Hu, C., Zhao, L., Wu, Z., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+and+their+derivatives+effectively+promotes+liver+regeneration+to+attenuate+acetaminophen-induced+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Transplantation of mesenchymal stem cells and their derivatives effectively promotes liver regeneration to attenuate acetaminophen-induced liver injury.</a> Stem Cell Research & Therapy. 11 (1), 88(2020).</li>
<li>Sancho-Bru, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+possibilities+of+stem+cells+in+the+treatment+of+liver+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterologia+y+Hepatologia%22%5BJournal%5D)">Therapeutic possibilities of stem cells in the treatment of liver diseases.</a> Gastroenterologia y Hepatologia. 34 (10), 701-710 (2011).</li>
<li>Kobolak, J., Dinnyes, A., Memic, A., Khademhosseini, A., Mobasheri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells%3A+Identification%2C+phenotypic+characterization%2C+biological+properties+and+potential+for+regenerative+medicine+through+biomaterial+micro-engineering+of+their+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells: Identification, phenotypic characterization, biological properties and potential for regenerative medicine through biomaterial micro-engineering of their niche.</a> Methods. 99, 62-68 (2016).</li>
<li>Freedman, B. R., Mooney, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterials+to+mimic+and+heal+connective+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Biomaterials to mimic and heal connective tissues.</a> Advanced Materials. 31 (19), 1806695(2019).</li>
<li>Meyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Processing+of+collagen+based+biomaterials+and+the+resulting+materials+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Engineering+Online%22%5BJournal%5D)">Processing of collagen based biomaterials and the resulting materials properties.</a> Biomedical Engineering Online. 18 (1), 24(2019).</li>
<li>El Baz, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplant+of+hepatocytes%2C+undifferentiated+mesenchymal+stem+cells%2C+and+in+vitro+hepatocyte-differentiated+mesenchymal+stem+cells+in+a+chronic+lver+failure+experimental+model%3A+a+comparative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Transplant of hepatocytes, undifferentiated mesenchymal stem cells, and in vitro hepatocyte-differentiated mesenchymal stem cells in a chronic lver failure experimental model: a comparative study.</a> Experimental and Clinical Transplantation. 16 (1), 81-89 (2018).</li>
<li>Nedjari, S., Awaja, F., Guarino, R., Gugutkov, D., Altankov, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+multiple+osteogenic+differentiation+pathways+of+mesenchymal+stem+cells+through+different+scaffold+configurations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Establishing multiple osteogenic differentiation pathways of mesenchymal stem cells through different scaffold configurations.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 14 (10), 1428-1437 (2020).</li>
<li>Chan, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+dimensional+collagen+scaffold+promotes+intrinsic+vascularisation+for+tissue+engineering+applications%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Three dimensional collagen scaffold promotes intrinsic vascularisation for tissue engineering applications.</a> PLoS One. 11 (2), 0149799(2016).</li>
<li>Arenas-Herrera, J. E., Ko, I. K., Atala, A., Yoo, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+for+whole+organ+bioengineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Materials%22%5BJournal%5D)">Decellularization for whole organ bioengineering.</a> Biomedical Materials. 8 (1), 014106(2013).</li>
<li>Parmaksiz, M., Dogan, A., Odabas, S., Elçin, A. E., Elçin, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+applications+of+decellularized+extracellular+matrices+for+tissue+engineering+and+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Materials%22%5BJournal%5D)">Clinical applications of decellularized extracellular matrices for tissue engineering and regenerative medicine.</a> Biomedical Materials. 11 (2), 022003(2016).</li>
<li>Gacek, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereo+microscope%2C+neglected+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Postepy+Biochemii%22%5BJournal%5D)">Stereo microscope, neglected tool.</a> Postepy Biochemii. 63 (1), 68-73 (2017).</li>
<li>Oldham, S., Rivera, C., Boland, M. L., Trevaskis, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+a+survivable+liver+biopsy+procedure+in+mice+to+assess+non-alcoholic+steatohepatitis+%28NASH%29+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Incorporation of a survivable liver biopsy procedure in mice to assess non-alcoholic steatohepatitis (NASH) resolution.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (146), e59130(2019).</li>
<li>The University of Texas at Austin Institutional Animal Care and Use Committee. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guidelines+for+the+Use+of+Chemical+Depilatory+Agents+on+Laboratory+Animals%22">Guidelines for the Use of Chemical Depilatory Agents on Laboratory Animals</a>. , 
 <a target="_blank" href="https://research.utexas.edu">https://research.utexas.edu</a> (2021).</li>
<li>Sivridis, L., Kotini, A., Anninos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+process+of+learning+in+neural+net+models+with+Poisson+and+Gauss+connectivities%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Networks%22%5BJournal%5D)">The process of learning in neural net models with Poisson and Gauss connectivities.</a> Neural Networks. 21 (1), 28-35 (2008).</li>
<li>León-Mancilla, B. H., Araiza-Téllez, M. A., Flores-Flores, J. O., Piña-Barba, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physico-chemical+characterization+of+collagen+scaffolds+for+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Research+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Physico-chemical characterization of collagen scaffolds for tissue engineering.</a> Journal of Applied Research and Technology. 14 (1), 77-85 (2016).</li>
<li>León, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematological+and+biochemical+parameters+in+Sprague+Dawley+laboratory+rats+breed+in+CENPALAB%2C+Cenp%3ASPRD%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+Electronica+de+Veterinaria%22%5BJournal%5D)">Hematological and biochemical parameters in Sprague Dawley laboratory rats breed in CENPALAB, Cenp:SPRD.</a> Revista Electronica de Veterinaria. 12, 1-10 (2011).</li>
<li>Tsuchiya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell+therapies+for+liver+cirrhosis%3A+MSCs+as+%22conducting+cells%22+for+improvement+of+liver+fibrosis+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell therapies for liver cirrhosis: MSCs as "conducting cells" for improvement of liver fibrosis and regeneration.</a> Inflammation and Regeneration. 39, 18(2019).</li>
<li>Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+extracellular+matrix+as+a+biologic+scaffold+material%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The extracellular matrix as a biologic scaffold material.</a> Biomaterials. 28, 3587-3593 (2007).</li>
<li>Acevedo, G. C. Xenoimplante de colágena en uretra de perro. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Universidad+Nacional+Aut%C3%B3noma+de+M%C3%A9xico%22">Universidad Nacional Autónoma de México</a>. , Specialty of Urology thesis (2011).</li>
<li>Montalvo-Jave, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absorbable+bioprosthesis+for+the+treatment+of+bile+duct+injury+in+an+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Absorbable bioprosthesis for the treatment of bile duct injury in an experimental model.</a> International Journal of Surgery. 20, 163-169 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar rakip finansal çıkarları olmadığını beyan ederler. Benjamín León-Mancilla, Program de Doctorado en Ciencias Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM) doktora öğrencisidir ve DGAPA-UNAM bursu almıştır.

Organ nakli karaciğer fibrozisi veya sirozlu hastalarda tedavinin temel dayanağıdır. Birkaç hasta bu işlemden yararlanarak bekleme listesindeki hastalar için terapötik alternatifler sunmayı zorunlu hale getirir. Doku mühendisliği, rejeneratif potansiyele sahip iskeleleri ve hücreleri kullanan umut verici bir stratejidir2,4,13. Karaciğerin bir kısmının alınması, bu damarlı organın bol kanaması nedeniyle bu işlemde kritik bir adım...

Karaciğer homeostaz ve protein üretiminin sürdürülmesinde rol oynayan en önemli organlardan biridir1. Ne yazık ki, karaciğer hastalığı dünya çapında önde gelen ölüm nedenidir. Siroz ve hepatosellüler karsinom içeren karaciğer hasarının ileri evrelerinde karaciğer nakli klinik olarak önerilen işlemdir. Ancak donörlerin azlığı ve başarılı nakil oranının düşük olması nedeniyle doku mühendisliği (TE) ve rejeneratif tıpta (RM) yeni teknikler geliştirilmiştir2,3.
TE, iltihaplı, fibrotik ve ödemli organ ve dokuların restorasyonu için kök hücrelerin, iskelelerin ve büyüme faktörlerinin4 kullanımını içerir1,5,6. İskelelerde kullanılan biyomalzemeler, kılavuzlu hücresel yeniden şekillendirme için fiziksel, kimyasal ve biyolojik ipuçları sağlayan yerelECM'yitaklit eder 7 . Kollajen dermis, tendon, bağırsak ve perikarddan elde edilen en bol proteinlerden biridir8,9. Ayrıca, kollajen biyobaskı veya elektrospinning yoluyla iki ve üç boyutlu iskeleler üretmek için bir biyopolimer olarak elde edilebilir10,11. Bu grup, karaciğer dokusunun yenilenmesi için bir kemik kaynağından kollajen kullanımını bildiren ilk gruptır. Başka bir çalışma, deriden elde edilen sığır kollajeninden sentezlenen iskelelerin homojen ve yakından yerleşmiş gözeneklerle, aralarında herhangi bir iletişim olmadan kullanıldığını bildirmektedir12.
Hücreden arındırma, yerel ECM'yi korur ve kök hücre potansiyeli13,14olan hücrelerin daha sonrabirleştirilmesineizin verir. Bununla birlikte, bu prosedür hala farelerden, sıçanlardan, tavşanlardan, domuzlardan, koyunlardan, sığırlardan ve atlardan karaciğer, kalp, böbrek, ince bağırsak ve idrar kesesinde deneyselaşamadadır 3,14. Şu anda, resected karaciğer kitle hacmi hayvan hepatektomi modellerinin hiçbirinde değiştirilmez. Bununla birlikte, hücre çoğalmasını ve anjiogenez sağlayan ek destek veya ağ (biyomalzemeler) kullanımı karaciğer parenkimal fonksiyonlarının hızlı restorasyonu için gerekli olabilir. Böylece, iskeleler kronik karaciğer hastalıklarında dokuyu yenilemek veya onarmak için alternatif yaklaşımlar olarak kullanılabilir, bu da bağış ve karaciğer naklinin klinik komplikasyonlarına bağlı sınırlamaları ortadan kaldırır.

<table><tbody><tr><td>Anyonik deterjan</td><td>Alconox</td><td>Z273228</td><td></td></tr><tr><td>Biyopsi kasetleri</td><td>Leica</td><td>3802453</td><td></td></tr><tr><td>Kamera DMX</td><td>Nikon</td><td>DXM1200F</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>Klorheksidin glukonat% 4</td> <td>BD</td><td>372412</td><td></td></tr><tr><td>Kapak camları 25 mm x 40 mm</td><td>Corning</td><td>2980-224</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>200-M</td><td>CAS 17372-87-1</td></tr><tr><td>Etil alkol, saf</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>459836</td><td>CAS 64-17-5</td></tr><tr><td>Fluniksin meglumid</td><td>MSD</td><td>Q-0273-035</td><td></td></tr><tr><td>Cam slaytlar 75 mm x 25 mm</td><td>Corning</td><td>101081022</td><td></td></tr><tr><td>Hematoksilen</td><td>Merck</td><td>H9627</td><td>CAS 571-28-2</td></tr><tr><td>Hidroklorik asit %</td><td>37Merck</td><td>339253</td><td>CAS 7647-01-0</td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Pisa agropecuaria</td><td>Q-7833-028</td><td></td></tr><tr><td>Işık mikroskobu</td><td>Nikon</td><td>Mikrofoto-FXA</td><td></td></tr><tr><td>Mikrocerrahi stereomikroskop</td><td>Zeiss</td><td>OPMI F170</td><td></td></tr><tr><td>Microtainer sarı pelerin</td><td>Beckton Dickinson</td><td>365967</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica</td><td>RM2125</td><td></td></tr><tr><td>Model hayvan: Wistar sıçanları</td><td>Universidad Nacional Aut&oacute; noma de M&eacute; xico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Naylon 3-0 (Dermalon)</td><td>Covidien</td><td>1750-41</td><td></td></tr><tr><td>Polipropilen 7-0</td><td>Atramat</td><td>SE867/2-60</td><td></td></tr><tr><td>Povidon-iyot%10 kutanöz çözelti</td><td>Diafra SA de CV</td><td>1.37E+86</td><td></td></tr><tr><td>Taramalı elektronik mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>DSM-950</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit, peletler</td><td>J. T. Baker</td><td>3722-01</td><td>CAS 1310-73-2</td></tr><tr><td>Yazılım ACT-1</td><td>Nikon</td><td>Ver 2.70</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Leica</td><td>EZ4Stereo 8X-35X</td><td></td></tr><tr><td>Sterrad 100S</td><td>Johnson and Johnson</td><td>99970</td><td></td></tr><tr><td>Surgipath paraplast</td><td>Leica</td><td>39601006</td><td></td></tr><tr><td>İğne ile 1 mL Synringe (27G x 13 mm)</td><td>SensiMedical</td><td>LAN-078-077</td><td></td></tr><tr><td>Doku İşlemcisi ( Histokinette)</td><td>Leica</td><td>TP1020</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek TEC 5 (Doku gömük)</td><td>Sakura Finetek USA</td><td>5229</td><td></td></tr><tr><td>Trikrom leke kiti</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT15</td><td></td></tr><tr><td>Unicell DxC600 Analizörü</td><td>Beckman Coulter</td><td>BC 200-10</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Pisa agropecuaria</td><td>Q-7833-099</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>534056</td><td>CAS 1330-20-7</td></tr></tbody></table>

karaciğer rejenerasyon stratejisi olarak Üç boyutlu kollajen matris İskele İmplantasyonu

Three-Dimensional Collagen Matrix Scaffold Implantation as a Liver Regeneration Strategy

Karaciğer hastalıkları dünya çapında önde gelen ölüm nedenidir. Aşırı alkol tüketimi, yüksek yağlı bir diyet ve hepatit C virüs enfeksiyonu fibrozis, siroz ve/veya hepatosellüler karsinomu teşvik eder. Karaciğer nakli, ileri hastalık evrelerinde hastaların yaşam süresini iyileştirmek ve uzatmak için klinik olarak önerilen prosedürdür. Bununla birlikte, organ mevcudiyeti, presurgical ve postsurgical prosedürler ve bu sonuçla doğrudan ilişkili yüksek maliyetler ile nakillerin sadece% 10'u başarılıdır. Hücre dışı matris (ECM) iskeleleri doku restorasyonu için bir alternatif olarak ortaya çıkmıştır. Biyouyumbilite ve greft kabulü bu biyomalzemelerin temel faydalı özellikleridir. Karaciğer hepatektomi modellerinde karaciğerin boyutunu ve doğru işlevini geri kazanma kapasitesi değerlendirilmiş olsa da, extirpated karaciğer kütlesinin hacmini değiştirmek için iskelelerin veya bir tür desteğin kullanımı değerlendirilmemiştir.
Bir sıçan karaciğerinde, bir sığır kondylesinden kollajen matrisli bir iskelenin (CMS) ksinoimplantasyonu ile kısmi hepatektomi yapıldı. Sol karaciğer lob dokusu alındı (yaklaşık %40) ve eşit oranda CMS cerrahi olarak yerleştirildi. Karaciğer fonksiyon testleri cerrahi işlem öncesi ve sonrası değerlendirildi. 3, 14 ve 21. 3 ve 14. günlerde, CMS'yi çevreleyen yağ dokusu gözlendi, 21. Hematoksilin ve eozin (H&E) ve Masson'un üç renkli lekelenmesi ile gözlenen önemsiz bir iltihaplanma süreci ve bitişik hücrelerin CMS'ye göçünün histolojik kanıtları vardı. CMS'nin karaciğer dokusunda iyi performans gösterdiği ve kronik karaciğer hastalıklarında doku yenilenmesi ve onarımı için yararlı bir alternatif olabileceği gösterilmiştir.

Kemik demineralizasyonu, gözeneklerinin orijinal şeklini veya ara bağlantısını değiştirmeden CMS'nin mekanik özelliklerinietkiler. CMS herhangi bir şekle sahip olabilir ve bu nedenle seçilen organın veya dokunun büyüklüğüne ve şekline ayarlanabilir19. Mevcut protokolde üçgen CMS ( Şekil1A-D) kullandık. Karaciğerdeki CMS ksnoimplantının rejeneratif kapasitesini değerlendirmek için bir sıçan modeli kullanılmıştır. Kara...

Karaciğer hastalıkları fibrozis veya sirozun teşvik ettiği birçok nedenden kaynaklanır. Sağlığın iyileşmesi için tek seçenek transplantasyondur. Bununla birlikte, nakledilebilir organların kıtlığı göz önüne alındığında, alternatifler araştırılmalıdır. Araştırmamız, karaciğer dokusuna bir hayvan modelinden kollajen iskelelerin yerleştirilmesini önermektedir.

Karaciğer Rejenerasyon Stratejisi Olarak Üç Boyutlu Kollajen Matris İskele İmplantasyonu

Liver diseases are the leading cause of death worldwide. Excessive alcohol consumption, a high-fat diet, and hepatitis C virus infection promote fibrosis, ...

Bu yöntem, karaciğer yenilenmesini teşvik etmek için karaciğerde bir iskele olarak kollajen matrisi implantı yerleştirmeyi içerir. Bu implantasyon yöntemi, resected dokuların şeklinin ve balonunun restorasyonunu araştıran bir stratejist için kapı açmış, böylece anesteziyi, cerrahi süreyi ve iyileşme süresini azaltmıştır. Bu yöntem, karaciğer fibrozis modellerinin yanı sıra diğer memeli türlerini içeren yenilenmeyi teşvik etmek için kullanılabilir.Bu yöntem, yaralı dokunun restorasyonu için doku mühendisliği ve rejeneratif tıbba dayanmaktadır. Cerrahi alan çalışma masasını, mikrocerrahi mikroskobu ve koltuğu% 2 klorheksidin çözeltisi ile sterilize ederek başlayın, ardından bir sığır kondylesinden elde edilen kollajen matris iskelesini steril salin çözeltisinde 20 dakika boyunca nemlendirin. Daha sonra, cerrahi sabun ve çift kenarlı bir bıçak kullanarak, uyuşturulmış altı ila sekiz haftalık bir erkek Wistar sıçanının karın derisini tıraş edin, ardından% 10 povidon iyot çözeltisi kullanarak cildi üç kez dezenfekte edin.Hayvanı, geçirgen bir hava yolunu korumak için boynu aşırı gerilmiş decubitus dorsal pozisyonda ılık bir tabağa yerleştirin. Anestezinin derinliğini solunum düzeni ve u

three-dimensional-collagen-matrix-scaffold-implantation-as-liver

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Perfüzyon decellularization organ ekstraselüler matriks kompozisyonu ve mikromimarisini korur tüm karaciğer iskeleleri üretmek için yeni bir tekniktir. Burada, hepatositler ile perfüzyon decellularization ve sonraki repopulation kullanarak tüm organı iskeleleri hazırlama yöntemi açıklanmıştır. Fonksiyonel ve transplante karaciğer greft tekniği kullanılarak oluşturulabilir.

Tüm karaciğerleri Decellularization ve Recellularization

Karmaşık dokunun son derece organize yapılarının oluşturulması için, birden fazla materyal ve hücre tipini entegre bir kompozitte bir araya getirmek gerekir.  Bu kombinatoryal tasarım, güçlü bir fibröz matris tabanı içeren iki farklı biyolojik olarak türetilmiş materyal ve yeni damar oluşumunu arttırmak için endotel hücreleri ile organa özgü katmanlı hücre tabakalarını içerir.

Doku Mühendisliği: Katmanlı Hücre Sheets teslimi için bir Multisellüler 3D İskele İnşaatı

Bu çalışmada, kollajen, düz kas hücreleri ve endotel hücrelerinin doğrudan kültürlenmesi yoluyla canlı vasküler dokuların hızlı bir şekilde üretilmesi için bir teknik sunuyoruz. Ek olarak, tasarlanmış vasküler dokuların mekanik karakterizasyonu için yeni bir protokol tanımlanmıştır.

Vasküler Doku Rejenerasyon için Mühendislik 3D cellularized Kollajen jeller

Doku mühendisliği genellikle doku rejenerasyonu için Otogreft yaratmak için in vitro genişlemesinde içerir. Bu çalışmada, genişleme, doku, yenilenme ve in vivo olarak yeniden yapılanma için bir yöntem olup vücut dışında hücreleri ve biyolojik malzemelerin işlenmesi en aza indirmek için geliştirilmiştir.

Sıkıştırılmış Kolajen kıyılmış Doku: Tek aşamalı Rekonstrüktif Onarım için Cep içeren Biotransplant

İn vivo dokunun mimari özelliklerine, bileşenlerine ve mekanik özelliklerine benzeyen üç boyutlu yapıları tasarlamak için yenilikçi bir biyofabrikasyon tekniği geliştirilmiştir. Bu teknik, çok çeşitli dokuların in vivo mimarilerini yeniden üreten, ayrıntılı uzamsal özellikleri aktaran yeni geliştirilmiş bir kurban malzemesi olan BSA kauçuğuna sahiptir.

Üç boyutlu Biyomimetik Teknoloji: Roman Biorubber Kollajen Hidrojeller içinde Mikro ve Makro ölçekli Mimarileri Tanımlı oluşturur

Bu el yazması, ortaya çıkan üç boyutlu bir hepatosit kültür platformunun, ters çevrilmiş kolloidal kristal iskelenin ve hepatosit davranışını değerlendirmek için eşlik eden tekniklerin üretimi için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır. Boyut kontrol edilebilir gözenekler, ara bağlantı ve hücre dışı matris proteinlerini poli (etilen glikol) (PEG) iskelesine konjuge etme yeteneği, Huh-7.5 hücre performansını artırır.

Ters Kolloidal Kristal Poli (etilen glikol) İskele imalatı: Karaciğer Doku Mühendisliği için Üç boyutlu Hücre Kültürü Platformu

Biz kendi kendine montajı, üç boyutlu demetleri boyuna hizalanmış astrositik somata ve süreçlerin bir roman biomaterial encasement içindeki gelişimi vitrin. Bunlar "yaşam iskele santimetre uzunluğunda, genişletme hizmet edebilir henüz test-yatak nörogelişimsel mekanizmaları incelemek veya yönetmenlik nöronal göç ve/veya aksonal neuroregeneration kolaylaştırmak için mikron çaplı çapı sergileyen", mühendislik kılavuz.

Astrocyte ağlar gelişimsel mekanizmaları özetlemek ve sinir sistemi yeniden oluşturma işlemi kolaylaştırmak için tasarlanmış üç boyutlu doku uyumlu

Bu iletişim kuralı elastik 3D macroporous microcryogels imalatı microfabrication cryogelation teknolojisi ile entegre ederek açıklar. Hücrelerle yükleme üzerine, 3D microtissues, hangi rejeneratif terapi kolaylaştırmak için kolayca enjekte içinde vivo olabilir veya diziler vitro yüksek üretilen iş uyuşturucu tarama için içine monte oluşturulur.

Enjekte edilebilir rejeneratif terapi ve yüksek-den geçerek uyuşturucu tarama için 3D Microtissues

Bu protokol, eşlik eden fibrotik stromal bölmeli 3D biyomimetik bir model sunar. Hücresel etkileşimlerin, tümör büyümesinin ve metastazın aktif bir arabulucu olan stromal hücre dışı matrisin biyo-fiziksel özelliklerini taklit eden oranlarda fizyolojik olarak ilgili hidrojellerle hazırlanmıştır.

Ayarlanabilir Biyo-Fiziksel Özelliklere Sahip 3D Ortamda Tümör-Stroma Etkileşimlerini İncelemek İçin Karaciğer Kanseri için Biyomimetik Model

Mevcut protokol, alkolsüz steatohepatit (NASH) sırasında hücre dışı matriks (ECM) yeniden şekillenmesinin dinamiklerini görselleştirmek için güvenilir bir platform oluşturmak üzere karaciğer in situ perfüzyon / desellülarizasyon ve iki foton mikroskopi yöntemlerini optimize etmektedir.

Alkolsüz Steatohepatitin Bir Fare Modelinde Karaciğer Hücre Dışı Matriksin 3D Görüntülenmesi

Organoidler, organ geliştirme, ilaç keşfi ve hastalık araştırmaları için kişiselleştirilmiş doku modellemesinde devrim yaratıyor. Organoid mühendisliği, karmaşık sentetik dokular oluşturmaya doğru ilerler. Amaç, doku mühendisliğini ilerletmek için morfogenez, assembloid teknolojisi ve biyomatrisleri entegre etmektir. Bu protokol, karaciğer organogenezinin modellenmesine ve sentetik doku yapımı için kılavuzların oluşturulmasına yardımcı olur.

Karaciğer Organogenezini Modellemek, Assembloidler Oluşturmak ve İnsan Hücre Hatlarını Kullanarak Sentetik Dokular Tasarlamak için İn Vitro Yetiştirme Teknikleri

Keşfedin karaciğer rejenerasyonu için üç boyutlu kollajen matris iskele implantasyonunu. Bu yöntem, sıçan modelinde doku mühendisliği kullanarak karaciğer fonksiyonunu korur ve hepatosit göçünü destekler.

Karaciğer Rejenerasyon Stratejisi Olarak Üç Boyutlu Kollajen Matris İskele İmplantasyonu

Daha fazla video keşfet